PT1579859E - Utilização de n-(2-aril-propionil)-sulfonamidas pata o tratamento de lesões da medula espinal - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "UTILIZAÇÃO DE N-(2-ARIL-PROPIONIL)-SULFONAMIDAS PÃRA O TRATAMENTO DE LESÕES DA MEDULA ESPINAL" A presente invenção relaciona-se com a utilização de N-(2-aril-propionil)-sulfonamidas de fórmula geral (I): CH3 R'

em que R2 é um grupo arilo, R é um alquilo Ci-Ce linear ou ramificado, trifluorometilo, ciclo-hexilo, ο-tolilo, 3-piridilo, 2-piridil-etilo, p-ciano-fenilmetilo, p-aminofenilmetilo, 3-ciano-l~propilo, grupo 4-aminobutilo, um grupo alcoxietileno CH3-(CH2)ni-(OCH2CH2) mi/ em que η3 é zero ou 1 e m,t é um número inteiro de 1 a 3, ou um grupo PiP:?N-CH2-CH2 em que Pi e P2 são, independentemente, H, alquilo Cx-C3, benziloxi-carbonilo, a-, ou β-piridocarbonilo, carboxicarbonilo ou carbalcoxicarbonilo, ou Ρχ e P2, quando juntos ao átomo de N ao qual estão ligados, formam um resíduo de ftalimido, piperidino, morfolino; R' é H ou alquilo Cj.“C3 linear ou ramificado, preferencialmente hidrogénio, para a preparação de um medicamento para o tratamento de lesão da medula espinal» Ί

ΜΊΤΕCEDENTES DA INVENÇÃO A lesão da 1 (Spinal Cord Injury, SCI) é um dos estados mais frustrantes em neurologia e medicina. A grande maioria dos doentes com SCI são jovens e a maioria dos sobreviventes de lesões significativas enfrentam a expectativa de recuperação limitada e de invalidez permanente. A incidência de novos casos de SCI é alta, para além de 12.000 novos casos por ano de paraplegia ou quadríplegia nos Estados Unidos {Sekhon L. et ai., Spine 26, S2-S12, 2001) . No entanto, com gestão melhorada, a taxa de mortalidade de SCI tem caído de forma regular. Como resultado, a prevalência de doentes incapacitados por SCI aproxima-se dos 200.000, só nos Estados Unidos. A necessidade de uma intervenção aguda, eficaz, tanto para limitar os números dos doentes permanentemente inválidos, como para dar esperança real aos novos lesionados, é particularmente sentida. O tratamento actual de SCI é limitado a uma terapêutica com alta dose de glucocorticóide, que só é útil quando administrada dentro de poucas horas após a lesão (Bracken Μ. B. et al.f The New England Journal of Medicine 322,1405-1411, 1990). Os mecanismos através do quais os esteróides exercem os seus efeitos moderadamente benéficos permanecem incertos, embora sejam atribuídos, de um modo geral, aos efeitos protectores sobre a peroxidação de lípidos. De facto, a metilprednisolona suprime a ruptura de membrana e neurofilamento inibindo a peroxidação de lípidos em 1 lesionada (Braughler J. M. et al., J. Neurosurg 67, 102-105, 1987). Ainda assim, apesar da insuficiência fundamental, o tratamento com uma alta dose de glucocorticóide permaneceu a única terapêutica disponível para a SCI.

Sabe-se agora que a patogénese da SCI envolve citocinas, particularmente o Factor de Necrose Tumoral (TNF), cuja expressão contribui para a morte neuronal após SCI (Beattie M. S. et al., Progress ín Brain Research 137,37-47, 2002) e infiltração de leucócitos. De facto, a SCI resulta tanto na lesão primária, caracterizada pela destruição da estrutura neural e vascular, como uma cascata de processos secundários que, colectivamente, levam à perda adicional de tecido. Crê-se que a inflamação pós-traumática, caracterizada pela acumulação de mícroglia e leucócitos actívados, contribua para a patogénese secundária (Mautes A. E. M. et al., Physical Therapy 80,673-687, 2000). As estratégias dirigidas ao bloqueio do influxo de neutrófilos ou macrófilos e à inibição da actividade fagocítica e secretória dos macrófagos na medula espinal lesionada resultaram em neuroprotecção e função locomotora melhoradas (Giulían D. et al., Ann. Neurol. 27, 3-42, 1990; Taoka Y. et al., Neuroscience 79, 1177-1182, 1997).

De facto, de acordo com o conhecimento disponível, a inibição selectiva da quimiotaxia. induzida por interleucina-8 (CX.CL8) não é uma condição suficiente para a protecção da SCI. De facto, a literatura cientifica identificou inúmeros factores envolvidos na etiologia da SCI, dentre os quais a CXCL8, certamente, não aparece como um dos mais importantes: por exemplo, Taoka Y. et al., -4- (Journal of Neurotrauma 18, 533-543, 2001) registam que a leucocitopenia e a inibição do recrutamento de leucócitos por meio da administração de um anticorpo monoclonal anti-P~selectina, como bloqueador específico da aderência de leucócitos, reduziu, de forma significativa, os distúrbios motores observados a seguir a SCI. Além disso, uma investigação recente demonstrou níveis elevados de mediadores inflamatórios no plasma, incluindo a interleucina-2, a interleucina-6, o receptor solúvel da interleucina-2 e a molécula 1 de aderência intercelular (ICAM-1) em doentes com SCI existente há muito tempo, como possíveis factores patogénicos na demora da recuperação funcional (Segai J. L. et al.f Arch. Phys. Med. Rehabil. 78, 44-47, 1997). Em consequência, pelos dados da literatura, parece ser necessário um inibídor específico da resposta inflamatória ou, pelo menos, do recrutamento de leucócitos, para a inibição da SCI.

As N-(2-aril-propionil)-sulfonamidas de fórmula geral (I) acima estão descritas no documento EP 1123276 e no Pedido de Patente Europeia EP 04101202.2. Registou-se que as sulfonamidas aí descritas são úteis, por exemplo, para a prevenção e o tratamento de lesão de tecido devido ao recrutamento exacerbado de neutrófilos polimorfonucleares (leucócitos PMN) nos sítios inflamatórios.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

Verificou-se agora, surpreendentemente, que as referidas sulfonamidas de fórmula (I) e, particularmente, as sulfonamidas de fórmula (Ia)

em que R" representa um a três substítuintes, que são os mesmos ou diferentes, seleccionados de átomos de hidrogénio, halogéneo, alquilo C1-C4, alcoxilo C1-C4, hidroxilo, aciloxi C1-C7, ciano, nitro, amino, acilamino C.1.-C3, haloalquilo C1.-C3, haloalcoxilo C]-C3, benzoílo, 4-(2-metil-propil)-fenilo, 3-fenoxi-fenilo, 2-[4-(l-oxo-2-isoindolinil)fenilo], 5-benzoil-tien-2-il, 4-tienoil-fenil, halogenoalquilsulfoniloxilo Ci-C2, são eficazes na protecção funcional da lesão de SCI.

De preferência, R", nos compostos de fórmula (Ia) representa hidrogénio, 4-isobutilo, 3-benzoxlo, 4-trifluorometanossulfoniloxilo. Δ protecção contra a lesão funcional da SCI foi demonstrada num modelo experimental em ratos, descrita aqui adiante em pormenor, utilizando dois compostos representativos de fórmula (I), nomeadamente, o composto de fórmula (II) e o seu sal de lisina (L-lisina ou DL- 6 lisina), e o composto de fórmula (III). Verificou-se que ambos os compostos são muito activos neste modelo in vivo. 6

0 composto de fórmula (II) e o composto de fórmula (III) também reduzem a lesão em tecido, avaliada como extensão da cavidade pós-traumática, apoptose de olígodendrócitos e infiltração de leucócitos. A invenção está ilustrada no Exemplo a seguir.

EXEMPLO

Ratos Sprague-Dawley adultos (fêmeas), pesando 240-260 g foram mantidos nas dependências do animal sob condições de habitação padrão (22 ± 2 °C, 65% humidade, luz artificial de 06:00-20:00 h) . Uma dieta padrão seca e água estavam disponíveis ad líbítum. A SCI no rato foi realizada conforme registado anteriormente (Gorio A. et al., Proc. Natl. Acad. Sei. EUA 99, 9450-9455, 2002). O aparelho de lesionar é controlado por computador e livre da influência da força da gravidade, A força aplicada foi de 1 N por 1 segundo. -Ί Α recuperação da incapacidade do membro posterior foi avaliada por meio do "teste de locomoção livre" realizado 24 horas, 4, 7, 11, 15, 19 e 27 dias após a SCI. 0 "teste de locomoção livre" permite a detecção do posicionamento dos pés, e a rotação das articulações. A qualidade da recuperação funcional é expressa quantitativamente de acordo com a "escala BBB" desenvolvida na Universidade de Ohio. Tal teste permite a quantificação dos défices de locomoção livre do membro posterior do rato por meio da observação dos seus movimentos num espaço aberto, livre de obstáculos: 0-0 rato lesionado não pode mover nenhum dos membros. 1 - Pequeno movimento de uma articulação (anca ou j oelho).

De 2 a 6 - Movimento em extensão progressiva das três articulações. 7 - Bom movimento das 3 articulações. 8 - Os animais andam sem suporte plantar do peso.

De 9 a 11 - Os animais andam com frequência ocasional a progressiva com suporte plantar do peso, 12 - Coordenação ocasional dos membros posteriores e membros anteriores durante o caminhar.

De 13 a 14 - Coordenação progressiva com os membros anteriores. 15 - Suporte plantar consistente do peso e coordenação durante o caminhar; movimento ocasional de dedos durante o avanço. - 8 -

De 16 a 18 - Tendência progressiva de movimento de dedos; durante o caminhar o pé fica ein posição predominantemente paralela em relação ao corpo, 19 - A posição do pé é correctamente paralela em relação ao corpo e a cauda é mantida abaixada durante o caminhar. 20 - Oscilação lateral e locomoção instável. 21 - Condição normal. A apoptose de oligodendrócitos foi determinada ao nível dos fascículos gracilis e cuneatus (3 mm frontalmente do sítio da lesão contusa) 28 dias depois da SCI utilizando a metodologia de marcação (TUNEL) e dUTP mediada por terminal deoxinucleotidiltransferase. A infiltração de leucócitos foi estimada quantitativamente por células CD68 positivas 1 e 7 dias depois da SCI. A extensão da cavidade pós-traumática foi realizada por meio de técnicas histológicas clássicas 28 dias depois da SCI.

Foram estudados os seguintes grupos experimentais de animais:

Grupo 1 (n=28) ratos tratados com solução de soro fisiológico depois da SCI.

Grupo 2 (n=28) ratos tratados com o composto de fórmula (II) depois da SCI. - 9 -

Grupo 3 (η=28} ratos tratados com o composto de fórmula (III) depois da SCI.

Os animais foram tratados com soro fisiológico ou com o composto de fórmula (II) (15 mg/kg) por meio de injecçâo i.v. em 30 minutos depois da SCI, depois injecção s.c. a cada 2 horas nas 6 horas seguintes. Nos dias seguintes os animais foram tratados com injecções s.c. às 8 horas da manhã e às 5 horas da tarde até o 7o dia depois da SCI. Os animais foram tratados com o composto de fórmula (III) (8 mg(kg) por meio de injecção i.v. 30 minutos depois da SCI, depois com injecção s.c. 24 horas depois da SCI. Nos dias seguintes os animais foram tratados com injecções s.c. a cada 36 horas até o 7o dia depois da SCI.

Os dados foram analisados por ANOVA seguido pelo teste t de Dunnett. 0 significado estatístico foi aceite em P<0,05.

RESULTADOS O efeito do composto de fórmula (II) e do composto de fórmula (III) sobre a recuperação funcional (marcação motora), expressa quantitativamente de acordo com a "escala BBB", foi avaliado em tempos diferentes depois da SCI- A Figura (1) ilustra o efeito de (R)-ibuprofen metanossulfonamida, e a Figura (2) ilustra o efeito de R-2-[(4'-trifluorometanossulfoniloxi)fenil]-N-metanossulfonil proprionamída. Todos os animais submetidos a SCI foram profundamente afectados imediatamente após a - 10- .lesão (marcação motora 0 para todos os grupos) e não ficou evidente uma recuperação significativa no grupo tratado com veículo (soro fisiológico) até o 1° dia depois da SCI, O tratamento com o composto de fórmula (II) e o composto de fórmula (III) promoveram, de forma significativa, a recuperação funcional do membro posterior depois da SCI. A .recuperação foi progressiva, sendo o período mais efectivo entre o 4° e 11° dia depois da SCI, A avaliação imuno-histológica da infiltração de leucócitos foi realizada 1 dia e 7 dias depois da SCI. Conforme ilustrado na Tabela 1, o composto de fórmula (II) .reduziu, de forma dramática, a infiltração de leucócitos (80¾ de inibição) às 24 horas e 7 dias depois da SCI- Foi também observada uma inibição semelhante de recrutamento de leucócitos em ratos tratados com o composto de fórmula (III) {dados não apresentados). É bem sabido que a apoptose de oligodendrócitos é um evento crucial durante os primeiros estágios depois da lesão traumática da 1 e que a extensão da recuperação neurológica é também dependente de como tal processo pode ser contrabalançado ou atenuado. A morte de oligodendrócitos provoca a desmielinaçâo dos axónios separados pela lesão, provocando, deste modo, a perda da capacidade de conduzir os impulsos eléctricos pelos sítios da lesão. Assim sendo, a atenuação farmacológica da apoptose de oligodendrócitos é um alvo principal de qualquer tratamento farmacológico que se destina a promover a recuperação depois da SCI. Conforme ilustrado na Tabela 2, o tratamento com o composto de fórmula (II) e o composto de fórmula (III) bloqueou a. apopto.se de olígodendrócitos determinada 28 dias depois da SCI f85% e 651 de inibição depois do tratamento de ratos com (R)-ibuprofen metanossulfonamida e R—2—[(dr~ t: r ifluorometanossu 1 f o n i 1 o x i) fenil ] -N-metanossul f o n i 1 proprionamida, respectivamente].

Finalmente, foi investigado o efeito do composto de fórmula (II) e composto de fórmula (III) sobre lesão em tecido induzida por SCI- Conforme ilustrado na Tabela 3, o tratamento com os compostos descritos acima reduziram, de forma significativa, a lesão em tecido no sítio da lesão e a extensão da cavidade pós-traumática 28 dias depois da SCI.

Em conclusão, os dados registados acima demonstram, com clareza, como os compostos de fórmula (II) e os compostos de fórmula (III) podem ser utilizados, de forma vantajosa, na prática médica na promoção da recuperação funcional depois da SCI.

Tabela 1. Número de leucócitos infiltrados (média ± DP; n=8)

Tempo desde 1 dia 7 dias a SCI Soro Fórmula Soro Fórmula fisiológico (II) fisiológico (III) Epicentro 125+36 24+3*** 235+54 19+3*** Periferia 56+13 3+1* ** 99+32 4+2*** ***P<0,001 de animais tratados com (R)-ibuprofen metanossulfonamida versus soro fisiológico - 12 -

Tabela 2. Número de núcleos apoptóticos de oligoclendrócitos (média ± DP; n-1.2)

Tratamento Soro fisiológico í 4,9i2 (R)-ibuprofen metanossulfonamida 2,1+1,2* R-2-[(4'-trifluorometanossulfoniloxi)fenil]-N-metanossulfonil proprionamida 5,213,8* *P<0,05 e ***P<0,001 de animais tratados com fármaco vs animais tratados com soro fisiológico

Tabela 3. Percentagem de tecido não lesionado no sítio da lesão (média + DP; n=12)

Tratamento Epicentro da Lesão Volume da Cavidade Soro fisiológico 39,8+3,9 46, 6±3,1 (R)“ibuprofen metanossulfonamida 48,9+3,0** 58,2+2,9** R-2- [ (4' - trifluorometanossulfoniloxi)fenil]-N-metanossulfonil proprionamida 49,7+4,2** 60,4+4,3** **P<0,001 de animais tratados com fármaco vs animais tratados com soro fisiológico

Para os valores terapêuticos levados em consideração, pode-se preparar composições farmacêuticas utilizando técnicas e excipientes convencionais, tais como aqueles descritos em "Remíngton's Pharmaceutícal Sciences

Handbook", Mack Publíshing Co., Mova Iorque, 18 th EcL, 1990.

As composições da invenção, de uma forma preferida, serão administradas por via intramuscular, intravenosa, como bolus, tendo em vista o carácter de urgência da patologia a ser tratada, embora nâo possam ser excluídas outras vias de administração, por exemplo, a via oral. A posologia diária média dependerá de vários factores, tais como a gravidade da doença e as condições do doente (idade, sexo e peso) . A dose irá variar, de um modo geral, de 1 a poucos mg até 1500 mg dos compostos, diariamente, opcionalmente subdividida em administrações múltiplas. Pode-se também administrar dosagens mais elevadas, graças à baixa toxicidade dos compostos da invenção, mesmo para tratamentos a longo prazo.

Lisboa, 06.03.2007

Claims (4)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de N-(2-aril-propionil)-sulfonamidas de fórmula geral (I): GHs Rr

   (I) Rg em que R.2 é um grupo arilo, R é um alquilo C1-C6 linear ou ramificado, trifluorometilo, ciclohexílo, ο-tolilo, 3-piridilo, 2-piridil-etilo, p-ciano-fenilmetilo, p-aminofenilmetilo, 3-ciano-l-propilo, grupo 4-aminobutilo, um grupo alcoxietileno CH3-(CH2)ni-{OCH2CH2)mi—/ em que n.i é zero ou 1 e mi é um número inteiro de 1 a 3, ou um grupo PiPjN-CI-b-CHa em que Pi e P2 são, independentemente, H, alquilo C1-C3, benziloxi-carbonilo, a-, ou β-piridocarbonilo, carboxicarbonilo ou carbalcoxicarbonilo, ou Pi e P2, quando juntos ao átomo de N ao qual estão ligados, formam um resíduo de ftalimido, piperidino, morfolino; R' é H ou alquilo C1-C3 linear ou ramificado, preferencialmente hidrogénio, para a preparação de um medicamento para o tratamento de lesão da medula espinal.
2. 2. Utilização de acordo com a reivindicação 1 dos compostos de fórmula (Ia) Ί

   0 (Ia) em que R" representa entre um a três substituintes, que são os mesmos ou diferentes, seleccionados de átomos de hidrogénio, halogéneo, alquilo Ci-C4, alcoxilo C1-C.1, hidroxilo, aciloxi Ci~C7, ciano, nitro, amino, acilamino C1-C3, haloalquilo C1-C3, halo-alcoxilo C3.-C3, benzoílo, 4-(2-metil-propil)-fenilo, 3-fenoxi-fenilo, 2-[4-(l-oxo-2-isoindolinil)fenilo], 5-benzoil-tien-2-il, 4-tienoil-fenil, halogenoalquilsulfoniloxilo Ci-C2-
3. 3, Utilização de acordo com a reivindicação 2, em que R" representa hidrogénio, 4-isobutilo, 3-benzoílo, 4 -trifluorometanossulfoniloxi.
4. 4., Utilização de acordo com a reivindicação 3 dos compostos de fórmula (II) e (III).

   II (II) (III) Lisboa, 06 03.2007 0