PT1768666E - Novas utilizações de compostos de porfirina - Google Patents

Description

ΕΡ 1 768 666/ΡΤ DESCRIÇÃO "Novas utilizações de compostos de porfirina"

Campo A presente invenção refere-se a novas utilizações de compostos de porfirina e, em particular, à utilização de tais compostos no tratamento curativo ou profiláctico da colonização e infecção microbiana.

Antecedentes A resistência aos antibióticos desenvolvida por um número crescente de microrganismos é reconhecida como um problema de saúde em todo o mundo (Tunger et al., 2000, Int. J. Microb. Agents 15:131-135; Jorgensen et al., 2000, Clin. Infect. Dis. 30:799-808). Em consequência, o desenvolvimento de novas abordagens para matar microrganismos é necessário com urgência. O tratamento de infecções microbianas por terapia fotodinâmica (PDT) representa um método recente e valioso para a erradicação de bactérias uma vez que envolve um mecanismo que é marcadamente diferente daquele que é típico da maior parte dos antibióticos. Assim, a PDT é baseada na utilização de uma molécula fotossenssibilizadora que, uma vez activada pela luz, gera espécies de oxigénio reactivo que são tóxicas para uma grande variedade de células procariotas e eucariotas, incluindo bactérias, micoplasmas e leveduras (Malik et al., 1990, J. Photochem. Photobiol. B Biol. 5:281-293; Bertoloni et al., 1992, Microbios 71:33-46). De modo importante, a actividade fotossenssibilizadora de muitos agentes fotodinâmicos contra bactérias não é afectada pela resistência aos antibióticos mas, pelo contrário, depende principalmente da sua estrutura química (Malik et al., 1992, J. Photochem. Photobiol. B Biol. 14:262-266). Vários tipos de agentes fotossenssibilizadores neutros e aniónicos exibem uma actividade fototóxica pronunciada contra bactérias Gram positivas. No entanto, esses agentes fotossenssibilizadores não exercem uma actividade citotóxica 2 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ apreciável contra bactérias Gram negativas, a menos que a permeabilidade da membrana exterior seja alterada por tratamento com ácido etilenodiaminatetracético (EDTA) ou policatiões (Bertoloni et al., 1990, FEMS Microbiol. Lett. 71: 149-156; Nitzan et al., 1992, Photochem. Photobiol. 55:89-97). Crê-se que o envelope celular das bactérias Gram negativas que é mais complexo e espesso do que o das bactérias Gram positivas impede uma ligação eficiente do agente fotossenssibilizador ou intercepta e desactiva a espécie reactiva citotóxica fotogerada pelo agente fotossenssibilizador (Ehrenberg et al., 1985, Photochem. Photobiol. 41:429-435; Valduga et al., 1993, J. Photochem. Photobiol. B. Biol. 21:81-86).

Em contraste, os agentes fotossenssibilizadores carregados positivamente (catiónicos) incluindo porfirinas e ftalocianinas, promovem a inactivação eficiente de bactérias Gram negativas sem a necessidade de modificação da estrutura natural do envelope celular (Merchat et al., 1996, J. Photochem. Photobiol. B. Biol. 32:153-157; Minnock et al., 1996, J. Photochem. Photobiol. B. Biol. 32:159-164). Parece que a carga positiva favorece a ligação do agente fotossenssibilizador em sítios celulares críticos que, uma vez danificados por exposição à luz provocam a perda de viabilidade celular (Merchat et al., 1996, J. Photochem. Photobiol. B. Biol. 35:149-157). Assim, foi referido que a Escherichia coli é inactivada eficientemente pela luz visível após incubação com a 5, 10, 15,20-tetraquis-(4-T7-metilpiridil) -porfina catiónica (T4MPyP) (Valduga et al., 1999, Biochem. Biophys. Res. Commun. 256:84-88). A actividade fototóxica desta porfirina é mediada principalmente pela deterioração das funções enzímica e de transporte de ambas as membranas exterior e citoplasmática, em vez de pela ligação a ADN.

No entanto, a utilidade dos agentes microbianos à base de porfirina é limitada devido à sua toxicidade contra células do tecido do mamífero hospedeiro, i.e., os compostos não são capazes de diferenciar as células microbianas alvo e as células do hospedeiro. Adicionalmente, a utilidade dos agentes microbianos à base de porfirina conhecidos é ainda limitada pela sua potência relativamente fraca para células microbianas alvo. Em WO 2004/056828 (disponível como estado 3 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ da técnica sob o Artigo 54(3)EPC) divulga compostos à base de porfirina para utilização em terapia fotodinâmica, que exibem toxicidade selectiva contra células microbianas.

Além disso, nem todas as infecções microbianas são adequadas para o tratamento utilizando terapia fotodinâmica, e.g., o local da infecção pode não estar acessível à luz.

Assim, existe uma necessidade de novos métodos para matar e atenuar o crescimento de agentes microbianos.

Sumário

De acordo com um primeiro aspecto da invenção, é proporcionada a utilização de um composto de Fórmula I na preparação de um medicamento para matar ou atenuar o crescimento de microorganismos através de um método in vivo que não compreende a exposição do composto a uma fonte de luz de terapia fotodinâmica ou a uma fonte de ultrassons de terapia ultrassónica

I em que: Χχ, X2, X3 e X4 representam independentemente (i.e. são iguais ou diferentes) um átomo de hidrogénio, uma porção lipófila, um grupo fenilo, um grupo alquilo, alcarilo ou aralquilo inferior ou um grupo catiónico com a fórmula seguinte -L-Ri-N+(R2) (R3)R4 em que: L é uma porção ligante ou está ausente; 4 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Rx representa alquileno inferior, alcenileno inferior ou alcinileno inferior, o qual está substituído opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo inferior, alquileno inferior (interrompido opcionalmente com oxigénio), fluoro, 0R5, C(0)R6, C(0)0R7, C(0)NR8R9, NRioRn e

N+Ri2Rl3Rl4/ S R2, R3 e R4 representam independentemente (i.e. são iguais ou diferentes) H, arilo, alquilo inferior, alcenilo inferior ou alcinilo inferior, os três últimos dos quais estão substituídos opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo inferior, alquileno inferior (interrompido opcionalmente com oxigénio), arilo, OR5, C(0)R6, C(0)0R7, C (0)NR8R9, NR10R11 e N+Ri2Ri3Ri4 Z é -CH ou N;

Ylr Y2, Y3 e Y4 estão ausentes ou representam independentemente arilo, alquilo inferior, alcenilo inferior ou alcinilo inferior, os três últimos dos quais estão substituídos opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo inferior, alquileno inferior (interrompido opcionalmente com oxigénio), arilo, OR5, C(0)R6, C (0) OR7, C(0)NR8R9, NR10R11, N+Ri2Ri3Ri4, ou, tomados em conjunto com o anel pirrole ao qual estão ligados, podem formar um grupo cíclico; e R5, R6, R7, Re, Rg, Rio, R11, R12, R13 e R14 representam independentemente H ou alquilo inferior; desde que pelo menos um de entre Xi, X2, X3 e X4 seja um grupo catiónico tal como definido acima e pelo menos um de entre

Xi, X2, X3 e X4 seja um átomo de hidrogénio. 0 termo "alquilo inferior" pretende englobar alquilo C1-C20 linear ou ramificado, cíclico ou acíclico, que pode estar interrompido com oxigénio (preferivelmente não estão presentes mais do que 5 átomos de oxigénio em cada cadeia alquilo) . Os grupos alquilo inferior que Ri, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, Rg, Rio, R11, R12, R13 e Ri4 podem representar incluem alquilo Ci-Cis, alquilo C1-C16, alquilo Ci-Ci4, alquilo 5 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Ci-Ci2, alquilo Ci-Cio, alquilo C1-C9, alquilo Ci-Cg, alquilo Ci-C7, alquilo Ci~C6, alquilo C1-C5, alquilo C1-C4, alquilo C1-C3 e alquilo C1-C2. Os grupos alquilo inferior preferidos que Ri, R2, R3 r R4, R5/ Rô / R7/ R8, Rçu Rio r Rll, Rl2, Rl3 β Ri4 podem representar incluem alquilo Ci, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, Cg, Cio, Cll, C12, C13, Ci4, Cl5 e C16.

Assim, qualquer um ou mais de N+-R2R3R4 e/ou N+Ri2Ri3Ri4 pode representar grupos amina/amónio ciclicos, por exemplo:

Será de notar que os grupos amina/amónio ciclicos podem também compreender menos ou mais de seis membros, por exemplo tais grupos podem compreender anéis de 4, 5, 7, 8, 9 ou 10 membros. O termo "alquileno inferior" deve ser entendido da mesma maneira.

Os termos "alcenilo inferior" e "alcinilo inferior" pretendem englobar alcenilo e alcinilo C2-C20 lineares ou ramificados, ciclicos ou aciclicos, respectivamente, podendo cada um estar interrompido com oxigénio (preferivelmente, não mais do que cinco átomos de oxigénio estão presentes em cada cadeia alcenilo ou alcinilo). O termo "alcenilo inferior" também inclui ambos os isómeros geométricos cis e trans. Os grupos alcenilo inferiores que Ri, R2, R3, R4, Rs, R6, R7, Rs, R9, Rio, R11, R12, R13 e R14 podem representar incluem alcenilo C2-C18, alcenilo C2-C17, alcenilo C2-Ci6, alcenilo C2-Ci4, alcenilo C2-C12, alcenilo C2-Cio, alcenilo C2-C8, alcenilo C2-C7, alcenilo C2-C6, alcenilo C2-C5, alcenilo C2-C4, alcenilo C2-C3 e alcenilo C3-C4. Os grupos alcenilo inferior preferidos que Ri, R2, R3, R4, R5, R6, R7, Re, Rg, Rio, Rn, R12, R13 e Ri4 podem representar incluem alcenilo C2, C3, C4, C5, Ce, C7, Cg, Cg, Cio, Cu, Ci2, C13 β Ci4 . 6 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ Ο termo "alcenileno inferior" deve ser entendido da mesma maneira.

Os grupos "alcinilo inferior" que Ri, R2, R3, R4, R5, Rè, R7, Rs, Rg, Rio, Rn, R12, R13 e R14 podem representar incluem alcinilo C2-C18, alcinilo C2-C16, alcinilo C2-C14, alcinilo C2-C12, alcinilo C2-C10, alcinilo C2-C9, alcinilo C2-Cs, alcinilo C2-C7, alcinilo C2-C6, alcinilo C2-C5, alcinilo C2-C4, alcinilo C2-C3 e alcinilo C3-C4. Os grupos alcinilo inferior preferidos que Ri, R2, R3, R4, Rs, Re, R7, Rs, Rg, Rio, R11, R12, R13 e R14 podem representar incluem alcinilo C2, C3, C4, C5, Ce, C7, Os, Cg, Cio, Cn, C12, C13 e Ci4 · O termo "alcinileno inferior" deve ser entendido da mesma maneira. O termo "arilo" inclui grupos aromáticos carbociclicos de seis a dez membros, tais como fenilo e naftilo, grupos esses que estão substituídos opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre fluoro, ciano, nitro, alquilo inferior (i.e. alcarilo) , OR5, C(0)R6, C(0)0R7, C(0)NRgRg e NR10R11 · 0 termo "aralquilo" inclui grupos alquilo ligados ao anel porfirina por meio de um grupo alquilo inferior.

Um segundo aspecto da invenção proporciona a utilização de um composto de fórmula II na preparação de um medicamento para matar ou atenuar o crescimento de microorganismos através de um método in vivo que não compreende a exposição do composto a uma fonte de luz de terapia fotodinâmica ou a uma fonte de ultrassons de terapia ultrassónica

U 7 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ em que Μ é um elemento metálico ou um elemento metalóide e Xlf X2, X3, X4, Yi Y2, Y3, Y4 e Z são como definidos anteriormente. segundo aspectos da matar ou atenuar o de um método que não estimulo que activa a

Preferivelmente, no primeiro e invenção o medicamento destina-se a crescimento de microorganismos através compreende a exposição do composto a um actividade antimicrobiana.

Por "um estimulo que activa a actividade antimicrobiana" pretende referir-se um estimulo que aumenta a capacidade do composto para matar ou atenuar o crescimento de agentes microbianos, tais como irradiação com uma fonte de luz de terapia fotodinâmica ou uma fonte de ultrassons. Por outras palavras, o medicamento exibe actividade antimicrobiana inata, i.e. o medicamento (e especificamente o composto activo nele incluído) é intrinsecamente activo. Tal actividade pode ser determinada através de métodos bem conhecidos na técnica; por exemplo, ver Exemplo B.

Assim, o medicamento destina-se a matar ou atenuar o crescimento de microorganismos através de um método diferente de terapia fotodinâmica ou sonodinâmica. No entanto, será de notar que não são excluídos métodos para matar ou atenuar o crescimento de microorganismos, em que o medicamento é exposto a luz ambiente normal (i.e. luz solar ou luz ambiente artificial).

Preferivelmente, o medicamento é exposto a luz/radiação de intensidade inferior a 10 mW/cm2, por exemplo inferior a 20 mW/cm2, inferior a 25 mW/cm2, inferior a 30 mW/cm2 (i.e. inferior a 300 W/m2) inferior a 40 mW/cm2, inferior a 50 mW/cm2, inferior a 60 mW/cm2, inferior a 70 mW/cm2, inferior a 80 mW/cm2, inferior a 90 mW/cm2 ou inferior a 100 mW/cm2.

Vantajosamente, o medicamento é exposto a uma dose de luz/radiação inferior a 100 J/cm2, por exemplo inferior a 90 J/cm2, inferior a 80 J/cm2, inferior a 70 J/cm2, inferior a 60 J/cm2, inferior a 50 J/cm2, inferior a 40 J/cm2, inferior a 30 J/cm2, inferior a 20 J/cm2 ou inferior a 10 J/cm2. 8 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Será ainda de notar pelos peritos na especialidade que os medicamentos se podem destinar á utilização num regime de tratamento que explora tanto a sua actividade inata como a sua actividade fotodinâmica e/ou actividade sonodinâmica. Por exemplo, o medicamento pode primeiro ser utilizado na ausência de um estimulo activador, de modo a que seja explorada a sua actividade antimicrobiana inata, e subsequentemente exposto a um estimulo activador, de tal modo a ser explorada a sua actividade fotodinâmica e/ou sonodinâmica. 0 termo "elemento metálico" pretende incluir um elemento metálico divalente ou trivalente. Preferivelmente, o elemento metálico é diamagnético. Mais preferivelmente, o elemento metálico é seleccionado de entre Zn(II), Cu(II), La(III), Lu (III), Y(III), In(III), Cd(II), Mg(II), AI(III), Ru, Ni (II), Μη(III), Fe(III) e Pd(II). Muito preferivelmente, o elemento metálico é Ni(II), Mn(III), Fe(III) ou Pd(II). 0 termo "metalóide" pretende incluir um elemento possuindo propriedades físicas e químicas, tais como a capacidade de conduzir a corrente eléctrica, que são intermédias entre as dos metais e não metais. O termo "elemento metalóide" inclui átomos de silício (Si) e germânio (Ge) que estão substituídos opcionalmente com um ou mais ligandos.

Será de notar que os termos elemento metálico e elemento metalóide incluem um elemento metálico ou um elemento metalóide possuindo um estado de oxidação positivo, todos os quais podem estar substituídos com um ou mais ligandos seleccionados de entre fluoro, OH, ORi5 em que Ri5 é alquilo inferior, alcenilo inferior, alcinilo inferior, aralquilo, arilo ou alcarilo (em que arilo e alcarilo estão monossubstituídos).

Os compostos de fórmulas I e II compreendem pelo menos um grupo catiónico. Assim, os compostos da invenção podem comportar uma carga global positiva, por exemplo, uma carga de +1, +2, +3, +4, +5, +6 ou mais. Numa concretização preferida, os compostos comportam uma carga global de menos do que +4, por exemplo +1, +2 ou +3. Numa concretização 9 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ particularmente preferida, os compostos comportam uma carga global de +2.

Será apreciado pelos peritos na especialidade que os compostos de fórmulas I e II podem ser contrabalançados por contraniões. Contraniões exemplares incluem, mas não estão limitados a, halogenetos (e.g. fluoreto, cloreto e brometo), sulfatos (e.g. decilsulfato), nitratos, percloratos, sulfonatos (e.g. metanossulfonato) e trifluoroacetato. Outros contraniões adequados serão bem conhecidos dos peritos na arte. Assim, os derivados farmaceuticamente e/ou veterinariamente aceitáveis dos compostos de fórmulas I e II, tais como sais e solvatos, estão também incluídos no âmbito da invenção. Os sais que podem ser mencionados incluem: sais de adição de ácido, por exemplo, sais formados com ácidos inorgânicos tais como o ácido clorídrico, bromidrico, sulfúrico e fosfórico, com ácidos carboxilicos ou com ácidos organossulfónicos; sais de adição de base; sais de metais formados com bases, por exemplo os sais de sódio e potássio.

Será ainda apreciado pelos peritos que os compostos de fórmula I podem exibir tautomerismo. Todas as formas tautoméricas e as suas misturas estão incluídas no âmbito da invenção.

Os compostos de fórmulas I e II podem também conter um ou mais átomos de carbono assimétricos e podem portanto exibir isomerismo óptico e/ou diastereoisomerismo. Os diastereómeros podem ser separados utilizando técnicas convencionais, e.g. cromatografia ou cristalização fraccionada. Os vários estereoisómeros podem ser isolados por separação de uma mistura racémica ou outra mistura dos compostos utilizando técnicas convencionais, e.g. cristalização fraccionada ou HPLC. Em alternativa, os isómeros ópticos desejados podem ser preparados por reacção dos materiais de partida opticamente activos apropriados sob condições que não provoquem racemização ou epimerização ou por derivatização, por exemplo com um ácido homoquiral seguida por separação dos ésteres diastereoméricos por meios convencionais (e.g. HPLC, cromatografia sobre sílica). Todos os esteroisómeros estão incluídos no âmbito da invenção. 10 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Numa concretização preferida do primeiro e segundo aspectos da invenção, Z é -CH.

Uma caracteristica distintiva dos primeiro e segundo aspectos da invenção é que pelo menos um dos grupos substituintes Xi, X2, X3 e X4 é um grupo catiónico de amónio quaternário de fórmula -L-Ri-N+(R2) (R3)R4/ tal como definido acima. Preferivelmente, nenhum de entre Xi, X2/ X3 e X4 é um grupo catiónico anilinio ou piridínio.

Numa concretização preferida, Ri é um grupo alquileno inferior, alcenileno inferior ou alcinileno inferior, não substituido.

Vantajosamente, Ri é um grupo alquileno inferior de cadeia linear de fórmula: “ (CH2) m“ ·

Preferivelmente, 'm' é um inteiro entre 1 e 20. Mais preferivelmente, 'm' é um inteiro entre 1 e 10, por exemplo entre 1 e 6, entre 1 e 5, entre 1 e 4 ou entre 1 e 3. Os grupos alquileno inferior de cadeia linear preferidos que Ri pode representar incluem grupos com a fórmula acima em que m é 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10. Muito preferivelmente, 'm' é 2 ou 3 .

Os três grupos substituintes remanescentes da porção amónio quaternário, i.e. R2, R3 e R4, podem ser iguais ou diferentes e são seleccionados de entre H, alquilo inferior, alcenilo inferior ou alcinilo inferior, estando os últimos três substituídos opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo inferior, OR5, C(0)R6, C(0)0R7, C (O) NRgRg, NR30R11 s N R12R13R14 ·

Numa concretização preferida, R2, R3 e/ou R4 são um grupo alquilo inferior, alcenilo inferior ou alcinilo inferior.

Preferivelmente, R2, R3 e/ou R4 são grupos alquilo inferior não substituídos.

Opcionalmente, pelo menos um de entre R2, R3 e R4 é um grupo alquilo que está substituído com um grupo amina 11 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ primária, secundária ou terciária ou com um grupo de amónio quaternário.

Numa concretização preferida dos primeiro e segundo aspectos da invenção, Ri é -(CH2)3-/ R2 e R3 são CH3 e R4 é - (CH2)3-N(CH3)2.

Numa concretização preferida alternativa dos primeiro e segundo aspectos da invenção, Ri é -(CH2)3-, e R2, R3 e R4 são cada um CH3.

Numa outra concretização preferida alternativa dos primeiro e segundo aspectos da invenção, Ri é -(CH2)3_, e R2, R3 e R4 são cada um C2H5.

Vantajosamente, pelo menos um de entre Xi, X2, X3 e X4 é um grupo catiónico como definido acima e pelo menos um de entre Xi, X2, X3 e X4 é um átomo de hidrogénio.

Preferivelmente, cada um de Xi, X2, X3 e X4 é um átomo de hidrogénio ou um grupo catiónico tal como definido acima.

Convenientemente, os valores pK de quaisquer grupos amina primária, secundária ou terciária, se presentes nos compostos da invenção, são superiores a 8 para assegurar que o grupo é protonado quando num ambiente fisiológico. 0 grupo catiónico de amónio quaternário é opcionalmente ligado ao anel porfirina por meio de uma porção de ligação, L.

As porções de ligação preferidas, L, incluem porções de ligação fenoxi, fenileno, sulfonilamido, aminossulfonilo, sulfonilimino, fenilsulfonilamido, fenilaminossulfonilo, ureia, uretano e carbamato.

Numa concretização preferida, o grupo catiónico de amónio quaternário é ligado ao anel porfirina por meio de um ligante fenoxi. 12 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Assim, Xlr χ2, Χ3 e/ou Χ4 podem ter a fórmula seguinte: '/ (OR)o em que R é Ri-N+(R2) (R3)R4^ como definido acima, e 'n' é um inteiro entre 1 e 3.

Numa concretização alternativa preferida, o grupo catiónico de amónio quaternário é ligado ao anel porfirina por meio de um ligante fenrleno.

Assim, Xi, X2, X3 e/ou X4 podem ter a fórmula seguinte: em que R é Ri-N+(R2) (R3)R4, como definido acima, e 'm' é um inteiro entre 1 e 3.

Preferivelmente, 'm' é 2, e muito preferivelmente 1.

Numa concretização preferida alternativa, X3, X2, X3 e/ou X4 podem ter a fórmula seguinte: em que R é Ri-N+(R2) (R3)R4, 'n' e 'm' são como definido acima, e 'n + m' está entre 1 e 3.

Vantajosamente, L compreende um anel benzeno (e.g. fenoxi, fenileno, fenilsulfonilamido ou fenilamino-sulfonilo) monossubstituido na posição para. Em alternativa, L pode estar mono- ou di-substituido nas posições meta ou orto. L pode também estar substituído em ambas as posições para e orto. 13 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Numa concretização preferida alternativa, o grupo catiónico de amónio quaternário é ligado directamente ao anel porfirina, i.e., L está ausente.

Numa concretização preferida do primeiro e segundo aspectos da invenção, o composto compreende dois grupos catiónicos, como definido acima, em lados opostos do anel porfirina, i.e. nas posições de anel 5 e 15 ou nas posições de anel 10 e 20. Por exemplo, Xi e X3 podem ser um átomo de hidrogénio, uma porção lipófila, um grupo fenilo, um grupo alquilo, alcarilo ou aralquilo inferior e X2 e X4 podem ser grupos catiónicos, ou vice versa. Preferivelmente, Xi e X3 são ambos um átomo de hidrogénio e X2 e X4 são ambos um grupo catiónico, ou vice versa.

Em alternativa, o composto pode compreender dois grupos catiónicos, como definido acima, em posições vizinhas do anel porfirina, i.e. nas posições de anel 5 e 10, ou nas posições de anel 10 e 15, ou nas posições de anel 15 e 20 ou nas posições de anel 20 e 5. Por exemplo, Xi e X2 podem ser hidrogénio e X3 e X4 podem ser grupos catiónicos, ou X2 e X3 podem ser hidrogénio e X4 e Xi podem ser grupos catiónicos, etc.

Será de notar pelos peritos na especialidade que surgem outras possibilidades estruturais isoméricas quando Z representa azoto. Tais possibilidades estão incluídas no âmbito da presente invenção.

Noutra concretização preferida do primeiro e segundo aspectos da invenção, o composto é substituído em um ou mais anéis pirrole constituintes. Assim, Yi, Y2, Y3 e Y4 podem estar ausentes ou representar independentemente arilo, alquilo inferior, alcenilo inferior ou alcinilo inferior, sendo os três últimos opcionalmente substituídos por um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo inferior, alquileno inferior (interrompido opcionalmente com oxigénio), arilo, OR5, C(0)R6, C(0)0R7, C(0)NR8 R9f NRioRu e N+Ri2Ri3Ri4. Será notado pelos peritos na especialidade que Yi, Y2, Y3 e/ou Y4 podem compreender grupos cíclicos, que podem ser saturados ou aromáticos. Por exemplo, um ou mais dos anéis pirrole podem ser substituídos para formar um grupo iso-indole, i.e. 14 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ Υι, Υ2, Υ3 e/ou Υ4 juntamente com ο anel pirrole ao qual estão ligados podem ser cíclicos.

Numa concretização preferida alternativa do primeiro e segundo aspectos do invento, Υχ, Y2, Y3 e Y4 estão ausentes. Assim, o anel porfirina é preferivelmente substituído apenas em uma ou mais das posições 5, 10, 15 ou 20.

Noutra concretização preferida dos primeiro e segundo aspectos da invenção, pelo menos um de entre Χχ, X2, X3 e X4 é ou compreende uma porção lipófila.

Por 'porção lipófila' incluem-se porções possuindo um coeficiente de partição entre 1-n-octanol e água, expresso como log P, superior a 1,0 ao pH fisiológico e 25°C.

Convenientemente, a porção lipófila é um grupo alquilo saturado de cadeia linear de fórmula -(CH2)PCH3, ou um grupo alquileno equivalente de fórmula -(CH2)P-, em que 'p' é um inteiro entre 1 e 22, por exemplo entre 1 e 18. Preferivelmente, 'p' está entre 1 e 18, mais preferivelmente entre 2 e 16, entre 4 e 16, entre 6 e 18, entre 8 e 16 ou entre 4 e 12. Muito preferivelmente, 'p' está entre 10 e 12.

Será apreciado que Χχ, X2, X3 e/ou X4 podem ser um grupo catiónico como definido acima, o qual também compreende uma porção lipófila.

Numa concretização preferida alternativa dos primeiro e segundo aspectos da invenção, nenhum de Χχ, X2, X3 e X4 é uma porção lipófila.

Vantajosamente, os compostos utilizados nos primeiro e segundo aspectos da invenção são solúveis em água. Preferivelmente, os compostos podem ser dissolvidos em água até uma concentração de pelo menos 5 yg/l, por exemplo pelo menos 10 yg/l, 15 pg/l ou 20 pg/l. Mais preferivelmente, os compostos podem ser dissolvidos em água até uma concentração de pelo menos 100, por exemplo 200 pg/l, 300 pg/l, 400 yg/l, 500 yg/l, 1 mg/ml, 5 mg/ml, 10 mg/ml, 2 0 mg/ml, 50 mg/ml ou 100 mg/ml. 15 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Convenientemente, os compostos utilizados nos primeiro e segundo aspectos da invenção exibem toxicidade selectiva para agentes microbianos. Por 'selectivo' pretende referir-se que o composto é preferencialmente tóxico para um ou mais um microrganismos (tais como bactérias, micoplasmas, leveduras, fungos e/ou virus) comparado com células de hospedeiro de mamifero, e.g. humano. Preferivelmente, a toxicidade do composto para um microorganismo alvo é pelo menos duas vezes superior à toxicidade desse composto para células de mamifero, mais preferivelmente pelo menos três vezes, pelo menos quatro vezes, pelo menos cinco vezes, pelo menos seis vezes, pelo menos oito vezes, pelo menos dez vezes, pelo menos quinze vezes ou pelo menos vinte vezes. Muito preferivelmente, o composto da invenção é substancialmente não tóxico para células de mamifero.

Deste modo, quando os compostos são utilizados para tratar infecções bacterianas, por exemplo, podem ser seleccionados regimes de dosagem de tal modo que as células bacterianas são destruídas com danos minimos para o tecido são do hospedeiro. Assim, os compostos para utilização nos primeiro e segundo aspectos da invenção preferivelmente exibem uma 'janela terapêutica'.

Numa concretização preferida, o composto da invenção é tóxico para o microrganismo alvo (e.g. células bacterianas) em doses baixas. Preferivelmente, o composto é tóxico para o microrganismo alvo a uma concentração inferior a 10 μΜ, por exemplo menor que 1 μΜ, menor que 0,1 μΜ, menor que 0,01 μΜ, menor que 0,005 μΜ ou menor que 0,001 μΜ (ver Exemplo B).

Os compostos preferidos para utilização nos primeiro e segundo aspectos da invenção incluem os seguintes: (a) Dicloreto de 5,15-bis-(4-{3-[(3-dimetilaminopropil)-dimetilamónio]propiloxi}fenil)porfirina ("Composto 8") 16 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Ο

U

Preferivelmente, este composto é providenciado como um sal dicloreto ou tetracloreto. (b) Dicloreto de 5,15-bis-[4-(3-trietilamóniopropiloxi)-fenil]porfirina ("Composto 9");

Preferivelmente, este composto é providenciado como um sal dicloreto. (c) Dicloreto de 5,15-bis-[3-(3-trimetilamóniopropiloxi)- fenil]porfirina ("Composto 12");

Preferivelmente, este composto é providenciado como um sal dicloreto. (d) Dicloreto de 5,15-bis-[4-(3-trimetilamóniopropiloxi)-fenil]porfirina ("Composto 10"); 17 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Preferivelmente, este composto é providenciado como um sal dicloreto. (e) Dicloreto de 5-[3,5-bis-(3-trimetilamóniopropiloxi)-fenil]-15-undecilporfirina ("Composto 6");

Preferivelmente, este composto é providenciado como um sal dicloreto. (f) Cloreto de 5-{4-[3-dimetil-(3-dimetilaminopropil)amónio-propiloxi]fenil}-15-(4-dodeciloxifenil)porfirina ("Composto 23") ;

Preferivelmente, este composto é providenciado como um sal cloreto ou dicloreto. (g) Tricloreto de 3-[({3-[ (3-{4-[15-(4-dodeciloxi fenil) porfirin-5-il]fenoxi}propil) dimetilamónio]propil}-dimetilamónio)propil]trimetilamónio (”Composto 25"); 18 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Preferivelmente, este composto é providenciado como um sal tricloreto. (h) Dicloreto de 5,15-bis-[3-(3-trimetilamónio-propiloxi)-fenil]-10-undecilporfirina ("Composto 28");

Preferivelmente, este composto é providenciado como um sal dicloreto. (i) Dicloreto de 5-{4-[3-dimetil-(3-trimetilamóniopropil)-amónio-propiloxi]fenil}-15-(4-dodeciloxifenil)porfirina ("Composto 31"); e

Preferivelmente, este composto é providenciado como um sal dicloreto. (j) Dicloreto de 5-[4-(3-dimetildecil-amóniopropiloxi)-fenil]—15 —{4 —[3-dimetil-(3-dimetilaminopropil)-amóniopropiloxi]fenil}porfirina ("Composto 32"). 19 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Me2N

Preferivelmente, este composto é providenciado como um sal dicloreto.

Será apreciado que os compostos acima podem em alternativa estar numa forma obtida por metalação, i.e. podem compreender um elemento metálico ou elemento metalóide quelado dentro do anel porfirina. 0 medicamento tal como preparado de acordo com os primeiro ou segundo aspectos da invenção pode ser formulado em várias concentrações, dependendo da eficácia/toxicidade do composto a ser utilizado e da indicação para a qual está a ser utilizado. Preferivelmente, o medicamento compreende o composto numa concentração compreendida entre 0,1 μΜ e 1 mM, mais preferivelmente entre 1 μΜ e 100 μΜ, entre 5 μΜ e 50 μΜ, entre 10 μΜ e 50 μΜ, entre 20 μΜ e 40 μΜ e muito preferivelmente cerca de 30 μΜ. Para aplicações in vitro, as formulações podem compreender uma concentração inferior de um composto, por exemplo, entre 0,0025 μΜ e 1 μΜ.

Será notado pelos peritos na especialidade que o composto utilizado nos primeiro ou segundo aspectos da invenção será geralmente administrado em mistura com um excipiente, diluente ou transportador farmacêutico adequado seleccionado em relação com a via de administração pretendida e com a prática farmacêutica padrão (por exemplo, ver Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a edição, 1995, Ed. Alfonso Gennaro, Mack Publishing Company, Pensilvânia, EUA). Vias de administração adequadas são discutidas em seguida, e incluem entrega tópica, intravenosa, oral, pulmonar, nasal, aural, ocular, na bexiga e SNC. 20 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Por exemplo, para aplicação topicamente, e.g. à pele ou ao local de uma ferida, os compostos podem ser administrados na forma de uma loção, solução creme, gel, unguento ou pó (por exemplo, ver Remington, supra, páginas 1586 a 1597). Assim, os compostos podem ser formulados como um unguento adequado contendo o composto activo suspenso ou dissolvido em, por exemplo, uma mistura com um ou mais dos seguintes: óleo mineral, vaselina liquida, vaselina branca, propilenoglicol, composto de polioxietileno e polioxipropileno, cera emulsionante e água. Em alternativa, podem ser formulados como uma loção ou creme adequado, suspensos ou dissolvidos em, por exemplo, uma mistura de um ou mais dos seguintes: óleo mineral, monoestearato de sorbitano, um polietilenoglicol, parafina liquida, polisorbato 60, cera de ésteres cetilicos, sulfato de e-laurilo, um álcool (e.g. etanol, álcool cetearilico, 2-octildodecanol, álcool benzilico) e água.

Numa concretização preferida, o medicamento (e.g. loção, solução, creme, gel ou unguento) é à base de água.

As formulações adequadas para administração tópica na boca incluem ainda losangos compreendendo o ingrediente activo numa base aromatizada, usualmente sacarose e goma arábica ou adragante; pastilhas compreendendo o ingrediente activo numa base inerte tal como gelatina e glicerina ou sacarose e acácia; e elixires bucais compreendendo o ingrediente activo num transportador liquido adequado. O medicamento tal como preparado de acordo com os primeiro ou segundo aspectos da invenção pode também ser administrado intranasalmente ou por inalação e é convenientemente administrado na forma de um inalador de pó seco ou de uma apresentação de spray de aerossol a partir de um recipiente pressurizado, bomba, spray ou nebulizador, com a utilização de um propulsor adequado, e.g. dicloro-difluorometano, triclorofluorometano, dicloro-tetrafluoroetano, um hidro-fluoroalcano tal como 1,1,1,2-tetrafluoroetano (HFA 134A3 ou 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropano (HFA 227EA3) , dióxido de carbono ou outro gás adequado. No caso de um aerossol pressurizado, a unidade de dosagem pode ser determinada providenciando uma válvula 21 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ para fornecer uma quantidade calibrada. 0 recipiente pressurizado, bomba, spray ou nebulizador pode conter uma solução ou suspensão do composto activo, e.g. utilizando uma mistura de etanol e o propulsor como solvente, o qual pode conter adicionalmente um lubrificante, e.g. trioleato de sorbitano. As cápsulas e cartuchos (feitos, por exemplo, a partir de qelatina) para utilização num inalador ou insuflador podem ser formulados para conter uma mistura em pó de um composto da invenção e uma base de pó adequada tal como lactose ou amido.

As formulações em aerossol ou pó seco são preferivelmente realizadas de tal forma que cada dose medida ou "puff" contenha pelo menos 1 mq de um composto para administração ao paciente. Será apreciado que a dose total com um aerossol variará de paciente para paciente e de indicação para indicação e pode ser administrada numa dose única ou, mais usualmente, em doses divididas ao longo do dia.

Em alternativa, outras vias de administração convencionais conhecidas na arte podem também ser empregues; por exemplo o medicamento tal como preparado de acordo com os primeiro ou segundo aspectos da invenção pode ser administrado por via oral, bucal ou sublingual na forma de comprimidos, cápsulas, óvulos, elixires, soluções ou suspensões que podem conter agentes aromatizantes ou corantes, para aplicações de libertação imediata, retardada ou controlada. 0 medicamento pode também ser administrados por via intraocular (ver abaixo), intra-aural ou por meio de injecção intracavernosa.

0 medicamento pode também ser administrado parentericamente, por exemplo, por via intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal, intratecal, intraventricular, intra-esterno, intracranial, intramuscular ou subcutânea (incluindo através de um conjunto de agulhas finas ou utilizando a tecnologia sem agulhas Powderject®) , ou pode ser administrado por técnicas de infusão. É melhor utilizado na forma de uma solução aquosa estéril que pode conter outras substâncias, por exemplo sais ou glucose suficientes para tornar a solução isotónica com o sangue. As soluções aquosas devem ser adequadamente tamponadas (preferivelmente a um pH 22 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ compreendido entre 3 e 9) , se necessário. A preparação de formulações parentéricas adequadas sob condições estéreis é facilmente realizada por técnicas farmacêuticas padrão bem conhecidas dos peritos na especialidade.

As formulações adequadas para administração parentérica incluem soluções para injecção estéreis, aquosas e não aquosas, as quais podem conter anti-oxidantes, tampões, bacteriostáticos e solutos que tornam a formulação isotónica com o sangue do receptor pretendido; e suspensões estéreis aquosas e não aquosas que podem incluir agentes de suspensão e agentes espessantes. As formulações podem ser apresentadas em recipientes de uni-dose ou multi-dose, por exemplo ampolas e frascos selados, e podem ser armazenadas numa condição seca por congelação (liofilizada) necessitando apenas da adição do transportador liquido estéril, por exemplo água para injecções, imediatamente antes da utilização. Podem ser preparadas soluções e suspensões extemporâneas para injecção a partir de pós, grânulos e comprimidos estéreis, do tipo descrito previamente. 0 medicamento pode também ser administrado pela via ocular, particularmente para o tratamento de doenças do olho. Para utilização oftálmica, os compostos podem ser formulados como suspensões micronizadas em solução salina estéril, isotónica, de pH ajustado ou preferivelmente como soluções em solução salina estéril, isotónica, de pH ajustado, opcionalmente em combinação com um conservante tal como cloreto de benzalcónio. Em alternativa, podem ser formulados num unguento tal como petrolato.

Para utilização veterinária, um composto é administrado como uma formulação adequadamente aceitável de acordo com a prática veterinária normal e o cirurgião veterinário determinará o regime de dosagem e a via de administração que será a mais apropriada para o animal particular.

Numa concretização preferida dos primeiro e segundo aspectos da invenção, o medicamento destina-se a administração oral ou parentérica. Assim, os medicamentos destinam-se preferivelmente para o tratamento de infecções microbianas sistémicas. 23 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Os medicamentos podem ser armazenados em qualquer recipiente ou vaso adequado conhecido na arte. Será apreciado pelos peritos na especialidade que o recipiente ou vaso deve preferivelmente ser estanque ao ar e/ou esterilizado. Vantajosamente, o recipiente ou vaso é feito de um material plástico, tal como polietileno.

Será notado que os medicamentos tal como preparados de acordo com o primeiro ou segundo aspectos da invenção podem ser utilizados para matar um número de tipos de microorganismos, incluindo bactérias, micoplasmas, leveduras, fungos e/ou virus. Será ainda apreciado que os medicamentos podem ser utilizados para prevenir e/ou tratar infecções com tais microorganismos, i.e. os medicamentos são adequados para tratamento profiláctico e/ou terapêutico. Por exemplo, o medicamento pode ser utilizado para prevenir ou reduzir a disseminação ou transferência de um patogénio para outros sujeitos, e.g. pacientes, trabalhadores de serviços de saúde, etc.

Preferivelmente, os medicamentos preparados de acordo com o primeiro ou segundo aspectos da invenção são para utilização no tratamento curativo e/ou profiláctico de infecções bacterianas tais como cocos Gram positivos (e.g. Streptococcus), cocos Gram negativos (e.g. Neisseria), bacilos Gram positivos (e.g. espécie Corynebacterium), bacilos Gram negativos (e.g. Escherichia coli), bacilos ácido-resistentes (e.g. uma Micobactéria tipica) e incluindo infecções que provocam abcessos, quistos, infecções do sangue (bacteriemia), infecções dermatológicas, infecções de feridas, artrite, infecções do tracto urinário, pancreatite, doença inflamatória pélvica, peritonite, prostatite, infecções da vagina, da cavidade oral (incluindo infecções dentárias), dos olhos e/ou ouvidos, úlceras e outras infecções localizadas; infecções por actinomicetas; infecções por fungos tais como Candida albicans, Aspergillus e Blastomyces; infecções virais tais como HIV, encefalite, gastroenterite, febre hemorrágica, hantavirus, hepatite virai, herpesvirus (e.g. citomegalovirus, Epstein-Barr, herpesvirus simiae, herpes simplex e varicela-zoster); infecções por protozoários tais como amebiase, babesiose, coccidiose, criptosporidiose, giardiase, Leishmaniose, 24 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Trichomoniase, toxoplasmose e malária; infecções helminticas tais como as causadas por nematodos, cestodas e trematodos, e.g. ascariase, ancilóstomo, filariase linfática, oncocerciase, schistosomiase e toxocariase; doenças de priões; e doenças inflamatórias tais como reumatismo de tecidos moles, osteoartrite, artrite reumatóide e espondiloartropatias.

Mais preferivelmente, os medicamentos destinam-se a utilização no tratamento curativo e/ou profiláctico de infecções por bactérias Gram positivas e/ou bactérias Gram negativas. Muito preferivelmente, os compostos da invenção são para utilização no tratamento curativo e/ou profiláctico de infecções por bactérias Gram positivas.

Os medicamentos são preferivelmente utilizados para matar microrganismos, e.g. bactérias, micoplasmas, leveduras, fungos e virus. Os medicamentos são particularmente adequados para matar bactérias que tenham desenvolvido resistência a tratamentos com antibióticos convencionais, tais como Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA).

Será apreciado pelos peritos na especialidade que os medicamentos são adequados para tratar todas as infecções microbianas, independentemente do local da infecção estar ou não numa área acessível à luz. Assim, tais medicamentos podem ter utilidade para tratar infecções que não estão disponíveis para serem tratadas por agentes de terapia fotodinâmica convencional. Preferivelmente, a infecção microbiana está situada numa superfície inacessível à luz ou numa área inacessível à luz.

As dosagens do composto nos medicamentos tal como preparados de acordo com o primeiro ou segundo aspectos da invenção dependerão de vários factores; incluindo o composto particular empregue, a formulação, via de administração e a indicação para a qual o composto é utilizado. Tipicamente, no entanto, as dosagens variarão de 0,01 e 20 mg de composto por quilograma de peso corporal, preferivelmente de 0,1 a 15 mg/kg, por exemplo de 1 a 10 mg/kg de peso corporal.

Numa concretização preferida, os medicamentos tal como preparados de acordo com o primeiro ou segundo aspectos da 25 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ invenção são utilizados em combinação com agentes antimicrobianos convencionais. Por exemplo, os compostos podem ser utilizados em combinação com um ou mais dos antibióticos convencionais seguintes: agentes antibacterianos, por exemplo penicilinas penicilinas sintéticas e cefalosporinas, sulfonamidas, eritromicina, canomicina, tetraciclina, cloramfenicol, rifampicina e incluindo gentamicina, ampicilina, benzipenicilina, benetamina penicilina, benzatina penicilina, feneticilina, fenoximetilpenicilina, procaina penicilina, cloxacilina, flucloxacilina, meticilina sódica, amoxicilina, cloridrato de bacampicilina, ciclacilina, mezlocilina, pivampicilina, cloridrato de talampicilina, carfecilina sódica, piperacilina, ticarcilina, mecilinamo, pirmecilinano, cefaclor, cefadroxil, cefotaxima, cefoxitina, cefsulodina sódica, ceftazidima, ceftizoxima, cefuroxima, cefalexina, cefalotina, cefamandole, cefazolina, cefradina, latamoxef dissódico, aztreonam, cloridrato de clortetraciclina, clomociclina sódica, cloridrato de demeclocidina, doxiciclina, limeciclina, minociclina, oxitetraciclina, amicacina, sulfato de framicetina, sulfato de neomicina, netilmicina, tobramicina, colistina, fusidato de sódio, sulfato de polimixina B, espectinomicina, vancomicina, sulfaloxato de cálcio, sulfametopirazina, sulfadiazina, sulfadimidina, sulfaguanidina, sulfaureia, capreomicina, metronidazole, tinidazole, cinoxacina, ciprofloxacina, nitrofurantoina, hexamina, estreptomicina, carbenicilina, colistimetato, polimixina B, furazolidona, ácido nalidixico, trimetoprim-sulfametoxazole, clindamicina, lincomicina, cicloserina, isoniazida, etambutol, etionamida, pirazinamida e semelhantes naturais e sintéticos; agentes anti-fúngicos, por exemplo miconazole, cetoconazole, itraconazole, fluconazole, anfotericina, flucitosina, griseofulvina, natamicina, nistatina, e semelhantes; e agentes antivirais tais como aciclovir, AZT, ddl, cloridrato de amantadina, inosina pranobex, vidarabina e semelhantes.

Noutra concretização preferida, os medicamentos compreendem e/ou são co-administrados com agentes promotores de penetração, tais como poli(etilenoimina), ou agentes antibióticos que exibam essa capacidade promotora de penetração (e.g. polimixina ou colistina). 26 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Os medicamentos tal como preparados de acordo com o primeiro ou segundo aspectos da invenção são particularmente adequados para utilização no tratamento curativo ou profiláctico de uma ou mais das indicações seguintes:

Impetigo O impetigo é uma infecção altamente contagiosa. É a infecção mais comum nas crianças. 0 impetigo tem duas formas clássicas não bolhoso e bolhoso. 0 impetigo não bolhoso, também denominado impetigo contagioso representa aproximadamente 70% dos casos. As lesões normalmente resolvem-se em 2 a 3 semanas sem tratamento. O impetigo pode também complicar outras doenças da pele tais como escabiose (sarna), varicela, dermatite atópica e doença de Darier. (a) Impetigo não bolhoso

Tipo de bactérias O impetigo não bolhoso é uma infecção provocada principalmente por estreptococos beta-hemolíticos do Grupo A (Streptococcus pyogenes), Staphylococcus aureus, ou uma combinação destes dois organismos (ver Andrews' Diseases of the skin: Clinicai dermatology, 9a ed. (2000) editado por Odom RB editor Saunders pp. 312-4) . Os estreptococos não

Grupo A (Grupo B, C, e G) podem ser responsáveis por casos raros de impetigo, e os estreptococos do Grupo B estão associados com impetigo no recém-nascido.

Tipo de feridas O impetigo não bolhoso é uma infecção superficial, intraepidérmica, unilocular vesiculopustular.

As lesões do impetigo não bolhoso começam vulgarmente sobre a pele da face ou extremidades na sequência de trauma. Como regra, a pele intacta é resistente a impetiginização. 27 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ A apresentação clínica do impetigo evolui de forma ordenada desde uma vesícula pequena ou pústula, que progride para uma placa com crosta cor de mel. As lesões usualmente têm menos de 2 cm de diâmetro. As lesões tendem a secar, deixando crostas finas sem cicatrização. As lesões são usualmente minimamente sintomáticas. Raramente, pode estar presente eritema associado com dor suave ou ligeiro prurido. A infecção espalha-se para áreas contíguas e distais através da inoculação de outras feridas por coçagem.

Sitio das Bactérias 0 impetigo não bolhoso é uma infecção superficial por estreptococos ou estafilococos que está localizada na camada subcórnea (imediatamente por baixo do estrato córneo) da pele (ver Figura 1) . Mais particularmente, a infecção no impetigo está confinada histopatogicamente a queranócitos altamente diferenciados da epiderme superior. Quando as bactérias invadem uma brecha na pele começam a multiplicar-se. A histopatologia é a de uma inflamação extremamente superficial em torno da porção superior em forma de funil dos folículos pilossebáceos. Forma-se uma vesicopústula subcórnea, contendo alguns cocos dispersos em conjunto com fragmentos de leucócitos polimorfonucleares e células epidérmicas. Na derme, há uma reacção inflamatória suave -dilatação vascular, edema e infiltração de leucócitos polimorfonucleares (Andrews' diseases of the skin, supra., pp. 312-4). (b) Impetigo bolhoso Tipo de bactérias 0 impetigo bolhoso é provocado principalmente por estirpes de Staphylococcus aureus que produzem toxinas exfoliativas (Sadich et al., 1997, Dermatologic Clinícs 15 (2) :341-9) .

Tipo de feridas 0 impetigo bolhoso é caracterizado histologicamente por clivagem subcórnea e infiltração com leucócitos e com 28 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ polimorfonucleares que migram através da epiderme e se acumulam entre as camadas da pele granular e do estrato córneo. Estão presentes pequenas ou grandes bolhas superficiais frágeis no tronco e extremidades.

Bolhas flácidas e erosões húmidas com eritema circundante são caracteristicas destas infecções subcórnea. Frequentemente, apenas se vêm os restos de bolhas rebentadas na altura da apresentação. A separação da epiderme é devida a uma endotoxina produzida por Staphylococcus aureus. Sítios das bactérias 0 impetigo bolhoso é uma infecção estafilocócica que ocorre no, e imediatamente por baixo do, estrato córneo (ver figura 1) . 0 impetigo bolhoso é considerado devido a toxina exfoliativa produzida por alguns Staphylococcus aureus ligados a células do estrato córneo.

Dermatite Atópica (DA) A dermatite atópica, também denominada eczema atópico, é uma inflamação crónica da pele que resulta numa erupção com comichão, especialmente nas flexões, i.e. atrás dos joelhos, na frente dos cotovelos, nos pulsos, no pescoço e nas pálpebras. A infecção da erupção é comum e provoca mais inflamação e comichão. O eczema manifesta-se tipicamente entre os 1-6 meses de vida. Aproximadamente 60% dos pacientes têm o seu primeiro episódio até ao ano e 90% até aos 5 anos. O estabelecimento da dermatite atópica na adolescência ou mais tarde é invulgar e deve levar a ter em consideração outros diagnósticos. As manifestações de doença variam com a idade.

Tipo de bactérias

As bactérias e os seus superantigénios contribuem para a patogenecidade da DA. O Staphylococcus aureus coloniza a pele de 90% dos pacientes com DA (lesões eczematosas crónicas) e apenas 5% dos pacientes não atópicos. A densidade de colonização de 29 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Staphylococcus aureus pode atingir 107 unidades formadoras de colónias cm-2 sem sinais clinicos de infecção em pacientes com DA. Adicionalmente, a pele aparentemente normal sem lesões dos pacientes atópicos contém números elevados de Staphylococcus aureus. A razão para o sobrecrescimento dos Staphylococcus aureus na dermatite atópica, apesar de muito menos severo ou nenhum em doenças tais como a psoriase, não é conhecida. A proteina A elicita uma resposta muito menos vigorosa em pacientes atópicos do que em normais ou psoriaticos, mas isto pode ser o resultado e não uma causa da colonização. A atenção focou-se recentemente nos lipidos da pele e existe alguma evidência de que os ácidos gordos que podem controlar a colonização estafilocócica são deficientes nos pacientes atópicos.

Os superantigénios são um grupo único de proteínas produzidas por bactérias e vírus que contorna certos elementos da sequência imune convencional mediada por antigénios. Enquanto os antigénios convencionais activam aproximadamente 0,01% a 0,1% das células T do corpo, um superantigénio tem a capacidade de estimular 5% a 30% da população de células T. Os S. aureus podem exacerbar ou manter a inflamação da pele na DA por secreção de um grupo de exotoxinas que actuam como superantigénios. Os pacientes com DA possuem uma barreira de pele alterada secundária a uma insuficiência de ceramidas no seio do estrato córneo. Foi proposto que a penetração da pele por estas exotoxinas pode provocar a activação de células T, macrófagos, LCs e mastócitos, conduzindo assim à libertação de citocinas e mediadores de mastócitos. É admissível que estes eventos possam proporcionar a base para inflamação na DA crónica. Permanece a especulação sobre se a colonização por S. aureus e a secreção local de superantigénios é um fenómeno primário ou secundário na DA (Andrews' diseases of skin, Cap. 5, Atopic Dermatitis, Eczema and non-infectious immunodeficiency disorders, pp. 69-76).

As infecções cutâneas virais, fúngicas e bacterianas ocorrem com mais frequência em pacientes com DA. As infecções virais são consistentes com um defeito das células T e 30 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ incluem herpes simplex (local ou generalizado, i.e. eczema herpeticum), molluscum contagiosum, e virus do papiloma humano. As infecções fúngicas superficiais com Trichophyton rubrum e Pityrosporon ovale ocorrem também frequentemente. As infecções bacterianas, especificamente aquelas com S. aureus, são extremamente comuns. A superinfecção resulta em crostas cor de mel, extensa exsudação serosa ou foliculite.

Tipo de feridas

As lesões agudas aparecem como pápulas eritematosas, vesículas e erosões; a doença crónica consiste em pápulas fibróticas e numa pele espessada, liquenifiçada. A descoberta de números crescentes de estafilococos patogénicos está associada frequentemente com a exsudação, crostas, foliculite e adenopatia. A infecção secundária com estafilococos é frequente e o edema local e a adenopatia regional ocorrem vulgarmente durante a dermatite atópica. O impetigo pode ser uma espécie de infecção secundária da dermatite atópica. A histologia da dermatite atópica varia desde dermatite espongiótica aguda a líquen simplex crónico, dependendo da morfologia da lesão de pele submetida a biópsia.

Sitios de bactérias

As paredes das células de Staphylococcus aureus exibem receptores, as denominadas adesinas, para fibronectina e fibrinogénio epidérmicos e dérmicos. Foi demonstrado que a ligação de Staphylococcus aureus era mediada por fibrinogénio e por fibronectina em pacientes com DA. Como a pele dos pacientes com DA não tem um stratum corneum intacto, a fibronectina dérmica pode estar descoberta e aumenta a aderência do Staphylococcus aureus. Foram traçadas estruturas fibrilares e amorfas entre células de Staphylococcus aureus e corneócitos e podem resultar num biofilme bacteriano. Observou-se que o Staphylococcus aureus penetra nos espaços intracelulares sugerindo que os lípidos da superfície da pele estão deteriorados em pacientes com DA (ver Breuer K et al., 2002, British Journal of Dermatology 147: 55-61) . 31 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ Úlceras

As úlceras da pele, tais como as úlceras do pé diabético, úlceras de pressão e úlceras venosas crónicas, são feridas ou lesões abertas da pele, caracterizadas pela perda de tecidos e por vezes acompanhadas pela formação de pús. As úlceras da pele podem ter causas diferentes e afectam populações diferentes, mas tendem todas a sarar muito lentamente, quando saram, e podem ser muito dificeis e dispendiosas de tratar.

Tipo de bactérias

As úlceras de pressão superficiais não estão associadas a grandes problemas de infecção. Os microrganismos aeróbicos contaminarão as úlceras de pressão a niveis baixos, mas não impedirão que aquelas sarem com o tempo. No entanto, as úlceras de pressão profundas, de espessura total, podem ficar infectadas secundariamente e pode ocorrer osteomielite. Essas úlceras de pressão com tecido necrótico contêm niveis elevados de microrganismos aeróbicos e anaeróbicos em comparação com as úlceras não necróticas; o cheiro fétido está usualmente presente quando há invasão anaeróbica dos tecidos. Assim, uma estratégia de tratamento consiste em remover o tecido necrótico da ferida, produzindo uma diminuição dos anaeróbios presentes.

As infecções das úlceras de pressão são tipicamente polimicrobianas e podem conter Streptococcus pyogenes, enterococos, estreptococos anaeróbicos, Enterobacteriaece, Pseudomonas aeruginosa, Bacteroides fragilis e Staphylococcus aureus.

Tipo de feridas Úlcera de pressão de grau I: Eritema não branqueável em pele intacta, considerado como lesão precursora de ulceração da pele. Úlcera de pressão de grau II: Perda parcial de espessura da pele envolvendo a epiderme e/ou a derme. A úlcera é superficial e apresenta-se clinicamente como uma abrasão, 32 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ bolha ou cratera superficial. Como a epiderme pode estar interrompida por uma abrasão, bolha ou cratera superficial, a úlcera deve ser avaliada em relação a sinais de infecções secundárias.

Grau III: Perda total da espessura da pele que envolve dano ou necrose do tecido subcutâneo que se pode estender até, mas não através, da fáscia subjacente. A úlcera apresenta-se clinicamente como uma cratera funda com ou sem afectação do tecido adjacente.

Grau IV: Perda total da espessura da pele com destruição extensa, necrose de tecidos ou danos de músculos, ossos ou estruturas de suporte, tais como tendões ou cápsulas articulares. Sítios de bactérias

Existem três estados microbiológicos que são possíveis numa ferida: contaminação, colonização e infecção. A contaminação é caracterizada como a simples presença de microrganismos na ferida mas sem proliferação. É geralmente aceite que todas as feridas, independentemente da sua etiologia, estão contaminadas. A colonização é caracterizada como a presença e proliferação de microrganismos na ferida mas sem reacção do hospedeiro. A colonização é uma condição comum em feridas crónicas tais como as úlceras venosas e não atrasa necessariamente o processo de cura. Quando as bactérias invadem tecidos saudáveis e continuam a proliferar numa extensão tal que a sua presença e sub-produtos reduzem ou aniquilam a resposta imune do hospedeiro, este estado microbiano é conhecido como infecção. Os sinais clássicos de infecção incluem vermelhidão local, dor e inchaço, febre e alterações na quantidade e carácter dos exsudados da ferida.

Infecções dos pulmões

Os medicamentos da invenção são também adequados para o tratamento de um paciente que tenha uma doença infecciosa do pulmão. A infecção dos pulmões pode ocorrer com uma variedade de géneros e espécies bacterianas, que incluem Mycobacterium tuberculosis (tuberculose), Pseudomonas (principal causa de 33 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ morte dos pacientes com fibrose cística), Streptococcus, Staphylococcus pneumoniae, Klebsiella, Toxoplasma, etc. A infecção pulmonar pode também ocorrer com uma variedade de estirpes de vírus e patogéneos oportunistas (fungos, parasitas). Como os patogéneos do pulmão estão cada vez mais resistentes às terapias com antibióticos clássicos, a terapia fotodinâmica oferece um método alternativo para eliminação destes organismos prejudiciais.

Os medicamentos da invenção podem ser administrados ao pulmão de diversas maneiras. Por exemplo, o composto pode ser administrado pelo tracto respiratório (i.e. por via intratraqueal, intrabrônquica, ou intra-alveolar) ou através da parede corporal do peito.

Outras indicações

Os compostos da invenção são também adequados para o tratamento curativo e/ou profiláctico das seguintes:

Infecções sistémicas, bacteriemia (infecção do sangue), periodontite e outras infecções dentárias, tratamento do decaimento dentário e contra a placa bacteriana, infecções do tracto urinário, infecções vaginais, tratamento de todas as doenças de microorganismos incluindo priões, infecções virais, infecções por leveduras, infecções da garganta, úlceras do estômago (causadas por Heliobacter pylori), infecções de sítios de queimaduras e de enxertos de pele, otites (infecções nos ouvidos), conjuntivite bacteriana e outras infecções oculares, periodontite e outras infecções dentárias e ossos infectados expostos durante procedimentos cirúrgicos, e ataques de bioterrorismo.

Aplicações veterinárias adequadas incluem o tratamento curativo e/ou profiláctico da febre aftosa, BSE e infestações de parasitas em animais.

Assim, outros aspectos da invenção proporcionam o seguinte: (i) Utilização de um composto tal como anteriormente descrito na preparação de um medicamento para o 34 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ tratamento curativo e/ou profiláctico de uma infecção dermatológica; (ii) Utilização de um composto tal como anteriormente descrito na preparação de um medicamento para o tratamento curativo e/ou profiláctico de uma infecção dos pulmões; e (iii) Utilização de um composto tal como anteriormente descrito na preparação de um medicamento para o tratamento curativo e/ou profiláctico de uma infecção numa ferida e/ou uma úlcera.

Em utilizações in vivo, o medicamento preparado de acordo com o primeiro e segundo aspectos da invenção é preferivelmente exposto aos microorganismos alvo (ou superficie/área a ser tratada) durante pelo menos cinco minutos. Por exemplo, o tempo de exposição pode ser de pelo menos 10 minutos, 20 minutos, 30 minutos, 40 minutos, 50 minutos, 1 hora, 2 horas, 3 horas, 5 horas, 12 horas e 24 horas.

Serão agora descritas concretizações preferidas não limitativas da invenção a titulo de exemplo, com referência aos desenhos acompanhantes, nos quais: A Figura 1 mostra um diagrama esquemático da estrutura da pele. A Figura 2 mostra a toxicidade de células de fibroblastos dérmicos humanos normais após incubação de 5 minutos, 1 hora e 4 horas com o Composto 10. As células NHDF foram incubadas com diferentes concentrações do Composto 10 para 5 min, lhe 4 h (0 μΜ, 0,01 μΜ, 0,1 μΜ, 1,0 μΜ, 10 μΜ). As células foram depois incubadas durante 24 h no escuro. A toxicidade foi avaliada pelo ensaio MTT padrão. A viabilidade das células foi normalizada para um, o que significa que os valores das células de controlo foram normalizadas para um. Linha tracejada a cinzento: 5 min de incubação; linha tracejada a negro: 1 h de incubação; linha a negro: 4 h de incubação; (n=3, média ± DP) . A Figura 3 mostra a toxicidade celular de queratinócitos de epiderme humana normais após 5 minutos, 1 hora e 4 horas de incubação com o Composto 10. As células NHEK foram incubadas 35 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ com diferentes concentrações de Composto 10 durante 5 min, 1 h e 4 h (0 μΜ, 0,01 μΜ, 0,1 μΜ, 1,0 μΜ, 10 μΜ). As células foram depois incubadas durante 24 h no escuro. A toxicidade foi avaliada pelo ensaio MTT padrão. A viabilidade das células foi normalizada a um, o que significa que os valores das células de controlo foram normalizados para um. Linha tracejada a vermelho: 5 min de incubação; linha tracejada a negro: 1 h de incubação; linha tracejada a azul: 4 h de incubação apenas; (n=3, média ± DP). A Figura 4 mostra a estabilidade química do Composto 10 formulado (A) como um sólido, (B) em água e (C) em PBS. A Figura 5 mostra um gráfico 3D da estabilidade (medida por HPLC) do Composto 10 após 21 dias em tampão PBS. A Figura 6 mostra a estabilidade ao longo de 8 semanas de várias formulações de (A) Composto 1, (B) Composto 8, (C)

Composto 12 e (D) Composto 10. A Figura 7 mostra a estabilidade prolongada ao longo de 17 semanas de várias formulações de (A) Composto 10 e (B)

Composto 8.

EXEMPLOS

EXEMPLO A: SÍNTESE DE COMPOSTOS EXEMPLARES Materiais e Métodos Medições de RMN

Os espectros de RMN do protão foram registados num instrumento Broker B-ACS60 (300 MHz) utilizando TMS como padrão interno. Os desvios químicos são apresentados em ppm e as constantes de acoplamento em Hz no solvente indicado. Algumas abreviaturas para RMN: singleto (s) , singleto largo (s largo), dubleto (d), tripleto (t), quarteto (q), quinteto (quint), multipleto (m). 36 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Produtos químicos

Todos os solventes e reagentes foram adquiridos a Aldrich, Fluka, Merck e Lancaster e utilizados sem mais purificação. O dipirrolmetano foi preparado como descrito por C. Bríicker et al., J. Porphyrins Phthalocyanines, 2 455 (1998).

Cromatografia A cromatografia em coluna foi realizada utilizando sílica gel (Merck Silicagel 60, Fluka 60, 0,040-0,063 mm) e

Sephadex LH-20 (Pharmacia). Todos os solventes (Synopharm) para cromatografia eram de grau técnico puro.

Abreviaturas DDQ: 2,3-dicloro-5,6-diciano-p-benzoquinona DMF: 17,17-dimetilformamida TFA: ácido trifluoroacético

Vias de síntese para os compostos de teste

Os compostos de teste que se seguem foram sintetizados:

Compostos exemplares para uso na invenção

Compostos 6, 8 a 10, 12, 23, 25, 28, 31 e 32.

Compostos de referência (para utilização como controlos comparativos)

Compostos 1, 3, 16, 19, 26, 29, 33, 36, 37, 39, 41 e 46 a 51.

Intermediários químicos

Compostos 2, 4, 5, 7, 11, 13 a 15, 17, 18, 20 a 22, 24, 27, 30, 34, 35, 38, 40 e 42 a 45. 37 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ COMPOSTO 1

Tetracloreto de 5,10,15,20-tetraquis-[4-(3-trimetilamónio-propiloxi)fenil]porfirina

A uma suspensão agitada vigorosamente de 5,10,15,20-tetraquis- (4-hidroxifenil) porf irina (50 mg, 0,07 mmol) e K2CO3 (230 mg, 1,7 mmol) em DMF (20 mL) , adiciona-se gota a gota uma solução de brometo de (1-bromopropil)trimetilamónio (0,27 g, 1,05 mmol) em DMF (5 mL) a 50°C durante 30 minutos. A mistura é agitada a 50°C durante 15 h. Após remoção da DMF sob pressão reduzida, o residuo obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e filtrado através de uma almofada de silica gel (profundidade 2 cm) suportada sobre uma frita de aço (diâmetro 3,5 cm). Após lavagem com metanol (1 L), a almofada é eluida com ácido acético. Após evaporação do solvente do eluato, o residuo obtido é purificado por cromatografia sobre uma coluna (2,5x40 cm) de Sephadex LH20 eluindo com n-butanol:água:ácido acético (4:5:1, em vol., fase superior). O material recuperado é dissolvido no volume minimo de metanol e a solução é passada através de uma coluna curta (3,5x20 cm) de resina de permuta aniónica (Amberlite IRA 400, forma de cloreto) . O sal tetracloreto recuperado é seco sob alto vácuo e obtido na forma de um sólido violeta). 38

ΕΡ 1 768 666/PT COMPOSTO 2 5,10,15-tris-(4-Hidroxifenil)-20-(4-undeciloxifenil)porfirina

A uma suspensão agitada vigorosamente de 5,10,15,20-tetraquis-(4-hidroxifenil)porfirina (400 mg, 0,59 mmol) e K2C03 (1,0 g, 7,1 mmol) em DMF (75 mL) , adiciona-se gota a gota uma solução de 1-bromoundecano (0,1 mL, 0,45 mmol) em DMF (10 mL) a 50°C durante 30 minutos e a mistura é agitada à mesma temperatura durante 1,5 h. Após remoção por filtração do K2CO3 e remoção sob pressão reduzida da DMF, o residuo obtido é dissolvido em diclorometano (200 mL) , lavado com água (3x150 mL) e a solução é seca (Na2S04) . O solvente é evaporado sob pressão reduzida e o residuo obtido é dissolvido em tolueno: etanol (5:1 em vol., ca. 10 mL) e purificado por cromatografia utilizando uma coluna (5x50 cm) de silica gel (Merck 60) . A coluna é eluída com tolueno seguido por tolueno:acetato de etilo (2:1 em vol.) e o material desejado recuperado por evaporação do solvente a partir das fracções apropriadas é seco sob alto vácuo. O produto é obtido como um sólido violeta. 39 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ COMPOSTO 3

Tricloreto de 5,10,15-tris-[4-(3-trimetilamóniopropiloxi)-fenil]-20-(4-undeciloxifenil)porfirina

A uma suspensão agitada vigorosamente de Composto 2 (100 mg, 0,12 mmol) e K2CO3 (230 mg, 1,7 mmol) em DMF (30 mL) , é adicionada uma solução de (1-bromopropil)trimetilamónio (0,3 g, 16,6 mmol) em DMF (10 mL) a 50°C e a mistura é agitada a esta temperatura durante 12 h. Após remoção da DMF sob pressão reduzida, o residuo obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e filtrado através de uma almofada de silica gel (profundidade 2 cm) suportada sobre uma frita de aço (diâmetro 3,5 cm). Após lavagem com metanol (ca. 1L), a almofada é eluida com ácido acético:metanol:água (3:2:1, em vol.) . Após evaporação do solvente a partir do eluato sob pressão reduzida, o residuo obtido é purificado por cromatografia sobre uma coluna (2,5x40 cm) de Sephadex LH-20 eluindo com n-butanol:água:ácido acético (5:4:1, em vol., fase superior). Após remoção do solvente das fracções apropriadas do eluato sob pressão reduzida, o residuo obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e a solução é passada através de uma coluna curta (3,5x20 cm) de resina de permuta iónica (Amberlite IRA 400, forma de cloreto). O produto final é obtido como o sal tricloreto, após remoção do solvente e secagem sob alto vácuo, como um sólido violeta. XH-RMN: õH (300 MHz, CD3OD) : 0,80 (t, 3J 7,5 Hz, 3 H) , 1,15-1,45 (m, 16 H) , 1,50-1, 60 (s largo, 2 H) , 2,25-2,45 (s largo, 6 H) , 3,25-3,35 (s largo, 27 H), 3,75-3,85 (s largo, 6 H), 4,18 (t, 3J 7,5 Hz, 2 H), 4,40-4,45 (s largo, 6 H) , 7,20-7,40, 7, 95- 8,15 (2xm, 16 H) , 8, 60-9, 00 (s largo, 8 H) . 40 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ COMPOSTO 4 5-(3,5-Dimetoxifenil)-15-undecilporfirina

A uma solução agitada of dipirrolemetano (0,62 g, 4,2 mmol) em diclorometano (5 mL) é adicionado 3,5-dimetoxi-benzaldeído (0,35 g, 2,1 mmol) e dodecanal (0,464 g, 2,52 mmol) em diclorometano desgaseifiçado (1L) . Adiciona-se TFA (0,07 mL, 3,0 mmol) gota a gota. A solução é agitada à temperatura ambiente no escuro durante 17 h sob árgon. Após adição de DDQ (2,7 g, 12 mmol), a mistura é agitada à temperatura ambiente durante mais uma hora. A purificação do material recuperado após remoção do solvente sob pressão reduzida por cromatografia sobre uma coluna (400 g) de silica gel (Merck 60) com tolueno para eluição origina o produto como um sólido violeta. 1H-RMN: ÕH (300 Mz, CDC13) : 0,80 (t, 3J7,5 Hz, 3 H) , 1,10-1,25 (m, 12 H), 1,40 (m, 2H), 1,75 (quint, 3J 7,5 Hz, 2 H), 2,45 (quint, 3J 7,5 Hz, 2 H) , 3,90 (s, 6H) , 4,90 (t, 3J 7,5 Hz, 2 H) , 6,80 (m, 1H) , 7,35 (m, 2 H) , 9, 00, 9,25, 9, 30, 9, 50 (4><d, 3J 4,7

Hz, 4x2 H), 10,15 (s, 2H). COMPOSTO 5 5-(15-Undecilporfirina-5-il)benzeno-1,3-diol

A uma solução de Composto 4 (80 mg, 0,133 mmol) em diclorometano anidro (80 mL) sob uma atmosfera de árgon, adiciona-se BBr3 (5 mL, 1M em diclorometano) gota a gota a -70°C e a mistura é agitada durante lha esta temperatura e 41 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ em seguida é aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante a noite. A mistura é arrefecida para -10°C e hidrolisada pela adição de água (2 mL) e agitação durante 1 h. Adiciona-se NaHCCt (3 g) directamente durante a neutralização. A mistura é agitada durante mais 12 h e após filtração do NaHC03 e remoção do diclorometano sob vácuo, o residuo obtido é purificado por cromatografia em coluna utilizando silica gel eluindo com diclorometano. Após evaporação do solvente a partir das fracções combinadas apropriadas e secagem do residuo obtido sob alto vácuo o produto é obtido como um sólido violeta. 1H-RMN: δΗ (300 Mz, d6-acetona): 0,75 (t, 3J 7,5 Hz, 3 H), 1,05-1,25 (m, 12 H), 1,30-1,40 (m, 2H), 1,45-1,50 (m, 2 H) , 2,40 (quint, 3J 7,5 Hz, 2 H) , 4,90 (t, 3J 7,5 Hz, 2 H) , 6,65 (m, 1 H) , 7,18 (m, 2 H) , 8, 60-8, 65, 9, 00-9, 05, 9, 35-9, 40, 9, 55-9, 60 (4xm, 8 H), 10,25 (s, 2H). COMPOSTO 6

Dicloreto de 5-[3,5-bis-(3-trimetilamóniopropiloxi)fenil]-15-undecilporfirina \ /* \

23 A uma suspensão agitada vigorosamente de Composto 5 (80 mg, 0,14 mmol) e K2CO3 (230 mg, 1,7 mmol) em DMF (30 mL) é adicionado brometo de (1-bromopropil)trimetilamónio (0,3 g, 16,6 mmol) a 50°C. A mistura é agitada a esta temperatura durante 18 h. Após remoção da DMF sob pressão reduzida, o residuo obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e filtrado através de uma almofada de silica gel (profundidade 2 cm) suportada sobre uma frita de aço (diâmetro 3,5 cm) . Após lavagem da almofada com metanol (ca. 1L) o produto bruto é eluido com ácido acético:metanol:água (3:2:1, em vol.). As fracções apropriadas são recolhidas e, após evaporação do solvente sob pressão reduzida, o residuo obtido é purificado 42 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ por cromatograf ia sobre uma coluna (2,5><40 cm) de Sephadex LH-20 eluindo com n-butanol:água:ácido acético (5:4:1, em vol., fase superior). Após remoção do solvente das fracções apropriadas sob pressão reduzida, o resíduo obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e a solução é passada através de uma coluna curta (3,5x20 cm) de resina de permuta aniónica (Amberlite IRA 400, forma de cloreto). Após recolha do eluato, o solvente é removido sob pressão reduzida e o resíduo obtido é seco sob alto vácuo para originar o sal dicloreto como um sólido violeta. 1H-RMN: Õh (300 Mz, CD3OD): 0,75 (t, 1 2 3J 7,5 Hz, 3 H), 1,05-1,20 (m, 14 H) , 1,45-1,50 (m, 2 H) , 2,05-2,15 (m, 4 H) , 2,15-2,20 (m, 2H) , 2,95 (s, 18 H) , 3, 35-3, 45 (m, 4 H) , 3,95 (t, 3J 7,5 Hz, 4 H) , 4,55 (t, 3J 7,5 Hz, 2 H) , 6,85 (m, 1 H) , 7,35 (m, 2 H) , 8,85-8, 90, 9, 15-9,20, (3xm, 8 H) , 10,10 (s, 2 H) . COMPOSTO 7 5,15-bis-[4-(3-Bromopropiloxi)fenil]porfirina

A uma solução agitada de dipirrolemetano (0,61 g, 4,1 mmol) e 4-(3-bromopropiloxi)benzaldeído (1,03 g, 4,2 mmol) em diclorometano desgaseifiçado (1L), adiciona-se TFA (0,07 mL, 1,5 mmol) gota a gota. A solução é agitada à temperatura ambiente no escuro sob árgon durante 17 h. Após adição de DDQ (2,76 g, 0,012 mol), a mistura é agitada à temperatura ambiente durante mais uma hora. A filtração através de sílica gel (Fluka 60, 100 g) utilizando diclorometano para eluição dá o produto bruto que, após tratamento com dicloro-metano:n-hexano, gera o produto puro como um sólido violeta. 1 H-RMN: 2 δΗ (300 Mz, CeDõ) : -3,15 (2 H, s) , 2,00 (quint, 3J 7,5 Hz, 4 H) , 3 3,30 (t, 3J 7,5 Hz, 4 H) , 3,90 (t, 3J 7,5 Hz, 4 H) , 7,15-7,18, 7,95-8,15 (2xm, 2x4 H) , 9,15-9,20, (m, 8 H) , 10,05 (s, 2H) . 43 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ COMPOSTO 8

Dicloreto de 5,15-bis-(4-{3-[(3-dimetilaminopropil)- dimetilamónio]propiloxi}fenil)porfirina /

O Composto 7 (200 mg, 0,27 mmol) é dissolvido em DMF absoluta (40 mL) com N,N,Ν',Ν'-tetrametil-1,3-propanodiamina (5 mL, 13,9 mmol) e a solução é agitada a 50°C sob árgon durante a noite. Após evaporação do solvente sob pressão reduzida, o residuo obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e a solução é filtrada através de uma almofada de silica gel (profundidade 2 cm) suportada sobre uma frita de aço (diâmetro 3,5 cm). A almofada é eluida com metanol (ca. 1L) seguido por ácido acético:metanol:água (3:2:1, em vol.). Após evaporação do solvente das fracções apropriadas, o produto bruto obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e purificado adicionalmente por cromatografia sobre uma coluna (2,5x40 cm) de Sephadex LH-20 utilizando n-butanol:água:ácido acético (4:5:1, em vol., fase superior) como fase de desenvolvimento. A primeira fracção eluida é o produto desejado. Após remoção do solvente sob pressão reduzida o residuo obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e passado através de uma coluna curta (3,5x20 cm) de resina de permuta de aniões (Amberlite IRA 400, forma de cloreto) . Após remoção do solvente sob pressão reduzida do eluato, o residuo é tratado com éter dietilico e seco sob alto vácuo para dar o produto como um sólido violeta. 44 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ COMPOSTO 9

Dicloreto de 5,15-bis-[4-(3-trietilamóniopropiloxi)fenil]-porfirina

A uma solução de Composto 7 (50 mg, 0,068 mmol) em DMF absoluta (20 mL) adiciona-se trietilamina (4,7 mL, 0,034 mol, 500 eq.). A mistura é agitada a 60°C durante 24 h. O solvente é removido sob pressão reduzida e o residuo obtido dissolvido em metanol (5 mL) e filtrado através de uma almofada de silica gel (profundidade 2 cm) suportada sobre uma frita de aço (diâmetro 3,5 cm). Após lavagem com metanol (ca. 1L) a almofada é eluida com ácido acéticormetanol:água (3:2:1, em vol.). Após evaporação do solvente a partir da fracção eluida o produto obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e purificado por cromatografia sobre uma coluna (2,5x40 cm) de Sephadex LH-20 eluindo com n-butanol:água:ácido acético (4:5:1, em vol., fase superior). Os solventes são removidos sob pressão reduzida a partir das fracções apropriadas, o residuo obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e a solução é passada através de uma coluna curta (3,5x20 cm) de resina de permuta aniónica (Amberlite IRA 400, forma de cloreto) para originar o produto como um sólido violeta após evaporação do solvente. 45 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ COMPOSTO 10

Dicloreto de 5,15-bis-[4-(3-trimetilamóniopropiloxi)fenil]-porfirina

Uma solução de Composto 7 (300 mg, 0,41 mmol) em DMF absoluta (50 mL) é transferida para uma autoclave de 100 mL. Após adição de trimetilamina (4,5 g) , a mistura é agitada a 50 °C durante 16 h. Após evaporação do solvente, o resíduo obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e a solução é filtrada através de uma almofada de sílica gel (profundidade 2 cm) suportada sobre uma frita de aço (diâmetro 3,5 cm). Após lavagem com metanol (ca. 1L) a almofada é eluída com ácido acético:metanol:água (3:2:1, em vol.). Após evaporação do solvente a partir das fracções apropriadas, o resíduo obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e purificado por cromatografia sobre uma coluna (2,5x40 cm) de Sephadex LH-20, eluindo com n-butanol:água:ácido acético (4:5:1, em vol., fase superior). Obtêm-se duas fracções, a primeira das quais a eluir é o produto desejado. O solvente é removido sob pressão reduzida e o resíduo obtido é redissolvido em metanol (5 mL) e a solução é passada através de uma coluna curta (3,5x20 cm) de resina de permuta aniónica (Amberlite IRA 400, forma de cloreto). Após evaporação do solvente sob pressão reduzida, o resíduo é tratado com metanol:éter dietílico e seco sob alto vácuo para dar o produto como um sólido violeta. 46 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ suspenso em DMF (30 mL) e à mistura vigorosamente agitada junta-se uma solução de brometo de (1-bromopropil)-trimetilamónio (350 mg, 1,3 mMol) em DMF (5 mL) , gota a gota a 50°C durante 30 mins. A mistura é aquecida durante 15 h. Remove-se a DMF por evaporação rotativa e o residuo obtido é dissolvido em metanol e a solução é filtrada através de uma almofada de silica gel (profundidade 2 cm) suportada numa frita de aço (diâmetro 3,5 cm). Após lavagem com metanol (ca. 1L) a almofada é eluida com ácido acético:metanol:água (3:2:1, em vol.). Após evaporação do solvente de fracções apropriadas, o residuo obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e purificado por cromatografia numa coluna (2,5x40 cm) Sephadex LH-20, eluindo com n-butanol:água:ácido acético (4:5:1, em vol., fase superior). São obtidas duas fracções, das quais a primeira a eluir é o produto desejado. O solvente é removido sob pressão reduzida e o residuo obtido é redissolvido em metanol (5 mL) e a solução é passada através de uma coluna curta (3,5x20 cm) de resina de permuta aniónica (Amberlite IRA 400, forma de cloreto). Após evaporação do solvente sob pressão reduzida, o residuo é tratado com metanol:éter dietilico e seco sob vácuo elevado para proporcionar o produto como um sólido violeta. COMPOSTO 11 5,15-bis-[3-(3-Bromopropiloxi)fenil]porfirina

A uma solução agitada de dipirrolemetano (1,22 g, 8,2 mmol) e 3-(3-bromopropiloxi)benzaldeido (2,06 g, 8,2 mmol) em diclorometano desgaseifiçado (2 L) , adiciona-se TFA (0,14 mL, 3 mmol) gota a gota. A solução é agitada a temperatura ambiente no escuro durante 17 h sob árgon. Após adição de DDQ (5,4 g, 0,024 mol), a mistura é agitada à temperatura ambiente durante mais lh. Após remoção dos solventes sob pressão reduzida, o residuo obtido é dissolvido em diclorometano (5 mL) e passado através de uma coluna (300 g) de silica (Fluka 47 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 60) utilizando diclorometano como eluente para dar o produto bruto que é tratado com diclorometano: metanol para dar o material puro como um sólido violeta. 1H-RMN: δΗ (300 Mz, CDC13) : -3,20 (2 H, s) , 2,40 (quint, 3J7,5 Hz, 4 H) , 3,65 (t, 3J 7,5 Hz, 4H) , 4,25 (t, 3J 7,5 Hz, 4 H) , 7,20-

7,25, 7, 60-7, 65, 7,75-7, 80 (3*m, 8 H) , 9, 05, 9, 25, (2*d, 3J 4,2 Hz, 8 H), 10,25 (s, 2 H). COMPOSTO 12

Dicloreto de 5,15-bis-[3-(3-trimetilamóniopropiloxi)- feniljporfirina

Uma solução de Composto 11 (400 mq, 0,543 mmol) em DMF (50 mL) é transferida para uma autoclave de 100 mL. Após adição de trimetilamina (6,3 g), a mistura é agitada a 50°C durante 8 h. Após evaporação do solvente sob pressão reduzida, o residuo obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e a solução é filtrada através de uma almofada de silica gel (profundidade 2 cm) suportada sobre uma frita de aço (diâmetro 3,5 cm). Após lavagem da almofada com metanol (ca. 1L), a eluição com ácido acético:metanol:água (3:2:1, em vol.) origina fracções que, após evaporação do solvente sob pressão reduzida, dão um residuo sólido. Este é dissolvido em metanol (5 mL) e purificado por cromatografia sobre uma coluna (2,5x40 cm) de Sephadex LH-20 eluindo com n-butanol:água:ácido acético (4:5:1, em vol., fase superior). São eluidas duas fracções da coluna, a primeira das quais é o produto desejado. Após remoção do solvente sob pressão reduzida, o residuo obtido é dissolvido em metanol (5 mL) . A solução é passada através de uma coluna curta (3,5x20 cm) de resina de permuta aniónica (Amberlite IRA 400, forma de cloreto), o solvente é removido sob pressão reduzida e o produto bruto é tratado com metanol:éter dietilico para dar um sólido violeta que é seco sob alto vácuo. 48 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 1H-RMN: δΗ (300 Μζ, CD3OD) : 2,30-2,35 (m, 4 Η), 3,15 (s, 18 Η), 3,95-4,05 (m, 4 Η), 4,20-4,25 (m, 4 Η), 7,40-7,45, 7,65-7,70, 7,80-7,85 (3xm, 8 Η), 9, 00-9, 05, 9, 40-9, 45, (2><m, 8 Η), 10,40 (m, 2 Η) . COMPOSTO 13 5,15-bis-(4-Hidroxifenil)-10,20-bis-(4-undeciloxifenil)-porfirina

A terceira fracção eluída da coluna durante a separação cromatográfica descrita para a síntese do Composto 2 é caracterizada como 5,15-bis-(4-hidroxifenil)-10,20-bis-(4-undeciloxifenil)porfirina. 1H-RMN: δΗ (300 MHz, CDC13) : -2,88 (2 H, s) , 0,85 (t, 3J 7,5 Hz, 6 H) , 1,20-1,40 (m, 28 H) , 1,55 (br m, 4 H) , 1,80 (quint, 3J 7,5

Hz, 4 H) , 4,15 (t, 3J 7,5 Hz, 4 H) , 6,65, 7,15 (d, 3J 8,1 Hz, 8 H) , 7, 80, 8, 00 (d, 3J8,1 Hz, 8 H) , 8,75-8, 80 (m, 8 H) . A geometria do regioisómero trans é estabelecida por 1H-13C-2D-RMN em ácido d-acético. COMPOSTO 14 5,10-bis-(4-Hidroxifenil)-15,20-bis-(4-undeciloxifenil)-porfirina 49 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

A quarta fracção eluída da coluna durante a separação cromatográfica descrita para a síntese do Composto 2 é caracterizada como 5,10-bis-(4-hidroxifenil)-15,20-bis-(4-undeciloxifenil)porfirina. 1H-RMN: ÕH (300 MHz, CDCI3) : -2 , 80 (2 H, s) , 0,90 (t, 3J 7 ,5 Hz, 6 H) , 1, 20-1, 60 (m, 28 H), 1, 65 (quint, 3J 7,5 Hz, 4 H) , 2 , 00 (quint, 3J 7 ,5 Hz, 4 H) , 4,22 (t, 3J 7,5 Hz, 4 H) , 7 ,15 (d, 3J 8, 1 Hz, 4 H) , 7,25 (d, 3J 8,2 Hz, 4 H) , 8,10 (d, 3J 8,2 Hz , 4 H) , 8,1 5 (d, 3J 8,2 Hz, 4 H), 8,80-8 , 90 (m, 8 H) . A geometria do regiois ómero cis é e stabelecida por 3Η-13ΰ- 2D- RMN em ácido d-acético. COMPOSTO 15 5,10,15-tris-[4-(3-Bromopropiloxi)fenil]-20-(4-undeciloxi-fenil)-porfirina

Sob uma atmosfera de árgon, o Composto 2 (200 mg, 0,24 mmol) é dissolvido em DMF absoluta (40 mL) na presença de K2CO3 (500 mg) e 1,3-dibromopropano (1,02 mL, 10 mmol). A mistura é aquecida durante a noite a 80°C. O processamento é como o procedimento dado para o Composto 2 descrito acima. O produto é purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (Merck 60) eluindo com hexano:acetato de etilo (5:1, em vol.). 50 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 1H-RMN: δΗ (300 ΜΗζ, CDC13) : -2,75 (2 Η, s), 0,85 (t, 3J 7,5 Hz, 3 Η), 1,20-1,45 (m, 14 Η), 1,50 (quint, 3J 7,5 Hz, 2 H) , 1,90 (quint, 3J 7,5 Hz, 2 H) , 2,40 (quint, 3J 7,4 Hz, 6 H) , 3,65 (t, 3J 7,4 Hz, 6 H), 4,16 (t, 3J7,5 Hz, 2 H), 4,25 (t, 3J7,5 Hz, 6 H) , 7,18-7,20 (m, 8 H) , 8, 00-8,05 (m, 8 H) , 8,75-8,85 (m, 8 H) . COMPOSTO 16

Tricloreto de 5,10,15-tris-[4-(3-trietilamóniopropiloxi)-fenil]-20-(4-undeciloxifenil)porfirina

O Composto 15 (200 mg, 0,17 mmol) é dissolvido em DMF absoluta (40 mL) com trietilamina (5 mL, 34,5 mmol, 208 eq.). A mistura é aquecida para 50°C durante 48 h. Após remoção da DMF sob vácuo, o residuo obtido é dissolvido em metanol e purificado por cromatografia em coluna utilizando silica gel (Merck, 60) eluindo com metanol:água:ácido acético (2:1:3, em vol.) e em seguida ácido acético:piridina (1:1, em vol.)· A remoção do solvente a partir das fracções apropriadas sob vácuo origina o produto bruto que é dissolvido em metanol :NaCl aquoso (1M) (5 mL, 1:1, em vol.) . A mistura é agitada durante 30 minutos e filtrada através de uma almofada de silica gel (profundidade 2 cm) suportada sobre uma frita de aço (diâmetro 3,5 cm). Após lavagem da almofada com metanol (200 mL) esta é eluida com metanol:água:ácido acético (2:1:3, em vol.). Após evaporação do solvente das fracções apropriadas combinadas, o residuo obtido é dissolvido em metanol (2 mL) e adiciona-se diclorometano (5 mL) gota a gota. O gel branco precipitado é recolhido por filtração e o solvente é removido sob alto vácuo. 51 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 1H-RMN: δΗ (300 ΜΗζ, CD3OD): 0,90 (t, 3J 7,5 Hz, 3 Η), 1,20-1,45 (m, 43H) , 1,45-1, 65 (s largo, 2 H) , 2,25-2,40 (s largo, 6 H), 3,35-3,45 (s largo, 24 Η), 3,50-3, 60 (s largo, 6 Η) , 4,25 (t, 3J 7,5 Hz, 2 Η), 4,40-4,45 (s largo, 6 Η), 7,25-7,40, 8,10- 8,20 (m, 16 Η), 8,80-9,10 (s largo, 8 H). COMPOSTO 17 5-[4-(3-Hidroxifenil)]-15-(3-undeciloxifenil)porfirina

5,15-bis-(3-Hidroxifenil)porfirina (Wiehe, A., Simonenko, E.J., Senge, M.O. e Roeder, B. Journal of Porphyrins and Phthalocyanines 5, 758-761 (2001)) (86 mg, 0,17 mmol) é dissolvida e K2CO3 (250 mg, 7,1 mmol) é suspenso em DMF (40 mL) . À mistura agitada vigorosamente adiciona-se uma solução de 1-bromoundecano (0,04 mL, 0,17 mmol) em DMF (5 mL) gota a gota a 50°C durante 30 minutos e a mistura é aquecida a essa temperatura durante lh. Após remoção por filtração do K2CO3, a DMF é removida sob alto vácuo. O resíduo obtido é purificado por cromatografia em coluna utilizando sílica gel (Merck 60) eluindo com n-hexano: acetato de etilo (10:1, em vol.) . A 2a fracção é recolhida e seca sob alto vácuo para dar o produto. 1H-RMN: δΗ (300 Mz, CDCI3) : -3,15 (2 H, s) , 0,75 (t, 3J7,5 Hz, 3 Η) , 1,10-1,30 (m, 14 Η) , 1,35 (m, 2 Η) , 1,80 (quint, 3J7,5 Hz, 2 Η) , 4,05 (t, 3J7,5 Hz, 2 Η) , 6, 85-6, 90, 7,20-7,25, 7,35-7,45, 7,50-7, 65, 7,75-7, 80 (5*m, 8 Η) , 8,85, 8, 95, 9, 10, 9,20 (4*d, 3J 4,9 Hz, 4χ2 Η) , 10,15 (s, 2 H) . COMPOSTO 18 5,10,15-tris-(3-Hidroxifenil)-20-(3-dodeciloxifenil)-porfirina

Dissolvem-se 3-hidroxibenzaldeido (1,8 g, 14,8 mmol, 3 eq.) e 3-dodecil-oxibenzaldeido (1,35 g, 4,9 mmol, 1 eqv.) numa mistura de ácido acético (145 mL) e nitrobenzeno (98 mL, 52 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 960 iranol) e aquecidos a 120°C. Adiciona-se pirrole (1,35 mL, 19,6 iranol, 4 eqv.) numa porção e a mistura é agitada a 120°C durante lh. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, os solventes são removidos em vácuo a 50°C. O produto é isolado por cromatografia sobre uma coluna (500 g) de silica utilizando tolueno como eluente. O produto desejado é obtido como a quinta fracção da coluna e é re-cromatografado utilizando uma coluna de silica mais pequena (200 g) eluida com tolueno. O produto é obtido como um sólido violeta, após evaporação do solvente. 1H-RMN: δΗ (300 MHz, CDC13) : 0,64 (t, 3 H, 3J 6,8 Hz), 0,94-1,15 (m, 16 H) , 1,25 (s largo, 2 H) , 1,62 (s largo, 2 H) , 3,90 (s largo, 2 H) , 6, 33-6, 95 (m, 8 H) , 7,08-7, 60 (m, 8 H) , 8,20- 8,47 (m, 4 H), 8,51-8,70 (m, 4 H). COMPOSTO 19 5 —{3 —[bis-(2-Dietilaminoetil)aminopropiloxi]fenil}-15-(3-undeciloxifenil)porfirina

O Composto 17 (50 mg, 0,065 mmol) é dissolvido com N,N,Ν',N'-tetraetildietilenotriamina (1 mL, 39 mmol) em THF (10 mL) e a mistura é agitada à temperatura ambiente durante 4 dias. Após evaporação do solvente, o resíduo é dissolvido em éter dietílico (20 mL) e a solução é lavada com água (5><30 mL) . A fase orgânica é seca (Na2S04) e concentrada sob alto vácuo. A mistura é purificada por cromatografia em coluna (sílica gel, Merck 60) eluindo com n-hexano:acetato de etilo (5:1, em vol.), seguido por n-hexano:acetato de etilo:trietilamina (10:10:1, em vol.). Após recolha das fracções apropriadas e remoção do solvente sob pressão reduzida, o produto puro é obtido por tratamento do resíduo com éter dietílico:metanol. 53 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 1H-RMN: ÕH (300 Mz , CDCI3) : O co 0 (t, 3J 7,5 Hz, 3 H), , 0, 9 (t, 3J 7,5 Hz , 12 H) , 1,20-1,40 (m, 14 H), 1,45 (quint, 3J 7,5 Hz, 2 H) , 1, 80 (quint, 3J 7,5 Hz, 2 H), 1, 95 (quint, 3 J 7,5 Hz, 2 H) , 2, 40-2, 60 (m, 16 H) , 2, 65 (t, 3J 7 ,5 Hz, 2 H) , 4 ,10 (t, . 3J 7, 5 Hz, 2 H) , 4,20 (t, 3 J 7,5 Hi z, 2 H) , 7,30- 7,40, 7,55 -7, . 65, 7, 75-7, 80 (3xm, 8 H) , 9, 10-9, 15, 9,20-9, 25 (2 xm , 2 x : 4 H) , 10,15 (s, 2 Η). COMPOSTO 20 5-[4-(3-Bromopropiloxi)fenil]-15-(4-dodeciloxifenil)-porfirina

A uma solução agitada de dipirrolemetano (0,31 g, 2,1 mmol), 4-(3-bromopropiloxi)benzaldeído (0,27 g, 1,1 mmol) e 4-dodeciloxibenzaldeído (0,32 g, 1,1 mmol) em diclorometano desgaseifiçado (500 mL) é adicionado TFA (0,035 mL, 1,5 mmol) gota a gota. A solução é agitada à temperatura ambiente no escuro durante 17 h sob árgon. Após adição de DDQ (1,38 g, 6 mmol), a mistura é agitada à temperatura ambiente durante mais uma hora. A purificação por cromatografia em coluna utilizando silica gel (Merck 60, 400 g) com tolueno como eluente dá o produto (2a fracção) em conjunto com Composto 7 (3° fracção). 1H-RMN: Õh (300 Mz, CDC13) : -3,15 (2 H, s) , 0,90 (t, 3J 7,5 Hz, 3 H) , 1,20-1,40 (m, 16 H) , 1,55 (quint, 3J 7,5 Hz, 2 H) , 1,90 (quint, 3J 7,5 Hz, 2 H), 2,40 (quint, 3J 7,5Hz, 2H), 3,75 (t, 3J 7,5 Hz, 2 H) , 4,20 (t, 3J 7,5 Hz, 2 H) , 4,35 (t, 3J 7,5 Hz, 2 H) , 7,20-7,30, 8,10-8, 15 (2xm, 8 H) , 9,10-9,15, 9,25-9,30 (2xm, 2χ4 H), 10,20 (s, 2 H) . COMPOSTO 21 5,10,15,2 0-tetraquis-(3-Hidroxifenil)porfirina

Dissolve-se 3-hidroxibenzaldeido (0,910 g, 7,45 mmol) em ácido propiónico (50 mL) e aquece-se a 140°C. Adiciona-se 54 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ pirrole (0,52 mL, 7,45 mmol) numa porção e a mistura é aquecida em refluxo durante 2h. A agitação é continuada durante um período adicional de 12 h à temperatura ambiente. O ácido propiónico é removido in vacuo e o resíduo dissolvido em acetona e purificado por cromatografia sobre uma coluna (250 g) de sílica que é eluída com tolueno contendo uma proporção continuamente crescente de acetato de etilo. O produto é eluído com tolueno:acetato de etilo (6:1 em vol.). O solvente é removido in vacuo para dar o produto como um sólido violeta. 1H-RMN: δΗ (300 MHz, d6-acetona): 7,18 (d, 4H, 3J= 8,25 Hz), 7,49 (t, 4H, 3J= 8,25 Hz), 7,56-7, 62 (m, 8H) , 8,81 (m, 8 H) COMPOSTO 22 5,10,15-tris-[4-(3-Bromopropiloxi)fenil]-20-(4-dodeciloxi- fenil)porfirina

A uma solução agitada de pirrole (0,7 ml, 10 mmol), 4-(3-bromoproiloxi)benzaldeído (1,8 g, 7,5 mmol) e 4-(n-dodeciloxi)benzaldeído (0,725 g, 2,5 mmol) em diclorometano desgaseifiçado (1 L) adiciona-se TFA (0,085 ml, 10 mmol) gota a gota. A solução de reacção é agitada sob árgon à temperatura ambiente no escuro durante 17 h. Após adição de DDQ (6,9 g, 30 mmol), a mistura de reacção é agitada à temperatura ambiente durante mais lh. Os solventes são removidos sob pressão reduzida e o resíduo redissolvido em tolueno. A purificação cromatográfica sobre uma coluna (3,5x30 cm) de sílica gel (Merck 60) utilizando tolueno:n-hexano (1:4 em vol.) como eluente dá o produto bruto que é purificado por tratamento com metanol:diclorometano, dando um sólido violeta. 55 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 1H-RMN: δΗ (300 ΜΗζ, CDC13) : 0,90 (t, 1 2 3J 7,5 Hz, 3 Η), 1,20-1,45 (m, 16 Η), 1,60 (quint, 3J 7,5 Hz, 2 H), 1,90 (quint, 3J 7,5 Hz, 2 H), 2,50 (quint, 3J 7,4 Hz, 6 H), 3,75 (t, 3J 7,4 Hz, 6 H), 4,20 (t, 3J 7,5 Hz, 2 H) , 4,35 (t, 3J 7,5 Hz, 6 H) , 7,25-7,30 (m, 8 H), 8,15-8,30 (m, 8 H) , 8, 80-8,85 (m, 8 H) . COMPOSTO 23

Cloreto de 5-{4-[3-dimetil-(3-dimetilaminopropil)amónio-propiloxi]fenil}-15-(4-dodeciloxifenil)porfirina

O Composto 20 (30 mg, 0,038 mmol) é dissolvido com N,N,Ν',Ν'-tetrametil-1,3-propanodiamina (156 mg, 1,2 mmol) em THF:DMF (1:1 em vol., 20 mL) e agitado a 50°C durante 18 h. Após evaporação do solvente sob pressão reduzida, o resíduo é dissolvido em diclorometano e purificado por cromatografia em coluna (sílica gel Merck 60) eluindo com ácido acéticormetanol:água (3:2:1, em vol.). Após combinação das fracções apropriadas e remoção do solvente sob pressão reduzida, o resíduo é tratado com diclorometano:hexano para dar o produto como um sólido violeta. 1 H-RMN: 2 δΗ (300 Mz, CDC13+1% ácido acético): 0,85 (m, 3 H), 1,20-1,40 (m, 18 H) , 1,55-1, 60 (m, 2 H) , 1, 60-1, 65 (m, 4H) , 2,10-2,20 3 (s largo, 8 H), 3,15-3,25 (m, 8 H), 3,75 (s largo, 2 H), 4,20 (s largo, 2 H) , 4,35 (s largo, 2 H) , 7,15-7,20, 8,10-8,15 (2xm, 8 H) , 8, 95-9, 00, 9, 10-9, 15, 9,25-9, 30 (3xs largo, 8 H) , 10,20 (s, 2H). 56 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ COMPOSTO 24 5,15-bis-(3-Metoxifenil)-10-undecilporfirina

MeO

Para um balão de 50 mL contendo lítio (500 mg, 71 mmol) é adicionado éter dietilico recém-destilado (15 mL) sob uma atmosfera de árgon. A suspensão é submetida a refluxo durante 1 hora, arrefecida para 15°C e tratada com uma solução de brometo de n-undecilo (6,58 g, 71 mmol) em éter (6 mL) adicionada gota a gota via seringa. A mistura é arrefecida para 7-10 °C e, após 5 min, quando a suspensão se torna ligeiramente enevoada e aparecem manchas brilhantes sobre o litio metálico, o remanescente da solução de brometo de n-undecilo é adicionado a uma velocidade uniforme durante um periodo de 30 min enquanto a temperatura interna é mantida abaixo de 10°C. Quando a adição está completa, a mistura é agitada durante mais lh a 10°C. A suspensão é filtrada sob árgon para remover o excesso de litio e o brometo de litio. 5,15-bis-(3-Metoxifenil)porfirina (100 mg, 0,19 mmol) é dissolvida em THF anidro (30 mL) a -50°C sob uma atmosfera de árgon. O reagente de organolitio descrito acima (5 mL) é adicionado gota a gota à mistura. Após 5 min o banho de arrefecimento é removido e a mistura é aquecida até à temperatura ambiente. Após agitação à temperatura ambiente durante 15 min a reacção é neutralizada pela adição lenta de água (2 mL) . Após 15 min a mistura é oxidada pela adição de DDQ (4 mL, 0,4 mmol, 0,1 M em THF) e agitada durante mais 15 min. A mistura é filtrada através de alumina (neutra, grau Brockman +) e purificada por cromatografia em coluna sobre silica gel eluindo com hexano:diclorometano (4:1 em vol.). A primeira fracção é recolhida e tratada com metanol:diclorometano para dar um produto sólido. 57 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 7,5 Ηζ, 2 Η), 2,40 (quint, 3J 7,5 Hz, 2 Η), 3,85 (s, 6Η), 4,95 (t, 3J 7,5 Hz, 2 H) , 7,20-7,23, 7,50-7, 60, 7, 65-7,75 (3xm, 8 H), 8,85-8, 90, 9, 10-9, 15, 9, 35-9, 40 (3*m, 8 H) , 9,95 (s, 1H) . COMPOSTO 25

Tricloreto de 3-[ ({3-[(3-{4-[15-(4-dodeciloxifenil)- porfirina-5-il]fenoxi}propil)dimetilamónio]propil}dimetil-amónio) propil]trimetilamónio

O Composto 23 (20 mg, 0,022 mmol) e brometo de (1-bromopropil)trimetilamónio (26 mg, 0,1 mmol) são dissolvidos em DMF (15 ml) e agitados durante a noite a 50°C. Após evaporação do solvente sob pressão reduzida, o residuo é dissolvido em metanol (5 ml) e aplicado a uma almofada (3 cm de profundidade) de sílica gel que é lavada com metanol (500 ml) seguido por ácido acético:metanol:água (3:2:1 em vol.). Após evaporação do solvente o resíduo é purificado por cromatografia em coluna (sílica gel Merck 60) utilizando primeiro ácido acético:metanol:água (3:2:1 em vol.) e depois piridina:ácido acético (1:1 em vol.). A segunda fracção eluída é recolhida e seca sob vácuo. O resíduo é dissolvido em metanol (2 ml) e purificado por cromatografia sobre uma coluna (2,5*40 cm) de Sephadex LH-20 que é eluída com n-butanol:ácido acético:água (5:1:4 em vol., fase superior). Após remoção do solvente sob pressão reduzida, o resíduo é seco sob vácuo a 80°C. A espectroscopia de RMN indica que o produto está contaminado com uma pequena porção de produtos de eliminação. COMPOSTO 26 5,10,15-tris-[4-(3-Dietilaminopropiloxi)fenil]-20-(4-dodeciloxifenil)porfirina 58 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Ο Composto 22 (50 mg, 0,06 mmol) e dietilamina recém- destilada (5 ml) são dissolvidos em DMF absoluta (30 ml) sob vácuo. A mistura de reacção é agitada à temperatura ambiente durante 20 h e vertida em acetato de etilo (50 ml). A mistura é lavada com água (4x50 ml) e, após secagem das fases orgânicas combinadas (Na2S04) , a evaporação do solvente origina um residuo que é purificado por cromatografia sobre uma coluna (2,5x30 cm) de silica (Merck 60) que é eluida com acetato de etilo:n-hexano:trietilamina (10:10:1, em vol.). As fracções são combinadas como apropriado, o solvente evaporado sob pressão reduzida e o residuo seco sob alto vácuo. O tratamento com diclorometano:n-hexano origina o produto puro. 1H-RMN: δΗ (300 MHz, CDC13) : 0,85 (t, 3J 7,5 Hz, 3 H) , 1,05 (m, 18 H) , 1,20-1,45 (m, 18 H) , 1,55 (quint, 3<J 7,5 Hz, 2 H) , 2,15 (quint, 3J 7,5 Hz, 6 H) , 2,75 (quint, 3<J 7,4 Hz, 6 H) , 3,15-3,25 (m, 12 H) , 4,15 (t, 3J 7,5 Hz, 2 H) , 4,25 (t, 3J 7,5 Hz, 6 H) , 7,15- 7,20 (m, 8 H) , 8,00-8, 05 (m, 8 H) , 7, 95-8, 05 (m, 8 H) . COMPOSTO 27 5,15-bis-(3-Hidroxifenil)-10-undecilporfirina

HO

A uma solução de Composto 24 (95 mg, 0,14 mmol) em diclorometano anidro (80 mL) sob uma atmosfera de árgon é adicionado BBr3, (6 mL, 1M em diclorometano) gota a gota a -70°C e a mistura é agitada durante lh. A mistura é aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante a noite, em seguida arrefecida para -10°C e hidrolisada por adição de 2 59 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ mL de água durante lh. Adiciona-se NaHC03 (3 g) directamente para neutralização. A mistura é agitada durante mais 12 h. Após remoção do NaHC03 por filtração e do diclorometano sob vácuo, o resíduo obtido é purificado por cromatografia em coluna utilizando sílica gel eluindo com diclorometano. Após remoção do solvente a partir das fracções apropriadas combinadas e secagem sob alto vácuo o produto é obtido como um sólido violeta. 1H-RMN: ÕH (300 Mz , CDC13) : -3,05 (s largo , 2 H, s) , 0,85 (t, 3J 7,5 Hz, 3H) , 1 ,20-1,40 (m, 12 H), 1,50 (m, 2 H) , 1,80 (quint, 3J LO [— Hz, 2 H) , 2,55 (quint, 3J 7,5 Hz, 2 H) , 5, 00 (t, 3J 7,5 Hz, 2 H), 7,15-7,25 , 7,50-7,60, 7, 80-7,90 (3x m, 8 H) , 8,95- 9, 00, 9,20-9,25, 9, 50-9, 60 (3><m, 8 H) , 10,15 (s, 1H) . COMPOSTO 28

Dicloreto de 5,15-bis-[3-(3-trimetilamóniopropiloxi)fenil]- 10-undecilporfirina

A uma solução de Composto 27 (50 mg, 0,08 mmol) em DMF (20 mL) sob uma atmosfera de árgon são adicionados K2C03 (100 mg, 0,72 mmol) e brometo de (3-bromopropil)trimetilamónio (300 mg, 1,2 mmol) e a mistura é agitada a 50°C durante 18 h. Após remoção do solvente sob alto vácuo o resíduo obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e filtrado através de uma almofada de sílica gel (profundidade 2 cm) suportada sobre uma frita de aço (diâmetro 3,5 cm). Após lavagem da almofada com metanol (500 mL) esta é eluída com ácido acético:metanol:água (3:2:1, v:v). Após secagem das fracções apropriadas combinadas sob alto vácuo o resíduo é dissolvido em metanol e purificado por cromatografia em coluna sobre Sephadex LH-20 eluindo com n-butanol:ácido acético:água (5:1:4, em vol., fase superior). Após evaporação do solvente 60 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ ο resíduo obtido da primeira fracção eluída é dissolvido em metanol e passado através de uma coluna curta de resina de permuta aniónica (Amberlite IRA 400, forma de cloreto) para dar, após evaporação do solvente, o produto puro. 1H-RMN: ÕH (300 Mz, CD3OD) : 0,85 (t, 3J 7,5 Hz, 3 H) , 1,20-1,40 (m, 12 H) , 1,50 (m, 2 H) , 1,80 (m, 2 H) , 2,40 (s largo, 4 H) , 2,55 (m, 2 H) , 3,20 (s largo, 18 H) , 3,65 (s largo, 4 H) , 4,35 (s largo, 4 H) , 5,10 (m, 2 H) , 7,50-7,55, 7,70-7,85 (2><m, 8 H) , 8, 95-9, 00, 9,25-9,24, 9, 50-9, 70 (3><s largo, 8 H) , 10,15 (s largo, 1H). COMPOSTO 29

Dicloreto de 5,10-bis-[4-(3-trimetilamóniopropiloxi)fenil]-15,20-bis-(4-undeciloxifenil)porfirina

O Composto 14 (50 mg, 0,05 mmol) é dissolvido e K2CO3 (150 mg, 1,1 mmol) é suspenso em DMF (30 mL) . À mistura agitada vigorosamente é adicionada uma solução de brometo de (1-bromopropil) trimetilamónio (0,3 g, 16,6 mmol) em DMF (10 mL) gota a gota a 50°C e a mistura é aquecida durante 18 h. Após remoção da DMF sob alto vácuo, o resíduo obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e filtrado através de uma almofada de sílica gel (profundidade 2 cm) suportada sobre uma frita de aço (diâmetro 3,5 cm) . Após lavagem da almofada com metanol (ca. 500 mL) esta é eluída com ácido acético:metanol: água (3:2:1, em vol.). Após evaporação do solvente das fracções apropriadas combinadas o resíduo obtido é purificado por cromatografia sobre uma coluna (2,5x40 cm) de Sephadex LH-20 eluindo com n-butanol:água:ácido acético (5:4:1, em vol., fase superior) para maior separação do excesso de sal de amónio e de outros produtos secundários. Após remoção do solvente sob pressão reduzida, o resíduo 61 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ obtido é dissolvido em metanol e passado através de uma coluna curta (3,5x20 cm) de resina de permuta aniónica (Amberlite IRA 400, forma de cloreto). Após evaporação do solvente sob pressão reduzida, o produto é seco sob alto vácuo. 1H-RMN: Õh (300 MHz, CD3OD) : 0,80 (t, 1 2 3J 7,5 Hz, 6 H) , 1,15-1,35 (m, 28 H) , 1,35-1,45 (s largo, 4 H) , 1,70-1,80 (s largo, 4 H) , 2,30-2,40 (s largo, 4 H) , 3,15-3,30 (s largo, 18 H) , 3,65-3,75 (s largo, 4 H) , 4,00-4,05 (m, 4 H), 4,30-4,40 (s largo, 4 H), 7,00-7,15, 7,20-7,30, 7,80-95, 7, 95-8,15 (4xm, 4χ4 H) , 8, 60-9, 00 (s largo, 8 H) . COMPOSTO 30 5,10,15-tris-(3-Hidroxifenil)-20-(3-undeciloxifenil)-porfirina

Adiciona-se pirrole (1,31 g, 19,6 mmol) numa só porção a uma mistura de 3-hidroxibenzaldeído (1,8 g, 14,8 mmol) e 3-undeciloxibenzaldeído (1,36 g, 4,9 mmol) em ácido acético (145 mL) e nitrobenzeno (118 g, 960 mmol) préaquecida a 130°C e a mistura é agitada durante 1 hora a 120°C. A mistura é arrefecida e o solvente removido sob alto vácuo. O residuo é dissolvido em diclorometano (5 mL) e purificado por cromatografia em coluna utilizando silica gel (Merck 60) eluindo com hexano:tolueno (4:1, em vol.). O produto é obtido após remoção do solvente do eluato sob pressão reduzida e por secagem do residuo obtido sob vácuo. 1 H-RMN: 2 δΗ (300 Mz, CDCI3) : 0,75-0, 80 (m, 3 H) , 1,05-1,35 (m, 14 H) , 3 1,40-1,50 (m, 2 H) , 1,75-1,85 (m, 2 H) , 3,90-4,10 (m, 2 H) , 6, 90- 7,70 (m, 16 H) , 8,45-8, 80 (m, 8 H) . 62 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ COMPOSTO 31

Dicloreto de 5-{4-[3-dimetil-(3-trimetilamóniopropil)-amóniopropiloxi]fenil}-15-(4-dodeciloxifenil)porfirina

O Composto 23 (50 mg, 0,055 mmol) é dissolvido com iodeto de metilo (5 mL, 80 mmol) em DMF absoluta (30 mL) e a mistura é agitada a 40°C durante 3h. Após evaporação do solvente o residuo obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e filtrado através de uma almofada de silica gel (profundidade 2 cm) suportada sobre uma frita de aço (diâmetro 3,5 cm) . Após lavagem da almofada com metanol (ca. 1 L) esta é eluida com diclorometano:metanol (2:3 em vol., 500 mL) e depois com ácido acético:água:metanol (3:1:2, em vol.). Após remoção do solvente das fracções apropriadas reunidas o residuo obtido é dissolvido em ácido acético e purificado por cromatografia em coluna sobre Sephadex LH-20 eluindo com ácido acético. Após evaporação do solvente das fracções apropriadas reunidas e secagem do residuo obtido sob alto vácuo, o residuo é dissolvido em metanol e passado através de uma pequena coluna (3,5x20 cm) de resina de permuta aniónica (Amberlite IRA 400, forma de cloreto) . Após evaporação do solvente do eluato, o produto é seco sob alto vácuo. COMPOSTO 32

Dicloreto de 5-[4-(3-dimetildecilamóniopropiloxi)fenil]-15-{4-[3-dimetil-(3-dimetilaminopropil)amóniopropiloxi]fenil}-porfirina

Μβ,Ν 63 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ Ο Composto 23 (50 mg, 0,068 mmol) é dissolvido com N,N,Ν',N'-tetrametil-1,3-propanodiamina (354 mg, 1,36 mmol) e N,N-dimetildecilamina (1 g, 2,72 mmol) em DMF:THF (30 mL, 1:1, em vol.) e a mistura é agitada a 50°C durante a noite. Após evaporação do solvente sob pressão reduzida o residuo obtido é dissolvido em metanol (10 mL) e filtrado através de uma almofada de silica gel (profundidade 2 cm) suportada sobre uma frita de aço (diâmetro 3,5 cm) . Após lavagem da almofada com metanol (ca. 500 mL) esta é eluida com ácido acético:metanol:água (3:2:1, em vol.). As duas primeiras fracções eluidas são combinadas e após evaporação do solvente sob pressão reduzida o residuo obtido é dissolvido em metanol e purificado por cromatografia sobre uma coluna (2,5x40 cm) de Sephadex LH-20 eluindo com n-butanol:água:ácido acético (4:5:1, em vol.). Após remoção do solvente sob pressão reduzida da segunda fracção eluida, o residuo é dissolvido em metanol (5 mL) e passado através de uma coluna curta (3,5x20 cm) de resina de permuta aniónica (Amberlite IRA 400, forma de cloreto) . O eluato é evaporado até à secura e o residuo obtido é seco sob alto vácuo para dar o produto. 1H-RMN: δΗ (300 MHz, CD3OD) : 0,80 (m, 3 H) , 1,05-1,25 (m, 10 H) , 1,25-1,40 (s largo, 2 H), 1,80-1,90 (s largo, 4 H), 2,15-2,30 (s largo, 2 H) , 2,80-3, 60 (m, 20 H) , 3, 80-3, 95 (s largo, 4 H), 7,05-7,15, 7,85-8, 00 (2*m, 2χ4 H) , 8,75-8, 90, 9, 20-9, 35 (2xs largo, 2x4H), 10,15 (s largo, 2 H). COMPOSTO 33

Tricloreto de 5,10,15-tris[3-(3-trimetilamóniopropiloxi)-fenil]-20-(3-undeciloxifenil)porfirina

O Composto 30 (100 mg, 0,12 mmol) é dissolvido e K2CO3 (230 mg, 1,7 mmol) é suspenso em DMF (30 mL) . À mistura 64 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ agitada vigorosamente é adicionada uma solução de brometo de (1-bromopropil)trimetilamónio (0,3 g, 16,6 mmol) em DMF (10 mL) gota a gota a 50 °C durante 30 minutos e a mistura é aquecida durante 18 h. Após remoção da DMF sob pressão reduzida, o residuo obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e filtrado através de uma almofada de silica gel (profundidade 2 cm) suportada sobre uma frita de aço (diâmetro 3,5 cm) . Após lavagem da almofada com metanol (ca. 500 mL) esta é eluida com ácido acético:metanol:água (3:2:1, em vol.). Após evaporação do solvente das fracções combinadas apropriadas sob pressão reduzida, o residuo é purificado por cromatografia sobre uma coluna (2,5x40 cm) de Sephadex LH-20 eluindo com n-butanol:água:ácido acético (5:4:1, em vol., fase superior). Após remoção do solvente sob pressão reduzida do eluato, o residuo obtido é dissolvido em metanol e a solução é passada através de uma coluna curta (3,5x20 cm) de resina de permuta aniónica (Amberlite IRA 400, forma de cloreto). A evaporação do solvente do eluato dá o produto que é seco sob alto vácuo. 1H-RMN: δΗ (300 MHz, CD3OD) : 0,75-0,80 (m, 3 H), 1,00-1,40 (m, 18 H), 1,60-1,80 (s largo, 2 H), 2,25-2,40 (s largo, 6 H), 3,29 (s largo, 27 H) , 3, 40-3, 60 (m, 6 H) , 3, 90-4,00 (m, 2 H) , 4,05- 4,25 (m, 6 H), 7,10-7,20, 7,25-7,40, 7,60-7,80, 7,80-7,90 (4xm, 16H), 8,70-9, 00 (s largo, 8 H) . COMPOSTO 34 5,15-bis-(3-Hidroxifenil)porfirina

HO

OH

Este é preparado como descrito por Wiehe, A., Simonenko, E.J., Senge, M.O. e Roeder, B. Journal of Porphirins and Phthalocyanines 5, 758-761 (2001). COMPOSTO 35 5,10,15-tris-(4-Hidroxifenil)-20-(4-tetradeciloxifenil)-porfirina 65 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Dissolve-se 5,10,15,2 0-tetraquis-(4-hidroxifenil)- porfirina (170 mg, 0,25 mmol) e suspende-se K2CO3 (0,65 g, mmol) em DMF (30 mL) . À mistura de reacção agitada vigorosamente adiciona-se uma solução de 1-bromotetradecano (0,1 mL, 0,45 mmol) em DMF (10 mL) gota a gota a 50°C durante 30 minutos e a mistura é aquecida durante 1,5 h. Após evaporação do solvente, o resíduo é dissolvido em tolueno: etanol (1:1 em vol., ca. 5 mL) e purificado por cromatografia utilizando uma coluna (5><25 cm) de sílica gel (Merck 60) que é lavada com tolueno. Após a eluição das primeiras 3 fracções, a eluição é continuada utilizando tolueno:acetato de etilo (2:1 em vol.). O quinto composto eluído é recolhido, o solvente evaporado e o resíduo seco sob alto vácuo para dar o produto como um sólido violeta. 1H-RMN : Õh (300 MHz, d6-acetona) : 0,85 (t, 3J 7,5 Hz, 3 H) , 1,15-1,55 (m, 20 H), 1,45 (quint, 3J 7,5 Hz, 2 H), 1,75 (quint, 3J 7,5 Hz, 2 H) , 4,10 (t, 3J 7,5 Hz, 2 H) , 7,20 (d, 3J 8,5 Hz, 2 H) , 7,25 (d, 3J 8,5 Hz, 6 H) , 8,00-8,15 (m, 8 H) , 8,80-9,10 (m, 8 H) . COMPOSTO 36

Tricloreto de 5,10,15-tris-[4-(3-trimetilamóniopropiloxi)-fenil]-20-(4-tetradeciloxifenil)porfirina 66 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Ο análogo n-tetradeciloxi do Composto 2, preparado similarmente ao descrito acima para o Composto 2 mas utilizando 1-bromotetradecano em vez de 1-bromoundecano, (50 mg, 0,057 mmol) e brometo de (1-bromopropil)trimetilamónio (210 mg, 0,8 mmol) são dissolvidos e K2CO3 (230 mg, 1,7 mmol) é suspenso em DMF (20 mL). A mistura agitada vigorosamente é agitada a esta temperatura durante 18 h. Após remoção da DMF sob pressão reduzida o residuo obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e filtrado através de uma almofada de silica gel (profundidade 2 cm) suportada sobre uma frita de aço (diâmetro 3,5 cm). Após lavagem da almofada com metanol (ca. 500 mL) esta é eluida com ácido acético:metanol:água (3:2:1, em vol.). Após evaporação do solvente das fracções combinadas apropriadamente, o residuo obtido é purificado por cromatografia sobre uma coluna (2,5x40 cm) de Sephadex LH-20 eluindo com n-butanol:água:ácido acético (4:5:1, em vol., fase superior) para separação do excesso de sal de amónio e de outros materiais contaminantes. Após eluição e remoção do solvente a partir das fracções apropriadas, o residuo obtido é dissolvido em metanol (5 mL) e passado através de uma coluna curta (3,5x20 cm) de resina de permuta aniónica (Amberlite IRA 400, forma de cloreto). O solvente é removido sob pressão reduzida e o residuo obtido é seco sob alto vácuo para dar o produto como um sólido violeta. 67 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ COMPOSTO 37 5-(4 —{3 —[2,4,6-tris-(Dimetilaminometil)feniloxi]propiloxi}-fenil)-15-(4-dodeciloxifenil)porfirina

0 Composto 20 (50 mg, 0,063 mmol) é dissolvido em DMF (20 mL) na presença de 2,4,6-tris-(dimetilaminometil)fenol (1 mL, 3,7 mmol) e agitado a 50°C durante a noite. Após evaporação do solvente, o residuo é solidificado por tratamento do residuo com diclorometano:metanol para remover o excesso de amina. Após filtração, as porfirinas são redissolvidas em diclorometano e purificadas por cromatografia sobre uma coluna de silica gel (Merck 60) que é lavada com diclorometano. A evaporação do solvente sob pressão reduzida e o tratamento do residuo com diclorometano:metanol dá o produto como um sólido violeta. 1H-RMN: õe (300 Mz, CDC13) : -3,15 (2 H, s) , 0,85 (t, 3J4,5 Hz, 3 H) , 1,20-1,40 (m, 18 H) , 1,55 (quint, 3J 4,5 Hz, 2 H) , 1,90 (quint, 3J 4,5 Hz, 2 H), 2, 20 (s, 18 H) , 2,55 (t, 3J 5 ,2 Hz, 2 H), 3,45 (s, 6 H), 4,15 (t, 3J 5,5 Hz , 2 H), 4,20 (t, 3J 5,5 Hz, 2 H), 4,35 (t, 3J 7,5 Hz, 2 H) , 6,85 (2xs, 2 H), 7,20-7,30, 8,10-8,15 (2 xm, 8 H) , 9,00-9, 05, 9,25-9, 30 (2 xm, 2x4 H), 10,20 (s, 2 H). COMPOSTO 38 5,10,15-tris-(4-Hidroxifenil)-20-(4-deciloxifenil)porfirina 68 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

5, 10, 15,20-tetraquis-(4-Hidroxifenil)porfirina (100 mg, 0,15 mmol) é dissolvida e K2CO3 (230 mg) é suspenso em DMF (30 mL). À mistura de reacção agitada vigorosamente é adicionada uma solução de 1-bromodecano (0,016 mL, 0,11 mmol) em DMF (10 mL) gota a gota a 70°C durante 30 minutos e a mistura é agitada durante 1,5 h. Após evaporação do solvente, o residuo é dissolvido em tolueno:etanol (1:1 em vol., ca. 3 mL) e purificado por cromatografia sobre uma coluna (150 g) de silica gel (Merck 60) utilizando tolueno como eluente. Após eluição das primeiras 3 fracções, a coluna é eluída com tolueno:acetato de etilo (2:1 em vol.) e a 5a fracção eluída é recolhida, o solvente removido e o resíduo seco sob alto vácuo para dar o produto como um sólido violeta. 1H-RMN: δΗ (300 Mz, d6-acetona): 0,95 (t, 3J 7,5 Hz, 3 H), 1,25-1,55 (m, 12 H) , 1,55 (quint, 3J 7,5 Hz, 2 H), 1,85 (quint, 3J 7,5 Hz, 2 H), 4,15 (t, 3J 7,5 Hz, 2 H), 7,20 (d, 3J 8,5 Hz, 2 H), 7,25 (d, 3J 8,5 Hz, 6 H) , 8,00-8,15 (m, 8 H) , 8,80-9,10 (m, 8 H) . COMPOSTO 39

Tricloreto de 5,10,15-tris-[4-(3-trimetilamóniopropiloxi)-fenil]-20-(4-deciloxifenil)porfirina

69 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ Ο Composto 38 (50 mg, 0,061 mmol) e brometo de (1-bromopropil)trimetilamónio (210 mg, 0,8 mmol) são dissolvidos e K2C03 (230 mg, 1,7 mmol) é suspenso em DMF (20 mL) . A mistura de reacção agitada vigorosamente é aquecida a 50 °C durante 18 h. Após evaporação do solvente, o produto bruto é dissolvido em metanol e purificado por cromatografia sobre uma coluna (2,5x40 cm) de Sephadex, eluindo com n-butanol:água:ácido acético (4:5:1, em vol., fase superior). Após remoção do solvente, o resíduo é dissolvido em metanol e passado através de uma coluna (3,5x20 cm) de Amberlite IRA-400 (forma de cloreto). Após evaporação do solvente, o produto é seco sob alto vácuo e origina um sólido violeta. 1H-RMN: δΗ (300 MHz, CD3OD) : 0,90 (t, 3J7,5 Hz, 3 H) , 1,20-1, 40 (m, 12 H) , 1,45-1, 60 (s largo, 2 H), 1,80-1,90 (s largo, 2 H), 2,45-2,55 (s largo, 6 H) , 3,25-3, 35 (s largo, 27 H) , 3,75-3, 85 (s largo, 6 H) , 4,05-4,25 (m, 2 H) , 4,35-4,40 (s largo, 6 H) , 7,10-7,40, 7, 95-8,15 (2xm, 16 H) , 8, 60-9, 00 (s largo, 8 H) . COMPOSTO 40 5,10,15-tris-(4-Hidroxifenil)-20-(4-trideciloxifenil)- porfirina

5, 10, 15,20-tetraquis-(4-Hidroxifenil)porfirina (400 mg, 0,59 mmol) é dissolvida e K2CO3 (1,0 g, 7,1 mmol) é suspenso em DMF (75 mL) . À mistura de reacção agitada vigorosamente adiciona-se uma solução de 1-bromotridecano, (0,1 mL, 0,45 mmol) em DMF (10 mL) gota a gota a 50°C durante 30 minutos e a mistura é então aquecida durante 1,5 h. A mistura de reacção é arrefecida para a temperatura ambiente e vertida em água (150 mL) . As porfirinas são extraídas com acetato de etilo (100 mL) e o extracto lavado com salmoura (3x50 mL) e seco (Na2S04) . Após evaporação do solvente, o resíduo é 70 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ dissolvido em tolueno:etanol (1:1, em vol., ca. 10 mL) e purificado por cromatografia utilizando uma coluna (200 g) de silica gel (Merck 60) com tolueno como eluente. Após a eluição dos primeiros três compostos, o eluente é trocado para tolueno:acetato de etilo (2:1, em vol.). O quinto composto eluido é recolhido e seco sob alto vácuo para dar o produto como um sólido violeta. 1H-RMN: Õh (300 Mz, d6-acetona): 0,85 (t, 3J 7,5 Hz, 3 H), 1,20-1,60 (m, 18 H), 1,50 (quint, 3J 7,5 Hz, 2 H), 1,80 (quint, 3J 7,5 Hz, 2 H), 4,14 (t, 3J 7,5 Hz, 2 H), 7,20 (d, 3J 8,5 Hz, 2 H), 7,25 (d, 3J 8,5 Hz, 6 H), 8,00-8,15 (m, 8 H) , 8,80-9,10 (m, 8 H) . COMPOSTO 41

Tricloreto de 5-(4-trideciloxifenil)-10,15,20-tris-[4-(3-trimetilamóniopropiloxi)fenil]porfirina

O Composto 40 (50 mg, 0,057 mmol) e brometo de (1-

bromopropil)trimetilamónio (210 mg, 0,8 mmol) são dissolvidos e K2C03 (230 mg, 1,7 mmol) é suspenso em DMF (20 mL) . A mistura de reacção agitada vigorosamente é aquecida a 50°C durante 18 h. Após remoção da DMF, o residuo é dissolvido em metanol (5 mL) e aplicado a uma almofada (2 cm de espessura) de silica gel que é lavada com metanol (ca. 1000 mL) e depois eluida com ácido acético:metanol:água (3:2:1 em vol.). Após evaporação do solvente o residuo é dissolvido em metanol e adicionalmente purificado por cromatografia sobre uma coluna (2,5x40 cm) de Sephadex LH-20 que é eluida com n-butanol:água:ácido acético (4:5:1 em vol., fase superior). Após remoção do solvente, o residuo é dissolvido em metanol e passado através de uma coluna curta (3,5x20 cm) de resina de 71 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ permuta aniónica (Amberlite IRC 400, forma de cloreto). Após evaporação do solvente, o produto é seco sob alto vácuo para dar um sólido violeta. 1H-RMN: Õh (300 MHz, CD3OD) : 0,90 (t, 3J7,5 Hz, 3 H) , 1,20-1,40 (m, 18 H), 1,45-1, 60 (m, 2 H) , 1,80-1, 90 (s largo, 2 H) , 2,40- 2,55 (s largo, 6 H) , 3,25-3, 35 (s largo, 27 H), 3, 75-3, 85 (s largo, 6 H) , 4,05-4,25 (m, 2 H) , 4,35-4,40 (s largo, 6 H) , 7,10-7,40, 7,90-8,15 (2xm, 16 H), 8,60-9,00 (s largo, 8 H). COMPOSTO 42 5,15-bis-(4-Hidroxifenil)porfirina

Este é preparado como descrito por Mehta, Goverdhan; Muthusamy, Sengodagounder; Maiya, Bhaskar G.; Arounaguiri, S., J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1; 2177-2182 (1999). COMPOSTO 43 5,10,15-tris-(4-Hidroxifenil)-20-(4-octiloxifenil)porfirina

5, 10, 15,20-tetraquis-(4-Hidroxifenil)porfirina (200 mg, 0,294 mmol) é dissolvida e carbonato de potássio (487 mg, 3,53 mmol, 12 eqv.) é suspenso sob árgon em DMF absoluta (50 mL) e a mistura é aquecida a 55°C. Uma solução de brometo de octilo (35,8 μΐ, 0,206 mmol, 0,7 eqv.) em DMF absoluta (10 mL) é adicionada gota a gota durante 30 min e a mistura é agitada a 55°C durante 2 h. O solvente é removido in vacuo a 72 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 50°C, adiciona-se água (80 mL) e a mistura é extraída com acetato de etilo (3x40 mL) . A fracção orgânica combinada é seca (Na2S04) e o solvente evaporado. O resíduo é purificado por cromatografia sobre uma coluna (300 g) de sílica gel. Os compostos tetra-alquilados e tri-alquilados são eluídos com tolueno:acetato de etilo (30:1 em vol.). A terceira fracção (composto dissubstituído, isómero trans) é eluída com tolueno:acetato de etilo (15:1 em vol.). A quarta fracção (composto dissubstituído, isómero cis) é eluída com tolueno:acetato de etilo (10:1 em vol.) e o produto desejado (composto mono-alquilado) é eluído com tolueno:acetato de etilo (5:1 em vol.). O solvente é removido sob pressão reduzida e o resíduo seco sob alto vácuo para dar o produto como um sólido violeta. 1H-RMN: Õh (300 MHz, d6-acetona): 0,75 (t, 3H, 3J= 6,8 Hz), 1,13-1,25 (m, 8H) , 1,43 (quint, 2H, 3J= 7,5 Hz), 1,73 (quint, 2 H, 3J= 7,5 Hz), 3,50 (t, 2H, 3J = 8 Hz), 7,11 (d, 2H, 3J= 7,5 Hz), 7,16 (d, 6 H, 3J = 7,5 Hz), 7, 90-7, 94 (m, 8H) , 8,80-8,90 (m, 8 H) . COMPOSTO 44 5-(4-Dodeciloxifenil)-10,15,20-tris-(4-hidroxifenil)-porfirina

5,10,15,20-tetraquis-(4-Hidroxifenil)porfirina (200 mg, 0,294 mmol) é dissolvida e carbonato de potássio (487 mg, 3,53 mmol, 12 eqv.) é suspenso sob árgon em DMF absoluta (50 mL) e a mistura é aquecida para 55°C. Uma solução de brometo de dodecilo (49,4 μΐ, 0,206 mmol, 0,7 eqv.) em DMF absoluta (10 mL) é adicionada gota a gota durante 30 min. A mistura é agitada a 55°C durante 2 h. O solvente é removido em vácuo a 73 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 50°C, adiciona-se água (80 mL) e a mistura é extraída com acetato de etilo (3x40 mL). As fracções orgânicas combinadas são secas (Na2S04) e o solvente evaporado. O produto é isolado por cromatografia sobre uma coluna (300 g) de silica. Os compostos tetra-alquilados e tri-alquilados são eluidos com tolueno:acetato de etilo (30:1 em vol.), o composto dissubstituido (isómero trans) com tolueno:acetato de etilo (15:1 em vol.), o composto dissubstituido (isómero cis) com tolueno:acetato de etilo (10:1 em vol.) e o produto desejado (composto mono-alquilado) com tolueno:acetato de etilo (5:1 em vol) . O solvente é removido em vácuo e o resíduo seco em alto vácuo para dar o produto como um sólido violeta. 1H-RMN: δΗ (300 MHz, d6-acetona) : 0,75 (t, 3H, 3J= 6,8 Hz), 1,13-1,25 (m, 16H), 1,41 (quint, 2H, 3 J= 7,5 Hz), 1,63 (quint, 2 H, 3J= 7,5 Hz), 3,89 (t, 2H, 3J = 6 Hz), 7,11 (d, 2H, 3J = 7,5 Hz), 7,16 (d, 6H, 3J = 7,5 Hz), 7,9-7,94 (m, 8H) , 8, 78-8, 83 (m, 8 H) . COMPOSTO 45 5,10,15-tris-(4-Hidroxifenil)-20-(4-noniloxifenil)porfirina

5, 10, 15,20-tetraquis-(4-Hidroxifenil)porfirina (200 mg, 0,294 mmol) é dissolvida e carbonato de potássio (487 mg, 3,53 mmol, 12 eqv.) é suspenso sob árgon em DMF absoluta (50 mL) e a mistura é aquecida a 55°C. Uma solução de brometo de nonilo (49,4 μΐ, 0,206 mmol, 0,7 eqv.) em DMF absoluta (10 mL) é adicionada gota a gota durante 30 min. A mistura é agitada a 55°C durante 2 h. O solvente é removido em vácuo a 50°C, adiciona-se água (80 mL) e a mistura é extraída com acetato de etilo (3x40 mL). Os extractos orgânicos combinados são secos (Na2S04) e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto é isolado por cromatografia sobre uma 74 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ coluna (300 g) de sílica. Os compostos tetra-alquilados e tri-alquilados são eluídos com tolueno:acetato de etilo (30:1 em vol.), o composto dissubstituído (isómero trans) com tolueno:acetato de etilo (15:1 em vol.), o composto dissubstituído (isómero cis) com tolueno:acetato de etilo (10:1 em vol.) e o produto desejado (composto mono-alquilado) é eluído com tolueno:acetato de etilo (5:1 em vol.). O solvente é removido sob pressão reduzida e o resíduo seco em alto vácuo para dar o produto como um sólido violeta. 1H-RMN: δΗ (300 MHz, d6-acetona) : 0,87 (t, 3H, 3J = 7,5 Hz), 1,14- 1,26 (m, 10H) , 1,41 (quint, 2H) , 1,70 (quint, 2H, 3J = 7,5

Hz), 3,92 (t, 2H, 3J = 7,5 Hz), 7,02 (d, 2H, 3J = 8,25 Hz,), 7,15 (d, 6H, 3J = 7,5 Hz,), 7,85 (d, 2H, 3J= 8,25 Hz), 7,91 (d, 3J = 7,5Hz) , 8,76-8, 84 (m, 8 H) . COMPOSTO 46

Tricloreto de 5-(4-octiloxifenil)-10,15,20-tris-[4-(3-trimetilamóniopropiloxi)fenil]porfirina

O Composto 43 (50 mg, 0,063 mmol) e brometo de (3-bromo-propil)trimetilamónio (164 mg, 0,63 mmol, 10 eqv.) são dissolvidos e carbonato de potássio (130 mg, 0,95 mmol, 15 eqv.) é suspenso sob árgon em DMF absoluta (30 mL) e a mistura é agitada a 55°C durante 12 h. O solvente é removido em vácuo a 50°C e o resíduo aplicado a uma almofada (2 cm de profundidade) de sílica. Os sais de amónio não reagidos são removidos por lavagem com metanol (1000 mL) e o produto é eluído com ácido acético:metanol:água (3:2:1 em vol.). O solvente é removido sob pressão reduzida e o resíduo é purificado adicionalmente por cromatografia sobre uma coluna (100 g) de Sephadex LH-20 utilizando n-butanol:água:ácido 75 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ acético (4:5:1 em vol., fase superior) como eluente. Os solventes são removidos sob pressão reduzida e o resíduo dissolvido em metanol e passado através de uma pequena coluna de resina de permuta aniónica (Amberlite IRA 400, forma de cloreto) utilizando metanol como eluente. Após evaporação do solvente, o produto bruto é dissolvido na quantidade mínima de metanol e adiciona-se éter dietílico (50 mL). A solução é centrifugada durante 15 min. O líquido sobrenadante é evaporado até à secura e o resíduo é seco em alto vácuo para dar o produto como um sólido violeta. 1H-RMN: õe (300 MHz, CD3OD) : 0,90 (t, 3H, 3J= 7,5 Hz), 1,25-1,41 (m, 8H) , 1,45 (s largo, 2H) , 1,87 (s largo, 2H) , 2,38 (s largo, 6H) ; 3,29 (s largo, 27H), 3,67 (t, 6H, 3J= 7,5 Hz), 4,01 (t, 2H, 3J= 7,5 Hz), 4,30 (t, 6H, 3 J= 7,5 Hz), 7,11 (d, 2H, 3 J= 7:5 Hz), 7,38 (d, 6H, 3J= 7,5 Hz), 7,95 (d, 2H, 3J= 7,5 Hz), 8,11 (d, 6H, 3J= 7,5 Hz), 8,93 (s largo, 8H). COMPOSTO 47

Tricloreto de 5-(4-dodeciloxifenil)-10,15,20-tris-[4-(3-trimetilamóniopropiloxi)feniljporfirina

Os solventes são O Composto 44 (50 mg, 0,059 mmol) e brometo de (3-bromopropil)trimetilamónio (154 mg, 0,59 mmol, 10 eqv.) são dissolvidos e carbonato de potássio (122 mg, 0,885 mmol, 15 eqv.) é suspenso sob árgon em DMF absoluta (30 mL) e a mistura é agitada a 55°C durante 12 h. O solvente é removido em vácuo a 50 °C e o resíduo redissolvido num pouco de metanol e aplicado a uma almofada de sílica (2 cm de profundidade). Os sais de amónio não reagidos são removidos por lavagem com metanol (1000 mL) . O produto é eluído com ácido acético:metanol:água (3:2:1 em vol.). 76 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ removidos sob pressão reduzida e o produto bruto é purificado adicionalmente por cromatografia sobre uma coluna (100 g) de Sephadex LH-20 utilizando n-butanol:água:ácido acético (4:5:1 em vol., fase superior) como eluente. Os solventes são removidos sob pressão reduzida, o residuo é redissolvido num pouco de metanol e a solução é passada através de uma coluna curta de resina de permuta aniónica (Amberlite IRC 400, forma de cloreto) utilizando metanol como eluente. Após remoção do solvente o produto bruto é redissolvido na quantidade minima de metanol e adiciona-se éter dietilico (50 mL). A solução é centrifugada durante 15 min. O liquido sobrenadante é evaporado até à secura e o produto seco em alto vácuo para dar um sólido violeta. 1H-RMN: ÕH (300 MHz, CD3OD) : 0,88 (t, 3H, 3J= 7,5 Hz), 1,25-1,37 (m, 16H) (0 OO \—1 largo, 2H), 1,93 (s largo, 2H), 2,42 (s largo, 6H) , 3,28 (s largo, 27H) , 3,68- -3,75 (m, 6H) , 4,05 (t, 2H) , 4,33 (t, 6H), 7,17 (d, 2H, 3J -- = 7,5 Hz) , 7,33 (d, 6H, 3J = 7,5 Hz), 7,99 (d, 2H, 3J = 7,5 Hz), 8, 08 (d, 6H, 3J = 7,5

Hz), 8,85 (s largo, 8H). COMPOSTO 48

Tricloreto de 5-(4-noniloxifenil)-10,15,20-tris-[4-(3-trimetilamóniopropiloxi)fenil]porfirina

O Composto 45 (50 mg, 0,062 mmol) e brometo de (3-bromo-propil)trimetilamónio (162 mg, 0,62 mmol, 10 eqv.) são dissolvidos e carbonato de potássio (128 mg, 0,93 mmol, 15 eqv.) é suspenso sob árgon em DMF absoluta (30 mL) e a mistura é agitada a 55°C durante 12 h. O solvente é removido em vácuo a 50°C e o residuo redissolvido num pouco de metanol e 77 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ aplicado a uma almofada de sílica (2 cm de profundidade) . Os sais de amónio não reagidos são removidos por lavagem com metanol (1000 mL). O produto é eluído com ácido acéticormetanol:água (3:2:1 em vol.)· Os solventes são removidos sob pressão reduzida e o produto é purificado adicionalmente por cromatografia sobre uma coluna (100 g) de Sephadex LH-20 eluindo com n-butanol:água:ácido acético (4:5:1 em vol., fase superior). Os solventes são removidos sob pressão reduzida, o resíduo redissolvido num pouco de metanol e a solução é passada através de uma coluna curta de resina de permuta aniónica (Amberlite IRC 400, forma de cloreto) utilizando metanol como eluente. Após remoção do solvente, o produto é seco em alto vácuo para dar um sólido violeta. 1H-RMN: Õh (300 MHz, CD3OD) 0,89 (t, 3H, 3J = 7,5 Hz), 1,18-1,34 (m, 10H) , 1,41 (s largo, 2H), 1,73 (quint, 2H, 3J= 7,5 Hz), 2,30-2,44 (m, 6H) , 3,31 (s largo, 27H) , 3, 65-3, 73 (m, 6H) , 3,93 (t, 2H, 3J= 7,5 Hz), 4,25-4,42 (m, 6H), 7,08 (d, 2H, 3J= 7,5

Hz), 7,30 (d, 6H, 3J= 7,5 Hz), 7,93 (d, 2H, 3J= 7,5 Hz), 8,05 (d, 6H, 3J= 7,5 Hz), 8,94 (s largo, 8H) COMPOSTO 49

Tricloreto de 5-(4-octiloxifenil)-10,15,20-tris-[4-(5-trimetilamóniopentiloxi)fenil]porfirina

O Composto 43 (23 mg, 0,03 mmol) e brometo de (5-bromo-pentil)trimetilamónio (84 mg, 0,3 mmol, 10 eqv.) são dissolvidos e carbonato de potássio (62 mg, 0,45 mmol, 15 eqv.) é suspenso sob árgon em DMF absoluta (15 mL) e a mistura é agitada a 55°C durante 12 h. O solvente é removido em vácuo a 50°C e o resíduo redissolvido num pouco de metanol e 78 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ aplicado a uma almofada (2 cm de profundidade) de sílica. Os sais de amónio não reagidos são removidos por lavagem com metanol (1000 mL). O produto é eluído com ácido acéticormetanol:água (3:2:1 em vol.). Os solventes são removidos sob pressão reduzida e o produto é purificado adicionalmente por cromatografia sobre uma coluna (100 g) de Sephadex LH-20 utilizando n-butanol:água:ácido acético (4:5:1 em vol., fase superior) como eluente. Os solventes são removidos sob pressão reduzida, o resíduo é redissolvido num pouco de metanol e a solução é passada através de uma coluna curta de resina de permuta aniónica (Amberlite IRC 400, forma de cloreto) com metanol como eluente. O processo de purificação completo é repetido se permanecerem impurezas no produto. Após remoção do solvente, o resíduo é seco em alto vácuo para dar o produto como um sólido violeta. 1H-RMN: Õh (300 MHz, CD3OD) : 0,78 (s largo, 3H), 1,08-1,35 (m, 10H) , 1,45-1,59 (m, 6H), 1, 63-1, 93 (m, 14H), 3,17-3,32 (m, 6H) , 3,31 (s largo, 33H), 3,84 (s largo, 2H), 4,07 (s largo, 6H), 6,93 (s largo, 2H) , 7,09 (d, 2H, 3J= 7,5 Hz), 7,74 (s largo, 2H), 7,88 (d, 2H, 3J= 7,5 Hz), 8,71 (s largo, 8H) COMPOSTO 50

Tricloreto de 5,10,15-tris-[4-(5-trimetilamóniopentiloxi)-fenil]-20-(4-undeciloxifenil)porfirina

O Composto 2 (50 mg, 0,06 mmol) e brometo de (5-bromopentil)trimetilamónio (174 mg, 0,6 mmol, 10 eqv.) são dissolvidos e carbonato de potássio (124 mg, 0,9 mmol, 15 eqv.) é suspenso sob árgon em DMF absoluta (30 mL) e a mistura é agitada a 55°C durante 12 h. O solvente é removido em vácuo a 50°C e o resíduo redissolvido num pouco de metanol 79 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ e aplicado a uma almofada (2 cm de profundidade) de sílica. Os sais de amónio não reagidos são removidos por lavagem com metanol (1000 mL). O produto é eluído com ácido acéticormetanol:água (3:2:1 em vol.)· Os solventes são removidos sob pressão reduzida e o produto é purificado adicionalmente por cromatografia sobre uma coluna (100 g) de Sephadex LH-20 eluindo com n-butanol:água:ácido acético (4:5:1 em vol., fase superior). Os solventes são removidos sob pressão reduzida, o resíduo redissolvido num mínimo de metanol e a solução passada através de uma coluna curta de resina de permuta aniónica (Amberlite IRC 400) com metanol como eluente. O processo de purificação completo é repetido se permanecerem impurezas no produto. Após remoção do solvente, o resíduo é seco sob alto vácuo para dar o produto como um sólido violeta. 1H-RMN: Õh (300 MHz, MeOD) : 0,71-0,88 (m, 13H) , 0,91-1,38 (m, 14H) , 1,48-1,81 (m, 12H) , os sinais para -CH2NCH2 e OCH2-cadeia alquilo longa são parte do multipleto em conjunto com os sinais para o solvente na área 2,8 - 3,3, 3,91 (s largo, 6H), 6,33 (s largo, 2H) , 6,86 (s largo, 6H) , 7,35 (s largo, 2H) , 7,70 (s largo, 6H), 8,65 (s largo, 8H). COMPOSTO 51 5,10,15,20-tetraquis-(3-Dodeciloxifenil)porfirina

Dissolve-se oxibenzaldeído e 3-dodecil-diclorometano pirrole (0,7 mL, 10 mmol) (2,91 g, 10 mmol) em desgaseificado (1000 mL) e adiciona-se TFA (0,77 mL, 10 mmol) gota a gota. A mistura é agitada durante 17 h à temperatura ambiente no escuro. Adiciona-se DDQ (6,81 g, 30 mmol) numa 80 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ porção e a mistura é agitada durante mais 1 h à temperatura ambiente. A mistura é filtrada através de uma coluna (400 g) de silica utilizando diclorometano como eluente seguido por diclorometano ao qual é adicionada trietilamina para ajustar o valor de pH a 8. Este processo de purificação é repetido até ser obtido o produto puro. 1H-RMN: δΗ (300 MHz, d6-acetona): 0,80 (s largo, 12H), 1,03-1,45 (m, 80H), 1,78 (quint, 8H, 3J= 7,5 Hz), 4,05 (t, 8H, 3J= 7,5 Hz), 7,24 (d, 4H, 3J= 7,5 Hz), 7,49-7,55 (m, 4H) , 7,68-7,71 (m, 8H) , 8, 80 (m, 8 H) . EXEMPLO B: ACTIVIDADE ANTI-BACTERIANA INATA DO COMPOSTO 10 -DETERMINAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO INIBIDORA MÍNIMA (MIC) E CONCENTRAÇÃO BACTERICIDA MÍNIMA (MBC) A concentração inibidora minima (MIC) para um agente antimicrobiano contra um microorganismo especifico é definida como a concentração mínima de um agente antibacteriano em que nenhum crescimento visível aparente do organismo é observado (definição FDA de Concentração Inibidora Minima). Os valores de MIC são tipicamente determinados utilizando concentrações derivadas tradicionalmente de diluições seriais duplas (National Committee for Clinicai Laboratory Standards (NCCLS) Handbook M7-A5: "Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bactéria that Grow Aerobically; Approved Standard - 5th Edition", Volume 20, number 2, January 2000) . A MIC para o Composto 10 na ausência de luz foi investigada, utilizando um protocolo baseado no protocolo de MIC produzido pelo NCCLS (National Committee for Clinicai Laboratory Standards (NCCLS), Handbook M7-A5, supra). A concentração bactericida minima (MBC) é definida como a concentração minima de droga necessária para matar a maior parte (99,9%) dos organismos viáveis após incubação durante um período de tempo fixo (geralmente 24 horas) sob um dado conjunto de condições (National Committee for Clinicai Laboratory Standards (NCCLS) Handbook M26-A; "Methods for determining Bactericidal Activity of Antimicrobial Agents; Approved Guidelines", Volume 19, number 18, September 1999). 81 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Metodologia

Foi utilizado neste estudo Staphylococcus aureus BAA-44, uma estirpe de Staphylococcus aureus (MRSA) multi-resistente a drogas e resistente a Meticilina obtida do catálogo ATCC. Foram investigadas as seguintes concentrações de Composto 10: 0,764/ 0,382; 0,191; 0,0955/ 0,0478; 0,0239; 0,0119; 0,00597; 0,00298; 0,00149; 0,00075 & 0,00037 yg/mL. Foram feitas soluções de reserva em água destilada e efectuadas diluições em série para produzir as concentrações requeridas imediatamente antes da utilização.

Foram seleccionadas pelo menos 3 a 5 colónias de poços isolados do mesmo tipo morfológico de uma cultura em placas de ágar e o crescimento foi transferido para um tubo contendo 100 mL de caldo Isosensitest e o caldo de cultura incubado a 37 °C durante a noite. A cultura foi depois diluida para uma densidade final de 104 células/mL com caldo Isosensitest fresco e incubada com agitação a 37°C até as células entrarem em crescimento exponencial.

Foram transferidos 0,09 mL do inoculo ajustado para cada um de 24 poços de uma placa de microtitulação de 96 poços de poliestireno. Foi incluído um poço de controlo de bactérias isoladas na presença de meio de crescimento isolado (como controlo positivo).

Pipetaram-se 0,09 mL das soluções de reserva do Composto 10 a partir das séries de diluição para o poço relevante para as placas de microtitulação e incubaram-se no escuro a 37°C e as placas examinadas após 24 horas de incubação para determinar a turbidez em cada poço. Estes dados são utilizados para determinar a MIC.

Após 24 horas de incubação a 37°C, amostras de 25 pL do fluido proveniente dos poços sem crescimento bacteriano visível (mais de quatro poços) foram inoculadas em placas de ágar nutriente como pontos e incubadas a 37°C durante outras 24 horas para determinar a MBC. 82 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Resultados

Os resultados demonstraram que a MIC para o Composto 10 na ausência de luz era de 0,0955 yg/mL, e que a MBC era de 0,382 yg/mL (Tabela 1).

Tabela 1

Dados de MIC e MBC para o Composto 10 MIC (yg/mL) ABC (yg/mL) Series 1 0,0955 0,382* Series 2 0,0955 Não determinado * crescimento inferior a 0,191, muito reduzido do inoculo inicial para cerca de 103/ml

Conclusões

Os resultados demonstram que na ausência de luz o Composto 10 apresenta baixos valores de MIC e MBC. Estes dados indicam que o Composto 10 é consideravelmente mais potente como antibiótico do que alguns antibióticos tradicionais (ver Tabela 2):

Tabela 2

Valores de MIC e MBC para o Composto 10 e antibióticos convencionais Composto Valores MIC (yg/mL) Valores MBC (yg/mL) Composto 10 0,0955 0,382 Vancomicina Ia 4 - 16b Zyvox® (Linezolid) 4a 4 - >64c (a) Critchley LA et al. Baseline study to determine in vitro activities of daptomycin against gram-positive pathogens isolated in the United States in 2000-2001. Antimicrobial Agents and Chemotherapy (2003); 47(5):1689-93 (b) Biavasco F et al. In vivo antibacterial activity of LY333338, a new semi-synthetic glycopeptide. Antimicrobial Agents and Chemotherapy (1997); 41(10): 2165-72 (c) Fuchs PC et al. In vitro bactericidal activity of daptomycin against staphylococci. Journal of Antimicrobial Chemotherapy (2002); 49: 467-70 83 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

EXEMPLO C: ACTIVIDADE ANTIBACTERIANA INATA DO COMPOSTO 10 -ACTIVIDADE SOBRE UMA GAMA DE ESTIRPES DE REFERÊNCIA E ISOLADOS CLÍNICOS

As Concentrações Inibidoras Mínimas (MICs) para o Composto 10, sobre uma gama de estirpes de referência e isolados clínicos, foram determinadas usando caldo IsoSensitest® e as Concentrações Bactericidas Mínimas (MBCs) determinadas por subcultura sobre ágar de sangue Columbia.

Metodologia 1. Preparou-se uma solução de reserva de 5 mg/ml do Composto 10 em água. 2. Realizou-se uma série de diluições para produzir uma gama de concentrações entre 32-0,001 mg/L. 3. Os microorganismos de teste foram cultivados de um dia para o outro em caldo IsoSensitest®. 4. As culturas foram depois diluídas com caldo fresco até uma concentração final de 104 organismos/ml e colocadas num agitador durante 90 minutos a 37°C. 5. Transferiram-se 90 μΐ do caldo de cultura contendo os microorganismos para cada um de 12 poços numa fila num tabuleiro de microtitulação e repetiu-se num tabuleiro de controlo - quatro organismos por tabuleiro. 6. Foram depois adicionados 90 yL da diluição apropriada de

Composto 10 a cada poço contendo organismos, para proporcionar uma série de diluição final de 16 mg/L a 0,0005 mg/L. 7. As soluções foram bem misturadas e incubadas no escuro durante 24 horas. 8. Registou-se a MIC e 25 yL dos poços que não exibiram crescimento foram subcultivados em ágar de sangue para determinação da MBC. 9. Os valores de MBC foram registados após incubação das subculturas de um dia para o outro. 10. Realizaram-se controlos de caldo não inoculado e de caldo mais inoculo, para cada organismo em cada tabuleiro. 84 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Resultados

Os resultados são mostrados na Tabela 3.

Tabela 3

Valores de MIC e MBC para o composto 10 e antibiótico convencional Organismo Estirpe Cpt 10 MIC (mg/L) Cpt 10 MBC (mg/L) (a) Staphylococcus aureus (resistente a meticilina) ATCC BAA-44 Experiência 1 0,5 0, 5 Experiência 2 0,5 1 Experiência 3 2 2 Experiência 4 0,5 1 Experiência 5 0,5 >1 Experiência 6 0,5 1 Organismo Estirpe Cpt 10 MIC (mg/L) Cpt 10 MBC (mg/L) NCTC 11939 (EMRSA-1) 0,5 0, 5 EMRSA-15* 1 1 EMRSA-16* 0,5 0, 5 (b) Staphylococcus aureus (sensível a meticilina) NCTC 6571 0,5 0, 5 ATCC 25923 0,5 1 (c) Staphylococcus epidermidis (resistente a meticilina) 38808* 0, 5 0, 5 33759* 0,5 1 33659* 0,5 1 36572* 0,25 0,25 (d) Staphylococcus epidermidis (sensível a meticilina) 37453* 0, 5 0, 5 (e) Enterococcus faecium NCTC 12204 1 1 El* 0,5 1 E5* 0,5 1 E19* 0,5 0, 5 E44* 0,5 0, 5 (f)Enterococcus faecalis ATCC 29212 1 >1 E3* 0, 5 1 85 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Valores de MIC e MBC para 0 composto 10 e antibiótico convencional Organismo Estirpe Cpt 10 MIC (mg/L) Cpt 10 MBC (mg/L) E4 * 0,5 LO O E10* 0,5 1 E37 * 0,5 1 * = Isolados clínicos

Conclusões

Os resultados demonstram que o Composto 10 tem valores muito baixos de MIC e MBC para uma gama de estirpes bacterianas gram-positivas. Os valores de MIC e MBC são quase idênticos dentro das limitações tecnológicas, sugerindo que o modo de actividade antimicrobiana é bactericida por oposição a bacteriostática.

EXEMPLO D: TESTE DE TOXICIDADE DO COMPOSTO 10 CONTRA CÉLULAS HUMANAS

Metodologia

Os compostos de teste foram rastreados quanto a toxicidade contra células de pele humana cultivadas utilizando queratinócitos de epiderme humana normais (NHEK) e fibroblastos dérmicos humanos normais (NHDF), adquiridos em Cell Systems Biotechnologie GmbH, Germany.

As células NHEK e NHDF foram utilizadas entre as passagens 3 e 10. As células foram semeadas com 7,5 e/ou 15χ104 células/poço (placa de microtitulação) e deixaram-se ligar de um dia para o outro numa incubadora (37°C, 5% de CO2) . Após incubação com diferentes concentrações dos fotossensibilizadores seleccionados para vários tempos, as células foram incubadas durante 24 horas no escuro. A toxicidade foi testada pelo ensaio MTT padrão (Mossman et al., 1983 J. Immunological Methods 65:55-63). MTT é um indicador de células metabolicamente activas. Dependendo da actividade da enzima em mitocôndrias, pode ser visualizada uma reacção de cor, que pode ser medida pelo leitor ELISA (540 nm) . A viabilidade das células foi normalizada para um, 86 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ ο que significa que os valores DO das células após incubação na ausência de um composto de teste foram normalizados para um. Cada experiência foi repetida três vezes.

Resultados

Os resultados dos estudos de toxicidade em queratinócitos e fibroblastos são mostrados nas Figuras 2 e 3. Os dados demonstram que o Composto 10 não demonstra uma toxicidade inata para os queratinócitos epidérmicos humanos normais ou os fibroblastos dérmicos humanos normais a doses que são conhecidos por possuírem um efeito anti-bacteriano.

EXEMPLO E: LIGAÇÃO DE COMPOSTOS EXEMPLARES COM CÉLULAS

BACTERIANAS

Ligação dos Compostos 8, 10 e 12 com E. coli

Incubaram-se células de E. coli durante 5 min com Composto 8, 10 ou 12 em várias concentrações (1-7,5 μΜ) . No final do periodo de incubação, as células foram sedimentadas por centrifugação para remover a fracção de composto de teste não ligado e o pelete de células foi ressuspenso em 2 ml de SDS a 2% para obter lisados celulares. Após incubação durante a noite com SDS, a quantidade de composto de teste ligado a células foi estimada por análise espectrofluorimétrica dos lisados celulares. A concentração dos compostos nos lisados celulares foi calculada por medição das intensidades no máximo do espectro de emissão de fluorescência e interpolando os resultados num gráfico de calibração. A quantidade de composto de teste ligado a células foi expressa como nmoles de composto por mg de proteína celular. A concentração de proteínas foi determinada pelo método de Lowry (Lowry et al., 1951, J. Biol. Chem. 193:265-275).

Todas as experiências foram realizadas em triplicado e os resultados representam a média de 3 determinações com desvios padrão. 87 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ A quantidade de porfirina recuperada das células é apresentada na Tabela 4.

Tabela 4

Concentração do composto (μΜ) Composto ligado (nmoles/mg de proteínas celulares) (a) 0 lavagens Composto 8 Composto 12 Composto 10 0, 01 0,024 ± 0,01 0,041 ± 0,02 0,026 ± 0,005 0,1 0, 056 ± 0,02 0,151 ± 0,02 0,274 ± 0,05 LO O 0,522 ± 0,2 0,806 ± 0,14 1,542 ± 0,350 1 3,670 ±0,7 2,70 ± 0,30 2,70 ± 0,354 (b) 3 lavagens Composto 8 Composto 12 Composto 10 0, 01 0,009 ± 0,001 0,021 ± 0,005 0,015 ±0,0004 0,1 0, 030 ± 0,02 0, 089 ± 0,02 0, 078 ± 0,02 LO O 0,274 ± 0,15 0,622 ± 0,10 0,334 ± 0,092 1 2,230 ±0,8 1,930 ± 0,20 1,278 ± 0,102

Os resultados apresentados na Tabela 4 mostram que os três compostos de teste se ligam a E. coli com eficiência similar e que cerca de 50% do composto que está associado às células no final do periodo de incubação (5 min) é removido por 3 lavagens com PBS.

EXEMPLO F: ESTUDOS DE ESTABILIDADE

Estabilidade química A metodologia de HPLC que se segue foi estabelecida para a análise dos compostos exemplares da invenção. O método envolve a detecção por UV a um comprimento de onda de 420 nm, que é muito especifico para estes compostos. Para monitorar as impurezas não relacionadas com a estrutura da porfirina (e portanto que não absorvem a 420 nm) os espectros de UV do cromatograma completo foram também registados entre 200 nm e 700 nm por DAD (detector de conjunto de diodos) em certas experiências.

Coluna: Zorbax Phenyl, 250x4,6 mm, 5 pm

Eluente A: 1,5 g de dodecilsulfato de sódio + 1 ml de ácido fórmico em 1000 mL de água 88 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ

Gradiente:

Eluente Β: 1,5 g de dodecilsulfato de sódio + 1 mL de ácido fórmico em 200 mL de água + 800 mL tetra- hidrofurano

Tempo [min] Eluente B [%] 0 50 31 65 32 90 33 50 43 50

Caudal: 0,4 mL/min

Detecção: 420 nm

Temperatura da Coluna: 25°C

Volume de injecção: 10 μΐ

Soluções: Os derivados de porfirina foram dissolvidos em eluente A para dar uma concentração final de aproximadamente 0,3 mg/ml. 0 tempo de retenção típico dos compostos exemplares foi de aproximadamente 8 minutos (tempo de análise 18 minutos).

Foram realizados testes de stress qualitativos sobre os compostos exemplares da invenção. A análise foi realizada por HPLC & LC-MS. Os compostos foram testados sob stress em forma sólida numa solução aquosa e numa solução formada em tampão de solução salina tamponada com fosfato. As amostras foram inicialmente incubadas durante 7 dias a 50°C e foi retirada uma amostra para teste. As amostras foram então incubadas durante mais 7 dias a 70°C, foram removidas amostras como antes e as amostras foram incubadas durante mais 7 dias a 90°C. A análise por HPLC de soluções preparadas de fresco foi realizada e comparada com as amostras após 7, 14 e 21 dias de incubação. Uma comparação visual dos cromatogramas foi então realizada e o teor dos produtos e produtos secundários principais foi então determinado como valores de percentagem de área (ver Figura 4).

Os gráficos 3D dos cromatogramas não revelam indicações da formação adicional de fragmentos (não há sinais a comprimentos de onda mais baixos). O gráfico na Figura 5 mostra a amostra após 21 dias em tampão de PBS que revelou o maior efeito de degradação. Os 89 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ resultados demonstraram uma degradação mínima na análise da droga sólida e na droga em solução aquecida a 80°C durante uma série de semanas.

Conclusões

Os Compostos 10 e 12 revelaram ambos exibir boa estabilidade e foram muito estáveis mesmo sob as condições de stress do protocolo de teste. Apesar do Composto 8 ser menos estável que os Compostos 10 e 12, a estabilidade demonstrada mostrou ser suficiente para utilização prática.

Estabilidade de compostos exemplares em formulações A estabilidade de três compostos exemplares da invenção (Compostos 8, 10 e 12) e de um composto de referência (Composto 1), armazenados a 40°C no escuro durante 8 semanas em frascos de polietileno em várias formulações de base aquosa, foi avaliada como segue: • Lauril éter sulfato de sódio (SLES) + água • 9:1 água:etanol • SLES + 9:1 água:etanol

Foram registados espectros de UV no intervalo de 350-700 nm durante um período de 7 semanas e foi efectuada uma avaliação visual das amostras ao fim de 8 semanas.

Os resultados indicam que todos os compostos testados exibiram boa estabilidade durante um período de oito semanas (ver Figura 6).

Para os Compostos 8 e 10, o estudo de estabilidade foi prolongado para 17 semanas (ver Figura 7). EXEMPLO G: TESTE DA TOXICIDADE AGUDA DO COMPOSTO 10 O Composto 10 foi utilizado a 3,2 mM numa formulação tópica num teste padrão de toxicidade aguda para determinar se podia ser detectada alguma toxicidade histológica ou clínica para o composto. 90 ΕΡ 1 768 666/ΡΤ Ο protocolo de toxicidade aguda foi baseado nas Orientações da OCDE para o teste de produtos quimicos/Secção 4 - Teste de Efeitos sobre a Saúde Número 402: Toxicidade Dérmica Aguda.

Resultados e Conclusões

Após observação clinica, macroscópica e microscópica, não foi observada toxicologia clinica. Não foi observada toxicologia histológica de nenhum órgão principal (incluindo a pele).

Em conclusão, o Composto 10 não resulta em nenhum efeito tóxico agudo ou alérgico: de facto, não foram observados sinais clínicos ou patológicos significativos relacionados com a aplicação da substância e do seu veículo.

Lisboa, 2012-05-03

Claims (63)

1. ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 1/12 REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de um composto da fórmula I seguinte na preparação de um medicamento para matar ou atenuar o crescimento de microorganismos através de um método in vivo que não compreende a exposição do composto a uma fonte de luz de terapia fotodinâmica ou uma fonte de ultrassons de terapia sonodinâmica

   / em que: Xi, X2, X3 e X4 representam independentemente um átomo de hidrogénio, uma porção lipófila, um grupo fenilo, um grupo alquilo, alcarilo ou aralquilo inferior ou um grupo catiónico da fórmula seguinte -L-Ri-N+(R2> (R3)R4 em que: L é uma porção ligante ou está ausente; Ri representa alquileno inferior, alcenileno inferior ou alcinileno inferior, o qual está substituído opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo inferior, alquileno inferior (interrompido opcionalmente com oxigénio), fluoro, OR5, C(0)R6r C(0)0R7, C(0)NRsR9í NR10R11 e N+Ri2Ri3Ri4; e ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 2/12 R2 , R3 e R4 representam independentemente H, arilo, alquilo inferior, alcenilo inferior ou alcinilo inferior, dos quais os três últimos estão substituidos opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo inferior, alquileno inferior (interrompido opcionalmente com oxigénio), arilo, OR5, C(0)R6, C(0)0R7, C(0)NR8R9, NRioRu e N+R12Ri3Ri4, Z é -CH ou N; e Yi, Y2, Y3 e Y4 estão ausentes ou representam independentemente arilo, alquilo inferior, alcenilo inferior ou alcinilo inferior, dos quais os três últimos estão substituidos opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo inferior, alquileno inferior (interrompido opcionalmente com oxigénio), arilo, 0R5, C(0)R6, C(0)0R7, C(0)NR8R9, NRioRu, N+Ri2Ri3Ri4, ou, tomados em conjunto com o anel pirrole ao qual estão ligados, formam um grupo ciclico; e R5, R6, R7, Rs, Rg, Rio, R11, R12, R13 e Ri4 representam independentemente H ou alquilo inferior; desde que pelo menos um de entre Χχ, X2, X3 e X4 seja um grupo catiónico tal como definido acima, e pelo menos um de entre Xi, X2, X3 e X4 seja um átomo de hidrogénio.
2. 2. Utilização de um composto da fórmula II seguinte na preparação de um medicamento para matar ou atenuar o crescimento de microorganismos através de um método in vivo que não compreende a exposição do composto a uma fonte de luz de terapia fotodinâmica ou uma fonte de ultrassons de terapia sonodinâmica

   II ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 3/12 em que Μ é um elemento metálico ou um elemento metalóide, e Xi, X2, X3, X4, Yi, Y2, Y3, Y4 e Z são como definidos na reivindicação 1.
3. 3. Utilização de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o medicamento se destina a matar ou atenuar o crescimento de microorganismos através de um método que não compreende a exposição do composto a um estimulo que activa a actividade microbiana.
4. 4. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que o composto exibe actividade microbiana na ausência de irradiação com uma fonte de luz de terapia fotodinâmica ou uma fonte de ultrassons.
5. 5. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações 2 a 4, em que M é um elemento metálico divalente ou trivalente.
6. 6. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações 2 a 5, em que M é seleccionado de entre Zn (II), Cu (II), La(III), Lu(III), Y(III), In(III) Cd(II), Mg(II), Al(III), Ru, Ni (II), Μη (III), Fe (III) e Pd(II).
7. 7. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações 2 a 4, em que M é um elemento metalóide, por exemplo silicio (Si) ou germânio (Ge) .
8. 8. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que Yi, Y2, Y3 e Y4 estão ausentes.
9. 9. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que Z é -CH.
10. 10. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que Ri é um grupo alquileno inferior, alcenileno inferior ou alcinileno inferior não substituído.
11. 11. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que Ri é -(CH2)m_, e 'm' é um inteiro entre 1 e 20. ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 4/12
12. 12. Utilização de acordo com a reivindicação 11, em que 'm' é um inteiro entre 1 e 10, por exemplo entre 1 e 6, entre 1 e 5, entre 1 e 4 ou entre 1 e 3.
13. 13. Utilização de acordo com a reivindicação 12, em que 'm' é 3.
14. 14. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que R2, R3 e/ou R4 são grupos alquilo inferior, alcenilo inferior ou alcinilo inferior.
15. 15. Utilização de acordo com a reivindicação 14, em que R2, R3 e/ou R4 são grupos alquilo inferior não substituídos.
16. 16. Utilização de acordo com a reivindicação 14 ou 15, em que pelo menos um de entre R2, R3 e R4 é um grupo alquilo que está substituído com um grupo amina primário, secundário ou terciário ou um grupo amónio quaternário.
17. 17. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que Ri é -(CH2)3_, R2 e R3 são CH3 e R4 é - (CH2)3-N(CH3)2.
18. 18. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que Ri é -(CH2)3_ e R2, R3 e R4 são cada um CH3.
19. 19. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que Ri é -(CH2)3-, e R2, R3 e R4 são cada um C2H5.
20. 20. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que L é seleccionado do grupo que consiste em porções de ligação fenoxi, fenileno, sulfonilamido, aminossulfonilo, sulfonilimino, fenilsulfonilamido, fenilaminossulfonilo, ureia, uretano e carbamatos.
21. 21. Utilização de acordo com a reivindicação 20, em que Xi, X2, X3 e/ou X4 sao ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 5/12 (OR)„ em que R é -Ri-N+(R2) (R3)R4, como definido na reivindicação 1, e 'n' é um inteiro entre 1 e 3.
22. 22. Utilização de acordo com a reivindicação 20, em que Xlr X2, X3 e/ou X4 são // R m em que R é -Ri-N+(R2) (R3)R4, como definido na reivindicação 1, e 'm' é um inteiro entre 1 e 3.
23. 23. Utilização de acordo com a reivindicação 20, em que Xi, X2, X3 e/ou X4 são

    em que cada R independentemente é -Ri-N+ (R2) (R3) R4, como definido na reivindicação 1, e 'n' e 'm' são inteiros entre 1 e 3, e em que a soma . de 'n' e 'm' é um inteiro entre 1 e 3. CM Utilização de acordo com qualquer das reivindicações 21 a 23, em que 'n' ou 'm' é 3 • 25. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações 21 a 23, em que 'n' ou 'm' é 2 • 26. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações 21 a 23 ou 25, em que ' n' e/ou 'm' é 1. 27. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações 21 a 23, em que L é mono-substituido na posição para-. 00 CM Utilização de acordo com qualquer das reivindicações 21 a 23 , em que L é mono- ou di-substituído numa posição meta-. ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 6/12
24. 29. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações 21 a 23, em que L é mono- ou di-substituido numa posição orto-.
25. 30. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que o composto compreende dois grupos catiónicos, como definido na reivindicação 1, em lados opostos do anel porfirina, i.e. nas posições do anel 5 e 15 ou nas posições do anel 10 e 20.
26. 31. Utilização de acordo com a reivindicação 30, em que Xi e X3 são um átomo de hidrogénio, uma porção lipófila, um grupo fenilo, um grupo alquilo, alcarilo ou aralquilo inferior e X2 e X4 são grupos catiónicos, ou vice versa.
27. 32. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 30, em que o composto compreende dois grupos catiónicos, como definido na reivindicação 1, em posições adjacentes do anel porfirina, i.e. nas posições de anel 5 e 10, ou nas posições de anel 10 e 15, ou nas posições de anel 15 e 20 ou nas posições de anel 20 e 5.
28. 33. Utilização de acordo com a reivindicação 32, em que Xi e X2 são hidrogénio e X3 e X4 são grupos catiónicos, ou X2 e X3 são hidrogénio e X4 e Χχ são grupos catiónicos.
29. 34. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que pelo menos um de Χχ, X2, X3 e X4 é uma porção lipófila.
30. 35. Utilização de acordo com a reivindicação 34, em que a porção lipófila é um grupo alquilo saturado de cadeia linear de fórmula -(CH2)PCH3, em que 'p' é um inteiro entre 1 e 22.
31. 36. Utilização de acordo com a reivindicação 35, em que 'p' está entre 1 e 18, por exemplo entre 2 e 16 ou entre 4 e 12 .
32. 37. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 33, em que nenhum de Χχ, X2, X3 e X4 é uma porção lipófila. ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 7/12
33. 38. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que nenhum de Xi, X2, X3 e X4 é um grupo fenilo.
34. 39. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que o composto é solúvel em água.
35. 40. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto é dicloreto de 5,15-bis-(4-{3-[(3-dimetilamino-propil)-dimetilamónio]propiloxi}fenil)porfirina.
36. 41. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto é dicloreto de 5,15-bis-[4-(3-trietilamóniopropiloxi)-fenil]porfirina.
37. 42. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto é dicloreto de 5,15-bis-[3-(3-trimetilamónio-propiloxi)fenil]porfirina.
38. 43. Utili zação de acordo com a reivindicação 1, em que o composto é dicloreto de 5,15-bis-[4-(3-trimetilamónio-propiloxi)-fenil]porfirina.
39. 44. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto é dicloreto de 5-[3,5-bis-(3-trimetilamónio-propiloxi)fenil]-15-undecilporfirina.
40. 45. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto é cloreto de 5-{4-[3-dimetil-(3-dimetilaminopropil)-amóniopropiloxi]fenil}-15-(4-dodeciloxifenil)porfirina.
41. 46. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto é tricloreto de 3-[({3-[(3-{4-[15-(4-dodeciloxifenil)-porfirin-5-il]fenoxi}propil)dimetilamónio]propil}dimetilamónio) propil]trimetilamóno.
42. 47. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto é dicloreto de 5,15-bis-[3-(3-trimetilamónio-propiloxi)fenil]-10-undecilporfirina.
43. 48. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto é dicloreto de 5-{4-[3-dimetil-(3-trimetilamónio-propil)amóniopropiloxi]fenil}-15-(4-dodeciloxifenil)porfirina. ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 8/12
44. 49. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o composto é dicloreto de 5-[4-(3-dimetildecilamóniopropiloxi)-fenil]-15-{4-[3-dimetil-(3-dimetilaminopropil)amóniopropiloxi]-feniljporfirina.
45. 50. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações 40 a 49, em que o composto está numa forma de metalação.
46. 51. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que o composto é substancialmente não tóxico para células de mamífero.
47. 52. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que o medicamento se destina a administração oral.
48. 53. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que o medicamento se destina a administração parentérica.
49. 54. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que o medicamento se destina a administração tópica.
50. 55. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que os microrganismos são seleccionados de entre o grupo constituído por bactérias, micoplasmas, leveduras, fungos e vírus.
51. 56. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que os microrganismos são bactérias que são resistentes a um ou mais agentes antibióticos convencionais.
52. 57. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que os microrganismos estão numa superfície inacessível à luz ou numa área inacessível à luz.
53. 58. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que o medicamento se destina a utilização no tratamento curativo e/ou profiláctico de infecções microbianas.
54. 59. Utilização de acordo com a reivindicação 58, em que a infecção microbiana é uma infecção sistémica. ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 9/12
55. 60. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que o medicamento se destina à prevenção e/ou tratamento de uma infecção dermatológica.
56. 61. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que o medicamento se destina à prevenção e/ou tratamento de uma infecção pulmonar.
57. 62. Utilização de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que o medicamento se destina à prevenção e/ou tratamento de uma infecção numa ferida e/ou úlceras.
58. 63. Composto da fórmula I seguinte para utilização para matar ou atenuar o crescimento de microorganismos através de um método in vivo que não compreende a exposição do composto a uma fonte de luz de terapia fotodinâmica ou uma fonte de ultrassons de terapia sonodinâmica

    / em que: Xlr X2, X3 e X4 representam independentemente um átomo de hidrogénio, uma porção lipófila, um grupo fenilo, um grupo alquilo, alcarilo ou aralquilo inferior ou um grupo catiónico da fórmula seguinte -L-Ri-N+(R2) (R3)R4 em que: L é uma porção ligante ou está ausente; ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 10/12 Ri representa alquileno inferior, alcenileno inferior ou alcinileno inferior, o qual está substituído opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo inferior, alquileno inferior (interrompido opcionalmente com oxigénio), fluoro, OR5, C(0)R6, C(0)0R7, C(0)NRsR9, NRi0Rn e N+Ri2Ri3Ri4/ e R2, R3 e R4 representam independentemente H, arilo, alquilo inferior, alcenilo inferior ou alcinilo inferior, dos quais os três últimos estão substituídos opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo inferior, alquileno inferior (interrompido opcionalmente com oxiqénio), arilo, OR5, C(0)R6, C(0)0R7, C(0)NR8R9, NRioRu e N+Ri2Ri3Ri4, Z é -CH ou N; e Yi, Y2, Y3 e Y4 estão ausentes ou representam independentemente arilo, alquilo inferior, alcenilo inferior ou alcinilo inferior, dos quais os três últimos estão substituídos opcionalmente com um ou mais substituintes seleccionados de entre alquilo inferior, alquileno inferior (interrompido opcionalmente com oxigénio), arilo, OR5, C(0)R6, C(0)0R7, C(0)NR8R9, NRioRu, N+Ri2Ri3Ri4, ou, tomados em conjunto com o anel pirrole ao qual estão ligados, formam um grupo cíclico; e R5, R6, R7, R8, R9, Rio, R11, R12, R13 e R14 representam independentemente H ou alquilo inferior; desde que pelo menos um de entre Xi, X2, X3 e X4 seja um grupo catiónico tal como definido acima, e pelo menos um de entre Xi, X2, X3 e X4 seja um átomo de hidrogénio.
59. 64. Composto da fórmula II seguinte para utilização para matar ou atenuar o crescimento de microorganismos através de um método in vivo que não compreende a exposição do composto a uma fonte de luz de terapia fotodinâmica ou uma fonte de ultrassons de terapia sonodinâmica ΕΡ 1 768 666/PT 11/12

    II em que M é um elemento metálico ou um elemento metalóide, e Xi, X2, X3, X4, Yi, Y2, Y3, Y4 e Z são como definidos na reivindicação 63.
60. 65. Composto para utilização para matar ou atenuar o crescimento de microorganismos de acordo com a reivindicação 63 ou 64, em que o composto é seleccionado do grupo que consiste em: Dicloreto de 5,15-bis-(4-{3-[(3-dimetilamino-propil)-dimetil-amónio]-propiloxi}-fenil)-porfirina, Dicloreto de 5,15-bis-[4-(3-trietilamónio-propiloxi)-fenil]-porfirina, Dicloreto de 5,15-bis-[3-(3-trimetilamónio-propiloxi)-fenil]-porfirina, Dicloreto de 5,15-bis-[4-(3-trimetilamónio-propiloxi)-fenil]-porfirina, Dicloreto de 5-[3,5-bis-(3-trimetilamónio-propiloxi)-fenil]-15-undecil-porfirina, Cloreto de 5-{4-[3-dimetil-(3-dimetilaminopropil)-amónio-propiloxi]-fenil}-15-(4-dodeciloxi-fenil)-porfirina, Tricloreto de 3-[({3-[ (3-{4-[15-(4-dodeciloxi-fenil)-porfirin-5-il]-fenoxi}-propil)-dimetil-amónio]-propil}-dimetil-amónio)-propil]-trimetil-amónio, ΕΡ 1 768 666/ΡΤ 12/12 Dicloreto de 5,15-bis-[3-(3-trimetilamónio-propiloxi)-fenil]-10-undecil-porfirina, Dicloreto de 5-(4-[3-dimetil-(3-trimetilamónio-propil)- amónio-propiloxi]-fenil)-15-(4-dodeciloxi-fenil)-porfirina, Dicloreto de 5-[4-(3-dimetildecil-amóniopropiloxi)-fenil]-15-{4-[3-dimetil-(3-dimetilaminopropil)-amóniopropiloxi]-fenil}-porfirina, e suas formas de metalação.
61. 66. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 63 a 65 para utilização para matar ou atenuar o crescimento de 6 microorqanismos de acordo com qualquer das reivindicações 63 a 65, em que os microorganismos são seleccionados de entre o grupo que consiste em bactérias, micoplasmas, leveduras, fungos e virus.
62. 67. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 63 a 65 para utilização para matar ou atenuar o crescimento de microorganismos de acordo com a reivindicação 66, em que os microorganismos são bactérias que são resistentes a um ou mais agentes antibióticos convencionais.
63. 68. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 63 a 65 para utilização para matar ou atenuar o crescimento de microorganismos de acordo com qualquer das reivindicações 63 a 67, em que os microorganismos estão sobre uma superfície inacessível à luz ou numa área inacessível à luz. Lisboa, 2012-05-03