PT1673338E - Compostos derivados de ácidos gordos, preparação e utilizações - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

COMPOSTOS DERIVADOS DE ÁCIDOS GORDOS, PREPARAÇÃO E

UTILIZAÇÕES A presente invenção refere-se a novas moléculas, à sua preparação e às suas utilizações, particularmente nos domínios da saúde humana e animal. Os compostos da invenção são, em parte, derivados de ácidos gordos e possuem propriedades farmacológicas, antioxidantes e anti-inflamatórias vantajosas. A invenção descreve igualmente as diferentes utilizações destes compostos e as composições farmacêuticas e cosméticas contendo-os, assim como os processos que permitem a sua preparação. Os compostos da invenção são utilizáveis, em especial, para prevenir ou tratar as doenças cardiovasculares, a síndrome X, a reestenose, a diabetes, a obesidade, a hipertensão, determinados cancros e doenças dermatológicas, bem como no domínio cosmético, para prevenir ou tratar os efeitos do envelhecimento cutâneo, particularmente o aparecimento de rugas, etc.

A aterosclerose e as suas complicações cardiovasculares são a principal causa de morbidade e de mortalidade nos países fortemente industrializados. A aterosclerose e as suas complicações são igualmente uma consequência importante da diabetes de tipo II. Uma relação estrita de causa-efeito foi demonstrada entre as dislipidemias e as doenças cardiovasculares. Uma taxa circulante elevada de LDL-colesterol é desfavorável. 0 risco ocasionado por uma taxa elevada de LDL-colesterol é amplificado por um aumento da taxa de triglicéridos. Além disso, a importância da estabilidade das lesões ateroscleróticas na ocorrência inesperada de acidentes cardiovasculares foi evidenciada. O 1 papel da oxidação das LDL no desenvolvimento da placa de aterosclerose e da sua fragilização é melhor compreendido.

Os tratamentos medicamentosos da aterosclerose visam reduzir as taxas circulantes de colesterol ou de triglicéridos, aumentar a estabilidade das placas de aterosclerose, reduzir os constrangimentos mecânicos aos quais os vasos estão sujeitos (redução da tensão arterial) e reduzir os factores de risco suplementares, como a diabetes.

Entre os medicamentos actualmente utilizados no tratamento das dislipidemias, encontram-se os fibratos e as estatinas. As tiazolidinedionas são utilizadas no tratamento da diabetes de tipo li.

Os fibratos são largamente utilizados para o tratamento das hipertrigliceridemias. Eles possuem igualmente efeitos favoráveis ao nivel da hipercolesterolemia. Eles são geralmente bem tolerados, mas apresentam um determinado número de efeitos secundários: reacções cutâneas, efeitos neurológicos, efeitos musculares e gastrintestinais. Os efeitos tóxicos são raros (rins, músculos, articulação, pele, hepatite, etc.). Quanto à incidência sobre o risco canceroso, ela é importante nos roedores, ainda que não tenha sido demonstrada nos seres humanos.

As estatinas são largamente utilizadas para o tratamento da hipercolesterolemia. Demonstrou-se que o tratamento de doentes que haviam sofrido um primeiro acidente vascular reduz consideravelmente o risco de reincidência. Marcas ocasionais ou sintomas de hepatites ou de miopatia foram, por outro lado, descritos. 2

As tiazolidinedionas (troglitazona) foram recentemente introduzidas no tratamento da resistência à insulina. Em consequência, o recuo necessário para uma estimativa objectiva do conjunto de efeitos adversos destas moléculas ainda não é suficiente. Neste contexto, a observação de um aumento da frequência de tumores eólicos, num modelo animal com predisposição para o cancro do cólon (ratinhos Min com uma mutação do gene APC), é desfavorável. Além disso, uma tiazolidinediona (troglitazona) foi muito recentemente retirada do mercado devido a questões de toxicidade hepática.

As principais moléculas utilizadas no tratamento medicamentoso da aterosclerose (fibratos, estatinas) possuem um espectro de acção pleiotrópico. Os fibratos activam uma classe de receptores nucleares (PPARa, PPARy, etc.) implicados na coordenação da expressão de proteínas responsáveis pelo transporte ou pelo metabolismo dos lipidos. 0 carácter pleiotrópico do espectro de acção dos fibratos reside na diversidade dos genes-alvo dos PPAR. As estatinas diminuem a sintese de novo do colesterol, ao inibirem a actividade da HMG-CoA-redutase. 0 pedido DE 2028240A descreve ésteres de gliceróis que compreendem grupos alquiltioalcoilo com uma cadeia alquilo longa. Estes compostos são utilizados como estabilizadores para composições que contêm proteínas. 0 pedido JP 57082573A (resumo Chemical Abstracts 1983:18071; XP2203065) descreve o triéster de glicerol e do ácido 3-(9-octadeceniltio)-propanóico e a sua utilização como lubrificante para as fibras sintéticas. Os ésteres de polióis, em particular de glicerol, estão descritos em EP 0018342, assim como por L.P. Molleyres et al. em J. Biol. Chem., 263 (29), pp. 14832-38, 3 (1988) (ΧΡ001042275). A sua aplicação em terapêuticas é ai discutida. A presente invenção propõe uma nova família de compostos possuidores de propriedades farmacológicas vantajosas e utilizáveis no tratamento curativo ou preventivo de diversas patologias.

Os compostos da invenção respondem à fórmula geral (I):

em que: • G representa um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre ou um grupo N-R4, no qual R4 é um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, compreendendo 1 a 5 átomos de carbono; • Rl, R2 e R3, idênticos ou diferentes, representam (i) um átomo de hidrogénio, (ii) um grupo CO-R no qual R é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 1 a 25 átomos de carbono ou (iii) um grupo de fórmula CO-(CH2)2n+i-X-R', na qual X é um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo S02, n é um número inteiro compreendido entre 0 e 11, 4 preferencialmente igual a 0 ou 1, ainda mais preferencialmente igual a 0, e R/ é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 13 a 23 átomos de carbono e, eventualmente, um ou mais heterogrupos, de preferência 0, 1 ou 2, mais preferencialmente 0 ou 1, seleccionados entre um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO e um grupo S02, em que pelo menos um dos grupos Rl, R2 e R3 é um grupo de fórmula CO- (CH2) 2n+i-X-R' tal como definido acima. A invenção refere-se igualmente a uma composição farmacêutica compreendendo um composto de fórmula geral (I). A invenção refere-se também a uma composição cosmética compreendendo um composto de fórmula geral (I). A invenção tem também como objecto a utilização dos compostos acima descritos como medicamento para o tratamento de diversas patologias, particularmente de patologias que implicam uma desregulação do metabolismo dos lípidos. A invenção refere-se igualmente aos métodos de preparação dos compostos descritos acima.

Nos compostos de fórmula geral (I) de acordo com a invenção, o grupo G representa vantajosamente um átomo de oxigénio ou um grupo N-R4. Por outro lado, quando G é N-R4, R4 representa preferencialmente um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo.

Nos compostos de fórmula geral (I) de acordo com a invenção, o(s) grupo(s) R, idênticos ou diferentes, representam 5 preferencialmente um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou insaturado, substituído ou não, cuja cadeia principal compreende 1 a 20 átomos de carbono, ainda mais preferencialmente 7 a 17 átomos de carbono.

Nos compostos de fórmula geral (I) de acordo com a invenção, o(s) grupo(s) R', idênticos ou diferentes, representam preferencialmente um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou insaturado, substituído ou não, cuja cadeia principal compreende 13 a 20 átomos de carbono, ainda mais preferencialmente 14 a 17 átomos de carbono.

Exemplos particulares de grupos alquilo de cadeia longa saturada para R ou R' (por exemplo, superior ou igual a 7 átomos de carbono) são, em particular, os grupos C7H15, C10H21, CnH23, C13H27/ C14H29/ C16H33, C17H35, C15H31, C20:5 (5, 8, 11, 14, 17) e C22:6(4, 7, 10, 13, 16, 19) . 020:5(5/ 8, 11, 14, 17 ) é o ácido eicosapentaenóico (EPA), e 022:6 ( 4, 0, 10, 13, 16, 19) é o ácido docosahexaenóico (DHA) .

Exemplos de grupos alquilo de cadeia longa insaturada são, em especial, os grupos Ci4H27, Ci4H25, Ci5H29, C17H29, C17H31, C17H33, C19H29, C19H31, C21H31, C21H35, C21H37, C21H39, C23H45 .

Exemplos de grupos alquilo de cadeia longa ramificada são, em particular, os grupos (CH2) n'-CH (CH3) C2H5, (CH=C(CH3)-(CH2)2)n"- CH=C(CH3)2 ou (CH2) 2x+i-C (CH3) 2- (CH2) n"'-CH3 (em que x é um número inteiro igual a ou compreendido entre 1 e 11; n' é um número inteiro igual a ou compreendido entre 1 e 22; n'' é um número inteiro igual a ou compreendido entre 1 e 5; n''' é um número inteiro igual a ou compreendido entre 0 e 22; e (2x+n''') é inferior ou igual a 22). 6

Em uma forma de realização particular, o(s) grupo(s) R, idênticos ou diferentes, pode(m) igualmente representar, de forma vantajosa, um grupo alquilo inferior compreendendo 1 a 6 átomos de carbono. Como exemplo especifico, é possível referir em especial os grupos metilo, etilo, propilo e butilo, preferencialmente metilo e etilo.

Por outro lado, o grupo alquilo do substituinte R ou R' pode também ser cíclico, especialmente no grupo R. Os exemplos de grupos alquilo cíclicos compreendem, especialmente, o ciclopropilo, o ciclobutilo, o ciclopentilo e o ciclohexilo.

Como indicado anteriormente, os grupos alquilo podem estar eventualmente substituídos com um ou mais substituintes, idênticos ou diferentes. Os substituintes são seleccionados de preferência entre um átomo de halogéneo (iodo, cloro, flúor, bromo) e um grupo OH, =0, N02, NH2, CN, CH2-0, CH2OCH3, CF3 e COOZ (em que Z é um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo, preferencialmente compreendendo 1 a 6 átomos de carbono).

Em um composto de fórmula geral (I), os grupos alquilo R e R' podem ser idênticos ou diferentes. No entanto, preferem-se os compostos nos quais os grupos alquilo R' são idênticos entre si ou apresentam um comprimento de cadeia similar, isto é, não apresentam uma variação superior a cerca de 3 átomos de carbono.

Um exemplo especialmente preferido do grupo R' é um grupo alquilo saturado e linear, que compreende vantajosamente 13 a 17 átomos de carbono, de preferência 14 a 16, ainda mais preferencialmente 14 átomos. 7

Por outro lado, no grupo C0- (CH2) 2n+i_X“R' r X representa muito preferencialmente um átomo de enxofre ou de selénio e, vantajosamente, um átomo de enxofre.

Por outro lado, no grupo C0- (CH2) 2n+i_X-R' , n é de preferência diferente de 1 e é, em particular, igual a 0. Um exemplo específico do grupo CO- (CH2) 2n+i_X_R' de acordo com a invenção é o grupo CO-CH2-S-C14H29 ·

Os compostos preferidos segundo a invenção são então os compostos de fórmula geral (I) acima, em que pelo menos um dos grupos Rl, R2 e R3 representa um grupo CO-(CH2) 2n+i-X-R', no qual X representa um átomo de selénio ou, preferencialmente, de enxofre e/ou R' é um grupo alquilo saturado e linear que compreende 13 a 17 átomos de carbono, de preferência 14 a 16, ainda mais preferencialmente 14 átomos de carbono.

Sob esta perspectiva, os compostos particulares de acordo com a invenção são aqueles nos quais R2 é um grupo de fórmula CO-(CH2) 2n+i-X-R', de preferência na qual X representa um átomo de selénio ou, preferencialmente, de enxofre e/ou R' é um grupo alquilo saturado e linear compreendendo 13 a 17 átomos de carbono, mais preferencialmente nos quais n é igual a 0, em particular um grupo de fórmula CO-CH2-S-C14H29.

Nestes compostos, Rl e R3, idênticos ou diferentes, representam vantajosamente um átomo de hidrogénio ou um grupo CO-R, de preferência um grupo CO-R.

Outros compostos particulares de acordo com a invenção são aqueles nos quais dois dos grupos Rl, R2 e R3 são grupos CO-(CH2) 2n+i-X-R', idênticos ou diferentes, de preferência nos quais X representa um átomo de selénio ou, preferencialmente, de enxofre e/ou R' é um grupo alquilo saturado e linear compreendendo 13 a 17 átomos de carbono, mais preferencialmente nos quais n é igual a 0, em particular grupos CO-CH2-S-C14H29.

Os compostos particularmente preferidos são os compostos de fórmula geral (I) acima, em que: • G é um grupo N-R4, no qual R4 é um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo; e • pelo menos dois dos grupos Rl, R2 e R3 representam um grupo CO-(CH2) 2n+i-X-R' tal como definido acima, idêntico ou diferente, de preferência idêntico.

Outros compostos preferidos são os compostos de fórmula geral (I) acima, em que Rl, R2 e R3, idênticos ou diferentes, de preferência idênticos, representam um grupo CO- (CH2) 2n+i“X“R' tal como definido acima, de preferência no qual X representa um átomo de selénio ou, preferencialmente, de enxofre e/ou R' é um grupo alquilo saturado e linear compreendendo 13 a 17 átomos de carbono, mais preferencialmente no qual n é igual a 0 e, em particular, os grupos CO-CH2-S-C14H29.

Uma outra família de compostos preferidos compreende os compostos de fórmula geral (I) acima, em que um dos grupos Rl, R2 e R3 é um grupo CO- (CH2) 2n+i-X-R' tal como definido acima, um outro dos grupos Rl, R2 e R3 é um grupo CO-R tal como definido acima, e o terceiro dos grupos Rl, R2 e R3 é um átomo de hidrogénio.

Uma família particular é aquela em que Rl é um grupo de fórmula CO- (CH2) 2n+i-X-R' , de preferência na qual X representa 9 um átomo de selénio ou, preferencialmente, de enxofre e/ou R' é um grupo alquilo saturado e linear compreendendo 13 a 17 átomos de carbono, mais preferencialmente na qual n é igual a 0 e, em particular, um grupo CO-CH2-S-C14H29. Nesta família, um e/ou os dois grupos R2 e R3 representam vantajosamente um átomo de hidrogénio ou, preferencialmente, um grupo CO-R, idêntico ou não.

Uma outra família de compostos de acordo com a invenção é aquela em que um dos substituintes Rl, R2 ou R3 é um grupo COCH3.

Os compostos preferidos segundo a invenção são aqueles de fórmula geral (I) descrita acima, em que: • R2 é um grupo de fórmula C0- (CH2) 2n+i-X-R', em particular CO-CH2-S-C14H29 e, de preferência, Rl e R3, idênticos ou diferentes, representam um átomo de hidrogénio ou um grupo CO-R. Estes compostos nos quais Rl e R3, idênticos ou diferentes, representam ambos um grupo CO-R são preferidos; ou • Rl é um grupo de fórmula C0- (CH2) 2n+i-X-R', em particular um grupo CO-CH2-S-C14H29 e, de preferência, um e/ou os dois grupos R2 e R3 representam um átomo de hidrogénio ou um grupo CO-R, idêntico ou não; ou • Rl, R2 e R3, idênticos, representam um grupo de fórmula CO— (CH2) 2n+i-X-R' r em particular CO-CH2-S-C14H29.

Exemplos de compostos preferidos de acordo com a invenção estão representados nas Figuras IA e 1B. 10

Os compostos da invenção podem encontrar-se sob a forma de sais, especialmente de sais de adição básicos ou ácidos, preferencialmente compatíveis com uma utilização farmacêutica ou cosmética. Entre os ácidos farmacêutica ou cosmeticamente aceitáveis, é possível referir, entre outros, os ácidos clorídrico, bromídrico, sulfúrico, fosfórico, acético, trifluoroacético, láctico, pirúvico, malónico, succínico, glutárico, fumárico, tártrico, maleico, cítrico, ascórbico, canfórico, etc. Entre as bases farmacêutica ou cosmeticamente aceitáveis, é possível referir, entre outras, o hidróxido de sódio, o hidróxido de potássio, a trietilamina, a ter-butilamina, etc. A invenção refere-se igualmente à utilização dos compostos de fórmula geral (I), em particular daqueles descritos anteriormente, no domínio farmacêutico ou cosmético.

Ela refere-se, assim, à utilização de um composto de fórmula geral (I), em particular como descrito acima, para a preparação de uma composição farmacêutica destinada à prevenção e/ou ao tratamento de diversas patologias, em particular as doenças cardiovasculares, a síndrome X, a reestenose, a diabetes, a obesidade, a hipertensão, o cancro ou as doenças dermatológicas. Ela refere-se igualmente à utilização de um composto de fórmula geral (I), em particular como descrito acima, para a preparação de uma composição cosmética destinada à protecção da pele, ao combate do envelhecimento cutâneo e dos seus efeitos, ao combate do aparecimento ou do desenvolvimento de rugas, etc.

Desta forma, os compostos utilizados no domínio farmacêutico ou cosmético possuem a fórmula geral (I), em que: • G representa um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre ou um grupo N-R4, no qual R4 é um átomo de hidrogénio ou 11 um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, compreendendo 1 a 5 átomos de carbono; • Rl, R2 e R3, idênticos ou diferentes, representam (i) um átomo de hidrogénio, (ii) um grupo CO-R no qual R é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 1 a 25 átomos de carbono ou (iii) um grupo de fórmula C0- (CH2) 2n+i-X-R', na qual X é um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo SO2, n é um número inteiro compreendido entre 0 e 11, preferencialmente igual a 0 ou 1, ainda mais preferencialmente igual a 0, e R' é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 2 a 23 átomos de carbono e, eventualmente, um ou mais heterogrupos, de preferência 0, 1 ou 2, mais preferencialmente 0 ou 1, seleccionados entre um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo SO2, em que pelo menos um dos grupos Rl, R2 e R3 é um grupo de fórmula CO-(CH2) 2n+i_X_R' tal como definido acima.

Os compostos preferencialmente utilizados neste quadro correspondem a compostos de fórmula (I), em que R' é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 9 a 23 átomos de carbono e, eventualmente, um ou mais heterogrupos. Vantajosamente, os compostos de fórmula (I) utilizados são tal como definidos acima. A utilização de um composto de acordo com a invenção pode, de facto, permitir diminuir as taxas de triglicéridos e de 12 colesterol circulantes, inibir a modificação oxidativa das LDL, induzir a expressão de enzimas implicadas na β-oxidação mitocondrial e peroxissomal, aumentar as capacidades de oxidação dos ácidos gordos hepáticos, induzir o crescimento das mitocôndrias nas fibras musculares de tipo I e II, activar PPARa e PPARy ou ainda diminuir o crescimento das células tumorais. A este respeito, os compostos da invenção possuem, de forma vantajosa, um tropismo melhorado para o fígado e podem ser administrados por via oral ou sistémica. Por outro lado, devido à sua estrutura, os compostos da invenção possuem um efeito durável.

Esta invenção tem como objectivo desenvolver uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um composto de acordo com a invenção, eventualmente acompanhado de um veículo aceitável no plano farmacêutico. A invenção refere-se igualmente a uma composição cosmética compreendendo pelo menos um composto de acordo com a invenção, eventualmente acompanhado de um veículo cosmeticamente aceitável. A invenção refere-se igualmente a uma composição nutricional contendo pelo menos um dos compostos definidos anteriormente, utilizável isoladamente ou em combinação com outros agentes. A presente invenção refere-se também a um método de tratamento, que compreende a administração a um mamífero de uma quantidade eficaz de um composto de acordo com a invenção. Os mamíferos considerados podem ser animais domésticos ou não, ou seres humanos. 13

Os compostos ou composições de acordo com a invenção podem ser administrados de diferentes maneiras e sob diferentes formas. Assim, eles podem, por exemplo, ser administrados de forma sistémica, por via oral, parentérica, por inalação ou por injecção, como, por exemplo, por via intravenosa, intramuscular, subcutânea, transdérmica, intra-arterial, etc. Para as injecções, os compostos são geralmente acondicionados sob a forma de suspensões liquidas, que podem ser injectadas por meio de seringas ou de perfusões. Sob esta perspectiva, os compostos são geralmente dissolvidos em soluções salinas, fisiológicas, isotónicas, tamponadas, etc., compatíveis com uma utilização farmacêutica e conhecidas pelos peritos. Desta forma, as composições podem conter um ou mais agentes ou veículos seleccionados entre os dispersantes, solubilizantes, emulsionantes, estabilizantes, conservantes, tampões, etc. Os agentes ou veiculos utilizáveis em formulações liquidas e/ou injectáveis são particularmente a metilcelulose, a hidroximetilcelulose, a carboximetilcelulose, o polisorbato 80, o manitol, a gelatina, a lactose, óleos vegetais, a acácia, os lipossomas, etc.

Os compostos podem, assim, ser administrados sob a forma de géis, óleos, comprimidos, supositórios, pós, cápsulas gelatinosas, cápsulas, aerossóis, etc., eventualmente por meio de formas galénicas ou de dispositivos que asseguram uma libertação prolongada e/ou retardada. Para este tipo de formulação, utiliza-se vantajosamente um agente como a celulose, os carbonatos ou os amidos.

Os compostos podem ser administrados oralmente, caso em que os agentes ou veiculos utilizados são escolhidos preferencialmente entre a água, a gelatina, as gomas, a 14 lactose, o amido, o estearato de magnésio, o talco, um óleo, 0 polialquilenoglicol, etc.

Para uma administração parentérica, os compostos são preferencialmente administrados sob a forma de soluções, suspensões ou emulsões, especialmente em água, óleo ou polialquilenoglicóis, aos quais é possível adicionar, além dos agentes conservantes, estabilizantes, emulsionantes, etc., sais que permitem ajustar a pressão osmótica, tampões, etc.

Para uma utilização cosmética, os compostos da invenção podem ser administrados sob a forma de um creme, como por exemplo cremes de tratamento, cremes solares, óleos, géis, etc.

Entende-se que o volume e/ou a dose injectada podem ser adaptados pelo perito em função do doente, da patologia em causa, do modo de administração, etc. Tipicamente, os compostos são administrados em doses que podem variar entre 1 pg e 2 g por administração, preferencialmente entre 0,1 mg e 1 g por administração As administrações podem ser quotidianas ou repetidas várias vezes ao dia, se for caso disso. Por outro lado, as composições de acordo com a invenção podem compreender, adicionalmente, outros agentes ou princípios activos.

Os compostos da invenção podem ser preparados a partir de produtos comerciais, utilizando uma combinação de reacções químicas conhecidas pelos peritos. A invenção refere-se igualmente aos processos de preparação dos compostos tal como definidos anteriormente. 15

De acordo com um primeiro processo da invenção, os compostos de fórmula (I), nos quais G é um átomo de oxigénio ou de enxofre e Rl, R2 e R3, idênticos ou diferentes, representam um grupo CO-R ou um grupo C0- (CH2) 2n+i-X-R', são obtidos a partir de um composto de fórmula (I), na qual G é respectivamente um átomo de oxigénio ou de enxofre, R2 é um átomo de hidrogénio e Rl e R3, idênticos ou diferentes, representam um grupo CO-R ou C0- (CH2) 2n+i-X-R' r e de um composto de fórmula A°-CO-A, em que A é um grupo reactivo seleccionado, por exemplo, entre OH, Cl, O-CO-A0 e OR'', onde R'' é um grupo alquilo, e A° é o grupo R ou o grupo (CH2)2n+i-X-R', eventualmente na presença de agentes de acoplamento ou de activadores conhecidos pelos peritos.

Os compostos de fórmula (I) de acordo com a invenção, na qual G é um átomo de oxigénio, R2 é um átomo de hidrogénio e Rl e R3, idênticos ou diferentes, representam um grupo CO-R ou C0-(CH2) 2n+i~X-R', podem ser obtidos de diferentes formas.

De acordo com uma primeira forma, efectua-se a reacção de uma molécula de glicerol com um composto de fórmula A°-C0-A1, em que Al é um grupo reactivo seleccionado, por exemplo, entre OH, Cl e OR'', onde R'' é um grupo alquilo, e A° é o grupo R ou o grupo - (CH2) 2n+1-X-R', eventualmente na presença de agentes de acoplamento ou de activadores conhecidos pelos peritos. Esta reacção permite a sintese de compostos ditos simétricos, nos quais Rl e R3 têm o mesmo significado. Esta reacção pode ser efectuada através de adaptação dos protocolos descritos, por exemplo, em Feuge et al., J. Am. Oil Chem. Soc., 1953, 30, 320-325; Gangadhar et al., Synth. Commun., 1989, 19, 2505-2514; Han et al., Biorg. Med. Chem. Lett., 1999, 9, 59-64; ou Robinson, J. Pharm. Pharmacol., 1960, 12, 685-689. 16

Os compostos de fórmula (I) de acordo com a invenção, na qual G é um átomo de oxigénio, R2 é um átomo de hidrogénio e Rl e R3, idênticos ou diferentes, representam um grupo CO-R ou C0-(CH2) 2n+i-X-R', também podem ser obtidos a partir de um composto de fórmula (I) de acordo com a invenção, na qual G é um átomo de oxigénio, R2 e R3 representam um átomo de hidrogénio e Rl é um grupo CO-R ou C0- (CH2) 2n+i-X-R' (esta forma particular de compostos de fórmula (I) recebe a designação de compostos IV), e de um composto de fórmula A°-C0-A2, em que A2 é um grupo reactivo seleccionado, por exemplo, entre OH e Cl, e A° é 0 grupo R ou 0 grupo (CH2)2n+i-X-R', eventualmente na presença de agentes de acoplamento ou de activadores conhecidos pelos peritos. Esta reacção é vantajosamente realizada de acordo com o protocolo descrito, por exemplo, em Daubert et al., J. Am. Chem. Soc., 1943, 65 2144-2145; Feuge & Lovegren, J. Am. Oil . Chem. Soc., 1956, 33 367-372; Katoch et al., Bioorg . Med. Chem., 1999, 7, 2753 2758; ou Strawn et al., J. Med. Chem., 1989, 32, 643 -648.

Os compostos IV descritos acima podem ser preparados por um processo compreendendo: a) reacção de um composto de fórmula geral (II)

17 com um composto de fórmula A°-C0-A2, em que A2 é um grupo reactivo seleccionado, por exemplo, entre OH e Cl, e A° é o grupo R ou o grupo (CH2) 2n+i_X-R', eventualmente na presença de agentes de acoplamento ou de activadores conhecidos pelos peritos, para fornecer um composto de fórmula geral (III)

Rl t

0 em que Rl representa um grupo CO-R ou C0-(CH2) 2n+i-X-R'; e b) desprotecção do composto (III) com um ácido (ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido bórico, ácido sulfúrico, etc.) para fornecer um composto de fórmula geral (IV) como definido anteriormente.

De acordo com um outro processo particular da invenção, os compostos de fórmula (I), na qual G é um átomo de oxigénio, R3 é um átomo de hidrogénio e Rl e R2, idênticos ou diferentes, representam um grupo CO-R ou C0- (CH2) 2n+i-X-R' , podem ser obtidos a partir de um composto de fórmula (I) de acordo com a invenção, na qual G é um átomo de oxigénio, R2 e R3 representam um átomo de hidrogénio e Rl é um grupo CO-R ou CO-(CH2) 2n+i-X-R' (compostos IV), de acordo com as seguintes etapas: a) reacção do composto (IV) com um composto PxE, em que Px é um grupo protector e E é um grupo reactivo seleccionado, por exemplo, entre OH ou um halogéneo, 18 para originar um composto de fórmula geral (V), em que RI é um grupo CO-R ou C0- (CH2) 2n+i-X-R' . A reacção pode ser vantajosamente efectuada através de adaptação do protocolo descrito por Gaffney e Reese, Tet. Lett., 1997, 38, 2539-2542, no qual PxE pode representar o composto 9-fenilxanteno-9-ol ou 9-cloro-9-fenilxanteno

b) reacção do composto de fórmula (V) com um composto de fórmula A°-C0-A2, em que A2 é um grupo reactivo seleccionado, por exemplo, entre OH e Cl, e A° é o grupo R ou o grupo (CH2) 2n+i-X-R', eventualmente na presença de agentes de acoplamento ou de activadores conhecidos pelos peritos, para fornecer um composto de fórmula geral (VI), em que Rl e R2, idênticos ou diferentes, representam um grupo CO-R ou C0- (CH2) 2n+i-X-R' e Px é um grupo protector

Rx-Q c) desprotecção do composto (VI), em meio ácido, para fornecer um composto de fórmula geral (I), em que G é um átomo de oxigénio, R3 é um átomo de hidrogénio e Rl e 19 R2, idênticos ou diferentes, representam um grupo CO-R ou C0- (CH2) 2n+1-X-R' .

De acordo com um outro processo particular da invenção, os compostos de fórmula geral (I), na qual G é um átomo de oxigénio, Rl e R3 representam um átomo de hidrogénio e R2 representa um grupo CO-R ou C0-(CH2)2n+i-X-R', são obtidos por um processo que compreende: a) a reacção de um composto de fórmula (VII)

(VII) com um composto de fórmula A°-C0-A2, em que A2 é um grupo reactivo seleccionado, por exemplo, entre OH e Cl, e A° é o grupo R ou o grupo (CH2) 2n+i-X-R' f eventualmente na presença de agentes de acoplamento ou de activadores conhecidos pelos peritos, para fornecer um composto de fórmula geral (VIII)

°^o

na qual R2 representa um grupo CO-R ou C0- (CH2) 2n+i-X-R'; e 20 b) desprotecção do composto de fórmula (VIII), em meio ácido ou por hidrogenação catalítica, para fornecer um composto de fórmula geral (I), em que G é um átomo de oxigénio, RI e R3 representam um átomo de hidrogénio e R2 representa um grupo CO-R ou C0- (CH2) 2n+i-X-R' ·

As etapas descritas acima podem ser efectuadas vantajosamente de acordo com os protocolos descritos por Bodai et al., Syn. Lett., 1999, 6, 759-761; Paris et al., J. Med. Chem., 1980, 23, 9-12; Scriba et al., Arch. Pharm. (Weinheim), 1993, 326, 477-481 ou Seltzman et al., Tet. Lett., 2000, 41, 3589-3592.

Os compostos de fórmula (I) de acordo com a invenção, em que G é um átomo de enxofre, R2 é um átomo de hidrogénio e Rl e R3, idênticos ou diferentes, representam um grupo CO-R ou CO-(CH2) 2n+i-X-R' r podem ser obtidos a partir do composto de fórmula (IX) pelo seguinte processo:

a) reacção do composto IX com um primeiro composto de fórmula A°-CO-A3, na qual A3 é um grupo reactivo seleccionado, por exemplo, entre OH, 0-C0-A0 e Cl, e A° é o grupo R ou o grupo (CH2) 2n+i-X-R', seguido de um segundo composto de fórmula A°-CO-A3, na qual, independentemente do primeiro composto, A3 é um grupo reactivo seleccionado, por exemplo, entre OH, 0-C0-A0 e Cl, e A° é o grupo R ou o grupo (CH2)2n+i-x-R', eventualmente na 21 presença de agentes de acoplamento ou de activadores conhecidos pelos peritos; b) desprotecção do grupo tiol pelo acetato mercúrico.

Este processo é vantajosamente efectuado de acordo com o protocolo descrito em Aveta et al., Gazz. Chim. Ital., 1986, 116 (11), 649-652.

Os compostos de fórmula (I) de acordo com a invenção, em que G é um átomo de enxofre, R2 e R3 são átomos de hidrogénio e Rl representa um grupo COR ou C0- (CH2) 2n+i-X-R', podem ser obtidos a partir do composto de fórmula (IX) pelo seguinte processo: a) reacção do composto IX com um primeiro composto de fórmula A°-C0-A3, na qual A3 é um grupo reactivo seleccionado, por exemplo, entre OH, 0-C0-A° e Cl, e A° é o grupo R ou o grupo (CH2) 2n+i“X_R', em quantidades estequiométricas, eventualmente na presença de agentes de acoplamento ou de activadores conhecidos pelos peritos; b) desprotecção do grupo tiol pelo acetato mercúrico. 0 composto de fórmula (IX) pode ser preparado por um processo que compreende: a) reacção de um 2-halogenomalonato de dimetilo com tritiltiol, para fornecer o composto de fórmula X; 22

m b) Redução das funções acetato com LiAlH4.

Os compostos de fórmula (I), em que G é um grupo N-R4 e Rl, R2 e R3, idênticos ou diferentes, representam um grupo CO-R ou um grupo C0- (CH2) 2n+i-X-R', são obtidos a partir de um composto de fórmula (I), em que G é um grupo N-R4, Rl e R3 são átomos de hidrogénio e R2 é um grupo CO-R ou um grupo C0-(CH2) 2n+i-X-R' (composto XI), de acordo com o seguinte processo:

Reacção de um composto XI com um primeiro composto de fórmula A°-C0-A2, na qual A2 é um grupo reactivo seleccionado, por exemplo, entre OH e Cl, e A° é o grupo R ou o grupo (CH2)2n+4-x-R', seguido de um segundo composto de fórmula A°-C0-A2, na qual, independentemente do primeiro composto, A2 é um grupo reactivo seleccionado, por exemplo, entre OH e Cl, e A° é o grupo R ou o grupo (CH2) 2n+:L-X-R', eventualmente na presença de agentes de acoplamento ou de activadores conhecidos pelos peritos.

Este processo é vantajosamente executado segundo o protocolo descrito em Terradas et al., J. Amer. Chem. Soc., 1993, 115, 390-396. 23

Os compostos de fórmula (I) de acordo com a invenção, em que G é um grupo N-R4, RI e R2 representam um grupo CO-R ou C0-(CH2)2n+i-X-R' e R3 é um átomo de hidrogénio, podem ser obtidos por reacção de um composto XI com um composto de fórmula A°-CO-A2, na qual A2 é um grupo reactivo seleccionado, por exemplo, entre OH e Cl e A° é o grupo R ou o grupo (CH2)2n+i-X-R', em quantidades estequiométricas, eventualmente na presença de agentes de acoplamento ou de activadores conhecidos pelos peritos.

Os compostos de fórmula (I) de acordo com a invenção, em que G é um grupo NH, Rl e R3 são átomos de hidrogénio e R2 é um grupo CO-R ou um grupo C0-(CH2) 2n+i-X-R' (composto Xla), podem ser obtidos de diferentes formas.

De acordo com um primeiro processo, efectua-se a reacção de uma molécula de 2-aminopropano-l,3-diol com um composto de fórmula A°-CO-A, na qual A é um grupo reactivo seleccionado, por exemplo, entre OH, O-CO-A0, OR'' e Cl, e A° é o grupo R ou o grupo (CH2) 2n+i-X-R', eventualmente na presença de agentes de acoplamento ou de activadores conhecidos pelos peritos.

Esta reacção pode ser efectuada através de adaptação dos protocolos descritos, por exemplo, em Daniher e Bashkin, Chem. Commun., 1998, 10, 1077-1078; Khanolkar et al., J. Med. Chem., 1996, 39, 4515-4519; Harada et al., Chem. Pharm.

Buli., 1996, 44(12), 2205-2212; Kurfuerst et al.,

Tetrahedron, 1993, 49(32), 6975-6990; Shaban et al.,

Carbohydr. Res., 1977, 59, 213-233; Putnam e Bashkin, Chem.

Commun., 2000, 767-768.

Os compostos de formula (I) de acordo com a invenção, em que G é um grupo NH, Rl e R3 são átomos de hidrogénio e R2 é um 24 grupo CO-R ou um grupo C0- (CH2) 2n+i-X-R' (composto Xla), podem ser igualmente obtidos segundo o processo seguinte: a) reacção do composto de fórmula XII com um composto de fórmula A°-CO-A, na qual A é um grupo reactivo seleccionado, por exemplo, entre OH, 0-C0-A°, OR'' e Cl e A° é o grupo R ou o grupo (CH2) 2n+i-X-R', eventualmente na presença de agentes de acoplamento ou de activadores conhecidos pelos peritos o·

para fornecer um composto de fórmula geral XIII

b) desprotecção do composto XIII.

Este processo pode ser vantajosamente realizado de acordo com o protocolo descrito em Harada et al., Chem. Pharm. Buli., 1996, 44(12), 2205-2212.

Os compostos de formula (I) de acordo com a invenção, em que G é um grupo N-R4 no qual R4 não é um átomo de hidrogénio, RI e R3 são átomos de hidrogénio e R2 é um grupo CO-R ou um grupo CO-(CH2) 2n+i-X-R' (composto Xlb), podem ser obtidos segundo o processo seguinte: 25 a) Reacção do composto de fórmula XII com um composto de fórmula A°-CO-A, na qual A é um grupo reactivo seleccionado, por exemplo, entre OH, 0-C0-A°, OR'' e Cl e A° é o grupo R ou o grupo (CH2) 2n+i-X-R'/ eventualmente na presença de agentes de acoplamento ou de activadores conhecidos pelos peritos.

para fornecer um composto de fórmula geral XIII

Kl (XUI) b) Reacção do composto XIII com um composto de tipo R4-A4, em que A4 é um grupo reactivo seleccionado, por exemplo, entre Cl ou Br, em meio básico; c) Desprotecção do composto XIII. A viabilidade, a execução e outras vantagens da invenção estão ilustradas em maior detalhe nos exemplos que se seguem, os quais devem ser considerados ilustrativos e não limitantes.

Legenda das figuras

Figura IA: Estrutura de acilgliceróis de acordo com a invenção (exemplos 2a, 2c, 4a-n).

Figura 1B: Estrutura de compostos particulares de acordo com a invenção (exemplos 5a-b). 26

Figura 2: Avaliação dos efeitos do exemplo 4a sobre o metabolismo do colesterol plasmático no rato.

Na figura 2a estão representados os efeitos do tratamento de ratos Sprague-Dawley com o exemplo 4a (300 mg/kg/d), sobre a distribuição do colesterol nas lipoparticulas avaliada por cromatografia de exclusão. Observou-se uma distribuição tipica do colesterol em várias populações de lipoparticulas de tamanhos diferentes. Além disso, no seguimento do tratamento dos animais com o exemplo 4a, observou-se uma diminuição do colesterol nas diferentes classes de lipoparticulas, particularmente nas partículas de grande tamanho (VLDL e LDL) e nas partículas de pequeno tamanho (HDL). Esta diminuição é característica dos efeitos dos activadores de PPARa.

Esta diminuição traduziu-se por uma diminuição do colesterol plasmático total como indicado na figura 2B.

Figura 3: Avaliação dos efeitos do exemplo 4a sobre o metabolismo dos triglicéridos plasmáticos no rato.

Na figura 3A estão representados os efeitos do tratamento de ratos Sprague-Dawley com o exemplo 4a (300 mg/kg/d), sobre a distribuição dos triglicéridos nas lipoparticulas avaliada por cromatografia de exclusão. Observou-se uma distribuição típica dos triglicéridos localizada principalmente numa população de lipoparticulas de grande tamanho. Além disso, no seguimento do tratamento dos animais com o exemplo 4a, observou-se uma diminuição dos triglicéridos nesta classe de lipoparticulas. Esta diminuição é característica dos efeitos dos activadores de PPARa.

Esta diminuição traduziu-se por uma diminuição dos triglicéridos plasmáticos como indicado na figura 3B. 27

Figura 4: Avaliação dos efeitos do exemplo 4a sobre o metabolismo dos fosfolipidos plasmáticos no rato.

Na figura 4A estão representados os efeitos do tratamento de ratos Sprague-Dawley com o exemplo 4a (300 mg/kg/d), sobre a distribuição dos fosfolipidos nas lipoparticulas avaliada por cromatografia de exclusão. Observou-se uma distribuição tipica dos fosfolipidos em várias populações de lipoparticulas de tamanhos diferentes. Além disso, no seguimento do tratamento dos animais com o exemplo 4a, observou-se uma diminuição dos fosfolipidos nas diferentes classes de lipoparticulas, particularmente nas partículas de grande tamanho (VLDL).

Esta diminuição traduziu-se por uma diminuição dos fosfolipidos plasmáticos totais como indicado na figura 4B.

Figura 5: Avaliação dos efeitos do exemplo 4a sobre a expressão de genes hepáticos no rato.

Na figura 5A estão representados os efeitos do tratamento de ratos Sprague-Dawley com o exemplo 4a (300 mg/kg/d), sobre a expressão hepática dos genes implicados na β-oxidação peroxissomal (ACO) ou mitocondrial (CPT-I e CPT-II) dos ácidos gordos. Observou-se uma forte activação da expressão hepática de ACO, um dos principais genes-alvo de PPARa, que sugere uma forte activação da capacidade de catabolismo dos ácidos gordos pelos peroxissomas hepáticos. Em paralelo,

observámos um aumento mais fraco da expressão dos genes CPT-I e CPT-II, que sugere uma activação da capacidade de catabolismo dos ácidos gordos pelas mitocôndrias hepáticas.

Na Figura 5B estão representados os efeitos do tratamento de ratos Sprague-Dawley com o exemplo 4a (300 mg/kg/d), sobre a expressão hepática dos genes implicados no transporte do colesterol (Apo AI) ou dos triglicéridos (Apo CIII).

Observou-se uma ligeira diminuição da expressão hepática de 28

Apo AI, que poderia explicar, em parte, a diminuição da taxa plasmática de colesterol. Observou-se igualmente uma diminuição mais nítida da expressão de Apo CHI, que poderia explicar, em parte, a diminuição da taxa plasmática de triglicéridos.

Figura 6: Avaliação dos efeitos do exemplo 4a sobre o metabolismo do colesterol e dos triglicéridos plasmáticos no rato Zucker.

Na figura 6A estão representados os efeitos do tratamento de ratos Zucker com o exemplo 4a (300 mg/kg/d), sobre a taxa plasmática de colesterol total. Os ratos Zucker são ratos resistentes à acção da insulina, caracterizados por um aumento gradual da taxa plasmática de colesterol. A figura 6A mostra esta evolução no grupo de controlo. Ela ilustra igualmente que esta evolução foi refreada pelo tratamento dos animais com o exemplo 4a.

Na figura 6B estão representados os efeitos do tratamento de ratos Zucker com o exemplo 4a (300 mg/kg/d), sobre a taxa plasmática de triglicéridos. Os ratos Zucker são igualmente caracterizados por um aumento gradual da taxa plasmática de triglicéridos. A figura 6B mostra esta evolução no grupo de controlo. Ela ilustra igualmente que esta evolução foi fortemente abrandada pelo tratamento dos animais com o exemplo 4a.

Figura 7: Avaliação dos efeitos do exemplo 4a sobre a taxa plasmática de insulina e o equilíbrio glucídico no rato Zucker.

Na figura 7 estão representados os efeitos do tratamento de ratos Zucker com o exemplo 4a (300 mg/kg/d), sobre as taxas plasmáticas de insulina e de glucose. Os ratos Zucker são ratos resistentes à acção da insulina, caracterizados por um 29 aumento gradual compensador da taxa plasmática de insulina. A figura 7A mostra esta evolução no grupo de controlo. A figura 7B mostra que esta evolução foi refreada pelo tratamento dos animais com o exemplo 4a, especialmente após 14 dias. Sendo as taxas de glucose equivalentes nos dois grupos (figuras 7A e 7B), o tratamento com o exemplo 4a aumentou, assim, a sensibilidade à insulina.

Figura 8: Avaliação dos efeitos do exemplo 4a sobre a taxa de insulina durante um teste de tolerância à glucose no rato Zucker.

Na figura 8 estão representados os efeitos do tratamento de ratos Zucker com o exemplo 4a (300 mg/kg/d), sobre a taxa plasmática de insulina durante um teste de tolerância à glucose. Os resultados mostram que os ratos tratados com o exemplo 4a utilizaram menos insulina para responder à injecção de glucose efectuada no inicio do teste. O tratamento com o exemplo 4a teve, pois, como efeito aumentar a sensibilidade à insulina.

Figura 9: Avaliação dos efeitos do exemplo 4g sobre as taxas de lipidos plasmáticos e sobre a expressão de um gene hepático no rato.

Nas figuras 9A e 9B estão representados os efeitos do tratamento de ratos Wistar com o exemplo 4g (300 mg/kg/d), sobre a taxa plasmática de colesterol e sobre a concentração plasmática dos triglicéridos, respectivamente, após 14 dias de tratamento. Os resultados mostram que o tratamento teve como efeito uma diminuição nitida das taxas circulantes de colesterol e de triglicéridos. Na figura 9C está representado o efeito do tratamento de ratos Wistar com o exemplo 4g (300 mg/kg/d), sobre a expressão hepática de um gene implicado na β-oxidação peroxissomal dos ácidos gordos (ACO). Observou-se 30 uma forte activação da expressão hepática de ACO, um dos principais genes-alvo de PPARa.

Figura 10: Avaliação do efeito dose-dependente do exemplo 4a sobre o metabolismo dos triglicéridos plasmáticos no rato Zucker.

Na figura 10 estão representados os efeitos do tratamento de ratos Zucker com o exemplo 4a, testado em doses de 0 a 600 mg/kg/d, sobre a taxa plasmática de triglicéridos. Ela mostra uma diminuição gradual desta concentração em função da dose de composto.

Figura 11: Avaliação dos efeitos do exemplo 4a sobre a activação de PPARa in vitro.

Na figura 11 estão representados os efeitos do exemplo 4a sobre a activação de PPARa avaliada in vitro em células

HepG2, utilizando uma quimera constituída pelo domínio de ligação ao ADN do factor de transcrição Gal4 e pelo domínio de ligação do ligando de PPARa. Os resultados mostram que o exemplo 4a foi capaz de activar fortemente o receptor nuclear PPARa, e isto de uma forma dose-dependente.

Figura 12. Avaliação dos efeitos do exemplo 4a sobre a expressão do gene ABCAl in vitro nos macrófagos humanos.

Na figura 12 estão representados os efeitos do exemplo 4a, solubilizado de acordo com o exemplo 6, sobre a expressão do gene ABCA-1 in vitro nos macrófagos humanos preparados de acordo com o exemplo 12. Os resultados mostram que o exemplo 4a foi capaz de activar fortemente a expressão do gene ABCAl nos macrófagos humanos, e isto de uma forma dose-dependente. 31

EXEMPLOS EXEMPLO 1: Preparação de derivados de ácidos gordos

Exemplo la: Preparação de ácido tetradeciltioacético

Adicionou-se hidróxido de potássio (34,30 g; 0,611 moles), ácido mercaptoacético (20,9 ml; 0,294 moles) e 1-bromo-tetradecano (50 ml; 0,184 moles), por esta ordem, a metanol (400 ml). Esta mistura foi colocada sob agitação durante uma noite à temperatura ambiente. À mistura reaccional precedente adicionou-se uma solução de ácido clorídrico concentrado (60 ml) dissolvido em água (800 ml) . O ácido tetradeciltioacético precipitou. A mistura foi deixada sob agitação durante uma noite à temperatura ambiente. O precipitado foi depois filtrado, lavado cinco vezes com água e seco no exsicador. O produto foi recristalizado em metanol (rendimento: 94%).

Rf (CH2C12 :MeOH 9:1): 0,60 P . f.: 67-68°C IV: vCO ácido 1726 e 1684 cm-1 RMN (ΧΗ, CDC13) : 0, 84-0, 95 (t, 3H, -CH3, J=6,5 Hz); 1,20-1,45 (m, 22H, -CH2-) ; 1,55-1, 69 (quint, 2H, -CH2-CH2-S-, J= 6,5

Hz); 2,63-2,72 (t, 2H, CH2-CH2-S-, J=7,3 Hz); 3,27 (s, 2H, S-CH2-COOH) EM: M-l = 287 EXEMPLO lb: Preparação de ácido 4-(dodeciltio)butanóico

Colocou-se sob agitação, à temperatura ambiente e sob atmosfera inerte, dodecanotiol (2,01 g; 10 mmoles) e bromobutirato de etilo (1,971 g; 10 mmoles). Adicionou-se lentamente hidróxido de potássio (1,36 g; 21 mmoles) dissolvido em 50 ml de etanol. A mistura reaccional foi 32 levada ao refluxo durante 3 horas. 0 etanol foi evaporado sob vácuo. 0 resíduo foi recuperado em água e acidificado. 0 precipitado formado foi filtrado, lavado com água e seco (rendimento: 90%).

Rf (CH2C12 :MeOH 9:1): 0,46 IV: vCO ácido 1689 cm-1 RMN (:Η, CDC13) : 0,86-0,91 (t, 3H, -CH3, J=6,2 Hz); 1,25-1,45 (m, 18H, -CH2_) ; 1,53-1, 63 (quint, 2H, -CH2-CH2-S-, J=6,7 Hz); 1,87-2, 00 (quint, 2H, -CH2-S-CH2-CH2-CH2-COOH, J=7,2 Hz); 2,47-2,55 (m, 4H, -CH2-S-CH2-CH2-CH2-COOH) ; 2,55-2,62 (t, 2H, -CH2-S-CH2-CH2-CH2-COOH) EM: M-l = 287 EXEMPLO lc: Preparação de ácido 6- (deciltio)hexanóico

Colocou-se sob agitação, à temperatura ambiente e sob atmosfera inerte, decanotiol (4,57 g; 25 mmoles) e ácido 4-bromobutírico (5 g; 25 mmoles). Adicionou-se lentamente hidróxido de potássio dissolvido em 50 ml de etanol. A mistura reaccional foi levada ao refluxo durante 3 horas. O etanol foi evaporado sob vácuo. O resíduo foi recuperado em água e acidificado. O precipitado formado foi filtrado, lavado com água e seco (rendimento: 95%).

Rf (CH2C12 :MeOH 9:1): 0,37 IV: vCO ácido 1690 cm-1 RMN (XH, CDCI3) : 0,86-0,91 (t, 3H, -CH3, J=6,5 Hz); 1,22-1,41 (m, 14H, -CH2-) ; 1,42-1,50 (m, 2H, CH2-S-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2- COOH) ; 1,53-1, 75 (m, 6H, -CH2-CH2-S-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) ; 2,35-2,42 (t, 2H, -CH2-S-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) ; 2,48-2,55 (m, 4H, -CH2-S-CH2-) EM: M-l = 287 33 EXEMPLO ld: Preparação de ácido tetradecilselenoacético

Preparação de tetradecildisselenieto

Sob atmosfera inerte, introduziu-se selénio i (1,19 g; 15 mmoles) numa mistura de THF/água (1/1) (50 ml) . A mistura reaccional foi arrefecida num banho de gelo antes de se adicionar lentamente tetraborohidreto de sódio (1,325 g; 35 mmoles). Adicionou-se uma segunda fracção de selénio (1,19 g; 15 mmoles). A mistura reaccional foi mantida sob agitação à temperatura ambiente durante 15 minutos e, em seguida, foi aquecida ao refluxo para dissolver todos os reagentes. Adicionou-se bromotetradecano (9 ml; 30 mmoles) dissolvido em 25 ml de THF. Deixou-se a mistura reaccional sob agitação à temperatura ambiente durante 3 horas. O meio reaccional foi depois extraido com diclorometano. As fases orgânicas foram combinadas, secas com sulfato de magnésio, filtradas e levadas à secura. O produto foi utilizado sem outra purificação.

Rf (éter de petróleo): 0,77 P.f.: 43°C (cristais amarelos) IV: vCH 2960-2850 cm'1 RMN (ΧΗ, CDCls) : 0, 87-0, 93 (t, 6H, -CH3, J=6,5 Hz); 1,20-1,48 (m, 40H, -CH2-) ; 1, 62-1, 80 (m, 4H, -CH2-CH2-Se-) ; 2,88-2,96 (t, 4H, -CH2-CH2-Se-) .

Preparação de ácido tetradecilselenoacético

Sob atmosfera inerte, dissolveu-se ditetradecildisselenieto (8,5 g; 17 mmoles) numa mistura de THF/água (150 ml/50 ml) e arrefeceu-se num banho de gelo. Adicionou-se lentamente tetraborohidreto de sódio (2,9 g; 61 mmoles) (a solução sofreu descoloração) e, em seguida, adicionou-se ácido 34 bromoacético (8,5 g; 61 mmoles) dissolvido numa mistura de THF/água (25 ml/25 ml). A mistura reaccional foi mantida sob agitação à temperatura ambiente durante 6 horas. A mistura reaccional foi extraída com éter, e a fase aquosa foi acidificada. 0 precipitado obtido foi filtrado, lavado várias vezes com água e seco (rendimento: 29%).

Rf (CH2Cl2:MeOH 9:1): 0,60 P.f.: 68 °C IV: vCO ácido 1719 e 1680 cnT1 RMN (ΤΗ, CDC13) : 0, 85-0, 95 (t, 3H, -CH3, J=6,5 Hz); 1,25-1,48 (m, 22H, -CH2_) ; 1,65-1, 78 (quint, 2H, -CH2-CH2-Se-, J=6,5

Hz); 2,78-2,84 (t, 2H, -CH2-CH2-Se-, J=7 Hz); 3,18 (s, 2H, Se-CH2-COOH) EM: M-l = 335 EXEMPLO le: Preparação de ácido tetradecilsulfoxiacético

Dissolveu-se ácido tetradeciltioacético (5 g; 17,4 mmoles) (exemplo la) numa mistura de metanol/diclorometano (160 ml/80 ml). A mistura reaccional foi colocada sob agitação e arrefecida num banho de gelo, antes de se adicionar lentamente Oxone® (12,8 g; 21 mmoles) dissolvido em água (160 ml) . A mistura reaccional foi mantida sob agitação à temperatura ambiente durante 3 horas. Os solventes foram evaporados sob vácuo. O precipitado formado na fase aquosa residual foi exposto ao ar, lavado várias vezes com água e seco (rendimento: 90%).

Rf (CH2C12 :MeOH 9:1): 0,27 IV: vCO ácido 1723 e 1690 cm-1 RMN ^H, DMSO): 0,80-0,92 (t, 3H, -CH3-, J=6,4 Hz); 1,19-1,50 (m, 22H, -CH2-); 1,55-1,71 (quint, 2H, -CH2-CH2-SO-) ; 2,70- 2,89 (t, 2H, -CH2-CH2-SO-CH2-COOH, J=6,7 Hz); 3,52-3, 70 (d, 35 1Η, -CH2-SO-CH2-COOH, J=14,5 Hz); 3,80-3,95 (d, 1H, -CH2-SO- CH2-COOH, J=14,1 Hz). EM: M+l = 305; M+23 = 327 (M+Na+) ; M+39 = 343 (M+K+) EXEMPLO lf: Preparação de ácido 6-(decilsulfoxi)hexanóico O produto foi preparado de acordo com o procedimento previamente descrito (exemplo le), a partir de ácido 6-(deciltio)hexanóico (exemplo lc). Rendimento: 94%.

Rf (CH2C12 :MeOH 9:1): 0,18 RMN (:H, CDCI3) : 0,86-0,91 (t, 3H, -CH3, J=6,8 Hz); 1,20-1,40 (m, 14H, -CH2-) ; 1, 40-1, 60 (m, 2H, CH2-SO-CH2-CH2- CH2-CH2-CH2-COOH) ; 1,63-1,95 (m, 6H, -CH2-CH2-S-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) ; 2,35-2, 42 (m, 3H, -CH2-S-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH e -CH2-SO-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) ; 2,60-2,71 (m, 1H, -CH2-SO-CH2-CH2-CH2- CH2-CH2-COOH) ; 2, 75-2,85 (m, 1H, -CH2-SO- (CH2) 5-COOH) ; 2,80- 3,01 (m, 1H, -CHz-SO-(CH2) 5-COOH) . EXEMPLO lg: Preparação de ácido tetradecilsulfonilacético

Dissolveu-se ácido tetradeciltioacético (5 g; 17,4 mmoles) (exemplo la) numa mistura de metanol/diclorometano (160 ml/80 ml). A mistura reaccional foi colocada sob agitação e arrefecida num banho de gelo, antes de se adicionar lentamente Oxone® (21,8 g; 35 mmoles) dissolvido em água (160 ml) . A mistura reaccional foi mantida sob agitação à temperatura ambiente durante 3 horas. Os solventes foram evaporados sob vácuo. O precipitado formado na fase aquosa residual foi exposto ao ar, lavado várias vezes com água e seco (rendimento: 89%).

Rf (CH2C12 :MeOH 9:1): 0,21 IV: vCO ácido 1701 cm-1 36 RMN (XH, DMSO) : 0, 85-0, 96 (t, 3H, -CH3, J=6 Hz); 1,20-1,40 (m, 22H, -CH2-) ; 1,40-1,55 (m, 2H,-CH2-CH2-CH2-S02-) ; 1,80-1,96 (m, 2H, -CH2-CH2-S02-) ; 3,22-3,34 (t, 2H, -CH2-CH2-S02-CH2-C00H, J=8 Hz); 4,01 (S, 2H, -CH2-S02-CH2-C00H) . EM: M-l = 319 EXEMPLO lh: Preparação de ácido 6-(decilsulfonil)hexanóico O produto foi obtido de acordo com o procedimento previamente descrito (exemplo lg), a partir de ácido 6-(deciltio)hexanóico (exemplo lc). Rendimento: 87%.

Rf (CH2C12 :MeOH 9:1) : 0,15 IV: vCO ácido 1689 cm”1 RMN ^H, CDC13) : 0, 85-0, 96 (t, 3H, _CH3, J=6,5 Hz); 1,22-1,40 (m, 12H, -CH2-); 1,40-1,61 (m, 4H, -S02-CH2-CH2-CH2-) ; 1,65- 1,95 (m, 6H, - CH2-CH2-S02-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-C00H) ; 2,35-2,46 (m, 2H, -CH2-COOH) ; 2, 60-2, 84 (m, 2H, -CH2-S02-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH); 2,90-3,02 (m, 2H, -CH2-S02-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-C00H) . EXEMPLO li: Preparação de ácido docosiltioacético O produto foi obtido de acordo com 0 procedimento previamente descrito (exemplo la), a partir de ácido mercaptoacético e de bromodocosano.

Rendimento: 90%.

Rf ((CH2C)2:MeOH 9:1): 0,62 IV: vCO ácido 1728 e 1685 cm”1 RMN (XH, CDCI3) : 0, 83-0, 94 (t, 3H, -CH3, J=6,6 Hz); 1,18-1,48 (m, 38H, -CH2_) ; 1,55-1, 69 (quint, 2H, -CH2-CH2-S-, J=6,7 Hz); 2,63-2, 72 (t, 2H, CH2-CH2-S-, J=7,3 Hz); 3,26 (s, 2H, S-CH2- COOH) 37 EXEMPLO 2 : Preparação de monoacilgliceróis EXEMPLO 2a: Preparação de 1-tetradeciltioacetilqlicerol

Preparação de tetradeciltioacetato de (2,3-Q-isopropilideno)-propilo

Num balão imerso num banho de gelo, dissolveu-se ácido tetradeciltioacético (4 g; 13,86 mmoles) em tetra-hidrofurano (100 ml), antes de se adicionar EDCI (2,658 g; 13,86 mmoles), dimetilaminopiridina (1,694 g; 13,86 mmoles) e solketal (1,72 ml; 13,86 mmoles), por esta ordem. A mistura reaccional foi deixada sob agitação à temperatura ambiente durante 4 horas. O solvente foi evaporado sob vácuo. O resíduo foi recuperado em diclorometano, lavado com uma solução aquosa de HC1 IN, depois com uma solução aquosa de NaHC03 a 10% e, finalmente, com uma solução saturada de NaCl. A fase orgânica foi seca com sulfato de magnésio, filtrada e evaporada sob vácuo. O óleo residual obtido foi purificado por cromatografia em gel de sílica (acetato de etilo:ciclohexano 1:9). O produto foi obtido sob a forma de um óleo amarelo (rendimento: 80%).

Rf (ciclohexano:acetato de etilo, 8:2): 0,65 IV: vCO éster 1736 cm-1 RMN (XH, CDC13) : 0,86 (t, 3H, -CH3, J=7,8 Hz); 1,25 (m, 20H, -CH2-) ; 1,33 (s, 3H, CH3 isopropilideno) ; 1,37 (s, 3H, CH3 isopropilideno) ; 1,59 (m, 4H, OCO-CH2-CH2-CH2-) ; 2,62 (t, 2H, -O-CO-CH2-S-CH2-, J=7,40 Hz); 3,25 (s, 2H, -0-C0-CH2-S-CH2) ; 3,75 (m, 1H, -C0-0-CH2-CH (isopropilideno) ) ; 4,08 (m, 2H, -CO-0-CH2CHCH2 (isopropilideno) ) ; 4,18 (m, 1H, -C0-0-CH2-isopropilideno); 4,35 (m, 1H, -CO-0-CH2-isopropilideno). 38

Preparação de 1-tetradeciltioacetilqlicerol

Dissolveu-se tetradeciltioacetato de (2,3-0-isopropilideno)-propilo (4,163 g; 10,356 mmoles) em ácido acético (60 ml) e deixou-se sob agitação à temperatura ambiente. Após 11 dias de reacção, a mistura reaccional foi diluída com água e depois extraída com acetato de etilo. A fase orgânica foi lavada com uma solução aquosa saturada de NaCl, seca com sulfato de magnésio e filtrada. O solvente foi evaporado. O pó branco obtido foi recristalizado em heptano (rendimento: 90%) .

Rf (acetato de etilo:ciclohexano 5:5): 0,30

P.f.: 63-65°C IV: vCO éster 1720 cnf1 RMN (ΧΗ, CDC13) : 0,89 (t, 3H, _CH3, J=6,6 Hz); 1,28 (m, 20H, _ CH2_); 1,59 (m, 4H, -CH2-CH2-CH2-S-) ; 2,64 (t, 2H, CH2-CH2-S-, J=7,23 Hz); 3,26 (s, 2H, S-CH2-COOH) ; 3,64 (m, 2H, -COO-CH2- CHOH-CH2OH) ; 3,97 (m, 1H, -COO-CH2-CHOH-CH2OH) ; 4,27 (m, 2H, -COO-CH2-CHOH-CH2OH) EM: M+23 = 385 (M+Na+) (M+H não detectado) EXEMPLO 2b: Preparação de 1-palmitoílglicerol

Este composto foi sintetizado de acordo com o procedimento previamente descrito (exemplo 2a), a partir de solketal e de ácido palmítico.

Palmitato de (2,3-0-isopropilideno)propilo rendimento: 55%

Rf (CH2C12) : 0,35

P . f.: 32-33°C IV: vCO éster 1733 cnf1 39 RMN (1H, CDC13): 0,89 (t, 3H, -CH3, J=6,6 Hz); 1,27 (m, 24H, -CH2-); 1,39 (s, 3H, CH3 isopropilideno) ; 1,45 (s, 3H, CH3 isopropilideno) ; 1,62 (m, 4H, OCO-CH2-CH2-CH2-) ; 2,32 (t, 2h, -0-C0-CH2-CH2-CH2-, J=7,40 Hz); 3,75 (dd, 1H, -C0-0-CH2- CH(isopropilideno), J=8,3 Hz e J=2,l Hz); 4,10 (m, 2H, -CO-O-CH2-CHCH2 (isopropilideno) ) ; 4,18 (dd, 1H, -C0-0-CH2- isopropilideno, J=ll,6 Hz e J=4,6 Hz); 4,33 (m, 1 H, -CO-O-CH2-isopropilideno). 1-palmitoílglicerol rendimento: 84%

Rf (acetato de etilo:ciclohexano 5:5): 0,30

P . f.: 72-74°C IV: vCO éster 1730 cm-1 RMN (XH, CDC13) : 0,89 (t, 3H, -CH3, J=6,5 Hz); 1,26 (m, 24H, -CH2-) ; 1,64 (m, 2H, OCO-CH2-CH2-CH2-) ; 2,36 (t, 2H, -0-C0-CH2- ch2-ch2- r J=7,40 Hz); 3,60 (dd, 1H, -co-o-ch2-choh-ch2oh, J=ll,8 Hz e J=6,1 Hz); 3, 71 (dd, 1H, -co-o-ch2-choh-ch2oh, J=ll,8 Hz e J=3,9 Hz); 3,94 (m, 1H, -C0-0-CH2-CH0H-CH20H); 4,19 (m, 2H, -C0-0-CH2-CH0H-CH20H) . EXEMPLO 2c: Preparação de 2-tetradeciltioacetilglicerol

Preparação de 1,3-benzilidenoglicerol

Dissolveu-se glicerol (30 g; 0,326 moles), benzaldeído (34,5 g; 0,326 moles) e ácido p-toluenossulfónico (50 mg) em 350 ml de tolueno e colocou-se a solução sob refluxo, num eguipamento de Dean-Stark, durante 18 horas. A mistura reaccional foi levada à secura. O produto residual foi purificado por cromatografia em gel de sílica (eluente -ciclohexano:acetato de etilo 8:2 e depois 7:3) e depois recristalizado (rendimento: 20%) 40

Rf (acetato de etilo:ciclohexano 5:5): 0,34 IV: vOH 3286 crtT1 RMN ^H, CDCI3) : 3,19 (sl, 1H permutável, -OH); 3,64 (sl, 1H, -O-CH2-CHOH-CH2O-) ; 3,99-4,16 (dd, 2H, -O-CHaHb-CHOH-CHaHbO-, J=l,l Hz e J=10,4 Hz); 4,17-4,23 (dd, 2H, -O-CHaHb-CHOH-CHaHbO-, J=l,6 Hz e J=ll,5 Hz); 5,57 (s, 1H, Φ-CH-) 7,34-7,45 (m, 3H, H aromáticos); 7,49-7,55 (m, 2H, H aromáticos).

Preparação de tetradeciltioacetato de (1,3-O-benzilideno)-propilo

Num balão imerso num banho de gelo, dissolveu-se ácido tetradeciltioacético (0,800 g; 2,774 mmoles) em THF (75 ml), antes de se adicionar edci (0,532 g; 2,774 mmoles), dimetilaminopiridina (0,339 g; 2,774 mmoles) e 1,3-benzilidenoglicerol (0,5 g; 2,774 mmoles), por esta ordem. A mistura foi deixada sob agitação à temperatura ambiente durante 16 horas. O solvente foi evaporado. O resíduo obtido foi recuperado em diclorometano, lavado com uma solução de ácido clorídrico IN, depois com uma solução de carbonato de potássio a 10% e, finalmente, com uma solução aquosa saturada de sal. A fase orgânica foi seca com MgS04, filtrada e levada à secura. O resíduo foi recuperado em éter de petróleo. O precipitado formado foi filtrado e purificado por cromatografia em gel de sílica (eluente - acetato de etilo:ciclohexano 2:8), e permitiu obter o produto desejado sob a forma de um pó branco (rendimento: 50%).

Rf (acetato de etilo:ciclohexano 2:8): 0,53

P.f.: 51-53°C IV: vCO éster 1723 crrf1 CDCI3) : 0,85-0,96 (t, 3H, CH3, J=6,8 Hz); 1, 19-1,44 -CH2) ; 1,52-1,69 (m, 4H, -CH2-CH2-CH2-S-) ; 2, 62-2,80 41 (t, 2H, -CH2-CH2-CH2-S-, J=7,2 Hz); 3,34 (s, 2H, -CH2-S-CH2- C00-); 4,12-4,29 (dd, 2H, -O-CHaHb-CHOH-CHaHbO-, J=l,7 Hz e J=13,l Hz); 4,30-4,41 (dd, 2H, -O-CHaHb-CHOH-CHaHbO-, J=l,3 Hz e J=13,l Hz); 4, 75-4, 79 (t, 1H, -0-CH2-CH0H-CH20-, J=l,7

Hz); 5,59 (s, 1H, Φ-CH-); 7,35-7,45 (m, 3H, H aromáticos); 7,48-7,57 (m, 2H, H aromáticos).

Preparação de 2-tetradeciltioacetílglicerol

Dissolveu-se tetradeciltioacetato de (1,3-O-benzilideno)-propilo (0,576 g; 1,278 mmoles) numa mistura de dioxano e de trietilborato (50:50, v/v), antes de se adicionar ácido bórico (0,317 g; 5,112 mmoles). A mistura reaccional foi aquecida a 100°C durante 4 horas. Adicionaram-se ainda 2 equivalentes de ácido bórico (0,158 g; 2,556 mmoles) mais 2 equivalentes, após 5,5 horas e 7 horas de reacção. Após 24 horas de reacção, evaporou-se o trietilborato. O resíduo foi recuperado em acetato de etilo e lavado com água. A fase aquosa foi neutralizada com NaHC03 e depois extraída com diclorometano. A fase orgânica foi lavada com água saturada com sal, seca com MgS04, filtrada e levada à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica (eluente: acetato de etilo:ciclohexano 5:5) (rendimento: 62%) .

Rf (acetato de etilo:ciclohexano 7:3): 0,51 IV: vCO éster 1739 cm-1 RMN (XH, CDC13) : 0, 82-0,95 (t, 3H, -CH3, J=6,9 Hz); 1,15-1,35 (m, 22H, -CH2-); 1,55-1, 68 (m, 2H, -CH2-CH2-S-) ; 2,23 (sl, 2H, OH); 2,65 (m, 2H, CH2-CH2-S-) ; 3,26 (s, 2H, S-CH2-COOH) ; 3,64-3,73 (m, 4H, -COO-CH2-CHOH-CH2OH) ; 3,97 (m, 1H, -COO-CH2-CHOH-CH2OH) . 42 EXEMPLO 3: Preparação de 1,3-diacilgliceróis EXEMPLO 3a: Preparação de 1,3-dipalmitoílqlicerol

Dissolveu-se glicerol (10 g; 0,109 moles; 1 eq), ácido palmitico (55, 69 g; 0,217 moles; 2 eq), diciclohexilcarbodi-imida (44,77 g; 0,217 moles; 2 eq) e dimetilaminopiridina (26,51 g; 0,217 moles; 2 eq) em diclorometano. A mistura reaccional foi colocada sob agitação à temperatura ambiente durante 48 horas. A diciclohexilureia formada foi filtrada e lavada várias vezes com diclorometano. O filtrado foi levado à secura. O produto residual foi purificado por cromatografia em gel de sílica (eluente: diclorometano) (rendimento: 45%). Rf (CH2C12) : 0,30 P.f.: 70-73 °C IV: vCO éster 1735 e 1716 crrT1 RMN (ΧΗ, CDC13) : 0,86-91 (t, 6H, -CH3, J=6,5 Hz); 1,27 (m, 48H, -CH2-); 1,60-1,65 (quint, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7,4 Hz); 2,32-2,38 (t, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7,6 Hz); 2,51-2,52 (d, 1H, OH (permutável)); 4,06-4,21 (m, 5H,-CH2-CH-CH2) EM: M+23 = 591 (M+Na+) ; M+39 = 607 (M+K+) ; (M+H não detectada) EXEMPLO 3b: Preparação de 1,3-dilinoleílglicerol

Este composto foi obtido de acordo com o procedimento previamente descrito (exemplo 3a), a partir de glicerol e de ácido linoleico. O produto foi obtido sob a forma de um óleo incolor (rendimento: 26%).

Rf (CH2C12) : 0,30 IV: vCO éster 1743 e 1719 cnV1 RMN (XH, CDC13) : 0, 83-0, 93 (t, 6H, _CH3, J=6,5 Hz); 1,15-1,44 (m, 28H, -CH2-) ; 1,55-1, 70 (quint, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7,4 Hz); 1,90-2,15 (m, 8H, - CH2-CH=CH-CH2-CH=CH-CH2-); 2,30-2,41 (t, 43 4Η, OCOCH2-CH2- J=7,6 Hz); 2,48-2,52 (d, 1H, OH (permutável)); 2,70-2,83 (t, 4H, -CH2-CH=CH-CH2-CH=CH-CH2-) ; 4,05-4,25 (m, 5H, -CHaHb-CH-CHaHb-) ; 5,25-5,46 (m, 8H, -CH2-CH=CH-CH2-CH=CH-CH2-) EM: M+23 = 639 (M+Na+) ; M+39 = 655 (M+K+) ; (M+H não detectada) exemplo 3c: Preparação de 1,3-diestearilglicerol

Este composto foi obtido de acordo com o procedimento previamente descrito (exemplo 3a), a partir de glicerol e de ácido esteárico. O produto foi obtido sob a forma de um pó branco (rendimento: 21%).

Rf (CH2C12) : 0,30 IV: vCO éster 1735 e 1716 cnT1 RMN (XH, CDCI3) : 0,83-0,91 (t, 6H, -CH3, J=6,5 Hz); 1,27 (m, 56H, -CH2-); 1,59-1,66 (quint, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7,4 Hz); 2,33-2,38 (t, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7,5 Hz); 2,45-2,47 (d, 1H, OH (permutável), J=4,3 Hz); 4,08-4,23 (m, 5H, _CHaHb-CH-CHaHb-). EM: M+23 = 647 (M+Na+); (M+H não detectada) EXEMPLO 3d: Preparação de 1,3-dioleílglicerol

Este composto foi obtido de acordo com o procedimento previamente descrito (exemplo 3a), a partir de glicerol e de ácido oleico. O produto foi obtido sob a forma de um óleo incolor (rendimento: 15%).

Rf (CH2C12) : 0,23 IV: vCO éster 1743 e 1720 cm-1 RMN (:H, CDCI3) : 0,89 (t, 6H, -CH3, J=7,2 Hz); 1,30 (m, 40H, - CH2-); 1,64 (quint, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7,4 Hz); 2,02 (m, 8H, - CH2-CH=CH-CH2-) ; 2,36 (t, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7,2 Hz); 2,45 (d, 1H, OH (permutável), J=4,2 Hz); 4,18 (m, 5H, -CHaHb-CH-

ChaHb) ; 5,35 (m, 4H, -CH2-CH=CH-CH2-) 44 EM: M+23 = 643 (M+Na+) ; (M+H não detectada) EXEMPLO 3e: Preparação de 1,3-ditetradecanoílqlicerol

Este composto foi obtido de acordo com o procedimento previamente descrito (exemplo 3a), a partir de glicerol e de ácido tetradecanóico. 0 produto foi obtido sob a forma de um pó branco (rendimento: 30%).

Rf (CH2C12) : 0,30 IV: vCO éster 1733 e 1707 cm-1 RMN (XH, CDC13) : 0,89 (t, 6H, -CH3, J=6,5 Hz); 1,26 (m, 40H, -CH2-) ; 1,62 (quint, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7,4 Hz); 2,36 (t, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7,5 Hz); 2,45 (d, 1H, OH (permutável), J=4,3

Hz); 4,15 (m, 5H, -CHaHb-CH-CHa-Hb-). EXEMPLO 3f: Preparação de l-oleíl-3-palmitoílglicerol

Dissolveu-se palmitato de glicerol (exemplo 2b) (5,516 g; 0,017 moles) em diclorometano (500 ml), antes de se adicionar diciclohexilcarbodiimida (5,165 g; 0,025 moles), dimetil-aminopiridina (3,058 g; 0,025 moles) e ácido oleico (4,714 g; O, 017 moles). A mistura reaccional foi mantida sob agitação à temperatura ambiente durante 24 horas. O precipitado de diciclohexilureia foi filtrado e lavado com diclorometano, e o filtrado foi evaporado sob vácuo. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em gel de sílica (eluente: CH2C12) e permitiu obter o composto desejado sob a forma de um sólido branco (rendimento: 23%) .

Rf (CH2C12) : 0,24

P. f.: 30°C IV: VCO éster 1731 e 1710 cm-1 RMN (XH, CDC13) : 087 (t, 6H, -CH3, J=6,5 Hz); 1,26 (m, 44H, - CH2-) ; 1,62 (quint, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7,4 Hz); 2,01 (m, 4H, - 45 CH2-CH=CH-CH2-) ; 2,36 (t, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7,3 Hz); 2,465 (d, 1H, OH (permutável), J=4,3 Hz); 4,17 (m, 5H, -CHaHb-CH- CHaHb-); 5,34 (m, 4H, -CH2-CH=CH-CH2-) EM: M+23 = 617 (M+Na+) ; (M+H não detectada) EXEMPLO 4: Preparação de 1,2,3-triacilgliceróis EXEMPLO 4a: Preparação de 1,2,3-tritetradeciltioacetil-glicerol

Dissolveu-se glicerol (1 g; 10,86 mmoles) em diclorometano (200 ml), antes de se adicionar diciclohexilcarbodiimida (7,84 g; 38,01 mmoles), dimetilaminopiridina (4,64 g; 38,01 mmoles) e ácido tetradeciltioacético (9,40 g; 32,58 moles). A mistura foi deixada sob agitação à temperatura ambiente. Após 48 horas de reacção, o precipitado de diciclohexilureia foi filtrado e lavado várias vezes com diclorometano, e o filtrado foi evaporado. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em gel de sílica (CH2C12:ciclohexano 4:6). O composto 1,2,3-tritetradeciltioacetilglicerol foi obtido sob a forma de um pó branco (rendimento: 65%).

Rf (CH2C12:ciclohexano 7:3): 0,47 P . f . : 57°C IV: vCO éster 1738 e 1722 cm-1 RMN (1H, CDC13) : 0,89 (t, 9H, -CH3, J=6,5 Hz); 1,26 (m, 66H, -CH2-) ; 1,62 (m, 6H, -CH2-CH2-CH2-S-) ; 2,63 (t, 6H, CH2-CH2-S-, J=7,3 Hz); 3,23 (S, 6H, S-CH2-COOH); 4,27 (dd, 2H, -CHaHb-CH-CHaHb-, J=12 Hz e J= 6Hz); 4,39 (dd, 2H, -CHaHb-CH-CHaHb-, J=12 Hz e J=4,3 Hz); 5,34 (m, 1H, -CHaHb-CH-CHaHb-) EM: M+23 = 925 (M+Na+) ; M+39 = 941 (M+K+) ; 903 (M+H não detectada) 46 EXEMPLO 4b: Preparação de 1,2,3-tri(4-dodeciltio)butanoíl-

Este composto foi obtido de acordo com o procedimento previamente descrito (exemplo 4a), a partir de ácido 4-(dodeciltio)butanóico (exemplo lb) e de glicerol.

Rf (CH2C12:ciclohexano 7:3): 0,43 IV: vCO éster 1738 e 1727 cm-1 RMN (XH, CDC13) : 0, 84-0, 92 (t, 9H, -CH3, J=6,3 Hz); 1,22-1,44 (m, 54H, -CH2-) ; 1,50-1,64 (m, 6H, -CH2-CH2-S-CH2-CH2-CH2- COOH); 1,83-1,97 (m, 6H, -CH2-S-CH2-CH2-CH2-COOH) ; 2,42-2, (m, 18H, -CH2-CH2- -CH2-S· -CH2-CH2-CH2-COOH) ; 4,11-4,20 (dd, 2H, CHaHb-CH-CHaHb-, J=12 Hz e J=5,9 Hz); 4,29-4,36 (dd, 2H, CHaHb-CH-CHaHb-, J=12 Hz e J=4,5 Hz); 5,22-5,32 (m, 1H, CHaHb-CH-CHaHb-) EM: M+23 = 925 (M+Na+) ; M+39 = 941 (M+K+) ; 903 (M+H não detectada) EXEMPLO 4c: Preparação de 1,2,3-tri(6-deciltio)hexanoíl-glicerol

Este composto foi obtido de acordo com 0 procedimento previamente descrito (exemplo 4a), a partir de ácido 6-(deciltio)hexanóico (exemplo lc) e de glicerol.

Rf (CH2C12: ciclohexano 7 :3): 0,43 IV: vCO éster 1730 cm-1 RMN (XH, CDCI3) : 0, 85-0, 92 (t, 9H, -CH3, J=6,5 Hz); 1,21-1,50 (m, 48H, -CH2-) ; 1,51-1,72 (m, 18H, -CH2-CH2-S-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) ; 2,28-2, 40 (m, 6H, -CH2-SCH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) ; 2,45-2,57 (m, 12H, -CH2-S-CH2-) ; 4,10-4,20 (dd, 2H, -CHaHb-CH-CHaHb-, J=12 Hz e J=6 Hz); 4,25-4, 38 (dd, 2H, -CHaHb-CH-CHaHb-, J=12 Hz e J=4,3 Hz); 5,22-5,32 (m, 1H, -CHaHb-CH-CHa-Hb-) 47 EM: M+23 = 925 (M+Na+) ; M+39 = 941 (M+K+) ; 903 (M+H não detectada) EXEMPLO 4d: Preparação de 1,2,3-tritetradecilsulfoxiacetil-glicerol

Este composto foi obtido de acordo com o procedimento previamente descrito (exemplo 4a), a partir de ácido tetradecilsulfoxiacético (exemplo le) e de glicerol.

Rf (CH2C12: ciclohexano 7:3): 0,33 IV: vCO éster 1730 cm-1 RMN (XH, CDCI3) : 0, 84-0, 92 (t, 9H, -CH3, J=6,7 Hz); 1,22-1,39 (m, 66H, CH2-) ; 1, 40-1, 54 (m, 6H, -CH2-CH2-SO-) ; 2, 82-2, 89 (m, 6H, -CH2-CH2-SO-CH2-COO-) ; 3,68 (s, 6H, -CH2-SO-CH2-COOH) ; 4,20-4,30 (m, 5H, -CH2-CH-CH2-) EM: M+l = 951; M+23 = 974 (M+Na+) ; M+39 = 990 (M+K+) EXEMPLO 4e: Preparação de 1,2,3-tri(tetradecilsulfonil)- acetilglicerol

Este composto foi obtido de acordo com o procedimento previamente descrito (exemplo 4a), a partir de ácido tetradecilsulfonilacético (exemplo lg) e de glicerol.

Rf (CH2C12:ciclohexano 7 :3): 0,50 IV: vCO éster 1741 crtf1 RMN (ΧΗ, CDCls) : 0, 84-0, 92 (t, 9H, -CH3, J=6,7 Hz); 1,22-1,38 (m, 60H, -CH2-) ; 1, 39-1, 48 (m, 6H, -CH2-CH2-CH2-S02-) ; 1,81- 1,94 (m, 6H, -CH2-CH2-S02-) ; 3,21-3,30 (t, 6H, -CH2-CH2-S02-CH2-COOH, J=8 Hz); 3,95 (s, 6H, -CH2-S02-CH2-C00H) ; 4,23-4,33 (m, 5H, -CH2-CH-CH2-) . 48 EXEMPLO 4f: Preparação de 1,2,3-tri-tetradecilselenoacetil-glicerol

Este composto foi obtido de acordo com o procedimento previamente descrito (exemplo 4a), a partir de ácido tetradecilselenoacético (exemplo ld) e de glicerol.

Rf (CH2C12:ciclohexano 7:3): 0,74 IV: vCO éster 1737 e 1721 cm'1 RMN (XH, CDC13) : 0, 85-0, 92 (t, 9H, -CH3, J=6,2 Hz); 1,23-1,46 (m, 66H, -CH2-) ; 1,62-1, 76 (m, 6H, -CH2-CH2-CH2-Se-) ; 2,72- 2,79 (t, 6H, CH2-CH2-Se-, J=7,4 Hz); 3,15 (s, 6H, Se-CH2-COOH) ; 4,13-4,23 (m, 5H, -CH2-CH-CH2-) . EXEMPLO 4q: Preparação de 1,3-dipalmitoíl-2-tetradecil-tioacetilglicerol

Dissolveu-se 1,3-dipalmitoilglicerol (5,64 g; 9,9 mmoles; 1 eq), ácido tetradeciltioacético (5,74 g; 19,8 mmoles; 2 eq), diciclohexilcarbodiimida (4,1 g; 19,8 mmoles; 2 eq) e dimetilaminopiridina (2,42 g; 19,8 mmoles; 2 eq) em diclorometano. Deixou-se a mistura reaccional sob agitação à temperatura ambiente durante 3 dias. A diciclohexilureia formada foi filtrada e lavada várias vezes com diclorometano. O filtrado foi levado à secura. O produto residual foi purificado por cromatografia em gel de silica (eluente -diclorometano:ciclohexano, 4:6) (rendimento: 80%).

Rf (CH2C12:ciclohexano 7:3): 0,32 P . f.: 60-62°C IV: vCO éster 1744 e 1730 cm'1 RMN (1 H, CDCI3) : 0,86-0,91 (t, 9H, -CH3, J=6,6 Hz); 1,10-1,45 (m, 70H, -CH2-) ; 1,57-1, 64 (m, 6H, -CH2-CH2-CH2-S- e OCOCH2-CH2) ; 2,30-2,35 (t, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7,4 Hz); 2, 60-2, 66 (t, 2H, CH2-CH2-S-, J=7,4 Hz); 3,23 (s, 2H, S-CH2-COOH) ; 4,14-4,21 49 (dd, 2H, -CHaHb-CH-CHaHb-, J=12 Hz e J=5,8 Hz); 4,30-4,36 (dd, 2H, -CHaHb-CH-CHaHb-, J=12 Hz e J=4 Hz); 5,26-5,33 (m, 1H, -CHaHb-CH-CHaHb-) EM: M+23 = 861 (M+Na+) ; M+39 = 877 (M+K+) ; (M+H não detectada) EXEMPLO 4h: Preparação de 1,3-dilinoleíl-2-tetradecil- tioacetilglicerol

Este composto foi obtido de acordo com o procedimento previamente descrito (exemplo 4g), a partir de 1,3-dilinoleílglicerol (exemplo 3b) e de ácido tetradecil-tioacético (exemplo la). O produto foi obtido sob a forma de um óleo viscoso incolor (rendimento: 56%).

Rf (CH2C12:ciclohexano 7:3): 0,32 IV: vCO éster 1745 cm-1 RMN (XH, CDC13) : 0, 82-0, 93 (t, 9H, -CH3, J=6,6 Hz); 1,15-1,45 (m, 50H, -CH2-) ; 1,52-1, 70 (m, 6H, -CH2-CH2-CH2-S- e OCOCH2-CH2) ; 1,93-2,14 (m, 8H, -CH2-CH=CH-CH2-) ; 2,28-2,37 (t, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7,5 Hz); 2, 59-2, 67 (t, 2H, CH2-CH2-S-, J=7,4

Hz); 2, 70-2,83 (t, 4H, -CH2-CH=CH-CH2-CH=CH-CH2-) ; 3,22 (s, 2H, S-CH2-C00H); 4,12-4,23 (dd, 2H, -CHaHb-CH-CHaHb-, J=12 Hz e J=6,2 Hz); 4,28-4,37 (dd, 2H, -CHaHb-CH-CHaHb-, J=12 Hz e J=4 Hz); 5,24-5,45 (m, 1 H, -CHaHb-CH-CHaHb-) EM: M+23 = 909 (M+Na+); M+39 = 925 (M+K+) ; (M+H não detectada) EXEMPLO 4i: Preparação de 1,3-diestearil-2-tetradecil- tioacetilglicerol

Este composto foi obtido de acordo com o procedimento previamente descrito (exemplo 4g), a partir de 1,3-diestearilglicerol (composto 3c) e de ácido tetradecil-tioacético (composto la). 50 rendimento: 41%

Rf (CH2C12) : 0,32 IV: vCO éster 1744 e 1731 cm"1 RMN (XH, CDCI3) : 0,86-0,91 (t, 9H, -CH3, J=6,6 Hz); 1,10-1,45 (m, 78H, -CH2-) ; 1,57-1, 64 (m, 6H, -CH2-CH2-CH2-S- e OCOCH2-CH2) ; 2,29-2,35 (t, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7,4 Hz); 2,60-2,66 (t, 2H, CH2-CH2-S-, J=7,4 Hz); 3,23 (s, 2H, S-CH2-C00H) ; 4,14-4,21 (dd, 2H, -CHaHb-CH-CHaHb-, J=12 Hz e J=5,8 Hz); 4,30-4,36 (dd, 2H, -CHaHb-CH-CHaHb-, J=12 Hz e J=4 Hz); 5, 26-5, 32 (m, 1H, -CHaHb-CH-CHaHb-) EXEMPLO 4j: Preparação de 1,3-dioleíl-2-tetradeciltioacetil-qlicerol

Este composto foi obtido de acordo com o procedimento previamente descrito (exemplo 4g), a partir de 1,3-dioleílglicerol (composto 3d) e de ácido tetradecil-tioacético (composto la). O produto foi obtido sob a forma de um óleo viscoso incolor (rendimento: 32%).

Rf (CH2C12:ciclohexano 7:3): 0,50 IV: vCO éster 1746 cm-1 RMN (ΧΗ, CDC13) : 0,89 (t, 9H, -CH3, J=6,4 Hz); 1,31 (m, 62H, -CH2-) ; 1,60 (m, 6H, -CH2-CH2CH2-S- e OCOCH2-CH2) ; 2,02 (m, 8H, -CH2-CH=CH-CH2-) ; 2,33 (t, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7,3 Hz); 2,63 (t, 2H, CH2-CH2-S-, J=7,7 Hz); 3,23 (s, 2H, S-CH2-C00H) ; 4,18 (dd, 2h, -CHaHb-CH-CHaHb-, J=12,4 Hz e J=6,4 Hz); 4,33 (dd, 2H, -CHaHb-CH-CHaHb-, J=12,4 Hz e J=4,5 Hz); 5,33 (m, 1H, - CHaHb-CH-CHaHb- e -CH2-CH=CH-CH2-) EM: M+23 = 913 (M+Na+); M+39 = 929 (M+K+) ; (M+H não detectada) 51 EXEMPLO 4k: Preparação de 1,3-ditetradecanoíl-2-tetradecil-

Este composto foi obtido de acordo com o procedimento previamente descrito (exemplo 4g), a partir de 1,3- ditetradecanoilglicerol (composto 3e) e de ácido tetradecil-tioacético (composto la) (rendimento: 28%).

Rf (CH2C12: ciclohexano 7:3): 0,30 P . f.: 60-62°C IV: vCO éster 1744 e 1730 cm-1 RMN (XH, CDC13) : 0,87 (t, 9H, -CH3, J=7,2 Hz); 1,27 (m, 62H, -CH2-) ; 1,60 (m, 6H, -CH2-CH2-CH2-S- e OCOCH2-CH2) ; 2,33 (t, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7, 7 Hz); 2,63 (t, 2H, CH2-CH2-S-, J=7,2 Hz); 3,23 (s, 2H, S-CH2-COOH); 4,18 (dd, 2H, -CHaHb-CH-CHaHb-, J=12 Hz e J=5,8 Hz); 4,33 (dd, 2H, -CHaHb-CH-CHaHb-, J=ll,5 Hz e J=5,8 Hz); 5,30 (m, 1H, -CHaHb-CH-CHaHb-) EM: M+23 = 805 (M+Na+); (M+H não detectada) EXEMPLO 41: Preparação de 1-palmitoí1-2,3-ditetradecil-tioacetilqlicerol

Dissolveu-se 1-palmitato de glicerol (4,804 g; 0,014 moles) em diclorometano (300 ml), antes de se adicionar diciclohexilcarbodiimida (7,498 g; 0,036 moles), dimetilaminopiridina (4,439 g; 0,036 moles) e ácido tetradeciltioacético (8,386 g; 0,029 moles). A mistura reaccional foi colocada sob agitação à temperatura ambiente durante 48 horas. O precipitado de diciclohexilureia foi filtrado e lavado com diclorometano. O filtrado foi levado à secura. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em gel de sílica (eluente - diclorometano:ciclohexano 4:6) e 52 forneceu o composto desejado sob a forma de um pó branco (rendimento: 42%).

Rf (CH2C12:ciclohexano 7:3): 0,31 P.f.: 57-59°C IV: vCO éster 1736 e 1722 cnT1 RMN (1H, CDC13) : 0,89 (t, 9H, -CH3, J=6,6 Hz); 1,27 (m, 68H, -CH2-) ; 1,60 (m, 6H, -CH2-CH2-CH2-S- e OCOCH2-CH2) ; 2,33 (t, 2H, OCOCH2-CH2-, J=7 Hz); 2,63 (t, 4H, CH2-CH2-S-, J=8,9 Hz); 3,23 (s, 4H, S-CH2-COOH); 4,23 (m, 2H, -CHaHb-CH-CHaHb-) ; 4,37 (m, 2H, -CHaHb-CH-CHaHb); 5,31 (m, 1H, -CHaHb-CH-CHaHb-) EM: M+23 = 893 (M+Na+); M+39 = 909 (M+K+) ; (M+H não detectada) EXEMPLO 4m: Preparação de l-oleíl-3-palmitoíl-2-tetradecil-tioacetilqlicerol

Dissolveu-se 3-oleíl-l-palmitoílglicerol (2 g; 0,003 moles) em diclorometano (150 ml), antes de se adicionar diciclohexilcarbodiimida (1,040 g; 0,005 moles), dimetilaminopiridina (0,616 g; 0,005 moles) e ácido tetradeciltioacético (1,455 g; 0,005 moles). A mistura foi deixada sob agitação à temperatura ambiente durante 24 horas. O precipitado de diciclohexilureia foi filtrado e lavado com diclorometano, e o filtrado foi concentrado. O residuo obtido foi purificado por cromatografia em gel de silica (eluente -CH2C12:ciclohexano 4:6) e permitiu obter o composto desejado sob a forma de um óleo (rendimento: 49%).

Rf (CH2C12: ciclohexano 7:3): 0,45 P.f. < 4°C IV: vCO éster 1742 cnV1 RMN ^H, CDCI3) : 0,89 (t, 9H, -CH3, J=6,5 Hz); 1,26 (m, 66H, -CH2-) ; 1,60 (m, 6H, -CH2-CH2CH2-S- e OCOCH2-CH2) ; 2,03 (m, 4H, -CH2-CH=CH-CH2-) ; 2,33 (t, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7,4 Hz) ; 2,63 (t, 2H, CH2-CH2-S-, J=7,4 Hz); 3,23 (s, 2H, S-CH2COOH) ; 4,18 53 (dd, 2H, -CHaHb-CH-CHaHb-, J=12,2 Hz e J=6,l Hz); 4,33 (dd, 2H, -CHaHb-CH-CHaHb-, J=12,2 Hz e J=4,4 Hz); 5,32 (m, 3H, - CHaHb-CH-CHaHb- e -CH2-CH=CH-CH2) EM: M+23 = 887 (M+Na+) ; M+39 = 903 (M+K+) ; (M+H não detectada) EXEMPLO 4n: Preparação de 1,3-dipalmitoíl-2-docosil- tioacetilglicerol O produto foi preparado de acordo com o procedimento descrito (exemplo 4g), a partir de 1,3-dipalmitoílglicerol (exemplo 3a) e de ácido docosiltioacético (exemplo li) (rendimento: 77%) .

Rf (CH2C12:ciclohexano 7:3): 0,32 IV: vCO éster 1745 e 1730 cm-1 RMN (XH, CDC13) : 0,86-0,91 (t, 9H, -CH3, J=6,6 Hz); 1,10-1,45 (m, 86H, -CH2-) ; 1,57-1, 64 (m, 6H, -CH2-CH2-CH2-S- e OCOCH2- CH2) ; 2,29-2,34 (t, 4H, OCOCH2-CH2-, J=7,5 Hz); 2, 60-2, 66 (t, 2H, CH2-CH-2-S-, J=7,4 Hz); 3,23 (s, 2H, S-CH2-COOH) ; 4,13- 4,22 (dd, 2H, -CHaHb-CH-CHaHb-, J=12 Hz e J=5,8 Hz); 4,30-4,36 (dd, 2H, -CHaHb-CH-CHaHb-, J=12 Hz e J=4 Hz); 5,27-5,34 (m, 1H, -CHaHb-CH-CHaHb-) EXEMPLO 5: Preparação de derivados 2-aminoglicerol EXEMPLO 5a: Preparação de 2-tetradeciltioacetamidopropano-1,3-diol

Colocou-se ácido tetradeciltioacético (2,878 g; 0,010 moles) e 2-amino-l,3-propanodiol (1 g; 0,011 moles) num balão e aqueceu-se a 190°C durante 1 hora. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, o meio foi recuperado em clorofórmio e lavado com água. A fase orgânica foi seca com MgSCg, filtrada e depois evaporada para fornecer um resíduo sólido ocre. Este 54 resíduo foi colocado sob agitação em éter dietílico durante 12 horas. 0 produto foi isolado por filtração e forneceu um pó branco (rendimento : 6%) .

Rf (CH2C12 :metanol 9:1): 0,60

P . f.: 95-97°C IV: vCO amida 1640 cm-1 RMN (XH, CDC13) : 0, 84-0, 93 (t, 3H, -CH3, J=6,4 Hz); 1,21-1,45 (m, 22H, -CH2-) ; 1,54-1, 72 (m, 2H, -CH2-CH2-CH2-S-) ; 2,52-2,59 (t, 2H, CH2-CH2-S-, J=7,1 Hz); 2,63 (sl, 2H, OH); 3,27 (s, 2H, S-CH2-COOH); 3,77-3,96 (m, 4H, - CH2-CH-CH2-); 3,97-4,04 (m, 1H, - CH2-CH-CH2-) ; 7,55 (d, 1H, -CONH-, J=6,7 Hz) EM: M+l=362; M+23 = 384 (M+Na+) ; M+39 = 400 (M+K+) EXEMPLO 5b: Preparação de 2-tetradeciltioacetamido-l,3-ditetradeciltioacetiloxipropano

Dissolveu-se 2-tetradeciltioacetamidopropan-l,3-diol (1 g; 2,77 mmoles) (exemplo 5a) em diclorometano (180 ml) e, em seguida, adicionou-se diciclohexilcarbodiimida (1,427 g; 6,91 mmoles), dimetilaminopiridina (0,845 g; 6,91 mmoles) e ácido tetradeciltioacético (1,995 g; 6,91 mmoles) (exemplo la) por esta ordem. A mistura reaccional foi deixada sob agitação à temperatura ambiente durante 48 horas. O precipitado de diciclohexilureia foi filtrado e lavado com diclorometano, e o filtrado foi concentrado. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia em gel de sílica (eluente diclorometano:ciclohexano 7:3) . 0 composto desejado foi obtido sob a forma de um pó branco (rendimento: 66%) .

Rf (CH2C12 10): 0,18 P.f.: 82-84°C IV: vCO éster 1715 e 1730 cm-1; vCO amida 1648 cm-1 RMN (XH, CDC13) : 0, 84-0, 95 (t, 3H, -CH3, J=6,6 Hz); 1,221-1,45 (m, 66H, -CH2-) ; 1,54-1, 69 (m, 6H, -CH2CH2-CH2-S-) ; 2,48-2,55 55 (t, 2H, CH2-CH2-S-CH2-CONH-, J=7,5 Hz); 2, 59-2, 70 (t, 4H, CH2-CH2-S-CH2-COO-, J=7,2 Hz); 3,24 (s, 6H, S-CH2-CO-); 4,18-4,35 (m, 4H, -CH2-CH-CH2-) ; 4, 47-4, 60 (m, 1H, -CH2-CH-CH2-) ; 7,23 (d, 1H, -CONH-, J=8,5 Hz) EM: M+23 = 924 (M+Na+) ; (M+l não detectada). EXEMPLO 6: Método de solubilização dos triacilgliceróis de acordo com a invenção

Os compostos de acordo com a invenção descritos nos exemplos 2 a 5 podem ser solubilizados da forma descrita para o exemplo 4a.

Esta solubilização é útil para realizar as experiências in vitro.

Uma emulsão compreendendo o exemplo 4a e fosfatidilcolina (PC) foi preparada de acordo com o protocolo de Spooner et al. (Spooner et al., JBC, 1988, vol 263, pp 1444-1453). O exemplo 4a foi misturado com a PC numa razão de 4:1 (p/p) em clorofórmio, e a mistura foi seca sob azoto e depois evaporada durante toda a noite sob vácuo. O pó resultante foi recuperado em KC1 0,16 M contendo EDTA 0,01 M, e as partículas lipídicas foram dispersas por ultrasons durante 30 minutos a 37°C. Os lipossomas formados foram, em seguida, separados por ultracentrifugação (ultracentrífuga XL 80, Beckman Coulter, Villepinte, França) a 25.000 r/min durante 45 minutos, para recuperar os lipossomas cujo tamanho era superior a 100 nm e se aproximava do dos quilomícrons. Lipossomas constituídos unicamente por PC foram preparados em paralelo para servir de controlo negativo. A composição dos lipossomas em exemplo 4a foi estimada utilizando o kit de doseamento enzimocolorimétrico de triglicéridos. O doseamento foi efectuado contra uma série 56

Standard, preparada graças ao calibrador de lípidos CFAS Ref. N.° 759350 (Boehringer Mannheim GmbH, Alemanha). A série

Standard foi construída entre 16 e 500 pg/ml. 100 μΐ de cada diluição de amostra ou de série padrão foram colocados em poços de uma placa de titulação (96 poços) . Em seguida, adicionaram-se 200 μΐ de reagentes triglicéridos Ref. 701912 (Boehringer Mannheim GmbH, Alemanha) a cada poço, e o conjunto da placa foi incubado durante 30 minutos a 37°C. A leitura das densidades ópticas (DO) foi efectuada a 492 nm no espectrofotómetro. As concentrações de triglicéridos de cada amostra foram calculadas após construção da curva padrão segundo uma função linear y = ax + b, onde y representa as DO e x as concentrações de triglicéridos.

Os lipossomas do exemplo 4a, preparados desta forma, podem ser utilizados nas experiências in vitro. EXEMPLO 7: Avaliação da activação dos PPAR in vitro

Os compostos de acordo com a invenção testados são os compostos cuja preparação está descrita nos exemplos 2 a 5 acima.

Os receptores nucleares membros da subfamília dos PPAR, que são activados por duas classes principais de drogas - os fibratos e as glitazonas - abundantemente utilizadas em clínica humana para o tratamento das dislipidemias e da diabetes, desempenham um papel importante na homeostasia lipídica e glucídica. Particularmente, o receptor PPARa modula, entre outras, a expressão dos genes que codificam as apolipoproteínas implicadas no transporte de lípidos e a expressão dos genes ACO, por um lado, e CPT-I e CPT-II, por 57 outro, implicados, respectivamente, na β-oxidação peroxissomal e mitocondrial. Os exemplos seguintes mostram que os compostos de acordo com a invenção activaram PPARa e PPARy in vitro. A activação dos PPAR foi avaliada in vitro em hepatócitos de rato em cultura primária, através de medição da expressão de genes-alvo dos PPAR e através de medição da actividade de transcrição de quimeras constituídas pelo domínio de ligação ao ADN do factor de transcrição Gal4 de levedura e pelo dominio de ligação do ligando dos diferentes PPAR. Estes últimos resultados foram depois confirmados em linhas celulares de acordo com os protocolos que se seguem. 1) Hepatócitos em cultura primária a. Protocolo de cultura

Os hepatócitos de rato foram isolados por perfusão dos fígados de ratos Wistar OFA machos (Charles River, L/Arbresle, França), cujo peso corporal estava compreendido entre 175 e 225 g, com a ajuda de uma mistura de colagenase e de termolisina (Blendzyme 3, Roche, Bâle, Suíça). 0 fígado dos ratos anestesiados com pentobarbital foi sujeito a perfusão através da veia porta, inicialmente com 100 ml de um tampão de lavagem (Liver perfusion médium, Gibco, Paisley, Reino Unido) e depois com 200 ml do seguinte meio de digestão: HBSS isento de CaCl2 e de MgS04 (Sigma, St Louis, Ml, EUA) suplementado com Hepes 10 mM, pH 7,6; CaCl2 4 mM e 7 mg de Blendzyme 3, segundo uma modificação do protocolo previamente descrito (Raspé et al. J. Lipid Res. 40, 2099-2110, 1999). Quando a viabilidade das células, determinada 58 pelo teste com azul de tripano (Sigma, St Louis, MI, EUA), ultrapassou 80%, os hepatócitos foram transferidos para caixas de cultura com 24 poços, à razão de 7,5xl04 células/cm2, para as experiências de transfecção, ou para caixas de cultura com 6 poços, à razão de 105 células/cm2, para as experiências de quantificação dos ARN mensageiros. As células foram semeadas e incubadas durante 4 horas num meio de cultura Williams E suplementado com penicilina 100 U/ml (Gibco, Paisley, Reino Unido), L-glutamina 2 mM (Gibco, Paisley, Reino Unido), UltroSER SF a 2% v/v (Biosepra, Cergy St-Christophe, França), albumina sérica de bovino a 0,2% p/v (Sigma, St Louis, MI, EUA), dexametasona 1 μΜ (Sigma, St Louis, MI, EUA) e T3 100 nM (Sigma, St Louis, MI, EUA) . A experiência foi depois continuada no mesmo meio de cultura desprovido de Ultroser. Os compostos testados foram adicionados, na concentração indicada, directamente ao meio de cultura. b. Protocolo de transfecção

Os hepatócitos de rato, que foram isolados e cultivados como descrito acima, foram transfectados no meio de cultura isento de Ultroser, durante uma noite, com o plasmideo repórter pG5TkpGL3 (10 ng/poço), os vectores de expressão pGal4-<|), pGal4-mPPARa, pGal4-hPPARa, pGal4-hPPARy, pGal4-hPPARô (10 ng/poço) e o vector de controlo da eficácia da transfecção pRL-Null (1 ng/poço) (Promega Madison, WI, EUA), com a ajuda de lipofectina (Gibco, Paisley, Reino Unido) ou de Effecten (QIAGEN, Courtaboeuf, França), de acordo com o protocolo descrito pelo fornecedor. Após a transfecção, as células foram tratadas e incubadas durante 36 horas como anteriormente descrito (Raspé et al., J. Lipid Res. 40, 2099- 59 2110, 1999). No fim da experiência, as células foram lisadas, e as actividades de luciferase foram determinadas com a ajuda do kit de doseamento Dual-Luciferase™ Repórter Assay System (Promega, Madison, WI, EUA) segundo a nota informativa do fornecedor, como anteriormente descrito (Raspé et al., J. Lipid Res. 40, 2099-2110, 1999). O teor de proteína dos extractos celulares foi depois avaliado com a ajuda do kit de doseamento Bio-Rad Protein Assay (Bio-Rad, Munique, Alemanha), segundo a nota informativa do fornecedor. c. Descrição dos plasmídeos utilizados

Os plasmídeos pG5TkpGL3, pGal4-hPPARa, pGal4-hPPARy e pGal4-(|) foram anteriormente descritos (Raspé et al., J. Lipid Res. 40, 2099-2110, 1999) . As construções pGal4-mPPARa e pGal4- hPPARô foram obtidas por clonagem, no vector pGal4-<|), de fragmentos de ADN amplificados por PCR correspondentes aos domínios DEF dos receptores nucleares PPARa de ratinho e PPARÔ humano. d. Medição dos ARN mensageiros

Os ARN mensageiros foram extraídos de hepatócitos de rato em cultura primária com a ajuda do reagente Tri-Reagent (Sigma, St Louis, Ml, EUA), segundo as instruções do fornecedor, doseados por espectrofotometria e quantificados por RT-PCR semi-quantitativo ou quantitativo, com o auxílio do kit Light Cycler Fast Start DNA Master Sybr Green 1 (Hoffman-La Roche, Basel, Suíça), numa aparelho Light Cycler System (Hoffman-La Roche, Basel, Suíça). Utilizaram-se pares de iniciadores específicos para os genes ACO e Apo AII, alvos de PPARa, como sondas. Pares de iniciadores específicos para os genes 36B4, 60 β-actina e GAPDH foram utilizados como sondas de controlo (ver Tabela I abaixo).

Tabela I

nome sequência PCR semi-quant it at ivo PCR quantitativo gene Tm ciclo nbr Tm ciclo nbr saida ApoAI_r_l_s 741 GCCTGAATCTC CTGGACAACTG 58 °C 25 58 °C 18 a 20 Apo AI ApoAI_r_l_as 742 ATGCCTTTGCA TCTCCTTCG ApoB_r_l_s 743 ATACAGCCTGA GTGAGCCTCTT CAG 55 °C 30 X X Apo B ApoB_r_l_as 744 CCAGGGAGTTG GAGACCGTG GAP D H_h_1_s 390 GACATCAAGAA GGTGGTGAA 55 °C 25 55 °C 20 (variável) GAPDH GAPDH_h_l_as 389 CCACATACCAG GAAATGAGC beta-actine_ h_l_s 189 TTCAACTCCAT CATGAAGTGTG AC 55 °C 25 55 °C variável β- actina beta-actine_ h_l_as 188 TCGTCATACTC CTTGCTTGCTG ATCC CPTI_r_l_s 517 GCTGGCTTATC GTGGTGGTG 60 °C 25 60 °C 20 a 25 CPT-I CPTI_r_l_as 516 GACCTGAGAGG ACCTTGACC 36B4_h_l_s 177 CATGCTCAACA TCTCCCCCTTC TCC X X 55 °C 23 36B4 36B4_h_l_as 178 GGGAAGGTGTA ATCCGTCTCCA CAG ACOXl_r_l_as 457 CGCATCCATTT CTCCTGCTG 60 °C 25 60 °C 18 a 24 ACO ACOXl_r_l_s 458 TTCTGTCGCCA CCTCCTCTG 61

Tabela I (continuação)

ApoCIII_r_l_s 797 ATGCAGCCCCG AATGCTCCTCA TCGTGG 55°C 30 55°C 28 a 30 Apo ciii ApoCIII_r_l_a s798 TCACGGCTCAA GAGTTGGTGTT AC CPT2_r_l_s 725 CAGAAGCCTCT CTTGGATGACA G 55 °C 25 X X CPT-II CPT2_r_l_as 726 TTGGTTGCCCT GGTAAGCTG ABCAl_h_2_s CTGAGGTTGCT GCTGTGGAAG 65 °C 21 X X ABCA1 ABCAl_l_h_ 2_as CATCTGAGAAC AGGCGAGCC 2) Linhas celulares a. Protocolos de cultura

As células HepG2 e RK13 provieram da ECACC (Porton Down, Reino Unido) e foram cultivadas em meio DMEM suplementado com soro fetal de vitelo a 10% (v/v), penicilina 100 U/ml (Gibco, Paisley, Reino Unido) e L-glutamina 2 mM (Gibco, Paisley, Reino Unido) . O meio de cultura foi mudado de dois em dois dias. As células foram conservadas a 37°C, numa atmosfera húmida contendo 5% de CO2 e 95% de ar. b. Transfecção

As células HepG2 e RK13 semeadas em caixas de cultura com 24 poços, à razão de 105 células/poço para as células HepG2 e de 5xl04 células/poço para as células RK13, foram transfectadas durante 2 horas com o plasmídeo repórter pG5TkpGL3 (10 ng/poço), os vectores de expressão pGal4-<|), pGal4-mPPARa, 62 pGal4-hPPARa, pGal4-hPPARy, pGal4-hPPARô (10 ng/poço) e o vector de controlo da eficácia da transfecção pRL-null (Promega Madison, wi, EUA) (20 ng/poço), seguindo o protocolo anteriormente descrito (Raspé et al., J. Lipid Res. 40, 2099-2110, 1999), e incubadas durante 36 horas com os compostos testados. No final da experiência, as células foram lisadas (Gibco, Paisley, Reino Unido), e as actividades de luciferase foram determinadas com a ajuda do kit de doseamento Dual-Luciferase™ Repórter Assay System (Promega, Madison, WI, EUA) segundo a nota informativa do fornecedor, como anteriormente descrito (Raspé et al., J. Lipid Res. 40, 2099-2110, 1999). O teor de proteína dos extractos celulares foi depois avaliado com a ajuda do kit de doseamento Bio-Rad Protein Assay (Bio-Rad, Munique, Alemanha), segundo a nota informativa do fornecedor.

Os resultados obtidos estão apresentados na Figura 11 e mostram que os compostos testados foram capazes de activar fortemente o receptor nuclear PPARa. EXEMPLO 8: Avaliação dos efeitos sobre o metabolismo lipídico in vivo

Os compostos de acordo com a invenção testados são os compostos cuja preparação está descrita nos exemplos 2 a 5 acima.

Os fibratos, abundantemente utilizados em clinica humana para o tratamento das dislipidemias implicadas no desenvolvimento da aterosclerose, uma das principais causas de mortalidade e de morbidade nas sociedades ocidentais, são fortes activadores do receptor nuclear PPARa. Este regula a 63 expressão de genes implicados no transporte (apolipoproteinas como ApoAI, ApoAII e ApoC-III, transportadores membranares como FAT) ou no catabolismo dos lípidos (ACO, CPT-I ou CPT-II). Um tratamento com os activadores de PPARa traduz-se, nos roedores, por uma diminuição das taxas circulantes de colesterol e de triglicéridos.

Os protocolos seguintes permitiram evidenciar uma quebra da taxa de triglicéridos e da taxa de colesterol circulante, assim como o interesse dos compostos de acordo com a invenção no âmbito da prevenção e/ou do tratamento das doenças cardiovasculares. 1) Tratamento dos animais

Ratos Sprague-Dawley ou Wistar, com 200 a 230 g (Charles River, LdArbresle, França), foram mantidos sob um ciclo de luz/obscuridade de 12 horas, a uma temperatura constante de 20 + 3°C. Após uma aclimatação de uma semana, os ratos foram pesados e distribuídos por grupos de 8 animais, seleccionados de forma que a distribuição de taxas plasmáticas de colesterol e de triglicéridos fossem uniformes. Os compostos testados foram suspensos em carboximetilcelulose e administrados via sonda intragástrica, à razão de uma vez por dia durante 15 dias, nas doses indicadas. Os animais tiveram livre acesso a água e aos alimentos. No final da experiência, os animais foram pesados e sacrificados sob anestesia, após um jejum de 5 horas. O sangue foi recolhido em EDTA. O plasma foi preparado por centrifugação a 3.000 r/min durante 20 minutos. Amostras de fígado foram recolhidas e conservadas, congeladas em azoto líquido, para análise posterior. 2) Medição dos lípidos e apolipoproteinas séricas 6 4

As concentrações plasmáticas dos lípidos (colesterol total e colesterol livre, triglicéridos e fosfolípidos) foram medidas por doseamento colorimétrico (Bio-Mérieux, Marcy 1'Etoile, França) de acordo com as indicações do fornecedor. As concentrações plasmáticas das apolipoproteinas AII, AI e CIII foram medidas de acordo com os métodos previamente descritos (Raspé et al., J. Lipid Res. 40, 2099-2110, 1999; Asset G et al., Lipids, 34, 39-44, 1999).

Para separar as lipoproteinas de acordo com o seu tamanho, injectaram-se 300 μΐ de plasma numa coluna de Sepharose 6HR 10/30 (Pharmacia, Uppsala, Suécia) e eluiu-se, utilizando um caudal constante (0,2 ml/minuto), com PBS (pH 7,2) . A densidade óptica do efluente foi registada a 280 nm. 0 efluente foi recolhido em fracções de oo o ml. As concentrações de lipidos nas diferentes fracções foram medidas por doseamento colorimétrico (Bio-Mérieux, Marcy 1'Etoile, França) de acordo com as indicações do fornecedor. Os resultados obtidos estão apresentados nas figuras 2, 3, 4, 9A e 9B.

3) Análise dos ARN O ARN total foi isolado dos fragmentos de fígado por extracção com a ajuda da mistura tiocianato de guanidina/fenol ácido/clorofórmio, de acordo com o protocolo anteriormente descrito (Raspé et al., J. Lipid Res. 40, 2099-2110, 1999) . Os ARN mensageiros foram quantificados por RT-PCR semi-quantitativo ou quantitativo com o auxílio do kit

Light Cycler Fast Start DNA Master Sybr Green 1 (Hoffman-La Roche, Basel, Suíça), num aparelho Light Cycler System (Hoffman-La Roche, Basel, Suíça). Utilizaram-se pares de iniciadores específicos para os genes ACO, Apo CIII, Apo AI, CPT-I e CPT-II como sondas. Pares de iniciadores específicos 65 para os genes 36B4, β-actina e GAPDH foram utilizados como sondas de controlo (ver Tabela I).

Os resultados obtidos estão apresentados nas figuras 5 e 9C. EXEMPLO 9: Avaliação das propriedades antioxidantes dos compostos de acordo com a invenção

Os compostos de acordo com a invenção testados são os compostos cuja preparação está descrita nos exemplos 2 a 5 acima. A oxidação das LDL está na base do processo inflamatório que conduz à aterosclerose e às doenças cardiovasculares. Os compostos que retardam ou inibem esta oxidação apresentam, assim, efeitos protectores benéficos. 1. Protecção da oxidação das LDL pelo cobre ou pelo dicloridrato de azo-bis(2-amidinopropano) (AAPH) A oxidação das LDL é uma modificação importante e desempenha um papel preponderante na instalação e no desenvolvimento da aterosclerose (Jurgens, Hoff et al. 1987). 0 protocolo seguinte permitiu destacar as propriedades antioxidantes dos compostos. Salvo indicação em contrário, os reagentes são provenientes de Sigma (St Quentin, França).

As LDL foram preparadas segundo o método descrito por Lebeau et al. (Lebeau, Furman et al. 2000).

As soluções dos compostos a testar foram preparadas de forma a terem concentrações finais variando entre 1 e 100 μΜ, para uma concentração total de etanol de 1% (v/v).

Antes da oxidação, o EDTA foi retirado da preparação de LDL por diálise contra PBS. A cinética de oxidação teve depois 66 lugar a 30°C, adicionando 20 μΐ de uma solução de CUSO4 16,6 μΜ ou de AAPH 2 mM a 160 μΐ de LDL (125 pg de proteínas/ml) e 20 μΐ de uma solução do composto a testar. A formação de dienos, a espécie a observar, mediu-se por densidade óptica a 234 nm das amostras tratadas com os compostos, mas com ou sem cobre (ou AAPH) . A medição da densidade óptica a 234 nm foi realizada a cada 10 minutos durante 8 horas, com a ajuda de um espectrofotómetro termostatizado (Kontron Uvikon 930). As análises foram realizadas em triplicado. A actividade dos compostos foi expressa em percentagem de afastamento da "lag-phase" (fase de latência antes do arranque da oxidação) comparada com a do controlo. Consideramos que os compostos possuem uma actividade antioxidante de 100% quando duplicam o afastamento da "lag-phase" da amostra de controlo. Os inventores evidenciaram que os compostos de acordo com a invenção, descritos nos exemplos 2 a 5, retardaram a oxidação das LDL (induzida pelo cobre), indicando isto que os compostos de acordo com a invenção possuem um carácter antioxidante intrínseco. 2. Avaliação da protecção conferida pelos compostos de acordo com a invenção em relação à peroxidação lipídica A medida da oxidação das LDL foi efectuada pelo método dos TBARS. De acordo com o mesmo princípio descrito anteriormente, as LDL foram oxidadas com CuSCg, e a peroxidação lipídica foi determinada da forma que se segue.

Os TBARS foram medidos com a ajuda de um método espectrofotométrico; a hidroperoxidação lipídica foi medida utilizando a oxidação peróxido-lípido dependente do iodeto em iodo. Os resultados são expressos em nmoles de malondialdeído (MDA) ou em nmoles de hidroperóxido/mg de proteínas. 67

Os resultados obtidos anteriormente, ao medir a inibição da formação de dienos conjugados, foram confirmados pelas experiências de medição da peroxidação lipidica das ldl. Os compostos de acordo com a invenção protegeram de forma igualmente eficaz as LDL contra a peroxidação lipidica induzida pelo cobre (agente oxidante). 0 exemplo 9 indica que os compostos de acordo com a invenção inibem a modificação oxidativa das LDL. EXEMPLO 10: Avaliação dos efeitos sobre a expressão de enzimas implicadas na β-oxidagão mitocondrial e peroxissomal

Os compostos de acordo com a invenção testados são os compostos cuja preparação está descrita nos exemplos 2 a 5 acima.

Os ácidos gordos constituem uma reserva essencial de energia. A β-oxidação mitocondrial e peroxissomal dos ácidos gordos são as principais vias de catabolismo dos ácidos gordos responsáveis pela mobilização desta energia. Estes dois processos desempenham, pois, um papel primordial no controlo das taxas séricas de ácidos gordos livres, assim como na regulação da síntese dos triglicéridos. A enzima que determina a velocidade da β-oxidação peroxissomal é a ACO. A β-oxidação mitocondrial é limitada pelo transporte dos ácidos gordos no interior da mitocôndria. Este último depende da actividade das enzimas CPT-I e CPT-II. A regulação da expressão das enzimas ACO, cpt-i e CPT-II desempenha um papel primordial no controlo da β-oxidação peroxissomal e mitocondrial, respectivamente. 68

Os compostos de acordo com a invenção induziram a expressão de ACO, CPT-I e de CPT-II. Esta actividade foi evidenciada da seguinte forma. 0 ARN isolado dos hepatócitos em cultura primária descritos no exemplo 7, ou de um fragmento de fígado recolhido em ratos tratados com os compostos testados da forma descrita no exemplo 8, foi quantificado por RT-PCR semi-quantitativo ou quantitativo como descrito nos exemplos 7 e 8, com a ajuda de pares de iniciadores específicos para os genes ACO, CPT-I e CPT-II. EXEMPLO 11: Avaliação das capacidades de oxidação dos ácidos gordos

Os compostos de acordo com a invenção testados são os compostos cuja preparação está descrita nos exemplos 2 a 5 acima.

As capacidades de oxidação dos ácidos gordos determinam as taxas séricas de ácidos gordos livres, assim como a possibilidade de síntese dos triglicéridos. Uma acumulação de ácidos gordos livres no sangue ou de triglicéridos fora do tecido adiposo favorece a resistência à insulina. Por outro lado, uma elevação das taxas plasmáticas de triglicéridos é actualmente considerada um factor de risco de doenças cardiovasculares. Um aumento das capacidades de oxidação dos ácidos gordos apresenta, assim, um interesse terapêutico.

Os compostos de acordo com a invenção activaram a oxidação dos ácidos gordos pelas mitocôndrias e pelos peroxissomas. Esta capacidade foi evidenciada da forma que se segue. 69

Testaram-se as actividades de CPT-I e de CPT-II mitocondriais de acordo com o protocolo descrito por Madsen et al, 1999, Biochem. Pharmacol. 57, 1011-1019. Testou-se a actividade de ACO segundo o protocolo descrito por Asiedu et al, 1995, Eur. J. Biochem, 227, 715-722.

Testou-se a β-oxidação mitocondrial e peroxissomal dos ácidos gordos de acordo com o protocolo descrito por Hovik et al, 1990, Biochem. J. 270, 167-173. EXEMPLO 12: Avaliação dos efeitos sobre o transporte inverso do colesterol

Os compostos de acordo com a invenção testados são os compostos cuja preparação está descrita nos exemplos 2 a 5 acima. A correlação negativa entre a taxa de HDL-colesterol e as doenças cardiovasculares é hoje bem conhecida. A capacidade de um composto para aumentar o transporte inverso do colesterol (RCT) é considerada um mecanismo pelo qual as HDL protegem da aterosclerose. 0 RCT é um processo que permite ao colesterol, que se encontra em excesso nos tecidos extra-hepáticos, ser recuperado e exportado para o figado, onde é convertido em ácidos biliares antes de ser excretado na bilis. A presença de células espumosas derivadas de macrófagos é uma das caracteristicas das primeiras etapas de formação da lesão de aterosclerose. O efluxo do colesterol dos macrófagos é pois uma fase critica para a prevenção da formação das células espumosas e, consequentemente, apresenta um efeito protector em relação à aterosclerose. A etapa crucial do RCT é a transferência do 70 colesterol em excesso e dos fosfolípidos das membranas celulares para as HDL nascentes. A este respeito, o transportador ABCAl (ATP binding cassette Al) desempenha um papel-chave no processo, e a sua expressão está correlacionada com a redução do desenvolvimento da placa de aterosclerose ao estimular o efluxo de colesterol nos macrófagos.

Por outro lado, foi recentemente demonstrado que o ABCAl é um gene-alvo do receptor nuclear LXRa, ele próprio um gene-alvo dos receptores PPARa e PPARy.

Os compostos de acordo com a invenção induziram a expressão de LXRa e de ABCAl e estimularam o efluxo do colesterol em 2 modelos in vitro de macrófagos THPl e primários. 1/ Medida da expressão de ABCAl e de LXRa a/ Diferenciação e tratamento de macrófagos humanos THP-1 e primários

Os monócitos THP-1 (ATCC, Rockville, Maryland) foram espalhados em caixas de cultura com 6 poços, na presença de PMA (phorbol myristate acetate) e de soro fetal de vitelo, e incubados a 37°C durante 48 horas, o que permitiu a sua diferenciação em macrófagos.

No que diz respeito aos macrófagos primários, as células mononucleadas foram isoladas a partir de sangue humano, como anteriormente descrito (Chinetti et al., Nat. Medecine 7(1), 53-58, 2001), espalhadas em placas de 6 poços e cultivadas durante 10 dias, na presença de soro humano, para permitir a 71 aderência e a diferenciação dos monócitos primários em macrófagos. 0 tratamento com a ajuda dos diferentes compostos foi efectuado durante 48h num meio sem soro humano ou de vitelo fetal, mas suplementado com soro Nutridoma HU (Boehringer) a 1%. b/ Medidas dos ARN mensageiros

Os ARN totais foram extraídos dos macrófagos tratados com a ajuda do kit RNeasy mini (QIAGEN, Hilden, Alemanha), de acordo com as instruções do fornecedor, doseados por espectrometria e quantificados por RT-PCR quantitativo com a ajuda do kit Light Cycler Fast DNA Master Green 1 (Hoffman-La Riche, Basel, Suíça), num aparelho Light Cycler System (Hoffman-La Riche, Basel, Suíça). Utilizaram-se pares de iniciadores específicos para os genes ABCAl e LXRa como sondas.

Os resultados obtidos estão apresentados na figura 12. 2/ Medida do efluxo de colesterol a/ Diferenciação e tratamento de macrófagos humanos THP-1 e primários

Os macrófagos foram diferenciados a partir de monócitos THP-1 ou primários como na experiência anterior (1/ medida da expressão de ABCAl e de LXRa). b/ Carregamento dos macrófagos com colesterol e medida do efluxo

Os macrófagos foram pré-tratados durante 24 horas com os compostos, mas também de 24 em 24 horas durante toda a 72 duração da experiência. Eles foram carregados com colesterol durante uma incubação de 48h na presença de LDL acetiladas (50 μς/παΐ contendo colesterol marcado com trítio), num meio RPMI 1640 suplementado com Nutidoma HU (Boehringer) a 1%.

Após esta etapa, as células foram lavadas 2 vezes com PBS e incubadas durante 24h em meio RPMI sem Nutridoma, com ou sem apolipoproteina A-l. No final desta etapa, o meio foi recuperado, e os lipidos intracelulares foram extraídos numa mistura de hexano/isopropanol e secos sob azoto. O efluxo foi quantificado com a ajuda de um leitor de cintilações Tri-Carb® 2100 TR (Packard, Meriden, CT, EUA), dividindo o número de cintilações contadas no meio pelo número total de cintilações contadas no meio e nas células. EXEMPLO 13: Avaliação dos efeitos sobre a síndrome metabólica (síndrome X) e a diabetes

Os compostos de acordo com a invenção testados são os compostos cuja preparação está descrita nos exemplos 2 a 5 acima. A resistência à insulina encontra-se na base da síndrome metabólica caracterizada por uma intolerância à glucose, uma hiperinsulinemia, uma dislipidemia e a hipertensão. A combinação de vários factores de risco cardiovascular, que se traduz por um risco acrescido de doenças cardiovasculares resultantes da aterosclerose, é responsável pela maior parte da mortalidade e da morbidade ligadas à diabetes de tipo II. Os tratamentos medicamentosos da síndrome metabólica têm como alvo principal a resistência à insulina.

Os compostos de acordo com a invenção reduziram as manifestações da síndrome metabólica (síndrome X), tais como 73 a elevação dos ácidos gordos livres, a hiperinsulinemia, a hiperglicemia e a resposta insulinémica à glucose (teste de tolerância à glucose), e a diabetes, em dois modelos animais que apresentam uma resistência à insulina na base da sindrome metabólica - os ratinhos C57BL/6 mantidos sob um regime rico em gordura e o rato Zucker obeso (fa/fa).

Estas propriedades foram evidenciadas da forma que se segue. 1) Tratamento dos animais

Ratinhos C57BL/6 (Charles River, L/Arbresle, França) machos, com 6 semanas de idade no inicio da experiência, foram distribuídos aleatoriamente por grupos de 6 animais, seleccionados de forma que a distribuição do seu peso corporal fosse uniforme. Os ratinhos receberam um regime pobre em gordura (UAR A04), um regime enriquecido em gordura (óleo de coco a 29% p/p) ou o mesmo regime enriquecido completado com os compostos estudados. Os ratos Zucker machos obesos (fa/fa) ou não obesos (fa/+), com 5 ou 21 semanas de idade (Charles River, L/Arbresle, França), distribuídos por grupos de 8 animais seleccionados de forma que a distribuição das taxas plasmáticas de colesterol e de triglicéridos fossem uniformes, foram mantidos sob um regime Standard. Os animais foram mantidos sob um ciclo de luz/obscuridade de 12 horas, a uma temperatura constante de 20 ± 3°C. Os animais tiveram livre acesso a água e aos alimentos. A ingestão de alimentos e o aumento de peso foram registados. Os compostos testados foram suspensos em carboximetilcelulose e administrados por sonda intragástrica, à razão de uma vez por dia durante 15 dias, nas doses indicadas. No final do tratamento, determinados animais foram submetidos a um teste de tolerância à glucose como descrito abaixo. No final da experiência, os outros animais foram pesados e sacrificados 74 sob anestesia, após um jejum de 5 horas. 0 sangue foi recolhido em EDTA. 0 plasma foi preparado por centrifugação a 3.000 r/min durante 20 minutos. As amostras de fígado foram recolhidas e conservadas, congeladas em azoto líquido, para análises posteriores. 2) Doseamento dos ácidos gordos livres e dos lípidos

As taxas de ácidos gordos livres foram variáveis nos ratos diabéticos. A concentração de ácidos gordos livres, no soro ou no plasma, foi medida por reacção enzimática colorimétrica "NEFA/FFA" WAKO (Labo immuno Systems, Neuss, Alemanha) no soro ou no plasma.

As concentrações plasmáticas de lípidos (colesterol total e triglicéridos) foram medidas por doseamento colorimétrico (Bio-Mérieux, Marcy 1'Etoile, França), de acordo com as indicações do fornecedor.

Os resultados obtidos estão apresentados nas figuras 6 e 10. 3) Doseamento da glicemia A medida da glicemia efectuou-se através de uma reacção enzimática colorimétrica (Sigma Aldrich, St Louis, MO) . Os resultados obtidos estão apresentados na figura 7. 4) Doseamento da insulina

Com o objectivo de evidenciar uma hiperinsulinemia característica das doenças metabólicas, as taxas de insulinas foram doseadas utilizando o kit de doseamento radioactivo (Mercodia, Uppsala, Suécia). A insulinemia foi determinada em soros ou plasmas recolhidos em EDTA. 75

Os resultados obtidos estão apresentados na figura 7. 5) Teste de tolerância à glucose

Os animais foram anestesiados, após um jejum de 8h, por injecção intraperitoneal de pentobarbital sódico (50 mg/kg). Para iniciar o teste de tolerância à glucose, administrou-se uma injecção de glucose (1 g/kg) na cavidade intraperitoneal, antes de recolher amostras de sangue, ao nivel da veia da cauda, em tubos heparinizados, 0, 15, 30, 45 e 60 minutos após a carga de glucose. As amostras foram conservadas em gelo, e o plasma foi isolado e conservado a -20°C antes da análise.

Os resultados obtidos estão apresentados na figura 8. EXEMPLO 14: Avaliação dos efeitos sobre a obesidade

Os compostos de acordo com a invenção testados são os compostos cuja preparação está descrita nos exemplos 2 a 5 acima. A obesidade está associada a um aumento da resistência à insulina, à diabetes de tipo II e a um aumento do risco cardiovascular e de cancro.

Ela desempenha, assim, um papel central em várias patologias tipicas das sociedades ocidentais e, devido a isto, representa um desafio farmacológico importante.

Os compostos de acordo com a invenção reduziram o aumento de peso em dois modelos animais que apresentam uma obesidade -os ratinhos C57BU6 mantidos sob um regime rico em gordura e o rato Zucker obeso (fa/fa). Estas propriedades foram evidenciadas da forma que se segue: 76 1) Tratamento dos animais

Ratinhos C57BU6 (Iffa Credo, L/Arbresle, França) machos, com 6 semanas de idade no inicio da experiência, foram aleatoriamente distribuídos por grupos de 6 animais, seleccionados de forma que a distribuição do seu peso corporal fosse uniforme. Os ratinhos receberam um regime pobre em gordura (UAR A04), um regime enriquecido em gordura (óleo de coco a 29% p/p) ou o mesmo regime enriquecido completado com os compostos estudados. Os ratos Zucker machos obesos (fa/fa), com 5 semanas de idade (Iffa Credo, l/Arbresle, França), distribuídos por grupos de 8 animais seleccionados de forma que a distribuição das taxas plasmáticas de colesterol e de triglicéridos fossem uniformes, foram mantidos sob um regime Standard completado com os compostos estudados durante 15 dias. Os animais foram mantidos sob um ciclo de luz/obscuridade de 12 horas, a uma temperatura constante de 20 + 3°C. Os animais tiveram livre acesso a água e aos alimentos. A ingestão de alimentos e o aumento de peso foram registados. No final da experiência, os animais foram pesados e sacrificados sob anestesia. O plasma foi preparado por centrifugação a 3.000 r/min durante 20 minutos.

As amostras de fígado e de tecido adiposo foram recolhidas, pesadas e conservadas congeladas, em azoto líquido, para análises posteriores. 2) Doseamento da leptina A leptina, um marcador de desenvolvimento da obesidade, foi medida com a ajuda do kit de doseamento "Rat Leptin assay" de Linco Reearch (St Charles, MI, EUA) . 77 EXEMPLO 15: Avaliação dos efeitos sobre o crescimento celular

Os compostos de acordo com a invenção testados são os compostos cuja preparação está descrita nos exemplos 2 a 5 acima.

Os compostos de acordo com a invenção diminuíram o crescimento das células tumorais.

Esta actividade pôde ser constatada utilizando o protocolo descrito por Hvattum et al, Biochem. J. 294, 917-921, 1993. EXEMPLO 16: Avaliação dos efeitos dos compostos sobre a reestenose

Os compostos de acordo com a invenção testados são os compostos cuja preparação está descrita nos exemplos 2 a 5 acima. A proliferação das células musculares lisas é um dos principais componentes da aterogénese, da reestenose e da hipertensão associadas às doenças cardiovasculares. A identificação de inibidores desta proliferação representa, pois, um desafio farmacológico interessante.

Os compostos de acordo com a invenção diminuíram o crescimento das células musculares lisas vasculares in vitro e reduziram a reestenose in vivo, no modelo de angioplastia coronária com balão no rato. Estas propriedades foram evidenciadas da forma que se segue. 78 1) Medidas da proliferação das células musculares lisas

As células musculares lisas da artéria coronária ou da aorta provieram de Promocell (Heidelberg, Alemanha) e foram cultivadas de acordo com as indicações do fornecedor, num meio de cultura seleccionado para as células musculares lisas em presença de soro fetal de vitelo a 10%. As células cultivadas até uma confluência de 50% foram tornadas quiescentes por omissão de soro durante 24 horas. As células foram depois tratadas durante 3 a 6 dias na presença de mitogénios (soro a 10%, bFGF 20 ng/ml ou a-trombina 2 u/ml) e dos compostos de acordo com a invenção. No final da experiência, as células foram tratadas com tripsina e contadas no hemocitómetro. 2) Medidas da reestenose no modelo de angioplastia coronária com balão no rato

Ratos Sprague-Dawley adultos, com 200 a 300 g (Iffa Credo, l/Arbresle, França), foram mantidos sob um ciclo de luz/obscuridade de 12 horas, a uma temperatura constante de 20 ± 3°C. Após uma aclimatação de uma semana, os ratos foram pesados e distribuídos por grupos de 6 animais seleccionados de forma que a distribuição do seu peso corporal fosse uniforme. A artéria coronária interna esquerda foi ferida com a ajuda de um balão como descrito anteriormente (Ruef et al.,

Arterioscl. Thromb. and Vasc. Biol. 20, 1745-1758, 2000). Os compostos de acordo com a invenção foram suspensos em carboximetilcelulose e administrados através de sonda intragástrica, à razão de uma vez por dia durante 4, 10 e 21 dias, em diferentes doses. O tratamento iniciou-se um dia antes da intervenção com o balão. Os animais tiveram livre acesso a água e aos alimentos. Os animais foram depois 79 sacrificados, e as artérias coronárias foram fixadas e analisadas como anteriormente descrito (Ruef et ai., Arterioscl. Thromb. and Vasc. Biol. 20, 1745-1758, 2000). EXEMPLO 17: Avaliação dos efeitos dos compostos sobre a

Os compostos de acordo com a invenção testados são os compostos cuja preparação está descrita nos exemplos 2 a 5 acima. A hipertensão arterial é um factor de risco importante das doenças cardiovasculares e representa um desafio farmacológico importante.

Os compostos de acordo com a invenção diminuíram a pressão sanguínea in vivo quando foram administrados a ratos espontaneamente hipertensos (rato SHR), utilizados como modelo de hipertensão. Estas propriedades foram evidenciadas da forma que se segue. 1) Tratamento dos animais

Ratos SHR adultos, com 200 a 300 g (Harlan France, Gannat, França), foram mantidos sob um ciclo de luz/obscuridade de 12 horas, a uma temperatura constante de 20 ± 3°C. Após uma aclimatação de uma semana, os ratos foram pesados e distribuídos por grupos de 6 animais seleccionados de forma que a distribuição do seu peso corporal fosse uniforme. Os compostos de acordo com a invenção foram suspensos em carboximetilcelulose e administrados através de sonda intragástrica, à razão de uma vez por dia durante 7 dias, em 80 diferentes doses. Os animais tiveram livre acesso a água e aos alimentos. 2) Medida da pressão sanguínea A pressão sanguínea foi medida de acordo com o protocolo previamente descrito (Siragy e Carey, J. Clin. Invest., 100, 264-269, 1997). EXEMPLO 18: Avaliação das propriedades antioxidantes sobre culturas de células

Os compostos de acordo com a invenção testados são os compostos cuja preparação está descrita nos exemplos 2 a 5 acima. a) Obtenção e cultura de queratinócitos humanos normais

As culturas de queratinócitos humanos normais (QHN) foram efectuadas a partir de amostras de pele. A amostra foi inicialmente lavada 4 vezes com PBS (Phosphate Buffered Saline - invitrogen, França). Em seguida, ela foi descontaminada, mergulhando-a em dois banhos sucessivos de etanol a 70% durante 30 segundos. Cortaram-se tiras estreitas com 3 mm de largura, tendo cuidado para eliminar o máximo de tecido adiposo e de derme. As tiras foram depois colocadas, durante 4h a 37°C, numa solução de tripsina a 0,25% (Invitrogen, França).

Após separação da epiderme da derme, a preparação epidérmica foi filtrada e centrifugada durante 5 minutos a 1.000 r/min. O resíduo foi recuperado em meio KHN-D (DMEM + soro fetal de vitelo (SFV) a 10% + hidrocortisona 0,4 μρ/ml + EGF 10 ng/ml 81 + toxina colérica 10“9M (Sigma, St. Quentin, França). As células foram contadas e depois semeadas numa quantidade de 10xl06 células/75 cm2.

Após 24h de cultura, o meio foi mudado, e as células foram enxaguadas com PBS e utilizadas para a continuação da cultura em meio de proliferação K-SFM (Invitrogen, França). As células foram depois semeadas com a densidade pretendida. 0 meio das células foi mudado a cada 48 horas, e elas foram cultivadas a 37°C com 5% C02. 0 tratamento das células com ou sem os compostos de acordo com a invenção foi efectuado antes da confluência (70-80%); os compostos foram adicionados, em concentrações que variaram entre 1 e 100 μΜ, directamente ao meio de cultura. b) Obtenção e cultura dos fibroblastos humanos

As culturas de fibroblastos humanos normais foram efectuadas a partir de uma amostra de pele. A amostra foi inicialmente lavada 4 vezes com PBS (Phosphate Buffered Saline Invitrogen, França). Em seguida, ela foi descontaminada, mergulhando-a em dois banhos sucessivos de etanol a 70% durante 30 segundos. Pedaços de derme com uma superfície de cerca de 5 mm2 foram depositados no fundo de uma caixa de Petri. Após adesão dos pedaços ao suporte (cerca de 5 minutos), eles foram cobertos com 4 ml de DMEM contendo SFV a 20%. O meio foi renovado a cada dois dias. As células saíram do explante ao fim de uma semana e colonizaram a caixa de Petri. Quando colonizaram o suporte, as células foram submetidas a tripsina, novamente semeadas e cultivadas no meio de cultura DMEM contendo SFV a 10%, a 37°C e 5% C02 (Invitrogen, França). O tratamento das células foi efectuado na confluência destas, e os compostos de acordo com a 82 invenção foram adicionados, em concentrações que variaram entre 1 e 100 μΜ, directamente ao meio de cultura. c) Medida dos ARN mensageiros

Os ARNm foram extraídos dos queratinócitos e dos fibroblastos humanos normais em cultura, tratados ou não com os compostos de acordo com a invenção. A extracção foi efectuada com a ajuda dos reagentes do kit Absolutely RNA RT-PCR miniprep (Stratagene, França), segundo as indicações do fornecedor. Os ARNm foram depois doseados por espectrometria e quantificados por RT-PCR quantitativo, com o auxilio do kit Light Cycler Fast Start DNA Master Sybr Green 1 (Roche), num aparelho Light Cycler System (Roche, França). Utilizaram-se pares de iniciadores específicos para os genes da superóxido-dismutase (SOD) e da glutationa-peroxidase (GPx), enzimas antioxidantes, como sondas. Pares de iniciadores específicos para os genes 36B4, β-actina e GAPDH foram utilizados como sondas de controlo (ver Tabela I). d) Medida da actividade da glutationa-peroxidase (GPx)

A actividade da glutationa-peroxidase foi determinada a partir de extractos proteicos de células (queratinócitos, fibroblastos) tratadas ou não com os compostos de acordo com a invenção, em concentrações que variaram entre 1 e 100 μΜ. A medida da actividade da GPx foi igualmente efectuada em condições de stress para as células - paraquat 0,5 mM ou H202 0,6 mM (indutores das espécies oxigenadas reactivas). A medida da actividade dos extractos proteicos realizou-se com o auxílio do kit Glutathione Peroxidase Cellular-Activity Assay (Sigma) de acordo com as indicações do fornecedor. A 83 medida indirecta baseou-se na oxidação da glutationa em glutationa oxidada catalisada pela glutationa-peroxidase. 0 retorno à forma não oxidada foi catalisado pela glutationa-redutase e o NADPH (β-Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phophate). A diminuição da absorvância do NADPH foi medida a 340 nm com a ajuda de um espectrofluorimetro Shimazu 1501 (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japão) e reflecte a actividade da GPx, uma vez que a GPx é o factor limitante desta reacção. e) Medida da peroxidação lipídica

Os reagentes provieram de Sigma (St Quentin, França) salvo indicação em contrário. A peroxidação lipidica foi medida por doseamento do malondialdeido (MDA) pelo ácido tiobarbitúrico (TBA). Após os tratamentos, o sobrenadante das células foi recolhido (900 μΐ) e adicionaram-se 90 μΐ de hidroxitolueno butilado (Morliere P. et al. (1991) UVA-induced lipid peroxidation in cultured human fibroblasts. Biochim. Biophys. Acta. 1084, 261-8). Um ml de uma solução de TBA a 0,375% em HC1 0,25M contendo ácido tricloroacético a 15% foi igualmente adicionado ao sobrenadante. A mistura foi aquecida a 80°C durante 15 minutos, arrefecida em gelo, e a fase orgânica foi extraída com butanol. A análise da fase orgânica fez-se por espectrof luorometria (λθχα=515 nm e λΘΓη=550 nm), utilizando um espectrofluorimetro Shimazu 1501 (Shimadzu Corporation,

Kyoto, Japão). Os TBARS foram expressos em equivalentes de MDA, utilizando como padrão o tetraetoxipropano. Os resultados foram normalizados em relação ao teor de proteínas das células. A indução da peroxidação lipídica foi obtida por tratamento das células com paraquat 0,5 mM (indutor das 84 espécies oxigenadas reactivas) ou com peróxido de hidrogénio 0,6 mM, durante 4h. A protecção anti-radicalar dos compostos de acordo com a invenção, em concentrações que variaram entre 1 e 100 μΜ, foi avaliada por um pré-tratamento de 24h, antes da indução da peroxidação lipidica. EXEMPLO 19: Avaliação das propriedades anti-inflamatórias sobre epidermes reconstruídas

As epidermes reconstruídas foram fornecidas pela companhia SkinEthic (Nice, França). As epidermes foram utilizadas ao dia 17 (0,63 cm2), quando a camada córnea se encontrava presente e a ultraestrutura do epitélio se aproximou daquela da epiderme humana in vivo. As epidermes reconstruídas foram mantidas em cultura segundo as indicações do fornecedor. As doses de compostos de acordo com a invenção empregues para o tratamento das epidermes reconstruídas variaram entre 2 e 10 mg/cm2, durante 24 e 72h.

Os compostos de acordo com a invenção testados são os compostos cuja preparação está descrita nos exemplos 2 a 5 acima. a) Medida das propriedades anti-inflamatórias

As epidermes reconstruídas foram pré-incubadas com os compostos de acordo com a invenção, em concentrações que variaram entre 2 e 10 mg/cm2, durante 24h, e depois foram tratadas durante 6h com SDS a 0,4% ou 1 μρ de TPA (12-0- tetradecanoílforbol-13-acetato) . O potencial anti- inflamatório dos compostos foi avaliado com o auxílio da técnica ELISA. Os meios de cultura (subjacentes) das epidermes de controlo ou tratadas foram recolhidos e 85 congelados a -20°C. A quantificação da interleucina 1-a (ILl— a) foi efectuada com o auxilio do kit de detecção ELISA iLl-a (R&D System, Reino Unido), segundo as indicações do fornecedor. b) Medida dos arn mensageiros

Os ARNm foram extraídos das epidermes reconstruídas, tratadas com ou sem os compostos de acordo com a invenção, nas mesmas condições que anteriormente. A extracção foi efectuada com a ajuda dos reagentes do kit Absolutely RNA RT-PCR miniprep (Stratagene), segundo as indicações do fornecedor. Os ARNm foram depois doseados por espectrometria e quantificados por RT-PCR quantitativo, com o auxílio do kit Light Cycler Fast Start DNA Master Sybr Green 1 (Roche), num aparelho Light Cycler System (Roche). Utilizaram-se pares de iniciadores específicos para os genes ILl (interleucina 1) e IL6 como sondas. Pares de iniciadores específicos para os genes 36B4, β-actina e GAPDH foram utilizados como sondas de controlo (ver Tabela I). EXEMPLO 20: Avaliação das propriedades antioxidantes sobre epidermes reconstruídas

As epidermes reconstruídas foram fornecidas pela companhia SkinEthic (Nice, França).

As epidermes foram utilizadas ao dia 17 (0,63 cm2), quando a camada córnea se encontrava presente e a ultraestrutura do epitélio se aproximou daquela da epiderme humana in vivo. As epidermes reconstruídas foram mantidas em cultura segundo as indicações do fornecedor. As doses de compostos de acordo com 86 a invenção empregues para o tratamento das epidermes reconstruídas variaram entre 2 e 10 mg/cm2, durante 24 e 72h.

Os compostos de acordo com a invenção testados são os compostos cuja preparação está descrita nos exemplos 2 a 5 acima. a) Medida dos ARN mensageiros

Os ARNm foram extraídos dos queratinócitos (provenientes das epidermes reconstruídas, tratadas com ou sem os compostos de acordo com a invenção). A extracção foi efectuada com a ajuda dos reagentes do kit Absolutely RNA RT-PCR miniprep (Stratagene), segundo as indicações do fornecedor. Os ARNm foram depois doseados por espectrometria e quantificados por RT-PCR quantitativo, com o auxílio do kit Light Cycler Fast Start DNA Master Sybr Green 1 (Roche), num aparelho Light Cycler System (Roche). Utilizaram-se pares de iniciadores específicos para os genes da superóxido-dismutase (SOD) e da glutationa-peroxidase (GPx), enzimas antioxidantes, como sondas. Pares de iniciadores específicos para os genes 36B4, β-actina e GAPDH foram utilizados como sondas de controlo (ver Tabela I). b) Medida da actividade da glutationa-peroxidase (GPx) A actividade da glutationa-peroxidase foi determinada a partir de extractos proteicos de epidermes reconstruídas, tratadas ou não com os compostos de acordo com a invenção (2 a 10 mg/cm2) . A medida da actividade da GPx foi igualmente efectuada em condições de stress para as células - paraquat 0,5 mM (indutor das espécies oxigenadas reactivas). A medida da actividade dos extractos proteicos realizou-se com o 87 auxílio do kit Glutathione Peroxidase Cellular-Activity Assay (Sigma), de acordo com as indicações do fornecedor. A medida indirecta baseou-se na oxidação da glutationa em glutationa oxidada catalisada pela glutationa-peroxidase. 0 retorno à forma não oxidada foi catalisado pela glutationa-redutase e o NADPH (β-Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phophate). A diminuição da absorvância do NADPH foi medida a 340 nm com a ajuda de um espectrofluorímetro Shimazu 1501 (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japão) e reflecte a actividade da GPx, uma vez que a GPx é o factor limitante desta reacção. EXEMPLO 21: Composição cosmética - creme de dia para o rosto, anti-idade

Estearato de glicerilo + estearato PEG-100 6,00 % Esqualano 3,00 % Poliisobuteno hidrogenado 3,00 % Tricaprilato/caprato de glicerol 3,00 % Glicerina 2,00 % Metoxicinamato de octilo 2,00 % Cera de abelha 1,50 % Octanoato de cetoestearilo 1,50 % Álcool cetílico 1,00 % Álcool estearílico 1,00 % Dimeticona 1,00 % Goma de xantana 0,20 % Carbómero 0,15 % 1,2,3-tritetradeciltioacetilglicerol 0,10 % Neutralizante qs. Conservantes qs. Perfume, corantes qs. Água qbp 100,00% 88 EXEMPLO 22: Composição cosmética - emulsão-gel para o rosto,

Glicerina 5,00 % Triglicéridos caprílico/cáprico/succínico 3,00 % Metoxicinamato de octilo 1,00 % 1, 3-dipalmitoíl-2-tetradeciltioacetil- glicerol 0,50 % Polímero reticulado de acrilatos/acrilato de alquilo C10-30 0,50 % Hidrolisado de proteína de trigo 0,50 % Dimeticona-copoliol 0,50 % Neutralizante qs . Conservantes qs . Perfume, corantes qs . Água qbp 100,00 % 26-11-2007 89

Claims (36)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula geral (1):

   em que: • G representa um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre ou um grupo N-R4, no qual R4 é um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, compreendendo 1 a 5 átomos de carbono; • Rl, R2 e R3, idênticos ou diferentes, representam (i) um átomo de hidrogénio, (ii) um grupo CO-R no qual R é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 1 a 25 átomos de carbono ou (iii) um grupo de fórmula C0- (CH2) ^í-X-R', na qual X é um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo S02, n é um número inteiro compreendido entre 0 e 11, preferencialmente igual a 0 ou 1, e R' é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 13 a 23 átomos de carbono e, eventualmente, um ou mais heterogrupos seleccionados entre um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO e um grupo S02, em que pelo menos um dos grupos 1 Rl, R2 e R3 é um grupo de fórmula C0- (CH2) 2n+i-X-R' tal como definido acima.
2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo(s) grupo(s) R, idênticos ou diferentes, representarem um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou insaturado, substituído ou não, cuja cadeia principal compreende 1 a 20 átomos de carbono, de preferência 7 a 17 átomos de carbono.
3. 3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo(s) grupo(s) R', idênticos ou diferentes, representarem um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou insaturado, substituído ou não, cuja cadeia principal compreende 13 a 20 átomos de carbono, mais preferencialmente 14 a 17 átomos de carbono.
4. 4. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo(s) grupo(s) R, idênticos ou diferentes, serem seleccionados entre C7H15, C10H21, CnH23, Ci3H27, Ci4H29, Ci6H33, Ci7H35, Ci5H31, C 2 0; 5 (5, 8, 11, 14, 17), C22:6 (4, 7, 10, 13, 16, 19), Ci4H27, C14H25r C15H29, Ci7H29, Ci7H3i, Ci7H33, C19H29, CigH3i, C2iH3i, C2iH35, C2iH37, C2iH39, C23H45, (CH2) n'~CH (CH3) C2H5, (CH=C(CH3) (CH2)2)n.,-CH=C(CH3)2 e (CH2) 2x+4-C (CH3) 2-(CH2) n. —CH3, em que x é um número inteiro igual a ou compreendido entre 1 e 11, n' é um número inteiro igual a ou compreendido entre 1 e 22, n'' é um número inteiro igual a ou compreendido entre 1 e 5. n''' é um número inteiro igual a ou compreendido entre 0 e 22 e (2x+n''') é inferior ou igual a 22.
5. 5. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 3, caracterizado pelo(s) grupo(s) R', idênticos ou diferentes, serem seleccionados entre Ci3H27, Ci4H29, Ci6H33, Ci7H35, C15H31, C2o: 5 (5, 8, 11, 14, 17), C22:6(4, 7, 10, 13, 16, 19), Ci4H27, 2 C14H25/ C15H29 , C17H29r C17H31, C17H33, C19H29, C19H31, C21H31, C21H35, C21H37, C21H39, C23H45, (CH2) n'~CH (CH3)C2H5, (CH=C(CH3) (CH2)2)n"- CH=C (CH3) 2 e (CH2) 2x+i-C (CH3) 2-(CH2) n'"-CH3, em que x é um número inteiro igual a ou compreendido entre 1 e 11, n' é um número inteiro igual a ou compreendido entre 1 e 22, n'' é um número inteiro igual a ou compreendido entre 1 e 5, n''' é um número inteiro igual a ou compreendido entre 0 e 22 e (2x+n''') é inferior ou igual a 20.
6. 6. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo(s) grupo(s) R, idênticos ou diferentes, representarem um grupo alquilo inferior compreendendo 1 a 6 átomos de carbono.
7. 7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo(s) grupo(s) R', idênticos ou diferentes, serem grupos alquilo saturados e lineares compreendendo 13 a 17 átomos de carbono, de preferência 14 a 16, mais preferencialmente 14.
8. 8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelos grupos alquilo estarem substituídos com um ou mais substituintes, idênticos ou diferentes, seleccionados entre um átomo de halogéneo (iodo, cloro, flúor, bromo) e um grupo OH, =0, N02, NH2, CN, CH2-0, CH2OCH3, CF3 e COOZ, no qual Z é um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo compreendendo 1 a 6 átomos de carbono.
9. 9. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por X ser um átomo de enxofre ou de selénio, de preferência um átomo de enxofre.
10. 10. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo grupo G representar um átomo 3 de oxigénio ou um grupo N-R4 e, quando G é N-R4, R4 representar preferencialmente um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo.
11. 11. Composto de acordo com uma das reivindicações anteriores, caracterizado por, no grupo C0- (CH2) , n ser diferente de 1 e ser, em particular, igual a 0.
12. 12. Composto de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que pelo menos um dos grupos Rl, R2 e R3 representa um grupo CO- (CH2) 2n+i-X-R', no qual X representa um átomo de selénio ou, de preferência, de enxofre e/ou R' é um grupo alquilo saturado e linear compreendendo 13 a 17 átomos de carbono, de preferência 14 a 16, ainda mais preferencialmente 14 átomos de carbono.
13. 13. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado por R2 ser um grupo de fórmula CO-(CH2) 2n+i-X-R' , de preferência na qual X representa um átomo de selénio ou, de preferência, de enxofre e/ou R' é um grupo alquilo saturado e linear compreendendo 13 a 17 átomos de carbono, mais preferencialmente na qual n é igual a 0, em particular um grupo de fórmula CO-CH2-S-C14H29·
14. 14. Composto de acordo com a reivindicação 13, caracterizado por Rl e R3, idênticos ou diferentes, representarem um átomo de hidrogénio ou um grupo CO-R.
15. 15. Composto de acordo com a reivindicação 14, caracterizado por Rl e R3, idênticos ou diferentes, representarem um grupo CO-R. 4
16. 16. Composto de acordo com uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado por dois dos grupos Rl, R2 e R3 serem grupos C0-(CH2)2n+i-x-R', idênticos ou diferentes, de preferência nos quais X representa um átomo de selénio ou, de preferência, de enxofre e/ou R' é um grupo alquilo saturado e linear compreendendo 13 a 17 átomos de carbono, mais preferencialmente nos quais n é igual a 0, em particular os grupos CO-CH2-S-C14H29.
17. 17. Composto de acordo com uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado por Rl, R2 e R3, idênticos ou diferentes, de preferência idênticos, serem grupos CO- (CH2) 2n+i-X-R' , de preferência nos quais X representa um átomo de selénio ou, de preferência, de enxofre e/ou R' é um grupo alquilo saturado e linear compreendendo 13 a 17 átomos de carbono, mais preferencialmente nos quais n é igual a 0, em particular os grupos CO-CH2-S-C14H29.
18. 18. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado por Rl ser um grupo de fórmula CO-(CH2) 2n+i-X-R', de preferência na qual X representa um átomo de selénio ou, de preferência, de enxofre e/ou R' é um grupo alquilo saturado e linear compreendendo 13 a 17 átomos de carbono, mais preferencialmente na qual n é igual a 0, em particular um grupo CO-CH2-S-C14H29.
19. 19. Composto de acordo com a reivindicação 18, caracterizado por um e/ou os dois grupos R2 e R3 representarem um átomo de hidrogénio.
20. 20. Composto de acordo com a reivindicação 18, caracterizado por um e/ou os dois grupos R2 e R3 representarem um grupo CO-R, idêntico ou não. 5
21. 21. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16 e 18 a 20, caracterizado por um dos substituintes Rl, R2 ou R3 ser um grupo COCH3.
22. 22. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por G representar um átomo de oxigénio e pelos grupos Rl, R2 e R3, idênticos, representarem grupos CO-CH2-S-C14H29.
23. 23. Composição farmacêutica caracterizada por compreender, num veiculo aceitável no plano farmacêutico, pelo menos um composto de fórmula geral (I) tal como descrita na reivindicação 1, em que: • G representa um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre ou um grupo N-R4, no qual R4 é um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, compreendendo 1 a 5 átomos de carbono; • Rl, R2 e R3, idênticos ou diferentes, representam (i) um átomo de hidrogénio, (ii) um grupo CO-R no qual R é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 1 a 25 átomos de carbono ou (iii) um grupo de fórmula CO-(CH2) 2n+i-X-R', na qual X é um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo S02, n é um número inteiro compreendido entre 0 e 11, preferencialmente igual a 0 ou 1, ainda mais preferencialmente igual a 0, e R' é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 2 a 23 átomos de carbono e, eventualmente, um ou mais heterogrupos, de preferência 0, 1 ou 2, mais preferencialmente 0 ou 1, seleccionados entre um átomo 6 de oxigénio, um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo SO2, em que pelo menos um dos grupos Rl, R2 e R3 é um grupo de fórmula C0- (CH2) 2n+i-X-R' tal como definido acima.
24. 24. Composição cosmética caracterizada por compreender, num veículo aceitável no plano cosmético, pelo menos um composto de fórmula geral (I) tal como descrita na reivindicação 1, em que: • G representa um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre ou um grupo N-R4, no qual R4 é um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, compreendendo 1 a 5 átomos de carbono; • Rl, R2 e R3, idênticos ou diferentes, representam (i) um átomo de hidrogénio, (ii) um grupo CO-R no qual R é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 1 a 25 átomos de carbono ou (iii) um grupo de fórmula C0- (CH2) 2n+i-X-R', na qual X é um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo S02, n é um número inteiro compreendido entre 0 e 11, preferencialmente igual a 0 ou 1, ainda mais preferencialmente igual a 0, e R' é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 2 a 23 átomos de carbono e, eventualmente, um ou mais heterogrupos, de preferência 0, 1 ou 2, mais preferencialmente 0 ou 1, seleccionados entre um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo SO2, em que pelo menos um dos 7 grupos Rl, R2 e R3 é um grupo de fórmula C0- (CH2) 2n+i_X_R' tal como definido acima.
25. 25. Composição nutricional caracterizada por compreender, num veiculo aceitável no plano nutricional, pelo menos um composto de fórmula geral (I) tal como descrita na reivindicação 1, em que: • G representa um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre ou um grupo N-R4, no qual R4 é um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, compreendendo 1 a 5 átomos de carbono; • Rl, R2 e R3, idênticos ou diferentes, representam (i) um átomo de hidrogénio, (ii) um grupo CO-R no qual R é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 1 a 25 átomos de carbono ou (iii) um grupo de fórmula C0- (CH2) 2n+i-X-R' r na qual X é um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo SO2, n é um número inteiro compreendido entre 0 e 11, preferencialmente igual a 0 ou 1, ainda mais preferencialmente igual a 0, e R' é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 2 a 23 átomos de carbono e, eventualmente, um ou mais heterogrupos, de preferência 0, 1 ou 2, mais preferencialmente 0 ou 1, seleccionados entre um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo S02, em que pelo menos um dos grupos Rl, R2 e R3 é um grupo de fórmula CO- (CH2) 2n+i_X_R' tal como definido acima.
26. 26. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 25, caracterizada pelo composto ser de fórmula (I), na qual R' é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 9 a 23 átomos de carbono e, eventualmente, um ou vários heterogrupos.
27. 27. Composição de acordo com uma das reivindicações 23 a 26, caracterizada pelo composto de fórmula (I) ser tal como definido em uma das reivindicações 1 a 22.
28. 28. Composição de acordo com a reivindicação 27, caracterizada pelo composto de fórmula (I) ser tal como definido na reivindicação 22.
29. 29. Utilização de um composto de fórmula geral (I), tal como definida na reivindicação 1, para a preparação de uma composição farmacêutica destinada à prevenção e/ou ao tratamento de dislipidemias, de doenças cardiovasculares, da sindrome X, da reestenose, da diabetes, da obesidade, da hipertensão, de cancros ou de doenças dermatológicas, em que o composto é representado pela fórmula (I) na qual: • G representa um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre ou um grupo N-R4, no qual R4 é um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, compreendendo 1 a 5 átomos de carbono; • Rl, R2 e R3, idênticos ou diferentes, representam (i) um átomo de hidrogénio, (ii) um grupo CO-R no qual R é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 1 a 25 átomos de carbono ou (iii) um grupo de 9 fórmula CO- (CH2) 2n+i-X-R', na qual X é um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo S02, n é um número inteiro compreendido entre 0 e 11, preferencialmente igual a 0 ou 1, ainda mais preferencialmente igual a 0, e R' é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 2 a 23 átomos de carbono e, eventualmente, um ou mais heterogrupos, de preferência 0, 1 ou 2, mais preferencialmente 0 ou 1, seleccionados entre um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo S02, em que pelo menos um dos grupos Rl, R2 e R3 é um grupo de fórmula CO- (CH2) 2n+i-X-R' tal como definido acima.
30. 30. Utilização de um composto de fórmula geral (I), tal como definida na reivindicação 1, para a preparação de uma composição cosmética destinada à prevenção e/ou ao tratamento do envelhecimento cutâneo e dos seus efeitos, da protecção da pele, do aparecimento ou do desenvolvimento de rugas, em que o composto é representado pela fórmula geral (I) na qual: • G representa um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre ou um grupo N-R4, no qual R4 é um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, compreendendo 1 a 5 átomos de carbono; • Rl, R2 e R3, idênticos ou diferentes, representam (i) um átomo de hidrogénio, (ii) um grupo CO-R no qual R é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 1 a 25 átomos de carbono ou (iii) um grupo de fórmula CO-(CH2) 2n+i-X-R', na qual X é um átomo de 10 enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo S02, n é um número inteiro compreendido entre 0 e 11, preferencialmente igual a 0 ou 1, ainda mais preferencialmente igual a 0, e R' é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 2 a 23 átomos de carbono e, eventualmente, um ou mais heterogrupos, de preferência 0, 1 ou 2, mais preferencialmente 0 ou 1, seleccionados entre um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo S02, em que pelo menos um dos grupos Rl, R2 e R3 é um grupo de fórmula CO- (CH2) 2n+i-X-R' tal como definido acima.
31. 31. Utilização de um composto de fórmula geral (I), tal como definida na reivindicação 1, para a preparação de uma composição farmacêutica destinada a diminuir as taxas de triglicéridos e/ou de colesterol circulantes ou a inibir a modificação oxidativa das LDL, em que o composto é representado pela fórmula (I) na qual: • G representa um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre ou um grupo N-R4, no qual R4 é um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, compreendendo 1 a 5 átomos de carbono; • Rl, R2 e R3, idênticos ou diferentes, representam (i) um átomo de hidrogénio, (ii) um grupo CO-R no qual R é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 1 a 25 átomos de carbono ou (iii) um grupo de fórmula CO- (CH2) 2n+i-X-R', na qual X é um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo 11 S02, n é um número inteiro compreendido entre 0 e 11, preferencialmente igual a 0 ou 1, ainda mais preferencialmente igual a 0, e R' é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 2 a 23 átomos de carbono e, eventualmente, um ou mais heterogrupos, de preferência 0, 1 ou 2, mais preferencialmente 0 ou 1, seleccionados entre um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo S02, em que pelo menos um dos grupos Rl, R2 e R3 é um grupo de fórmula CO-(CH2)2n+i-X-R' tal como definido acima.
32. 32. Utilização de um composto de fórmula geral (I), tal como definida na reivindicação 1, para a preparação de uma composição farmacêutica destinada a induzir a expressão de enzimas implicadas na β-oxidação mitocondrial e peroxissomal e/ou a aumentar as capacidades de oxidação dos ácidos gordos hepáticos e/ou a induzir o crescimento das mitocôndrias nas fibras musculares de tipo I e II e/ou a activar PPARa e PPARy, em que o composto é representado pela fórmula geral (I) na qual: • G representa um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre ou um grupo N-R4, no qual R4 é um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, compreendendo 1 a 5 átomos de carbono; • Rl, R2 e R3, idênticos ou diferentes, representam (i) um átomo de hidrogénio, (ii) um grupo CO-R no qual R é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal 12 compreende 1 a 25 átomos de carbono ou (iii) um grupo de fórmula C0- (CH2) 2n+i-X-R', na qual X é um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo S02, n é um número inteiro compreendido entre 0 e 11, preferencialmente igual a 0 ou 1, ainda mais preferencialmente igual a 0, e R' é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 2 a 23 átomos de carbono e, eventualmente, um ou mais heterogrupos, de preferência 0, 1 ou 2, mais preferencialmente 0 ou 1, seleccionados entre um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo S02, em que pelo menos um dos grupos Rl, R2 e R3 é um grupo de fórmula CO-(CH2) 2n+i-X-R' tal como definido acima.
33. 33. Utilização de um composto de fórmula geral (I), tal como definida na reivindicação 1, para a preparação de uma composição farmacêutica destinada a diminuir o crescimento das células tumorais, em que o composto é representado pela fórmula geral (I) na qual: • G representa um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre ou um grupo N-R4, no qual R4 é um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, compreendendo 1 a 5 átomos de carbono; • Rl, R2 e R3, idênticos ou diferentes, representam (i) um átomo de hidrogénio, (ii) um grupo CO-R no qual R é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 1 a 25 átomos de carbono ou (iii) um grupo de fórmula CO-(CH2) 2n+i-X-R', na qual X é um átomo de 13 enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo S02, n é um número inteiro compreendido entre 0 e 11, preferencialmente igual a 0 ou 1, ainda mais preferencialmente igual a 0, e R' é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 2 a 23 átomos de carbono e, eventualmente, um ou mais heterogrupos, de preferência 0, 1 ou 2, mais preferencialmente 0 ou 1, seleccionados entre um átomo de oxigénio, um átomo de enxofre, um átomo de selénio, um grupo SO ou um grupo S02, em que pelo menos um dos grupos Rl, R2 e R3 é um grupo de fórmula CO- (CH2) 2n+i-X-R' tal como definido acima.
34. 34. Utilização de acordo com uma das reivindicações 29 a 33, caracterizada pelo composto ser de fórmula (I), na qual R' é um grupo alquilo linear ou ramificado, saturado ou não, eventualmente substituído, cuja cadeia principal compreende 9 a 23 átomos de carbono e, eventualmente, um ou vários heterogrupos.
35. 35. Utilização de acordo com uma das reivindicações 29 a 34, caracterizada pelo composto de fórmula (I) ser tal como definido numa das reivindicações 1 a 22.
36. 36. Utilização de acordo com a reivindicação 35, caracterizada pelo composto de fórmula (I) ser tal como definido na reivindicação 22. 26-11-2007 14