PT1781657E

PT1781657E - Medicamentos com actividade no receptor hm74a

Info

Publication number: PT1781657E
Application number: PT57073637T
Authority: PT
Inventors: Ivan Leo Pinto; Shahzad Sharooq Rahman; Neville Hubertnicholson
Original assignee: Glaxosmithkline Ip Dev Ltd
Priority date: 2004-02-14
Filing date: 2005-02-10
Publication date: 2013-05-23
Also published as: KR20060126772A; ES2406732T3; NO20064151L; CN101103030A; HRP20130406T1; JP5001012B2; TWI350289B; SI1781657T1; SG157242A1; AU2005212816C1; CN101863888B; PE20060317A1; HK1104530A1; EP1781657A2; JP2007522176A; MA28357A1; US20100160354A1; IL177051A; PL1781657T3; US20070135456A1

Description

ΡΕ1781657 1 DESCRIÇÃO "MEDICAMENTOS COM ACTIVIDADE NO RECEPTOR HM74A" A presente invenção refere-se a compostos tera-peuticamente activos que são derivados de xantina, processos para o fabrico de tais derivados, formulações farmacêuticas contendo os compostos activos e a utilização dos compostos em terapia, particularmente no tratamento de doenças nas quais a sub-activação do receptor HM74A contribui para a doença ou em que a activação do receptor seria benéfica. A dislipidemia é um termo geral usado para descrever indivíduos com perfis de lipoproteinas aberrantes. Clinicamente, as principais classes de compostos usadas para o tratamento de pacientes com dislipidemia, e como tal em risco de doença cardiovascular são as estatinas, fibratos, resinas que se ligam a ácidos biliares e ácido nicotinico. 0 ácido nicotinico (niacina, uma vitamina B) foi usado clinicamente durante mais de 40 anos em pacientes com várias formas de dislipidemia. O modo primário de acção do ácido nicotinico é através da inibição da lipase de triglicéridos hormona sensivel (HSL), que resulta numa diminuição de ácidos gordos não esterifiçados (NEFA) no plasma que por seu turno altera o metabolismo hepático de gorduras para reduzir a produção de LDL e VLDL (lipopro-teina de densidade baixa e muito baixa). Crê-se que os 2 ΡΕ1781657 níveis de VLDL diminuem a actividade da proteína de transferência do éster de colesterol (CETP) para resultar em níveis mais elevados de HDL (lipoproteína de elevada densidade) que podem ser a causa dos benefícios cardiovasculares observados. Assim, o ácido nicotínico produz uma alteração muito desejável em perfis de lipoproteína; reduzindo os níveis de VLDL e LDL enquanto aumentam aqueles de HDL. Também se demonstrou que o ácido nicotínico tem benefícios modificadores de doenças, reduzindo a progressão e aumentando a regressão de lesões ateroscleróticas e reduzindo o número de eventos cardiovasculares em vários ensaios.

A inibição observada de HSL por intermédio do ácido nicotínico é mediada por uma diminuição na adenosina monofosfato cíclica (cAMP) celular causada pela inibição da adenilil ciclase mediada pela proteína G. Recentemente, os receptores HM74 e HM74A acoplados com a proteína G foram identificados como receptores para o ácido nicotínico (pedido de patente WO02/84298; Wise et. al. J Biol Chem., 2003, 278 (11) , 9869-9874) . A sequência de ADN de HM74A humana pode ser encontrada no Genbank; número de acesso AY148884. Mais dois artigos suportam esta descoberta (Tunaru et. al. Nature Medicine, 2003, 9(3), 352-255 e Soga et. al. Biochem Biophys Res Commun., 2003, 303 (1) 364-369), no entanto a nomenclatura difere ligeiramente. No artigo de Tunaru aquilo que é designado por HM74 humano é de facto HM74A e no artigo de Soga HM74b é idêntico a H;74A. As células transfectadas para expressar HM74A e/ou 3 ΡΕ1781657 ΗΜ74 ganham a capacidade de estimular respostas Gi mediadas pela proteina G após a exposição ao ácido nicotinico. EM ratinhos que não possuem o homólogo de HM74A (m-PUMA-G) o ácido nicotinico não consegue reduzir os níveis de NEFA no plasma.

Certos derivados da xantina foram sintetizados e divulgados na técnica anterior. Por exemplo, EP0389282 divulga derivados da xantina como mediadores potenciais de distúrbios cerebrovasculares. Identificou-se uma gama de derivados de xantina como agonistas dos receptores da adenosina por Jacobson et. al. em J. Med. Chem., 1993, 36, 2639-2644.

Agora apresentamos um grupo de derivados da xantina que são agonista selectivos do receptor do ácido nicotinico HM74A e são assim benéficos no tratamento, na profilaxia e na supressão de doenças nas quais a sub-activação deste receptor ou contribui para a doença ou em que a activação do receptor será benéfica.

Sumário da Invenção A presente invenção proporciona derivados da xantina terapeuticamente activos e a utilização destes derivados em terapia, particularmente no tratamento de doenças nas quais a sub-activação do receptor HM74A contribui para a doença ou em que a activação do receptor seria benéfica, em particular doenças do metabolismo dos 4 ΡΕ1781657 lípidos incluindo dislipidemia ou hiperlipoproteinemia tais como dislipidemia diabética e dislipidemia mista, insuficiência cardíaca, hipercolesterolemia, doenças cardiovasculares incluindo aterosclerose, arteriosclerose, e hiper-trigliceridemia. Como tal, os compostos podem também encontrar uso como terapia para doença das artérias coronárias, trombose, angina, insuficiência renal crónica, doença vascular periférica e acidente vascular cerebral, assim como indicações cardiovasculares associadas com a diabetes mellitus do tipo II, diabetes do tipo I, resistência à insulina, hiperlipidemia, anorexia nervosa, obesidade. Os compostos podem também ser úteis no tratamento de doenças e condições inflamatórias, tal como apresentado abaixo. São descritos intermediários. As formulações, métodos e processos aqui descritos formam aspectos adicionais da invenção.

Descrição Detalhada da Invenção

De acordo com um aspecto desta invenção, proporciona-se um composto de Fórmula (I)

O

R2 (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que 5 ΡΕ1781657 R1 representa hidrogénio ou metilo; R2 representa n-alquilo C4_6 não substituído; e R3 representa cloro.

Os compostos são úteis no tratamento de doenças em que a sub-activação do receptor HM7A contribui para a doença ou em que a activação do receptor seria benéfica, em particular doenças do metabolismo lipídico incluindo dis-lipidemia ou hiperlipoproteinemia tais como dislipidemia diabética e dislipidemia mista, insuficiência cardíaca, hipercolesterolemia, doenças cardiovasculares incluindo aterosclerose, arteriosclerose, e hipertrigliceridemia. Como tal, os compostos podem também encontrar uso como terapia para doença das artérias coronárias, trombose, angina, insuficiência renal crónica, doença vascular periférica e acidente vascular cerebral, assim como indicações cardiovasculares associadas com a diabetes mellitus do tipo II, diabetes do tipo I, resistência à insulina, hiperli-pidemia, anorexia nervosa, obesidade. Como tal, os compostos da presente invenção podem ter utilização como agonis-tas ou agonistas parciais de HM74A (moduladores de HM74A).

Em certas realizações, R2 é pentilo.

Deve entender-se que a presente invenção inclui qualquer combinação de realizações particulares e cobre todas as combinações de substituintes particulares aqui descritos acima. 6 ΡΕ1781657

Compostos particulares da presente invenção incluem: 3-Butil-8-cloro-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona, 8-Cloro-l-metil-3-pentil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona, 3-Butil-8-cloro-l-metil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona, 8-Cloro-3-(3-metilbutil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona, 8-Cloro-3-pentil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona, 8-Cloro-3-hexil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona, 8-Cloro-3-hexil-l-metil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona, 8-Cloro-3-(4-metilpentil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona, (+/-)-8-Cloro-3-(3-metilpentil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona, (+/-)-8-Cloro-3-(2-metilbutil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona, (+/-)-8-Cloro-3-(2-metilpentil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona,

Ao longo da presente especificação e das reivindicações que a acompanham as palavras "compreendem" e "incluem" e variações tais como "compreende", "compreendendo", "inclui" e "incluindo" devem ser interpretadas de forma inclusiva. Ou seja, pretende-se que estas palavras contemplem a possível inclusão de outros elementos ou inteiros não especificamente mencionados, quando o contexto o permite.

Tal como aqui utilizado, o termo "alquilo" (quando usado como um grupo ou parte de um grupo) refere-se a uma cadeia de hidrocarboneto excepto se especificado de 7 ΡΕ1781657 outro modo, contendo o número especificado de átomos de carbono. Por exemplo, alquilo C3-C10 significa uma cadeia de hidrocarboneto linear ou ramificada contendo pelo menos 3 e no máximo 10 átomos de carbono. Exemplos de alquilo tais como aqui utilizados incluem, mas não se limitam a metilo (Me), etilo (Et), n-propilo e i-propilo. O termo "n-alquilo" refere-se especificamente a uma cadeia de hidrocarboneto não ramificada.

Tal como aqui utilizado, o termo "derivado fisiologicamente funcional" refere-se a qualquer derivado farmaceuticamente aceitável de um composto da presente invenção, por exemplo, uma sua amida, e inclui qualquer sal farmaceuticamente aceitável de um composto de fórmula (I), e qualquer solvato farmaceuticamente aceitável de um composto de fórmula (I) o qual, mediante administração a um mamífero, tal como um humano, é capaz de proporcionar (directa ou indirectamente) um composto de fórmula (I) ou um seu metabolito ou resíduo activo. Será apreciado pelos peritos na técnica que os compostos de fórmula (I) podem ser modificados para proporcionar os seus derivados fisiologicamente funcionais em qualquer dos grupos funcionais nos compostos, e que os compostos de fórmula (I) podem também ser modificados em mais do que uma posição.

Tal como aqui utilizado, o termo "fisiologi-camente aceitável" usado em relação a um ingrediente (ingrediente activo ou excipiente) que pode ser incluído numa formulação farmacêutica para administração a um ΡΕ1781657 paciente, refere-se àquele ingrediente que é aceitável no sentido em que é compativel com quaisquer outros ingredientes presentes na formulação farmacêutica e que não é prejudicial ao referido receptor.

Tal como aqui usado, o termo "solvato" refere-se a um complexo de estequiometria variável formado por um soluto (nesta invenção, um composto de fórmula (I), ou seu sal ou um seu derivado funcional) e um solvente. Tais solventes para os objectivos da presente invenção não podem intervir na actividade biológica do soluto. 0 solvente usado pode ser um solvente farmaceuticamente aceitável. Exemplos de solventes farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem água, etanol e ácido acético. Um exemplo de um solvente que pode ser usado é água, em cujo caso o solvato pode ser referido como um hidrato do soluto em questão.

Será apreciado que, para utilização farmacêutica, o "sal ou solvato" referidos acima serão um sal ou solvato farmaceuticamente aceitáveis. No entanto, outros sais ou solvatos podem ser usados, por exemplo, na preparação de um composto de fórmula (I) ou na preparação de um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável.

Sais farmaceuticamente aceitáveis incluem aqueles descritos por Berge, Bighley e Monkhouse, J. Pharm. Sei., 1977, 66, 1-19. Sais farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de metais alcalinos formados a partir da adição de bases de metais alcalinos tais como hidróxidos de metais 9 ΡΕ1781657 alcalinos. Exemplos de sais de metais alcalinos adequados são sais de sódio ou sais de potássio. Outros sais farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem sais de metais alcalino terrosos, tais como sais de cálcio ou sais de magnésio, sais de amónio; ou sais com bases orgânicas, tais como etanolamina, trietanolamina, etileno diamina, trietilamina, colina e meglumina; ou sais com aminoácidos tais como arginina, lisina e histidina.

Compostos de fórmula (I) são potencialmente de beneficio terapêutico no tratamento e na melhoria dos sintomas de muitas doenças do metabolismo de lipidos, incluindo dislipidemia ou hiperlipoproteinemia, tais como dislipidemia diabética e dislipidemia mista, insuficiência cardiaca, hipercolesterolemia, doenças cardiovasculares incluindo aterosclerose, arteriosclerose, e hipertriglice-ridemia, diabetes mellitus do tipo II, diabetes do tipo I, resistência à insulina, hiperlipidemia, anorexia nervosa, obesidade. Como tal, os compostos podem também ser úteis como terapia para doença das artérias coronárias, trombose, angina, insuficiência renal crónica, doença vascular periférica e acidente vascular cerebral.

Além disso, também se crê que os receptores HM74 e HM74A estão envolvidos em inflamação. A inflamação represente um grupo de respostas vasculares, celulares e neurológicas a trauma. A inflamação pode ser caracterizada como o movimento de células inflamatórias tais como monócitos, neutrófilos e granulócitos para os tecidos. Isto 10 ΡΕ1781657 está geralmente associado com uma função de barreira endotelial reduzida e a edema nos tecidos. A inflamação relativamente a doença é tipicamente referida como inflamação crónica e pode durar a vida inteira. Tal inflamação crónica pode-se manifestar através de sintomas de doença. O objectivo da terapia anti-inflamatória é deste modo a redução desta inflamação crónica e permitir que progrida o processo fisiológico de reparação de tecidos e cura.

Exemplos de doenças ou condições inflamatórias para as quais os compostos da presente invenção podem mostrar utilidade incluem aquelas das articulações, particularmente a artrite (por exemplo, artrite reumatóide, osteoartrite, falência de prótese de articulação), ou do tracto gastrointestinal (por exemplo, colite ulcerosa, doença de Crohn, e outras doenças inflamatórias dos intestinos e gastrointestinais, gastrite e inflamação das mucosas resultante de infecção, a enteropatia provocada por fármacos anti-inflamatórios não esteróides), dos pulmões (por exemplo, sindroma de insuficiência respiratória no adulto, asma, fibrose quistica, ou doença obstrutiva pulmonar crónica), do coração (por exemplo, miocardite), do tecido nervoso (por exemplo, esclerose múltipla) , do pâncreas (por exemplo, inflamação associada com diabetes mellitus e suas complicações), dos rins (por exemplo, glomerulonefrite), da pele (por exemplo, dermatite, psori-ase, eczema, urticária, lesões de queimaduras), dos olhos (por exemplo, glaucoma) assim como de órgãos transplantados (por exemplo, rejeição) e doenças que afectam múltiplos 11 ΡΕ1781657 órgãos (por exemplo, lúpus eritematoso sistémico, sepsia) e sequelas inflamatórias de infecções virais ou bacterianas e condições inflamatórias associadas a aterosclerose e após agressões hipóxicas ou isquémicas (com ou sem reperfusão), por exemplo, no cérebro ou na doença isquémica do coração.

Em particular, os compostos desta invenção são úteis para o tratamento e a prevenção de inflamação, diabetes e doenças ou condições cardiovasculares incluindo aterosclerose, arteriosclerose, hipertrigliceridemia, e dislipidemia mista 0 ácido nicotinico têm um perfil de efeitos secundários significativo, possivelmente por ser doseado em niveis elevados (quantidades na ordem dos gramas diariamente). 0 efeito secundário mais comum é um corar cutâneo intenso. Em certas realizações da presente invenção os compostos podem apresentar efeitos secundários reduzidos em comparação com o ácido nicotinico. Identificou-se HM74A como um receptor de elevada afinidade para o ácido nico-tínico enquanto que HM74 é um receptor de menor afinidade. Os compostos da presente invenção podem encontrar utilização como agonistas HM74A selectivos ou agonistas parciais; em cujo caso apresentarão uma afinidade superior para HM74A do que para HM74. 0 potencial para compostos de fórmula (I) em activar HM74A pode ser demonstrado, por exemplo, usando os seguintes testes enzimático e de células inteiras in vitro: 12 ΡΕ1781657

Testes in vitro:

Para transfecções transientes, mantiveram-se células HEK293T (células HEK293 que expressam de forma estável o antigénio T grande SV40) em DMEM contendo 10% de soro fetal bovino e 2 mM de glutamina. As células foram adicionadas em placas de cultura de 90 mm e crescidas até 60-80% de confluência (18-24 h) antes de transfecção. Subclonou-se HM74A humano (número de acesso GenBank™ AY148884) num vector de expressão de mamífero (pcDNA3; Invitrogen) e transfectou-se usando o reagente Lipofecta-mina. Para a transfecção, misturou-se 9 yg de ADN com 30 yL de Lipofectamina em 0,6 mL de Opti-MEM (Life Technologies Inc.) e incubou-se à temperatura ambiente durante 30 min antes da adição de 1,6 mL de Opti-MEM. As células foram expostas à mistura Lipofectamina/ADN durante 5 h e então adicionou-se 6 mL de soro fetal bovino a 20% (v/v) em DMEM. As células foram recolhidas 48h após transfecção. Realizou-se o tratamento com a toxina pertussis foi levado a cabo por suplementação no meio a 50 ng mL-1 durante 16 h. Todos os estudos de transfecção transientes envolveram co-transfecção do receptor em conjunto com a proteína G G±/0, Goia ·

Para a geração de linhas celulares estáveis usou-se o método acima descrito para transfectar células CHO-K1 inoculadas em placas de seis poços e crescidas até 30% de confluência. Estas células foram mantidas em meio DMEM F-12 HAM contendo 10% de soro fetal bovino e 2 mM de glutamina. 13 ΡΕ1781657 48 h após a transfecção o meio foi suplementado com 400 yg/mL de Geneticina (G418, Gibco) para selecção de células resistentes a antibióticos. As linhas celulares CHO-K1 clonais que expressam HM74A foram confirmadas por medições de ligação [ 35S]-GT-PyS, seguindo-se a adição de ácido nicotinico.

Preparação de membrana P2 - fracções de partículas P2 contendo membrana plasmática foram preparadas a partir de pastas celulares congeladas a -80°C após a recolha. Todos os procedimentos foram levados a cabo a 4°C. Os sedimentos celulares foram ressuspendidos em 1 mL de lOmM Tris-HCl e 0,1 mM EDTA, pH 7,5 (tampão A) e por homogeneização durante 20 s com um Ultra Turrax seguida por passagem (5 vezes) através de uma agulha de calibre 25. Os lisados celulares foram centrifugados a 1000 g durante 10 min numa microcentrífuga para sedimentar os núcleos e as células não homogeneizadas e recuperaram-se as fracções de partículas P2 por centrifugação a 16000 g durante 30 min. As fracções de partículas P2 foram ressuspendidas em tampão A e armazenadas a -80°C até ser necessário.

Ligação [35s]~GTPyS - Realizaram-se ensaios de ligação à temperatura ambiente num formato de 384 poços com base em métodos descritos anteriormente (Wieland, T. e Jakobs, K.H. (1994) Methods Enzymol. 237,3-13). Resumidamente, preparou-se a diluição de compostos padrão e em teste e adicionou-se a uma placa de 384 poços a um volume de 10 pL. Diluíram-se membranas (HM74A ou HM74) em tampão 14 ΡΕ1781657 de ensaio (20 mM HEPES, 100 mM NaCl, 10 mM MgCl2, pH 7,4) suplementado com saponina (60 mg/mL) , esferas Leadseeker WGA (Amersham; 250 mg/poço) e 10 mM GDP, de modo que o volume de 20 pL adicionado a cada poço contém 5 pg de membranas. Diluiu-se [35S]-GTPyS (1170 Ci/mmol, Amersham) (1:1500) no tampão do ensaio e adicionou-se 20 μΐ a cada poço. Após a adição do radioligando, as placas foram seladas, submetidas a um pulso de centrifugação, e incubadas durante 4 horas à temperatura ambiente. No final do periodo de incubação, as placas foram lidas numa máquina Leadseeker (VIEWLUX PLUS; Perkin-Elmer) para determinar os niveis de ligação específica.

Testes in vivo

Testaram-se agonistas HM74A em ratos Sprague-Dawley (200-250 g) que tinham sido submetidos a jejum durante pelo menos 12 horas antes do estudo. Os compostos foram dosados intravenosamente (5 mL/kg) ou por gavagem oral (10 mL/kg) . Amostras de sangue (0,3 mL de sangria da veia da cauda) foram recolhidas antes da dose e três vezes depois da dose (vezes variando de 15 minutos a 8 horas depois da dose) Cada amostra de sangue foi transferida para um tubo de heparina (Microtainer Becton Dickinson, PST LH) e centrifugada (10000 g durante 5 minutos) para produzir uma amostra de plasma. As amostras de plasma foram testadas em relação aos níveis de ácidos gordos não este-rificados (NEFA) usando um kit comercialmente disponível (Randox). A inibição de níveis plasmáticos de NEFA, 15 ΡΕ1781657 relativa aos níveis de antes da dose, foi usada como um sucedâneo para actividade agonista HM74A.

De modo a determinar se os compostos HM74A exibiram a resposta de lavagem associada ao ácido nicotínico, eles foram dosados em porcos da índia anestesiados. Porcos da índia Dunkin Hartley machos (300-800 g) ficaram em jejum por 12 horas antes de serem anestesiados com uma mistura de cloridrato de cetamina (Vetalar, 40 mg/kg i.m.), Xilazina (Rompun, 8 mg/kg i.m.) e pentobarbitona de sódio (Sagatal, 30 mg/kg i.p.) . Após a anestesia, foi realizada uma tra-queostomia e os animais foram mecanicamente ventilados com ar ambiente (10-12 mL/kg, 60 respirações/minuto). Uma veia jugular e uma artéria carótida foram canuladas para administração intravenosa do composto em teste e recolha de sangue respectivamente. Uma sonda de temperatura infravermelha (Extech Instruments) foi colocada a 3-5 mm da extremidade da orelha esquerda. As medidas de temperatura foram registadas a cada minuto a partir dos 5 minutos antes do composto de teste e até 40 minutos depois da administração do composto teste. Os dados foram automaticamente recolhidos num computador Psion antes de serem transferidos para análise dos dados numa folha de cálculo de Excel. Antes da administração do composto, e a pontos de tempo frequentes depois, foram recolhidas amostras de sangue (0,3 mL) por meio de uma cânula arterial carótida e transferidas para tubos Microtainer (BD) contendo heparina de lítio. As amostras foram misturadas de forma completa num rolador de tubos de sangue e em seguida armazenadas em gelo antes da centrifugação a 1200 g durante 5 minutos. 16 ΡΕ1781657 0 ácido nicotínico (10 mg/kg i.v.) produziu um aumento médio (± e.p.m.) na temperatura da orelha equivalente a 10,42 ± 1,44 (área sobre a curva; unidades arbitrárias; n = 6) . Por comparação, o composto do Exemplo 30 (10 mg/kg i.v.) produziu um aumento médio (± e.p.m.) na temperatura da orelha equivalente a 1,52 ± 0,39 (área sobre a curva; unidades arbitrárias; n = 6), uma redução de 85%.

Compostos de acordo com a Fórmula (I) foram sintetizados (ver exemplos sintéticos a seguir) e testados num ou mais dos ensaios discutidos anteriormente. Todos os compostos exemplificados têm um pEC50 de 4,9 ( + /- 0,3 unidade logarítmica) ou mais e uma eficácia de 30% ou superior. Alguns compostos particulares estão exemplificados abaixo.

Purificação geral e métodos analíticos:

Os espectros de massa (MS) foram registados num espectrómetro de massa Fisons VG Platform usando modos de ionização positiva por electrospray [(ES+ve para originar iões moleculares MH+ e M(NH4)+] ou ionização negativa por electrospray [(ES-ve para originar o ião molecular (M-H)-].

Espectros RMN H1 foram registados usando um espectrómetro Bruker DPX 400MHz usando tetrametilsilano como padrão externo. 17 ΡΕ1781657

Cromatografia Biotage™ refere-se à purificação realizada usando equipamento vendido pela Dyax Corporation (tanto Flash 401 como Flash 150i) e cartuchos pré-empa-cotados com KPSil.

Autoprep direccionada para massa refere-se a métodos onde o material foi purificado por cromatografia liquida de alta eficiência numa coluna HPLCABZ+ 5 ym (5 cm x 10 mm d.i.) com HC02H 0,1% em água e MeCN 95%, água 5% (HCO2H 0,5%) utilizando as seguintes condições de gradiente de eluição: 0-1,0 minutos 5%B, 1,0-8,0 minutos 5—>30%B, 8,0-8,9 minutos 30%B, 8,9-9,0 minutos 30—»95%B, 9,0-9,9 minutos 95—>0%B, 9,9-10 minutos a um caudal de 8 mL minutos-1 (Sistema 2) . 0 amostrador Gilson 202 foi accio- nado por um Espectrómetro de Massa de Plataforma VG aquando da detecção da massa de interesse. HPLC preparativa refere-se aos métodos onde o material foi purificado por cromatografia liquida de alta eficiência numa coluna de 5 ym HPLCABZ+ (10 cm x 21,2 mm d.i.) com HC02H 0,1% em água (A) e MeCN (HCO2H 0,5%) (B) utilizando as condições de gradiente de eluição genéricas expressas como gradiente "x para y" com um sistema de gradiente como se segue: 0-1,45 minutos x%B, 1,45-20 minutos x—>y%B, 20-24 minutos y—>95%B, 24-30 minutos 95%B, 32-34 minutos 95—»x%B a um caudal de 8 mL minutos-1. O amostrador Gilson 233 foi accionado por UV (254 nm). SPE (extracção em fase sólida) refere-se ao uso 18 ΡΕ1781657 de cartuchos vendidos pela International Sorbent Technology Ltd.

Strata Fenil SPE refere-se ao uso de cartuchos vendidos pela Phenomenex. 0 composto foi carregado num cartucho previamente acondicionado com MeCN e equilibrado com MeCN 5% em água. 0 composto foi eluido com HC02H 0,1% em água e MeCN (HCO2H 0,5%) com um gradiente adequado num Combiflash Optix 10.

Tal como indicado acima, compostos da fórmula (I) podem encontrar uso na medicina humana ou veterinária, em particular como activadores de HM74A, na gestão da dislipidemia e da hiperlipoproteinemia.

Assim, é fornecido como um aspecto adicional da presente invenção um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso na medicina humana ou veterinária, particularmente no tratamento de distúrbios do metabolismo lipidico incluindo dislipidemia ou hiperlipoproteinemia, tais como dislipidemia diabética e dislipidemia mista, insuficiência cardíaca, hipercolesteremia, doença cardiovascular incluindo aterosclerose, arteriosclerose e hipertrigliceridemia, diabetes mellitus do tipo II, diabetes do tipo I, resistência à insulina, hiperli-pidemia, anorexia nervosa, obesidade. Desta forma, os compostos também são fornecidos para uso no tratamento de doença arterial coronária, trombose, angina, insuficiência renal crónica, doença vascular periférica e acidente vascular . 19 ΡΕ1781657 É fornecido como um aspecto adicional da presente invenção um composto de fórmula (I) ou um se sal farma-ceuticamente aceitável, para uso na produção de um medicamento para o tratamento de distúrbios do metabolismo lipidico incluindo dislipidemia ou hiperlipoproteinemia, tais como dislipidemia diabética e dislipidemia mista, insuficiência cardíaca, hipercolesteremia, doença cardiovascular incluindo aterosclerose, arteriosclerose e hiper-trigliceridemia, diabetes mellitus do tipo II, diabetes do tipo I, resistência à insulina, hiperlipidemia, anorexia nervosa, obesidade. Desta forma, os compostos também são fornecidos para uso no tratamento de doença arterial coronária, trombose, angina, insuficiência renal crónica, doença vascular periférica e acidente vascular.

Deve ter-se em conta que as referências feitas aqui a tratamento se estendem a profilaxia, prevenção da recorrência e supressão de sintomas, bem como ao tratamento das condições estabelecidas.

De acordo com um outro aspecto da invenção, é proporcionado o uso de um composto de Fórmula (II)

20 ΡΕ1781657 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que: R1 representa hidrogénio ou metilo; R representa n-alquilo não substituído C4-6; e R3 representa cloro; na produção de um medicamento para o tratamento de distúrbios do metabolismo lipídico incluindo dislipidemia ou hiperlipoproteinemia. Em particular, é proporcionado o uso de um composto de Fórmula (II) no fabrico de um medicamento para o tratamento de dislipidemia diabética ou dislipidemia mista, insuficiência cardíaca, hipercolesteremia, diabetes mellitus do tipo II, diabetes do tipo I, resistência à insulina, hiperlipidemia, anorexia nervosa, obesidade, doença arterial coronária, trombose, angina, insuficiência renal crónica, acidente vascular e doença cardiovascular incluindo aterosclerose, arteriosclerose e hipertrigli-ceridemia.

Numa realização da invenção, é proporcionado um composto de fórmula (II) para uso no tratamento de distúrbios do metabolismo lipídico incluindo dislipidemia ou hiperlipoproteinemia. Em particular, é proporcionado o uso de um composto de Fórmula (II) no fabrico de um medicamento para o tratamento de dislipidemia diabética ou dislipidemia mista, insuficiência cardíaca, hipercolesteremia, diabetes mellitus do tipo II, diabetes do tipo I, resistência à insulina, hiperlipidemia, anorexia nervosa, obesidade, doença arterial coronária, trombose, angina, insuficiência renal crónica, acidente vascular e doença cardiovascular incluindo aterosclerose, arteriosclerose e hipertriglice-ridemia. 21 ΡΕ1781657

Em certas realizações, R2 representa fenilo.

Compostos particulares para uso no tratamento, ou na produção de um medicamento para o tratamento de distúrbios do metabolismo lipidico incluindo dislipidemia ou hiperlipoproteinemia incluem: 3-Butil-8-cloro-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona, 8-Cloro-l-metil-3-pentil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona, 3-Butil-8-cloro-l-metil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona, 8-Cloro-3-(3-metilbutil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona, 8-Cloro-3-pentil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona, 8-Cloro-3-hexil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona, 8-Cloro-3-hexil-l-metil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona, 8-Cloro-3-(4-metilpentil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona, (+/-)-8-Cloro-3-(3-metilpentil)-3,7-di-hidro-lH-purin-2,6-diona, ( + /-)-8-Cloro-3- (2-metilbutil)-3,7-di-hidro-lH-purin-2,6-diona, ( + /-) -8-Cloro-3-(2-metilpentil)-3,7-di-hidro-lH-purin-2,6-diona,

Deve entender-se que este aspecto da presente invenção inclui qualquer combinação de realizações particulares e abrange todas as combinações de substituintes particulares aqui descritos anteriormente para compostos da fórmula (II).

Adicionalmente, a presente invenção proporciona o 22 ΡΕ1781657 uso de um composto de fórmula (I) ou um seu sal farma-ceuticamente aceitável, na produção de um medicamento para o tratamento de doenças ou condições inflamatórias da articulação, particularmente artrite (por exemplo, artrite reumatóide, osteoartrite, falência da articulação pros-tética), ou do tracto gastrintestinal (por exemplo, colite ulcerosa, doença de Crohn, e outras doenças inflamatórias do intestino e gastrintestinais, gastrite e inflamação da mucosa resultante de infecção, a enteropatia provocada por medicamentos anti-inflamatórios não esteróides), do pulmão (por exemplo, sindrome da insuficiência respiratória do adulto, asma, fibrose quística, ou doença pulmonar obstrutiva crónica), do coração (por exemplo, miocardite), do tecido nervoso (por exemplo, esclerose múltipla), do pâncreas, (por exemplo, inflamação associada com diabetes mellitus e suas complicações, do rim (por exemplo, glo-merulonefrite), da pele (por exemplo, dermatite, psoríase, eczema, urticária, lesão de queimadura) , dos olhos (por exemplo, glaucoma), bem como de órgãos transplantados (por exemplo, rejeição) e doenças de múltiplos órgãos (por exemplo, lúpus eritematoso sistémico, sepsia) e sequelas inflamatórias de infecções virais ou bacterianas e condições inflamatórias associadas com aterosclerose e após agressões hipóxicas ou isquémicas (com ou sem reperfusão), por exemplo, no cérebro ou na doença isquémica do coração.

Também se proporciona um método para o tratamento de um individuo humano ou animal com uma condição onde a sub-activação do receptor HM74A contribui para a condição 23 ΡΕ1781657 ou onde a activação do receptor será benéfica, método este que compreende administrar ao dito individuo humano ou animal uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) ou um seu sal ou solvato fisioloqicamente aceitável.

Novamente, entende-se que isto inclui qualquer combinação de realizações particulares e abrange todas as combinações de substituintes particulares aqui descritos acima por compostos da Fórmula (I).

Mais particularmente, proporciona-se um método para o tratamento de distúrbios do metabolismo lipídico incluindo dislipidemia ou hiperlipoproteinemia tais como dislipidemia diabética e dislipidemia mista, insuficiência cardiaca, hipercolesteremia, doença cardiovascular incluindo aterosclerose, arteriosclerose e hipertrigliceridemia, diabetes mellitus do tipo II, diabetes do tipo I, resistência à insulina, hiperlipidemia, anorexia nervosa, obesidade, método este que compreende administrar ao dito individuo humano ou animal uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) ou um seu sal ou solvato fisiologicamente aceitável. Como tal, estes compostos podem também encontrar aplicação em métodos para o tratamento de doença arterial coronária, trombose, angina, insuficiência renal crónica, doença vascular periférica e acidente vascular, métodos estes que compreendem administrar ao dito individuo humano ou animal uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I). - 24 - ΡΕ1781657 A quantidade de um modulador HM74A que é exigida para obter o efeito biológico desejado irá, naturalmente, depender de inúmeros factores, por exemplo, o modo de administração e a condição clinica precisa do receptor. Em geral, a dose diária será na gama de 0,1 mg - 1 g/kg, tipicamente 0,1 - 100 mg/kg. Uma dose intravenosa pode, por exemplo, ser na gama de 0,01 mg a 0,1 g/kg, tipicamente 0,01 mg a 10 mg/kg, que pode convenientemente ser administrada como uma infusão a partir de 0,1 pg a 1 mg, por minuto. Fluidos de infusão adequados para este propósito podem conter, por exemplo, de 0,01 pg a 0,1 mg, por mililitro. Doses únicas podem conter, por exemplo, de 0,01 pg a 1 g de um modulador HM74A. Assim ampolas para injecção podem conter, por exemplo, de 0,01 pg a 0,1 g e formulações de doses únicas administráveis oralmente, tais como comprimidos ou cápsulas, podem conter, por exemplo, de 0,1 mg a 1 g. Nenhuns efeitos toxicológicos são indicados/esperados quando um composto da invenção é administrado na gama de dosagem acima mencionada.

Um composto da presente invenção pode ser usado como o composto tal qual no tratamento de uma doença onde a sub-activação do receptor HM74A contribui para a doença ou em que a activação do receptor será benéfica, um exemplo disto é quando um composto da presente invenção é apresentado com um veiculo aceitável na forma de uma formulação farmacêutica. O veiculo deve, naturalmente, ser aceitável no sentido de que é compatível com os outros ingredientes da formulação e não deve ser prejudicial ao receptor. O 25 ΡΕ1781657 veículo pode ser um sólido ou um líquido, ou ambos, e pode ser formulado com o modulador HM74A como uma formulação de dose única, por exemplo, um comprimido, que pode conter de 0,05% a 95% por peso do modulador HM74A.

As formulações incluem aquelas adequadas para administração oral, rectal, tópica, bucal (por exemplo, sublingual) e parenteral (por exemplo, subcutânea, intramuscular, intradérmica ou intravenosa). É também proporcionado um processo para a preparação de uma tal composição farmacêutica que compreende misturar os ingredientes.

Formulações adequadas para administração oral podem ser apresentadas em unidades discretas, tais como cápsulas, hóstias, pastilhas ou comprimidos, cada qual contendo uma quantidade predeterminada de um modulador HM74A; como um pó ou grânulos; como uma solução ou uma suspensão num líquido aquoso ou não aquoso; ou na forma de uma emulsão de óleo em água ou água em óleo. Em geral, as formulações são preparadas misturando de maneira uniforme e íntima o modulador HM74A activo com um veículo líquido ou sólido finamente dividido, ou ambos, e em seguida, caso necessário, modelando o produto. Por exemplo, um comprimido pode ser preparado prensando ou moldado originando um pó ou grânulos do modulador HM74A opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Comprimidos prensados podem ser preparados prensando, numa máquina adequada, o composto 26 ΡΕ1781657 numa forma de escoamento livre, tais como um pó ou grânulos opcionalmente misturados com um aglutinante, lubrificante, diluente inerte e/ou agente(s) tensioactivo(s)/ disper-sante(s). Comprimidos moldados podem ser feitos por moldagem, numa máquina adequada, o composto em pó humedecido com um diluente liquido inerte.

Comprimidos e cápsulas para administração oral podem conter excipientes convencionais tais como aglutinantes, por exemplo, xarope, acácia, gelatina, sorbitol, tragacanto, mucilagem de amido ou polivinil pirrolidona; agentes de enchimento, por exemplo, lactose, celulose microcristalina, açúcar, amido de milho, fosfato de cálcio ou sorbitol; lubrificantes, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico, talco, polietileno glicol ou sílica; desintegrantes, por exemplo, amido de batata, croscarmelose de sódio ou glicolato de amido de sódio; ou agentes humectantes tal como lauril sulfato de sódio. Os comprimidos podem ser revestidos de acordo com os métodos bem conhecidos na técnica. Preparações líquidas orais podem ser na forma de, por exemplo, suspensões, soluções, emulsões, xaropes ou elixires aquosos ou oleosos, ou podem ser apresentadas como um produto seco para constituição com água ou outros veículos adequados antes da utilização. Tais preparações líquidas podem conter aditivos convencionais tais como agentes de suspensão, por exemplo, xarope de sorbitol, metilcelulose, xarope de glicose/açúcar, gelatina, hidroximetilcelulose, carboximetilcelulose, gel de estearato de alumínio ou gorduras comestíveis hidrogenadas; agentes emulsionantes, por exemplo, lecitina, mono-oleato 27 ΡΕ1781657 de sorbitan ou acácia; veículos não aquosos (que podem incluir óleos comestíveis) , por exemplo, óleo de amêndoa, óleo de coco fraccionado, ésteres oleosos, propileno glicol ou álcool etílico; ou conservantes, por exemplo, p-hidroxibenzoatos de metilo ou propilo ou ácido sórbico. As preparações podem também conter sais de tampão, agentes aromatizantes, agentes corantes e/ou adoçantes (por exemplo, manitol) conforme apropriado.

Formulações adequadas para administração bucal (sublingual) incluem pastilhas compreendendo um modulador HM74A numa base aromatizada, usualmente sacarose e acácia ou tragacanto e pastilhas compreendendo o modulador HM74A numa base inerte tal como gelatina e glicerina ou sacarose e acácia.

Formulações da presente invenção adequadas para administração parenteral convenientemente compreendem preparações aquosas estéreis de um modulador HM74A, a fase formulação pode ser isotónica com o sangue do receptor pretendido. Estas preparações poderiam ser administradas intravenosamente, embora a administração possa também ser efectuada por meio de injecção subcutânea, intramuscular ou intradérmica. Tais preparações podem ser convenientemente preparadas adicionando e misturando o modulador HM74A com água e tornando a solução resultante estéril e isotónica com o sangue. Composições injectáveis de acordo com a invenção conterão geralmente de 0,1 a 5% p/p do modulador HM74A. 28 ΡΕ1781657

Assim, formulações da presente invenção adequadas para administração parenteral compreendendo um composto de acordo com a invenção podem ser formuladas para administração parenteral por injecção de bólus ou infusão continua e podem ser apresentadas em forma de dose única, por exemplo, como ampolas, frascos, infusões de pequenos volumes ou serinqas pré-cheias, ou em recipientes de múltiplas doses com um conservante adicionado. As composições podem tomar formas tais como soluções, suspensões ou emulsões em veiculos aquosos ou não aquosos, e podem conter agentes de formulação tais como antioxidantes, tampões, agentes antimicrobianos e/ou agentes de ajuste de toxicidade. Alternativamente, o ingrediente activo pode ser em forma de pó para constituição com um veiculo adequado, por exemplo, água estéril livre de pirogénio, antes do uso. A apresentação do sólido seco pode ser preparada enchendo um pó estéril assepticamente em recipientes estéreis individuais ou enchendo uma solução estéril assepticamente em cada receptor e liofilizando.

Formulações adequadas para administração rectal podem ser apresentadas como supositórios de dose única. Estes podem ser preparados misturando um modulador HM74A com um ou mais veiculos sólidos convencionais, por exemplo, manteiga de cacau ou glicéridos, e em seguida modelando a mistura resultante.

Formulações adequadas para aplicação tópica na pele podem ser na forma de um unguento, creme, loção, 29 ΡΕ1781657 pasta, gel, spray, aerossol, ou óleo. Veículos que podem ser usados incluem vaselina, lanolina, polietileno glicóis, álcoois, e combinações de dois ou mais destes. 0 modulador HM74A está geralmente presente numa concentração de 0,1 a 15% p/p da composição, por exemplo, de 0,5 a 2%.

Por administração tópica, tal como aqui utilizado, inclui-se administração por insuflação e inalação. Exemplos de vários tipos de preparação para administração tópica incluem unguentos, cremes, loções, pós, pessários, sprays, aerossóis, cápsulas ou cartuchos para o uso num inalador ou insuflador ou gotas (por exemplo, colírios ou gotas nasais).

Unguentos e cremes podem, por exemplo, ser formulados com uma base aquosa ou oleosa com a adição de agentes de espessamento e/ou gelificação e/ou solventes adequados. Tais bases podem assim, por exemplo, incluir água e/ou um óleo tal como parafina líquida ou um óleo vegetal tais como óleo de amendoim ou óleo de rícino ou um solvente tal como um polietileno glicol. Agentes de espessamento que podem ser usados incluem parafina macia, estearato de alumínio, álcool cetoestearílico, polietileno glicóis, cera microcristalina e cera de abelha.

Loções podem ser formuladas com uma base aquosa ou oleosa e em geral também conterão um ou mais agentes emulsionantes, agentes estabilizantes, agentes de dispersão, agentes de suspensão ou agentes espessantes. 30 ΡΕ1781657 Pós para aplicação externa podem ser formados com a ajuda de qualquer base de pó adequada, por exemplo, talco, lactose ou amido. Gotas podem ser formuladas com uma base aquosa ou não aquosa também compreendendo um ou mais agentes de dispersão, agentes solubilizantes ou agentes de suspensão.

Composições de spray podem ser formuladas, por exemplo, como soluções ou suspensões aquosas ou como aerossóis administrados através de embalagens pressurizadas, com o uso de um propulsor adequado, por exemplo, diclorodi-fluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroeta-no, 1, 1, 1,2,3,3,3-heptafluoropropano, 1,1,1,2-tetrafluoro-etano, dióxido de carbono ou outros gases adequados. Cápsulas e cartuchos para o uso num inalador ou insuflador, por exemplo, de gelatina, podem ser formulados contendo uma mistura de pó de um composto da invenção e uma base de pó adequada tais como lactose ou amido.

As composições farmacêuticas de acordo com a invenção podem também ser usadas em combinação com outros agentes terapêuticos, por exemplo, em combinação com outras classes de medicamentos dislipidémicos (por exemplo, estatinas, fibratos, resinas de ligação aos ácidos biliares ou ácido nicotinico).

Os compostos da presente invenção podem ser usados em combinação com um ou mais outros agentes terapêuticos, por exemplo, em combinação com outras classes de 31 ΡΕ1781657 medicamentos dislipidémicos por exemplo, inibidores da redutase da 3-hidróxi-3-metilglutaril-coenzima A (estati-nas) ou fibratos ou resinas de ligação aos ácidos biliares ou ácido nicotinico. A invenção fornece assim, num aspecto adicional, a utilização de uma tal combinação no tratamento de doenças onde uma sub-activação do receptor HM74A contribui para a doença ou onde uma activação do receptor será benéfica e o uso de um composto de fórmula (I) ou (II) ou um seu sal, solvato, ou derivado fisiologicamente funcional farmaceuticamente aceitável na produção de um medicamento para a terapia de combinação de distúrbios do metabolismo lipidico incluindo dislipidemia ou hiperlipoproteinemia tais como dislipidemia diabética e dislipidemia mista, insuficiência cardiaca, hipercolesteremia, doença cardiovascular incluindo aterosclerose, arteriosclerose, e hiper-trigliceridemia, diabetes mellitus do tipo II, diabetes do tipo I, resistência à insulina, hiperlipidemia, anorexia nervosa ou obesidade.

Quando os compostos da presente invenção são usados em combinação com outros agentes terapêuticos, os compostos podem ser administrados tanto sequencialmente como simultaneamente por qualquer via conveniente.

As combinações referidas anteriormente podem ser convenientemente apresentadas para utilização na forma de uma formulação farmacêutica e assim formulações farmacêuticas compreendendo uma combinação tal como definida acima idealmente em conjunto com um veiculo ou excipiente farmaceuticamente aceitável que compreende um aspecto 32 ΡΕ1781657 adicional da invenção. Os componentes individuais de tais combinações podem ser administrados tanto sequencial como simultaneamente em formulações farmacêuticas separadas ou combinadas.

Quando combinados na mesma formulação, notar-se-á que os dois componentes têm que ser estáveis e compatíveis entre si e os outros componentes da formulação e podem ser formulados para administração. Quando formulados separadamente eles podem ser fornecidos em qualquer formulação conveniente, convenientemente numa maneira tal como conhecida para tais compostos na técnica.

Quando em combinação com um segundo agente terapêutico activo contra a mesma doença, a dose de cada componente pode diferir daquela quando o composto é usado isoladamente. As doses apropriadas serão facilmente determinadas pelos peritos na técnica. A invenção assim fornece, num aspecto adicional, uma combinação compreendendo um composto de fórmula (I) ou (II) ou um seu sal ou solvato fisiologicamente aceitável juntamente com outro agente terapeuticamente activo. A combinação referida anteriormente pode convenientemente ser apresentada para o uso na forma de uma formulação farmacêutica e assim formulações farmacêuticas compreendendo uma combinação tal como definida acima juntamente com um veiculo farmaceuticamente aceitável destes representa um aspecto adicional da invenção. 33 ΡΕ1781657

Os compostos da presente invenção têm uma duração de acção útil.

Os compostos da presente invenção e seus sais e solvatos podem ser preparados pela metodologia descrita aqui de seguida.

Processo A:

Um processo de acordo com a invenção para preparar um composto de fórmula (I) ou fórmula (II) em que R1 é 2 3 H ou é o mesmo que R e R e Cl, compreende:

34 ΡΕ1781657 i) Alquilação de guanina com brometo de alilo ii) Diazotização com nitrato de sódio seguida por hidrólise para formar a xantina iii) Cloração iv) alquilação em N3 e/ou dialquilação em NI e N3 v) Remoção catalisada por paládio do grupo alilo

Processo B:

Um processo para preparar um composto de fórmula (I) ou fórmula (II) em que R3 é CN compreende os passos (i) e (ii) do processo A seguido por:

iii) Alquilação em N3

iv) Alquilação em NI

v) Formação de aldeido em C8 por litiação com LiHMDS e paragem da reacção com DMF vi) Conversão do aldeido em nitrilo vii) Remoção catalisada de paládio do grupo alilo 35 ΡΕ1781657

Processo C:

Um processo para preparar um composto de fórmula (I) ou fórmula (II) em que R3 é Cl ou Br compreende os passos (i) a (iv) do processo B seguidos por:

R3 R3 ~ Cl ou Br

i) NCS ouNBS OMF ií) Pd(PPhj)4 morfofina

i) Halogenação em C8 usando NCS ou NBS ii) Remoção catalisada por paládio do grupo alilo

Processo D: Um processo de acordo para a preparação de um composto de fórmula (I) ou fórmula (II) em que R3 é CN compreende as etapas (i) a (iv) do processo B seguido por:

(Viíij POCI, OMF

R2

OMF

36 ΡΕ1781657 v) Formação de éster vi) Hidrólise de éster metilico vii) Conversão do ácido na amida. viii) Conversão da amida para o nitrilo ix) Remoção catalisada por paládio do grupo alilo

Processo E:

Um processo para a preparação de um composto de fórmula (I) ou fórmula (II) em que R3 é Cl compreende:

Pd(OHy H,50 Psi («>

i) Alquilação em N3

ii) Alquilação em NI iii) Desbenzilação iv) Cloração em C8

Processo F:

Um processo para a preparação de um composto de 37 ΡΕ1781657 fórmula (I) ou fórmula (II) em que R1 difere de R2 e R3 é Cl compreende os passos (i) a (iv) do Processo A seguidos por:

v) Alquilação em NI vi) Remoção catalisada por paládio do grupo alilo Processo G:

Um processo de acordo com a invenção para a preparação de um composto de fórmula (I) ou fórmula (II) em que R1 difere de R2 e R3 é Cl compreende os passos (i) a (v) do processo F (em que R2 do processo F é especificamente SEM ou MEM) seguido por:

vi) Clivagem do grupo protector MEM ou SEM vii) Alquilação de N3 seguida pela remoção catalisada de paládio do grupo alilo

Processo H:

Um processo para a preparação de um composto de 38 ΡΕ1781657 fórmula (I) ou fórmula (II) em que R3 é Cl, Br, I ou F compreende as etapas (i) a (iv) do processo B seguidas por:

v) Remoção catalisada por paládio do grupo alilo

vi) Halogenação em C8 usando NCS, NBS ou NIS

Processo I:

Um processo para a preparação de um composto de fórmula (I) ou fórmula (II) em que R1 é H ou alquilo, R2 é alquilo e R3 é Cl compreende:

NaOH ΕίΟΗ,Δ 0)

agente redutor (iii) H20, rói '

39 ΡΕ1781657 i) Formação de pirimidinadiona ii) Nitrosação iii) Redução usando Na2S2C>4 ou um agente de redução similar iv) Formação de xantina v) Alquilação em NI (opcional)

vi) Halogenação em C8 usando NCS

Onde desejado ou necessário, como uma última fase em qualquer dos processos sintéticos anteriores, um composto resultante da fórmula (I) ou (II) pode ser convertido numa forma de sal fisiologicamente aceitável ou vice versa ou converter uma forma de sal noutra forma de sal fisiologicamente aceitável.

ABREVIATURAS THF Tetra-hidrofurano Ac Acetil DCM Diclorometano DMEM meio de Eagle modificado por Dulbecco HEPES ácido 4-(2-hidroxietil)piperazina-l-etanossulfó-nico DMSO Dimetilsulfóxido NBS N-bromosuccinimida NCS N-clorossuccinimida NIS N-iodossuccinimida DMF Dimetilformamida LiHMDS Hexametildisililamida de litio ΡΕ1781657 40 DBAD Dl ΡΕΑ ΡΥΒΟΡ MEM SEM TFA TA Δ

Dibenzilazodicarboxilato Di-isopropiletilamina

Hexafluorfosfato de benzotriazo-l-iloxi-tripirro- lidinofosfónio

Metoxietiloximetilo 2-(trimetilsilil)etoximetilo Ácido trifluoroacético temperatura ambiente

Calor

Os exemplos não limitantes seguintes ilustram a presente invenção:

Exemplos de Sintese

Exemplo 1: 8-Cloro-3-(4-penten-l-il)-3,7-di-hidro-lH-puri- no-2,6-diona (Comparativo)

a) 2-amino-7-(2-propen-l-il)-1,7-di-hidro-6H-purina-6-ona

41 ΡΕ1781657

Uma mistura de guanosina (20 g, 0,071 mol), brometo de alilo (14, 7 mL, 0,169 mol) e DMSO anidro (100 mL) agitaram-se à ta , sob azoto, durante 18 horas. HC1 concentrado (50 mL a 37%) foi adicionado numa porção e a mistura foi agitada durante 45 minutos em seguida vertida em MeOH (600 mL). A solução metanólica foi neutralizada com solução NaOH (aq) a 2M e o precipitado branco resultante recolhido por filtração. O sólido branco foi seco sob vácuo a 50°C durante 18 horas para resultar no composto do titulo (16g em bruto, 119%). m/z 192,2 [MH+] . b) 7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

Uma mistura de 2-amino-7-(2-propen-l-il)-1,7-di-hidro-6H-purina-6-ona (40g, 0,209 mol) em AcOH (900 mL) e água (100 mL) foi aquecida a 55°C. Nitrato de sódio (57,74 g, 0,837 mol) em água (100 mL) foi adicionado gota-a-gota. Cuidado; gases tóxicos. Após estar completa a adição (aproximadamente 25 minutos) a mistura reaccional foi deixada arrefecer à temperatura ambiente e em seguida concentrada para aproximadamente 1/3 do seu volume original. Água (500 mL) foi adicionada e o precipitado resultante recolhido por filtração. O residuo foi lavado com água e em seguida seco a 50°C sobre P2O5 e sob vácuo durante 2 horas para originar o composto do titulo (17,20 g) . A fracção 42 ΡΕ1781657 aquosa foi concentrada e água adicionada (100 mL) . Novamente o sólido resultante foi filtrado e seco. Isto originou mais do composto do titulo (2,31 g). Produto combinado (19,52 g, 49%). m/z 193,2 [MH+] . c) 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-di- ona

H A uma solução de 7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona) (10,52 g, 54,7 mmol) em DMF anidra (60 mL) foi adicionado NCS (8,04 g, 60,2 mmol). A mistura reaccional foi deixada a agitar sob azoto a 20°C durante 6 horas. A mistura reaccional foi concentrada sob vácuo para originar um óleo âmbar. MeOH foi adicionado e deixou-se em repouso durante 18 horas. O residuo resultante foi filtrado e seco sob vácuo para originar o composto do titulo (7,69 g, 62%) . m/z 227,2 [MH+] . d) 8-Cloro-3-(4-penten-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-di-ona

43 ΡΕ1781657

Dissolveu-se 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hi-dro-lH-purino-2,6-diona (0,10 g, 0,44 mmol) em DMF (1,5 mL) contendo carbonato de sódio (0,12 g, 0,49 mmol) e 5-bro-mopenteno (0,07 g, 0,49 mmol) e a mistura foi agitada durante 18 horas. Quando se completou a alquilação, morfolina (0,5 mL) e tetraquis(trifenilfosfina) paládio (0) (0,08 g, 0,07 mmol) foram adicionados e a agitação continuou durante 3.5 horas. A reacção foi diluida com acetato de etilo (10 mL) lavada sequencialmente com ácido clorídrico a 2N (2x5 mL) e salmoura (3x5 mL) e o composto orgânico foi isolado, seco (MgS04) e concentrado. O produto em bruto foi suspenso em metanol (2 mL) e purificado num aminopropil SPE (5 g) eluindo com metanol primeiro, em seguida ácido acético 5% em metanol para eluir o composto do titulo que foi isolado na forma de um sólido branco após a concentração (0,039 g, 35%). RMN; (400 Hz, d6-DMSO) 1,75 (m, 2H), 2.05 (m, 2H) , 3,85 (t, 2H, J = 7Hz) , 4,95 (m, 1H) , 5,05 (m, 1H), 5,8 (m, 1H), 11,1 (br s, 1H), um protão permutável não observado para δΗ 13; m/z 255 [MH+] .

Exemplo 2: 8-Cloro-3-hexil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

Preparado de modo similar ao Exemplo 1 usando 44 ΡΕ1781657 iodeto de hexilo, para resultar no composto do titulo. RMN; §H (400MHz, ds-DMSO) 0 , 85 (t, 3H, J = 7Hz), 1,25 (br s, 6H) , 1,6 (m, 2H) , 3,85 (t, 2H, J = 8Hz), 11,2 (br s, 1H) , um protão permutável não observado para δπ 13; m/ z 271 [ΜΗ+] .

Exemplos 3 e 4 : (8-cloro-2,6-dioxo-l,2, 6,7-tetra-hidro-3H- purin-3-il)acetonitrilo e 2,2'-(8-cloro-2,6-dioxo-6,7-di-hidro-lH-purino-1,3(2H)-di-il)diacetonitrilo (Comparativo)

a) [8-cloro-2, 6-dioxo-7-(2-propen-l-il)-1,2,6,7-tetra-hi-dro-3H-purin-3-il]acetonitrilo e 2,2'-[8-cloro-2,6-dioxo-7-(2-propen-l-il)-6,7-di-hidro-lH-purino-l,3(2H)-di-il] diacetonitrilo

Uma solução de 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (0,445 g, 2,0 mmol) em DMF (8 mL) foi tratada com carbonato de sódio (0,18 g, 1,7 mmol) e bromoacetonitrilo (0,1 mL, 1,4 mmol). A mistura agitada foi aquecida a 70°C durante 3 horas em seguida arrefecida a 45 ΡΕ1781657 50°C e tratada com mais bromoacetonitrilo (0,06 mL, 0,8 mmol) . A mistura foi mantida a 50°C por mais 2 horas e depois arrefecida à temperatura ambiente e evaporada até a secura. O residuo foi tratado com ácido clorídrico aquoso a 1M (20 mL) e extraído com acetato de etilo (2 x 50 mL). As fracções orgânicas foram combinadas, secas sob sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas. O resíduo foi dissolvido em diclorometano (2 mL) , após 20 minutos, o sólido precipitado resultante (8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hi-dro-lH-purino-2,6-diona que não reagiu foi separado por filtração e lavado com mais diclorometano) . O filtrado foi concentrado sob vácuo e submetido a cromatografia "flash" usando acetato de etilo/ciclo-hexano como eluente numa eluição gradiente de 1:3 a 4:1. Para resultar nos dois compostos títulos: [8-cloro-2,6-dioxo-7-(2-propen-l-il)-1,2,6,7-tetra-hidro-3H-purin-3-il]acetonitrilo Sólido branco (0,084 g, 16%); m/z 266 [MH+] . 2,2'-[8-cloro-2,6-dioxo-7-(2-propen-l-il)-6,7-di-hidro-lH-purino-1,3(2H)-di-il]diacetonitrilo Sólido branco (0,195 g, 32%); m/z 305 [MH+] . b) (8-cloro-2,6-dioxo-l,2,6,7-tetra-hidro-3H-purina-3H-il)-acetonitrilo

A uma solução de [8-cloro-2,6-dioxo-7-(2-propen- 46 ΡΕ1781657 l-il)-l,2,6,7-tetra-hidro-3H-purin-3-il]acetonitrilo (0,084 g, 0,32 inmol) em THF (5 mL) foi desgaseif içada pela aplicação sucessiva de vácuo e pressão de azoto à mistura reaccional. A solução foi subsequentemente tratada com morfolina (0,3 ml,3,4 mmol) e tetraquis(trifenilfosfina) paládio(0) (0,03 g, 0,03 mmol). Após 2 horas, a mistura foi tratada com ácido clorídrico aquoso a 2M (3 mL) e clorofórmio (5 mL). A mistura foi separada e a fase orgânica evaporada. 0 produto foi purificado do residuo usando HPLC direccionada para massa, para resultar no composto do titulo na forma de um sólido branco (0,018 g, 25%). RMN δΗ (400MHz, d6-DMSO) 4,95 (s, 2H) , 11,49 (s, 1H) , 14,63 (br s, 1H) ; m/z 226 [MH+] . c) 2,2'-(8-cloro-2,6-dioxo-6,7-di-hidro-lH-purino-l,3(2H)-di-il)diacetonitrilo

O composto titulo foi preparado de 2,2'-[8-cloro-2,6-dioxo-7-(2-propen-l-il)-6,7-di-hidro-lH-purino-l,3(2H)-di-il]diacetonitrilo usando as condições descritas para a síntese de (8-cloro-2,6-dioxo-l,2,6,7-tetra-hidro-3H-purin-3-il)acetonitrilo.

Para resultar no composto do título na forma de um sólido branco 0,068 (4%); RMN δΗ (400MHz, d6-DMSO) 4,88 47 ΡΕ1781657 (s, 2H) , 5,06 (s, 2H), NH não observado para δΗ 14; m/z 282 [MNH4+] .

Exemplo 5: 8-cloro-3-(3,3,3-trifluorpropil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (Comparativo)

Preparado de modo similar ao Exemplo 3 usando 3-bromo-1,1,1-trifluorpropano como agente de alquilação para resultar no composto do titulo. RMN δΗ (400 MHz, d6-DMSO) 2, 64-2,76 (m, 2H) , 4,12 (t, 2H, J = 7Hz) , 11,30 (s, 1H) , 14,46 (br. s, 1H) ; m/z 283 [MH+] .

Exemplo 6: 8-cloro-3-(2,2,2-trifluoretil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (Comparativo)

Preparado de modo similar ao Exemplo 3 usando 2-bromo-1,1,1-trifluoretano como o agente de alquilação e bicarbonato de sódio como base para resultar no composto do titulo. δΗ (400 MHz, d4-MeOD) 4,68 (q, 2H, J = 8,5Hz); m/z 267,1 [M-H] 48 ΡΕ1781657

Exemplo 7 e 8 : 8-cloro-3-(4,4,4-trifluorobutil)-3,7-di-hi-dro-lH-purino-2,6-diona e 8-cloro-l,3-bis(4,4,4-trifluoro-butil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (Comparativo)

a) 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona e 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-1,3-bis (4,4,4-trifluorobutil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona (1,5 g, 6,64 mmol) , carbonato de sódio (844 mg, 7,9 mmol) e 4-bromo-l,1,1-trifluorbutano (1,39 g, 7,3 mmol) foram agitados em dimetilformamida (25 mL, seco) durante sete dias. A mistura reaccional foi partilhada entre acetato de etilo e água. A fase orgânica foi separada e 49 ΡΕ1781657 lavada com ácido clorídrico (2 N), salmoura, seca (MgS04) e em seguida evaporada até a secura. 0 produto em bruto foi triturado com éter e o sólido recolhido por filtração para resultar em 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3-(4,4,4-trifluo-robutil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona na forma de um sólido branco (1,23 g, 57%). m/z 337 [MH+] . 0 filtrado reduzido foi submetido a cromatografia em sílica, coluna SPE (20 g) . Eluição com ciclo-hexa-noracetato de etilo (10:1 a 2:1) disponibilizou 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-1,3-bis(4,4,4-trifluorobutil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona na forma de um xarope (480 mg, 16%). m/z 447 [MH+] . b) 8-cloro-3- (4,4,4-trifluorobutil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil) -3, 7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona (84 mg, 0,25 mmol) e morfolina (220 μΐ, 2,5 mmol) foram desgaseifiçados com azoto em tetra-hidrofurano (3 mL) e em seguida adicionou-se tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (29 mg, 0,025 mmol) e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. O precipitado branco foi recolhido por filtração e lavado com tetra-hidrofurano e éter para 50 ΡΕ1781657 resultar no sal morfolina do composto do título (59 mg). Este foi tratado com HC1 a 2 N e metanol e os solventes evaporados até a secura antes de novamente se dissolver em DMSO / MeOH e purificação por HPLC preparativa usando um gradiente 10 a 40% para originar o composto do titulo (11 mg, 14,9%). RMN δΗ (400 MHz, d4-MeOD) 1,92-2,03 (m, 2H) , 2,19-2,33 (m, 2H) , 4,06 (t, 2H, J = 7Hz) ; m/z 297 [MH+] . c) 8-cloro-l,3-bis(4,4,4-trifluorobutil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

8-cloro-7-(2-propen-l-il)-1,3-bis(4,4,4-trifluo-robutil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona (478 mg, 1,1 mmol) e morfolina (937 μΐ, 11 mmol) foram desgaseifiçados com azoto em tetra-hidrofurano (10 mL) e em seguida adicionou-se tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (123 mg, 0,11 mmol) e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reaccional foi partilhada entre diclorometano e ácido clorídrico a 2 N. A fase orgânica foi separada e reduzida para originar o produto em bruto. Este foi purificado por aminopropil SPE (5 g) seguido por recristalização a partir de acetonitrilo para resultar no composto do título (75,5 mg, 16,9%). RMN. δΗ (400 MHz, CDC13) 1,96-2,13 (m, 4H) , 2,15-2,29 (m, 4H) , 4,15-4,23 (m, 4H) , 12,94 (br. s, 1H) ; m/z 407 [MH+] . 51 ΡΕ1781657

Exemplo 9: 8-cloro-3-(2-ciclopropiletil)-3,7-di-hidro-lH-purina-2 6-diona (Comparativo)

a) 8-cloro-3-(2-ciclopropiletil)-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

Agitaram-se 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3, 7-di-hi-dro-lH-purino-2,6-diona (1,5 g, 6,64 mmol), carbonato de sódio (844 mg, 7,9 mmol) e metanossulf onato de 2-ciclopropiletilo (1,19 g, 7,3 mmol) em dimetilformamida (25 mL, anidra) durante dois dias a 80°C. A mistura reaccional foi partilhada entre acetato de etilo e água. A fase orgânica foi separada e lavada com ácido clorídrico (2 N) , salmoura, seca (MgS04) e depois evaporada até a secura. 0 produto em bruto foi triturado com éter e o sólido recolhido por filtração para resultar no composto do título na forma de um sólido branco (0,96 g, 49%). m/z 295 [MH+] . b) 8-cloro-3-(2-ciclopropiletil)-3,7-di-hidro-lH-purino- 2,6-diona 52 ΡΕ1781657

8-cloro-3-(2-ciclopropiletil)-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (74 mg, 0,25 mmol) e mor-folina (220 μΐ, 2,5 mmol) foram desgaseifiçados com azoto em tetra-hidrofurano (3 mL) e em seguida adicionou-se tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (29 mg, 0,025 mmol) e a mistura reaccional agitada à temperatura ambiente durante a noite. O precipitado branco foi recolhido por filtração e lavado com tetra-hidrofurano e éter para resultar no sal morfolina do composto do título (52 mg) . Este foi tratado com HCL 2 N e metanol e os solventes evaporados até a secura antes de nova dissolução em DMSO / MeOH e purificação por HPLC preparativa usando um gradiente de 10 a 40% para originar o composto do título (22 mg, 34,6%). RMN δΗ (400 MHz, d4-MeOD) 0, 00-0,05 (m, 2H) , 0,37-0,43 (m, 2H) , 0, 67-0,77 (m, 1H) , 1,61 (q, 2H, J = 7Hz), 4,06-4,11 (m, 2H) ; m/z 255 [MH+] .

Exemplo 10: 3-butil-8-cloro-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-dio-na

53 ΡΕ1781657 a) 3-butil-8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-puri-no-2,6-diona

A uma solução de 3-butil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (3,34 g, 13,4 mmol) em DMF anidra (19 mL) adicionou-se NCS (1,97 g, 14,8 mmol) e deixou-se a agitar à ta sob azoto durante 22 horas. A mistura foi concentrada sob vácuo para originar um sólido amarelo que foi filtrado e lavado com metanol. 0 filtrado foi concentrado e o processo repetido. No final da lavagem o filtrado foi purificado por intermédio de um cartucho SPE (Si, 20 g) com eluição com 1:1; EtOAc: ciclo-hexano. Os sólidos combinados foram secos sob vácuo para resultar no composto do titulo (2,42 g, 64%); m/z 283, 3 [MH+] . b) 3-butil-8-cloro-3,7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona o

Uma solução de 3-butil-8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (100 mg, 0,35 mmol) em THF anidro (4 mL) e DMSO anidro (0,4 mL) foi tratada com 54 ΡΕ1781657

Pd(PPh3)4 (61 mg, 0,053 mmol). A mistura foi desgaseifiçada sob leve vácuo, adicionou-se morfolina (308 yL, 3,5 mmol), e deixou-se a agitar à ta sob azoto durante 4 horas. A solução amarela foi partilhada entre HC1 (aq) a 2 M e EtOAc. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca (MgSCy) e concentrada. O resíduo foi absorvido em MeOH e passado através de amino-propil SPE (5 g), eluindo com MeOH seguido por 5% ACOH/ MeOH. As fracções do produto foram combinadas e concentradas sob vácuo para resultar no composto do título na forma de um sólido branco sujo (30 mg, 35%). RMN; δΗ (400 MHz, d6-DMSO) 0,89 (t, 3H, J = 7,5Hz), 1,23-1,34 (m, 2H), 1,55-1,65 (m, 2H), 3,85 (t, 2H, J = 7Hz) , 11,17 (s, 1H) , 14,37 (br.s, 1H) ; m/z 243, 3 [MH+] .

Exemplo 11: 8-Cloro-3-propil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6- diona (Comparativo)

3-Propil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (J. Med. Chem, 1993, 36 (10), 1380-6) (0,3 g, 1,5 mmol) e N- clorosuccinimida (0,21 g, 1,5 mmol) foram dissolvido em DMF (5 mL) e a solução agitada durante 5 horas. A solução foi concentrada e os resíduos sólidos lavados com metanol e filtrados para fornecer o produto na forma de um sólido branco (0,148 g, 42%). RMN; δΗ (400 MHz, d6-DMSO) 0,85 (t, 3H, J = 7Hz), 1,65 (m, 2H), 3,8 (t, 2H, J = 7Hz), 11,2 (s, 1H) , um permutável não observado para δΗ 13; m/z 229 [MH+] 55 ΡΕ1781657

Exemplo 12: 8-cloro-3-pentil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-di- ona

a) 8-cloro-3-pentil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-purino-2,6-diona

A uma solução de 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3,6- di-hidro-lH-purino-2,6-diona (100 mg, 0,44 mmol) em DMF anidra (3 mL) foi adicionado carbonato de sódio (0,051 g, 0,484 mmol). Após 10 minutos de agitação à temperatura ambiente iodeto de pentilo (0,063 mL, 0,484 mmol) foi adicionado e a agitação continuou sob azoto à temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura reaccional foi diluída com água (25 mL) e extraída com EtOAc (2 x 25 mL). Os ex-tractos orgânicos combinados foram secos (MgS04) filtrados e evaporados. Purificação por SPE (Si, 5 g) eluindo com 4:1 EtOAc/ciclo-hexano resultou no composto do título na forma de um sólido branco (96 mg, 74%); m/z 297,2 [MH+] . 56 ΡΕ1781657 b) 8-cloro-3-pentil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

Um frasco contendo tetraquis(trifenilfosfina)-paládio (0) (56 mg, 0,049 mmol) foi ventilado com azoto, antes de se adicionar uma solução de 8-cloro-3-pentil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (96 mg, 0,323 mmol) em THF anidro (1,5 mL) , seguido por DMSO (0,1 mL) e morfolina (0,28 mL, 0,049 mmol). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente sob azoto por 72 horas. A mistura reaccional foi dissolvida em EtOAc (25 mL) e lavada com HCL aq. 2 M (25 mL) . 0 extracto orgânico foi seco (MgSCh) filtrado e evaporado sob baixa pressão. Purificação por amino propil SPE (2 g) carregando e lavando com metanol e em seguida eluindo o produto com ácido acético 5% em metanol. Evaporação das fracções contendo produto resultou no composto do titulo na forma de um sólido branco (27 mg, 33%). RMN; δΗ (400MHz, d6-DMSO) 0,85 (t, 3H, J = 7Hz) , 1,20-1,34 (m, 4H) , 1,57-1, 67 (m, 2H) , 3,84 (t, 2H, J = 7Hz) , 11,19 (s, 1H) , 14,38 (br. s, 1H) ; m/z 257,2 [MH+] .

Exemplo 13: 8-cloro-3-(3-metilbutil)-3,7-di-hidro-lH-puri-no-2,6-diona 57 ΡΕ1781657

a) 8-cloro-3-(3-metilbutil)-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

Uma solução de 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona (1,5 g, 6,6 mmol) em DMF (40 mL) foi tratado com carbonato de sódio (0,9 g, 8,5 inmol) e 1- bromo-3-metilbutano (1,04 g, 6,9 mmol). A mistura agitada foi aquecida a 50°C durante 18 horas, depois arrefecida e evaporada até a secura. O resíduo foi tratado com água (60 mL) e extraído com acetato de etilo (3 x 80 mL) . As fracções orgânicas foram combinadas, secas sob sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas. O resíduo foi triturado com uma mistura de éter dietílico e ciclo-hexano para revelar o produto na forma de um sólido branco que foi separado por filtração e seco. Isto resultou no composto do título na forma de um sólido branco m/z 297 [MH+] . b) 8-cloro-3-(3-metilbutil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-di-ona 58 ΡΕ1781657

Uma solução de 8-cloro-3-(3-metilbutil)-7-(2-pro-pen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (0,074 g, 0,25 mmol) em THF (2 mL) foi tratada com morfolina (0,035 mL, 4,0 mmol) e a mistura desgaseifiçada pela aplicação alternada repetida de vácuo e azoto para o recipiente da reacção. A mistura foi em seguida tratada com uma solução de tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,03 g, 0,026 mmol) em THF desgaseif içado (0,5 mL) . Após 2 horas a mistura foi tratada com ácido clorídrico aquoso a 2 M (2 mL) e éter dietílico (3 mL) . O produto precipitado foi separado por filtração, lavado com éter dietílico e seco. Isto resultou no composto do título na forma de um sólido branco (0, 036g, 56%). RMN δΗ (400 MHz, d6-DMSO) ; 0,91 (d, 6H, J = 6,3 Hz), 1,47-1, 62 (m, 3H) , 3,87(t, 2H, J = 7,5 Hz), 11,19 (br. s, 1H) , 14,38 (br. s, 1H) ; m/z 257, 259 [MH+] .

Exemplo 14: 4 - (8-cloro-2,6-dioxo-l,2,6,7-tetra-hidro-3H-pu-rin-3-il)butanonitrilo (Comparativo)

59 ΡΕ1781657

Preparado como no exemplo 13 usando 4-bromo-butironitrilo como agente de alquilação RMN δΗ (40OM Hz, d6-DMSO) , 1, 89-2,00 (m, 2H) , 2,55 (t, 2H, J = 7,0Hz), 3,95 (t, 2H, J = 6,5Hz), 11,25 (br. s, 1H) , 14,40 (br. s, 1H) ; m/z 254 [MH+] .

Exemplo 15: 8-cloro-3-(2-ciclo-hexiletil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (Comparativa)

Agitou-se 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (100 mg, 0,442 mmol) com carbonato de sódio (52 mg, 0,486 mmol) em DMF anidra (3 mL) durante 30 minutos. Adicionou-se brometo de ciclo-hexiletilo (93 mg, 0,486 mmol), e a mistura foi agitada a 37-40°C sob azoto durante 65 horas, seguido por aquecimento a 90°C durante 18 horas. Após arrefecimento a solução foi desgaseifiçada evacuando e introduzindo azoto diversas vezes, e adicionou-se tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (76 mg, 0,066 mmol) e morfolina (0,385 mL, 4,42 mmol) e a mistura foi agitada durante 18 horas. Uma quantidade adicional de tetraquis (trifenilfosfina)paládio(0) (50 mg, 0,043 mmol) e morfolina (0,2 mL) foram adicionados e a agitação continuou por mais uma hora. Acetato de etilo e HC1 aquoso a 2 M foram 60 ΡΕ1781657

adicionados (ca. 10 mL cada) e a fase orgânica separada, lavada com salmoura e evaporada. O residuo foi dissolvido em THF e carregado num cartucho SPE aminopropilo 5 g. O cartucho foi lavado com THF seguido por MeOH, e o produto ácido eluiu com AcOH em MeOH (5% aumentando para 10%) . O produto assim obtido foi purificado adicionalmente por HPLC "autoprep" para fornecer o composto do titulo, 5,5 mg , 3% RMN δΗ (400 MHz, d6-DMSO) 0,80-0,95 (m, 2H), 1,05-1,35 (m, 4H) , 1,45-1,55 (m, 2H) , 1,55-1,70 (m, 3H) , 1,70-1,80 (m, 2H) , 3,86 (t, 2H, J = 8Hz) , 11,07 (s, 1H) , um interper- mutável não observado, m/z 297 (MH+) .

Exemplo 16: 3-butil-l-metil-2,6-dioxo-2,3,6, 7-tetra-hidro-lH-purino-8-carbonitrilo (Comparativo)

a) 3-butil-7- (2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-di-ona

Uma solução agitada de 7-(2-propen-l-il)-3,6-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (10 g, 52 mmol) em DMF anidra (100 mL) foi tratada com K2C03 (7,91 g, 57,2 mmol) e, após 10 minutos, Bui (6,51 mL, 57,2 mmol). Após reacção durante 61 ΡΕ1781657 2 dias, a mistura reaccional foi partilhada entre HC1 (aq) a 2 M e EtOAc. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca (MgSCg) e concentrada sob vácuo para originar um sólido branco sujo. Este foi lavado com ciclo-hexano quente e seco sob vácuo para originar o composto do titulo (8,87g, 68%); m/z 249, 3 [MH+] . b) 3-butil-l-metil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-puri-no-2,6-diona

Uma solução agitada de 3-butil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (1,0 g, 4,03 mmol) em DMF anidra (10 mL) foi tratada com Na2CC>3 (470 mg, 4,43 mmol) seguida por iodeto de metilo (275 μΐ, 4,43 mmol). A mistura foi aquecida a 35°C durante 17 horas. K2CO3 (500 mg, 3,6 mmol) e iodeto de metilo (275 μΐ, 4,43 mmol) foram adicionados e em seguida agitados a 50°C durante mais 18 horas. A mistura reaccional foi deixada arrefecer e depois seguida partilhada entre HC1 (aq) a 2 M e EtOAc. A fase orgânica foi separada e a fase aquosa extraído uma vez mais com EtOAc. Os extractos combinados foram lavados com salmoura, secos (MgS04) e concentrados originando um óleo amare-lo/castanho (1,24 g) . 0 produto foi purificado por sílica SPE (10 g) , eluindo com misturas EtOAc/ciclo-hexano. As fracções do produto foram combinadas e concentradas para resultar no composto do título na forma de um sólido amarelo pálido (1,11 g, quant.); m/z 263,3 [MH+] . 62 ΡΕ1781657 c) 3-butil-l-metil-2,6-dioxo-7-(2-propen-l-il)-2,3, 6,7-te-tra-hidro-lH-purino-8-carbaldeído

Um frasco previamente seco foi carregado com 3-butil-l-metil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (300 mg, 1,14 mmol) e THF anidro (6 mL) , arrefecido até -75°C sob azoto, em seguida tratado com LiHMDS (1,37 mL de uma solução em THF a 1,0 M) . Deixou-se a solução resultante aquecer até -60°C durante 1,5 horas antes da adição de DMF anidra (177 μΐ, 2,29 mmol). Deixou-se a solução aquecer até -10°C durante 3 horas e parou-se a reacção com solução NH4C1 (aq) sat.. A mistura foi partilhada entre HC1 (aq) 1 M e EtOAc. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca (MgS04) e concentrada originando um óleo castanho (350 mg) . O produto foi purificado por SPE (Si, 10 g) eluindo com misturas EtOAc/ciclo-hexano para originar o composto do título na forma de um sólido branco (131 mg, 39%); RMN; δΗ (400 Hz, d6-DMSO) 0,91 (t, 3H, J = 7,5Hz), 1,28-1,39 (m, 2H), 1, 63-1,73 (m, 2H) , 3,25 (s, 3H), 4,02 (t, 2H, J = 7,5Hz), 5,03 (dd, 1H, J = 17 e 1Hz) , 5,17 (dd, 1H, J = 10 e 1Hz) , 5,31 (ap. d, 2H, J = 5,5Hz) , 5, 98-6, 09 (m, 1H) , 9,88 (s, 1H) . d) 3-butil-l-metil-2,6-dioxo-7-(2-propen-l-il)-2,3,6,7-te-tra-hidro-lH-purino-8-carbonitrilo ΡΕ1781657 63

Uma solução de 3-butil-l-metil-2,6-dioxo-7-(2-propen-l-il)-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-purino-8-carbaldeído em piridina anidra (5 mL) foi tratada com hidrocloreto de hidroxilamina (63 mg, 0,91 mmol) e aquecida a 50°C durante 1 hora. A mistura foi deixada arrefecer, concentrada, e tratada com anidrido acético (5 mL) em seguida aquecida a 100°C durante 2,5 horas e 125°C durante 45 minutos. Novamente a mistura foi deixada arrefecer em seguida partilhada entre água e EtOAc. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca (MgS04) e concentrada para resultar no composto do titulo na forma de um resíduo amarelo (230 mg bruto, 114%); m/z 288,3 [MH+] . e) 3-butil-l-metil-2,6-dioxo-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-purino-8-carbonitrilo o

Uma solução de 3-butil-l-metil-2,6-dioxo-7-(2-propen-l-il)-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-purino-8-carbonitrilo (230 mg, 0,80 mmol) em THF anidro (5 mL) e DMSO anidro (0,5 mL) foi tratada com Pd(PPh3)4 (185 mg, 0,16 mmol). A mistura foi desgaseifiçada sob um leve vácuo, adicionou-se morfolina (698 pL) , e deixou-se a agitar à ta sob azoto 64 ΡΕ1781657 durante 2 horas. A solução amarela foi partilhada entre HC1 (aq) 2 M e EtOAc. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca (MgSCU) e concentrada. 0 residuo foi absorvido em MeOH e passado para baixo, e amino-propil SPE (5 g) , eluindo com MeOH seguido por ACOH 5% em seguida 10%, 20% e misturas ACOH/MeOH 30%. As fracções do produto foram combinadas e concentradas para disponibilizar um sólido amarelo desbotado (116 mg) . Este foi lavado com MeOH e o composto do titulo, um sólido branco, foi recolhido por filtração e seco sob vácuo (55 mg, 28%). RMN; δΗ (400 MHz, d6-DMSO) 0,90 (t, 3H, J = 7,5Hz), 1,25-1,35 (m, 2H) , 1,59- 1,68 (m, 2H) , 3,24 (s, 3H) , 3,96 (t, 2H, J = 7Hz) , NH não observado para 5h 15; m/z 248,2 [MH+] .

Exemplo 17: l-Metil-2,6-dioxo-3-pentil-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-purino-8-carbonitrilo (Comparativo)

a) 3-Pentil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

65 ΡΕ1781657 7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona (0,61 g, 3,2 inmol) , carbonato de sódio (0,60 g, 5,7 mmol) e iodeto de pentilo (0,64 g, 3,2 mmol) foram agitados em DMF (5 mL) a 50°C durante 18 horas. A solução foi arrefecida, separada entre acetato de etilo e salmoura e os orgânicos isolados, secos (MgS04) e concentrados. Cromato-grafia sobre silica (eluição com gradiente de diclorometano a 5:1 diclorometano/acetato de etilo) forneceu o composto do titulo na forma de um sólido desbotado amarelo (0,47 g, 56%) . m/z 263 [MH+] . b) l-metil-3-pentil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-puri-no-2,6-diona

3-Pentil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-puri-no-2,6-diona (0,20 g, 0,76 mmol), carbonato de potássio (0,4 g, 2,9 mmol) e iodeto de metilo (0,5 mL, 4,9 mmol) foram agitados e aquecidos a 50°C em DMF (5 mL) durante 3 horas. A solução foi deixada arrefecer e separada entre acetato de etilo e salmoura. Os orgânicos foram isolados, secos (MgS04) e concentrados para fornecer o composto do titulo (0,21 g, 100%) . m/z 277 [MH+] . c) l-Metil-2,6-dioxo-3-pentil-7-(2-propen-l-il)-2,3,6,7-te-tra-hidro-lH-purino-8-carbaldeído 66 ΡΕ1781657

A l-metil-3-pentil-7-(2-propen-l-il)-3, 7-di-hi-dro-lH-purino-2,6-diona (1,05 g, 3,6 mmol) em THF (15 mL) a -78°C foi adicionado LiHMDS (4 mL, 1 M em hexano, 4 mmol) ao longo de 10 minutos e a solução foi agitada durante 0,5 hora. DMF (0,5 mL) foi adicionada e a solução foi agitada a -78°C por mais 0,5 h e depois deixou-se aquecer até à temperatura ambiente com o banho de arrefecimento durante 2 horas. A reacção foi finalizada com ácido cloridrico a 2N (3 mL) e partilhada entre acetato de etilo e salmoura. Os orgânicos foram isolados, secos e concentrados. O produto em bruto foi submetido a cromatografia sobre silica (eluição com gradiente de diclorometano a 5:1 diclorometa-no/acetato de etilo) para resultar no composto do titulo na forma de um sólido branco (0,35 g, 30%). m/z 305 [MH+] . d) l-Metil-2,6-dioxo-3-pentil-7-(2-propen-l-il)-2,3,6,7-te-tra-hidro-lH-purino-8-carbonitrilo

67 ΡΕ1781657 l-Metil-2,6-dioxo-3-pentil-7-(2-propen-l-il)-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-purino-8-carbaldeído (0,18 g, 0,6 mmol) e cloridrato de hidroxilamina (0,053 g, 0,76 mmol) foram aquecidos a 50°C em piridina (5 mL) durante 1 hora e depois arrefecidos até à temperatura ambiente. Adicionou-se anidrido acético (0,08 g, 0,78 mmol) e a solução foi agitada durante 18 horas. A solução foi concentrada para proporcionar o acetato e dissolvido em anidrido acético (3 mL) e aquecida a 130°C durante 3 horas, arrefecida e concentrada para resultar no produto em bruto. Cromato-grafia sobre silica (eluindo com diclorometano) resultou no composto do titulo na forma de um óleo translúcido (0,17 g, 95%) . m/z 302 [MH+] . e) l-Metil-2,6-dioxo-3-pentil-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-puri-no-8-carbonitrilo

l-Metil-2,6-dioxo-3-pentil-7-(2-propen-l-il)-2,3, 6,7-tetra-hidro-lH-purino-8-carbonitrilo (0,17 g, 0,56 mmol) e morfolina (0,6 mL, 6,7 mmol) foram dissolvidos em THF (5 mL) contendo DMSO (0,5 mL) . O recipiente contendo a solução foi colocado sob vácuo e o ar substituído com azoto (x 3). Adicionou-se tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) (0,13 g, 0,11 mmol) e a solução foi agitada durante 2,5 68 ΡΕ1781657 horas. A solução foi separada entre acetato de etilo (20 mL) e ácido clorídrico a 2N (10 mL) e os orgânicos isolados e lavados com salmoura (3 x 10 mL) . Os orgânicos foram em seguida lavados com solução de hidróxido de sódio a 2N (2 x 10 mL) e a fase aquosa acidificada com ácido clorídrico a 2N e extraída com acetato de etilo (2 x 10 mL) . Os orgânicos foram isolados, secos (MgS04) e concentrados para render o composto do título (0,026g, 18%). RMN; δΗ (400 MHz, CDC13) 0,92 (t, 3H, J = 7Hz) , 1,32-1,43 (m, 4H) , 1,79 (m, 2H), 3,54 (s, 3H), 4,15 (t, 2H, J = 7,5 Hz), 14,35 (br. s, 1H) ; m/z 262 [MH+] .

Exemplo 18: 8-cloro-3-hexil-l-metil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

a) 8-cloro-3-({[2-(metiloxi)etil]oxi)metil)-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

A uma solução de 8-cloro-7-(2-propen-l-il) 3,7 69 ΡΕ1781657 di-hidro-lH-purino-2,6-diona (6 g, 26,5 mmol) em DMF anidra (30 mL) adicionou-se carbonato de sódio (3,09 g, 29,15 mmol) . Após 10 minutos de agitação à temperatura ambiente adicionou-se cloreto de metoxietoximetilo (3,03 mL, 26,5 mmol) e a agitação continuou sob azoto à temperatura ambiente durante 66 horas. A mistura reaccional foi concentrada sob vácuo e o resíduo dissolvido em EtOAc (100 mL) e lavado com salmoura (100 mL) , o extracto aquoso foi extraído com DCM (100 mL) e os extractos orgânicos secos (MgSCq) combinados e concentrados sob vácuo. O resíduo foi triturado com EtOAc e o sólido separado por filtração. A concentração do filtrado disponibilizou um óleo castanho claro que foi absorvido em sílica e purificado por SPE (Si, 50 g) eluindo com um gradiente de 1:1 EtOAc/ciclo-hexano-EtOAc para resultar no composto do título na forma de um sólido branco (2 g, 24%) , m/z 315,2 [MH+] . b) 8-cloro-l-metil-3-({[2-(metiloxi)etil]oxi)metil)-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

A uma solução de 8-cloro-3-({[2-(metiloxi)etil]-oxi)metil)-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (2 g, 6,37 mmol) em DMF anidra (15 mL) adicionou-se 70 ΡΕ1781657 carbonato de sódio (0,743 g, 7 mmol) . Após 10 minutos de agitação à temperatura ambiente, adicionou-se iodeto de metilo (0,44 mL, 7 mmol) e a agitação continuou sob azoto à temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura reaccional foi concentrada sob vácuo e o residuo dissolvido em EtOAc (100 mL) e lavado com salmoura (100 mL) . O extracto orgânico foi seco (MgSCq) , filtrado e evaporado para resultar no composto do titulo na forma de um óleo castanho amarelado (pureza de 85%) (2,98 g, quant.), m/z 329, 2 [MH+] . c) 8-cloro-l-metil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-puri-no-2,6-diona

A uma solução de 8-cloro-l-metil-3-({[2-(meti-loxi)etil]oxi}metil)-7-(2-propen-l-il)-3,7di-hidro-lH-puri-no-2, 6-diona (2,9 g, 6,37 mmol) em dioxano (20 mL) e água (20 mL) adicionou-se HC1 a 5M (20 mL). A mistura resultante foi aquecida a 100°C sob azoto durante 18 horas. A mistura reaccional foi de seguida concentrada sob vácuo, o residuo foi dissolvido em EtOAc (100 mL) e lavado com água. O extracto orgânico foi seco (MgSCq) filtrado e evaporado. Purificação por SPE (Si, 20 g) eluindo com 2:3 EtOAc/ciclo-hexano resultou no composto do titulo na forma de um sólido branco (1,04 g, 68%). m/z 241,1 [MH+] .

Alternativamente 8-cloro-l-metil-7-(2-propen-l- 71 ΡΕ1781657 il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,β-diona pode ser preparado com protecção SEM. a) 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3-({[2-(trimetilsilil) etil]-oxi}meti1)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

A uma solução de 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (5 g, 22,1 inmol) em DMF (80 mL) adicionou-se cloreto de 2-2-(trimetilsilil)etoximetilo (4,3 mL, 24,2 mmol) e carbonato de sódio (2,6 g, 24,2 mmol). Após agitação durante a noite à temperatura ambiente adicionou-se mais cloreto de 2-2-(trimetilsilil) etoximetilo (4,3 mL, 24,2 mmol) e carbonato de sódio (1,3 g, 12,1 mmol) e a agitação continuou durante 2 horas. A mistura reaccional foi em seguida partilhada entre LiCl aq a 5% e acetato de etilo. O extracto orgânico foi separado, lavado com salmoura, seco (MgS04) e concentrado. Purificação por cromatografia Biotage™ usando um cartucho de sílica eluindo com 1:4-1:2 acetato de etilo/ciclo-hexano resultou no composto do titulo (3,14 g, 40%); m/z 374,2 [MNH4+] . b) 8-cloro-l-metil-7-(2-propen-l-il)-3-({[2-(trimetilsilil) etil]oxi}metil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona ΡΕ1781657 72

A uma solução de 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3-({[2-(trimetilsilil)etil]oxi}metil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (3,14 g, 8,82 mmol) em DMF (50 mL) foi adicionado iodeto de metilo (0,659 mL, 10,58 mmol) e carbonato de césio (3,45 g, 10,58 mmol) e a mistura reaccional foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi partilhada entre água e acetato de etilo. O extracto orgânico foi separado, lavado com salmoura, seco (MgS04) e concentrado para resultar no composto do titulo 2,99 g (92%); m/z 388 [MNH4+] . c) 8-cloro-l-metil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-puri-no-2,6-diona

A uma solução de 8-cloro-l-metil-7-(2-propen-l-il) -3- ({ [2- (trimetilsilil)etil]oxi}metil)3,7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona (2,99 g, 8,08 mmol) em DCM (20 mL) foi adicionado TFA (10 mL) e a mistura reaccional agitada durante 2,5 horas à temperatura ambiente. A mistura 73 ΡΕ1781657 reaccional foi em seguida concentrada e o resíduo tratado com DCM adicional e evaporado mais uma vez. Purificação por SPE (Si) eluindo com 1:9-4:1 acetato de etilo/ciclo-hexano resultou no produto impuro (1,31 g) , que foi dissolvido em metanol (20 mL) e tratado com carbonato de potássio aq. sat. (20 mL) . Após agitação durante a noite a mistura foi partilhada entre água contendo HC1 a 2M (1 mL) e acetato de etilo. O extracto orgânico foi separado, lavado com salmoura, seco (MgSCg) e concentrado para resultar no composto do título 0,87 g (45%); m/z 241, 1 [MH+] . d) 8-cloro-3-hexil-l-metil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

A uma solução de 8-cloro-l-metil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (100 mg, 0,42 mmol) em DMF anidra (3 mL) foi adicionado carbonato de sódio (58 mg, 0,54 mmol), após 10 minutos de agitação iodeto de hexilo (0,08 mL, 0,54 mmol) foi adicionado e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente sob azoto durante 90 horas. Adicionou-se de seguida Pd(PPh3)4 (73 mg, 0,063 mmol) e o recipiente da reacção evacuado e ventilado com azoto (x 3), adicionou-se morfolina (0,37 mL, 4,3 mmol) e a agitação à temperatura ambiente sob azoto continuou durante 4 horas. A mistura reaccional foi diluída com EtOAc (25 mL) 74 ΡΕ1781657 e lavada com HCL aq. 2M (25 mL) . O extracto orgânico foi seco (MgS04) filtrado e evaporado. Purificação por aminopropil SPE (5 g) carregando o composto e lavando com MeOH antes da eluição do produto com AcOH/MeOH 5% resultou no composto do título na forma de um sólido branco (65 mg, 54%). RMN; ÔH (400 Hz, d6-DMSO) 0,85 (t, 3H, J = 7Hz) , 1,23-1,33 (m, 6H) , 1,58-1,68 (m, 2H) , 3,22 (s, 3H) , 3,91 (t, 2H, J = 7,5Hz) , 14,46 (br. s, 1H) ; m/z 285, 3 [MH+] .

Exemplo 19: 8-cloro-l-metil-3-propil-3,7-di-hidro-lH-puri-no-2,6-diona (Comparativo)

Preparado de modo similar ao Exemplo 18 mas usando iodeto de propilo para alquilar em N3. RMN δΗ (400 MHz, d6-DMS0) 0,87 (t, 3H, J = 7,5Hz), 1,61- 1,73 (m, 2H), 3,22 (s, 3H), 3,89 (t, 2H, J = 7,5Hz), 14,45 (br. s, 1H) , m/z 243 [MH+] .

Exemplo 20: 1,3-dibutil-2,6-dioxo-2,3,6,7-tetra-hidro-lH- purino-8-carbonitrilo

75 ΡΕ1781657 a) 1,3-dibutil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino- 2,6-diona

Uma solução de 1,3-di-N-butil xantina (10 g, 38 mmol) em DMF anidra (80 mL) foi tratada com K2CO3 (5,2 g, 38 mmol) seguido por brometo de alilo (3,6 mL, 42 mmol). A mistura foi aquecida a 55°C sob azoto durante 18 horas. Após arrefecimento à ta a mistura foi partilhada entre água e EtOAc. Alguns mLs de HC1 (aq) 2 M foram adicionados para auxiliar a separação. A fase orgânica foi separada e a aquosa extraido mais uma vez com EtOAc. Os extractos combinados foram lavados com salmoura, secos (MgS04) e concentrados para resultar no composto do titulo na forma de um sólido branco sujo (12,23 g, 106%). m/z 305, 3 [MH+] . b) 1,3-dibutil-2,6-dioxo-7-(2-propen-l-il)-2,3, 6, 7-tetra-hidro-lH-purina-8carboxilato de metilo

76 ΡΕ1781657

Uma solução de 1,3-dibutil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (3,0 g, 9,9 mmol) em THF anidro (30 mL) foi arrefecida a -50°C e tratada com LiHMDS (18 mL de uma solução em THF a 1,0 M, 17,8 mmol). Após 1 hora a -50°C adicionou-se cloroformato de metilo (1,9 mL, 24,6 mmol) e deixou-se a mistura aquecer até -30°C durante 2 horas, cessando-se de seguida a reacção com solução de NH4C1 (aq) sat.. A mistura foi partilhada entre EtOAc e HCL (aq) a 1M. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca (MgS04) e concentrada originando um óleo laranja escuro (4,07 g). O óleo foi tomado em EtOAc/ ciclo-hexano 15% e passado através de uma coluna de cromatografia Si Biotage™. As fracções do produto foram combinadas e concentradas para resultar no composto do titulo na forma de um sólido amarelo (1,35 g, 38%) . m/z 363, 2 [MH+] . c) Ácido 1,3-dibutil-2,6-dioxo-7-(2-propen-l-il)-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-purino-8-carboxílico

Uma solução agitada de 1,3-dibutil-2,6-dioxo-7-(2-propen-l-il)-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-purino-8-carboxilato de metilo (1,30 g, 3,6 mmol) em MeOH (15 mL) foi tratada com LiOH (215 mg) e água (1,5 mL) . Após 3 horas à ta a 77 ΡΕ1781657 mistura foi diluída com água e o pH ajustado a ca. pH5 com HC1 (aq) a 2M. Adicionou-se EtOAc e de seguida separou-se, lavou-se com salmoura, secou-se (MgS04) e concentrou-se para resultar no composto do título na forma de um sólido amarelo 85% puro (1,2 g, 88%). m/z. 349,2 [MH+] . d) 1,3-dibutil-2,6-dioxo-7-(2-propen-l-il)-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-purino-8-carboxamida

Uma solução agitada de ácido 1,3-dibutil-2,6-dioxo-7- (2-propen-l-il)-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-purino-8-carboxílico (1,0 g, 2,9 mmol) em DMF anidra (10 mL) foi sequencialmente tratada com DIPEA (1,1 mL), PyBOP, e NH3 a 2M (3,6 mL). Após 2 horas a mistura do produto foi partilhada entre HC1 (aq) a 2M e EtOAc. A fase orgânica foi separada, lavada com solução de NaHC03 (aq) sat., salmoura, em seguida seca (MgS04) e concentrada originando um óleo laranja (ca. 2 g) . O produto foi purificado por cromato-grafia de Biotage™ eluindo com misturas EtOAc/ciclo-hexano 5%—>40%. As fracções apropriadas foram combinadas e concentradas para originar a amida 90% pura (790 mg, 78%) . m/z. 392,3 [M+ácido fórmico-H]“. 78 ΡΕ1781657 e) 1,3-dibutil-2,6-dioxo-7-(2-propen-l-il)-2,3, 6, 7-tetra-hidro-lH-purino-8-carbonitrilo

Uma solução de 1,3-dibutil-2,6-dioxo-7-(2-propen-1-il)-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-purino-8-carboxamida (300 mg) em DMF anidra (7 mL) a 0°C foi tratada gota-a-gota com POCI3 (237 uL). 0 banho gelado foi removido e após 2 horas a mistura foi partilhada entre água e Et2<0. A fase aquosa foi de novo extraida com Et2<0 e os extractos combinados separados, lavados com água (x2), salmoura, em seguida secos (MgSCh) e concentrados, originando um óleo amarelo (312 mg) . O óleo foi tomado em ciclo-hexano e purificado por SPE (Si, 10 g) eluindo com misturas EtOAc/ciclo-hexano. A concentração das fracções do produto resultou no composto do titulo na forma de um óleo incolor (150 mg, 53%); m/z. 330,3 [MH+] . f) 1,3-dibutil-2,6-dioxo-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-purino-8- carbonitrilo

79 ΡΕ1781657

Uma solução de 1,3-dibutil-2,6-dioxo-7-(2-propen-1-il)-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-purino-8-carbonitrilo (140 mg, 0,43 mmol) em THF anidro (4 mL) e DMSO anidro (0,4 mL) foi tratada com Pd(PPh3)4 (74 mg, 0,064 mmol). A mistura foi desgaseifiçada sob um leve vácuo, adicionou-se morfolina (371 ul), e deixou-se agitar à ta sob azoto durante 4 horas. A solução amarela foi partilhada entre HCl (aq) a 2M e EtOAc. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca (MgS04) e concentrada. O residuo foi absorvido em MeOH e passado para baixo e amino-propil SPE (5 g) , eluindo com MeOH seguido por AcOH/MeOH 5%—>50%. O produto eluiu com uma pequena impureza que foi removida por lavagem, após concentração, com ciclo-hexano para resultar no composto do titulo na forma de um sólido branco sujo (30 mg, 24%). RMN δΗ (400 MHz, d6-DMSO) 0,89 (ap. td, 6H, J = 7 e 3Hz) , 1,25-1,35 (m, 4H) , 12,48-1,55 (m, 2H) , 1,58-1, 69 (m, 2H) , 3,87 (t, 2H, J = 7Hz) , 3, 95 (t, 2H, J = 7Hz) , NH não observado para δΗ 15; m/z 290,3 [MH+] .

Exemplo 21: 1,3-dibutil-8-iodo-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6- diona (Comparativo)

Uma solução agitada de 1,3-di-N-butil xantina (100 mg, 3,39 mmol) em DMF anidra (3 mL) foi tratada com 80 ΡΕ1781657 NIS (94 mg, 3,75 mmol) e deixada agitar à ta. sob azoto durante 23 horas. A mistura foi partilhada entre solução de Na2S03 (aq) sat. e EtOAc. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca (MgS04) e concentrada sob vácuo. O produto foi purificado passando num cartucho SPE (Si, 5 g) eluindo com misturas de EtOAc/ciclo-hexano. A fracção do produto foi concentrada para resultar no composto do titulo na forma de um sólido branco (75 mg, 51%) ; RMN; δΗ (400 MHz, d6-DMSO) (ap.td, 6H, J = 7,5 e 4Hz) , 1,21-1,34 (m, 4H) , 1,45-1,54 (m, 2H) , 1,56-1, 66 (m, 2H) , 3,84 (t, 2H, J = 7,5Hz), 3,93 (t, 2H, J = 7,5Hz), 14,10 (s, 1H); m/z 391,3 [MH+] .

Exemplo 22: (3-butil-8-cloro-2,6-dioxo-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-purin-l-il)acetonitrilo (Comparativo)

A uma mistura de 3-butil-8-cloro-7- (2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (200 mg, 0,707 mmol) e CS2CO3 (254 mg, 0,778 mmol) em DMF anidra (5 mL) foi adicionado cloroacetonitrilo (0,054 mL, 0,85 mmol). A mistura foi aquecida a 50°C durante 18 horas em seguida deixada arrefecer à ta e desgaseifiçada sob um leve vácuo e em seguida foi introduzido azoto. Isto foi repetido duas vezes. Adicionou-se Pd(PPh3)4 (82 mg, 0,071 mmol) e a 81 ΡΕ1781657 mistura desgaseifiçada mais uma vez, antes de se adicionar morfolina (0,617 mL, 7,07 mmol) e a mistura foi deixada agitar durante 3 horas à ta. A mistura foi partilhada entre HC1 (aq) a 2M e EtOAc. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca (MgS04) e concentrada. O residuo foi tomado em MeOH e passado através de amino-propil SPE (5 g), eluindo com MeOH seguido por AcOH/ MeOH 5-10%. A fracção do produto foi concentrada originando o composto do titulo 52 mg (26%); RMN; δΗ (400 MHz, d6-DMSO) 0,90 (t, 3H, J = 7,5Hz) , 1,26-1,37 (m, 2H) , 1, 60-1, 69 (m, 2H) , 3,94 (t, 2H, J = 7,5Hz) , 4,87 (s, 2H) , 14,72 (br s, 1H) ; m/z 299,2 [MNH4+] .

Exemplo 23: (8-cloro-2,6-dioxo-3-propil-2,3,6,7-tetra-hi- dro-lH-purin-l-il)acetonitrilo

a) 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3-propil-3,7-di-hidro -lH-purino-2,6-diona

Uma mistura de 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3, 6-di- 82 ΡΕ1781657 hidro-lH-purino-2,6-diona (1,5 g, 6,6 iranol), 1-iodopropano (1,2 g, 6,9 iranol) e carbonato de sódio (0,9 g, 8,5 iranol) em DMF (40 mL) foi aquecida a 50°C durante 18 horas. A mistura reaccional foi concentrada sob vácuo e o residuo tratado com água (60 mL) e extraido com acetato de etilo (3 x 80 mL) . Os extractos orgânicos combinados foram secos (MgS04) filtrados e evaporados. O residuo foi triturado com éter/ciclo-hexano, o sólido foi separado por filtração e seco para resultar no composto do titulo (0,82 g, 46%); m/z 269, 1 [MH+] . b) (8-cloro-2,6-dioxo-3-propil-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-pu-rin-l-il)acetonitrilo

Uma solução de 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3-pro-pil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (0,067 g, 0,25 iranol) em DMF (2 mL) foi tratada com carbonato de césio (0,082 g, 0,25 iranol) e bromoacetonitrilo (0,044 g, 0,37 iranol). A mistura foi aquecida a 80°C durante 4 horas e de seguida arrefecida à temperatura ambiente. A DMF foi removida sob vácuo e o residuo tratado com THF (2 mL) . O solvente foi desgaseifiçado pela aplicação sucessiva de vácuo e pressão de azoto à mistura reaccional. A mistura foi de seguida tratada com morfolina (0,035 mL, 0,4 iranol) e tetra-quis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,03 g, 0,026 iranol). Após 83 ΡΕ1781657 2 horas a mistura foi tratada com ácido clorídrico aquoso a 2M (2 mL) e o produto extraido com clorofórmio (3x5 mL) . As fracções orgânicas foram combinadas e evaporadas. 0 resíduo foi submetido a purificação por HPLC direccionada para massa para resultar no composto do título na forma de um sólido branco (0,022 g, 33%) . RMN; δΗ (400 MHz, d6- DMSO) , 0,88 (t, 3H, J = 7,5Hz), 1, 63-1,74 (m, 2H) , 3,91 (t, 2H, J = 7, 50 Hz), 4,87 (s, 2H) , NH não observado para δΗ 14; m/z 268 [MH+] .

Exemplo 24: [8-cloro-3-(2-ciclopropiletil)-2,6-dioxo-2,3, 6,7-tetra-hidro-lH-purin-l-il]acetonitrilo (Comparativo)

Preparado como (8-cloro-2,6-dioxo-3-propil-2,3,6, 7-tetra-hidro-lH-purin-l-il)acetonitrilo (exemplo 23) usando 8-cloro-3- (2-ciclopropiletil)-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona. RMN δΗ (400 MHz, d6-DMSO) -0,06-0,00 (m, 2H) , 0,31-0,39 (m, 2H) , , 0,64 1 o (m, 1H) , 1,57 (q, 2H, J = 7Hz), 4,04 (t, 2H, J = 7Hz) , 4,87 (s, C\l 14,68 (br. s, 1H); m/z 2 94 [MH+] .

Exemplo 25: 8-cloro-l-etil-3-(2,2,2-trifluoretil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona 84 ΡΕ1781657

a) 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3-(2,2,2-trifluoretil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

A uma solução de 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (1,5 g, 6,62 mmol) em DMF anidra (50 mL) foi adicionado bicarbonato de sódio (0,98 g, 9,25 mmol) seguido por 1,1,1-trifluoro-2-iodoetano (1,20 g, 5,72 mmol) e a mistura aquecida com agitação durante 6 horas a 50°C sob uma atmosfera de azoto. A solução foi deixada arrefecer à temperatura ambiente durante 10 horas em seguida aquecida durante 48 horas a 120°C. Mais 1,1,1-triflúor-2-iodoetano (0,43 g, 2,05 mmol) foi adicionado e a mistura aquecida a 120°C durante mais 3 horas. O solvente foi removido sob baixa pressão e o residuo triturado com DCM e de seguida filtrado. A reacção foi repetida usando 8-cloro-7- (2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona (3,80 g, 16,8 mmol), bicarbonato de sódio (2,45 g, 23,1 mmol) e 1,1,1-trifluoro-2-iodoetano (4,05 g, 19,3 mmol) em DMF anidra 85 ΡΕ1781657 (125 mL) . A mistura foi aquecida durante 16 horas a 120°C, o solvente removido sob baixa pressão e o residuo triturado com DCM e de seguida filtrado.

Filtrados de DCM dos dois ciclos foram combinados, concentrados sob baixa pressão em seguida purificados usando cromatografia de Biotage™ (eluindo com ciclo-hexano/acetato de etilo 1:1, de seguida 7:3) para originar o composto do titulo na forma de um sólido branco (1, 6 g, 23%) . m/z 309 [MH+] . b) 8-cloro-l-etil-3-(2, 2,2-trifluoretil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

A uma solução de 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3-(2,2,2-trifluoretil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (0,070 g, 0,23 mmol) em DMF anidra (2 mL) foi adicionado carbonato de césio (0,085 g, 0,26 mmol) seguido por 1-iodoetano (0,061 g, 0,39 mmol). A mistura foi aquecida durante 5 horas a 80°C em seguida agitada durante 16 horas à temperatura ambiente sob uma atmosfera de azoto. O solvente foi removido sob baixa pressão usando uma centrífuga sob vácuo e o residuo dissolvido em THF anidro (2,5 mL) . À mistura foram adicionados tetraquis paládio (0,030 86 ΡΕ1781657 g, 0,026 mmol) e morfolina (0,040 g, 0,45 mmol) e a mistura reaccional foi desgaseifiçada usando azoto e de seguida agitada à temperatura ambiente durante 72 horas. A mistura foi partilhada entre clorofórmio e HCL aq. a 2N, e a fase aquosa de novo extraida. Os extractos orgânicos foram combinados e evaporados sob uma corrente de azoto e de seguida purificados usando aminopropil SPE (eluindo com ácido acético:metanol:DCM, 1:2:2) para originar o composto do titulo na forma de um sólido branco com pureza >95% (0,041 g, 60%). RMN δΗ (400 MHz, d4-MeOD) 1,20 (t, 3H, J = 7Hz) , 4,03 (q, 2H, J = 7Hz), 4,73 (q, 2H, J = 8,5Hz), m/z 297 [MH+] .

Exemplo 26: 8-cloro-l-propil-3 - (2, 2,2-trifluoretil)-3,7- di-hidro-lH-purino-2,6-diona (Comparativo)

Preparado de modo similar ao Exemplo 25 usando iodeto de propilo para alquilar em Nl. RMN δΗ (400 MHz, CDC13) 0,99 (t, 3H, J = 7,5Hz), 1,68-1,79 (m, 2H), 4,07 (t, 2H, J = 7,5Hz), 4,77 (q, 2H, J = 8,5Hz) , NH não observado para δΗ 13; m/z 311 [MH+] . 87 ΡΕ1781657

Exemplo 27: 8-cloro-l-(4,4,4,4-trifluorobutil)-3-(2,2,2-trifluoretil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (Comparativo)

Preparado de modo similar ao Exemplo 25 usando 4-bromo-1,1,1-trifluorbutano para alquilar em NI. RMN; δΗ (400 MHz, d4-MeOD) 1,83-1, 95 (m, 2H) , 2,14-2,32 (m, 2H), 4,06 (t, 2H, J = 7Hz), 4,74 (q, 2H, J = 8,5 Hz), m/z 377 [M-H]“ 8-Bromo-l-metil-3-pentil-3,7-di-hidro-lH-puri-

Exemplo 28 : no-2,6-diona (Comparativo)

a) l-metil-3-pentil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

88 ΡΕ1781657

Dissolveram-se l-metil-3-pentil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (0,45 g, 1,63 mmol), fe-nilsilano (0,25 mL, 2,03 mmol) e tetraquis (trifenil-fosfina)paládio (0) (0,35 g, 0,3 mmol) em DCM (10 mL) contendo ácido acético (6 mL) . O ar no frasco foi substituído com azoto evacuando o frasco e em seguida enchendo-o com azoto (x 3) e a mistura reaccional foi aquecida a 45 C durante 4h. A solução foi deixada arrefecer, diluída com DCM e em seguida lavada com água e depois solução saturada de bicarbonato de sódio. Os orgânicos foram isolados, secos e concentrados para resultar no produto em bruto. Purificação por SPE (sílica) eluindo com éter resultou no produto, 0,06 g, 16%. m/z 237 [MH+] . b) 8-Bromo-l-metil-3-pentil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

Dissolveu-se l-metil-3-pentil-3,7-di-hidro-lH-pu-rino-2, 6-diona (0,06 g, 0,25 mmol) em DMF (2 mL) e adi-cionou-se N-bromosuccinamida (0,045 g, 0,25 mmol). A mistura foi agitada durante 18 horas, concentrada e o produto em bruto purificado eluindo através de aminopropil SPE (5 g) primeiro com metanol em seguida 5% de ácido acé-tico/metanol para eluir o produto. O produto foi purificado 89 ΡΕ1781657 adicionalmente por auto prep direccionada para massa para resultar no composto do titulo na forma de um sólido branco (0,01 g, 12%). RMN δΗ (400 MHz, d6-DMSO) 0,86 (t, 3H, J = 7 Hz), 1,21-1,35 (m, 4H) , 1,59-1, 68 (m, 2H) , 3,22 (s, 3H) , 3,91 (t, 2H, J = 7,5Hz) , 14,39 (br. s, 1H) ; m/z 315, 317 [MH+] .

Exemplo 29: 8-cloro-l-metil-3-pentil-3,7-di-hidro-lH-puri-no-2,6-diona

a) 8-cloro-l-metil-3-pentil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

A uma solução de 8-cloro-3-pentil-7-(2-propen-l-il) -3, 7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona (3,9 g, 13,3 mmol) em DMF (35 mL) adicionou-se carbonato de césio e a mistura foi agitada durante 10 minutos após o que se adicionou iodometano (0,91 mL, 14,6 mmol) e a mistura foi agitada durante 18 horas. A mistura reaccional foi partilhada entre acetato de etilo e solução de HCL a 2N e os orgânicos isolados, secos (MgS04) e concentrados. Cromatografia em 90 ΡΕ1781657 sílica SPE eluindo com ciclo-hexano/acetato de etilo (5%-20%) forneceu o produto na forma de um óleo, 2,78 g, 68%. m/z 311 [MH+] . b) 8-cloro-l-metil-3-pentil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6- diona

Colocou-se tetraquis(trifenilfosfina)paládio (1,0, 0,90 mmol) num recipiente que foi evacuado e de seguida cheio com azoto (x 3) . Uma solução de 8-cloro-l-metil-3-pentil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (2,78 g, 8,96 mmol) em 50 mL de THF foi adicionada e o frasco evacuado mais uma vez e introduzido azoto. Adicionaram-se DMSO (4,5 mL) e morfolina (7,8 mL, 89,6 mmol) e a solução foi agitada durante 5 horas. A solução foi partilhada entre acetato de etilo e solução de HC1 a 2N e a fracção orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) e concentrada. 0 produto em bruto foi purificado com um aminopropil SPE eluindo primeiro com metanol e depois com metanol contendo ácido acético 0-15% para fornecer o composto do título na forma de um sólido branco, 1,12 g, 46%. RM δΗ (400 MHz, d6-DMSO) 0,86 (t, 3H, J = 7Hz) , 1,21-1,35 (m, 4H) , 1,59-1, 68 (m, 2H) , 3,22 (s, 3H) , 3,91 (t, 2H, J = 7,5Hz), NH não observado; m/z 271 [MH+] . 91 ΡΕ1781657

Exemplo 30: 3-butil-8-cloro-l-metil-3,7-di-hidro-lH-purino 2,6-diona

Preparado de modo similar ao Exemplo 29 usando 3-butil-8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona como material de partida. RMN δΗ (400 MHz, d6-DMSO) 0,88 (t, 3H, J = 7Hz), 1,25-1,35 (m, 2H) , 1,6-1,66 (m, 2H) , 3,22 (s, 3H) , 3,91 (t, 2H, J = 7,5Hz) , 14,46 (br s, 1H) ; m/z 257 [MH+] .

Exemplo 31: 4- (8-cloro-l-metil-2,6-dioxo-l,2,6,7-tetra-hi-dro-3H-purin-3-il)butanonitrilo (Comparativo)

A uma mistura de 8-cloro-l-metil-7-(2-propen-l-il) -3, 7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona (70 mg, 0,292 mmol) e Na2C03 (37 mg, 0,35 mmol) em DMF (3 mL) adicionou-se 4-bromobutironitrilo (0,035 mL, 0,35 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, antes de desgaseificar sob um leve vácuo e introduzir azoto. 92 ΡΕ1781657

Pd(PPh3)4 (50 mg, 0,044 mmol) e morfolina (0,254 mL, 2,92 mmol) foi em seguida adicionado sequencialmente. Após duas horas de agitação à temperatura ambiente adicionou-se mais Pd(PPh3)4 fresco (50 mg, 0,044 mmol) e a agitação continuou durante a noite. A mistura reaccional foi partilhada entre acetato de etilo (20 mL) e água (20 mL) adicionando uma pequena quantidade de HC1 a 2M para auxiliar a separação. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca (MgSCg) e concentrada. O resíduo foi absorvido em MeOH e passado através de amino-propil SPE (5 g), eluindo com MeOH seguido por 3-5% de AcOH/ MeOH. A fracção do produto foi concentrada para resultar no composto do título 39,7 mg (51%); RMN; δΗ (400 MHz, d6-DMSO) 1,91-2,00 (m, 2H) , 2,55 (t, 2H, J = 7Hz) , 3,22 (s, 3H) , 4,03 (t, 2H, J = 7Hz) , 14,49 (br.s, 1H) ; m/z 268,1 [MH+] .

Exemplo 32: 8-cloro-l-metil-3-(4,4,4-trifluorobutil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (Comparativo)

X

Uma solução de 8-cloro-l-metil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (0,04 g, 0,2 mmol) em THF (1 mL) foi tratada com carbonato de césio (0,78 g, 0,24 mmol) e 4-bromo-l,1,1-trifluorbutano (0,044 g, 0,25 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora 93 ΡΕ1781657 e depois aquecida a 50°C durante 4 horas e de seguida arrefecida. A mistura foi desgaseifiçada aplicando alternadamente vácuo e pressão de azoto à mistura e de seguida tratada com morfolina (0,17 mL, 2 mmol) e tetra- quis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,023 g, 0,02 mmol). Após 2 horas a mistura foi tratada cuidadosamente com ácido clorídrico aquoso a 2M (2 mL) e o produto extraído com clorofórmio (2x4 mL) . Os orgânicos combinados foram evaporados e o produto purificado por HPLC de fase reversa direccionado para massa para resultar no composto do título 6, 2 mg (10%) ; RMN; δΗ (400 MHz, d6-DMSO) ; 1,84- 1,92 (m, 2H) , 2, 28-2,35 (m, 2H) , 3,22 (s, 3H), 3,99-4,03 (m, 2H) 14,31 (br.s, 1H) ; m/z 311,2 [MH+] .

Exemplo 33: 3-butil-8-cloro-l-etil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (Comparativo)

ct a) 3-butil-7-(fenilmetil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

Suspendeu-se 7-benzil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (17,14 g, 70,8 mmol) [Synthetic Communications, 20(16), 2459-2467, 1990] e carbonato de potássio (11,43 g, 94 ΡΕ1781657 82,8 iranol) em DMF (400 mL) a 40°C. Após agitação durante trinta minutos, adicionou-se iodeto de butilo (8,76 mL, 77,0 mmol) e a mistura foi agitada a 40°C durante a noite. Adicionou-se ácido acético aquoso a 50% (60 mL), e a solução foi concentrada sob pressão reduzida. O residuo foi suspenso em água (500 mL), e os produtos foram extraidos em clorofórmio. A eluição com metanol a 1% em diclorometano proporcionou o produto (9,49 g, 45%); RMN 1H (400 Hz; CDCls) δ: 0,95 (3H, t) , 1,34-1,41 (2H, m) , 1,70-1,78 (2H, m) , 4,05 (2H, t) , 5,46 (2H, s) , 7,31-7,40 (5H, m) , 7,56 (1H, s), 8,21 (1H, br.s); m/z 299 [MH+] . b) 3-butil-l-etil-7-(fenilmetil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

Suspendeu-se 3-butil-7-(fenilmetil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (0,429 g, 1,24 mmol) e carbonato de potássio (0,256 g, 1,85 mmol) em DMF (8 mL), adicionou-se iodoetano (0,113 mL, 1,42 mmol). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reaccional foi evaporada até a secura e o residuo foi partilhado entre água e acetato de etilo. A fase orgânica foi lavada com água, seguida por salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida para resultar no composto do titulo; RMN ΧΗ (400 MHz; 95 ΡΕ1781657 CDCI3 ) δ: 0,96 (3H, t), 1,25 (3H, t), 1,36· -1,45 (2H, m) , 1,72- 1,76 (2H, m) , 4,05-4,13 (4H, m) , 5,50 (2H, s), 7,32- 7,40 (5H, m) , 7,52 (1H, s) ; m/z 327 [MH+] . c) 3-Butil-l-etil-3,7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona

Dissolveu-se 3-butil-l-etil-7-(fenilmetil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (0,353 g, 1,08 mmol) em ácido acético (30 mL) , adicionou-se 20% de hidróxido de paládio em carbono (0,238 g) e a mistura foi agitada sob hidrogénio (a 50 psi) durante a noite. O catalisador foi removido por filtração através de Celite® e lavado com ácido acético. O filtrado foi concentrado sob baixa pressão para resultar no composto do titulo (0,227 g, 89%); RMN (400 MHz; CDCI3) δ: 0,97 (3H, t), 1,28 (3H, t), 1,38-1,47 (2H, m), 1,74-1,82 (2H, m) , 4,12-4,17 (4H, m) , 7,80 (1H, s); m/z 237 [MH+] . d) 3-Butil-8-cloro-l-etil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

96 ΡΕ1781657

Suspendeu-se 3-butil-l-etil-3,7-di-hidro-lH-puri-no-2,6-diona (100 mg, 0,42 mmol) e NCS (56 mg, 0,42 mmol) em MeCN (5 mL) e aqueceu-se a 120°C sob irradiação de microondas. A mistura reaccional foi concentrada sob baixa pressão e o composto do titulo isolado usando HPLC. [condições de HPLC usadas para a purificação: ciclo de 23 minutos. Solventes: TFA 0,1% em MeCN e TFA 0,1% em água. MeCN aumentou de 5% para 95% linearmente ao longo de 15 minutos. Manteve-se a 95% durante 2 minutos. Depois diminuiu-se para 5% linearmente ao longo de 1 minuto, equilibrou-se a 5% durante 5 minutos antes da injecção seguinte.]; RMN XH (400 MHz ; CDC13) δ: 0,97 (3H, t) , 1,31 (3H, t), 1,38-1,45 (2H, m) , 1,72-1,80 (2H, m) , 4,09-4,20 (4H, m) , 13,40 (1H, br.s); m/z 271 [MH+] .

Exemplo 34: 8-Cloro-3-(4-metilpentil)-3,7-di-hidro-lH-puri-no-2,6-diona

A partir de l-bromo-4 -metilpentano (81 mg)

Recristalizado de MeOH

Rendimento 34,8 mg (29%), RMN; (400 MHz, d6-DMSO) 97 ΡΕ1781657 δΗ 0,83 (d, 6Η, J = 8Hz), 1,12-1,22 (m, 2H),1,55 (septeto, IH, J = 8Hz), 1,58-1, 68 (m, 2H) , 3,83 (t, 2H, J = 7,5Hz), II, 20 (s, 1H) ; m/z 271 [MH+] .

Exemplo 35: 6-(8-cloro-2,6-dioxo-l,2,6,7-tetra-hidro-3H-pu-rin-3-il)-2,2-dimetil-hexanonitrilo (Comparativo)

A partir de 6-bromo-2,2-dimetilexanonitrilo (100 mg)

Recristalizado de MeOH.

Rendimento 48,5 mg (35% ) ; RMN; (400 Hz, d6-DMSO) δΗ 1,27 (s, 6H) , 1,35-1,44 (m, 2H) , 1,54-1,59 (m, 2H) , 1, 63-1,72 (m, 2H) , 3,88 (t, 2H, J = 7Hz), 11,24 (s, 1H) ; m/z 310 [MH+] .

Exemplo 36: 8-cloro-3-(6-metil-heptil)-3,7-di-hidro-lH-pu-rino-2,6-diona (Comparativo)

ΡΕ1781657 98 A partir de l-bromo-6-metil-heptano (95 mg)

Recristalizado de MeOH.

Rendimento 36 mg (27%) , RMN; (400 MHz, d6-DMSO) δΗ 0,83 (d, 6H, J = 7,5Hz), 1,10-1,17 (m, 2H) , 1,20-1,34 (m, 4H), 1,48 (septeto, 1H, J = 7,5Hz), 1,58-1,68 (m, 2H), 3,84 (t, 2H, J = 8Hz) , 11,22 (s, 1H) ; m/z 299 [MH+] .

Exemplo 37 : 8-Cloro-3-octil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-di-ona (Comparativo)

Agitou-se 8-cloro-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-di-ona (100 mg, 0,44 mmol) com carbonato de sódio (52 mg, 0,49 mmol) em DMF anidra (3 mL) durante 2 0 minutos, depois adicionou-se 1-iodooctano (118 mg, 0,49 mmol) e a mistura foi agitada sob azoto a 40°C durante 65 horas. Após se arrefecer à temperatura ambiente, a mistura foi cuidadosamente desgaseifiçada evacuando o recipiente e enchendo-o de novo com azoto diversas vezes. Adicionou-se tetraquis-(trifenilfosfina)paládio (0) (102 mg, 0,09 mmol), a mistura foi de novo desgaseifiçada e em seguida adicionou-se mor-folina (0,385 mL, 4,4 mmol) e a agitação continuou durante 6,5 horas. Adicionou-se HC1 a 2M e EtOAc e o sistema de 2 fases foi filtrado. O produto estava presente predominan- 99 ΡΕ1781657 temente no sólido filtrado, o qual foi recristalizado a partir de THF-acetonitrilo, seguido por MeOH, com filtração, para resultar no composto do título puro. Rendimento 48 mg (36%); RMN; (400 MHz, d6-DMSO) δΗ 0,84 (t, 3H, J = 7Hz), 1,18-1,30 (m, 10H), 1,57-1,66 (m, 2H), 3,84 (t, 2H, J = 7,5Hz) , 11,22 (s, 1H) ; m/z 299 [MH+] .

Exemplo 38: 8-Cloro-3-decil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-di-ona (Comparativo)

Preparado pelo método do Exemplo 37, partindo de 1-bromodecano (108 mg). Conseguiu-se uma purificação adicional por recristalização de MeOH seguida por autoprep di-reccionada para massa.

Rendimento 2 mg (1,4%); RMN; (400 MHz, d4-meta-nol) δΗ 0,89 (t, 3H, J = 7Hz) , 1,26-1,38 (m, 14H) , 1,68-1,76 (m, 2H) , 3,97 (t, 2H, J = 7,5Hz); m/z 327 [MH+] .

Exemplo 39: 8-cloro-3-(ciclo-hexilmetil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (Comparativo)

100 ΡΕ1781657

Preparado de modo similar ao Exemplo 37, a partir de (bromometil)ciclo-hexano (87 mg) excepto que se procedeu a um período de aquecimento adicional a 80 C durante 18 horas.

Recristalizado de MeOH. Rendimento 31 mg (25%); RMN; (400 MHz, d6-DMSO) δΗ 0, 90-1, 02 (m, 2H) , 1, 08-1,20 (m, 3H), 1,53-1, 69 (m, 5H), 1,77-1, 87 (m, 1H) , 3,70 (d, 2H, J = 7,5Hz) , 11,21 (s, 1H) ; m/z 283 [MH+] . Método Geral para os Exemplos 40-46: A 8-cloro-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (100 mg, 0,442 mmol) em THF anidro (3 mL) adicionou-se o álcool (0,442 mmol) i . A mistura foi agitada a 0 C à medida que foi adicionada uma solução de azodicarboxilato de dibenzilo (280 mg com 94% de pureza, 0 ,88 mmol) em THF anidro (2 mL), seguida por uma solução de trifenilfosfina (232 mg, 0,88 mmol) em THF anidro, adicionado em porções durante 5 minutos. Após mais 30 minutos a 0 C, a agitação continuou à temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura foi cuidadosamente desgaseifiçada evacuando e enchendo de novo o recipiente com azoto diversas vezes, depois adicionou-se tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (102 mg, 0,088 mmol) e depois morfolina (0,385 mL, 4,42 mmol) e a agitação continuou durante 4,5 horas. Adicionou-se EtOAc e HC1 a 2M, e a mistura foi filtrada para remover um sólido precipitado amarelo. O filtrado foi separado e a fase orgânica concentrada e redissolvida numa mistura de THF e MeOH. Esta 101 ΡΕ1781657 solução foi passada em aminopropil SPE, eluindo com THF-MeOH (1:1) seguido por MeOH e em seguida AcOH a 5% em DCM-MeOH (1:1). As fracções do produto assim obtidas foram concentradas e recristalizadas a partir de MeOH para resultar no composto do titulo puro.

Exemplo 40: (+/-)-8-Cloro-3-(3-metilpentil)-3,7-di-hidro- lH-purino-2,6-diona

A partir de (+/-)-3-metil-l-pentanol 45 mg

Rendimento 20,2 mg (17%); RMN ; (400 MHz, d6- DMSO) δΗ 0,83 (t, 3H, J = 7,5Hz), 0,90 (d, 3H, J = 6,5Hz), 1,12-1,21 (m, 1H) , 1,30-1,48 (m, 3H) , 1,58-1, 68 (m, 1H) , 3,87 (t, 2H, J = 7,5Hz) , 11,21 (s, 1H) ; m/z 271 [MH+] .

Exemplo 41: 8-Cloro-3-(2-ciclopentiletil)~3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (Comparativo)

102 ΡΕ1781657 A partir de 2-ciclopentiletanol 50 mg

Rendimento 24,6 mg (20%); RMN; (400 MHz, d6-DMSO) δΗ 1,04-1,15 (m, 2H), 1,40-1,67 (m, 6H), 1,70-1,82 (m, 3H), 3,86 (t, 2H, J = 7,5Hz) , 11,22 (s, 1H) ; m/z 283 [MH+] .

Exemplo 42: 8-cloro-3-(ciclopropilmetil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (Comparativo)

A partir de ciclopropilmetanol 32 mg

Rendimento 22,3 mg (21%); RMN; (400 MHz, d6-DMSO) δΗ 0,34-0,40 (m, 2H), 0,40-0,48 (m, 2H), 1,17-1,27 (m, 1H), 3,74 (d, 2H, J = 7,5Hz) , 11,23 (s, 1H) ; m/z 241 [MH+] .

Exemplo 43: (+/-)-8-cloro-3-(2-metilbutil)-3,7-di-hidro-lH- purino-2,6-diona o

A partir de (+/-)-2-metil-l-butanol 39 mg

Rendimento 12 mg (9,5%); RMN; (400 MHz, d6-DMSO) 103 ΡΕ1781657 §H, 0 , ,81 (d, 3H, J = 7Hz), 0,86 (t, 3H, J = 7,5Hz), 1,06- 1, 17 (m, 1H) , 1,30-1,41 (m, 1H), 1 ,90-2,00 (m, 1H), 3,68 (dd, 1H, J = 13,5 e 8Hz), 3,75 (dd, 1H, J = 13,5 e 7,5Hz), 11,22 (s, 1H) ; m/z 2 57 [MH+] .

Exemplo 44: (+/-)-8-cloro-3-(2-metilpentil)-3,7-di-hidro- lH-purino-2,6-diona

A partir de (+/-)-2-metil-l-pentanol 45 mg

Rendimento 22,4 mg (19%); RMN; (400 MHz, d6-DMSO) δΗ 0,81 (d, 3H, J = 7Hz) , 0,84 (t, 3H, J = 7,5Hz), 1,05- I, 16 (m, 1H) , 1,16-1,43 (m, 3H) , 1, 98-2,09 (m, 1H) , 3,67 (dd, 1H, J = 13,5 e 8Hz) , 3,74 (dd, 1H, J = 13,5 e 7Hz) , II, 22 (s, 1H) ; m/z 271 [MH+] .

Exemplo 45: 8-Cloro-3-(ciclobutilmetil)-3,7-di-hidro-lH-pu-rino-2,6-diona (Comparativo)

A partir de ciclobutilmetanol 38 mg 104 ΡΕ1781657

Rendimento 30,5 mg (27%); RMN; (400 MHz, d6-DMSO) δΗ 1,73-1,85 (m, 4H) , 1, 86-1, 97 (m, 2H) , 2, 66-2,79 (m, 1H) , 3,90 (d, 2H, J = 7,5Hz) , 11,22 (s, 1H) ; m/z 255 [MH+] .

Exemplo 46: 8-cloro-3-(ciclopentilmetil)-3,7-di-hidro-lH- purino-2,6-diona (Comparativo)

A partir de ciclopentilmetanol 44 mg

Rendimento 15 mg (13%); RMN; (400MHz, d6-DMSO) δΗ 1,20 -1,32 (m, 2H) , 1,42-1,54 (m, 2H) , 1,54-1,66 (m, 4H) , 2,32 -2,45 (m, 1H) , 3,79 (d, 2H, J = 8Hz), 11,22 (s, 1H) ; m/z 2 69 [MH+] .

Exemplo 47: 8-cloro-3-(3-ciclopropilpropil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (Comparativo)

A partir de 3-ciclopropil-l-propanol (P.J. Wagner, J. Amer. Chem. Soc, 1981, 103, 3837-3841) (44 mg). 105 ΡΕ1781657

Rendimento 27,7 mg (23%); RMN; (400 MHz, d6-DMSO) δΗ -0,03- + 0,03 (m, 2H) , 0,34-0,40 (m, 2H) , 0, 65-0,75 (m, 1H) , 1,15-1,23 (m, 2H) , 1, 66-1,76 (m, 2H) , 3,87 (t, 2H, J = 7Hz) , 11,15 (s, 1H) ; m/z 269 [MH+] .

Exemplo 48: 8-cloro-3-(2-ciclobutiletil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (Comparativo)

A partir de 2-ciclobutiletanol (P. Vergnon, Eur. J. Med. Chem., 1975, 10, 65-71) (44 mg).

Rendimento 21,5 mg (18%); RMN; (400 MHz, d6-DMSO) δΗ 1,53-1, 64 (m, 2H) , 1, 68-1,85 (m, 4H) , 1, 93-2,03 (m, 2H) , 2,19-2,30 (m, 1H) , 3,78 (t, 2H, J = 7Hz), 11,20 (s, 1H) ; m/z 2 69 [MH+] .

Exemplo 49: 8-cloro-3-(4 — fluorobutil)-3,7-di-hidro-lH-puri-no-2,6-diona

F 106 ΡΕ1781657 a) 8-cloro-3- (4-fluorobutil)-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hi-dro-lH-purino-2,6-diona

A uma solução de 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona (200 mg, 0,88 mmol, 1 eq) em DMSO anidro (1 mL) num frasco de microondas de 1,5 mL equipado com um agitador adicionou-se bicarbonato de sódio (113 mg, 1,07 mmol, 1,2 eq) seguido de l-bromo-4-f luoro-butano (114 ul, 165 mg, 1,06 mmol, 1,2 eq) . O frasco foi selado e aquecido com agitação usando um microondas, mantendo a temperatura a 120°C durante 25 minutos produzindo uma potência máxima de 300W. A solução castanho escura resultante foi diluída com metanol (1 mL) e purificada por HPLC autopreparativa direccionado para massa para originar o composto do título na forma de um sólido branco (159 mg, 60%) . m/z 301,3 [MH+] . 8-cloro-3-(4-fluorobutil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona A uma suspensão de 8-cloro-3-(4-fluorobutil)-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (100 mg, 0,33 mmol, 1 eq) em DCM anidro (2 mL) adicionou-se tetraquis paládio (38 mg, 0,033 mmol, 10% eq) , seguido por ácido acético (115 uL, 121 mg, 2,01 mmol, 6 eq) e fenil 107 ΡΕ1781657 silano (410 uL, 360 mg, 3,33 mmol, 10 eq) . A solução amarelo clara resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas para originar uma solução púrpura escura. 0 solvente foi removido sob uma corrente de azoto e o residuo dissolvido numa solução de DMSO/metanol (3 mL, 2:1) com aquecimento. A mistura gelatinosa foi deixada arrefecer à temperatura ambiente, filtrada em seguida purificada por HPLC autopreparativa direccionada para massa para originar o composto do titulo na forma de um sólido branco (35 mg, 43%). m/z 261,2 [MH+] RMN (400 MHz, MeOD) , δΗ 4,45 (2H, dt, J = 47 e 6Hz), 4,03 (2H, t, J = 7Hz) , 1, 90-1, 65 (4H, m) .

Os compostos seguintes foram preparados de modo similar e purificados por HPLC preparativa ou autopreparativa direccionado para massa como apropriado:

Exemplo 50: 8-cloro-3-(3—fluoropropil)-3,7-di-hidro-lH-pu-rino-2,6-diona (Comparativo)

RMN (400 MHz, MeOD), δΗ 4,51 (2H, dt, J = 47 e 6Hz) , 4,11 (2H, t, J = 7Hz) , 2,18-2,03 (2H, m) . m/z 247 [MH+] . 108 ΡΕ1781657

Exemplo 51: 8-cloro-3-(5-fluoropentil)-3,7-di-hidro-lH-pu-rino-2,6-diona (Comparativo)

J = 48 e 1,52-1,40 RMN (400 MHz, MeOD) , δΗ 4,41 (2H, dt, 6Hz), 3,99 (2H, t, J = 8Hz), 1, 84-1, 63 (4H, m) , (2H, m) . m/z 273, 29 [MH-] .

Exemplo 52: 3- (3-buten-l-il)-8-cloro-3,7-di-hidro-lH-puri- no-2,6-diona (Comparativo) o

Agitou-se 8-cloro-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-di-ona (100 mg, 0,44 mmol) com carbonato de sódio (52 mg, 0,49 mmol) em DMF anidra (3 mL) durante 45 minutos, de seguida adicionou-se 4-bromo-l-buteno (66 mg, 0,49 mmol) e a mistura foi agitada sob azoto a 40 C durante 65 horas. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura foi completamente desgaseifiçada evacuando o vaso e voltando a encher com azoto diversas vezes. Adicionou-se tetra-quis (trifenilfosfina)paládio(0) (102 mg, 0,09 mmol), a mistura desgaseifiçada novamente e em seguida adicionou-se morfolina (0,385 mL, 4,4 mmol) e a agitação continuou 109 ΡΕ1781657 durante 6,5 horas. Adicionou-se HC1 a 2M e EtOAc, e o sistema de 2 fases foi filtrado para remover um sólido precipitado amarelo. A fase orgânica do filtrado foi separada e evaporada. O residuo foi dissolvido com aquecimento em THF-MeOH (1:1) e carregado em aminopropil SPE (5 g) que foi eluido com THF-MeOH (1:1) seguido por MeOH e em seguida 5% de AcOH em MeOH-DCM (1:1). A fracção do produto foi purificada adicionalmente por autoprep direccionada para massa para resultar no composto do titulo.

Rendimento 27,5 mg (26%), RMN; (400MHz, d5-DMSO) δΗ 2, 40 (dt, 2H, J = 7 e 6Hz) , 3, 93 (t, 2H, J = 7Hz), 4,97- 5, 07 (m, 2H) , 5,74-5,85 (m, 1H) . 11,22 (s, 1H) ; m/z 241 [MH+] .

Exemplo 53: 8-cloro-3-(6-fluor-hexil)-3,7-di-hidro-lH-pu-rino-2,6-diona (Comparativo)

F RMN (400MHz, MeOD) , δΗ 4,40 (2H, dt, 48 e 6Hz) , 3,98 (2H, t, 8Hz) , 1, 80-1, 60 (4H, m) , 1,52-1,35 (4H, m) . m/z 287 [MH-] .

Exemplo 54: 8-cloro-3-etil-l-metil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (Comparativo)

110 ΡΕ1781657 a) 8-cloro-3-({[2-(metiloxi)etil]oxijmetil)-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona

A uma solução de 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (6 g, 26,5 mmol) em DMF anidra (30 mL) adicionou-se carbonato de sódio (3,09 g, 29,15 mmol) . Após 10 minutos de agitação à temperatura ambiente adicionou-se cloreto de metoxietoximetilo (3,03 mL, 26,5 mmol) e a agitação continuou sob azoto à temperatura ambiente por 66 horas. A mistura reaccional foi concentrada sob vácuo e o residuo dissolvido em EtOAc (100 mL) e lavado com salmoura (100 mL) , o extracto aquoso foi extraido com DCM (100 mL) e os extractos orgânicos secos (MgS04) combinados e concentrados sob vácuo. 0 residuo foi triturado com EtOAc e o sólido separado por filtração. A concentração do filtrado resultou num óleo castanho claro que foi absorvido em sílica e purificado por SPE (Si, 50 g) eluindo com a gradiente de 1:1 EtOAc/ciclo-hexano-EtOAc para resultar no composto do título na forma de um sólido branco (2 g, 24%), m/z 315,2 [MH+ ] . b) 8-cloro-l-metil-3-({[2-(metiloxi)etil]oxi}metil)-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona 111 ΡΕ1781657

A uma solução de 8-cloro-3-({[2-(metiloxi)etil]-oxi}metil)-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (2 g, 6,37 inmol) em DMF anidra (15 mL) adicionou-se carbonato de sódio (0,743 g, 7 mmol) . Após 10 minutos de agitação à temperatura ambiente adicionou-se iodeto de metilo (0,44 mL, 7 mmol) e a agitação continuou sob azoto à temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura reaccional foi concentrada sob vácuo e o residuo dissolvido em EtOAc (100 mL) e lavado com salmoura (100 mL). O extracto orgânico foi seco (MgS04) filtrado e evaporado para resultar no composto do titulo na forma de um óleo castanho amarelado (85% puro) (2,98 g, quant.), m/z 329, 2 [MH+] . c) 8-cloro-l-metil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-puri-no-2,6-diona

A uma solução de 8-cloro-l-metil-3-({[2-(metiloxi) etil]oxi}metil)-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona (2,9 g, 6,37 mmol) em dioxano (20 mL) e 112 ΡΕ1781657 água (20 mL), adicionou-se HC1 aq. a 5M (20 mL). A mistura resultante foi aquecida a 100°C sob azoto durante 18 horas. A mistura reaccional foi de seguida concentrado sob vácuo, o resíduo foi dissolvido em EtOAc (100 mL) e lavado com água. O extracto orgânico foi seco (MgS04) filtrado e evaporado. Purificação por SPE (Si, 20 g) eluindo 2:3 EtOAC/ciclo-hexano resultou no composto do título na forma de um sólido branco (1,04 g, 68%) . m/z 241,1 [MH+] . d) 8-cloro-3-etil-l -metil-3,7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona

A uma solução de 8-cloro-l-metil-7-(2-propen-l-il)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (100 mg, 0,42 mmol) em DMF anidra (3 mL) foi adicionado carbonato de sódio (58 mg, 0,54 mmol), após 10 minutos de agitação adicionou-se iodeto de etilo (0, 043 mL, 0,54 mmol) e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente sob azoto durante 90 horas. Adicionou-se então Pd(PPh3)4 (73 mg, 0,063 mmol) e o vaso reaccional foi evacuado e ventilado com azoto (x 3), adicionou-se morfolina (0,37 mL, 4,3 mmol) e a agitação à temperatura ambiente sob azoto continuou durante 4 horas. A mistura de reacção foi diluída com EtOAc (25 mL) e lavada com HCL aq. a 2M (25 mL) . O extracto orgânico foi seco (MgS04) filtrado e evaporado. Purificação por aminopropil SPE (5 g) carregando o composto e lavando com MeOH antes de 113 ΡΕ1781657 se eluir o produto com AcOH/MeOH a 5% resultou no composto do título na forma de um sólido branco (67 mg, 70%) . RMN; δΗ (400 MHz, d6-DMSO) 1,20 (t, 3H, J = 7Hz) , 3,22 (s, 3H) , 3,97 (q, 2H, J = 7Hz), 14,46 (1H, br s); m/z 227,2

Lisboa, 16 de maio de 2013

Claims

ΡΕ1781657 1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto de Fórmula (I): O

H N N L R (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que R1 representa: hidrogénio ou metilo; R2 representa: n-alquilo C4_6 não substituido e R3 representa cloro.
2. Um composto de acordo com a reivindicação 1 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável em que R2 é n-pentilo.
3. Um composto de acordo com a reivindicação 1 que é 8-cloro-3-pentil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
4. Um composto de acordo com a reivindicação 1 que é 8-cloro-l-metil-3-pentil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
5. Um composto de acordo com a reivindicação 3 que é 8-cloro-3-pentil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona. 2 ΡΕ1781657
6. Um composto de acordo com a reivindicação 4 que é 8-cloro-l-metil-3-pentil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona.
7. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para utilização em medicina humana ou veterinária.
8. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para utilização no tratamento de dislipidemia diabética ou dislipidemia mista.
9. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para utilização no tratamento de diabetes mellitus do tipo II.
10. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para utilização no tratamento de dislipidemia diabética, dislipidemia mista, insuficiência cardíaca, hiperco-lesterolemia, aterosclerose, arteriosclerose, e hipertri-qliceridemia, diabetes mellitus do tipo II, diabetes do tipo I, resistência à insulina, hiperlipidemia, anorexia nervosa, obesidade, doença das artérias coronárias, trombose, anqina, insuficiência renal crónica, doença vascular periférica ou acidente vascular cerebral. 3 ΡΕ1781657
11. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para utilização no tratamento de dislipidemia diabética, dislipidemia mista, hiperlipoproteinemia, hiperco-lesterolemia ou hipertrigliceridemia.
12. Um composto de acordo com a reivindicação 3 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para utilização no tratamento de diabetes mellitus do tipo II.
13. Um composto de acordo com a reivindicação 4 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para utilização no tratamento de diabetes mellitus do tipo II.
14. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para utilização no tratamento de diabetes mellitus do tipo II.
15. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável na produção de um medicamento para o tratamento da dislipidemia diabética ou da dislipidemia mista.
16. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável na produção de um medicamento 4 ΡΕ1781657 para o tratamento da dislipidemia diabética, dislipidemia mista, insuficiência cardíaca, hipercolesterolemia, ateros-clerose, arteriosclerose, e hipertrigliceridemia, diabetes mellitus do tipo II, diabetes do tipo I, resistência à insulina, hiperlipidemia, anorexia nervosa, obesidade, doença das artérias coronárias, trombose, angina, insuficiência renal crónica, doença vascular periférica ou acidente vascular cerebral.
17. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável na produção de um medicamento para o tratamento da dislipidemia diabética, dislipidemia mista, hiperlipoproteinemia, hipercolesterolemia ou hiper-trigl iceridemia.
18. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 3 ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável na produção de um medicamento para o tratamento da diabetes mellitus do tipo II.
19. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 4 ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável na produção de um medicamento para o tratamento da diabetes mellitus do tipo II.
20. Uma formulação farmacêutica compreendendo um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável e um ou mais 5 ΡΕ1781657 diluentes, excipientes ou veículos fisiologicamente aceitáveis .
21. A combinação para administração em conjunto ou separadamente, sequencialmente ou simultaneamente em formulações farmacêuticas separadas ou combinadas, compreendendo a referida combinação um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável em conjunto com outro agente terapeuticamente activo.
22. Uma formulação farmacêutica compreendendo: (i) um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável; (ii) um ou mais ingredientes activos selec-cionados de estatinas, resinas que se ligam a ácidos biliares e ácido nicotínico; e (iii) um ou mais diluentes, excipientes ou veículos fisiologicamente aceitáveis.
23. Um método para a preparação de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, compreendendo o méto- 6 ΡΕ1781657 (i) alquilação em N3, ou dialquilação em NI e N3 de uma xantina protegida em N7; (ii) cloração em C8; e (iii) desprotecção; em qualquer ordem desde que a desprotecção seja levada a cabo após a alquilação. Lisboa, 16 de maio de 2013 1 ΡΕ1781657 REFERENCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito. Documentos de patentes citadas na Descrição * WC> 0284288 A ♦ EP 0388282 A Literatura que não é de patentes citada na Descrição ♦ WJELAMB, T.; JAKQSS, KM, Ms^mâs Em^tsísL, 1894, wL 237,3-1:3 * JUMSKJtCfcem, 4898, Yd. 86 im> 1360-8 • SyntíseSc Co/mMtèts&sm, mm. «s1. 20 (16), 2459-24S7 « P Λ. W&SfíER. J. Atmr. Ctom. Sm, 1881, vis!. 103, 3837-3841 * P. mmmm. Em, J, Meâ. Ctem,f 1875, «sá. 18s 85-71 1 WISEv J Bk1 Oxem.> 2DS3, vsi 278Wl 3S58-8S74 * TtíMARU, mttírnMBtãdm, M, vsi. 9¾ 352-255 ♦ SOQ&. Bfctcfam Ssds?%$ Rss Ccmufm,, S803.: v<á. -303(1),864-389 • JACOBSOH. J. Metí. €fmm, 1S93, sot 38, 2539-2644 • BERSE ; SJSHLEY ; MOKKHOOSE, d Píwm. SsLt