PT1556389E - Compostos de cefeme - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "COMPOSTOS DE CEFEME"

CAMPO TÉCNICO A presente invenção refere-se a novos compostos de cefeme e aos seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Mais particularmente, a presente invenção refere-se a novos compostos de cefeme e aos seus sais farmaceuticamente aceitáveis, os quais têm actividades antimicrobianas, aos seus processos de preparação, a composições farmacêuticas compreendendo os mesmos e, a um método para tratar doenças infecciosas em humanos e animais.

DESCRIÇÃO DA TÉCNICA ANTECEDENTE São descritos compostos de cefeme nos documentos EP-A-0047977, EP-A-1134222, EP-A-1392704 e JP-A-04288086.

DIVULGAÇÃO DA INVENÇÃO

Um objectivo da presente invenção é proporcionar novos compostos de cefeme e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, os quais são extremamente activos contra um número de microrganismo patogénicos. 1

Outro objectivo da presente invenção é proporcionar processos de preparação dos referidos compostos de cefeme e os seus sais.

Um outro objectivo da presente invenção é proporcionar uma composição farmacêutica compreendendo, como um ingrediente activo, os referidos compostos de cefeme ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Ainda outro objectivo da presente invenção é proporcionar um método para tratar doenças infecciosas provocadas por microrganismos patogénicos, o qual compreende a administração dos referidos compostos de cefeme a humanos ou animais infectados.

Os compostos de cefeme, objecto da presente invenção são novos e podem ser representados pela seguinte fórmula geral [I] :

em que R1 R2 é alquilo inferior, hidroxialquilo(inferior) ou haloalquilo(inferior), e é hidrogénio ou grupo de protecção de amino, ou 2 R1 e R2 R3 R4 estão ligados em conjunto e formam alquileno inferior ou alcenileno inferior; é hidrogénio ou alquilo inferior; é

R7 R8 R9 R5 R6 em que X é 0 ou NH, é hidrogénio, alquilo inferior ou grupo de protecção de amino, é hidrogénio ou hidroxilo, é amino, mono ou dialquil(inferior)amino, amino protegido, guanidino, guanidino protegido ou grupo heterociclico de 3 até 8 membros saturado contendo 1 até 4 átomos de azoto opcionalmente substituídos com amino ou amino protegido, k, m, n e q são independentemente 0 ou 1, e p é 0, 1, 2 ou 3; é carboxilo ou carboxilo protegido; e é amino ou amino protegido. 3

No que se refere ao composto objecto [I] , assinala-se os seguintes pontos.

Isto é, o composto objecto [I] inclui o isómero sin (forma Z) , isómero anti (forma E) e uma mistura destes. 0 isómero sin (forma Z) significa um isómero geométrico possuindo a estrutura parcial representada pela fórmula seguinte:

II

em que R5 e R6 são, cada um, como definidos acima, e o isómero anti (forma E) significa o outro isómero geométrico possuindo a estrutura parcial representada pela fórmula seguinte:

em que R5 e R6 são, cada, como definidos acima, e todos estes isómeros geométricos e as suas misturas estão incluídos dentro do âmbito desta invenção.

Na presente descrição e reivindicações, a estrutura parcial destes isómeros geométricos e as suas misturas são representadas por razões de conveniência pela seguinte fórmula: 4

0 R'

1 N

S em que R5 e R6 são, cada um, como definidos acima.

Outro ponto a ser assinalado, é que a unidade de pirazolio do composto [I] também pode existir na forma tautomérica, e esse equilíbrio tautomérico pode ser representado pela fórmula seguinte:

(A) (B) em que R1, R2, R3 e R4 são, cada, como definidos acima.

Ambos os isómeros tautoméricos anteriores estão incluídos dentro do âmbito da presente invenção. No entanto, na presente descrição e reivindicações, o composto objecto [I] é representado, por razões de conveniência, por uma expressão do grupo pirazolio da fórmula (A) . 5 0 composto de cefeme [I] da presente invenção pode ser preparado pelos processos seguintes como ilustrados a seguir.

Processo 1

ou o seu derivado reactivo no grupo amino, ou um seu sal h3cych3 c/r5

N

II N““R—C—COOH [III] ou o seu derivado reactivo no grupo carboxilo, ou um seu sal ·>

H3C wCH3 O^R5 E> R

[I] ou um seu sal 6

Processo 2

[Ia] ou um seu sal

Reacção de eliminação do grupo de protecção de amino '1

[Ib] ou um seu sal 7

Processo 3 H3C CH3 <rS5

N

N N

cC

R1 R2 [VIU ou um seu sal (i) H3r ch3 O^R5 i

R, .Z© (ii)

H3C CH3 (TSs * N

ou um seu sal

Processo 4 h3c ch3 O^R5 &

ou um seu sal

Reacção de eliminação do grupo de protecção de hidroxilo

[Idl ou um seu sal cada em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, A, k, m, n, p e q são, um, como definidos acima, R10 é carboxilo protegido, Y é um grupo de saida, Ζθ é um anião, R1 a é hidroxialquilo(inferior) protegido, R1 b é hidroxialquilo(inferior) , 9 R9a é amino protegido, guanidino protegido ou grupo heterocíclico de 3 até 8 membros saturado, contendo 1 até 4 átomos de azoto substituídos com amino protegido, e R9b é amino, guanidino ou grupo heterocíclico de 3 até 8 membros saturado, contendo 1 até 4 átomos de azoto substituídos com amino.

Os compostos de partida [II] e [VI] podem ser preparados pelos processos seguintes. 10

Processo A

(i)

[XI] ou um seu sal ''

(ii)

UI] ou um seu sal 11

Processo B

[XIII] ou o seu derivado reactivo no grupo amino, ou um seu sal [XIV] ou o seu derivado reactivo no grupo carboxilo, ou um seu sal em que

h3c ch3<rS5 *N

N^— CHo— Y R1, R2, R3, R4, R5, R6, R10, Y e Ζθ R12 são, cada um, como definidos acima, é amino protegido, é carboxilo protegido, e é grupo de protecção de amino ou alquilo inferior. 12

Os compostos de partida [VII] e [XI] ou os seus sais podem ser preparados pelos métodos divulgados nas Preparações 3-6, 8-47 e 49-102 descritas mais à frente ou de modo semelhante àqueles.

Nas descrições anteriores e subsequentes desta descrição, os exemplos adequados das várias definições são explicados em pormenor como se segue. O termo "inferior" é utilizado para significar um grupo possuindo 1 até 6, de um modo preferido 1 até 4, átomos de carbono, a menos que indicado de outro modo. "Alquilo inferior" e unidade "alquil inferior" adequados em "hidroxialquilo (inferior)", "hidroxialquilo(inferior) protegido", "arilalquilo(inferior)", "haloalquilo(inferior)" e "mono ou dialquil(inferior)amino", incluem alquilo linear ou ramificado possuindo 1 até 6 átomos de carbono, tais como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, terc-pentilo e hexilo, nos quais o mais preferido é alquilo C1-C4. "Hidroxialquilo(inferior)" adequado inclui hidroxialquilo(Ci-C6) tais como hidroximetilo, 1-hidroxietilo, 2- hidroxietilo, 1-hidroxipropilo, 2-hidroxipropilo, 3- hidroxipropilo, 4-hidroxibutilo, 5-hidroxipentilo e 6-hidroxi-hexilo, nos quais o mais preferido é hidroxialquilo (C1-C4) . "Haloalquilo(inferior)" adequado inclui alquilo linear ou ramificado possuindo 1 até 6 átomos de carbono substituídos com 1 até 5 átomos de halogéneo, tais como cloro, bromo, iodo e 13 flúor. Os exemplos preferidos de "haloalquilo(inferior)" incluem fluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, clorometilo, bromometilo, 2-fluoroetilo, 2,2-difluoroetilo, 2.2.2- trifluoroetilo, 2-cloroetilo, 2,2-dicloroetilo, 2.2.2- tricloroetilo, 3-fluoropropilo e 2,2,3,3,3-pentafluoropropilo, nos quais o mais preferido é haloalquilo (C1-C4) . "Mono ou dialquil(inferior) amino" adequado, inclui mono ou dialquil (Ci-C6) amino, tais como metilamino, dimetilamino, etilamino, dietilamino, N-etil-N-metilamino, propilamino, butilamino e N-etil-N-propilamino, nos quais o mais preferido é mono ou dialquil(C1-C4)amino. "Alquileno inferior" adequado formado por R1 e R2, inclui alquileno linear possuindo 1 até 6, de um modo preferido 2 até 4 átomos de carbono, tais como metileno, etileno, trimetileno e tetrametileno, nos quais o mais preferido é alquileno linear possuindo 2 ou 3 átomos de carbono. 'Alcenileno inferior" adequado, formado por R1 e R2, inclui alcenileno linear possuindo 2 até 6, de um modo preferido 2 até 4 átomos de carbono , tais como vinileno e propenileno, nos quais 0 mais preferido é alcenileno linear possuindo 2 ou 3 átomos de carbono. "Grupo heterocíclico de 3 até 8 membros saturado contendo 1 até 4 átomos de azoto" inclui azetidinilo (e. 9-, 1-azetidinilo e 3-azetidinilo), pirrolidinilo (e. 9-, 1-pirrolidinilo e 3-pirrolidinilo), imidazolidinilo (e. 9·' 1-imidazolidinilo e 4-imidazolidinilo), piperidinilo (e. 9-, 1-piperidinilo e 4-piperidinilo) e piperazinilo (e. 9-, 14 1-piperazinilo), nos quais o mais preferido é grupo heterociclico de 4 até 6 membros saturado contendo 1 até 4 átomos de azoto. 0 grupo heterociclico de 3 até 8 membros saturado contendo 1 até 4 átomos de azoto está opcionalmente substituído com amino ou amino protegido. Os exemplos adequados do "grupo heterociclico de 3 até 8 membros saturado contendo 1 até 4 átomos de azoto opcionalmente substituídos com amino ou amino protegido", incluem 1-azetidinilo, 3-amino-l-azetidinilo, 3-terc-butoxicarbonilamino-l-azetidinilo, 3-azetidinilo, 1-pirrolidinilo, 3-amino-l-pirrolidinilo, 3-terc-butoxicarbonilamino-l-pirrolidinilo, 3-pirrolidinilo, 1-piperidinilo, 4-piperidinilo e 1-piperazinilo. A unidade "arilo" adequada em "arilalquilo(inferior)" inclui arilo C6-CI2, tais como fenilo e naftilo, nos quais o mais preferido é fenilo. "Arilalquilo(inferior)" adequado inclui mono-, di- ou trifenilalquilo(inferior), tais como benzilo, fenetilo, benzidrilo e tritilo. "Alcanoílo inferior" e unidade "alcanoílo inferior" adequados em "alcanoilamino inferior" incluem alcanoílo linear ou ramificado possuindo 1 até 6 átomos de carbono, tais como formilo, acetilo, propionilo, butirilo, isobutirilo, valerilo, isovalerilo, pivaloílo e hexanoílo, nos quais o mais preferido é alcanoílo C1-C4. A unidade "alcoxilo inferior" adequada em "alcoxi(inferior)carbonilo" e "alcoxi(inferior)carbonilamino" 15 inclui alcoxilo linear ou ramificado possuindo 1 até 6 átomos de carbono, tais como metoxilo, etoxilo, propoxilo, isopropoxilo, butoxilo, isobutoxilo, sec-butoxilo, terc-butoxilo, pentiloxilo, terc-pentiloxilo e hexiloxilo, nos quais o mais preferido é alcoxilo C1-C4. 0 "grupo de protecção de amino" adequado em "amino protegido" inclui um grupo acilo como mencionado abaixo, arilalquilideno(inferior) substituído ou não substituído [e. g., benzilideno, hidroxibenzilideno, etc.], arilalquilo(inferior) tal como mono-, di- ou trifenilalquilo (inferior) [e. g., benzilo, fenetilo, benzidrilo, tritilo, etc.] e semelhantes. "Acilo" adequado inclui alcanoílo inferior [e. g., formilo, acetilo, propionilo, hexanoílo, pivaloílo, etc.], mono(ou di ou tri)haloalcanoílo(inferior) [e. g., cloroacetilo, trifluoroacetilo, etc.], alcoxi (inferior)carbonilo [e. g., metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, terc-butoxicarbonilo, terc-pentiloxicarbonilo, hexiloxicarbonilo, etc.], carbamoílo, aroílo [e. g., benzoílo, toluoílo, naftoílo, etc.], arilalcanoílo (inferior) [e. g., fenilacetilo, fenilpropionilo, etc.], ariloxicarbonilo [e. g., fenoxicarbonilo, naftiloxicarbonilo, etc.], ariloxialcanoílo (inferior) [e. g., fenoxiacetilo, fenoxipropionilo, etc.], arilglioxiloílo [e. g., fenilglioxiloílo, naftilglioxiloílo, etc.], arilalcoxi(inferior)carbonilo, 0 qual está, opcionalmente substituído com substituinte(s) adequado(s) [e. g., benziloxicarbonilo, fenetiloxicarbonilo, p-nitrobenziloxicarbonilo, etc.] e semelhantes.

Os exemplos preferidos de "grupo de protecção de amino" incluem arilalquilo(inferior) e acilo, nos quais os mais 16 preferidos são arilalquilo(inferior), alcanoilo inferior e alcoxi(inferior)carbonilo, e os particularmente preferidos são mono-, di- ou trifenilalquilo (Ci-Cê) , alcanoilo Ci-Cê e alcoxi (Ci-C6) carbonilo.

Os exemplos preferidos de "amino protegido" incluem arilalquil(inferior)amino e acilamino, nos quais os mais preferidos são arilalquil(inferior)amino, alcanoil(inferior)amino e alcoxi(inferior)carbonilamino e os particularmente preferidos são mono-, di- ou trifenilalquil (Ci-Cô) amino, alcanoil (Ci-C6) amino e alcoxi (Ci-C6) carbonilamino.

Os exemplos preferidos de "guanidino protegido" incluem acilguanidino (monoacilguanidino e diacilguanidino) tal como 2.3- bis[alcoxi(inferior)carbonil]guanidino [e. g., 2,3-bis(terc- butoxicarbonil)guanidino], nos quais o mais preferido é 2.3- bis[alcoxi(Οι-Οε)carbonil]guanidino. 0 "hidroxilo protegido" adequado em "hidroxialquilo(inferior) protegido" inclui o grupo aciloxilo, grupo arilalquiloxilo(inferior) e semelhantes. A unidade "acilo" adequada em "aciloxilo" inclui alcanoilo inferior [e. g., formilo, acetilo, propionilo, hexanoilo, pivaloilo, etc.], mono (ou di ou tri)haloalcanoílo(inferior) , [e. g., cloroacetilo, trifluoroacetilo, etc.], alcoxi (inferior)carbonilo, [e. g., metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, terc-butoxicarbonilo, terc-pentiloxicarbonilo, hexiloxicarbonilo, etc.], carbamoilo e semelhantes. A unidade "arilalquilo(inferior)" adequada em "arilalquiloxilo(inferior)", inclui mono-, di- ou trifenilalquilo(inferior) [e. g., benzilo, fenetilo, benzidrilo, tritilo, etc.] e semelhantes. 17 "Carboxilo protegido" adequado inclui carboxilo esterificado e semelhantes, e os exemplos concretos de carboxilo esterificado incluem alcoxi(inferior)carbonilo [e. g., 1-ciclopropiletoxicarbonilo, etc.], substituinte (s) adequado(s), metoxicarbonilo, isopropoxicarbonilo, terc-butoxicarbonilo, etoxicarbonilo, butoxicarbonilo, pentiloxicarbonilo, propoxicarbonilo, isobutoxicarbonilo, hexiloxicarbonilo, qual pode ter por exemplo, [e. g., alcanoiloxi(inferior)alcoxi(inferior)carbonilo propioniloximetoxicarbonilo, vaieriloximetoxicarbonilo, 1-acetoxietoxicarbonilo, 2-propioniloxietoxicarbonilo, etc.], [e. g., di ou acetoximetoxicarbonilo, butiriloximetoxicarbonilo, pivaloiloximetoxicarbonilo, 1- propioniloxietoxicarbonilo, hexanoiloximetoxicarbonilo, alcano(inferior)sulfonilalcoxi(inferior)carbonilo, 2- mesiletoxicarbonilo, etc.] ou mono (ou 2-iodoetoxicarbonilo, etc.]; viniloxicarbonilo, tri)haloalcoxi(inferior)carbonilo [e. g., 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo, alceniloxi(inferior)carbonilo [e. g., aliloxicarbonilo, etc.]; alciniloxi(inferior)carbonilo [e. g., etiniloxicarbonilo, propiniloxicarbonilo, etc.]; arilalcoxi(inferior)carbonilo, o qual pode ter substituinte (s) adequado(s) [e. g., benziloxicarbonilo, 4-metoxibenziloxicarbonilo, 4-nitrobeziloxicarbonilo, fenetiloxicarbonilo, tritiloxicarbonilo, benzidriloxicarbonilo, bis(metoxifenil)metoxicarbonilo, 3,4-dimetoxibenziloxicarbonilo, 4-hidroxi-3,5-di-terc-butilbenziloxicarbonilo, etc.]; ariloxicarbonilo, o qual pode ter substituinte (s) adequado(s) [e. g., fenoxicarbonilo, 4-clorofenoxicarbonilo, toliloxicarbonilo, 4-terc-butilfenoxicarbonilo, xililoxicarbonilo, mesitiloxicarbonilo, cumeniloxicarbonilo, etc.]; e semelhantes. 18

Os exemplos preferidos de "carboxilo protegido" incluem alcoxi(inferior)carbonilo e arilalcoxi(inferior)carbonilo, o qual pode ter substituinte (s) adequado (s), nos quais o mais preferido é alcoxi(0ι-0δ)carbonilo. 0 "grupo de saída" adequado inclui halogéneo [e. g., cloro, bromo, iodo, etc.] ou aciloxilo tal como arilsulfoniloxilo [e. g., benzenossulfoniloxilo, tosiloxilo, etc.], alquil(inferior)sulfoniloxilo [e. g., mesiloxilo, etc.], alcanoiloxilo(inferior) [e. g., acetiloxilo, propioniloxilo, etc.] e semelhantes. 0 "anião" adequado inclui formato, acetato, trifluoroacetato, maleato, tartarato, metanossulfonato, benzenossulfonato, toluenossulfonato, cloreto, brometo, iodeto, sulfato, hidrogenossulfato, fosfato e semelhantes.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis adequados do composto objecto [I] são sais não tóxicos convencionais e incluem, por exemplo, um sal com uma base ou um sal de adição de ácido, tal como um sal com uma base inorgânica, por exemplo, um sal de metal alcalino [e. g., sal de sódio, sal de potássio, etc.], um sal de metal alcalino-terroso [e. g., sal de cálcio, sal de magnésio, etc.], um sal de amónio; um sal com uma base orgânica, por exemplo, um sal de amina orgânica [e. g., sal de trimetilamina, sal de trietilamina, sal de piridina, sal de picolina, sal de etanolamina, sal de trietanolamina, sal de dicicio-hexilamina, sal de N,N'-dibenziletilenodiamina, etc, .]; um sal de adição de ácido inorgânico [e. g., cloridrato, bromidrato, sulfato, hidrogenossulfato, fosfato, etc.]; um sal de adição de ácido carboxílico ou sulfónico orgânico [e. g., 19 formato, acetato, trifluoroacetato, maleato, tartarato, citrato, fumarato, metanossulfonato, benzenossulfonato, toluenossulfonato, etc.]; e um sal com um aminoácido básico ou ácido [e. g., arginina, ácido aspártico, ácido glutâmico, etc.].

As formas de realização preferidas do composto de cefeme da presente invenção representado pela fórmula geral [I] são como se segue. (1) 0 composto da fórmula [I] em que

R1 R2 R1 e R2 R1 A

R' R9 P é alquilo inferior ou hidroxialquilo(inferior), e é hidrogénio ou grupo de protecção de amino, ou estão ligados em conjunto e formam alquileno inferior; é hidrogénio; é

X —c— em que X é 0 ou NH; é hidrogénio ou grupo de protecção de amino; é amino ou amino protegido; e é 0, 1 ou 2, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. (2) O composto de (1) acima, em que R8 é hidrogénio, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 20 1 O composto da fórmula [I] em que R1 é alquilo inferior, hidroxialquilo(inferior) ou haloalquilo(inferior), e R2 é hidrogénio, arilalquilo(inferior) ou acilo, ou R1 e R2 estão ligados em conjunto e formam alquileno inferior ou alcenileno inferior; R5 é carboxilo ou carboxilo esterifiçado; R6 é amino ou acilamino; R7 é hidrogénio, alquilo inferior ou acilo; e R9 é amino, mono ou dialquil(inferior)amino, acilamino, guanidino, acilguanidino ou grupo heterociclico de 3 até 8 membros saturado contendo 1 até 4 átomos de azoto opcionalmente substituídos com amino ou acilamino, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. (4) 0 composto de (3) acima em que R1 é alquilo inferior ou hidroxialquilo(inferior), e R2 é hidrogénio, arilalquilo(inferior) ou acilo, ou R1 e R2 estão ligados em conjunto e formam alquileno inferior; R5 é carboxilo ou carboxilo esterifiçado; R6 é amino ou acilamino; R7 é hidrogénio ou acilo; e R9 é amino ou acilamino, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. (5) 0 composto de (4) acima em que R1 é alquilo inferior ou hidroxialquilo(inferior), e R2 é hidrogénio, arilalquilo (inferior), alcanoílo inferior ou alcoxi(inferior)carbonilo, ou 21 R1 e R2 estão ligados em conjunto e formam alquileno inferior; R5 é carboxilo ou alcoxi(inferior)carbonilo; Rê é amino, alcanoil(inferior)amino ou alcoxi(inferior)carbonilamino; R7 é hidrogénio, alcanoilo inferior ou alcoxi(inferior)carbonilo; e R9 é amino, alcanoil(inferior)amino ou alcoxi(inferior)carbonilamino, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. (6) 0 composto de (5) acima em que R1 é alquilo Ci-C6 ou hidroxialquilo (Ci-C6) , e R2 é hidrogénio, mono-, di- ou trifenilalquilo (Ci-C6), alcanoilo Ci-Cg ou alcoxi(Ci-Cg)carbonilo, ou R1 e R2 estão ligados em conjunto e formam alquileno Ci-C6,' R5 é carboxilo ou alcoxi(Ci-Cê)carbonilo; R6 é amino, alcanoil (Ci~Ce) amino ou alcoxi (Ci—Οβ) carbonilamino; R7 é hidrogénio, alcanoilo Ci-C6 ou alcoxi (Ci-C6) carbonilo; e R9 é amino, alcanoil (Ci-C6) amino ou alcoxi(Ci-C6)carbonilamino, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. (7) 0 composto de (5) acima em que R1 é alquilo inferior ou hidroxialquilo(inferior), e R2 é hidrogénio, ou R1 e R2 estão ligados em conjunto e formam alquileno inferior; R5 é carboxilo; R6 é amino; R7 é hidrogénio ou alcanoilo inferior; e 22 e amino, R9 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. (8) O composto de (7) acima em que R1 é alquilo Ci-C6 ou hidroxialquilo (Ci-C6) , e R2 é hidrogénio, ou R1 e R2 estão ligados em conjunto e formam alquileno Ci-C6; R5 é carboxilo; R6 é amino; R7 é hidrogénio ou alcanoilo Ci-C6; e R9 é amino, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. (9) 0 composto da fórmula [I], em que R4 é seleccionado do grupo consistindo de —NH—A-(NH)~(CH2)—(CH2) p-R14 0 li —NH—C-(NH)—0-(CH2)—(CH2)p-R14

0 OH

II I

—NH—C—CH-(CH2) p“R 23 -N-(CH2)—(ch2)—r14 0 11 —NH—C-(NH)—(CH2)—(CH2) p-R15 e 0

II “NH—C—(NH)—R16 em que R7, A, m, p e q são, cada um, como definidos acima na fórmula [I], R14 é amino, mono ou dialquil(inferior)amino ou amino protegido, R15 é guanidino ou guanidino protegido, e R16 é grupo heterocíclico de 3 até 8 membros saturado contendo 1 até 4 átomos de azoto opcionalmente substituídos com amino ou amino protegido, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. (10) O composto da fórmula [I] em que R4 é seleccionado do grupo consistindo de

O

II —NH—C—NH—(CH2)—(CH2) p— R9 24 ο

II —ΝΗ—C-( CH2)—(CH 2) p-R9

O

II —NH—C—NH-0-(CH2)—(CH2)p-R9 /

O

II —NH—c—0-(CH2)—(CH2) P-Rs

O OH

II I —NH—C—CH-(CH2) p— R*

NH

II —NH“C-(CH2)—(CH2) -Ra e R7 l -N-(CH2)—<ch2)—r9 em que p é 0, 1 ou 2, q é 0 ou 1, R7 é hidrogénio ou grupo de protecção de amino, e R9 é amino ou amino protegido, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 25 (11) 0 composto de (10) acima em que R7 é hidrogénio, alcanoilo inferior ou alcoxi (inferior)carbonilo; e R9 é amino, alcanoil(inferior)amino ou alcoxi(inferior)carbonilamino, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. (12) O composto de (11) acima em que R7 é hidrogénio, alcanoilo Ci-C6 ou alcoxi(Ci-C6)carbonilo; e R9 é amino, alcanoil(Ci-C6)amino ou alcoxi(Ci-C6)carbonilamino, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. (13) O composto de (11) acima em que R7 é hidrogénio ou alcanoilo inferior; e R9 é amino, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. (14) O composto de (13) acima em que R7 é hidrogénio ou alcanoilo C1-C6; e R9 é amino, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Os processos de preparação do composto objecto da presente invenção são explicados em pormenor no que se segue. 26

Processo 1 0 composto [I] ou um seu sal pode ser preparado fazendo reagir o composto [II] ou um seu derivado reactivo no grupo amino, ou um seu sal, com o composto [III] ou um seu derivado reactivo no grupo carboxilo, ou um seu sal. 0 derivado reactivo adequado no grupo amino do composto [II] inclui a base de Schiff tipo imina ou o seu isómero de tipo tautomérico enamina preparada pela reacçâo do composto [II] com um composto de carbonilo, tais como aldeído, cetona e semelhantes; um derivado de sililo preparado pela reacção do composto [II] com um composto de sililo, tais como bis(trimetilsilil)acetamida, mono(trimetilsilil)acetamida [e. g., N-(trimetilsilil)acetamida], bis(trimetilsilil)ureia e semelhantes; um derivado preparado pela reacção do composto [II] com tricloreto de fósforo ou fosgénio.

Os sais adequados do composto [II] e do seu derivado reactivo podem ser referidos como aqueles exemplificados para o composto [I] . 0 derivado reactivo adequado no grupo carboxilo do composto [III] inclui um halogeneto ácido, um anidrido ácido, uma amida activada e um éster activado. Um exemplo adequado dos derivados reactivos pode ser um cloreto ácido; uma azida ácida; um anidrido de ácido misto com um ácido tal como ácido fosfórico substituído [e. g., ácido dialquilfosfórico, ácido fenilfosfórico, ácido difenilfosfórico, ácido dibenzilfosfórico, ácido fosfórico halogenado, etc.], ácido dialquilfosforoso, ácido sulfuroso, ácido tiossulfúrico, ácido sulfúrico, ácido alcanossulfónico [e. g., ácido metanossulfónico, etc.], ácido 27 carboxílico alifático [e. g., ácido acético, ácido propiónico, ácido butirico, ácido isobutirico, ácido piválico, ácido pentanóico, ácido isopentanóico, ácido 2-etilbutírico, ácido tricloroacético, etc.] e ácido carboxílico aromático [e. g.r ácido benzóico, etc.]; um anidrido ácido simétrico; uma amida activada com imidazole, imidazole 4-substituído, dimetilpirazole, triazole ou tetrazole; um éster activado [e. g., éster de cianometilo, éster de metoximetilo, éster de dimetiliminometilo [(CH3) 2N+=CH-], éster de vinilo, éster de propargilo, éster de p-nitrofenilo, éster de 2,4-dinitrofenilo, éster de triclorofenilo, éster de pentaclorofenilo, éster de mesilfenilo, éster de fenilazofenilo, tioéster de fenilo, tioéster de p-nitrofenilo, tioéster de p-cresilo, tioéster de carboximetilo, éster de piranilo, éster de piridilo, éster de piperidilo, tioéster de 8-quinolilo, etc.]; ou um éster com um composto de N-hidroxilo [e. g., N,N-dimetil-hidroxilamina, l-hidroxi-2-(1H)-piridona, N-hidroxi-succinimida, N-hidroxiftalimida, N-hidroxi-lH-benzotriazole, etc. Estes derivados reactivos podem ser, opcionalmente, seleccionados de entre aqueles de acordo com o tipo de composto [III] a ser utilizado.

Os sais adequados do composto [III] e do seu derivado reactivo podem ser referidos como aqueles exemplificados para o composto [I] . A reacção é geralmente realizada num solvente convencional tal como água, álcool [e. g., metanol, etanol, etc.], acetona, dioxano, acetonitrilo, clorofórmio, cloreto de metileno, cloreto de etileno, tetra-hidrofurano, acetato de etilo, N, N-dimetilformamida, piridina ou qualquer outro solvente 28 orgânico que não afecte negativamente a reacção. Estes solventes convencionais também podem ser utilizados numa mistura com água.

Nesta reacção, quando o composto [III] é utilizado na forma de ácido livre ou na sua forma salina, a reacção é de um modo preferido realizada na presença de um agente de condensação convencional tal como N,N'-diciclo-hexilcarbodiimida; N-ciclo-hexil-N'-morfolinoetilcarbodiimida; N-ciclo-hexil-N'-(4-dietilaminociclo-hexil)carbodiimida; N,N'-dietilcarbodiimida; N,N'-diisopropilcarbodiimida; N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida; N,Ν'-carbonil-bis- (2-metilimidazole); pentametilenoceteno-N-ciclo-hexilimina; difenilceteno-N-ciclo-hexilimina; etoxiacetileno; 1-alcoxi-l-cloroetileno; fosfite de trialquilo; polifosfato de etilo; polifosfato de isopropilo; oxicloreto de fósforo (cloreto de fosforilo); tricloreto de fósforo; cloreto de tionilo; cloreto de oxalilo; haloformato de alquilo inferior [e. g., cloroformato de etilo, cloroformato de isopropilo, etc.], trifenilfosfina; sal de 2-etil-7-hidroxibenzisoxazólio; sal intramolecular de hidróxido de 2-etil-5-(m-sulfofenil)isoxazólio; 1-(p-clorobenzenossulfoniloxi)-6-cloro-lH-benzotriazole; o chamado reagente de Vilsmeier preparado pela reacção de N, N-dimetilformamida com cloreto de tionilo, fosgénio, cloroformato de triclorometilo, oxicloreto de fósforo, etc.; e semelhantes. A reacção também pode ser realizada na presença de uma base inorgânica ou orgânica, tais como um bicarbonato de metal alcalino, trialquil(inferior)amina, piridina, N-alquil(inferior)morfolina, Ν,Ν-dialquil(inferior)benzilamina e semelhantes. 29 A temperatura da reacção não é crítica e, a reacção é geralmente realizada sob arrefecimento até aquecimento.

Processo 2 0 composto [Ib] ou um seu sal pode ser preparado submetendo o composto [Ia] ou um seu sal a reacção de eliminação do grupo de protecção de amino. A reacção de eliminação é realizada de acordo com um método convencional tal como hidrólise e semelhantes. A hidrólise é de um modo preferido realizada na presença de uma base ou um ácido incluindo ácido de Lewis. A base adequada inclui uma base inorgânica e uma base orgânica, tais como o hidróxido ou carbonato ou hidrogenocarbonato de um metal alcalino [e. g., sódio, potássio, etc.], um metal alcalino-terroso [e. g., magnésio, cálcio, etc.], trialquilamina [e. g., trimetilamina, trietilamina, etc.], picolina, 1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno, 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno e semelhantes. O ácido adequado inclui um ácido orgânico [e. g., ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido tricloroacético, ácido trifluoroacético, etc.], e um ácido inorgânico [e. g., ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, cloreto de hidrogénio, brometo de hidrogénio, etc.]. 30 A eliminação utilizando ácido de Lewis, tal como ácido tri-haloacético [e. g., ácido tricloroacético, ácido trifluoroacético, etc.] e semelhantes é, de um modo preferido, realizada na presença de armadilhas de catiões [e. g., anisole, fenol, etc. ] . A reacção é geralmente realizada num solvente, tal como água, álcool [e. g., metanol, etanol, etc.], cloreto de metileno, tetra-hidrofurano, uma mistura destes ou qualquer outro solvente que não influencie negativamente a reacção. Também se pode utilizar uma base ou ácido liquido como solvente. A temperatura da reacção não é critica e a reacção é geralmente realizada sob arrefecimento até aquecimento.

Processo 3-(i) 0 composto [VIII] ou um seu sal pode ser preparado fazendo reagir o composto [VI] ou um seu sal com o composto [VII] ou um seu sal. 0 sal adequado dos compostos [VI], [VII] e [VIII] pode ser referido como aqueles exemplificados para o composto [I]. A presente reacção pode ser realizada num solvente tal como água, tampão de fosfato, acetona, clorofórmio, acetonitrilo nitrobenzeno, cloreto de metileno, cloreto de etileno, formamida, Ν,Ν-dimetilformamida, metanol, etanol, éter dietilico, tetra-hidrofurano, sulfóxido de dimetilo, ou qualquer outro solvente orgânico que não afecte negativamente a reacção, de um modo preferido, naqueles com polaridades fortes. Entre os 31 solventes, pode utilizar-se solventes hidrófilos numa mistura com água. Quando o composto [VII] é liquido, também pode ser utilizado como um solvente. A reacção é de um modo preferido realizada na presença de uma base, por exemplo, uma base inorgânica, tais como hidróxido de metal alcalino, carbonato de metal alcalino, hidrogenocarbonato de metal alcalino, uma base orgânica tal como trialquilamina e semelhantes. A temperatura da reacção não é crítica e a reacção é geralmente realizada à temperatura ambiente, sob arrefecimento ou sob aquecimento. A presente reacção é, de um modo preferido, realizada na presença de halogeneto de metal alcalino [e. g., iodeto de sódio, iodeto de potássio, etc.], tiocianato de metal alcalino [e. g., tiocianato de sódio, tiocianato de potássio, etc.] e semelhantes. 0 anião Ζθ pode ser um derivado de um grupo de saída Y e pode ser convertido noutro anião por um método convencional.

Processo 3- (ii) 0 composto [I] ou um seu sal pode ser preparado submetendo o composto [VIII] , ou um seu sal, a reacção de eliminação do grupo de protecção de carboxilo. A reacção de eliminação é realizada de um modo semelhante à reacção no Processo 2 supramencionado e, por conseguinte, os reagentes e condições reaccionais a serem utilizados (e. g., 32 solvente, temperatura da reacção, etc.) podem ser referidos aos do Processo 2.

Processo 4 0 composto [Id], ou um seu sal, pode ser preparado submetendo o composto [Ic] ou um seu sal a reacção de eliminação do grupo de protecção de hidroxilo. 0 método adequado para esta reacção de eliminação inclui os convencionais, tais como hidrólise, redução e semelhantes. (i) Para hidrólise: A hidrólise é, de um modo preferido, realizada na presença de uma base ou um ácido, incluindo ácido de Lewis. A base adequada inclui uma base inorgânica e uma base orgânica, tais como o hidróxido ou carbonato ou hidrogenocarbonato de um metal alcalino [e. g., sódio, potássio, etc.], um metal alcalino-terroso [e. g., magnésio, cálcio, etc.], trialquilamina [e. g., trimetilamina, trietilamina, etc.], picolina, 1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno, 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno e semelhantes. O ácido adequado inclui um ácido orgânico [e. g., ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido tricloroacético, ácido trifluoroacético, etc.], e um ácido inorgânico [e. g., 33 ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, cloreto de hidrogénio, brometo de hidrogénio, etc.]. A eliminação utilizando ácido de Lewis, tal como ácido tri-haloacético [e. g., ácido tricloroacético, ácido trifluoroacético, etc.] e semelhantes é de um modo preferido realizada na presença de armadilhas de catiões [e. g., anisole, fenol, etc.]. A reacção é geralmente realizada num solvente, tais como água, álcool [e. g., metanol, etanol, etc.], cloreto de metileno, tetra-hidrofurano, uma mistura destes ou qualquer outro solvente que não influencie negativamente a reacção. Uma base ou ácido líquido também pode ser utilizado como um solvente. A temperatura da reacção não é crítica e a reacção é geralmente realizada sob arrefecimento até aquecimento. (ii) Para redução: A redução é realizada de um modo convencional, incluindo redução química e redução catalítica.

Os reagentes de redução adequados para serem utilizados na redução química são uma combinação de um metal [e. g., estanho, zinco, ferro, etc.] ou composto metálico [e. g., cloreto de crómio, acetato de crómio, etc.] e um ácido orgânico ou ácido inorgânico [e. g., ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido trifluoroacético, ácido p-toluenossulfónico, ácido clorídrico, ácido bromídrico, etc.]. 34

Catalisadores adequados para serem utilizados na redução catalítica são os convencionais, tais como catalisadores de platina [e. g., placa de platina, platina esponjosa, negro de platina, platina coloidal, óxido de platina, fio de platina, etc.], catalisadores de paládio [e. g., paládio esponjoso, negro de paládio, óxido de paládio, paládio sobre carvão, paládio coloidal, paládio sobre sulfato de bário, paládio sobre carbonato de bário, etc.], catalisadores de níquel [e. g., níquel reduzido, óxido de níquel, níquel de Raney, etc.], catalisadores de cobalto [e. g., cobalto reduzido, cobalto de Raney, etc.], catalisadores de ferro [e. g., ferro reduzido, ferro de Raney, etc.], catalisadores de cobre [e. g., cobre reduzido, cobre de Raney, cobre de Ullman, etc.] e semelhantes. A redução é geralmente realizada num solvente convencional que não influencie negativamente a reacção, tais como água, metanol, etanol, propanol, N,N-dimetilformamida ou uma mistura destes.

Adicionalmente, no caso dos ácidos supramencionados que são utilizados na redução química serem líquidos, também podem ser utilizados como um solvente.

Além disso, um solvente adequado para ser utilizado na redução catalítica pode ser o solvente supramencionado e outro solvente convencional, tais como éter dietílico, dioxano, tetra-hidrofurano, etc., ou uma mistura destes. A temperatura reaccional desta redução não é crítica e a reacção é geralmente realizada sob arrefecimento até aquecimento. 35

Quando R6 é amino protegido, o grupo de protecção de amino em R6 pode ser eliminado por um método convencional tal como hidrólise.

Os processos A e B de preparação dos compostos de partida são explicados em pormenor no que se segue.

Processo A-(i) 0 composto [XII] ou um seu sal pode ser preparado fazendo reagir o composto [X] ou um seu sal com o composto [XI] ou um seu sal.

Esta reacção pode ser realizada de um modo semelhante à reacção no Processo 3-(i) supramencionado e, por conseguinte, os reagentes e condições reaccionais a serem utilizados (e. g., solvente, temperatura da reacção, etc.) podem ser referidos aos do Processo 3- (i) .

Processo A-(ii) 0 composto [II] ou um seu sal pode ser preparado submetendo o composto [XII] ou um seu sal a reacção de eliminação dos grupos de protecção de amino em R11 e R13 e do grupo de protecção de carboxilo em R12.

Esta reacção pode ser realizada de um modo semelhante à reacção no Processo 2 supramencionado e, por conseguinte, os reagentes e condições reaccionais a serem utilizados (e. g., 36 solvente, temperatura da reacção, etc.) podem ser referidos aos do Processo 2.

Processo B 0 composto [VI] ou um seu sal, pode ser preparado fazendo reagir o composto [XIII] ou um seu derivado reactivo no grupo amino, ou um seu sal, com o composto [XIV] ou um seu derivado reactivo no grupo carboxilo, ou um seu sal.

Esta reacção pode ser realizada de um modo semelhante à reacção no Processo 1 supramencionado e, por conseguinte, os reagentes e condições reaccionais a serem utilizados (e. g., solvente, temperatura da reacção, etc.) podem ser referidos aos do Processo 1.

Os compostos obtidos pelos processos anteriores podem ser isolados e purificados por um método convencional, tal como pulverização, recristalização, cromatografia em coluna, reprecipitação e semelhantes.

Assinale-se que o composto [I] e os outros compostos podem incluir um ou mais estereoisómero (s), tais como isómero(s) óptico(s) e isómero(s) geométrico (s) devido a átomo(s) de carbono e ligação(ões) duplas, e todos esses isómeros e suas misturas estão incluídos dentro do âmbito desta invenção.

Os compostos objecto [I] e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os solvatos [e. g., compostos de inclusão (e. g., hidrato, etc.)]. 37 0 composto objecto [I] e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis são novos e apresentam actividade antimicrobiana elevada, inibindo o crescimento de uma grande variedade de microrganismos patogénicos incluindo microrganismos Gram-positivos e Gram-negativos e são úteis como agentes antimicrobianos.

Agora, para mostrar a utilidade do composto objecto [I], são apresentados a seguir os dados de ensaio da MIC (concentração inibidora mínima) de um composto representativo desta invenção. Método de ensaio A actividade antibacteriana in vitro foi determinada pelo método de desdobramento em placa de agar como se descreve abaixo.

Uma ansa de uma cultura de cada estirpe de ensaio obtida dum dia para o outro em caldo de tripticase de soja (106 células viáveis por mL) foi aplicada em raiado em agar de infusão de coração (HI-agar) contendo concentrações discretas do composto de ensaio representativo e, a concentração inibidora mínima (MIC) foi exprimida em mg/mL após incubação a 37 °C durante 20 horas.

Composto de ensaio

Composto (a): 7β-[ (Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido] -3-[7-(3- 38 aminopropionamido)-2,3-di-hidro-5-(lH-imidazo[1,2-b]pirazolio)]metil-3-cefeme-4-carboxilato (Exemplo 3) Composto (b): 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-[3-amino-4-(3-aminopropionamido)-2-metil-l-pirazolio]metil-3-cefeme-4-carboxilato (Exemplo 4)

Composto (c): hidrogenossulfato do ácido 7β-[(Z)-2-(5-amino- 1.2.4- tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l- metiletoxiimino)acetamido]-3-[3-amino-4-(aminoacetil)amino-2-metil-l-pirazolio]metil-3-cefeme-4-carboxílico (Exemplo 6)

Composto (d): hidrogenossulfato do ácido 7β-[(Z)-2-(5-amino- 1.2.4- tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-{3-amino-4-[3-(2-aminoetil)ureido]-2-metil-l-pirazolio}metil-3-cefeme-4-carboxílico (Exemplo 7)

Composto (e): hidrogenossulfato do ácido 7β-[(Z)-2-(5-amino- 1.2.4- tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l- metiletoxiimino)acetamido]-3-(3-amino-4-guanidino-2-metil-1-pirazolio)metil-3-cefeme-4-carboxílico (Exemplo 11) Ceftazidima 39

Resultados do ensaio

Quadro 1

Estirpe de ensaio Composto de ensaio MIC (μς/ιηΐ.) (a) 2 (b) 1 Pseudomonas (c) 2 aeruginosa FP 1380 (d) 2 (e) 1 Ceftazidima 128

Para administração terapêutica, o composto objecto [I] e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção são utilizados na forma de uma preparação farmacêutica convencional a qual contém o referido composto como um ingrediente activo, em combinação com veículos farmaceuticamente aceitáveis, tais como um excipiente sólido ou líquido orgânico ou inorgânico que é adequado para administração oral, parentérica ou externa. As preparações farmacêuticas podem estar numa forma sólida tal como comprimido, granulado, pó, cápsula ou numa forma líquida, tais como solução, suspensão, xarope, emulsão, bebida e semelhantes.

Se necessário, pode incluir-se nas preparações anteriores substâncias auxiliares, estabilizantes, humectantes e outros aditivos habitualmente utilizados, tais como lactose, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido esteárico, estearato de magnésio, terra de diatomáceas, sacarose, amido de milho, talco, gelatina, agar, pectina, óleo de amendoim, azeite, manteiga de cacau, etilenoglicol e semelhantes. 40

Apesar da dosagem do composto [I] poder variar em função da idade, estado do doente, tipo de doença, tipo do composto [I] a ser aplicado, etc. duma maneira geral pode administrar-se quantidades entre 1 mg e 4000 mg ou, ainda, mais por dia a um doente. Pode utilizar-se uma dose única média de cerca de 50 mg, 100 mg, 250 mg, 500 mg, 1000 mg ou 2000 mg dos compostos objecto [I] da presente invenção para tratar doentes infectados por microrganismos patogénicos.

As Preparações e Exemplos seguintes são dados para o efeito de ilustrar a presente invenção em mais pormenor.

Preparação 1 A uma solução de ácido (Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)[(2-terc-butoxi-l,l-dimetil-2-oxoetoxi)imino]etanóico (5 g) numa mistura de tetra-hidrofurano (80 mL) e N,N-dimetilformamida (20 mL) , adicionou-se uma solução de bis(trimetilsilil)amida de sódio (8,33 g) em tetra-hidrofurano (12 mL) e agitou-se a mistura durante 15 minutos. À mistura reaccional adicionou-se uma solução de dicarbonato de di-terc-butilo (3,3 g) em tetra-hidrofurano (20 mL) sob arrefecimento com gelo e, agitou-se a mistura sob arrefecimento com gelo durante 3 horas. À mistura reaccional adicionou-se acetato de etilo, lavou-se a mistura com solução aquosa de hidrogenossulfato de potássio a 10%, lavou-se, em seguida, com um tampão de fosfato (pH 6,86). Separou-se a camada orgânica, secou-se sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vácuo. Triturou-se o residuo com éter diisopropílico e secou-se in vacuo, para dar ácido (Z)—2— {5- [ (terc-butoxicarbonil)amino]-1,2,4-tiadiazol-3-il}[(2-terc-butoxi-l, l-dimetil-2-oxoetoxi) imino] etanóico (3,10 g). 41 IV (KBr) 3191, 6, 2981, 4, 1714,4, 1550, 5, 1153, 2, 1000, 9 cm-1 RMN de (DMSO-d6) δ 1,37 (9H, s) , 1,45 (6H, s) , 1,50 (9H, s), 12,7 (1H, s) ESI-MS: m/z=429(M-H)

Preparação 2

Agitou-se, à temperatura ambiente durante 30 minutos, uma mistura de N,N-dimetilformamida (0,648 mL) e cloreto de fosforilo (0,781 mL) . À mistura adicionou-se tetra-hidrofurano (4 mL) e ácido (Z)-2-(5-[(terc-butoxicarbonil)amino]-1,2,4-tiadiazol-3-il}[(2-terc-butoxi-l,l-dimetil-2- oxoetoxi)imino]etanóico (3 g) a 4 °C e, agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 1 hora. Entretanto, aqueceu-se uma mistura de cloridrato de 7p-amino-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (3 g) e N-(trimetilsilil)acetamida (8,72 g) em tetra-hidrofurano (15 mL) para originar uma solução transparente. Arrefeceu-se, então, a solução até -20 °C e adicionou-se à solução ácida activada obtida acima. Agitou-se a mistura reaccional a uma temperatura de -10 °C até 0 °C durante 1 hora e verteu-se para uma mistura de acetato de etilo e água. Separou-se a camada aquosa, lavou-se a camada orgânica com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado in vacuo e purificou-se por cromatografia em coluna sobre silica gel, eluindo com hexano/acetato de etilo (3 : 2) para dar 7β-[(Z)-2-(5-terc-butoxicarbonilamino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc- 42 butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (4,79 g). IV (KBr) 2981,4, 1793,5, 1720,2, 1524,8, 1371,1, 1247,7, 1151,3 cm'1 RMN de *H (DMSO-d6) δ 1,39 (6H, s) , 1,48 (3H, s), 1,50 (6H, s), 3,58 (1H, d, J=18,3 Hz) , 3,76 (1H, d, J=18,3 Hz) , 4,44 (2 H, s), 5,29 (1H, d, J=5,0 Hz) , 6,01 (1H, dd, J=8,6, 5,0 Hz), 6,97 (1H, s), 7,2-7,6 (10H, m) , 9,65 (1H, d, J=5,0 Hz), 12,7 (1H, s) ESI-MS: m/z=849(M+Na)

Preparação 3 A uma solução de 5-amino-l-metilpirazole (5 g) em etanol (50 mL) adicionou-se nitrito de isoamilo (6,92 mL) e adicionou-se, em seguida, ácido clorídrico a 20% (5 gotas) a 4 °C.

Aqueceu-se a mistura reaccional a refluxo durante 2 horas e arrefeceu-se até à temperatura ambiente. À mistura reaccional adicionou-se éter diisopropílico (50 mL) e, agitou-se a mistura durante 0,5 horas. Recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para dar 5-amino-l-metil-4-nitrosopirazole (3,53 g). RMN de 2H (DMSO-dg) δ 3,51 (3H, s) , 8,07 (2H, s 1), 8,51 (1H, s) APCI-MS: m/z=127(M+H) 43

Preparação 4 A uma solução de 5-amino-l-metil-4-nitrosopirazole (1 g) em água (40 mL) adicionou-se ácido sulfúrico concentrado (0,423 mL) e paládio sobre carvão (0,3 g) sob uma atmosfera de hidrogénio. Agitou-se a mistura dum dia para o outro. Filtrou-se a mistura reaccional, e evaporou-se o filtrado in vácuo. Ao residuo adicionou-se álcool isopropilico e recolheu-se o precipitado resultante por filtração para dar o sal de ácido sulfúrico de 4,5-diamino-l-metilpirazole (1,71 g). RMN de (DMSO-de) δ 3,54 (3H, s) , 7,19 (1H, s) ESI-MS: m/z=113(M+H)

Preparação 5 A uma suspensão de 1,1'-carbonildiimidazole (9,73 g) em clorofórmio desidratado (72 mL) adicionou-se N-(2-aminoetil)carbamato de terc-butilo (9,61 g) sob arrefecimento com gelo e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. À mistura reaccional adicionou-se N-etildiisopropilamina (14,22 g) e sal de ácido sulfúrico de 4,5-diamino-l-metilpirazole (10,51 g) e, agitou-se a mistura a 50 °C durante 15 horas. Eliminou-se os materiais insolúveis por filtração. Ao filtrado adicionou-se clorofórmio (200 mL) e solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio a 5% (100 mL) . Separou-se a camada orgânica, e extraiu-se a camada aquosa com um solvente misto de clorofórmio e metanol (4:1). Combinou-se as camadas orgânicas, secou-se sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Triturou-se o residuo com acetato de 44 etilo e secou-se in vácuo para dar 5-amino-4-(3-{2-[(terc-butoxicarbonil)amino]etiljureido)-1-metilpirazole (14,0 g) como um sólido. RMN de (DMSO-de) δ 1,38 (9H, s) , 2,96-2,98 (2H, m) , 3,03- 3,07 (2H, m) , 3,50 (3H, s) , 4,81 (2H, 1), 5,92 (1H, 1), 6,80 (1H, 1), 6,96 (1H, s), 7,18 (1H, 1)

Exemplo 1 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-terc-butoxicarbonilamino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (500 mg) em N,N-dimetilformamida (1,0 mL) adicionou-se iodeto de sódio (100 mg) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À mistura reaccional adicionou-se uma solução de 5-amino-4-(3-{2-[(terc-butoxicarbonil)amino]etil)ureido)-1-metilpirazole (216 mg) em N,N-dimetilformamida (1,0 mL). Agitou-se a mistura completa a 32 °C durante 4 horas. À mistura reaccional resultante adicionou-se acetato de etilo (50 mL) e água (50 mL) . Separou-se a camada aquosa, lavou-se a camada orgânica com solução aquosa de trifluoroacetato de sódio a 10% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de sódio anidro e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado até cerca de 5 mL in vácuo. Verteu-se o concentrado para éter diisopropilico (75 mL), e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vácuo. A uma solução do sólido resultante em cloreto de metileno (1,8 mL) adicionou-se anisole (0,6 mL) e ácido trifluoroacético (1,2 mL) . Agitou-se a solução resultante à temperatura ambiente 45 durante 4 horas e verteu-se para éter diisopropílico (80 mL) . Recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para dar um produto em bruto (380 mg), o qual foi purificado por cromatografia liquida de alta eficiência preparativa (HPLC) utilizando uma coluna ODS. Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 30 mL in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 3 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (Mitsubishi Chemical Corporation) eluindo com 2-propanol aquoso a 30%. Concentrou-se o eluato até cerca de 30 mL in vacuo e liofilizou-se para dar 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-(3-amino-4-[3-(2-aminoetil)ureido]-2-metil-l-pirazolio)metil-3-cefeme-4-carboxilato (21 mg) como um sólido amorfo. RMN de ΧΗ (D20) δ 1,52 (3H, s) , 1,53 (3H, s) , 3,12 (2H, t, J=5,7 Hz), 3,22 (1H, d, J=17,9 Hz), 3,49 (1H, d, J=17,9 Hz), 3,46 (2H, t, J=5,7 Hz), 3,71 (3H, s) , 4,95 (1H, d, J=15,6 Hz), 5,15 (1H, d, J=15,6 Hz), 5,25 (1H, d, J=4,6 Hz), 5,84 (1H, d, J=4,6 Hz), 7,89 (1H, s)

Preparação 6 A uma solução de 5-amino-4-(3-{2-[(terc-butoxicarbonil)amino]etil}ureido)-1-metilpirazole (597 mg) e trietilamina (243 mg) em cloreto de metileno (10 mL) adicionou-se cloreto de trifenilmetilo (669 mg) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 19 horas. Lavou-se a mistura reaccional sucessivamente com solução aquosa de ácido cítrico a 10%, solução aquosa saturada de cloreto de sódio e solução 46 aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Triturou-se o resíduo com acetato de etilo para dar 4-(3—{2—[(terc-butoxicarbonil)amino]etiljureido)-l-metil-5-trifenilmetilaminopirazole (640 mg) como um sólido. RMN de ΧΗ (DMSO-d6) δ 1,38 (9H, s) , 2,70 (3H, s) , 2,94-2,96 (2H, m), 2,99-3,01 (2H, m) , 5,68 (1H, s 1), 5,96 (1H, 1), 6,78 (1H, 1), 6,85 (1H, 1), 7,00 (1H, s) , 7,13-7,15 (6H, m) , 7,24- 7,28 (9H, m)

Preparação 7 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (60 g) em tolueno (600 mL), adicionou-se uma solução de iodeto de sódio (61,8 g) em tampão de fosfato 0,05 mol (pH 7, 500 mL) e cloreto de tricaprililmetilamónio (6,67 g) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 15 horas. Adicionou-se a mistura reaccional a uma mistura de acetato de etilo e água. Lavou-se a camada orgânica com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, e secou-se, em seguida, sobre sulfato de magnésio. Eliminou-se o sulfato de magnésio por filtração e, evaporou-se o filtrado até 255 g sob pressão reduzida. Verteu-se o concentrado para éter diisopropílico (2 L) . Recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se para dar 7β-[(Z)-2-(5-amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (59,4 g). 47 RMN de 1U. (DMSO-dê) δ 1,39 (9H, s), 1,46 (6H, s) , 3,57 e 3,87 (2H, ABq, J=18,0 Hz), 3,76 (3H, s) , 4,30 (2H, s 1), 5,25 (1H, d, J=4,9 Hz), 5,94 (1H, dd, J=4,9, 8,7 Hz), 6,95 (1H, s 1), 7,15-7,60 (10H, m), 8,17 (2H, s 1), 9,53 (1H, d, J=8,7 Hz)

Exemplo 2 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (810 mg) em N, N-dimetilformamida (2,4 mL) adicionou-se N-(trimetilsilil)acetamida (656 mg) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À mistura reaccional adicionou-se uma solução de 4-(3-{2-[(terc- butoxicarbonil)amino]etil}ureido)-l-metil-5-trifenilmetilami-nopirazole (640 mg) em cloreto de metileno (10 mL) . Agitou-se a mistura completa à temperatura ambiente durante 26 horas. À mistura reaccional resultante adicionou-se acetato de etilo (50 mL) e água (50 mL) . Separou-se a camada aquosa, lavou-se a camada orgânica com solução aquosa de trifluoroacetato de sódio a 10% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de sódio anidro e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado até cerca de 5 mL in vacuo. Verteu-se o concentrado para éter diisopropilico (80 mL), e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo. A uma solução do sólido resultante em cloreto de metileno (2,38 mL) adicionou-se anisole (0,79 mL) e ácido trifluoroacético (1,58 mL) . Agitou-se a solução resultante à temperatura ambiente durante 4 horas e verteu-se para éter diisopropilico (80 mL) . Recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para 48 dar um produto em bruto (635 mg), o qual foi purificado por HPLC preparativa utilizando uma coluna de ODS. Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 30 mL in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 3 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (Mitsubishi Chemical Corporation) eluindo com 2-propanol aquoso a 30%. Concentrou-se o eluato até cerca de 30 mL in vacuo e liofilizou-se para dar 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-{1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-(3-amino-4-[3-(2-aminoetil)ureido]-2-metil-l-pirazolio}metil-3-cefeme-4-carboxilato (54 mg) como um sólido amorfo. RMN de (D20) δ 1,52 (3H, s) , 1,53 (3H, s) , 3,12 (2H, t, J=5,7 Hz), 3,22 (1H, d, J=17,9 Hz), 3,49 (1H, d, J=17,9 Hz), 3,46 (2 H, t, J=5,7 Hz), 3,71 (3H, s) , 4,95 (1H, d, J=15,6 Hz), 5,15 (1H, d, J=15,6 Hz), 5,25 (1H, d, J=4,6 Hz), 5,84 (1H, d, J=4,6 Hz), 7,89 (1H, s)

Preparação 8 A uma solução de 2,3-di-hidro-lH-irnidazo[l,2-b]pirazole (120 g) em ácido sulfúrico (500 mL) adicionou-se nitrato de potássio (111 g) sob arrefecimento com gelo. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 48 horas. Adicionou-se a mistura reaccional a gelo (2,0 kg) . Recolheu-se o resíduo cristalino por filtração e secou-se in vacuo para dar 7-nitro-2,3-di-hidro-lH-imidazo[1,2 —b]pirazole (132 g) como um sólido. RMN de 2H (DMSO-de) δ 4,05-4,09 (2H, m) , 4,17-4,20 (2H, m) , 7,82 (1H, s), 7,97 (1H, 1) 49

Preparação 9

Tratou-se uma suspensão de 7-nitro-2,3-di-hidro-lH-imidazo[1,2-b]pirazole (97 g) num solvente misto de ácido sulfúrico (34 mL) e água (2000 mL) com paládio a 10% sobre carvão (10 g) sob uma atmosfera de hidrogénio à temperatura ambiente durante 4 dias. Depois de se ter eliminado o catalisador por filtração, concentrou-se o filtrado in vacuo. Triturou-se o residuo com metanol e secou-se in vacuo para dar o sal de ácido sulfúrico de 7-amino-2,3-di-hidro-lH-imidazo[1,2-b]pirazole (90,2 g) como um sólido. RMN de 2Η (DMSO-d6) δ 3, 87-3, 90 (2H, m) , 4,07-4,10 (2H, m) , 7,28 (1H, s)

Preparação 10 A uma solução do sal de ácido sulfúrico de 7-amino-2,3-di-hidro-lH-imidazo[1,2-b]pirazole (2,22 g) e N- etildiisopropilamina (2,84 g) em cloreto de metileno (70 mL) adicionou-se N-[3-(terc-butoxicarbonilamino)- propioniloxi]succinimida (3,15 g) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 4 horas. Lavou-se a mistura reaccional com solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio, e secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Purificou-se o residuo oleoso por cromatografia em coluna sobre sílica gel, eluindo com 5% de metanol/clorofórmio para dar 7-[3-(terc-butoxicarbonilamino) propionil] amino-2,3-di-hidro-lH-imidazo[1,2-b]pirazole (2,2 g) como um sólido. 50 RMN de 1E (CDC13) δ 1,44 (9H, s) , 2,52 (2H, t, J=6,0 Hz), 3,36-3,47 (2H, m), 3,96 (2H, t, J=8,2 Hz), 4,18 (2H, t, J=8,2 Hz), 5,16 (1H, 1), 7,16 (1H, s), 7,90 (1H, 1)

Exemplo 3 7β-[(Z)-2-(5-Amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-[7-(3-aminopropionamido)-2,3-di-hidro-5-(lH-imidazo[1,2—b]pirazolio)]metil-3-cefeme-4-carboxilato O composto em epígrafe foi obtido a partir de 7β-[(Ζ)-2-(5-terc-butoxicarbonilamino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)-acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo e 7-[3-(terc- butoxicarbonilamino)propionil]amino-2,3-di-hidro-lH-imidazo[1,2-b]pirazole do mesmo modo que no Exemplo 1 como um sólido amorfo. RMN de 2Η (D20) δ 1,51 (3H, s) , 1,52 (3H, s) , 2,83 (2H, t, J=6,4 Hz) , 3,26 (1H f d, J=17,9 Hz), 3 ,53 (1H, d, J= =17, 9 Hz) , 3,31 (2H, t, J= =6,4 Hz ), 4,15 (2H, t, J=8, 7 Hz ), 4 ,33 (1H, q, J=8,7 Hz), 4,42 (1H, q< , J=8,7 Hz) , 4,95 (1H, d, J=15 ,1 Hz), 5,03 (1H, d, J=15,1 Hz) , f 5,25 (1H, d, J= =5,0 Hz) , 5, 84 (1H, d, J=5,0 Hz) , 8,06 (1H, S) 51

Preparação 11 [2-(5-Amino-l-metil-lH-pirazol-4-ilcarbamoil)etil]carbamato de terc-butilo 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de sal de ácido sulfúrico de 4,5-diamino-l-metilpirazole e N-[3-(terc-butoxicarbonilamino)propioniloxi]succinimida do mesmo modo que na Preparação 10. RMN de ΧΗ (DMSO-de) δ 1,38 (9H, s), 2,35 (2H, t, J=7,l Hz) 3,18 (2H, q, J=7,l Hz), 3,50 (3H, s), 4,90 (2H, s), 6,83 (1H, t, J=7,1 Hz), 7,14 (1H, s), 9,06 (1H, s) AP-MS: m/z=283

Preparação 12 {2-[l-Metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-ilcarbamoil]etil}carbamato de terc-butilo O composto em epígrafe foi obtido a partir de [2-(5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-ilcarbamoil)etil]-carbamato de terc-butilo do mesmo modo que na Preparação 6. RMN de (DMSO-dg) δ 1,39 (9H, s) , 2,08 (2H, t, J=7,l Hz), 2,71 (3H, s), 3,04 (2H, q, J=7,l Hz), 5,57 (1H, s), 6,72 (1H, t, J=7,l Hz), 7,1-7,4 (16H, m), 8,25 (1H, s) 52

Exemplo 4 7β-[(Z)-2-(5-Amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-[3-amino-4-(3-aminopropionamido)-2-metil-l-pirazolio]metil-3-cefeme-4-carboxilato 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de 7β-[(Z)-2-(5-terc-butoxicarbonilamino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)-acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo e {2-([l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-ilcarbamoil]etil}carbamato de terc-butilo do mesmo modo que no Exemplo 1. RMN de 2H (D20) δ 1,53 (6H, s) , 2,89 (2H, t, J=6,5 Hz), 3,20 e 3,47 (2H, ABq, J=18 Hz), 3,34 (2H, t, J=6,5 Hz), 3,75 (3H, s), 4,99 e 5,21 (2H, ABq, J=16 Hz), 5,25 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,85 (1H, d, J=4,8 Hz), 8,02 (1H, s) ESI-MS: m/z=674(M+Na)

Preparação 13 A uma solução de 1,3-bis(terc-butoxicarbonil)-2-(trifluorometilsulfonil)guanidina (22,3 g) em diclorometano (100 mL) adicionou-se sal de ácido sulfúrico de 4,5-diamino-l-metilpirazole (10 g) e trietilamina (33,2 mL) a 4 °C e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente dum dia para o outro. Verteu-se a mistura reaccional para uma mistura de acetato de etilo e água. Separou-se a camada aquosa, lavou-se a camada orgânica com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou- 53 se sobre sulfato de magnésio anidro e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado in vacuo. Verteu-se o concentrado para acetonitrilo, e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para dar 5-amino-4-[2', 3'-bis(terc- butoxicarbonil)guanidino]-1-metilpirazole (11,62 g). RMN de ΧΗ (DMSO-d6) Ô 1,37 (9H, s) , 1,50 (9H, s) , 3,52 (3H, s), 5,14 (2H, s), 7,11 (1H, s) , 9,14 (1H, s) , 11,5 (1H, s) ESI-MS: m/z=353(M-H)

Preparação 14 4-[2' , 3' -Bis(terc-butoxicarbonil)guanidino]-l-metil-5-(tritilamino)pirazole 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de 5-amino-4-[2' , 3' -bis(terc-butoxicarbonil)guanidino]-1-metilpirazole do mesmo modo como na Preparação 6. RMN de ΧΗ (DMSO-dê) δ 1,37 (9H, s), 1,50 (9H, s), 2,85 (3H, s), 5,88 (1H, s), 7,17 (1H, s) , 7,21 (15H, m) , 8,85 (1H, s) , 11,2 (1H, s) ESI-MS: m/z=597(M+H) 54

Exemplo 5 7β-[(Z)-2-(5-Amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-(3-amino-4-guanidino-2-metil-l-pirazolio)metil-3-cefeme-4-carboxilato 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de 7β—[(Z)—2—(5— amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo e 4-[2',3'-bis (terc-butoxicarbonil)guanidino]-1-metil-5-(tritilamino)pirazole do mesmo modo que no Exemplo 1. RMN de 2H (DMSO-d6) δ 1,53 (6H, s) , 3,25 e 3,57 (2H, ABq, J=18 Hz), 3,75 (3H, s) , 5,00 e 5,18 (2H, ABq, J=15 Hz), 5,27 (1H, d, J=4,9 Hz), 5,85 (1H, d, J=4,9 Hz), 8,05 (1H, s)

Preparação 15 A uma suspensão do sal de ácido sulfúrico de 4,5-diamino-l-metilpirazole (305 g) em tetra-hidrofurano (3,05 L), adicionou-se 2-[(2,5-dioxo-l-pirrolidinil)oxi]-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo (415 g) sob arrefecimento com gelo. À mistura adicionou-se diisopropiletilamina (556 mL) , gota a gota, a uma temperatura inferior a 10 °C. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente dum dia para o outro. À solução resultante adicionou-se solução aquosa saturada de cloreto de sódio e solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio e, extraiu-se a mistura com acetato de etilo (3,0 L). Extraiu-se duas vezes a camada aquosa com tetra-hidrofurano/acetato de etilo = 1/1 (3,0 L) . Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vácuo. Triturou-se o resíduo com 55 éter diisopropílico (1,0 L) e secou-se in vácuo para dar 2— [ (5— amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)amino]-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo (307 g) . IV (KBr) 3440, 3349, 1670, 1631, 1525, 1276, 1163, 1074, 1014, 860, 791 cm'1 RMN de 2H (DMSO-de) δ 1,39 (9H, s) , 3,44 (3H, s) , 3,64 (2H, d, J=5, 9 Hz), 4,91 (2H, s 1), 6,97 (1H, t, J=5,9 Hz), 7,15 (1H, s) , 9,09 (1H, s 1)

Preparação 16 A uma solução de 2-[(5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)amino]-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo (307 g) em N,N-dimetilformamida (1,5 L) adicionou-se cloreto de trifenilmetilo (334 g). À mistura adicionou-se trietilamina (318 mL) gota a gota. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. Dissolveu-se a mistura reaccional em acetato de etilo. Lavou-se a solução sucessivamente com água, solução aquosa de ácido citrico a 10%, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Secou-se o extracto sobre sulfato de magnésio anidro; filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Triturou-se o residuo com acetonitrilo (1,5 L) e secou-se in vacuo para dar 2-{[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo (468 g) . IV (KBr) 3336, 3280, 1724, 1683, 1599, 1234, 939, 704 cm'1 56 RMN de 2H (DMSO-dê) δ 1,38 (9H, s) , 2,73 (3H, s) , 3,38 (2H, d, J=5,8 Hz), 5,58 (1H, s) , 6,94 (1H, t, J=5,8 Hz), 7,11-7,35 (15H, m), 7,21 (1H, s), 8,31 (1H, s) ESI-MS: m/z=512,3 (M+H+)

Exemplo 6 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (489 g) em N,N-dimetilformamida (1,4 L) adicionou-se iodeto de sódio (102 g). Depois de agitar à temperatura ambiente durante 1 hora, adicionou-se 2-{[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo (383 g) à mistura. Prosseguiu-se a agitação a 37 °C durante 24 horas. Verteu-se a mistura resultante para água e extraiu-se com acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica, sucessivamente, com água, solução aquosa de tiossulfato de sódio a 10%, solução aquosa saturada de cloreto de sódio e solução aquosa de trifluoroacetato de sódio a 10%, secou-se sobre sulfato de magnésio, filtrou-se e evaporou-se in vacuo.

Dissolveu-se o residuo em acetato de etilo (3,5 L) e, adicionou-se a solução, gota a gota, a éter diisopropilico (36 L) . Recolheu-se o precipitado por filtração. Lavou-se o bolo de filtração com éter diisopropilico e secou-se in vacuo.

Dissolveu-se o sólido obtido (700 g) em diclorometano (1,4 L) e à solução adicionou-se, sucessivamente, anisole 57 (700 mL) e ácido trifluoroacético (2,1 L). Depois de agitar à temperatura ambiente durante 4 horas, verteu-se a mistura reaccional para éter diisopropilico (30 L) . Recolheu-se o precipitado por filtração. Lavou-se o sólido obtido com éter diisopropilico e secou-se in vacuo. Dissolveu-se o produto em bruto em água (3,5 L) e, ajustou-se o pH da solução até 7,0 com solução aquosa de amoniaco a 28%. Eliminou-se o material insolúvel por filtração e, ajustou-se o pH do filtrado até 1, com ácido clorídrico concentrado. Eliminou-se novamente o material insolúvel por filtração. Cromatografou-se o filtrado sobre Diaion® HP-20 eluindo com 2-propanol aquoso a 20%. Concentrou-se o eluato até cerca de 3,0 L in vacuo e, adicionou-se ácido sulfúrico a 2,0 M (102 mL) ao concentrado. Liofilizou-se a mistura para dar o produto em bruto.

Purificou-se o produto em bruto por HPLC preparativa (tampão de fosfato pH 7,0 e acetonitrilo), e concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 6 L in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 1 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20, eluindo com 2-propanol aquoso a 20%. Concentrou-se o eluato até cerca de 550 mL in vacuo e, adicionou-se ácido sulfúrico a 2,0 M (54,5 mL) ao concentrado. À mistura adicionou-se gota a gota acetonitrilo (880 mL) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente dum dia para o outro. À mistura adicionou-se acetonitrilo (200 mL) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2 horas. Recolheu-se os cristais brancos resultantes por filtração, lavou-se com acetonitrilo aquoso a 25% e secou-se sob pressão reduzida para dar o hidrogenossulfato do ácido 7β-[(Z)-2-(5-amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l- metiletoxiimino)acetamido]-3-[3-amino-4-(aminoacetil)amino-2-metil-l-pirazolio]metil-3-cefeme-4-carboxílico (72,5 g). 58 IV (KBr) 1778, 1700, 1653, 1525, 1149, 1111, 617 cm-1 RMN de XH (D20) δ 1,61 (6H, s), 3,22 e 3, 45 (2 H, ABq, J=17,8 Hz), 3, 73 (3H, s) , 4, 03 (2 H, s), 5,05 e 5,27 (2 H, ABq, J=15,8 Hz), 5,25 (1H, d, J=4, 8 Hz), 5,87 (1H, d, J=4, 8 Hz) , 8,09 (1H, s) ESI-MS: m/z=638,2 (M+H+)

Exemplo 7

Purificou-se uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-(3-amino-4-[3-(2-aminoetil)ureido]-2-metil-l-pirazolio}metil-3-cef eme-4-carboxilato (36 g) em água por HPLC preparativa utilizando uma coluna ODS. Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 1,5 L in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 1 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (6 L) eluindo com 2-propanol aquoso a 20%. Concentrou-se o eluato até cerca de 800 mL in vacuo e, adicionou-se ácido sulfúrico a 2 M (17 mL) . Liof ilizou-se a solução resultante para dar um sal de ácido sulfúrico como um pó amorfo (23,6 g).

Dissolveu-se o pó em água (71 mL) e etanol (57 mL) . Após adição de núcleos de cristalização (310 mg) que resultou na precipitação de um sólido branco, agitou-se a mistura durante 1 hora. Adicionou-se uma mistura de etanol (47 mL) e água (37 mL) ao longo de 30 minutos e, adicionou-se etanol (33 mL) ao longo de 20 minutos. Agitou-se então a suspensão durante mais 59 1,5 horas. Recolheu-se o precipitado por filtração, lavou-se com etanol/água (60 mL/20 mL) e etanol (60 mL) e secou-se para dar o hidrogenossulfato do ácido 7β-[(Z)-2-(5-amino-l, 2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-{3-amino-4-[3-(2-aminoetil)ureido]-2-metil-l-pirazolio}metil-3-cefeme-4-carboxílico como cristais (17,3 g). IV (KBr) 3353, 3183, 1778, 1652, 1558, 1403, 1321, 1143, 1118, 997, 619 cm-1 RMN de XH (D20) δ 1,61 (6H, s), 3,10-3,55 (6H, m), 3,71 (3H, s), 5,02 e 5,23 (2H, ABq, J=16,7 Hz), 5,25 (1H, d, J=4,9 Hz), 5,87 (1H, d, J=4,9 Hz), 7,91 (1H, s) ESI-MS: m/z=667 (M+H+)

Análise de difracção de raios X (utilizando um sistema de Difracção de raios X Rigaku MultiFlex) 60 2Θ intensidade 1286 586 423 618 520 748 667 1058 944 618 813 472 537 455 390 8,0 12.7 13.8 16,1 18.9 20.4 21.5 22.4 23.3 24,0 25.5 26,7 27.9 28.5 31.3

Raios X: Cu/40 kV/30 mA

Preparação 17 5-Amino-l-etil-4-nitrosopirazole O composto em epígrafe foi obtido a partir de 5-amino-l-etilpirazole do mesmo modo que na Preparação 3. RMN de 1H (DMSO-d6) δ 1,21 (3H, t, J=7,1 Hz), 3,93 (2H, q, J=7,l Hz), 7,04 e 8,53 (1H, s), 8,10 e 8,15 (1H, s 1) APCIMS: m/z=141 (M+H)+ 61

Preparagão 18

Sal de ácido sulfúrico de 4,5-diamino-l-etilpirazole 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de 5-amino-l-etil-4-nitrosopirazole do mesmo modo que na Preparação 4. RMN de 2H (D20) δ 1,36 (3H, t, J=7,3 Hz), 4,10 (2H, q, J=7,3 Hz), 7,77 (1H, s) ESI-MS: m/z=127(M+H) "

Preparação 19 5-Amino-4-[3-(terc-butoxicarbonilamino)-propionilamino]-1-etilpirazole O composto em epígrafe foi obtido a partir do sal de ácido sulfúrico de 4,5-diamino-l-etilpirazole do mesmo modo que na Preparação 15. RMN de XH (DMSO-dê) δ 1,24 (3H, t, J=7,2 Hz), 1,37 (9H, s), 2,35 (2H, t, J=7,1 Hz), 3,18 (2H, dt, J=7,l, 7,1 Hz), 3. 85 (q, J=7,2 Hz), 4,88 (2H, s 1), 6,75-6,90 (1H, m), 7,17 (1H, s), 9,05 (1H, s 1) APCI-MS: m/z=298(M+H)+ 62

Preparação 20 4-[3- (terc-Butoxicarbonilamino)propionilamino]-l-etil-5-trifenilmetilaminopirazole O composto em epígrafe foi obtido a partir de 5-amino-4-[3-(terc-butoxicarbonilamino)propionilamino]-1-etilpirazole do mesmo modo que na Preparação 16. RMN de (DMSO-de) δ 0,88 (3H, t, J=7,2 Hz), 1,39 (9H, s) , 2,02 (2H,t, J=7,1 Hz), 2, 95-3,20 (4H, m) , 5,59 (1H, s 1), 6,60-6,75 (1H, m), 7,10-7,35 (16H, m), 8,04 (1H, s 1) ESI-MS: m/z=540(M+H)+, 562(M+Na)+

Exemplo 8 7β-[(Z)-2-(5-Amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l- metiletoxiimino)acetamido]-3-[3-amino-4-(3-aminopropionilamino)-2-etil-l-pirazolio]metil-3-cefeme-4-carboxilato O composto em epígrafe foi obtido a partir de 7β—[(Z)—2—(5— amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo e 4-[3-(terc-butoxicarbonilamino)propionilamino]-1-etil-5-trifenilmetilaminopirazole do mesmo modo que no Exemplo 1. IV (KBr) 3415, 1763, 1658, 1598, 1529, 1402, 1361 cm-1 63 2,89 (2H, ABq, 8,03 RMN de 2Η (D20) δ 1,33 (3H, t, J=7,2 Hz), 1,53 (6H, s), (2H, t, J=6,5 Hz), 3,17 e 3,49 (2H, ABq, J=17,7 Hz), 3,34 t, J=6,5 Hz), 4,28 (2H, q, J=7,2 Hz), 5,05 e 5,16 (2H, J=15,4 Hz), 5,26 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,85 (1H, d, J=4,8 Hz), (1H, s)

Preparação 21 2- [ (5-Amino-l-etil-lH-pirazol-4-il)amino] -2-oxoetilcarbamato de terc-butilo O composto em epígrafe foi obtido a partir do sal de ácido sulfúrico de 4,5-diamino-l-etilpirazole do mesmo modo que na Preparação 15. RMN de 2H (DMSO-d6) δ 1,21 (3H, t, J=7,2 Hz), 1,39 (9H, s) , 3,64 (2H, d, J=6,0 Hz), 3,86 (2H, d, J=7,2 Hz), 4,88 (2H, s 1) , 6,90-7,00 (1H, m), 7,17 (1H, s), 9,06 (1H, s 1) ESI-MS: m/z=284 (M+H)+, 306(M+Na)+

Preparação 22 2 - {[l-Etil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo O composto em epígrafe foi obtido a partir de 2-[(5-amino-l-etil-lH-pirazol-4-il)amino]-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo do mesmo modo que na Preparação 16. 64 RMN άθ ΧΗ (DMSO-de) δ 0,88 (3H, t, J=7,2 Hz), 1,38 (9H, s) , 3,16 (2H, q, J=7,2 Hz), 3,31 (2H, d), 5,59 (1H, s 1), 6,80-6,95 (1H, m), 7,10-7,40 (16H, m), 8,03 (1H, s 1) ESI-MS: m/z=526 (M+H)\ 548(M+Na)+

Exemplo 9 7β-[(Z)-2-(5-Amino-l, 2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-[3-amino-4-(aminoacetil)amino-2-etil-l-pirazolio]metil-3-cefeme-4-carboxilato O composto em epígrafe foi obtido a partir de 7β-[(Z)-2- (5-amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo e 2-{ [l-etil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-iljamino}-2-oxoetilcarbamato de terc-butilo do mesmo modo que no Exemplo 1. IV (KBr) 3444, 1761, 1635, 1626, 1446, 1406 crn-1 RMN de 2H (D20) δ 1,33 (3H, t, J=7,2 Hz), 1,53 (6H, s), 2,89 (2H, t, J=6,5 Hz), 3,17 e 3,49 (2H, ABq, J=17,7 Hz), 4,00 (2H, s), 4,28 (2H, q, J=7,2 Hz), 5,06 e 5,17 (2H, ABq, J=15,4 Hz), 5,27 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,85 (1H, d, J=4,8 Hz), 8,07 (1H, s) 65

Preparação 23 5-Amino-4-[2', 3'-bis(terc-butoxicarbonil)-guanidino]-1-etilpirazole 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de 1,3-bis(terc-butoxicarbonil) -2-(trifluorometilsulfonil)guanidina e do sal de ácido sulfúrico de 4,5-diamino-l-etilpirazole do mesmo modo que na Preparação 13. RMN de XH (DMSO-de) δ 1,22 (3H, t, J=7,l Hz), 1,37 (9H, s) , 1,50 (9H, s), 3,88 (2H, d, J=7,lHz), 5,12 (2H, s 1), 7,14 (1H, s), 9,16 (1H, s 1), 11,51 (1H, s 1) ESI-MS: m/z=369(M+H)+

Preparação 24 4-[2',3'-Bis(terc-butoxicarbonil)guanidino]-l-etil-5-trifenilmetilaminopirazole O composto em epígrafe foi obtido a partir de 5-amino-4-[2',3'-bis(terc-butoxicarbonil)guanidino]-1-etilpirazole do mesmo modo que na Preparação 16. RMN de 2H (DMSO-d6) δ 0,86 (3H, t, J=7,l Hz), 1,38 (9H, s) , I, 49 (9H,s), 5,85 (1H, s 1), 7,10-7,30 (16H, m), 8,80 (1H, s 1), II, 14 (1H, s 1) ESI-MS: m/z=611(M+H)+, 633(M+Na)+ 66

Exemplo 10 7β-[(Z)-2-(5-Amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-[3-amino-2-etil-4-guanidino-l-pirazolio]metil-3-cefeme-4-carboxilato O composto em epígrafe foi obtido a partir de 7β—[(Z)—2—(5— amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo e 4- [2', 3'-bis(terc-butoxicarbonil)guanidino]-1-etil-5-trifenilmetilaminopirazole do mesmo modo que no Exemplo 1. IV (KBr) 3437, 1760, 1658, 1625, 1406, 1065 cm-1 RMN de XH (D20) δ 1,35 (3H, t, J=7,3 Hz), 1,53 (6H, s), 3,26 e 3,61 (2H, ABq, J=17,8 Hz), 4,29 (2H, q, J=7,3 Hz), 5,06 e 5,17 (2H, ABq, J=15,7 Hz), 5,29 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,85 (1H, d, J=4,8 Hz), 8,06 (1H, s)

Exemplo 11 A uma suspensão de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (500 g) em N,N-dimetilformamida (2,5 L) adicionou-se 4-[2',3'-bis(terc-butoxicarbonil) guanidino]-l-metil-5-trifenilmetilaminopirazole (419 g) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 16 horas. Adicionou-se a mistura reaccional a uma mistura de acetato de etilo e água. Lavou-se a camada orgânica com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio e solução aquosa de 67 trifluoroacetato de sódio a 10% e secou-se, em seguida, sobre sulfato de magnésio. Eliminou-se o sulfato de magnésio por filtração, e evaporou-se o filtrado até 3,3 kg sob pressão reduzida. Verteu-se o concentrado para éter diisopropilico (33 L) , e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo. A uma solução do sólido resultante em cloreto de metileno (1500 mL) adicionou-se anisole (500 mL) e ácido trifluoroacético (1500 mL). Agitou-se a solução resultante à temperatura ambiente durante 4 horas e verteu-se para éter diisopropilico. Recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo. Dissolveu-se o produto em bruto em água (3,5 L) e ajustou-se o pH da solução até 7,0 com solução aquosa de amónia a 28%. Eliminou-se o material insolúvel por filtração e, ajustou-se o pH do filtrado até 1 com ácido clorídrico concentrado. Eliminou-se novamente o material insolúvel por filtração. Cromatografouse o filtrado sobre Diaion® HP-20 eluindo com 2-propanol aquoso a 20%. Concentrou-se o eluato até cerca de 3,0 L in vacuo. Ao concentrado adicionou-se ácido sulfúrico a 2,0 M (150 mL) e liofilizou-se a mistura para dar o produto em bruto. Purificou-se o produto em bruto por HPLC preparativa utilizando uma coluna ODS (tampão de fosfato pH 7,0 e acetonitrilo). Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 6 L in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 1 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 eluindo com 2-propanol aquoso a 20%. Concentrou-se o eluato até cerca de 1,5 L in vacuo. Ao concentrado adicionou-se ácido sulfúrico a 2,0 M (60 mL), e liofilizou-se a mistura para dar hidrogenossulfato do ácido 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-(3-amino-4- 68 guanidino-2-metil-l-pirazolio)metil-3-cefeme-4-carboxílico (48,5 g) . IV (KBr) 1776, 1714, 1677, 1651, 1402, 1112 cm-1 RMN de 2H (D20) δ 1,61 (6H, s) , 3,28 e 3,58 (2H, ABq, J=17,8 Hz), 3,74 (3H, s) , 5,15 e 5,23 (2H, ABq, J=15,7 Hz), 5,27 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,88 (1H, d, J=4,8 Hz), 8,07 (1H, s) ESI-MS: m/z=623,2(M+H+)

Preparação 25 A uma suspensão do sal de ácido sulfúrico de 4,5-diamino-l-(2-hidroxietil)pirazole (2,4 g) em cloreto de metileno (40 mL) adicionou-se N-etildiisopropilamina (2,1 mL) e N-[3-(terc-butoxicarbonilamino)propioniloxi]succinimida (2,3 g) sob arrefecimento com gelo e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 6 horas. À mistura reaccional adicionou-se solução aquosa saturada de cloreto de sódio (40 mL) e solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio (20 mL), e extraiu-se a mistura com uma mistura de acetato de etilo e 2-propanol (3:1, 60 mL). Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vácuo. Triturou-se o resíduo com éter dietílico para dar 5-amino-4-[3-(terc-butoxicarbonilamino)propionil]-amino-1-(2-hidroxietil)pirazole (1,65 g) como um sólido. RMN de XH (DMSO-de) δ 1,38 (9H, s) , 2,35 (2H, t, J=7,3 Hz), 3,16-3,20 (2H, m) , 3,62-3, 65 (2H, m) , 3,90 (2H, t, J=6,0 Hz), 69 4,85 (2Η, s 1), 4,92 (1H, t, J=5,0 Hz), 6,84 (1H, t, J=5,5 Hz), 7,20 (1H, s), 9,09 (1H, s 1)

Exemplo 12 7β-[(Z)-2-(5-Amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-[3-amino-4-(3-aminopropionamido)-2-(2-hidroxietil)-1-pirazolio]metil-3-cefeme-4-carboxilato O composto em epígrafe foi obtido a partir de 7β-[(Z)-2-(5-terc-butoxicarbonilamino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)-acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo e 5-amino-4-[3-(terc-butoxicarbonilamino)propionil]amino-1-(2-hidroxietil)pirazole do mesmo modo que no Exemplo 1 como um sólido amorfo. RMN de XH (D20) δ 1,51 (6H, s) , 2,88 (2H, t, J=6,4 Hz), 3,15 (1H, d, J=17,9 Hz), 3,48 (1H, d, J=17,9 Hz), 3,32 (2H, t, J=6,4 Hz), 3,88 (2H, t, J=4,8 Hz), 4,39 (1H, dt, J=16,5 Hz, 4,8 Hz), 4,42 (1H, dt, J=16,5, 4,8 Hz), 5,06 (1H, d, J=15,l Hz), 5,11 (1H, d, J=15,1 Hz), 5,25 (1H, d, J=5,0 Hz), 5,83 (1H, d, J=5,0 Hz), 8,05 (1H, s)

Preparação 26 A uma solução de 4-formil-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo [1,5-a]pirimidina (1,51 g) em ácido sulfúrico (7,5 mL), adicionou-se nitrato de potássio (111 g) sob arrefecimento com gelo. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 17 horas. Adicionou- 70 se a mistura reaccional a gelo (100 g) . Recolheu-se o resíduo cristalino por filtração e secou-se in vácuo para dar 3-nitro-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina (0,63 g) como um sólido. RMN de (DMSO-d6) δ 2,00-2. 05 (2H, m) , 3, 30-3,36 (2H, m) , 3,99 (2H, t, J=6,0 Hz), 7,85 (1H, s), 7,89 (1H, s)

Preparação 27

Uma solução de 3-nitro-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo [1,5-a]pirimidina (1,68 g) numa mistura de ácido sulfúrico (0,6 mL) , ácido acético (100 mL) e água (10 mL) foi tratada com paládio a 10% sobre carvão (0,5 g) sob uma atmosfera de hidrogénio à temperatura ambiente durante 6 dias. Depois de se ter eliminado o catalisador por filtração, concentrou-se o filtrado in vacuo. Triturou-se o resíduo com etanol e secou-se in vacuo para dar o sal de ácido sulfúrico de 3-amino-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo [1,5-a]pirimidina (2,3 g) como um sólido. RMN de XH (DMSO-de) δ 1,97-2,01 (2H, m) , 3,22 (2H, t, J=5,0 Hz), 3,98 (2H, t, J=6,0 Hz), 7,22 (1H, s)

Preparação 28 A uma solução do sal de ácido sulfúrico de 3-amino-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina (2,96 g) e N-etildiisopropilamina (3,88 g) em cloreto de metileno (70 mL) adicionou-se 1,3-bis(terc-butoxicarbonil)-2- 71 (trifluorometanossulfonil)guanidina (3,91 g). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 150 minutos. Lavou-se a mistura reaccional com solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna sobre sílica gel, eluindo com 2% de metanol/clorofórmio para dar 3-[2,3-bis(terc-butoxicarbonil)guanidino]-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina (3,4 g) como um sólido. RMN de ΧΗ (CDCla) δ 1,48 (9H, s), 1,52 (9H, s), 2,12-2,14 (2H, m), 3,33-3,37 (2H, m), 4,08 (2H, t, J=6,0 Hz), 6,17 (1H, s 1), 7,16 (1H, s), 9,87 (1H, s 1), 11,39 (1H, s 1)

Exemplo 13 A uma solução de 7β-[ (Z)-2-(5-terc-butoxicarbonilamino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (1,0 g) em N, N-dimetilformamida (2,0 mL) adicionou-se iodeto de sódio (181 mg) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À mistura reaccional adicionou-se 3-[2,3-bis(terc-butoxicarbonil)guanidino]-4,5,6,7- tetra-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina (571 mg) e cloreto de metileno (2,0 mL) . Agitou-se a mistura completa à temperatura ambiente durante 7 horas. À mistura reaccional adicionou-se acetato de etilo (100 mL) e água (50 mL) . Separou-se a camada aquosa, lavou-se a camada orgânica com solução aquosa de trifluoroacetato de sódio a 10% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de sódio e filtrou-se. 72

Concentrou-se o filtrado até cerca de 5 mL in vácuo. Verteu-se o concentrado para éter diisopropílico (150 mL) e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo. A uma solução do sólido resultante em cloreto de metileno (3,0 mL) adicionou-se anisole (1,0 mL) e ácido trifluoroacético (2,0 mL) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 4 horas. Verteu-se a mistura reaccional para éter diisopropílico (150 mL), e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para dar um produto em bruto (570 mg) , o qual foi purificado por HPLC preparativa utilizando uma coluna de ODS. Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 30 mL in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 3 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (Mitsubishi Chemical Corporation) eluindo com 2-propanol aquoso a 30%. Concentrou-se o eluato até cerca de 30 mL in vacuo e liofilizou-se para dar 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-[3-guanidino-4,5,6,7-tetra-hidro-l-pirazolo[1,5- a]pirimidinio]metil-3-cefeme-4-carboxilato (51 mg) como um sólido amorfo. RMN de 1H (D20) δ 1,52 (3H, s! ), 1,53 (3H r S) , 2,05- -2,25 (2H, m) , 3,26 (1H, d, J= =17, 4 Hz) , 3,56 (1H, d, J= =17, 4 Hz) , 3,30- -3,45 (2H, m) , 4,15 (2H, t, J=6, 0 Hz) , 4,93 (1H, d, J= =15, 6 Hz) , 5,15 (1H, d, J=15 ,6 Hz) r 5,25 (1H, d, J=4,8 Hz) , 5,84 (1H, d, J=4, 8 Hz) , 7,99 (1H, s) 73

Preparação 29 A uma solução do sal de ácido sulfúrico de 7-amino-2,3-di-hidro-lH-imidazo[1,2—b]pirazole (4,4 g) , 4-(dimetilamino)piridina (244 mg) e trietilamina (8,10 g) em clorofórmio (45 mL) adicionou-se 1,3-bis(terc-butoxicarbonil)-2-(trifluorometanossulfonil)guanidina (10,18 g) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2 horas. Lavou-se a mistura reaccional sucessivamente com solução aquosa de ácido cítrico a 10%, solução aquosa saturada de cloreto de sódio e solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Triturou-se o resíduo com éter diisopropílico para dar 7-[2,3-bis(terc-butoxicarbonil) guanidino]-2,3-di-hidro-lH-imidazo [1,2-b]pira-zole (4,6 g) como um sólido. RMN de (CDC13) δ 1,49 (9H, s) , 1,52 (9H, s) , 3,97-4,01 (2 H, m) , 4,21 (2H, t, J=7,8 Hz), 5,30 (1H, s 1), 7,19 (1H, s) , 9,86 (1H, s 1), 11,32 (1H, s 1)

Exemplo 14 7β-[(Z)-2-(5-Amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2- (1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-[7-guanidino-2,3-di-hidro-5-(1H— imidazo[1,2-b]pirazolio)]metil-3-cefeme-4-carboxilato O composto em epígrafe foi obtido a partir de 7β-[(Z)-2-(5-terc-butoxicarbonilamino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)-acetamido]-3-clorometil-3- 74 cefeme-4-carboxilato de benzidrilo e 7-[2,3-bis(terc- butoxicarbonil)guanidino]-2,3-di-hidro-lH-imidazo[1,2 —b]pirazole do mesmo modo que no Exemplo 13 como um sólido amorfo. RMN de 2H (D20) δ 1,51 (3H, s) , 1,52 (3H, s) , 3,35 (1H, d, J=17,9 Hz) i—1 CO (1H, d, J=17,9 Hz) , 4 . 19 (2H, t, J= 4,37 ( 1H, q, J=8 ,7 Hz; ), 4,47 (1H, q, J=8,7 Hz) , 5, 00 \—1 LO \—1 II •o Hz) , 5,04 (1H, d, J=15,1 Hz), 5,26 (1H, d, J: 5,84 (1H, d, J=4,8 Hz), 8,13 (1H, s)

Preparação 30 A uma solução de 5-amino-l-(2-hidroxietil)pirazole (6,35 g) num solvente misto de etanol (25 mL) e ácido clorídrico concentrado (0,035 mL) adicionou-se, gota a gota, nitrito de isoamilo (7,03 g) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 17 horas. Recolheu-se o resíduo cristalino por filtração e secou-se in vacuo para dar 5-amino-l-(2-hidroxietil)-4-nitrosopirazole (4,0 g) como um sólido. RMN de ΧΗ (DMSO-de) δ 3,68 (2H, t, J=5,5 Hz), 3,94 (2H, t, J=5,5 Hz), 4,89 (1H, 1), 8,06 (2H, 1), 8,53 (1H, s)

Preparação 31

Tratou-se uma solução de 5-amino-l-(2-hidroxietil)-4-nitrosopirazole (97 g) num solvente misto de ácido sulfúrico (34 mL) e água (2000 mL) com paládio a 10% sobre carvão (10 g) sob uma atmosfera de hidrogénio à temperatura ambiente durante 75 4 dias. Depois de se ter eliminado o catalisador por filtração, concentrou-se o filtrado in vácuo. Triturou-se o resíduo com metanol e secou-se in vacuo para dar o sal de ácido sulfúrico de 4,5-diamino-l-(2-hidroxietil)pirazole (90,2 g) como um sólido. RMN de XH (DMSO-dê) δ 3,66 (2H, t, J=5,5 Hz), 3,95 (2H, t, J=5,5 Hz), 7,25 (1H, s)

Preparação 32 A uma suspensão do sal de ácido sulfúrico de 4,5-diamino-l-(2-hidroxietil)pirazole (50,0 g) em clorofórmio (500 mL) adicionou-se 4-(dimetilamino)piridina (2,54 g), trietilamina (116 mL) e 1,3-bis(terc-butoxicarbonil)-2-(trifluorometanossulfonil)guanidina (106 g) . Agitou-se a mistura sob refluxo durante 2 horas. Depois de arrefecer num banho de gelo, lavou-se a mistura reaccional sucessivamente com água, solução aquosa de ácido cítrico a 4%, água e solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de sódio, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Triturou-se o resíduo com um solvente misto de acetato de etilo (50 mL) e éter dietílico (200 mL), para dar 5-amino-4-[2,3-bis(terc-butoxicarbonil) guanidino]-1-(2-hidroxietil)pirazole (50 g) , como um sólido. RMN de ΧΗ (CDCla) δ 1,47 (9H, s), 1,53 (9H, s) , 3,28 (1H, 1), 4,02-4,05 (4H, m), 4,65 (2H, 1), 7,22 (1H, s), 9,85 (1H, 1), 11,55 (1H, 1) 76

Exemplo 15 7β-[(Z)-2-(5-Amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-[3-amino-4-guanidino-2-(2-hidroxietil)-1-pirazolio]metil-3-cefeme-4-carboxilato 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de 7β—[(Z)—2—(5— terc-butoxicarbonilamino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2- (1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)-acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo e 5-amino-4-[2,3-bis(terc-butoxicarbonil)guanidino]-1-(2-hidroxietil)pirazole, do mesmo modo que no Exemplo 13, como um sólido amorfo. RMN de ΧΗ (D20) δ 1,52 (3H, s), 3,21 (1H, d, J=17,9 Hz), 3,59 (1H, d, J=17,9 Hz) , 3,90 (2H, t, J=4,8 Hz), 4,35-4,50 (2H, m) , 5,07 (1H, d, J=14,9 Hz), 5,11 (1H, d, J=14,9 Hz), 5,28 (1H, d, J=5,0 Hz), 5,84 (1H, d, J=5,0 Hz), 8,09 (1H, s)

Preparação 33 A uma solução de 7-[2,3-bis(terc-butoxicarbonil)guanidino]-2,3-di-hidro-lH-imidazo[1,2-b]pirazole (1,83 g) em piridina (10 mL) adicionou-se cloreto de trifenilmetilo (1,67 g). Agitou-se a mistura a 50 °C durante 5 horas. Depois de arrefecer, adicionou- se clorofórmio (50 mL) à mistura reaccional, lavou-se a mistura sucessivamente com solução aquosa de ácido cítrico a 10%, solução aquosa saturada de cloreto de sódio e solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vácuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia 77 em coluna sobre sílica gel, eluindo com 2% de metanol/clorofórmio para dar 7-[2,3-bis(terc- butoxicarbonil)guanidino]-l-trifenilmetil-2,3-di-hidro-lH-imidazo[1,2—b]pirazole (1,57 g) como um sólido. RMN de (CDC13) δ 1,47 (9H, s) , 1,48 (9H, s) , 3,50 (2H, t, J=7,8 Hz), 3,92 (2H, t, J=7,8 Hz), 7,07-7,26 (10H, m) , 7,53-7,54 (6H, m), 8,34 (1H, s 1), 11,12 (1H, s 1)

Exemplo 16 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (819 mg) em N,N-dimetilformamida (2,4 mL) adicionou-se N-(trimetilsilil)acetamida (656 mg) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À mistura reaccional adicionou-se 7-[2,3-bis(terc-butoxicarbonil)guanidino]-1- trifenilmetil-2,3-di-hidro-lH-imidazo[1,2 —b]pirazole (730 mg).

Agitou-se a mistura completa à temperatura ambiente durante 6 horas. À mistura reaccional resultante adicionou-se acetato de etilo (100 mL) e água (50 mL) . Separou-se a camada aquosa, lavou-se a camada orgânica com solução aquosa de trifluoroacetato de sódio a 10%, solução aquosa de tiossulfato de sódio a 10% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de sódio e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado até cerca de 5 mL in vacuo. Verteu-se o concentrado para éter diisopropílico (120 mL) , e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo. 78 A uma solução do sólido resultante em cloreto de metileno (2,0 mL) adicionou-se anisole (0,67 mL) e ácido trifluoroacético (1,34 mL) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 4 horas. Verteu-se a mistura reaccional para éter diisopropilico (120 mL) . Recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para dar um produto em bruto (430 mg), o qual foi purificado por HPLC preparativa utilizando uma coluna de ODS. Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 30 mL in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 3 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (Mitsubishi Chemical Corporation) eluindo com 2-propanol aquoso a 30%. Concentrou-se o eluato até cerca de 30 mL in vacuo e liofilizou-se para dar 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-[7-guanidino-2,3-di-hidro-5-(lH-imidazo[1,2 —b]pirazolio)]metil-3-cefeme-4-carboxilato (20,4 mg) como um sólido amorfo. RMN de XH (D20) δ 1,51 (3H, s) , 1,52 (3H, s) , 3,35 (1H, d, J=17,9 Hz), 3,61 (1H, d, J=17,9 Hz), 4,19 (2H, t, J=8,7 Hz), 4,37 (1H, q, J=8,7 Hz), 4,47 (1H, q, J=8,7 Hz), 5,00 (1H, d, J=15,1 Hz), 5,04 (1H, d, J=15,l Hz), 5,26 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,84 (1H, d, J=4,8 Hz), 8,13 (1H, s)

Preparação 34 A uma suspensão de 1,1'-carbonildiimidazole (1,94 g) em cloreto de metileno (20 mL) adicionou-se N- (3-aminopropil)carbamato de terc-butilo (2,30 g) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. À mistura reaccional adicionou-se N-etildiisopropilamina (2,56 g) e sal de 79 ácido sulfúrico de 4,5-diamino-l-metilpirazole (2,10 g) e, agitou-se a mistura a 30 °C durante 3 dias. Concentrou-se a mistura reaccional in vacuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna sobre sílica gel, eluindo com 6% de metanol/clorofórmio para dar 5-amino-4-(3-{3-[(terc-butoxicarbonil)amino]propiljureido)-1-metilpirazole (1,75 g) como um sólido. RMN de ΧΗ (DMSO-de) δ 1,37 (9H, s) , 1,43-1,49 (2H, m) , 2,89-2,93 (2H, m), 2,98-3,01 (2H, m), 3. 50 (3H, s), 4,79 (2H, 1), 5,85 (1H, 1), 6,77 (1H, 1), 6,96 (1H, s), 7,12 (1H, 1)

Exemplo 17 A uma solução de ΐβ-[(Z)-2-(5-terc-butoxicarbonilamino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (1,0 g) em N, N-dimetilformamida (2,0 mL) adicionou-se iodeto de sódio (199 mg) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À mistura reaccional adicionou-se 5-amino-4-(3—{3—[(terc- butoxicarbonil)amino]propilJureido)-1-metilpirazole (415 mg) e agitou-se a mistura completa a 32 °C durante 24 horas. À mistura reaccional resultante adicionou-se acetato de etilo (50 mL) e água (50 mL) . Separou-se a camada aquosa, lavou-se a camada orgânica com solução aquosa de trifluoroacetato de sódio a 10% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de sódio anidro e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado até cerca de 5 mL in vacuo. Verteu-se o concentrado para éter diisopropílico (100 mL) , e recolheu-se o precipitado resultante 80 por filtração e secou-se in vácuo. A uma solução do sólido resultante em cloreto de metileno (3,6 mL) adicionou-se anisole (1,2 mL) e ácido trifluoroacético (2,4 mL) . Agitou-se a solução resultante à temperatura ambiente durante 4 horas e verteu-se para éter diisopropilico (100 mL) . Recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vácuo para dar um produto em bruto (939 mg), o qual foi purificado por HPLC preparativa utilizando uma coluna de ODS. Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 30 mL in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 3 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (Mitsubishi Chemical Corporation) eluindo com 2-propanol aquoso a 30%. Concentrou-se o eluato até cerca de 30 mL in vacuo e liofilizou-se para dar 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-{3-amino-4-[3- (3-aminopropil)ureido)-2-metil-l-pirazolio}metil-3-cefeme-4-carboxilato (53 mg) como um sólido amorfo. RMN de ΧΗ (D20) δ 1,52 (3H, s) , 1,53 (3H, s) , 1,85-1, 88 (2H, m) , 3,03 (2H, t, J=8 Hz), 3,22 (2H, t, J=18 Hz), 3,26 (2H, t, J=7 Hz), 3,49 (1H, d, J=18 Hz), 3,72 (3H, s), 4,96 (1H, d, J=15 Hz), 5,16 (1H, d, J=15 Hz), 5,25 (1H, d, J=5 Hz), 5,84 (1H, d, J=5 Hz), 7,88 (1H, s)

Preparação 35 A uma suspensão de 1,1'-carbonildiimidazole (973 mg) em cloreto de metileno (10 mL) adicionou-se N-(2-aminoetil)carbamato de terc-butilo (1,11 g) sob arrefecimento com gelo e, agitou-se a mistura à temperatura 81 ambiente durante 2 horas. À mistura reaccional adicionou-se N-etildiisopropilamina (1,28 g) e sal de ácido sulfúrico de 3-amino-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina (1,18 g) e, agitou-se a mistura a 50 °C durante 6 horas. Lavou-se a mistura reaccional com solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna sobre sílica gel, eluindo com 5% de metanol/clorofórmio para dar 3-(3-{2-[(terc- butoxicarbonil)amino]etil}ureido)-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo [1,5-a]pirimidina (150 mg) como um sólido. RMN de (CDC13) δ 1,43 (9H, s) , 2,11-2,16 (2H, m) , 3,22-3,35 (6H, m), 4,09 (2H, t, J=7 Hz), 4,69 (1H, 1), 5,14 (2H, 1), 5,69 (1H, 1), 7,17 (1H, s)

Exemplo 18 7β-[(Z)-2-(5-Amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2- (1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-{3-[3-(2-aminoetil)ureido] - 4,5,6,7-tetra-hidro-l-pirazolo[1,5-a]pirimidinio}metil-3-cefeme-4-carboxilato O composto em epigrafe foi obtido a partir de 7β-[ (Z)-2-(5-terc-butoxicarbonilamino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)-acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo e 3-(3—{2—[(terc-butoxicarbonil)amino]etiljureido)-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo [1,5-a]pirimidina do mesmo modo que no Exemplo 17 como um sólido amorfo. 82 RMN de 1H (D20) Ô 1,52 (3H, s), 1,53 (3H, s) , 2, 09- 2, ,21 (2H, m) , 3,13 (2H, t, J= :6 Hz) , 3,24 (1H, d, J= =18 Hz), 3, 35- 3, ,52 (5H, m) , 4,12 -4,15 (2H, m) , 4 ,88 (1H, d, J =16 Hz) , 5 ,13 (1H, d, J=16 Hz) , 5,25 (1H, d, J=5 Hz) , 5,85 (1H, d, J=5 Hz ), 7, ,83 (1H, s)

Preparação 36 A uma suspensão de 1,1'-carbonildiimidazole (973 mg) em cloreto de metileno (10 mL) adicionou-se 0-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]hidroxilamina (1,11 g) sob arrefecimento com gelo e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2 horas. À mistura reaccional adicionou-se N-etildiisopropilamina (1,28 g) e sal de ácido sulfúrico de 4,5-diamino-l-metilpirazole (1,05 g) e, agitou-se a mistura sob refluxo durante 4 horas. Lavou-se a mistura reaccional com solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna sobre sílica gel, eluindo com 10% metanol/clorofórmio

para dar 5-amino-4 - (3—{2—[(terc- butoxicarbonil)amino]etoxijureido) -1- -metilpirazole (255 mg) como um sólido. RMN de XH (DMSO-de) δ 1,38 (9H, s), 3,19-3,20 (2H, m), 3,51 (3H, s), 3,72 (2H, t, J=6 Hz) , 4,86 (2H, 1), 6,95 (1H, 1), 7,06 (1H, s), 8,02 (1H, s 1), 9,15 (1H, s D 83

Exemplo 19 7β-[(Z)-2-(5-Amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-{3-amino-4-[3-(2-aminoetoxi)ureido]-2-metil-l-pirazolio}metil-3-cefeme-4-carboxilato 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de 7β—[(Z)—2 — (5— terc-butoxicarbonilamino-1,2,4-tiadiazol-3- il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)-acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo e 5-amino-4-(3-{2-[(terc-butoxicarbonil)amino]etoxi}-ureido)-1-metilpirazole do mesmo modo que no Exemplo 17 como um sólido amorfo. RMN de XH (D20) δ 1,52 (3H, s) , 1,53 (3H, s) , 3,21 (1H, d, J=18 Hz), 3,33 (2H, t, J=5 Hz), 3,47 (1H, d, J=18 Hz), 3,74 (3H, s), 4,17 (2H, t, J=5 Hz), 4,99 (1H, d, J=15 Hz), 5,17 (1H, d, J=15 Hz), 5,26 (1H, d, J=5 Hz), 5,86 (1H, d, J=5 Hz), 7,93 (1H, s)

Preparação 37 A uma suspensão de 1,1'-carbonildiimidazole (1,95 g) em cloreto de metileno (20 mL) adicionou-se N-(2-aminoetil)carbamato de terc-butilo (1,92 g) sob arrefecimento com gelo e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2 horas. À mistura reaccional adicionou-se N-etildiisopropilamina (2,59 g) e sal de ácido sulfúrico de 7-amino-2,3-di-hidro-lH-imidazo[1,2 —b]pirazole (2,22 g) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 16 horas. À 84 mistura reaccional adicionou-se cloreto de tritilo (9,0 g) e trietilamina (3,0 g) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 24 horas. Lavou-se a mistura reaccional com solução aquosa de ácido citrico a 10%, solução aquosa saturada de cloreto de sódio e solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se ín vacuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna sobre sílica gel, eluindo com 3% de metanol/clorofórmio para dar 7-(3—{2—[(terc- butoxicarbonil)amino]etil}ureido)-2,3-di-hidro-l-tritilimidazo[1,2-b]pirazole (800 mg) como um sólido. RMN de (CDC13) δ 1,43 (9H, s) , 3,19 (4H, 1), 3,69 (1H, s 1), 3, 78-3. 85 (4H, m) , 4,51 (1H, 1), 5,07 (1H, 1), 7,20 (1H, s), 7,26-7,34 (9H, m), 7,46-7,47 (6H, m)

Exemplo 20 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (820 mg) em N, N-dimetilformamida (2,4 mL) adicionou-se N-(trimetilsilil)acetamida (656 mg) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À mistura reaccional adicionou-se 7-(3-(2-[(terc-butoxicarbonil)amino]etil}ureido)-2,3-di-hidro-l-tritilimidazo[1,2—b]pirazole (700 mg) e, agitou-se a mistura completa à temperatura ambiente durante 6 horas. À mistura reaccional resultante adicionou-se acetato de etilo (50 mL) e água (50 mL) . Separou-se a camada aquosa, lavou-se a camada orgânica com solução aquosa de trifluoroacetato de sódio 85 a 10% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de sódio anidro e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado até cerca de 5 mL in vacuo. Verteu-se o concentrado para éter diisopropilico (120 mL) , e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo. A uma solução do sólido resultante em cloreto de metileno (3,0 mL) adicionou-se anisole (1,0 mL) e ácido trifluoroacético (2,0 mL) . Agitou-se a solução resultante à temperatura ambiente durante 4 horas e verteu-se para éter diisopropilico (120 mL) . Recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para dar um produto em bruto (830 mg), o qual foi purificado por HPLC preparativa utilizando uma coluna de ODS. Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 30 mL in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 3 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (Mitsubishi Chemical Corporation) eluindo com 2-propanol aquoso a 30%. Concentrou-se o eluato até cerca de 30 mL in vacuo e liofilizou-se para dar 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]—3—{7—[3-(2-aminoetil)ureido]-2,3-di-hidro-5-(lH-imidazo[1,2— b]pirazolio)}metil-3-cefeme-4-carboxilato (28,5 mg) como um sólido amorfo. RMN de 2H (D20) δ 1,53 ’ (3H, s), 1,54 (3H, , s) , 3 ,14 (2H , t, J=6 Hz) , 3, 29 (1H, d, J=18 Hz), 3,49 (2H, t, J=6 Hz) , 3, 57 (1H, d, J=18 Hz) , 4,16 (2H, t, J=9 Hz), 4 ,31-4, ,45 (2H, m) , 4, 94 (1H, d, J=15 Hz) , 5,02 (1H, r d, J=15 Hz), 5,27 (1H, , d, J= :5 Hz ), 5,85 (1H , d, J=5 Hz), 7, 95 (1H, s) 86

Preparação 38 A uma suspensão de 1,1-carbonildiimidazole (2,0 g) em clorofórmio desidratado (30 mL) adicionou-se uma solução de N-(2-hidroxietil)carbamato de terc-butilo (1,92 g) em clorofórmio desidratado (10 mL) sob arrefecimento com gelo e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. À mistura reaccional adicionou-se N-etildiisopropilamina (2,2 mL) e sal de ácido sulfúrico de 4,5-diamino-l-metilpirazole (2,58 g) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 17,5 horas. À mistura reaccional adicionou-se cloreto de tritilo (3,42 g) e trietilamina (1,25 g) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2 horas. Lavou-se a mistura reaccional com solução aquosa de ácido cítrico a 10%, solução aquosa saturada de cloreto de sódio e solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna sobre sílica gel, eluindo com 5% de metanol/clorofórmio para dar 4-{[2-(terc-butoxicarbonilamino)etoxicarbonil]amino}-5-(tritilamino)-1-metilpirazole (1,91 g) como um sólido. RMN de ΧΗ (CDC13) δ 1,46 (9H, s), 2,89 (3H, s), 3,30-3,36 (2H, m) , 4,03-4 ,07 (2H, m) , 4, ,37 (1H, s 1), 4,75 (1H, 1), 5,42 (1H, D, 7,17-7, 30 (16H, m) 87

Exemplo 21 7β-[(Z)-2-(5-Amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-{3-amino-4-[ (2- aminoetoxicarbonil)amino]-2-metil-l-pirazolio}metil-3-cefeme-4-carboxilato 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de 7β—[ (Z)—2 — (5— amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo e 4-([2-(terc- butoxicarbonilamino)etoxicarbonil]amino)-5-(tritilamino)-1-metilpirazole do mesmo modo que no Exemplo 20 como um sólido amorfo. RMN de 2H (D20) δ 1,53 (3H, s) , 1,54 (3H, s) , 3,18 (1H, d, J=18 Hz), 3, 30-3, 38 (2H, m) , 3,43 (1H, d, J=18 Hz), 3,71 (3H, s), 4,37-4,40 (2H, m), 4,97 (1H, d, J=15 Hz), 5,18 (1H, d, J=15 Hz), 5,24 (1H, d, J=5 Hz), 5,83 (1H, d, J=5 Hz), 7,95 (1H, s)

Preparação 39 A uma solução do sal de ácido sulfúrico de 7-amino-2,3-di-hidro-lH-imidazo[1,2-b]pirazole (1,42 g) e N-etildiisopropilamina (2,73 g) em cloreto de metileno (50 mL) adicionou-se N-[2-(terc-butoxicarbonilamino)-acetoxi]succinimida (1,90 g) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 22 horas. Lavou-se a mistura reaccional com solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio, e secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo oleoso por cromatografia em coluna sobre sílica gel, eluindo com 5% de metanol/clorofórmio para dar 7-[2-(terc- butoxicarbonilamino)acetil]amino-2,3-di-hidro-lH-imidazo[1,2— b]pirazole (1,07 g) como um sólido. RMN de ΧΗ (CDC13 ) δ 1,47 (9H, s), 3,89 (2H, d, J=5,5 Hz) , 3,97 (2H, dt, J=2,7, 7,3 Hz) , 4,18 (2H, t, J=7,3 Hz), 4,55 (1H, 1), 5,22 (1H, 1), 7,16 (1H, s), 7,95 (1H, 1)

Exemplo 22 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-terc-butoxicarbonilamino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (1,0 g) em N, N-dimetilformamida (2,0 mL) adicionou-se iodeto de sódio (181 mg) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À mistura reaccional adicionou-se 7-[2-(terc-butoxicarbonilamino)acetil]amino-2,3-di-hidro-lH-imidazo[1,2—b]pirazole (421 mg). Agitou-se a mistura completa a 30 °C durante 3 horas. À mistura reaccional resultante adicionou-se acetato de etilo (100 mL) e água (50 mL) . Separou-se a camada aquosa, lavou-se a camada orgânica com solução aquosa de trifluoroacetato de sódio a 10% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de sódio anidro e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado até cerca de 5 mL in vacuo. Verteu-se o concentrado para éter diisopropílico (150 mL) , e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo. A uma solução do sólido resultante em cloreto 89 de metileno (3,0 mL) adicionou-se anisole (1,0 mL) e ácido trifluoroacético (2,0 mL). Agitou-se a solução resultante à temperatura ambiente durante 4 horas e verteu-se para éter diisopropilico (150 mL) . Recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para dar um produto em bruto (830 mg), o qual foi purificado por HPLC preparativa utilizando uma coluna de ODS. Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 30 mL in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 3 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (Mitsubishi Chemical Corporation) eluindo com 2-propanol aquoso a 30%. Concentrou-se o eluato até cerca de 30 mL in vacuo e liofilizou-se para dar 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-[7-(2-aminoacetamido)-2,3-di-hidro-5-(lH-imidazo[1,2-b]pirazolio)]metil-3-cefeme-4-carboxilato (20,8 mg) como um sólido amorfo. RMN de XH (D20) δ 1,51 (3H, s) , 1,52 (3H, s) , 3,26 (2H, d, J=18 Hz), 3,54 (2 H, d, J=18 Hz), 3,97 (2H, s) , 4. 16 (2H, t, J=9 Hz), 4,35 (1H, q, J=9 Hz), 4,44 (1H, q, J=9 Hz), 4,97 (2H, d, J=15 Hz), 5,04 (2H, d, J=15 Hz), 5,25 (1H, d, J=4 Hz), 5,84 (1H, d, J=4 Hz), 8,10 (1H, s)

Preparação 40 A uma suspensão de sal de ácido sulfúrico de 4,5-diamino-l-(2-hidroxietil)pirazole (1,20 g) e N-[2-(terc-butoxicarbonilamino)acetoxi]succinimida (1,35 g) em cloreto de metileno (20 mL) adicionou-se N-etildiisopropilamina (2,1 mL) sob arrefecimento com gelo e, agitou-se a mistura à temperatura 90 ambiente durante 17 horas. Lavou-se a mistura reaccional com água (40 mL) , solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio (40 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (40 mL). Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vácuo. Purificou-se o resíduo oleoso por cromatografia em coluna sobre sílica gel, eluindo com 10% de metanol/clorofórmio para dar 5-amino-4-[2-(terc-butoxicarbonilamino)acetil]amino-1-(2-hidroxietil)pirazole (1,20 g) como um sólido. RMN de XH (CDC13) δ 1,46 (9H, s), 3,89-3,90 (4 H, m), 4,00- 4,04 (2H, m), 4,26 (2H, 1), 5,51 (1H, 1), 7,17 (1H, s), 8,06 (1H, 1)

Exemplo 23 7β-[(Z)-2-(5-Amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-[3-amino-4-(2-aminoacetamido)-2- (2-hidroxietil)-1-pirazolio]metil-3-cefeme-4-carboxilato O composto em epigrafe foi obtido a partir de 7β—[(Z)—2 — (5— terc-butoxicarbonilamino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)-acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo e 5-amino-4-[2-(terc-butoxicarbonilamino)acetil]amino-1-(2-hidroxietil)pirazole do mesmo modo que no Exemplo 22 como um sólido amorfo. RMN de XH (d20) δ 1 ,52 (6H, s), 3, 15 (2H, d, J=18 Hz) , 3,48 (2H, d, J=18 Hz) , 3,88 (1H , dt, J=16 Hz), 4,02 (2H, s) , 4,42 (1H, dt, J=16,5 Hz), 5,07 (2 H, d, J=15 Hz), 5,13 (2H, . d, 91 J=15 Hz), 5,27 (1H, d, J=5 Hz), 5,84 (1H, d, J=5 Hz), 8,09 (1H, s)

Preparação 41 A uma solução do sal de ácido sulfúrico de 3-amino-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina (2,96 g) e N-etildiisopropilamina (2,59 g) em cloreto de metileno (70 mL) adicionou-se N-[2-(terc-butoxicarbonilamino)acetoxi]succinimida (2,72 g) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 14 horas. Lavou-se a mistura reaccional com solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vácuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna sobre sílica gel, eluindo com 6% de metanol/clorofórmio para dar 3-[2-(terc- butoxicarbonilamino) acetil] amino-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina (2,4 g) como um sólido. RMN de 2H (CDCls) δ 1,46 (9H, s) , 2,08-2,12 (2H, m) , 3,29-3,32 (2H, m), 3,90 (2H, 1), 4,07 (2H, t, J=6,0 Hz), 5,00 (1H, 1), 5,38 (1H, 1), 7,12 (1H, s), 8,11 (1H, 1) 92

Exemplo 24 7β-[(Z)-2-(5-Amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-[3-(2-aminoacetamido)-4,5,6,7-tetra-hidro-l-pirazolo[1,5-a]pirimidinio]metil-3-cefeme-4-carboxilato 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de 7β-[ (Z)-2-(5-terc-butoxicarbonilamino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)-acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo e 3-[2-(terc-butoxicarbonilamino)acetil]amino-4,5,6,7-tetra- hidropirazolo[1,5-a]pirimidina do mesmo modo que no Exemplo 22 como um sólido amorfo. RMN de 1H (D20) δ 1, 52 (3H, s), 1,53 (3H, s), 2, .05- -2, 25 (2H, m) , 3,21 (2H, d, J= 18 Hz ), 3,45 (2H, d, J- =18 Hz), 3, 30- -3, 45 (2H, m) , 4,00 (2H, S) , 4 , 10-4 ,25 (2H, m) , 4, 92 (2H, d, J= =15 Hz ), 5,17 (2H, d, J=15 Hz) , 5,24 (1H , d, J=5 Hz) , 5,84 (1H, d, J '=5 Hz), 7, 97 (1H, s)

Preparação 42 A uma solução do sal de ácido sulfúrico de 3-amino-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina (4,44 g) e N-etildiisopropilamina (3,88 g) em cloreto de metileno (100 mL) adicionou-se N-[3-(terc-butoxicarbonilamino)propioniloxi]-succinimida (4,29 g) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 6 horas. Lavou-se a mistura reaccional com solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio. Secou-se a 93 camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vácuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna sobre sílica gel, eluindo com 5% de metanol/clorofórmio para dar 3-[3-(terc- butoxicarbonilamino)propionil]amino-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina (3,67 g) como um óleo. RMN de 2H (CDC13) δ 1,43 (2H, t, J=6,0 Hz) , 3,32 (2H, 4,07 (2H, t, J=6,0 Hz) , 5,12 S), 7,97 (1H, 1) (9H, s), 2,08-2,13 (2H, m), 2,52 t, J=5,0 Hz), 3,43-3, 46 (2H, m) , (1H, 1), 5,23 (1H, 1), 7,13 (1H,

Exemplo 25 7β-[(Z)-2-(5-Amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l- metiletoxiimino)acetamido]-3-[3-(3-aminopropionamido)-4,5,6,7-tetra-hidro-l-pirazolo[1,5-a]pirimidinio]metil-3-cefeme-4-carboxilato 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de 7β—[(Z)—2— (5— terc-butoxicarbonilamino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2- (1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)-acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo e 3-[3-(terc-butoxicarbonilamino)propionil]amino-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina do mesmo modo que no Exemplo 22 como um sólido amorfo. RMN de ΧΗ (d20) δ 1,51 (3H, s) , 1,52 (3H, s) , 2,05-2,25 (2H, m) , 2. 85 (2H, t, J=7 Hz), 3,20 (2H, d, J=18 Hz), 3,44 (2H, d, J=18 Hz), 3, 30-3,45 (2H, m) , 3,31 (2H, t, J=7 Hz), 4,05-4,20 94 (2Η, m), 4,91 (2H, d, J=16 Hz), 5,16 (2H, d, J=16 Hz), 5,23 (1H, d, J=5 Hz), 5,84 (1H, d, J=5 Hz), 7,92 (1H, s)

Preparação 43 A uma solução de 5-amino-l-metilpirazole (100 g) em água (700 mL), adicionou-se ácido clorídrico concentrado (86 mL) e nitrito de sódio (63,9 g) em água (200 mL) a uma temperatura inferior a 10 °C. Agitou-se a mistura reaccional a 5 °C durante 30 minutos. Recolheu-se o sólido precipitado por filtração e secou-se para dar 5-amino-l-metil-4-nitrosopirazole (117 g). RMN de 2Η (DMSO-d6) Ò 3,52 e 3. 59 (3H, s) , 7,22 e 8,51 (1H, s), 8,17 e 8,51 (1H, s 1)

Preparação 44 A uma suspensão de 5-amino-l-metil-4-nitrosopirazole (117 g) adicionou-se ácido sulfúrico (91 g) e paládio a 10% sobre carvão (58 g) . Hidrogenou-se a mistura sob pressão de balão durante 10 horas. Filtrou-se a mistura reaccional, e concentrou-se o filtrado in vácuo. Ao concentrado adicionou-se álcool isopropílico (2,3 L) e, agitou-se a mistura durante 1 hora. Recolheu-se o sólido precipitado por filtração e secou-se para dar o sal de ácido sulfúrico de 4,5-diamino-l-metilpirazole (158 g). RMN de ΧΗ (D20) δ 3,74 (3H, s) , 7,80 (1H, s) 95

Preparação 45

Neutralizou-se uma solução de sal de ácido sulfúrico de

4,5-diamino-l-metilpirazole (158 g) em água (1,1 L) até pH 6,9 com solução aquosa de hidróxido de sódio a 4 N e, adicionou-se dioxano (474 mL) a esta solução. À mistura resultante adicionou-se, gota a gota, cloroformato de fenilo (124 g) mantendo o pH da mistura a 6,9 com solução aquosa de hidróxido de sódio a 4 N a uma temperatura inferior a 10 °C. Agitou-se a mistura reaccional durante 1 hora. Recolheu-se o sólido precipitado por filtração e secou-se para dar 5-amino-l-metil-4-fenoxicarbonilaminopirazole (155 g) . RMN de (DMSO-d6) 6 3,52 (3H, s) , 5,00 (2H, s 1), 7,10- 7,50 (6H, m), 8,93 (1H, s 1)

Preparação 46 A uma suspensão de 5-amino-l-metil-4-fenoxicarbonilaminopirazole (153,8 g) em tetra-hidrofurano (1 L) adicionou-se trietilamina (67 g) e cloreto de trifenilmetilo (185 g) à temperatura ambiente. Agitou-se a mistura durante 6,5 horas. À mistura reaccional adicionou-se heptano (2,6 L) e, agitou-se a mistura durante 1 hora. Recolheu-se o sólido precipitado por filtração e lavou-se com heptano-éter diisopropilico (1:1). Suspendeu-se o sólido em bruto em água (3 L) e, agitou-se a suspensão durante 1 hora. Recolheu-se o sólido por filtração e secou-se para dar l-metil-4-fenoxicarbonilamino-5-trifenilmetilaminopirazole (253, 6 g) . 96 RMN de ΧΗ (DMSO-dg) δ 2,74 (3H, s) , 5,57 (1H, s 1), 7,00- 7,50 (21H, m), 8,12 (1H, s 1)

Preparação 47 A uma suspensão de l-metil-4-fenoxicarbonilamino-5-trifenilmetilaminopirazole (253,6 g) em N,N-dimetilformamida (1,5 L) adicionou-se trietilamina (59,5 g) e N-(2-aminoetil)carbamato de terc-butilo (94,2 g) em N,N-dimetilformamida (254 mL) Agitou-se a mistura durante 5 horas e verteu-se para água (10,6 L) . Agitou-se a suspensão durante 1 hora. Recolheu-se o sólido precipitado por filtração e secou-se para dar um produto em bruto. O produto em bruto suspendeu-se em N,N-dimetilformamida e, aqueceu-se a suspensão sob refluxo durante 20 minutos. Arrefeceu-se a suspensão até à temperatura ambiente ao longo de 4 horas. Recolheu-se o sólido por filtração, lavou-se com acetonitrilo e secou-se para dar 4-[N-(2-terc-butoxicarbonilaminoetil)carbamoilamino]-l-metil-5-trifenilmetilaminopirazole (261,2 g). RMN de ΧΗ (DMSO-de) δ 2,69 (3H, s) , 2,90-3, 05 (4H, m) , 5,69 (1H, s 1), 5,91-6,01 (1H, m), 6,74-6,81 (1H, m), 6,87 (1H, s 1), 7,00 (1H, s), 7,10-7,30 (15H, m)

Preparação 48 A uma solução de ácido (Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acético (319 g) em N,N-dimetilacetamida (1,5 L) adicionou-se potássio carbonato 97 (113 g) e cloreto de metanossulfonilo (126 mL) sob arrefecimento com gelo. Agitou-se a mistura a 10 °C durante 2 horas. Adicionou-se a mistura reaccional a uma mistura de acetato de etilo e água. Lavou-se a camada orgânica com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio para dar uma solução de ácido activado. Por outro lado, ajustou-se uma suspensão de cloridrato de 7p-amino-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de 4-metoxibenzilo (300 g) numa mistura de água (1 L) e acetato de etilo (1 L) to pH 6 com trietilamina sob arrefecimento com gelo. À mistura resultante adicionou-se gota a gota a solução de ácido activado obtido acima a 10 °C sob agitação. Prosseguiu-se a agitação a 5-10 °C durante 1,5 horas mantendo o pH da mistura reaccional a 6 com trietilamina. Separou-se a camada orgânica, lavou-se com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, e evaporou-se in vácuo. Verteu-se o concentrado para éter diisopropilico (15 L), e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se para dar 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l- metiletoxiimino)acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de 4-metoxibenzilo (495, 7 g) . RMN de XH (DMSO-d6) δ 1,39 (9H, s) , 1,44 (6H, s), 3,45-3, 70 (2H, m) , 3,76 (3H, s), 4,46 e 4,54 (1H, ABq, J=16 Hz), 5,10-5,28 (2H+1H, m), 5,90 (1H, dd, J=4,9, 8,5 Hz), 6,94 (2H, d, J=8,7 Hz), 7,36 (2H, d, J=8,7 Hz), 8,18 (2H, s 1), 9,52 (1H, d, J=8,5 Hz)

Exemplo 26 A uma solução de 7β-[(z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de 4-metoxibenzilo (150 g) em 98 Ν,Ν-dimetilformamida (400 mL) , adicionou-se 1,3-bis(trimetilsilil)ureia (225 g) e agitou-se a mistura durante 30 minutos. Adicionou-se iodeto de potássio (51,2 g) a esta solução e, agitou-se a mistura durante 30 minutos.

Dissolveu-se 4-[N-(2-terc-butoxicarbonilaminoetil)- carbamoilamino]-l-metil-5-trifenilmetilaminopirazole (147 g) em Ν,Ν-dimetilformamida (650 mL) a 78 °C e arrefeceu-se a solução até 45 °C. Adicionou-se a solução à solução de 7β—[ (Z)—2— (5— amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato obtida acima. Agitou-se a mistura reaccional a 35 °C durante 18,5 horas e verteu-se para uma mistura de acetato de etilo (2 L) , água (1,8 L) e solução aquosa de cloreto de sódio a 20% (150 mL). Lavou-se a camada orgânica com uma mistura de solução aquosa de tiossulfato de sódio a 10% (375 mL) e solução aquosa de cloreto de sódio a 20% (375 mL) . Lavou-se a camada orgânica sucessivamente três vezes com solução aquosa de trifluoroacetato de sódio a 10% (750 mL x 3) e solução aquosa de cloreto de sódio a 20% (750 mL) . Concentrou-se a camada orgânica in vacuo, e filtrou-se o 4-[N-(2-terc-butoxicarbonilaminoetil)- carbamoilamino]-l-metil-5-trifenilmetilaminopirazole precipitado. Concentrou-se adicionalmente o filtrado in vacuo até um volume de aproximadamente 600 mL. Adicionou-se esta solução a éter diisopropilico e agitou-se a suspensão durante 1 hora. Recolheu-se o sólido resultante por filtração e secou-se. Dissolveu-se o sólido em diclorometano (669 mL) . À solução adicionou-se anisole (223 mL) e ácido trifluoroacético (669 mL) . Agitou-se a mistura reaccional durante 4 horas e verteu-se para éter diisopropilico. Recolheu-se o sólido resultante por filtração e secou-se. Suspendeu-se este sólido em água e, 99 ajustou-se o pH da suspensão até 7 com solução aquosa de amoníaco a uma temperatura inferior a 10 °C. Eliminou-se o precipitado resultante por filtração. Acidificou-se o filtrado até pH 1 com ácido clorídrico concentrado a uma temperatura inferior a 10 °C e eliminou-se o precipitado resultante por filtração. Cromatografou-se o filtrado sobre Diaion® HP-20 (11 L) eluindo com 2-propanol aquoso a 20%. Concentrou-se o eluato até cerca de 3,5 L in vácuo e, adicionou-se ácido sulfúrico a 2 M (51 mL) . Liofilizou-se a mistura para dar um produto em bruto (72,2 g).

Purificou-se o produto em bruto (3 g) por HPLC preparativa utilizando uma coluna ODS. Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado in vácuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 1 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (400 mL) eluindo com 2-propanol aquoso a 20%.

Concentrou-se o eluato até cerca de 73 mL in vacuo e, adicionou- se ácido sulfúrico a 2 M (1,5 mL). Evaporou-se novamente a mistura até um volume de, aproximadamente, 12,5 mL e, adicionou-se água (6 mL). Após adição de núcleos de cristalização (10 mg), que resultaram na precipitação de um sólido branco, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. Agitou-se adicionalmente a mistura a 5 °C durante 13 horas. Adicionou-se 2-propanol (20 mL) a 5 °C ao longo de 20 minutos e, agitou-se a suspensão à temperatura ambiente durante 4 horas. Adicionou-se 2-propanol (20 mL) ao longo de 30 minutos e, agitou-se a suspensão à temperatura ambiente durante 3 horas. Recolheu-se os cristais precipitados por filtração e secou-se para dar hidrogenossulfato do ácido 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-{3-amino-4-[N-(2-aminoetil)carbamoilamino]-2-metil-l-pirazolio)metil-3-cefeme-4-carboxílico (1,51 g) como cristais. 100 RMN de 2Η (D20) δ 1,61 (6H, s) , 3,10-3,55 (6H, m), 3,71 (3H, s), 5,02 e 5,23 (2H, ABq, J=16,7 Hz), 5,25 (1H, d, J=4,9 Hz), 5,87 (1H, d, J=4,9 Hz), 7,91 (1H, s)

Preparação 49

Agitou-se, a 0 °C durante 10 minutos, uma suspensão de sal de ácido sulfúrico de 4,5-diamino-l-metilpirazole (20 g) em trietilamina (29,2 mL) . Agitou-se, a 40 °C durante 30 minutos, uma mistura de anidrido acético (9,87 mL) e ácido fórmico (7,96 mL) , arrefeceu-se até 0 °C e, adicionou-se gota a gota à solução anterior a 0 °C. Agitou-se a mistura completa a 0 °C durante 2 horas. À mistura adicionou-se solução aquosa saturada de cloreto de sódio, e extraiu-se a mistura completa com tetra-hidrofurano. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio e evaporou-se sob pressão reduzida para dar N-(5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)formamida em bruto, a qual foi utilizada no passo seguinte sem qualquer purificação adicional.

Preparação 50

Dissolveu-se o produto em bruto de N-(5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)formamida (13,33 g) em N,N-dimetilformamida (130 mL) . À solução adicionou-se cloreto de tritilo (29,2 g), trietilamina (66,3 mL) e 4-dimetilaminopiridina (465 mg) e, agitou-se a mistura a 60 °C durante 5 horas. À mistura reaccional adicionou-se água e, extraiu-se a mistura completa com acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio e, secou-se sobre sulfato de magnésio. Evaporou-se o solvente sob pressão reduzida 101 para dar um sólido branco. Triturou-se o sólido com acetato de etilo/éter diisopropílico (1:1) para dar N-[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]formamida (19,18 g). 0 espectro de RMN deste composto indica a existência do seu rotâmero. RMN de (DMSO-d6) δ 2,76 e 2,92 (3H, s) , 5,56 e 5,84 (1H, s), 7,0-7,4 (16H, m), 7,66 (1H, d, J=l,7 Hz), 8,3-8,4 (1H, m) ESI-MS: m/z=405,2(M+Na)+

Preparação 51 A uma solução de N-[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]formamida (3,825 g) em N,N-dimetilformamida (66 mL) adicionou-se hidreto de sódio (264 mg, suspensão em óleo a 60%) sob uma atmosfera de azoto a 0 °C, sob agitação. Agitou-se a mistura a 0 °C durante 15 minutos. À mistura adicionou-se N-(3-bromopropil)carbamato de terc-butilo (2,62 g) em N,N-dimetilformamida (10 mL) e iodeto de sódio (1,65 g) . Aqueceu-se a mistura até à temperatura ambiente e agitou-se durante 2 horas. Adicionou-se solução aquosa de hidrogenossulfato de potássio a 10% (5 mL) , e extraiu-se a mistura com acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, e secou-se sobre sulfato de magnésio. Evaporou-se o solvente sob pressão reduzida, e cromatografou-se o resíduo sobre sílica gel, eluindo com cloreto de metileno/acetato de etilo (4:1) para dar 3-{N-formil-N-[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4- il]aminolpropilcarbamato de terc-butilo (2,714 g) . O espectro de RMN deste composto indica a existência do seu rotâmero. 102 RMN de 2H (DMSO-dg) δ 1,37 e 1:39 (9H, s), 2,6-2,9 (6H, m) , 2,89 (3H, s), 5,34 e 6,01 (1H, s) , 6,6-6,9 (1H, m) , 7,0-7,4 (15H, m), 7,5-7,6 (1H, m), 7,95 (1H, s) ESI-MS: m/z=562,3(M+Na)+

Exemplo 27 7β-[(Z)-2-(5-Amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-{3-amino-4-[N-(3-aminopropil)-N-formilamino]-2-metil-l-pirazolio}metil-3-cefeme-4-carboxilato O composto em epígrafe foi obtido a partir de 7β-[(Z)-2- (5-amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo e 3-{N-formil-N-[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]aminojpropilcarbamato de terc-butilo do mesmo modo que no Exemplo 1. O espectro de RMN deste composto indica a existência do seu rotâmero. RMN de XH (D20) δ 1,53 (6H, s) , 1,7-2,1 (2H, m) , 2,9-3,9 (9H, m), 4,97 e 5,20 (2H, ABq, J=15,2 Hz), 5,26 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,84 (1H, d, J=4,8 Hz), 8,0-8,3 (2H, m)

Exemplo 28 A uma suspensão de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)-acetamido]-3-{3-amino-4-[N-(3-aminopropil)-N-formilamino]-2-metil-l-pirazolio}metil-3-cefeme- 103 4-carboxilato (140 mg) em metanol (2,6 mL) adicionou-se ácido clorídrico concentrado (0,176 mL) à temperatura ambiente e, agitou-se a mistura durante 6,5 horas. À mistura reaccional adicionou-se hidrogenocarbonato de sódio (177 mg), e purificou-se a mistura por HPLC preparativa (coluna ODS, acetonitrilo/tampão de fosfato (pH 7)=5:95). Evaporou-se o eluato contendo um produto desejado para eliminar o acetonitrilo, acidificou-se com ácido clorídrico diluído e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 eluindo com 2-propanol aquoso a 20%. Concentrou-se o eluato sob pressão reduzida e liofilizou-se para dar 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-(3-amino-4-[(3-aminopropil)amino]-2-metil-l-pirazolio)metil-3-cefeme-4-carboxilato (39 mg). RMN de XH (D20) δ 1,52-1,54 (6H, m), 1,95 (2H, tt, J=7,3 Hz, 7,3 Hz), 3,0-3,2 (4H, m) , 3. 16 e 3,38 (2H, ABq, J=17,7 Hz), 3,68 (3H, s), 4,89 e 5,11 (2H, ABq, J=15,6 Hz), 5,22 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,83 (1H, d, J=4,8 Hz), 7,59 (1H, s) ESI-MS: m/z=636,3(M-H)'

Preparação 52 1-{N-Formil-N-[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}etilcarbamato de terc-butilo O composto em epígrafe foi obtido a partir de N-[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]formamida e 104 N-(2-bromoetil)carbamato de terc-butilo, do mesmo modo que na Preparação 51. IV (KBr) 1709, 1670, 1170, 704 cm'1 RMN de 2H (DMSO-d6) δ 1,35 e 1,36 (9H, s) , 2,65 e 2,75 (3H, s) , 2,73-2,90 (4H, m) , 5,45 e 6,02 (1H, s) , 6,78 e 6,88 (1H, tipo t), 7,05-7,30 (15H, m), 7,31 e 7,57 (1H, s) ESI-MS: m/z=426, 3 (M+H+) , 548,3 (M+Na+)

Exemplo 29 7β-[(Z)-2-(5-Amino-l, 2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-{3-amino-4-[N-(2-aminoetil)-N-formilamino]-2-metil-l-pirazolio}metil-3-cefeme-4-carboxilato O composto em epígrafe foi obtido a partir de 7β—[(Z)—2— (5— amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo e 2-{N-formil-N-[l-metil-5-(tritilamino)-1H-pirazol-4-il]aminojetilcarbamato de terc-butilo do mesmo modo que no Exemplo 1. IV (KBr) 1770, 1675, 1653, 1597 cm'1 RMN de 2H (DMSO-de) δ 1,53 (6H, s) , 3,12-3,78 (4H, m) , 3,77 e 3,78 (3H, s), 3,86-3,96 (2H, m), 5,00 e 5,19 (2H, ABq, J=15,2 Hz), 5,28 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,86 (1H, d, J=4,8 Hz), 8,15 e 8,18 (1H, s), 8,19 e 8,33 (1H, s) ESI-MS: m/z=652,2 (M+H+) 105

Exemplo 30 7β-[(Z)-2-(5-Amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-{3-amino-4-[(2-aminoetil)amino]-2-metil-l-pirazolio}metil-3-cefeme-4-carboxilato O composto em epígrafe foi obtido a partir de 7β—[(Z)—2—(5— amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-{3-amino-4-[N-(2-aminoetil)-N-formilamino]-2-metil-l-pirazolio}metil-3-cefeme-4-carboxilato do mesmo modo que no Exemplo 28. IV (KBr) 1770, 1651, 1593 cm'1 RMN de XH (DMSO-de) δ 1,53 (3H, s) , 1,59 (3H, s) , 3,13-3,26 (4H, m) , 3,26 e 3,39 (2H, ABq, J=17,8 Hz), 3,68 (3H, s) , 4,87 e 5,11 (2H, ABq, J=15,7 Hz), 5,25 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,84 (1H, d, J=4,8 Hz), 7,63 (1H, s) ESI-MS: m/z=622,2(M-H-)

Preparação 53 A uma suspensão de sulfato de l-metil-lH-pirazole-4,5-diamina (86 g) em tetra-hidrofurano (1,3 L) adicionou-se trietilamina (117 mL) e, adicionou-se, em seguida, ácido (2S)-4-[(terc-butoxicarbonil)amino]-2-hidroxibutanoic (82,5 g) à mistura. À mistura adicionou-se 1-hidroxibenzotriazole (58,3 g) e cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (82,7 g) sob arrefecimento com gelo. Agitou-se a mistura 106 reaccional à temperatura ambiente durante 8 horas. À mistura reaccional adicionou-se acetato de etilo (1,3 L), solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio e cloreto de sódio e, agitou-se a mistura durante 30 minutos. Separou-se a camada orgânica, e extraiu-se seis vezes a camada aquosa com acetato de etilo (1,0 L) . Secou-se o extracto sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vácuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna sobre sílica gel, eluindo com acetato de etilo/tetra-hidrofurano (1/1) para dar {(3S)—4— [(5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)amino]-3-hidroxi-4-oxobutil}carbamato de terc-butilo (69,5 g). RMN de (CDC13) δ 1 ,43 (9H, s) , 1—1 1 <0 I-1 ,9 (1H, m) , 1,9-2,2 (1H, m) , 3,1-3,3 (1H, m), 3,3-3,5 (1H, m) , 3,65 (3H, s), 4,20 (1H, dd, J=3, 6, 6,6 Hz) , 4,7-5,3 (4H, m) , 7,24 (1H, s) , 8,58 (1H, s) [a] 20d (c=1,05, CHC13) =-27,06°

Preparação 54 A uma solução de {(3S)-4-[(5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)amino]-3-hidroxi-4-oxobutil}carbamato de terc-butilo (68,51 g) em N,N-dimetilformamida (350 mL) adicionou-se clorotrifenilmetano (67 g) . À mistura adicionou-se, gota a gota, trietilamina (67 mL) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 12 horas. Dissolveu-se a mistura reaccional em diclorometano (2 L) . Lavou-se a solução sucessivamente com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Secou-se o extracto sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e 107 concentrou-se in vacuo. Triturou-se o resíduo com acetonitrilo e secou-se in vacuo para dar ((3S)-3-hidroxi-4-{[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-4-oxobutil)carbamato de terc-butilo (64 g). RMN de (CDC13) δ 1,46 (9H, s) , 1,3-1,6 (1H, m) , 1,8-2,1 (1H, m), 2,95 (3H, s) , 2,9-3,2 (1H, m) , 3,3-3,6 (1H, m) , 3,95 (1H, m) , 4,53 (1H, d, J=4,5 Hz), 4,74 (1H, s) , 4,92 (1H, s 1) , 7,1-7,3 (15H, m), 7,39 (1H, s), 7,73 (1H, s) ESI-MS: m/z=638,2 (M+H+Na+) [a] 20d (c=1,025, CHC13) =-36,5°

Exemplo 31 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de 4-metoxibenzilo (130 g) em N,N-dimetilformamida (400 mL) , adicionou-se 1,3-bis(trimetilsilil)ureia (195 g) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À solução adicionou-se iodeto de potássio (44,4 g) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À mistura reaccional adicionou-se ((3S)-3-hidroxi-4-{[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-4-oxobutil)carbamato de terc-butilo (106 g) e, agitou-se a mistura completa a 35 °C durante 22 horas. À mistura reaccional adicionou-se acetato de etilo (1,7 L), lavou-se a mistura sucessivamente com água (1,6 L), solução aquosa de trifluoroacetato de sódio a 10% (650 mL x 3) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (650 mL), secou-se sobre sulfato de 108 magnésio e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado até cerca de 1 L in vacuo. Verteu-se o concentrado para éter diisopropilico (3 L), e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo. A uma solução do sólido em cloreto de metileno (660 mL) adicionou-se anisole (220 mL) e ácido trifluoroacético (660 mL).

Agitou-se a solução resultante à temperatura ambiente durante 4 horas e verteu-se para éter diisopropilico (7 L) . Recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para dar um produto em bruto (156,2 g) . Dissolveu-se o produto em bruto em água (3,5 L). Ajustou-se a solução até cerca de pH 3 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (Mitsubishi Chemical Corporation) eluindo com 2-propanol aquoso a 20%. Concentrou-se o eluato até cerca de 1,5 L in vacuo e, adicionou-se solução aquosa de ácido sulfúrico a 2 M (33,18 mL). Liofilizou-se a mistura. Dissolveu-se o produto liofilizado (40 g) em tampão de fosfato (pH 7) e purificou-se por HPLC preparativa utilizando uma coluna ODS. Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 30 mL in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 3 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (Mitsubishi Chemical Corporation) eluindo com 2-propanol aquoso a 10%. Concentrou-se o eluato até cerca de 1 L in vacuo e, adicionou-se solução aquosa de ácido sulfúrico a 2 M (13,59 mL). Liofilizou-se a solução resultante para dar hidrogenossulfato do ácido 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-{3-amino-4-[((2S)-4-amino-2-hidroxibutanoil)amino]-2-metil-l-pirazolio}metil-3-cefeme-4-carboxílico (20,82 g) como um sólido amorfo. 109 d, RMN de 2Η (D20) δ 1,61 (6H, s) , 1,9-2,4 (2H, m) , 3,20 (1H, J=17,6 Hz), 3,0-3,3 (2H, m) , 3,45 (1H, d, J=17,6 Hz), 3,74 (3H, s), 4,47 (1H, dd, J=4, 6,3 Hz), 5,06 (1H, d, J=15,7 Hz), 5,25 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,28 (1H, d, J=15,7 Hz), 5,87 (1H, d, J=4,8 Hz), 8,07 (1H, s)

Preparação 55 A uma suspensão de l-metil-N5-tritil-lH-pirazole-4,5-diamina (1,60 g) em etanol (50 mL) adicionou-se trietilamina (0,627 mL) e esquarato de dietilo (0,858 mL) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 22 horas. À mistura reaccional adicionou-se acetato de etilo (200 mL) e hexano (100 mL), lavou-se a solução sucessivamente com água, solução aquosa de ácido cítrico a 5% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vácuo. Lavou-se o resíduo cristalino com éter dietílico e secou-se in vacuo para dar 3-etoxi-4-{[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-3-ciclobuteno-1,2-diona (1,45 g) como um sólido. RMN de 1E (CDCla) Ô 1,42 (3H, 1), 2,99 (3H, s) , 4,41 (1H, s 1), 4,69 (2H, q, J=7,2 Hz), 6,40 (1H, 1), 7,13-7,35 (16H, m)

Preparação 56 A uma suspensão de 2-aminoetilcarbamato de terc-butilo (288 mg) e 3-etoxi-4-{[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-3-ciclobuteno-l, 2-diona (718 mg) em etanol (20 mL) 110 adicionou-se trietilamina (0,209 mL) e, agitou-se a mistura sob refluxo durante 4 horas. À mistura reaccional adicionou-se éter dietilico e hexano. Recolheu-se o precipitado cristalino por filtração e secou-se in vácuo para dar 2-[(2—{[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-3,4-dioxociclobut-l-en-l-il)amino]etilcarbamato de terc-butilo (830 mg) como um sólido. RMN de 2Η (CDC13) δ 1,40 (9H, s) , 3, 07-3,28 (5H, m) , 3,38-3,67 (2H, m) , 4,53-4,84 (1H, 1), 4,84 (1H, 1), 7,15-7,22 (6H, m) , 7,23 (1H, s), 7,22-7,34 (9H, m)

Exemplo 32 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (901 mg) em N, N-dimetilformamida (1,8 mL) adicionou-se N-(trimetilsilil)acetamida (720 mg) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. À mistura reaccional adicionou-se uma solução de 2-[(2-{[l-metil-5-(tritilamino)-1H-pirazol-4-il]amino}-3,4-dioxociclobut-l-en-l- il)amino]etilcarbamato de terc-butilo (682 mg) em N,N-dimetilformamida (6,3 mL) e, agitou-se a mistura completa a 35-40 °C durante 7 horas. À mistura reaccional resultante adicionou-se acetato de etilo, e eliminou-se o precipitado por filtração. Lavou-se o filtrado sucessivamente com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de sódio anidro e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado até cerca de 5 mL in vacuo. Verteu-se o concentrado para éter diisopropílico (80 mL), e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e 111 secou-se in vácuo. A uma solução do sólido resultante em cloreto de metileno (2,6 mL) adicionou-se anisole (0,88 mL) e ácido trifluoroacético (2,6 mL). Agitou-se a solução resultante à temperatura ambiente durante 3 horas e verteu-se para éter diisopropílico (80 mL) . Recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vácuo para dar um produto em bruto (580 mg) , o qual foi purificado por HPLC preparativa utilizando uma coluna de ODS. Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 30 mL in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 3 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (Mitsubishi Chemical

Corporation) eluindo com 2-propanol aquoso a 30%. Concentrou-se o eluato até cerca de 10 mL in vacuo e liofilizou-se para dar 3-{[3-amino-4-({2-[(2-aminoetil)amino]-3,4-dioxo-l-ciclobuten-l-il}amino)-2-metil-l-pirazolio]metil} — 7β—[(Z)-2-(5-amino-l, 2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato (22 mg) como um sólido amorfo. RMN de XH (D20) δ 1,53 (3H, s) , 1,54 (3H, s) , 3,26-3, 36 (1H, m) , 3,27 (2H, t, J=5,7 Hz), 3,58-3, 69 (1H, m) , 3,74 (3H, s) , 3,86-4,03 (2H, m), 4,93 (1H, d, J=14,5 Hz), 5,10 (1H, d, J=14,5 Hz), 5,29 (1H, d, J=4,3 Hz), 5,83 (1H, d, J=4,3 Hz), 7,99 (1H, s)

Preparação 57 A uma suspensão de 3-aminopropilcarbamato de terc-butilo (366 mg) e 3-etoxi-4-{[l-metil-5-(tritilamino)-lHpirazol-4-il]amino}-3-ciclobuteno-l,2-diona (670 mg) em etanol (30 mL) adicionou-se trietilamina (0,195 mL) e, agitou-se a mistura sob 112 refluxo durante 3 horas. À mistura reaccional adicionou-se éter dietilico (40 mL) e hexano (10 mL) . Recolheu-se o precipitado cristalino por filtração e secou-se in vacuo para dar {3—[ (2— 1[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-3,4-dioxo-l-ciclobuten-l-il)amino]propil}carbamato de terc-butilo (788 mg) como um sólido. RMN de XH (CDC13) δ 1,43 (9H, s), 1,67 (2H, quinteto, J=5,5 Hz), 3,15 (2H, q, J=5,5 Hz), 3,17 (3H, s) , 3,60 (2H, q, J=5,5 Hz), 4,82 (1H, s 1), 4,86 (1H, t, J=5,5 Hz), 5,44 (1H, 1) , 5,86 (1H, 1), 7,13-7,33 (15H, m) , 7,17 (1H, s)

Exemplo 33 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (819 mg) em N, N_dimetilformamida (1,6 mL) adicionou-se N-(trimetilsilil)acetamida (656 mg) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 40 minutos. À mistura reaccional adicionou-se uma solução de {3-[(2 — {[l-metil-5-(tritilamino)-1H-pirazol-4-il]amino}-3,4-dioxo-l-ciclobuten-l- il)amino]propil}carbamato de terc-butilo (637 mg) em N,N-dimetilformamida (3,2 mL) e, agitou-se a mistura completa a 35-40 °C durante 3,5 horas. À mistura reaccional resultante adicionou-se acetato de etilo (60 mL) e eliminou-se o precipitado por filtração. Lavou-se o filtrado sucessivamente com água (50 mL x 2) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL), secou-se sobre sulfato de sódio anidro e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado até cerca de 8 mL in vacuo. Verteu- 113 se o concentrado para éter diisopropílico (80 mL), e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo. A uma solução do sólido resultante em cloreto de metileno (2,4 mL) adicionou-se anisole (0,80 mL) e ácido trifluoroacético (1,6 mL) . Agitou-se a solução resultante à temperatura ambiente durante 3 horas e verteu-se para éter diisopropílico (80 mL) . Recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para dar um produto em bruto (565 mg), o qual foi purificado por HPLC preparativa utilizando uma coluna ODS eluindo com uma mistura de acetonitrilo e tampão de fosfato (pH 5,5). Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 20 mL in vacuo. Dessalinizou-se o concentrado por HPLC preparativa utilizando uma coluna ODS, e concentrou-se a fracção eluída com 8% de acetonitrilo/ácido clorídrico a 0,01 M até cerca de 10 mL in vacuo e liofilizou-se para dar tricloridrato de 3-{[3-amino-4-({2-[(3-aminopropil)amino]-3,4-dioxo-l-ciclobuten-l-il}amino)-2-metil-l-pirazolio]metil}-7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato (34 mg) como um sólido amorfo. RMN de XH (D20) δ 1,62 (6H, s), 2,02 (2H, quinteto, J=7,3 Hz), 3,09 (2H, t, J=7,3 Hz), 3,32 (1H, d, J=17,5 Hz), 3, 54-3, 65 (1H, m) , 3,67-3, 78 (2H, m) , 3,75 (3H, s) , 4,93-5,23 (2H, m) , 5,30 (1H, d, J=4,5 Hz), 5,86 (1H, d, J=4,5 Hz), 7,99 (1H, s) 114

Preparação 58 A uma solução de 1,1'-(1,2-dioxo-l,2-etanodiil)bis-lH-imidazole (761 mg) em N,N-dimetilformamida (8 mL) adicionou-se l-metil-N5-tritil-lH-pirazole-4,5-diamina (709 mg) sob arrefecimento com gelo e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À mistura reaccional adicionou-se uma solução de 2-aminoetilcarbamato de terc-butilo (1,28 g) em N,N-dimetilformamida (2 mL) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 27 horas. À mistura reaccional adicionou-se acetato de etilo (50 mL). Depois de se ter eliminado o precipitado por filtração, lavou-se o filtrado sucessivamente com água, solução aquosa de ácido cítrico a 5% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vácuo. Lavou-se o resíduo cristalino com um solvente misto de éter dietílico e acetato de etilo e secou-se in vacuo para dar {2 —[(2 —{[1-meti1-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-2-oxoacetil)amino]etil}carbamato de terc-butilo (823 mg) como um sólido. RMN de XH (CDC13) δ 1,43 (9H, s) , 2,97 (3H, s) , 3,31 (2H, q, J=5,5 Hz), 3,43 (2H, q, J=5,5 Hz), 4,53 (1H, s), 4,84 (1H, s 1), 7,10-7,30 (15H, m), 7,47 (1H, s), 7,67 (1H, s 1), 8,20 (1H, s 1)

Exemplo 34 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de 4-metoxibenzilo (618 mg) em 115 N,N-dimetilformamida (1,5 mL) adicionou-se N-(trimetilsilil)acetamida (656 mg) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 40 minutos. À solução adicionou-se iodeto de potássio (232 mg) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 35 minutos. À mistura reaccional adicionou-se uma solução de {2-[ (2-{[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-2-oxoacetil)amino]etil}carbamato de terc-butilo (626 mg) em N,N-dimetilformamida (3 mL) e, agitou-se a mistura completa a 35-40 °C durante 24 horas. À mistura reaccional resultante adicionou-se acetato de etilo (50 mL) , lavou-se a solução sucessivamente com água (50 mL x 2), solução aquosa de trifluoroacetato de sódio a 10% (50 mL x 2) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , secou-se sobre sulfato de sódio anidro e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado até cerca de 10 mL in vacuo. Verteu-se o concentrado para éter diisopropilico (60 mL) , e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo. A uma solução do sólido em cloreto de metileno (2,9 mL) adicionou-se anisole (0,95 mL) e ácido trifluoroacético (2,9 mL). Agitou-se a solução resultante à temperatura ambiente durante 4 horas e verteu-se para éter diisopropilico (60 mL) . Recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para dar um produto em bruto (770 mg), o qual foi purificado por HPLC preparativa utilizando uma coluna de ODS. Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 30 mL in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 3 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (Mitsubishi Chemical Corporation) eluindo com 2-propanol aquoso a 30%. Concentrou-se o eluato até cerca de 10 mL in vacuo e liofilizou-se para dar 3-{[3-amino-4-({2-[(2-aminoetil)amino]-2-oxoacetil}amino)-2-metil-l-pirazolio]metil}-7β-[(Z)-2-(5-amino-l, 2,4-tiadiazol-3- 116 il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato (31 mg) como um sólido amorfo. RMN de XH (D20) δ 1,52 (3H, s), 1,53 (3H, s), 3,20 (1H, d, J=18,0 Hz), 3,24 (2H, t, J=6,0 Hz), 3,45 (1H, d, J=18,0 Hz), 3,66 (2H, t, J=6,0 Hz), 3,75 (3H, s) , 5,02 (1H, d, J=15,5 Hz), 5,21 (1H, d, J=15,5 Hz), 5,25 (1H, d, J=5,0 Hz), 5,85 (1H, d, J=5,0 Hz), 8,14 (1H, s)

Preparação 59 A uma suspensão de [l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]carbamato de fenilo (711 mg) e sal de ácido acético de 3-azetidinilcarbamato de terc-butilo (418 mg) em cloreto de metileno (8 mL) adicionou-se N-etildiisopropilamina (0,62 mL) e, agitou-se a mistura sob refluxo durante 16 horas. À mistura reaccional adicionou-se cloreto de metileno, lavou-se a solução sucessivamente com solução aquosa de ácido cítrico a 10%, solução aquosa de hidróxido de sódio a 10% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vácuo. Triturou-se o resíduo com um solvente misto de acetato de etilo e hexano para dar [1-({[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}carbonil)-3-azetidinil]carbamato de terc-butilo (735 mg) como um sólido. RMN de 2H (CDC13) δ 1,47 (9H, s), 2,92 (3H, s) , 3,56 (2 H, dd, J=7,5, 5, 0 Hz), 4, 02 (2 H, dd, J=7,5, 7,5 Hz) i, 4,42 ( 1H, S D, m) , 4,71 (1H, s), 4,74 7,25-7,32 (9H, m) (1H, s; >, 4, 94 (1H, s 1), 7,18-7,21 (7H, 117

Exemplo 35 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (819 mg) em N,N-dimetilformamida (2,4 mL) adicionou-se N-(trimetilsilil)-acetamida (655 mg) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À mistura reaccional adicionou-se uma solução de [1-({[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4- il]amino}carbonil)-3-azetidinil]carbamato de terc-butilo (553 mg) em N,N-dimetilformamida (3 mL) e, agitou-se a mistura completa à temperatura ambiente durante 3 horas e, agitou-se, em seguida, a 50 °C durante 1 hora. À mistura reaccional resultante adicionou-se acetato de etilo (50 mL) e água (50 mL) . Separou-se a camada aquosa, lavou-se a camada orgânica com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado até cerca de 5 mL in vacuo. Verteu-se o concentrado para éter diisopropilico (80 mL), e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo. A uma solução do sólido resultante em cloreto de metileno (2,1 mL) adicionou-se anisole (0,7 mL) e ácido trifluoroacético (2,1 mL) . Agitou-se a solução resultante à temperatura ambiente durante 4,5 horas e verteu-se para éter diisopropilico (80 mL) . Recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para dar um produto em bruto (521 mg), o qual foi purificado por HPLC preparativa utilizando uma coluna de ODS eluindo com uma mistura de acetonitrilo e tampão de fosfato (pH 5,5). Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 20 mL in vacuo. Dessalinizou-se o concentrado por HPLC preparativa utilizando uma coluna ODS, e concentrou-se a fracção eluida com 7% de acetonitrilo/ácido clorídrico a 0,01 M até cerca de 10 mL in 118 vacuo e liofilizou-se para dar tricloridrato de 3-[(3-amino-4-{[(3-amino-l-azetidinil)carbonil]amino)-2-metil-l-pirazolio)metil]-7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato (22 mg) como um sólido amorfo. RMN de XH (D20) δ 1, 62 (3H t s) , 1,63 (3H, s), 3,25 (1H , d, J= =17 ,9 Hz), 3,50 (1H, d, J=17,9 Hz) , 3,72 (3H, s), 4,14 (2H, dd, J= =9, 6, 4,4 Hz), 4,25 (1H, tt, J=7 ,8, 4,6 Hz) , 4 ,46 (2H, dd, J= = 9, 6, 7,8 Hz) , 5,08 (1H, d, J=15,6 Hz), 5, 24 (1H, d, J= =15 ,6 Hz), 5,27 (1H, d, J=4,6 Hz) , 5,88 (1H, d, J= 4,6 Hz) , 7,91 (1H, s)

Preparação 60 A uma suspensão de [l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-iljcarbamato de fenilo (2,18 g) e 3-amino-l-azetidinecarboxilato de terc-butilo (793 mg) em cloreto de metileno (20 mL) adicionou-se N-etildiisopropilamina (1,07 mL) e, agitou-se a mistura sob refluxo durante 40 horas. À mistura reaccional adicionou-se cloreto de metileno, lavou-se a solução sucessivamente com solução aquosa de ácido cítrico a 10%, solução aquosa de hidróxido de sódio a 10% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna sobre sílica gel, eluindo com 10% de metanol/cloreto de metileno para dar 3-[({[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4- il]amino}carbonil)amino]-1-azetidinocarboxilato de terc-butilo (1,52 g) como um sólido. 119 RMN de XH (CDC13) δ 1,44 (9H, s) , 3,03 (3H, s) , 3,59 (2H, dd, J=9,2, 5,0 Hz), 4,17 (2H, dd, J=9,2, 7,8 Hz), 4,39-4,43 (3H, m), 4,64 (1H, s 1), 7,18-7,21 (6H, m) , 7,27 (1H, s) , 7,29-7,32 (9H, m)

Exemplo 36 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de 4-metoxibenzilo (1,48 g) em N,N-dimetilformamida (3,0 mL) adicionou-se N-(trimetilsilil)acetamida (1,42 g) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À solução adicionou-se iodeto de potássio (504 mg) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À mistura reaccional adicionou-se uma solução de 3-[({[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}carbonil)amino]-1-azetidinocarboxilato de terc-butilo (1,20 g) em N,N-dimetilformamida (2,2 mL) , agitou-se a mistura completa a 50 °C durante 16 horas. À mistura reaccional resultante adicionou-se acetato de etilo (200 mL) , lavou-se a solução, sucessivamente, com água (50 mL) , solução aquosa de trifluoroacetato de sódio a 10% (50 mL x 2) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , secou-se sobre sulfato de sódio anidro e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado até cerca de 10 mL in vácuo. Verteu-se o concentrado para éter diisopropilico (160 mL) , e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo. A uma solução do sólido em cloreto de metileno (8,64 mL) adicionou-se anisole (2,88 mL) e ácido trifluoroacético (8,64 mL). Agitou-se a solução resultante à temperatura ambiente durante 3 horas e verteu-se para éter 120 diisopropílico (160 mL) . Recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para dar um produto em bruto (2,22 g), o qual foi purificado por HPLC preparativa utilizando uma coluna de ODS eluindo com uma mistura de acetonitrilo e tampão de fosfato (pH 5,5). Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 20 mL in vacuo. Dessalinizou-se o concentrado por HPLC preparativa utilizando uma coluna ODS, e concentrou-se a fracção eluida com acetonitrilo aquoso a 8% até cerca de 10 mL in vacuo e liofilizou-se para dar 3-[(3-amino-4-{[(3-azetidinilamino)carbonil]amino}-2-metil-l-pirazolio)metil]-7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato (220 mg) como um sólido amorfo. RMN de XH (D20) δ 1,50 (3H , s) , 1,51 (3H, s), 3,20 (1H , d, J= =17 ,6 Hz) , 3, 47 (1H, d, J=17,6 Hz) , 3,70 (3H, s), 4,18 (2H, dd, J= =11 ,2, 7,6 Hz) , 4,31 (2H, dd, J= 11,2, 8,3 Hz), 4,68 (1H, tt, J= =8, 3, 7,6 Hz) , 4,94 (1H, d, J=15,6 Hz), 5 ,15 (1H, d, J= =15 ,6 Hz) , 5,23 (1H, d, J=4,8 Hz) , 5,83 (1H, d, J: =4,8 Hz), 7,87 (1H, s)

Preparação 61 A uma suspensão de (l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]carbamato de fenilo (786 mg) e 3-pirrolidinilcarbamato de terc-butilo (373 mg) em cloreto de metileno (6 mL) adicionou-se N-etildiisopropilamina (0,43 mL), agitou-se a mistura sob refluxo durante 10 horas. Lavou-se a mistura reaccional sucessivamente com solução aquosa de ácido cítrico a 10%, solução aquosa saturada de cloreto de sódio e solução aquosa 121 saturada de hidrogenocarbonato de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo para dar [1-({[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]aminojcarbonil)-3-pirrolidinil]carbamato de terc-butilo (730 mg) como um sólido. RMN de XH (CDC13) δ 1,48 (9H, s) , 1,82-1,88 (1H, m) , 2,12- 2,18 (1H, m), 2,89 (3H, s), 2,89-3, 03 (1H, m) , 3, 20-3,30 (2H,m), 3, 38-3, 43 (1H, m) , 4,22 (1H, 1), 4,69 (1H, 1), 4,88 (1H, s 1) , 4,96 (1H, s 1), 7,18-7,27 (16H, m)

Exemplo 37 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (819 mg) em N,N-dimetilformamida (2,4 mL), adicionou-se N-(trimetilsilil)acetamida (655 mg), agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À mistura reaccional adicionou-se uma solução de [1-({[l-metil-5-(tritilamino)-1H-pirazol-4-il]amino}carbonil)-3-pirrolidinil]carbamato de terc-butilo (567 mg) em N,N-dimetilformamida (3,0 mL) . Agitou-se a mistura completa à temperatura ambiente durante 3 horas. À mistura reaccional resultante adicionou-se acetato de etilo (100 mL) e água (50 mL) . Separou-se a camada aquosa, lavou-se a camada orgânica sucessivamente com solução aquosa de trifluoroacetato de sódio a 10%, solução aquosa de tiossulfato de sódio a 10% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de sódio e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado até cerca de 2,5 mL in vacuo. Verteu-se o concentrado 122 para éter diisopropílico (80 mL) , e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vácuo. A uma solução do sólido resultante em cloreto de metileno (2,55 mL) adicionou-se anisole (0,85 mL) e ácido trifluoroacético (2,55 mL) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 3 horas. Verteu-se a mistura reaccional para éter diisopropílico (80 mL), e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para dar um produto em bruto (608 mg), o qual foi purificado por HPLC preparativa utilizando uma coluna de ODS eluindo com uma mistura de acetonitrilo e tampão de fosfato (pH 5,5). Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 20 mL in vacuo. Dessalinizou-se o concentrado por HPLC preparativa utilizando uma coluna ODS, e concentrou-se a fracção eluída com 7% de acetonitrilo/ácido clorídrico a 0,01 M até cerca de 10 mL in vacuo e liofilizou-se para dar tricloridrato de 3-[(3-amino-4-{[(3-amino-l-pirrolidihil)carbonil]amino)-2-metil-l-pirazolio)metil]-7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato (31 mg) como um sólido amorfo. RMN de XH (D20) δ 1,61 (3H, s), 1,61 (3H, s), 2,13-2,27 (1H, m) , 2,39-2,54 (1H, m) , 3,29 (1H, d, J=18,l Hz), 3,51 (1H, d, J=18,1 Hz) , 3,55-3, 68 (3H, m), 3,73 (3H, s), 3,80 (1H, dd, J=ll, 5, 6,0 Hz), 4,01-4,11 (1H, m) , 5,20 (1H, d, J=16,0 Hz), 5,24 (1H, d, J=16,0 Hz), 5,28 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,89 (1H, d, J=4,8 Hz) , 7, 91 (1H, s) 123

Preparação 62 A uma suspensão de [l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-iljcarbamato de fenilo (711mg) e 3-amino-l-pirrolidinacarboxilato de terc-butilo (372 mg) em cloreto de metileno (15 mL) adicionou-se N-etildiisopropilamina (0,51 mL) e, agitou-se a mistura sob refluxo durante 17 horas. Lavou-se a mistura reaccional sucessivamente com solução aquosa de ácido cítrico a 10%, solução aquosa saturada de cloreto de sódio e solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna sobre sílica gel, eluindo com 10% de metanol/cloreto de metileno para dar 3-[({[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]aminojcarbonil)amino]-1-pirrolidinecarboxilato de terc-butilo (511 mg) como um sólido. RMN de (CDC13) δ 1,46 (9H, s) , 1, 66-1,74 (1H, m) , 2,04-2,11 (1H, m) , 2,97 (3H, s) , 3,05-3,11 (1H, m) , 3,30-3,43 (2H, m), 3,53-3,58 (1H, m) , 4,16-4,23 (2H, m) , 4,45 (1H, s 1), 4,74 (1H, 1), 7,18-7,20 (6H, m), 7,28-7,30 (10H, m)

Exemplo 38 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (707 mg) em N,N-dimetilformamida (2,1 mL) adicionou-se N-(trimetilsilil)acetamida (566 mg) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À mistura reaccional 124 adicionou-se uma solução de 3-[({[l-metil-5-(tritilamino)-1H-pirazol-4-il]amino}carbonil)amino]-1-pirrolidina-carboxilato de terc-butilo (490 mg) em N,N-dimetilformamida (2,0 mL) . Agitou-se a mistura completa à temperatura ambiente durante 3 horas. À mistura reaccional resultante adicionou-se acetato de etilo (100 mL) e água (50 mL) . Separou-se a camada aquosa, lavou-se a camada orgânica sucessivamente com solução aquosa de trifluoroacetato de sódio a 10%, solução aquosa de tiossulfato de sódio a 10% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de sódio e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado até cerca de 3 mL in vacuo. Verteu-se o concentrado para éter diisopropilico (80 mL), e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo. A uma solução do sólido resultante em cloreto de metileno (1,83 mL) adicionou-se anisole (0,61 mL) e ácido trifluoroacético (1,83 mL), agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 5 horas. Verteu-se a mistura reaccional para éter diisopropilico (80 mL), e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para dar um produto em bruto (440 mg), o qual foi purificado por HPLC preparativa utilizando uma coluna de ODS. Concentrou-se o eluato contendo os produtos desejados até cerca de 30 mL in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 3 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (Mitsubishi Chemical Corporation) eluindo com 2-propanol aquoso a 30%. Concentrou-se o eluato até cerca de 30 mL in vacuo e liofilizou-se para dar 3-[(3-amino-2-metil-4-{[(3- pirrolidinilamino)carbonil]amino}-1-pirazolio)metil] -7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l- metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato (18 mg) como um sólido amorfo. 125 RMN de XH (D20) δ 1,54 (3H, s) , 1,55 (3H, s), 2,00-2,10 (1H, m), 2,30-2,40 (1H, m) , 3,23 (0,5H, d, J=17,9 Hz), 3,24 (0,5H, d, J=17,9 Hz), 3,27-3,34 (1H, m), 3,34-3, 43 (1H, m) , 3,45-3, 57 (3H, m), 3,72 (3H, s), 4,36-4,46 (1H, m), 4,95 (0,5H, d, J=15,l Hz), 4,96 (0,5H, d, J=15,6 Hz), 5,17 (1H, d, J=15,6 Hz), 5,26 (1H, d, J=5,0 Hz), 5,85 (1H, a, J=5,0 Hz), 7,88 (1H, s)

Preparação 63 A uma suspensão de {2-[ ({ [ l-metil-5-(tritilamino)-1H-pirazol-4-il]amino}carbonil)amino]-etil}carbamato de terc-butilo (10,8 g) em metanol (50 mL) adicionou-se solução de cloreto de hidrogénio a 4 M em dioxano (50 mL) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 3 horas. Concentrou-se o solvente in vacuo, e triturou-se o resíduo com acetato de etilo e secou-se in vacuo para dar tricloridrato de N-(2-aminoetil)-Ν' - (5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)ureia (5,6 g) como um sólido. RMN de 2H (DMSO-d6) δ 2,84-2, 87 (2H, m) , 3,30 (2H, s 1) , 3,71 (3H, s), 6,57 (1H, 1), 7,91 (1H, s) , 8,05 (4H, 1), 8,55 (1H, 1)

Preparação 64 A uma solução de tricloridrato de N-(2-aminoetil)-Ν'- (5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)ureia (3,1 g) e trietilamina (4,6 g) em clorofórmio (100 mL) adicionou-se ({[(trifluorometil)sulfonil]imino}-metileno)biscarbamato de di-terc-butilo (5,9 g) . Agitou-se a mistura à temperatura 126 ambiente durante 90 minutos. Lavou-se a mistura reaccional sucessivamente com solução aquosa de ácido cítrico a 10%, solução aquosa saturada de cloreto de sódio e solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Triturou-se o resíduo com acetato de etilo para dar ((Z)-{[2-({[(5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)amino]carbonil}amino)-etil]amino}metilideno)biscarbamato de di-terc-butilo (4,3 g) como um sólido. RMN de XH (DMSO-dê) δ 1, 39 (9H, s) co 1—1 (9H, s), 3,18 (2H, J=6, 0 Hz), 3,35 (2H, D, 3,49 (3H, S), 4, 77 (1H, s 1), 6,05 , D, 6,97 (1H, s), 7,19 (1H, s 1) , 8,36 (1H, t, J=5,5 Hz) , 11,49 (1H, s 1)

Preparação 65 A uma solução de ((Z)-{[2-({[(5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)amino]carbonil}amino)-etil]amino}metilideno)biscarbamato de di-terc-butilo (2,2 g) e trietilamina (0,6 g) em clorofórmio (30 mL) adicionou-se cloreto de tritilo (1,7 g), agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 14 horas. Lavou-se a mistura reaccional sucessivamente com solução aquosa de ácido cítrico a 10%, solução aquosa saturada de cloreto de sódio e solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Triturou-se o resíduo com acetato de etilo para dar [(Z)-({2-[({[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}carbonil)amino]-etillamino)metilideno]biscarbamato de di-terc-butilo (1,9 g) como um sólido. 127 RMN de 1H (DMSO-dê) Ô 1,39 (9H, S), 1,47 (9H , S) , 2,72 (3H, s) , 3,0 9- O \—1 PO 1 (2H, m) , 3,31-3 , 34 (2H, m) , 5,69 (1H, s), 6,10 (1H, 1), 6,77 (1H, s D , 7,02 (1H, s) , 7, 14- 7,16 (6H, m), 7,22- 7,27 (9H, m) , 8,36 (1H, t, J=5, 5 Hz) , ii ,51, (1H, s 1)

Exemplo 39 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (820 mg) em N,N-dimetilformamida (1,4 mL) adicionou-se N-(trimetilsilil)acetamida (656 mg) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À mistura reaccional adicionou-se [(Z) — ({2 —[({[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4- il]amino}carbonil)amino]etil}amino)metilideno]-biscarbamato de di-terc-butilo (820 mg) e N,N-dimetilformamida (2,0 mL) . Agitou-se a mistura completa à temperatura ambiente durante 3 horas. À mistura reaccional resultante adicionou-se acetato de etilo (100 mL) e água (50 mL) . Separou-se a camada aquosa, lavou-se a camada orgânica sucessivamente com solução aquosa de trifluoroacetato de sódio a 10%, solução aquosa de tiossulfato de sódio a 10% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de sódio e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado até cerca de 5 mL in vacuo. Verteu-se o concentrado para éter diisopropilico (120 mL) , e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo. A uma solução do sólido resultante em cloreto de metileno (3,0 mL) adicionou-se anisole (1,0 mL) e ácido trifluoroacético (2,0 mL) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 4 horas. Verteu-se a mistura reaccional para éter diisopropilico (100 mL), e 128 recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para dar um produto em bruto (740 mg), o qual foi purificado por HPLC preparativa utilizando uma coluna de ODS. Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 30 mL in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 3 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (Mitsubishi Chemical Corporation) eluindo com 2-propanol aquoso a 30%. Concentrou-se o eluato até cerca de 30 mL in vacuo e liofilizou-se para dar 3-([3-amino-4-( ([ (2- guanidinoetil)amino]carbonil)amino)-2-metil-l-pirazolio]metil}-7β—[(Z)—2—(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato (70 mg) como um sólido amorfo. RMN de XH (D20) δ 1,55 (3H, s) , 1,56 (3H, s), 3,24 (1H, d, J=17,6 Hz), 3,28-3,40 (4H, m) , 3,52 (1H, d, J=17,6 Hz), 3,73 (3H, s), 4, 97 (1H, d, J=15, 4 Hz) , 5,16 (1H, d, J=15,4 Hz), 5,27 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,84 (1H, d, J=4,8 Hz), 7,87 (1H, s)

Preparação 66 A uma suspensão de [l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]carbamato de fenilo (950 mg) e (3S)-3-pirrolidinilcarbamato de terc-butilo (560 mg) em cloreto de metileno (20 mL) adicionou-se N-etildiisopropilamina (390 mg) e, agitou-se a mistura sob refluxo durante 23 horas. Lavou-se a mistura reaccional sucessivamente com solução aquosa de ácido cítrico a 10%, solução aquosa saturada de cloreto de sódio e solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e 129 concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna sobre sílica gel, eluindo com 4% de metanol/clorofórmio para dar [(3S)-1-({[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]aminojcarbonil)-3-pirrolidinil]carbamato de terc-butilo (680 mg) como um sólido. RMN de ΧΗ (CDC13) δ 1,48 (9H, s) , 1,82-1,88 (1H, m) , 2,12- 2,18 (1H, m) , 2,89 (3H, s) , 2,89-3, 03 (1H, m) , 3,20-3, 30 (2H, m) , 3,38-3,43 (1H, m) , 4,22 (1H, 1), 4,69 (1H, 1), 4,88 (1H, s 1), 4,96 (1H, s 1), 7,18-7,27 (16H, m)

Exemplo 40 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (820 mg) em N, N-dimetilformamida (2,4 mL) adicionou-se N-(trimetilsilil)acetamida (656 mg) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À mistura reaccional adicionou-se [(3S)-1-({[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]aminojcarbonil)-3-pirrolidinil]carbamato de terc-butilo (680 mg) . Agitou-se a mistura completa à temperatura ambiente durante 3 horas. À mistura reaccional resultante adicionou-se acetato de etilo (80 mL) e água (50 mL) . Separou-se a camada aquosa, lavou-se a camada orgânica sucessivamente com solução aquosa de trifluoroacetato de sódio a 10%, solução aquosa de tiossulfato de sódio a 10% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de sódio e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado até cerca de 5 mL in vacuo. Verteu-se o concentrado para éter diisopropílico (120 mL), e recolheu-se o 130 precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo. A uma solução do sólido resultante em cloreto de metileno (3,0 mL) adicionou-se anisole (1,0 mL) e ácido trifluoroacético (2,0 mL) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 4 horas. Verteu-se a mistura reaccional para éter diisopropilico (100 mL), e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para dar um produto em bruto (690 mg), o qual foi purificado por HPLC preparativa utilizando uma coluna de ODS. Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 30 mL in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 3 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (Mitsubishi Chemical Corporation) eluindo com 2-propanol aquoso a 30%. Concentrou-se o eluato até cerca de 30 mL in vacuo e liofilizou-se para dar 3-{[3-amino-4-({[(3S)-3-amino-l-pirrolidinil]carbonil)amino)-2-metil-l-pirazoliolmetil}-7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2, 4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato (60 mg) como um sólido amorfo. RMN de (D20) δ 1,52 (6H, s), 2,13-2,27 (1H, m), 2,38-2,53 (1H, m), 3,20 (1H, d, J=17,4 Hz), 3,46 (1H, d, J=17,4 Hz), 3,54-3,67 (3H, m), 3,73 (3H, s), 3,79 (1H, dd, J=ll,5, 6,0 Hz), 4,00- 4,10 (1H, m) , 4,97 (1H, d, J=15,4 Hz), 5,16 (1H, d, J=15,4H.z), 5,25 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,83 (1H, d, J=4,8 Hz), 7,85 (1H, s)

Preparação 67 A uma suspensão de [l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-iljcarbamato de fenilo (950 mg) e (3R)-3-pirrolidinilcarbamato de terc-butilo (560 mg) em cloreto de metileno (20 mL) 131 adicionou-se N-etildiisopropilamina (390 mg) e, agitou-se a mistura sob refluxo durante 23 horas. Lavou-se a mistura reaccional sucessivamente com solução aquosa de ácido citrico a 10%, solução aquosa saturada de cloreto de sódio e solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vácuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna sobre sílica gel, eluindo com 4% de metanol/clorofórmio para dar [(3R)-1-({[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}carbonil)-3-pirrolidinil]carbamato de terc-butilo (700 mg) como um sólido. RMN de (CDCls) δ 1,48 (9H, s) , 1,82-1,88 (1H, m) , 2,12-2,18 (1H, m) , 2,89 (3H, s), 2,89-3,03 (1H, m) , 3,20-3,30 (2H, m) , 3,38-3,43 (1H, m) , 4,22 (1H, 1), 4,69 (1H, 1), 4,88 (1H, s 1), 4,96 (1H, s 1), 7,18-7,27 (16H, m)

Exemplo 41 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (820 mg) em N,N-dimetilformamida (2,4 mL) adicionou-se N-(trimetilsilil)-acetamida (656 mg) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À mistura reaccional adicionou-se [(3R)-1-({[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}carbonil)-3-pirrolidinil]carbamato de terc-butilo (680 mg). Agitou-se a mistura completa à temperatura ambiente durante 3 horas. À mistura reaccional resultante adicionou-se acetato de etilo (80 mL) e água (50 mL) . Separou-se a camada aquosa, lavou-se a 132 camada orgânica sucessivamente com solução aquosa de trifluoroacetato de sódio a 10%, solução aquosa de tiossulfato de sódio a 10% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de sódio e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado até cerca de 5 mL in vacuo. Verteu-se o concentrado para éter diisopropilico (120 mL), recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo. A uma solução do sólido resultante em cloreto de metileno (3,0 mL) adicionou-se anisole (1,0 mL) e ácido trifluoroacético (2,0 mL) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 4 horas. Verteu-se a mistura reaccional para éter diisopropilico (100 mL), recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para dar um produto em bruto (760 mg), o qual foi purificado por HPLC preparativa utilizando uma coluna de ODS. Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 30 mL in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 3 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (Mitsubishi Chemical Corporation) eluindo com 2-propanol aquoso a 30%. Concentrou-se o eluato até cerca de 30 mL in vacuo e liofilizou-se para dar 3-{[3-amino-4-({[(3R)-3-amino-l- pirrolidinil]carbonil}amino)-2-metil-l-pirazolio]metil) -7β-[(Ζ)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato (68 mg) como um sólido amorfo. RMN de XH (d20) δ 1,52 (6H, s), 2,13-2,27 (1H, m), 2,38-2,53 (1H, m), 3,20 (1H, d, J=17,6 Hz), 3,47 (1H, d, J=17,6 Hz), 3,56-3,66 (3H, m), 3,73 (3H, s), 3,79 (1H, dd, J=11,0, 6,0 Hz), 4,00-4,10 (1H, m), 4,96 (1H, d, J=15,l Hz), 5,15 (1H, d, J=15,l Hz), 5,26 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,83 (1H, d, J=4,8 Hz), 7,84 (1H, s) 133

Preparação 68 A uma suspensão de (5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)carbamato de fenilo (1,86 g) e (3S)-l-benzil-3-pirrolidinamina (2,0 g) em clorofórmio (50 mL) adicionou-se N-etildiisopropilamina (3,1 g) e, agitou-se a mistura sob refluxo durante 19 horas. Concentrou-se a mistura reaccional in vacuo para dar (S)-5-amino-4-[3-(l-benzil-3- pirrolidinil)ureido]-1-metil-lH-pirazole em bruto como um sólido. Tratou-se uma solução do produto em bruto em ácido acético com negro de paládio (3 mL) sob uma atmosfera de hidrogénio à temperatura ambiente durante 24 horas. Depois de se ter eliminado o catalisador por filtração, concentrou-se o filtrado in vacuo, e dissolveu-se o resíduo em solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio (100 mL) . À solução adicionou-se uma solução de dicarbonato de di-terc-butilo (5,0 g) em tetra-hidrofurano (40 mL) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 5 horas. Extraiu-se a mistura reaccional com clorofórmio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Triturou-se o resíduo com éter dietílico para dar (3S)—3—({[ (5— amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)amino]carbonil}amino)-1-pirrolidina-carboxilato de terc-butilo (1,9 g) como um sólido. RMN de (DMSO-d6) Ô 1,40 (9H, s) , 1,70-1,76 (1H, m) , 1,95- 2,02 (1H, m) , 3,01-3,05 (1H, m) , 3,24-3, 34 (2H, m), 3,38-3,45 (1H, m) 3,50 (3H, s) , 4,06-4,11 (1H, m) , 4,78 (2H, s 1), 6,19 (1H, s 1), 6,97 (1H, s), 7,09 (1H, s 1) 134

Preparação 69 A uma solução de (3S)-3-({[(5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)amino]carbonil}amino)-1-pirrolidina-carboxilato de terc-butilo (1,8 g) e N-etildiisopropilamina (720 mg) em clorofórmio (50 mL) adicionou-se cloreto de tritilo (1,6 g), agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 28 horas. Lavou-se a mistura reaccional sucessivamente com solução aquosa de ácido cítrico a 10%, solução aquosa saturada de cloreto de sódio e solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna sobre sílica gel, eluindo com 3% de metanol/clorofórmio para dar (3S)-3-[({[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}carbonil)amino]-1-pirrolidina-carboxilato de terc-butilo (1,7 g) como um sólido. RMN de (CDC13) δ 1,46 (9H, s) , 1, 66-1,74 (1H, m) , 2,04- 2,11 (1H, m) , 2,97 (3H, s) , 3,05-3,11 (1H, m) , 3,30-3, 43 (2H, m), 3,53-3,58 (1H, m) , 4,16-4,23 (2H, m) , 4,45 (1H, s 1), 4,74 (1H, 1), 7,18-7,20 (6H, m), 7,28-7,30 (10H, m)

Exemplo 42 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (820 mg) em N,N-dimetilformamida (2,4 mL) adicionou-se N-(trimetilsilil)acetamida (656 mg), agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À mistura reaccional 135 adicionou-se (3S)-3-[({[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4- il]aminoJcarbonil)amino]-1-pirrolidina-carboxilato de terc-butilo (680 mg) . Agitou-se a mistura completa à temperatura ambiente durante 3 horas. À mistura reaccional resultante adicionou-se acetato de etilo (80 mL) e água (50 mL) . Separou-se a camada aquosa, lavou-se a camada orgânica sucessivamente com solução aquosa de trifluoroacetato de sódio a 10%, solução aquosa de tiossulfato de sódio a 10% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de sódio e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado até cerca de 5 mL in vácuo. Verteu-se o concentrado para éter diisopropilico (120 mL), e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo. A uma solução do sólido resultante em cloreto de metileno (3,0 mL) adicionou-se anisole (1,0 mL) e ácido trifluoroacético (2,0 mL) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 5 horas. Verteu-se a mistura reaccional para éter diisopropilico (100 mL) , e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para dar um produto em bruto (870 mg), o qual foi purificado por HPLC preparativa utilizando uma coluna de ODS. Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 30 mL in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 3 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (Mitsubishi Chemical Corporation) eluindo com 2-propanol aquoso a 30%. Concentrou-se o eluato até cerca de 30 mL in vacuo e liofilizou-se para dar 3-{[3-amino-2-metil-4-({[(3S)-3-pirrolidinilamino]carbonil)-amino)-1-pirazolio]metil}-7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)-acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato (68 mg) como um sólido amorfo. 136 RMN de 2H (D20) δ 1,52 (3H, s), 1,53 (3H, s), 2,00-2,09 (1H, m), 2,28-2,38 (1H, m) , 3,22 (1H, d, J=17,4 Hz), 3,29 (1H, dd, J=12,4, 4,6 Hz), 3,34-3,42 (1H, m), 3,44-3,54 (3H, m), 3,71 (3H, s), 4,36-4,43 (1H, m) , 4,95 (1H, d, J=15,6 Hz), 5,15 (1H, d, J=15,6 Hz), 5,25 (1H, d, J=4,6 Hz), 5. 84 (1H, d, J=4,6 Hz), 7,87 (1H, s)

Preparação 70 A uma suspensão de ácido 4-[(terc-butoxicarbonil)amino]butanóico (2,13 g) em diclorometano (40 mL) adicionou-se 1-hidroxibenzotriazole (HOBT) (1,41 g) e cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-Ν'-etilcarbodiimida (WSCD HC1) (3,65 g) e, agitou-se a mistura durante 1 hora. À solução adicionou-se sulfato de l-metil-lH-pirazole-4,5-diamina (2 g) e N,N-diisopropiletilamina (3,32 mL). Agitou-se a mistura reaccional durante 18 horas. À solução resultante adicionou-se solução aquosa saturada de cloreto de sódio e solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio, e extraiu-se a mistura com acetato de etilo. Extraiu-se duas vezes a camada aquosa com tetra-hidrofurano/acetato de etilo = 1/1. Secou-se o extracto sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Ao resíduo adicionou-se piridina (40 mL) , adicionou-se, em seguida, clorotrifenilmetano (5,3 g) . Agitou-se a mistura a 65 °C durante 6 horas. Dissolveu-se a mistura em acetato de etilo. Lavou-se a solução sucessivamente com água, solução aquosa de ácido cítrico a 10%, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Secou-se o extracto sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna sobre sílica gel, eluindo com 60% de acetato de etilo/diclorometano para dar (4-{[1-metil- 137 5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-4-oxobutil)carbamato de terc-butilo (2,01 g). RMN de XH (CDC13) δ 1,44 (9H, s) , 1,67 (2H, tt, J=6,7, 6,7 Hz), 1,92 (2H, t, J=6,7 Hz), 2,90 (3H, s) , 3,09 (2H, dt, J=6,7, 6,7 Hz), 4,50 (1H, s) , 4,71 (1H, t, J=6,7 Hz), 6,53 (1H, s), 7,0-7,35 (16H, m), 7,56 (1H, s)

Exemplo 43 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-iodometil-3-cefeme-4-carboxilato de benzidrilo (2 g) em N,N-dimetilformamida (6 mL) adicionou-se N-(trimetilsilil)acetamida (1,77 g) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. À mistura reaccional adicionou-se (4-{[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4- il]amino}-4-oxobutil)carbamato de terc-butilo (1,98 g) e, agitou-se a mistura completa a 35 °C durante 30 horas. À mistura reaccional resultante adicionou-se acetato de etilo, lavou-se a solução, sucessivamente, com água, solução aquosa de trifluoroacetato de sódio a 10% e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de magnésio e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado até cerca de 25 mL ín vácuo. Verteu-se o concentrado para éter diisopropilico (150 mL), e recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo. A uma solução do sólido em cloreto de metileno (5 mL) adicionou-se anisole (1,5 mL) e ácido trifluoroacético (5 mL). Agitou-se a solução resultante à temperatura ambiente durante 4 horas e verteu-se para éter diisopropilico. Recolheu-se o 138 precipitado resultante por filtração e secou-se in vacuo para dar um produto em bruto (1,2 g). Dissolveu-se o produto em bruto numa mistura de tampão de fosfato (pH 6,86, 10 mL) e solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio e purificou-se por HPLC preparativa utilizando uma coluna ODS. Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado até cerca de 20 mL in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 3 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (Mitsubishi Chemical Corporation) eluindo com 2-propanol aquoso a 20%. Concentrou-se o eluato até cerca de 30 mL in vacuo e, adicionou-se solução aquosa de ácido sulfúrico a 2 M (72 mL) . Liofilizou-se a mistura para dar hidrogenossulfato do ácido 3-({3-amino-4-[(4-aminobutanoil)amino]-2-metil-l-pirazolio}metil)-7β-[(Z)-2- (5-amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l- metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxílico (113 mg) como um sólido amorfo. RMN de 1H (D20) δ 1,61 (6H, s) , 2,01 (2H, tt, J=7,6, 7,6 Hz), 2,58 (2H, t, J=7,6 Hz), 3,07 (2H, t, J=7,6 Hz), 3,23 (1H, d, J=18 Hz), 3,45 (1H, d, J=18 Hz), 3,72 (3H, s), 5,06 (1H, d, J=15,7 Hz), 5,25 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,28 (1H, d, J=15,7 Hz), 5,87 (1H, d, J=4,8 Hz), 8,03 (1H, s)

Preparação 71 (5-([l-Metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-5-oxopentil)carbamato de terc-butilo O composto em epígrafe foi obtido a partir de ácido 5-[(terc-butoxicarbonil)amino]pentanóico do mesmo modo que na Preparação 70. 139 RMN de 2H (CDC13) δ 1,43 (9H, s), 1,2-1,6 (4H, m) , 1,90 (2H, t, J=7,0 Hz), 2,90 (3H, s) , 3,09 (2H, dt, J=7,0, 7,0 Hz), 4,52 (1H, s), 4,61 (1H, t, J=7,0 Hz) , 6,28 (1H, s) , 7,0-7,35 (16H, m), 7,59 (1H, s)

Exemplo 44

Hidrogenossulfato do ácido 3-({3-amino-4-[(5- aminopentanoil)amino]-2-metil-l-pirazolio}metil) -7β-[(Z)-2-(5-amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxílico O composto em epígrafe foi obtido a partir de (5—{[1-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il)amino}-5-oxopentil)carbamato de terc-butilo do mesmo modo gue no Exemplo 43. RMN de 1H (D20) δ 1,61 (6H, s), 1,65-1,8 (4H, m), 2,50 (2H, m), 3,02 (2H, m) , 3,23 (1H, d, J=18 Hz), 3,45 (1H, d, J=18 Hz), 3. 72 (3H, s) , 5,06 (1H, d, J=15,7 Hz), 5,25 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,28 (1H, d, J=15,7 Hz), 5,87 (1H, d, J=4,8 Hz), 8,02 (1H, s)

Preparação 72 A uma solução de l-metil-N5-tritil-lH-pirazole-4,5-diamina (4 g) em diclorometano (100 mL) adicionou-se 4-{ [ (2,5-dioxo-l-pirrolidinil)oxi]carbonil}-1-piperidina-carboxilato de terc-butilo (4,05 g) e, agueceu-se a mistura a refluxo durante 72 horas. Lavou-se a mistura reaccional sucessivamente com água, solução aquosa de ácido cítrico a 10%, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Secou-se o extracto sobre sulfato 140 de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo para dar 4-({[1-meti1-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}carbonil)-1-piperidina-carboxilato de terc-butilo (1,806 g). RMN de XH (CDCla) δ 1,3-1,9 (14H, m) , 1,5-1,8 (2H, m) , 2,95 (3H, s), 4,10 (2H, m), 4,36 (1H, s) , 6,53 (1H, s) , 7,0-7,35 (16H, m), 7,68 (1H, s)

Exemplo 45 3-({3-Amino-2-metil-4-[(4-piperidinilcarbonil)amino]-1-pirazolio}metil)-7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato O composto em epígrafe foi obtido a partir de 4-({[1-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}carbonil)-1-piperidina-carboxilato de terc-butilo do mesmo modo que no Exemplo 36. RMN de (D20) δ 1,57 (6H, s) , 1,8-2,3 (4H, m) , 2,7-3,6 (7H, m) , 3,72 (3H, s) , 5,06 (1H, d, J=15,7 Hz), 5,25 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,28 (1H, d, J=15,7 Hz), 5,87 (1H, d, J=4,8 Hz), 8,01 (1H, s)

Preparação 73 A uma suspensão de ácido 3- [N-(terc-butoxicarbonil)-N-metilamino]propanóico (3,33 g) em diclorometano (33 mL) e tetra-hidrofurano (33 mL) adicionou-se HOBT (3,33 g) e WSC HC1 (6,29 g) e, agitou-se a mistura durante 1 hora. À solução 141 adicionou-se sulfato de l-metil-lH-pirazole-4,5-diamina (3,45 g) e N,N-diisopropiletilamina (11,4 mL) . Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente dum dia para o outro. À solução resultante adicionou-se solução aquosa saturada de cloreto de sódio e extraiu-se com tetra-hidrofurano/acetato de etilo = 1/1. Secou-se o extracto sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vácuo para dar N-{3-[(5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)amino]-3-oxopropil}-N-metilcarbamato de terc-butilo como um óleo (2,4 g). Este produto foi utilizado no passo seguinte sem qualquer purificação adicional.

Preparação 74 A uma solução de N-{3-[(5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)amino]-3-oxopropil}-N-metilcarbamato de terc-butilo (4,88 g) em N,N-dimetilformamida (50 mL) adicionou-se sucessivamente cloreto de tritilo (6,86 g) , trietilamina (6,86 mL) e 4-dimetilaminopiridina (80 mg) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente dum dia para o outro. À mistura resultante adicionou-se acetato de etilo e lavou-se com água (três vezes) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Purificou-se o residuo por cromatografia em coluna sobre silica gel para dar N-metil-N-(3-{[l-metil-5-(tritilamino)-1H-pirazol-4-il]amino}-3-oxopropil)carbamato de terc-butilo (4,20 g) como um sólido amorfo. IV (KBr) 1659, 1587, 1491, 1446, 1173, 1151, 762, 739, 708 cm-1 142 RMN de ΧΗ (DMSO-de) δ 1,40 (9H, s) , 2,12 (2H, t, J=7,4 Hz), 2,74 (3H, s), 2, 74 (3H, s) , 3,24 (2H, t, J=7,4 Hz), 5. 58 (1H, s), 7,13-7,40 (16H, m), 8,30 (1H, s)

Exemplo 46 3-[(3-Amino-2-meti1-4-{[3-(metilamino)propanoil]amino}-1-pirazolio)metil]—7β—[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato O composto em epígrafe foi obtido a partir de N-metil-N-(3-{[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-3-oxopropil)carbamato de terc-butilo do mesmo modo que no Exemplo 32 como um sólido amorfo. IV (KBr) 1770, 1664 , 1599, 1531 , 1400, 1360 cm-1 RMN de 1 Ή (D20) δ 1 , 53 (6H, s) , , 2,77 (3H, s), 2,92 (2H, t, J= = 6,5 Hz ), 3, 19 e 3,45 (2H, ABq , J= 11,1 Hz ), 3, 74 (3H, s), 5,00 e 5,21 (2 H, ABq, J=15,4 Hz) , 5, 25 (1H, d, J=4, 8 Hz), 5 ,85 (1H, d, J=4, 8 Hz) , 8,02 (1H, s) ESI-MS 666,3 (M+H+) 143

Preparação 75 3- ([ (5-Amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)amino]carbonil) -1-azetidinocarboxilato de terc-butilo 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de ácido 1-(terc-butoxicarbonil)-3-azetidinocarboxílico do mesmo modo que na Preparação 73 como um óleo. Este produto foi utilizado no passo seguinte sem qualquer purificação adicional.

Preparação 76 3-({[l-Metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}carbonil)-1-azetidinocarboxilato de terc-butilo 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de 3-{[(5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)amino]carbonil}-1-azetidinocarboxilato de terc-butilo do mesmo modo que na Preparação 74 como um sólido amorfo. IV (KBr) 3367, 3321, 1701, 1662, 1489, 1414, 1144, 766, 704 RMN de (DMSO-d6) Ò 1,39 (9H, s) , 2. 75 (3H, s) , 2,97-3,05 (1H, m) , 3,63-3, 70 (2H, m) , 3,82-3, 90 (2H, m) , 5,57 (1H, s) , 7,10-7,33 (16H, m), 8,41 (1H, s) ESI-MS 560,3 (M+Na+) 144

Exemplo 47 3-({3-Amino-4-[(3-azetidinilcarbonil)amino]-2-metil-l-pirazolio}metil)-7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2- (1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato. 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de 3-({[1-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]aminojcarbonil)-1-azetidinocarboxilato de terc-butilo do mesmo modo que no Exemplo 32 como um sólido amorfo. IV (KBr) 1768, 1663, 1624, 1605, 1406, 1362 cm'1 RMN de XH (D20) δ 1,53 (3H, s), 1,53 (3H, s) , 3,19 e 3,50 (2 H, ABq, J=17,7 Hz), 3, 82-3, 98 (1H, m) , 4,31-4,35 (4H, m) , 4,49 e 5,20 (2H, ABq, J=15,3 Hz), 5,25 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,85 (1H, d, J=4,8 Hz), 8,04 (1H, s) ESI-MS 664,2 (M+H+)

Preparação 77 N-{2-[(5-Amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)amino]-2-oxoetil}-N-metilcarbamato de terc-butilo O composto em epígrafe foi obtido a partir de ácido [N-(terc-butoxicarbonil)-N-(metil)amino]acético do mesmo modo que na Preparação 73 como um óleo. Este produto foi utilizado no passo seguinte sem qualquer purificação adicional. 145

Preparação 78 N-Metil-N-(2-{[1-metil-S-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino)-2-oxoetil)carbamato de terc-butilo 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de N-{2-[(5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)amino]-2-oxoetil}-N-metilcarbamato de terc-butilo do mesmo modo que na Preparação 74 como um sólido branco. 0 espectro de RMN deste composto indica a existência do seu rotâmero. RMN de ΧΗ (DMSO-dê) δ 1,32 e 1,39 (9H, s) , 2,72 e 2,77 (3H, s), 3,52 e 3,61 (2H, s 1), 5,61 (1H, s), 7,13-7,33 (16H, m) , 8,20 e 8,30 (1H, s 1) ESI-MS 548,3 (M+Na+)

Exemplo 48 3-[(3-Amino-2-metil-4-{[(metilamino)acetil]amino}-l-pirazolio)metil]—7β—[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2- (1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato O composto em epígrafe foi obtido a partir de N-metil-N-(2-{[1-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-2-oxoetil)carbamato de terc-butilo do mesmo modo que no Exemplo 32 como um sólido amorfo. IV (KBr) 1770, 1657, 1601, 1400, 1362 cm-1 146 RMN de 2Η (D20) δ 1,53 (6H, s), 2,82 (3 H, s), 3,18 e 3, 45 (2H, ABq, J=17,7 Hz) , 3,74 (3H, s) , 4,08 (2 H, s) , 5,00 e 5, 20 (2H, ABq, J=15,3 Hz), 5,25 (1H, d, J=4, 8 Hz) , 5,84 (1H, d, J=4,8 Hz), 8,05 (1H, s) ESI-MS 652,2 (M+H+)

Preparação 79 N-(5-Amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)-Z-(1,3-dioxo-l,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)acetamida O composto em epígrafe foi obtido a partir de ácido (1,3-dioxo-l,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)acético do mesmo modo que na Preparação 73 como um sólido. RMN de XH (DMSO-d6) δ 3,55 (3H, s) , 4,36 (2H, s) , 4,91 (2H, s 1), 7,14 (1H, s), 7,85-8,02 (4H, m), 9,48 (1H; s) ESI-MS 322,2 (M+Na+)

Preparação 80 2- (1,3-Dioxo-l,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)-N-[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]acetamida O composto em epígrafe foi obtido a partir de N-(5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)-2-(1,3-dioxo-l,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)acetamida do mesmo modo que na Preparação 74 como um sólido. 147 RMN de 2H (DMSO-de) δ 2,70 (3H, s) , 4,12 (2H, s) , 5,41 (1H, s), 7,12-7,33 (16H, m), 7,85-7,95 (4H, m), 8,93 (1H, s) ESIMS 564,3 (M+Na+)

Preparação 81

Adicionou-se mono-hidrato de hidrazina (1,46 mL) a uma solução de 2-(1,3-dioxo-l,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)-N-[1-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]acetamida (5,42 g) em etanol (108 mL) e tetra-hidrofurano (54 mL) à temperatura ambiente e, agitou-se a mistura a 70 °C durante 2 horas. Arrefeceu-se a mistura reaccional até 0 °C, e eliminou-se os materiais insolúveis por filtração. Concentrou-se o filtrado in vacuo. Triturou-se o resíduo com éter diisopropílico, recolheu-se por filtração e secou-se in vacuo para dar 2-amino-N-[1-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]acetamida (3,37 g) como um sólido. Este produto foi utilizado no passo seguinte sem qualquer purificação adicional.

Preparação 82 A uma solução de 2-amino-N-[l-metil-5-(tritilamino)-1H-pirazol-4-il]acetamida (2,47 g) em tetra-hidrofurano (50 mL) adicionou-se ({ [ (trifluorometil)sulfonil]imino}metileno)-biscarbamato de di-terc-butilo (2,35 g) e trietilamina (2,5 mL) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. Verteu-se a mistura reaccional para uma mistura de acetato de etilo e água. Separou-se a camada aquosa, lavou-se a camada orgânica com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, 148 secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado in vácuo. Purificou-se o concentrado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para dar { (E) — [ (2— {[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-2-oxoetil)amino]metilideno}-biscarbamato de di-terc-butilo (3,25 g) como um sólido amorfo. RMN de XH (DMSO-dê) δ 1,38 (9H, s) , 1,49 (9H, s) , 2,75 (3H, s), 3,79 (2H, d, J=4,7 Hz), 5,47 (1H, s) , 7,12-7,33 (16H, m) , 8,55 (1H, t, J=4,7 Hz), 8,61 (1H, s), 11,43 (1H, s) ESI-MS 676,3 (M+Na+)

Exemplo 49 3-({3-Amino-4-[(guanidinoacetil)amino]-2-metil-l-pirazolio}metil)—7β—[(Z)-2-(5-amino-l, 2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de {(E)—[(2—{[1— metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-2- oxoetil)amino]metilidenojbiscarbamato de di-terc-butilo do mesmo modo que no Exemplo 32 como um sólido amorfo. IV (KBr) 1770, 1668, 1655, 1620, 1601, 1402, 1363 cm'1 RMN de XH (D20) Ô 1,53 (6H, s) , 3,20 e 3,48 (2H, ABq, J=17,6 Hz), 3,75 (3H, s) , 4,21 (2H, s) , 5,00 e 5,20 (2H, ABq, J=15,3 Hz), 5,26 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,85 (1H, d, J=4. 8 Hz), 8,02 (1H, s) 149 ESI-MS 678,2 (M-H+) (negativo)

Exemplo 5Q A uma solução de 3-({3-amino-4-[(3-aminopropanoil)aminol-2-metil-l-pirazolio}metil)-7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato (652 mg) em água (30 mL) e acetonitrilo (3 mL) adicionou-se cloridrato de formimidato de etilo (658 mg) e carbonato de potássio (1,106 g) sob arrefecimento com gelo. Depois de agitar a 5 °C durante 3 horas, adicionou-se HC1 a 1 N até neutralizar a mistura reaccional. Purificou-se a solução resultante por HPLC preparativa eluindo com uma mistura de tampão de fosfato (pH 5,5) e acetonitrilo, e submeteu-se o eluato a cromatografia em coluna sobre Diaion® HP20 (Mitsubishi Chemical Corporation) e liofilizou-se para dar 3-({3-amino-4-[ (3-guanidinopropanoil)amino]-2-metil-l-pirazolio}metil)-7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino) acetamido] -3-cefeme-4-carboxilato (23 mg) como um sólido amorfo. 0 espectro de RMN deste composto indica a existência do seu rotâmero. Foi descrito apenas o isómero principal. IV (KBr) 1770, 1714, 1668, 1653, 1456, 1400, 1360 cm-1 RMN de 2H (D20) δ 1,53 (6H, s) , 2,85 (2H, t, J=6,4 Hz), 3,19 e 3,46 (2H, ABq, J=17,7 Hz), 3,65 (2H, t, J=6,4 Hz), 5,00 e 5,21 (2H, ABq, J=15,2 Hz), 5,26 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,85 (1H, d, J=4,8 Hz), 7,80 (1H, s), 8,01 (1H, s) 150 ESI-MS 677,2 (M-H+) (negativo)

Preparação 83 A uma solução, mantida sob agitação, de sulfato de 1-metil-lH-pirazole-4,5-diamina (2,1 g) e ácido 3-etoxi-3-oxopropanóico (1,32 g) em diclorometano (10 mL) e tetra-hidrofurano (10 mL) adicionou-se WSCD HC1 (3,83 g) e N, N-diisopropiletilamina (6,96 mL), agitou-se a mistura dum dia para o outro. Eliminou-se o solvente sob pressão reduzida e o resíduo em bruto o qual inclui 3-[(5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)amino]-3-oxopropanoato de etilo foi utilizado na reacção seguinte sem qualquer purificação adicional.

Preparação 84

Dissolveu-se o resíduo em bruto contendo 3-[(5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)amino]-3-oxopropanoato de etilo em N,N-dimetilformamida (20 mL) e, adicionou-se cloreto de tritilo (5,52 g) e trietilamina (4,14 mL) sob agitação. Agitou-se a mistura dum dia para o outro e desactivou-se com água (10 mL) . Extraiu-se a mistura completa com acetato de etilo, lavou-se o extracto com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de magnésio e concentrou-se sob pressão reduzida para dar um óleo residual, o qual foi cromatografado sobre sílica gel, eluindo com diclorometano-acetato de etilo (2:3) para dar 3-{[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il] amino}-3-oxopropanoato de etilo (1,23 g). ESI-MS 491,2 [M+Na]+ (positivo), 467,3 [M-H] ~(negativo) 151 RMN de XH (DMSO-de) δ 1,18 (3H, t, J=7,l Hz), 2,75 (3H, s) , 3,04 (2H, s), 4,07 (2H, q, J=7,l Hz), 5,55 (1H, s) , 7,1-7,4 (16H, m), 8,54 (1H, s)

Preparação 85 A uma solução, mantida sob agitação, de 3-{[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-3-oxopropanoato de etilo (1,3 g) em tetra-hidrofurano (30 mL) adicionou-se solução aquosa de hidróxido de sódio a 1 N (3,1 mL) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 3 horas. Eliminou-se o tetra-hidrofurano in vacuo e tornou-se o resíduo ácido com ácido cítrico diluído. Recolheu-se o precipitado resultante por filtração e secou-se sob pressão reduzida para dar o ácido 3-{[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-3-oxopropanóico (1,22 g). ESI-MS 463,2 [M+Na]+ (positivo) RMN de 2H (DMSO-de) Ô 2,74 (3H, s) , 2,95 (2H, s) , 5,56 (1H, s), 7,0-7,4 (16H, m), 8,54 (1H, s), 12,0-13,0 (1H, s 1)

Preparação 86 A uma suspensão de ácido 3-{[l-metil-5-(tritilamino)-1H-pirazol-4-il]amino}-3-oxopropanóico (600 mg) e (2-aminoetil)carbamato de terc-butilo (240 mg) em tetra- hidrofurano (12 mL) e diclorometano (6 mL) adicionou-se WSCD HC1 (522 mg) e, agitou-se a mistura completa à temperatura ambiente 152 dum dia para o outro. À mistura reaccional adicionou-se água (3 mL), e extraiu-se a mistura completa com acetato de etilo. Lavou-se o extracto com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secou-se sobre sulfato de magnésio. A evaporação do solvente deu um resíduo em bruto, o qual foi triturado com éter diisopropílico-acetato de etilo (2:1) para dar {2-[(3-{[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-3-oxopropanoil)amino]etil}carbamato de terc-butilo (537 mg). ESI-MS 604,9 [M+Na]+ (positivo) RMN de ΧΗ (DMSO-de) δ 1,38 (9H, s), 2,74 (3H, s) , 2,85 (2H, s), 2,9-3,2 (4H, m) , 5,61 (1H, s) , 6,7-6,9 (1H, m) , 7,0-7,4 (16H, m), 8,0-8,1 (1H, m), 8,63 (1H, s)

Exemplo 51 3-{[3-Amino-4-({3-[(2-aminoetil)amino]-3-oxopropanoil}amino)-2-metil-l-pirazolio]metil}-7P-[(Z)-2-(5-amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato O composto em epígrafe foi obtido a partir de (2—[ (3— ([ 1— metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-3- oxopropanoil)amino]etil}carbamato de terc-butilo do mesmo modo que no Exemplo 34. ESI-MS 731,2 [M+Na]+ (positivo) 153 RMN de (D20) δ 1,53 (6H, s) , 3,1-3,3 (2H, m), 3,19 e 3,44 (2H, ABq, J=17,7 Hz), 3,54 (2H, s) , 3,5-3,7 (2H, m) , 3,74 (3H, s) , 5,00 e 5,22 (2H, ABq, J=15,5 Hz), 5,25 (1H, d, J=4,7 Hz), 5,86 (1H, d, J=4,8 Hz), 8,05 (1H, s)

Preparação 87 A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 3-amino-2-hidroxipropanóico (2,1 g) em tetra-hidrofurano (30 mL) e água (30 mL) adicionou-se solução aquosa de hidróxido de sódio a 1 N até tornar a solução básica (pH=9). À mistura adicionou-se dicarbonato de di-terc-butilo (4,36 g) e, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 4 horas mantendo o pH da mistura entre 8,5 e 9,0. Lavou-se a mistura completa com éter dietílico. Acidificou-se a camada aquosa (pH=2) com hidrogenossulfato de potássio aquoso a 10%, saturado com sódio cloreto e extraiu-se com acetato de etilo. Secou-se o extracto sobre sulfato de magnésio. Evaporou-se o solvente sob pressão reduzida para dar o ácido 3-[(terc-butoxicarbonil)amino]-2-hidroxipropanóico (3,96 g). ESI-MS 228,2 [M+Na]+ (positivo) RMN de 2H (DMSO-de) δ 1,37 (9H, s) , 3,0-3,8 (3H, m) , 3,9-4,1 (1H, m), 6,5-6,8 (1H, m)

Preparação 88 A uma solução de ácido 3-[(terc-butoxicarbonil)amino]-2-hidroxipropanóico (1,61 g) em diclorometano (8 mL) e tetra-hidrofurano (8 mL) adicionou-se HOBT (1,59 g) e WSCD HC1 154 (3,01 g) , agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. Arrefeceu-se a solução até 0 °C e, adicionou-se sulfato de l-metil-lH-pirazole-4,5-diamina e N,N-diisopropiletilamina (4,1 mL) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 8 horas. Eliminou-se o solvente sob pressão reduzida para dar o {3-[(5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)amino]-2-hidroxi-3-oxopropil}carbamato de terc-butilo em bruto, o qual foi utilizado na reacção seguinte sem qualquer purificação adicional.

Preparação 89 (2-Hidroxi-3-{[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-3-oxopropil)carbamato de terc-butilo O composto em epígrafe foi obtido a partir de {3-[(5-amino-l-metil-lH-pirazol-4-il)amino]-2-hidroxi-3-oxopropil}carbamato de terc-butilo do mesmo modo que na Preparação 84. ESI-MS 564,3 [M+Na]+ (positivo) RMN de ΧΗ (DMSO-d6) δ 1,39 (9H, s), 2,7-2,9 (1H, m) , 2,83 (3H, s), 3,1- 3,4 (1H, m) , 3, 7-3, 9 (1H, m) , 5,79 (1H, d, J=5,3 Hz) , 5,98 (1H, s) , 6,5-6,7 (1H, m), 7,1-7,4 (16H, m) , 8,36 (1H, s) 155

Exemplo 52 3-({3-Amino-4-[(3-amino-2-hidroxipropanoil)amino]-2-metil-l-pirazolio}metil)-7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1- carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de (2-hidroxi-3-{[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-3-oxopropil)carbamato de terc-butilo do mesmo modo que no Exemplo 32. RMN de 2Η (D20) δ 1,49 (6H, s) , 3,1-3,6 (4H, m), 3,76 (3H, s), 4,6-4,7 (1H, m) , 5,02 e 5,21 (2H, ABq, J=15,4 Hz), 5,26 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,86 (1H, d, J=4,8 Hz), 8,05 (1H, s)

Preparação 90 A uma suspensão de sulfato de 2-(4,5-diamino-lH-pirazol-l-il)etanol (5 g) em diclorometano (50 mL), adicionou-se trietilamina (6,38 mL) a 0 °C, agitou-se a mistura a 0 °C durante 10 minutos. Agitou-se a 40 °C durante 30 minutos, uma mistura de anidrido acético (2,16 mL) e ácido fórmico (1,74 mL), arrefeceu-se até 0 °C, adicionou-se, gota a gota, à solução anterior a 0 °C. Agitou-se a mistura completa a 0 °C durante 2 horas. À mistura adicionou-se solução aquosa saturada de cloreto de sódio, extraiu-se a mistura completa com tetra-hidrofurano. Secou-se o extracto sobre sulfato de magnésio e evaporou-se sob pressão reduzida para dar [5-amino-l-(2-hidroxietil)-lH-pirazol-4-il]formamida em bruto, a qual foi 156 utilizada na reacção seguinte sem qualquer purificação adicional.

Preparação 91 [1-(2-Hidroxietil)-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]formamida 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de [5-amino-l-(2-hidroxietil)-lH-pirazol-4-il]formamida do mesmo modo que na Preparação 84. 0 espectro de RMN deste composto indica a existência do seu rotâmero. RMN de XH (DMSO-d6) δ 3,10 (2H, t, J=6,2 Hz), 3,3-3,5 e 3,4-3,6 (2H, m), 4,89 e 5,06 (1H, t, J=5,l Hz), 5,77 e 6:07 (1H, s), 7,1-7,4 (16H, m), 7,58 e 8,07 (1H, s) , 7,58 (1H, s)

Preparação 92 A uma solução, mantida sob agitação, de [1-(2-hidroxietil)-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]formamida (2 g) em N,N-dimetilformamida (30 mL) adicionou-se hidreto de sódio (213 mg, suspensão em óleo a 60%) sob uma corrente de azoto a 0 °C e, agitou-se a mistura completa a 0 °C durante 20 minutos. Adicionou-se uma solução de (3-bromopropil)carbamato de terc-butilo (1,27 g) em N,N-dimetilformamida (10 mL) e iodeto de sódio (799 mg) à solução anterior e, agitou-se a mistura dum dia para o outro. Adicionou-se solução aquosa de hidrogenossulfato de potássio a 10% (5 mL) , e extraiu-se a mistura completa com acetato de etilo. Lavou-se o extracto com água e solução aquosa 157 saturada de cloreto de sódio e secou-se sobre sulfato de magnésio. A evaporação do solvente sob pressão reduzida deu um óleo, o qual foi cromatografado sobre silica gel, eluindo com diclorometano-acetato de etilo (2:1) para dar (3-{N-formil-N-[1-(2-hidroxietil)-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4- il]aminojpropil)carbamato de terc-butilo (1 g). 0 espectro de RMN deste composto indica a existência do seu rotâmero. ESI-MS 592,3 [M+Na]+ (positivo) RMN de (DMSO-de) δ 1,37 e 1,38 (9H, s) , 2,7-3,5 (10H, m) , 4,80 e 4,88 (1H, t, J=5,0 Hz), 5,52 & 6,06 (1H, s), 6,5-6,9 (1H, m), 7,0-7,4 (16H, m), 7,52 (1H, s)

Exemplo 53 3-({3-Amino-4-[N-(3-aminopropil)-N-formilamino]-2-(2-hidroxietil)-l-pirazolio}metil)-7β-[(Z)-2-(5-amino-l, 2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato O composto em epígrafe foi obtido a partir de (3-{N-formil-N-[1-(2-hidroxietil)-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}propil)carbamato de terc-butilo do mesmo modo que no Exemplo 32. ESI-MS 694,2 [M-H]-(negativo) RMN de ΧΗ (D20) δ 1,53 (6H, s) , 1,7-2,1 (2H, m) , 2,9-3,1 (2H, m), 3,1-3,8 (4H, m), 3,8-4,0 (2H, m), 4,3-4,6 (2H, m), 4,8- 158 5,2 (2Η, m), 5,29 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,85 (1H, d, J=4,7 Hz), 8,0-8,3 (2H, m)

Exemplo 54 A uma suspensão, mantida sob agitação, de 3-({3-amino-4-[N-(3-aminopropil)-N-formilamino]-2-(2-hidroxietil)-1-pirazolio} metil)-7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato (100 mg) em metanol (1,4 mL) adicionou-se ácido clorídrico concentrado (0,125 mL) à temperatura ambiente, agitou-se a mistura durante 6,5 horas. À solução acima adicionou-se hidrogenocarbonato de sódio (109 mg), e purificou-se a mistura por HPLC preparativa (coluna ODS; acetonitrilo:tampão de fosfato (pH 7) = 5:95).

Evaporou-se o eluato contendo um produto desejado para eliminar o acetonitrilo, acidificou-se com ácido clorídrico diluído e cromatografou-se sobre Diaion® HP20 (Mitsubishi Chemical

Corporation) eluindo com 2-propanol aquoso a 20%. Concentrou-se o eluato sob pressão reduzida e liofilizou-se para dar 3— ({3— amino-4-[(3-aminopropil)amino]-2-(2-hidroxietil)-1-pirazolio}metil)-7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2- (1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato (18 mg). ESI-MS 666,2 [M-H]“(negativo) RMN de 2H (DMSO-d6) Ô 1,53 (6H, s) , 1,96 (2H, tt, J=7,5 Hz), 3,0-3,2 (4H, m) , 3,13 e 3,43 (2H, ABq, J=17,6 Hz), 3,87 (2H, t, J=4,8 Hz), 4,2-4,4 (2H, m) , 4,87 e 5,03 (2H, ABq, J=15,2 Hz), 5,24 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,83 (1H, d, J=4,8 Hz), 7,64 (1H, s) 159

Preparação 93 A uma solução, mantida sob agitação, de N-[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]-2-(tritilamino)acetamida (2 g) em N,N-dimetilformamida (20 mL) adicionou-se hidreto de sódio (245 mg, suspensão em óleo a 60%) a 0 °C e, agitou-se a mistura durante 30 minutos com aquecimento até à temperatura ambiente. Arrefeceu-se a mistura até 0 °C e, adicionou-se iodeto de metilo (1,3 g). Agitou-se a mistura completa à temperatura ambiente dum dia para o outro. Adicionou-se água (5 mL) e extraiu-se a mistura completa com acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secou-se sobre sulfato de magnésio. A evaporação do solvente sob pressão reduzida deu N-metil-N-[l-metil-5-(tritilamino)-1H-pirazol-4-il]-2-(tritilamino)acetamida (2,05 g). ESI-MS 690,3 [M+Na]+ (positivo) RMN de ΧΗ (DMSO-d6) δ 1,99 (3H, s) , 2,3-2,8 (3H, m) , 2,52 (3H, s), 5,44 (1H, s), 6,85 (1H, s), 6,9-7,5 (30H, m)

Preparação 94

Adicionou-se lentamente hidreto de aluminio-litio (455 mg) a tetra-hidrofurano (40 mL) a 0 °C e agitou-se a mistura durante 20 minutos. Adicionou-se N-Metil-N-[l-metil-5-(tritilamino)-1H-pirazol-4-il]-2-(tritilamino)acetamida (2 g) à mistura a 0 °C e, agitou-se a mistura completa durante 2 horas com aquecimento até à temperatura ambiente e aqueceu-se a refluxo durante 2 horas. Adicionou-se fluoreto de sódio (2,51 g) e água (862 mg) à mistura e, agitou-se a mistura completa à temperatura ambiente 160 durante 30 minutos. Eliminou-se o precipitado por filtração, e concentrou-se o filtrado sob pressão reduzida para dar um resíduo em bruto, o qual foi cromatografado (sílica gel; acetato de etilo:diclorometano=l:10) para dar N4,l-dimetil-N5-tritil-N4-[2-(tritilamino)etil]-lH-pirazole-4,5-diamina (740 mg). ESI-MS 676,2 [M+Na]+ (positivo) RMN de 4H (DMSO-dg) δ 1,7-2,0 (2H, m) , 1,98 (3H, s) , 2,2-2,4 (1H, m), 2,6-2,8 (2H, m) , 2,81 (3H, s) , 5,24 (1H, s) , 7,00 (1H, s) , 7,0-7,5 (30H, m)

Exemplo 55 3-({3-Amino-4-[N-(2-aminoetil)-N-metilamino]-2-metil-l-pirazolio}metil)—7β—[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2- (1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato O composto em epígrafe foi obtido a partir de N4,1-dimetil-N5-tritil-N4-[2-(tritilamino) etil] -lH-pirazole-4,5-diamina do mesmo modo que no Exemplo 32. ESI-MS 636,2 [M-H]“(negativo) RMN de 4H (D20) δ 1,60 (6H, s) , 2,60 (3H, s) , 3,0-3,2 (4H, m) , 3,19 e 3,39 (2H, ABq, J=17,7 Hz), 3,67 (3H, s) , 4,87 e 5,20 (2H, ABq, J=15,8 Hz), 5,22 (1H, d, J=4,9 Hz), 5,85 (1H, d, J=4,7 Hz), 7,90 (1H, s) 161

Preparação 95 A uma solução de [1-(2-fluoroetil)-lH-pirazol-5-il]formamida (15,7 g) em metanol (78 mL) adicionou-se ácido clorídrico concentrado (21 mL) à temperatura ambiente. Agitou-se a mistura reaccional durante 3,5 horas e evaporou-se in vacuo. Dissolveu-se o resíduo em acetato de etilo e lavou-se com solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio e concentrou-se in vacuo para dar 1-(2-fluoroetil)-lH-pirazol-5-amina (12 g). RMN de (DMSO-ds) δ 4,15 (2H, dt, J=25,2, 5,1 Hz), 4,66 (2H, dt, J=4 7,2, 5,1 Hz), 5,1 (2H, s 1), 5,27 (1H, d, J=l,7 Hz), 7,06 (1H, d, J=1,7 Hz)

Preparação 96 A uma solução de 1-(2-fluoroetil)-lH-pirazol-5-amina (12 g) em etanol (30 mL) adicionou-se ácido clorídrico concentrado (70 mg) e nitrito de isoamilo (10,9 g) . Agitou-se a mistura reaccional a 25-38 °C durante 2 horas. Adicionou-se éter diisopropílico e hexano à mistura reaccional, purificou-se o óleo resultante por cromatografia em coluna sobre sílica gel (acetato de etilo :hexano=l: 2 -> 1:1 -> 2:1 -> 1:0) para dar 1-(2-fluoroetil)-4-nitroso-lH-pirazol-5-amina (4,8 g). RMN de 2H (DMSO-d6) δ 4,10-4,90 (4H, m) , 7,09 e 8,59 (1H, s), 8,20 e 8,26 (1H, s 1) 162

Preparação 97 A uma solução de 1-(2-fluoroetil)-4-nitroso-lH-pirazol-5-amina (4,8 g) em água (30 mL) e metanol (30 mL) adicionou-se ácido sulfúrico (2,98 g) e paládio a 10% sobre carvão (2,5 g), e hidrogenou-se a mistura sob pressão de balão durante 7,5 horas. Filtrou-se a mistura reaccional através de um leito de Celite, e concentrou-se o filtrado in vacuo. Adicionou-se 2-propanol ao resíduo, e recolheu-se o precipitado por filtração para dar sulfato de 1-(2-fluoroetil)-lHpirazole-4,5-diamina (7 g). RMN de 2H (D20) δ 4,25-4,95 (4H, m), 7,66 (1H, s)

Preparação 98 A uma suspensão de sulfato de 1-(2-fluoroetil)-lH-pirazole-4,5-diamina (3 g) em tetra-hidrofurano (30 mL) adicionou-se {3- [ (2,5-dioxo-l-pirrolidinil)oxi]-3-oxopropil}carbamato de terc-butilo (3,9 g) e N,N-diisopropiletilamina (3,5 g) sob arrefecimento com gelo. Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 2 horas. Adicionou-se uma solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio e cloreto de sódio, e extraiu-se a mistura com acetato de etilo-tetra-hidrofurano (três vezes). Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio e concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna sobre sílica gel (acetato de etilo -> acetato de etilo:etanol=8:1) para dar (3-{[5-amino-l-(2-fluoroetil)-lH-pirazol-4-il]amino}-3-oxopropil)carbamato de terc-butilo (2,3 g). 163 RMN de XH (DMSO-dg) δ 1,38 (9H, s) , 2,36 (2H, t, J=7,l Hz), 3,10-3,27 (2H, m) , 4,16 (2H, dt, J=25,5, 5,0 Hz), 4,67 (2H, dt, J=4 7,2, 5,0 Hz), 5,27 (2H, s 1), 6,75-6, 90 (1H, m) , 7,23 (1H, s) , 9,08 (1H, s 1)

Preparação 99 A uma solução de (3-{[5-amino-l-(2-fluoroetil)-lH-pirazol-4-il]amino}-3-oxopropil)carbamato de terc-butilo (2,3 g) em N,N-dimetilformamida (12 mL) adicionou-se trietilamina (1,48 g), 4-dimetilaminopiridina (35,6 mg) e cloreto de tritilo (2,2 g) à temperatura ambiente. Agitou-se a mistura reaccional durante 2 horas e adicionou-se água. Extraiu-se a mistura com acetato de etilo, lavou-se a camada orgânica com água e solução aquosa de cloreto de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio e concentrou-se in vácuo. Adicionou-se acetonitrilo, e recolheu-se o precipitado por filtração para dar (3—{[1— (2— fluoroetil)-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-3-oxopropil)carbamato de terc-butilo (2 g). RMN de XH (DMSO-de) δ 1,39 (9H, s), 2,05 (2H, t, J=7,2 Hz), 3, 00-3, 08 (2H, m), 3,23 (2H, dt, J=25,3, 5,1 Hz), 4,41 (2H, dt, J=47,1, 5,1 Hz) 164

Exemplo 56 3-({3-Amino-4-[(3-aminopropionil)amino]-2-(2—fluoroetil)-1-pirazolio}metil)-7β-[(z)-2-(5-amino-l, 2,4-tiadiazol-3-il) -2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de (3—{[1— (2 — fluoroetil)-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}-3-oxopropil)carbamato de terc-butilo do mesmo modo que no Exemplo 38. RMN de XH (D20) δ 2,89 (2H, t, J=6,5 Hz), 3,22 (1H, d, J=9,2 Hz), 3,34 (1H, t, J=6,5 Hz), 3,50 (1H, d, J=9,2 Hz), 4,55-4,95 (4H, m), 5,08 (2H, s 1), 5,26 (1H, d, J=4,9 Hz), 5,84 (1H, d, J=4,9 Hz), 8,09 (lH,s)

Preparação 100 l-Metil-7-nitroso-lH-imidazo[l,2-b]pirazole O composto em epígrafe foi obtido a partir de 1-metil-lH-imidazo[1,2-b]pirazole do mesmo modo que na Preparação 96. RMN de 1R (DMSO-d6) δ 3,93 (1H, s) , 7,48 (1H, m) , 7,92 (1H, m), 9,03 (1H, s) 165

Preparação 101

Sulfato de 1-metil-lH-imidazo[1,2-b]pirazol-7-amina O composto em epígrafe foi obtido a partir de l-metil-7-nitroso-lH-imidazo[1,2-b]pirazole do mesmo modo que na

Preparação 97. RMN de 2Η (DMSO-de) δ 3,73 (3H, s) , 7,24 (1H, m) , 7,62 (2H, m)

Preparação 102 { (Z)- [ (1-Metil-lH-imidazo[1,2-b]pirazol-7-il)amino]metilidenojbiscarbamato de di-terc-butilo O composto em epígrafe foi obtido a partir de sulfato de 1-metil-lH-imidazo[1,2-b]pirazol-7-amina do mesmo modo que na Preparação 64 . RMN de (DMSO-d6) δ 1,34 (9H, s) , 1,52 (9H, s) , 3,61 (3H, s) , 7,14 (1H, m), 7,42 (1H, m), 7,52 (1H, m) 166

Exemplo 57 7β-[(Z)-2-(5-Amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-{[7-guanidino-l-metil-5-(1H— imidazo[1,2-b]pirazolio)]metil}-3-cefeme-4-carboxilato 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de { (Z) — [ (1 — metil-lH-imidazo[1,2-b]pirazol-7-il)amino]metilideno}-biscarbamato de di-terc-butilo do mesmo modo que no Exemplo 43. RMN de XH (D20) δ 1,51 (6H, s) , 3,40 (2H, m) , 3,85 (3H, s) , 5,15-5,30 (3H, m), 5,83 (1H, d, J=4,8 Hz), 7,49 (1H, d, J=2,2 Hz), 8,02 (1H, d, J=2,2 Hz), 8,27 (1H, d, J=1,0 Hz) IV (KBr) 3400, 3392, 1770, 1672, 1606, 1531 cm-1

Preparação 103 {3-[(1-Metil-lH-imidazo[1,2-b]pirazol-7-il)amino]-3-oxopropil]carbamato de terc-butilo O composto em epígrafe foi obtido a partir de sulfato de 1-metil-lH-imidazo[1,2-b]pirazol-7-amina e ácido 3-[(terc-butoxicarbonil)amino]propanóico do mesmo modo que na Preparação 70. RMN de 2H (DMSO-dê) δ 1,43 (9H, s) , 2,61 (2H, m) , 3,49 (2H, m), 3,65 (3H, s), 7,22 (1H, m), 7,26 (1H, m), 7,44 (1H, m) 167

Exemplo 58 3-({7-[(3-Aminopropanoil)amino]-l-metil-5-(lH-imidazo[1,2-blpirazolio)}metil)-7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxilato 0 composto em epígrafe foi obtido a partir de {3-[(1-metil-lH-imidazo[1,2-b]pirazol-7-il)amino]-3-oxopropil}carbamato de terc-butilo do mesmo modo que no Exemplo 43. RMN de (D20) δ 1,50 (6H, s) , 2,97 (2H, d, J=6,5 Hz), 3,36 (2H, d, J=6,5 Hz), 3,4 (2H, m) , 3,81 (3H, s) , 5,15-5,30 (3H, m) , 5,82 (1H, d, J=4,8 Hz), 7,44 (1H, d, J=2,2 Hz), 7,98 (1H, d, J=2,2 Hz), 8,11 (1H, d, J=1,0 Hz) IV (KBr) 3401, 1770, 1666, 1606, 1525 cm'1

Preparação 104 A uma suspensão de [l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il] carbamato de fenilo (4,6 g) em N,N-dimetilformamida (32 mL) adicionou-se trietilamina (1,08 g) e 1-piperazinacarboxilato de terc-butilo (1,99 g) . Agitou-se a mistura reaccional durante 3 horas e verteu-se para água. Extraiu-se a mistura com acetato de etilo e concentrou-se a camada orgânica in vacuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna sobre sílica gel (acetato de etilo -> acetato de etilo:etanol=20:1) para dar 4-({[l-metil-5-(tritilamino)-lH-pirazol-4-il]amino}carbonil)-1-piperazinacarboxilato de terc-butilo (4,7 g). 168 RMN de 1E (CDCI3) δ 1,46 (9H, s), 2,90 (3H, s) , 3,05-3,25 m) , 3,30-3,45 (4H, m) , 4,76 (1H, s 1) , 5,34 (1H, s 1), 7,10-7,30 (16Η, m)

Exemplo 59 A uma solução de 7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-terc-butoxicarbonil-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-clorometil-3-cefeme-4-carboxilato de 4-metoxibenzilo (2 g) em N,N-dimetilformamida (6 mL) adicionou-se 1,3-bis(trimetilsilil)ureia (3 g) e, agitou-se a mistura reaccional durante 30 minutos. Adicionou-se iodeto de potássio (680 mg) a esta solução e, agitou-se a mistura durante 30 minutos. Adicionou-se 4-({[l-metil-5-(tritilamino)-1H-pirazol-4-il]amino}carbonil)-1-piperazinacarboxilato de terc-butilo (2 g) a esta solução. Agitou-se a mistura reaccional a 25 °C durante 23 horas e verteu-se para uma mistura de acetato de etilo-água-solução aquosa de cloreto de sódio a 20%. Lavou-se a camada orgânica com uma mistura de solução aquosa de tiossulfato de sódio a 10% e solução aquosa de cloreto de sódio a 20%. Lavou-se a camada orgânica sucessivamente duas vezes com solução aquosa de trifluoroacetato de sódio a 10% e solução aquosa de cloreto de sódio a 20%. Concentrou-se a camada orgânica in vacuo até um volume de, aproximadamente, 10 mL. Adicionou-se o concentrado a éter diisopropilico, agitou-se a suspensão durante 1 hora. Recolheu-se o sólido resultante por filtração e secou-se.

Dissolveu-se o sólido em diclorometano (6 mL). A esta solução adicionou-se anisole (2 mL) e ácido trifluoroacético 169 (6 mL). Agitou-se a mistura reaccional durante 4 horas e verteu-se para éter diisopropilico. Recolheu-se o sólido resultante por filtração e secou-se. Purificou-se este sólido por HPLC preparativa utilizando uma coluna ODS. Concentrou-se o eluato contendo um produto desejado in vacuo. Ajustou-se o concentrado até cerca de pH 1 com ácido clorídrico concentrado e cromatografou-se sobre Diaion® HP-20 (Mitsubishi Chemical Corporation) eluindo com 2-propanol aquoso a 20%. Concentrou-se o eluato in vacuo e, adicionou-se ácido sulfúrico a 2 M. Liofilizou-se a mistura para dar hidrogenossulfato do ácido 3-({3-amino-2-metil-4-[(1-piperazinilcarbonil)amino]-1-pirazolio)metil)-7β-[(Z)-2-(5-amino-l,2,4-tiadiazol-3-il)-2-(1-carboxi-l-metiletoxiimino)acetamido]-3-cefeme-4-carboxílico (679 mg). RMN de ΧΗ (D20) δ 1,60 (6H, s) , 3,20 (2H, d, J=17,7 Hz), 3,25-3, 45 (4H, m) , 3,45 (1H, d, J=17,7 Hz) 3,72 (3H, m) , 3,75- 3,85 (4H, m) , 5,00 (1H, d, J=15,7 Hz), 5,24 (1H, d, J=15,7 Hz), 5',25 (1H, d, J=4,8 Hz), 5,86 (1H, d, J=4,8 Hz), 7,89 (1H, s)

Este pedido baseia-se no pedido N° 2002952355 apresentado na Austrália em 30 de Outubro de 2002 e no pedido N° 2003904813 apresentado na Austrália em 4 de Setembro de 2003, cujos conteúdos são aqui incorporados por referência.

Lisboa, 24 de Outubro de 2007 170

Claims (16)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Composto da fórmula [I]:

   em que R1 é alquilo Ci-C6, hidroxialquilo (Ci-C6) ou haloalquilo (Ci-C6) , e R2 é hidrogénio ou grupo de protecção de amino, ou R1 e R2 estão ligados em conjunto e formam alquileno Ci-C6 ou alcenileno C2-C6; R3 é hidrogénio ou alquilo Ci-Cê; R4 é N (A) k—(NH) m (0)
2. 2. Composto da reivindicação 1, em que R1 é alquilo Ci-Cô ou hidroxialquilo (Ci-Cô) , e R2 é hidrogénio ou grupo de protecção de amino, ou R1 e R2 estão ligados em conjunto e formam alquileno Ci-C6; R3 é hidrogénio; A é 2 X

   em que X é 0 ou NH; R7 é hidrogénio ou grupo de protecção de amino; R9 é amino ou amino protegido; e p é 0, 1 ou 2, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
3. 3. Composto da reivindicação 2, em que R8 é hidrogénio, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
4. 4. Composto da reivindicação 1, em que R1 é alquilo Ci-C6, hidroxialquilo (Ci-C6) ou haloalquilo (Ci-Cô) , e R2 é hidrogénio, arilalquilo (Ci-Cê) ou acilo, ou R1 e R2 estão ligados em conjunto e formam alquileno Ci_Cê ou alcenileno C2-C6; R5 é carboxilo ou carboxilo esterifiçado; R6 é amino ou acilamino; R7 é hidrogénio, alquilo Ci-C6 ou acilo; e R9 é amino, mono ou dialquil (Ci-C6) amino, acilamino, guanidino, acilguanidino ou grupo heterociclico de 3 até 8 membros saturado contendo 1 até 4 átomos de azoto opcionalmente substituídos com amino ou acilamino, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 3
5. 5. Composto da reivindicação 4, em que R1 é alquilo Ci-Cê ou hidroxialquilo (Ci—Ce) , e R2 é hidrogénio, arilalquilo(Ci-Cê) ou acilo, ou R1 e R2 estão ligados em conjunto e formam alquileno C!-C6; R5 é carboxilo ou carboxilo esterifiçado; R6 é amino ou acilamino; R7 é hidrogénio ou acilo; e R9 é amino ou acilamino, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
6. 6. Composto da reivindicação 5 em que R1 é alquilo Ci-Cê ou hidroxialquilo (Ci-Cê), e R2 é hidrogénio, arilalquilo (Ci-Cê) , alcanoilo Ci-C6 ou alcoxi (Ci-Cé) carbonilo, ou R1 e R2 estão ligados em conjunto e formam alquileno Ci-C6; R5 é carboxilo ou alcoxi (Ci-C6) carbonilo; R6 é amino, alcanoil (Ci-Cê) amino ou alcoxi (Ci-Cõ) carbonilamino; R7 é hidrogénio, alcanoilo Ci-C6 ou alcoxi (Ci-C6) carbonilo; e R9 é amino, alcanoil (Ci-Cô) amino ou alcoxi(Ci-C6)carbonilamino, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 4
7. 7. Composto da reivindicação 6, em que R1 é alquilo Ci-Cê ou hidroxialquilo(Ci-Cê), e R2 é hidrogénio, ou R1 e R2 estão ligados em conjunto e formam alquileno Ci-C6; R5 é carboxilo; R6 é amino; R7 é hidrogénio ou alcanoilo Ci-C6; e R9 é amino, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
8. 8 em que R1 é alquilo Ci-Cê, hidroxialquilo (Ci-Cô) ou haloalquilo (Ci-Cê) , e R2 é hidrogénio ou grupo de protecção de amino, ou R1 e R2 estão ligados em conjunto e formam alquileno C1-C6 ou alcenileno C2-C6; R3 é hidrogénio ou alquilo Ci-Cg; R4 é

   (CHj)—R9 em que A é XII —c— i

   em que X é 0 ou NH, R7 é hidrogénio, alquilo Ci-Cê ou grupo de protecção de amino, R8 é hidrogénio ou hidroxilo, R9 é amino, mono ou dialquil (Ci-C6) amino, amino protegido, guanidino, guanidino protegido ou grupo heterocíclico de 3 até 8 membros saturado contendo 1 até 4 átomos de azoto opcionalmente substituídos com amino ou amino protegido, 9 k, m, n e q são, independentemente, 0 ou 1, e p é 0, 1, 2 ou 3; R5 é carboxilo ou carboxilo protegido; e R6 é amino ou amino protegido, ou um seu sal, o qual compreende (1) fazer reagir um composto da fórmula [II]:

   [II] em que R1, R2, R3 e R4 são, cada, como definidos acima, ou um seu derivado reactivo no grupo amino, ou um seu sal com um composto da fórmula [III]: R' H N-rr- 3cvch* <> Rs * NII C—COOH [III] em que R5 e R6 são, cada, como definidos acima, ou um seu derivado reactivo no grupo carboxilo, ou um seu sal para dar um composto da fórmula [I]: 10

   em que R1, R2, R3, R4, R5 e R6 são, cada, como definidos acima, ou um seu sal, ou (2) submeter um composto da fórmula [Ia]:

   em que R1, R2, R3, R5, R6, R7, R8, A, k, m, n, p e q são, cada um, como definidos acima, e R9a é amino protegido, guanidino protegido ou grupo heterocíclico de 3 até 8 membros saturado contendo 1 até 4 átomos de azoto substituídos com amino protegido, ou um seu sal, a reacção de eliminação do grupo de protecção de amino para dar um composto da fórmula [Ib] : 11

   em que R1, R2, R3, R5, R6, R7, R8, A, k, m, n, p e q são, cada um, como definidos acima, e R9b é amino, guanidina ou grupo heterociclico de 3 até 8 membros saturado contendo 1 até 4 átomos de azoto substituídos com amino, ou um seu sal, ou (3) fazer reagir um composto da fórmula [VI]:

   ch2—Y [VI] em que R5 e Rê são, cada, como definidos acima, R10 é carboxilo protegido, e Y é um grupo de saida, ou um seu sal com um composto da fórmula [VII]:

   R3 I R [VII] 12 1 em que R1, R2, R3 e R4 são, cada, como definidos acima, ou um seu sal para dar um composto da fórmula [VIII]:

   em que R1, R2, R3, R4, R5, R6 e R10 são, cada, como definidos acima, e Ζθ é um anião, ou um seu sal, e submeter o composto da fórmula [VIII] ou um seu sal a reacção de eliminação do grupo de protecção de carboxilo, para dar a composto da fórmula [I]:

   em que R1, R2, R3, R4, R5 e R6 são, cada, como definidos acima, ou um seu sal.

   8. Composto da reivindicação 1 em que R4 é seleccionado do grupo consistindo de 5 — NH—A-(NH)—(CH2)Y-(CH2)p'R14 Ο 11 -NH-C-(NH)—0-( CH2)—(CH2) p-R14 0 OH li i —NH—C—-CH-(CH2) p-R14 R7 1 -N-(CHj)—(CHj)— R14 O li -NH-C-(NH)—(CH2)—(CH2)p-R15 e 0 ii NH C—(NH)~R16 em que R7, A, m, p e q são, cada um, como definidos na reivindicação 1, R14 é amino, mono ou dialquil (Ci-C6) amino ou amino protegido, R15 é guanidino ou guanidino protegido, e R16 é grupo heterocíclico de 3 até 8 membros saturado contendo 1 até 4 átomos de azoto opcionalmente substituídos com amino ou amino protegido, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 6
9. 9. Composto da reivindicação 1, em que R4 é seleccionado do grupo consistindo de O II —NH—C— NH— (CH2)—(CH2) p-R9 O II —NH—C"( CH2)—{CH2) p-R9 O ii —NH—C—NH-0-(CH2)—(CH2)p-R9 O li , , 9 —NH—C~0“(CH2)—(CH2)p-Ry O OH II I —NH— C— CH-(CH2) p-R9 NH —NH— C-(CH2)—(CH2) p-R9 e R7 l —N—(CH2)—(CH2)—R9 em que p é 0, 1 ou 2, q é 0 ou 1, 7 R7 é hidrogénio ou grupo de protecção de amino, e R9 é amino ou amino protegido, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

   9 em que A é 1

   °w° o

   ΛΛ em que X é 0 ou NH, R7 é hidrogénio, alquilo Ci-Cê ou grupo de protecção de amino, R8 é hidrogénio ou hidroxilo, R9 é amino, mono ou dialquil (Ci-Cê) amino, amino protegido, guanidino, guanidino protegido ou grupo heterociclico de 3 até 8 membros saturado contendo 1 até 4 átomos de azoto opcionalmente substituídos com amino ou amino protegido, k, m, n e q são independentemente 0 ou 1, e p é 0, 1, 2 ou 3; R5 é carboxilo ou carboxilo protegido; e R6 é amino ou amino protegido, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
10. 10. Composto da reivindicação 9, em que R7 é hidrogénio, alcanoilo Ci-Cê alcoxi(Ci-C6)carbonilo; e R9 é amino, alcanoil (Ci-C6) amino alcoxi (Ci-Cê) carbonilamino, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
11. 11. Composto da reivindicação 10 em que R7 é hidrogénio ou alcanoilo Ci-C6; e R9 é amino, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
12. 12. Processo de preparação de um composto da fórmula [I]: ou ou
13. 13. Composição farmacêutica compreendendo um composto da reivindicação 1 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável combinado com um veiculo farmaceuticamente aceitável. 13
14. 14. Composto da reivindicação 1 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para ser utilizado como um medicamento.
15. 15. Composto da reivindicação 1 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para ser utilizado como um agente antimicrobiano.
16. 16. Utilização de um composto da reivindicação 1 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para o fabrico de um medicamento para tratar doenças infecciosas. Lisboa, 24 de Outubro de 2007 14