PT1546127E

PT1546127E - Novos derivados de piridinamida e a sua utilização

Info

Publication number: PT1546127E
Application number: PT03750639T
Authority: PT
Inventors: Paul William Manley; Werner Breitenstein; Sandra Jacob; Pascal Furet
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2002-09-27
Filing date: 2003-09-26
Publication date: 2007-11-07
Also published as: PL374443A1; GB0222514D0; RU2378267C2; JP4463685B2; HK1080459A1; ES2288615T3; DE60315479T2; AU2003270277B2; KR100876055B1; ATE369355T1; SI1546127T1; EP1546127B1; ECSP055701A; JP2006508064A; BR0314797A; KR20050047128A; NZ538930A; KR20070098940A; EP1546127A1; AU2003270277A1

Description

ΡΕ1546127 1 DESCRIÇÃO "NOVOS DERIVADOS DE PIRIDINAMIDA E A SUA UTILIZAÇÃO" A invenção diz respeito a novos derivados substituídos de N-(3-benzoílaminofenil)-4-piridil-2-pirimidi-namina, a processos para a sua preparação, a composições farmacêuticas que os contenham, à sua utilização opcionalmente em combinação com um ou mais outros compostos activos do ponto de vista farmacêutico para a terapia de uma doença que reaja à inibição da actividade de proteína quinase, em especial de uma doença neoplásica, e a um método para o tratamento de uma tal doença.

As proteína quinases (PK) são enzimas que catalisam a fosforilação de resíduos específicos de serina, treonina ou tirosina em proteínas celulares. Estas modificações post-translacionais das proteínas substrato actuam como interruptores moleculares regulando a proliferação, a activação e/ou a diferenciação celular. Foi observada uma actividade aberrante ou excessiva das PK em muitos estados de doença, incluindo em patologias proliferativas benignas e malignas. Numa série de casos, tem sido possível tratar doenças, tais como doenças proliferativas, recorrendo à utilização de inibidores de PK in vitro e in vivo.

Atento o grande número de inibidores de proteína 2 ΡΕ1546127 quinase, e à multiplicidade de doenças proliferativas e de outras doenças relacionadas com PK, existe uma necessidade permanente de se proporcionarem novas classes de compostos que sejam úteis como inibidores de PK e portanto no tratamento destas doenças relacionadas com as PK. Aquilo que é necessário são novas classes de compostos inibidores de PK que sejam vantajosas do ponto de vista farmacêutico. 0 Cromossoma Philadelphia é um marcador para a leucemia mielogenosa crónica (CML) e contém um gene híbrido que contém exões no terminal azotado do gene bcr e a parte principal do terminal carbonado (exões 2-11) do gene c-abl. 0 gene codifica para uma proteína quimérica com 190 kD, 210 kD, ou com 230 kD, consoante aquele de entre três pontos de quebra alternativos com o qual estiver envolvido o bcr. A parte Abl da proteína Bcr-Abl contém a tirosina quinase Abl que se encontra estreitamente regulada no c-Abl de tipo selvagem, mas constitutivamente activada na proteína de fusão Bcr-Abl. Esta tirosina quinase desregulada interactua com muitos caminhos de sinalização celulares, levando à transformação e à proliferação desregulada das células (Lugo et al., Science 247, 1079 [1990]). O Bcr-Abl de p210 kDal está expresso em 95% dos pacientes com CML e em aproximadamente 33% dos pacientes com leucemia linfoblástica aguda (ALL). A expressão da proteína mais pequena de pl90 kD ocorre mais frequentemente na ALL, mas raramente na CML e é caracterizada clinicamente por uma monocitose proeminente. A proteína de fusão de 230 3 ΡΕ1546127 kD está associada à leucemia neutrofilica crónica que é rara, cuja progressão até a crise blástica é lenta. Nos estádios avançados de CML e na ALL em especial, emergem frequentemente clones nos quais o domínio de quinase da proteína Bcr-Abl está mutado. Incluem-se nesses mutantes, por exemplo, as transformações E225V e M351T (Shah et ai., Câncer Research 2, 117-225 [2002]).

Os oncogenes ras mutantes estão frequentemente associados com a progressão dos tumores. As proteínas Ras são expressas a partir de três genes diferentes, nomeadamente, Neuroblastoma(N)-ras, Harvey(Ha)-ras e Kirsten(K)-ras. O K-ras mutava mais amiúde em tumores sólidos, tais como os cancros do cólon, do pulmão e em especial do pâncreas, e o N-ras nos tumores hematopoiéticos, predominantemente na leucemia mieloginosa aguda (Lyons et al., Endocrine-Related Câncer 8, 219 [2001]). Demonstrou-se que a Ras regulava diversos caminhos que contribuem para a transformação celular, incluindo por exemplo o caminho Raf/MEK, por se ligar a uma quinase Raf e a activar. A EP 0 564.409 da Ciba-Geigy AG (publicada a 06.10.1993) e o WO 02/22.597 da Novartis AG (publicada a 21.03.2002) proporcionam ambas derivados de N-fenil-2-pirimidinamina que são adequados para a terapia de doenças tumorais. O composto do Exemplo 21 descrito na EP 0 564.409 é conhecido como imatinib, o qual sob a forma do seu sal mesilato (Glivec®) representa o padrão de Ouro para o tratamento da leucemia mielóide crónica. As mutações na 4 ΡΕ1546127 tirosina quinase Bcr-Abl podem conferir resistência ao Glivec®. 0 WO 02/093164 da Axxima Pharmaceuticals AG (publicado a 21.11.2002) descreve a utilização de piridil-pirimidinas incluindo as descritas na EP 0 564.409, para a profilaxia e para o tratamento de infecções por priões e de doenças a priões, em especial a BSE e a vCJD.

Os derivados de N-(3-benzoilaminofenil)-4-piri-dil-2-pirimidinamina com a fórmula 1, descritos adiante em mais pormenor, apresentam uma excelente inibição da acti-vidade de proteina quinases, em especial uma inibição de uma ou mais tirosina quinases, tais como Bcr-Abl, Bcr-Abl mutante, c-Abl, Raf, as tirosina quinases receptoras PDGF-R, FIt3, VEGF-R, EGF-R, e c-Kit, bem como combinações de duas ou mais destas. Em especial, os compostos da invenção evidenciam uma potência elevada contra algumas das formas mutantes de Bcr-Abl, que têm sido observadas em pacientes resistentes a fármacos. Atentas estas actividades, podem utilizar-se os compostos no tratamento das doenças relacionadas a actividades especialmente aberrantes ou excessivas destes tipos de quinases, por exemplo para o tratamento de caos particulares de leucemia e de tumores sólidos tais como os do cólon, do pulmão, e o cancro pancreático. A invenção diz respeito a um composto cm a fórmula 1, 5 ΡΕ1546127

na qual,

Ri represente hidrogénio e R2 represente NR5R6, ou Ri represente NR5R6 e R2 represente hidrogénio; R3 represente alquilo, fluoroalquilo, hidroxial-quilo ou carbamoílo, inferiores; R4 represente hidrogénio, alquilo inferior ou halogéneo; e R5 e R6 representem, independentemente um do outro, hidrogénio, alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior, alcoxil inferior-alquilo inferior, aciloxil inferior-alquilo inferior, carboxi-alquilo inferior, alcoxicarbonil inferior-alquilo inferior, amino-alquilo inferior, alquil-amino inferior-alquilo inferior, di(alquil inferior)amino-alquilo inferior, N-alquil inferior-piperidinilo, N-alquil inferior-pirrolidinilo, ou acilo inferior, ou R5R6 representem em conjunto alquileno com quatro, cinco ou seis átomos de carbono, oxa-alquileno inferior com um oxigénio e 6 ΡΕ1546127 três ou quatro átomos de carbono, ou aza-alquileno inferior com um azoto e três ou quatro átomos de carbono, em que o átomo de azoto seja não substituído ou seja substituído com alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior ou alcoxil inferior-alquilo inferior, e em que o alquileno inferior possa em cada caso ser parcial ou totalmente insaturado e/ou os átomos de carbono do alquileno inferior possam ser substituídos com alquilo inferior, hidroxilo ou alcoxilo inferior; e um N-óxido ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico de um tal composto.

Os termos gerais utilizados acima e adiante neste documento têm de preferência os seguintes significados, no contexto desta especificação, a não ser aonde seja indicado algo em contrário: 0 qualificativo "inferior" denota um grupo que contenha no máximo, e incluindo 7, e em especial no máximo e incluindo 4, átomos de carbono, sendo os grupos em questão quer lineares quer ramificados com um ou diversos pontos de ramificação.

Quando se utilizar para compostos, sais, e outros semelhantes, a forma de plural deve ser entendida como referindo-se também a um único composto, sal, ou outros semelhantes. 7 ΡΕ1546127

Quaisquer átomos de carbono assimétricos podem estar presentes nas configurações (R)-, (S) — ou (R,S)-, preferivelmente nas configurações (R)- ou (S)-. Os compostos podem estar portanto presentes como misturas de isómeros ou como isómeros puros, de preferência como dias-tereómeros enantiomericamente puros. A invenção diz respeito também aos possíveis tautómeros dos compostos com a fórmula 1.

Alquilo inferior é de preferência alquilo com entre 1 e 7, incluindo um e outro caso, átomos de carbono, de preferência com entre 1 e 4 átomos de carbono, incluindo um e outro caso, e é linear ou ramificado; de preferência, alquilo inferior é butilo, tal como n-butilo, sec-butilo, isobutilo, terc-butilo, propilo, tal como n-propilo ou isopropilo, etilo ou metilo. De preferência, alquilo inferior será metilo, propilo ou terc-butilo.

Acilo inferior é de preferência formilo ou alquilo inferior-carbonilo, em especial acetilo.

Hidroxialquilo é de preferência hidroxi-alquilo inferior, de preferência hidroximetilo, 2-hidroxietilo ou 2-hidroxi-2-propilo.

Fluoroalquilo é em particular fluoro-alquilo inferior, de preferência trifluorometilo ou pentafluoroetilo. ΡΕ1546127

Halogéneo é em particular flúor, cloro, bromo ou iodo, em especial flúor, cloro ou bromo.

Alcoxilo inferior é em particular metoxilo, etoxilo, isopropoxilo ou terc-butoxilo.

Alcoxil inferio-carbonilo é em especial terc-butoxicarbonilo, iso-propoxicarbonilo, metoxicarbonilo ou etoxicarbonilo.

Os sais são em especial os sais aceitáveis do ponto de vista farmacêutico dos compostos com a fórmula 1.

Esses sais são formados, por exemplo, na qualidade de sais de adição a ácido, de preferência com ácidos orgânicos ou inorgânicos, a partir de compostos com a fórmula 1 contendo um átomo de azoto básico, em especial os sais aceitáveis do ponto de vista farmacêutico. São ácidos inorgânicos adequados, por exemplo, os ácidos halogenados, tais como o ácido clorídrico, o ácido sulfúrico, ou o ácido fosfórico. São ácidos orgânicos adequados, por exemplo, os ácidos carboxilicos, fosfónicos sulfónicos ou sulfâmicos, por exemplo ácido acético, ácido propiónico, ácido octa-nóico, ácido decanóico, ácido dodecanóico, ácido glicólico, ácido láctico, ácido fumárico, ácido succinico, ácido adipico, ácido pimélico, ácido subérico, ácido azelaico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, aminoácidos, tais como o ácido glutâmico ou o ácido aspártico, ácido maleico, ácido hidroximaleico, ácido metilmaleico, ácido 9 ΡΕ1546127 ciclo-hexanocarboxílico, ácido adamantanocarboxílico, ácido benzóico, ácido salicilico, ácido 4-aminossalicílico, ácido ftálico, ácido fenilacético, ácido mandélico, ácido cinâ-mico, ácido metanossulfónico, ácido etanossulfónico, ácido 2-hidroxietanossulfónico, ácido etano-1,2dissulfónico, ácido benzenossulfónico, ácido 2-naftalenossulfónico, 1,5-naftalenodissulfónico, ácido 2-, 3- ou 4-metilbenzenos-sulfónico, ácido metilsulfúrico, ácido etilsulfúrico, ácido dodecilsulfúrico, ácido N-ciclo-hexilsulfâmico, ácido N-metilsulfâmico, ácido N-etilsulfâmico, ácido N-propil-sulfâmico, ou outros ácidos protónicos orgânicos, tais como o ácido ascórbico.

Para o seu isolamento ou a sua purificação também é possível utilizarem-se ácidos que não sejam aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, por exemplo picratos ou percloratos. Para utilização terapêutica, só se empregam os sais aceitáveis do ponto de vista farmacêutco ou os compostos livres (e sempre que tal seja aplicável, sob a forma de preparações farmacêuticas), e estes são portanto preferidos.

Atenta a relação próxima entre os novos compostos sob a sua forma livre, e aqueles que estejam sob a forma dos seus sais, incluindo aqueles sais que se possam utilizar como intermediários, por exemplo na purificação ou na identificação dos novos compostos, qualquer referência aos compostos livres que esteja feita acima, ou seja feita adiante neste documento, deve ser entendida como referindo- 10 ΡΕ1546127 se também aos correspondentes sais, tal como é apropriado e conveniente.

Os compostos com a fórmula 1 e os seus N-óxidos possuem propriedades farmacológicas valiosas, tal como descrito acima e adiante neste documento. A eficácia destes compostos a titulo de inibi-dores da actividade de tirosina quinase em c-Abl, Bcr-Abl, Raf e receptor VEGF pode ser demonstrada como se segue:

Teste para a actividade contra a proteína tirosina quinase c-Abl. O teste é levado a cabo sob a forma de um ensaio de ligação a um filtro como se segue: Clona-se o domínio marcado com His de quinase de c-Abl e expressa-se no sistema de baculovirus/Sf9, tal como foi descrito por Bhat et al., J. Biol. Chem. 272, 16170-5 (1997). Purifica-se uma proteína de 37 kD (a c-Abl quinase) por um procedimento em dois passo sobre uma coluna de quelato de cobalto metálico, seguida por uma coluna de permuta aniónica, com um rendimento de 1-2 mg/L de células Sf9. A pureza da c-Abl quinase é > 90% tal como avaliada por SDS-PAGE depois de uma contrastação com azul de Coomassie. O ensaio contém: c-Abl quinase (50 ng), Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, MgCl2 10 mM, Na3V04 10 μΜ, DTT 1 mM e com 0,06 pCi/ensaio de [Y33P]-ATP (ATP 5 μΜ) utilizando 30 pg/mL de poli-Ala,Glu,Lys,Tyr-6:2:5:1 (Poli-AEKY, Sigma P1152) na presença de 1 % de DMSO, volume total de 30/pL. Terminam-se as reacções adicionando 10 pL de EDTA 250 mM, e 30 pL da 11 ΡΕ1546127 mistura reaccional que se transferem para um ponto de uma membrana Immobilon-PVDF (Millipore, Bedford, MA, USA) que previamente se deixou embeber durante 5 minutos em metanol, se lavou com água, e em seguida se deixou embeber durante 5 minutos em solução aquosa de H3PO4 a 5 % e se montou numa linha de vácuo não ligada à fonte de vazio. Depois de se prepararem pontos de todas as amostras, liga-se o vazio e lava-se cada poço com 200 μΕ de H3PO4 a 5 %. Removem-se as membranas e lavam-se num agitador com H3PO4 a 5 % (4 vezes) e uma vez com etanol. Contam-se as membranas depois de se secarem à temperatura ambiente, montando-se numa moldura Packard TopCount para placas de 96 poços, e de se adicionar 10 μL/poço de Microscint TM (Packard).

Teste para a actividade contra Bcr-Abl. Trans-fecta-se a linha celular progenitora murina 32Dcl3 com o vector de expressão pGDp210Bcr/Abl (32D-bcr/abl) de p210 Bcr-Abl, obtido junto de J. Griffin (Dana Faber Câncer Institute, Boston, MA, USA). As células expressam a proteína de fusão Bcr-Abl com uma quinase Abl constitutivamente activa, e proliferam independentemente do fac-tor de crescimento. Expandem-se as células num meio RPMI 1640 (AMIMED), 10% de soro fetal de vitelo, 2 mM em glutamina (Gibco) ("meio completo"), e prepara-se uma quantidade de reserva para o trabalho congelando aliquotas de 2 x 106 células por tubo, em meio de congelação (95% de soro fetal de vitelo, 5% de DMSO (SIGMA)). Depois de descongelar, as células são utilizadas durante no máximo 10-12 passagens, para as experiências. Para ensaios 12 ΡΕ1546127 celulares, dissolvem-se os compostos em DMSO e diluem-se com meio completo para se obter uma concentração inicial de 10 μΜ, seguindo-se a preparação de uma série de diluições a 1/3 em meio completo. Semeiam-se em cada poço 200.000 células 32D-Bcr/Abl em 50 μΒ de meio completo, em placas de cultura de tecidos de 96 poços com fundo redondo. Adicionam-se às células 50 μΒ por poço, das diluições em série a 1/3, do composto em teste, em triplicado. Utilizam-se como controlo células não tratadas. Incuba-se o composto em conjunto com as células, durante 90 minutos a 37°C, sob 5% de C02, seguindo-se uma centrifugação das placas de cultura de tecidos a 1300 rpm (centrífuga Beckman GPR) e a remoção dos sobrenadantes por aspiração cuidadosa de modo a não se remover nenhumas das células nas pastilhas. Lisam-se as pastilhas de células por adição de 150 μΒ de tampão de lise por poço (50 mM em Tris/HCl, pH 7,4, 150 mM em cloreto de sódio, 5 mM em EDTA, 1 mM em EGTA, contendo 1% de NP-40, 2 mM em orto-vanadato de sódio, 1 mM em PMSF, com 50 μρ/ηιΒ de aprotinina e com 80 μρ/ηϋΐ, de leupeptina), que ou se utilizam de imediato para o ELISA, ou se armazenam nas placas a -20°C até à sua utilização.

Revestem-se de um dia para o outro placas negras de ELISA (placas negras Packard HTRF-96) a 4°C, com 50 ng/poço do domínio policlonal de coelho anti-abl-SH3, o Ab 06-466 da Upstate em 50 pL de PBS. Depois de se lavar por três vezes com 200 μΒ/poço de PBS contendo 0,05% de Tween 20 (PBST), e com 0,5% de TopBlock (Juro), bloqueiam-se os locais residuais de ligação com 200 μΒ/poço de PBST, e com 13 ΡΕ1546127 3% de TopBlock durante 4 h à temperatura ambiente, seguindo-se uma incubação com 50 μΒ de lisados celulares não tratados ou tratados com composto (20 pg de proteína total por célula) durante 3-4 h a 4°C. Depois de 3 lavagens, adiciona-se 50 μμ/ροςο de Ab PY20 anti-fosfotirosina (AP) marcado com fosfatase alcalina (Zymed) diluído até 0,2 pg/mL em tampão de bloqueio, e incuba-se de um dia para o outro (4°C) . Durante todos os passos de incubação, as placas são tapadas com tampas de placas (Costar). Por último, as placas são lavadas mais três vezes com tampão de lavagem e mais uma vez com água desionizada, antes da adição de 90 μL/poço do substrato de AP, CDPStar RTU com Emerald II. As placas, agora seladas com tampas Packard TopSeal-A, são incubadas durante 45 minutos à temperatura ambiente no escuro e quantifica-se a luminescência medindo as contagens por segundo (CPS) com um Contador de Cintilação de Microplacas Packard Top Count (Top Count). A diferença entre a leitura do ELISA (CPS) obtido para os lisados das células 32D-Bcr/Abl, e a leitura para a linha de base do teste (todas as componentes, mas sem lisado celular) é calculada e tomada como sendo 100% reflectindo a proteína constitutiva fosforilada Bcr-Abl presente nestas células. A actividade do composto sobre a actividade da Bcr-Abl quinase é expressa em percentagem de diminuição da fosforilação da Bcr-Abl. Os valores para os IC50 e IC90 são determinados a partir da curvas de resposta a diversas doses, por extrapolação gráfica. 14 ΡΕ1546127

Teste para a actividade contra o mutante Bcr-Abl: A actividade dos compostos sobre a actividade da quinase mutante Bcr-Abl, M351 T, é avaliada tal como se descreveu acima, excepto que são utilizadas as células 32Dcl3 transfectadas com a Bcr-Abl mutante em vez de com a p210 Bcr-Abl.

Ensaio da proteina quinase c-Raf-1: Obtém-se proteína recombinante c-Raf-1 por infecção tripla de células Sf21 com baculovírus recombinante GST-c-Raf-1 em conjunto com baculovírus recombinantes v-Src e v-Ras que são necessários para a produção de quinase c-Raf-1 (Williams et ai., PNAS 1992; 89: 2922-6). É necessário Ras activo (v-Ras) para se recrutar o c-Raf-1 para a membrana celular, e o v-Src para fosforilar o c-Raf-1 para o activar por completo. Semeiam-se as células a 2,5 x 107 células por placa de 150 mm e deixa-se que se liguem a uma placa de 150 mm durante 1 hora à TA. Aspiram-se os meios de crescimento (SF900II contendo 10 % de FBS) e adicionam-se os baculovírus recombinantes GST-c-Raf-1, v-Ras e v-Src a valores de MOI de, respectivamente, 3,0, 2,5 e 2,5, num volume total de 4-5 mL.

Incubam-se as células durante 1 hora à TA e depois adiciona-se-lhes 15 mL de meio. Incubam-se as células infectadas durante 48-72 horas a 27°C. Raspam-se células Sf21 infectadas e recolhem-se num tubo de 50 mL, centrifugando-se durante 10 minutos a 4°C, a 1100 x g numa 15 ΡΕ1546127 centrífuga Sorvall. Lava-se a pastilha de células uma vez com PBS gelado e lisa-se com 0,6 mL de tampão de lise por cada 2,5 x 107 células. A lise completa das células é conseguida ao fim de 10 minutos sobre gelo, com uma pipetagem ocasional. Centrifugam-se os lisados celulares durante 10 minutos a 4°C e a 14.500 x g numa centrífuga Sorvall com um rotor SS-34, e transfere-se o sobrenadante para um novo tubo para se armazenar a -80°C. Purifica-se a c-Raf-1 dos lisados celulares recorrendo a 100 μΒ de um leito de pérolas de glutationa-sefarose 4B equilibradas em PBS gelado, por cada 2,5 x 107 células. Deixa-se a GST-c-Raf-1 ligar-se às pérolas a 4°C durante 1 hora com agitação de vaivém. Transfere-se a GST-c-Raf-1 com as pérolas a que se ligou, para uma coluna. Lava-se a coluna uma vez com tampão de lise e duas vezes com soro salino tamponizado com Tris e gelado. Adiciona-se tampão de eluição gelado e para-se o caudal da coluna para permitir que a glutationa livre interfira com a ligação da GST-c-Raf-1 com as pérolas de glutationa-sefarose. Recolhem-se fracções (1 mL) em tubos previamente arrefecidos. Cada tubo contém 10 % de glicerol (concentração final) para manter a actividade da quinase durante os ciclos de congelação e descongelação. As fracções purificadas de GST-c-Raf quinase 1 são armazenadas a -80°C.

Utiliza-se IkB como substrato para a c-Raf-1 quinase. Expressa-se a IkB em bactérias sob a forma da proteina BL21 marcada com His. Fazem-se crescer as bactérias LysS contendo o plasmídeo IkB até a uma D06oo de 16 ΡΕ1546127 0,6, em meio LB, e depois induzem-se a expressar o IkB usando IPTG (concentração final de 1 mM) durante 3 horas a 37°C e depois lisam-se as bactérias por sonicação (regulação limite da microponta por 3 vezes, 1 minuto de cada vez, em tampão de sonicação [50 mM em TRIS, pH 8,0, 1 mM em DTT, 1 mM em EDTA] e centrifuga-se a 10.000 x g durante 15 minutos. Mistura-se o sobrenadante com sulfato de amónio para se obter uma concentração final de 30 %. Agita-se em vaivém esta mistura durante 15 minutos a 4°C, e depois centrifuga-se a 10.000 g durante 15 minutos. Volta a suspender-se a pastilha em tampão de ligação (Novagen) contendo BSA 10 mM. Aplica-se esta solução sobre Ni-agarose (Novagen) e lava-se de acordo com o manual da Novagen. Elui-se o IkB da coluna utilizando tampão de eluição (0,4 M em imidazole, 0,2 M em NaCl, 8 mM em Tris, pH 7,9). Submetem-se as fracções que contêm proteína a uma diálise em Tris 50 mM, com pH 8, 1 mM em DTT.

Determina-se a actividade da proteína quinase c-Raf-1 quer na presença quer na ausência de inibidores, medindo a incorporação de 33P, a partir de [y33P]-ATP, no IkB. Leva-se a cabo este teste em placas de 96 poços à temperatura ambiente durante 60 minutos. Contém (volume total de 30 pL) : c-Raf-1 quinase (400 ng), Tris*HCl 25 mM, pH 7,5, MgCl2 5 mM, MnCl2 5 mM, Na3V04 10 μΜ, DTT 1 mM e 0,3 pCi/ensaio de [y33P]-ATP (ATP 10 μΜ), utilizando 600 ng de IkB na presença de 1 % de DMSO. Terminam-se as reacções adicionando 10 pL de EDTA 250 mM e 30 pL da mistura reaccional sobre membrana Immobilon-PVDF (Millipore, 17 ΡΕ1546127

Bedford, MA, EUA) que previamente se deixou embeber durante 5 minutos em metanol, se lavou com água, e em seguida se deixou embeber durante 5 minutos em solução aquosa de H3PO4 a 5 % e se montou numa linha de vácuo não ligada à fonte de vazio. Removem-se as membranas e lavam-se 4 x num agitador, com H3PO4 a 0,5 %, e uma vez com etanol. Contam-se as membranas depois de se secarem à temperatura ambiente, montadas numa moldura de placa de 96 poços Packard TopCount, e adiciona-se 10 pL/poço de Microscint TM (Packard) .

Teste para a actividade contra tirosina quinase de receptor VEGF. Leva-se a cabo o teste utilizando tirosina quinase de receptor VEGF Flt-1. O procedimento pormenorizado é como se segue: incubam-se em conjunto durante 10 minutos à temperatura ambiente 30 pL de solução de quinase (10 ng do dominio de quinase da Flt-1, Shibuya et ai., Oncogene 5, 519-24 [1990]) em Tris*HCl 20 mM, pH 7,5, 3 mM em dicloreto de manganês (MnCl2), 3 mM em cloreto de magnésio (MgCl2), 10 μΜ em vanadato de sódio, com 0,25 mg/mL de polietilenoglicol (PEG) 20000, 1 mM de ditio-treitol e com 3 μg/μL de poli(Glu,Tyr) a 4:1 (Sigma, Buchs, Suiça), 8 μΜ de [33P]-ATP (0,2 Ci), 1% de DMSO, e 0 a 100 μΜ no composto a testar. Termina-se então a reacção pela adição de 10 μΐ de etilenodiaminotetra-acetato (EDTA) 0,25 μΜ, pH 7. Utilizando um sistema de alimentação multicanal (LAB SYSTEMS, EUA), aplica-se uma aliquota de 20 pL sobre uma membrana de PVDF (= difluoreto de polivinilo) Immobilon P (Millipore, Bedford, EUA), através de um dispositivo de filtragem Gibco-BRL de microtítulo, e ligou-se o vácuo. A 18 ΡΕ1546127 seguir à eliminação completa do liquido, lava-se a membrana 4 vezes sucessivamente num banho contendo ácido fosfórico a 0,5 % (H3PO4) e uma vez com etanol, incubou-se durante 10 minutos de cada vez enquanto se agitava, e depois montou-se num dispositivo TopCount da Hewlett Packard e mediu-se a radioactividade depois da adição de 10 μΐ. de Microscint® (liquido de contagem de cintilação β) . Os valores de IC50 são determinados por análise de regressão linear das percentagens para a inibição de cada composto, a pelo menos quatro concentrações (em regra 0,01, 0,1, 1,0 e 10 mol). Os valores de IC50 que se podem determinar para os compostos com a fórmula 1 estão na gama de entre 1 e 10.000 nM, de preferência na gama de entre 1 e 100 nM. A inibição da autofosforilação do receptor KDR induzida por VEGF pode ser confirmada utilizando mais uma experiência in vitro com células: semeiam-se células CHO transfectadas, que expressam permanentemente o receptor de VEGF humano (KDR), em meio de cultura completo com 10% de soro fetal de vitelo (FCS), em placas de cultura de 6 poços, e incubou-se a 37°C sob 5% de C02 até evidenciarem uma confluência de cerca de 80%. Diluem-se então os compostos que se pretendem testar em meio de cultura (sem FCS, com albumina de soro bovino a 0,1%) e adicionou-se às células. (Os controlos incluem meio, sem compostos em teste) . Passadas duas horas de incubação a 37°C, adiciona-se VEGF recombinante; a concentração final em VEGF é de 20 ng/mL). Depois de mais 5 minutos de incubação a 37°C, lavam-se as células por duas vezes com PBS (soro salino tamponizado com 19 ΡΕ1546127 fosfato) gelado, e lisa-se de imediato com 100 pL de tampão de lise por poço. Centrifugam-se então os lisados para remover os núcleos das células, e determinam-se as concentrações proteicas dos sobrenadantes utilizando um sistema comercial de determinação proteica (BIORAD). Os lisados podem ser utilizados de imediato ou, caso seja necessário, armazenados a -20°C.

Leva-se a cabo um ELISA em sanduíche para medir a fosforilação do receptor KDR: imobiliza-se um anticorpo monoclonal contra KDR (por exemplo o Mab 1495.12.14) sobre placas negras de ELISA (OptiPlate HTRF-96 da Packard). Lavam-se então as placas e saturam-se os locais de ligação proteica ainda livres com uma solução de BSA a 1 % em PBS. Incubam-se então os lisados celulares (20 μg de proteína por poço) nestas placas de um dia para o outro a 4°C em conjunto com um anticorpo contra fosfotirosina acoplado com fosfatase alcalina (PY20: AP dos Transduction Laboratories). Lavam-se de novo as placas e depois demonstra-se a ligação do anticorpo antifosfotirosina utilizando um substrato AP luminescente (CDP-Star, pronto a utilizar, com Emerald 11; TROPIX). Mede-se a luminescência num contador de cintilação de Microplacas Packard Top Count (Top Count). A diferença entre o sinal do controlo positivo (estimulado com VEGF) e o do controlo negativo (não estimulado com VEGF) corresponde à fosforilação do receptor de KDR induzida por VEGF (= 100 %) . Calcula-se a actividade das substâncias testadas sob a forma de uma % de inibição da fosforilação de receptor KDR induzida por VEGF, em que a 20 ΡΕ1546127 concentração de substância que induz metade da inibição máxima é definida como o valor ED50 (dose efectiva para 50% de inibição). Os compostos com a fórmula 1 deste documento evidenciam valores de ED50 na gama de entre 0,25 nM e 1000 nM, de preferência entre 0,25 e 250 nM.

Um composto com a fórmula 1 ou um seu N-óxido inibe a uma série de graus diferentes outras tirosina quinases envolvidas na transdução do sinal e que são mediadas por factores tróficos, por exemplo Raf, Bcr-Abl e Abl quinases, Arg. quinases da familia Src, em especial a c-Src quinase, a Lck, e a Fyn; e também quinases da familia EGF, por exemplo, a c-erbB2 quinase (HER-2), a c-erbB3 quinase, a c-erbB4 quinase; a quinase do receptor do factor de crescimento, semelhante à insulina (IGF-1 quinase), em especial os membros da família das tirosina quinases de receptor PDGF, tais como a quinase do receptor de PDGF, a quinase do receptor de CSF-1, a quinase do receptor de Kit e a quinase do receptor de VEGF; e também as quinases a serina/treonina, todas as quais desempenham um papel na regulação do crescimento e na transformação em células de mamíferos, incluindo células humanas. A inibição da tirosina quinase c-erbB2 (HER-2) pode ser medida, por exemplo, da mesma maneira que a inibição da proteína quinase EGF-R, utilizando procedimentos conhecidos.

Com base nestes estudos, um composto com a 21 ΡΕ1546127 fórmula 1 de acordo com a invenção evidencia eficácia terapêutica em especial contra patologias dependentes de proteína quinase, em especial doenças proliferativas.

Com base na sua eficácia como inibidores da actividade da tirosina quinase de receptor de VEGF, os compostos com a fórmula 1 inibem sobretudo o crescimento dos vasos sanguíneos e são portanto, por exemplo, efectivos contra uma série de doenças associadas com a angiogénese desregulada, em especial doenças provocadas neovasculari-zação ocular, em especial retinopatias, tais como a retinopatia diabética ou a degenerescência da mácula relacionada com a idade, a psoríase, o hemangioblastoma, tal como o hemangioma, as patologias proliferativas de células mesangiais, tais como as doenças renais crónicas ou agudas, por exemplo a nefropatia diabética, a nefroes-clerose maligna, as síndromes de microangiopatia trombótica ou de rejeição de transplante, ou em especial as doenças inflamatórias dos rins, tais como a glomerulonefrite, em especial a glomerulonefrite mesangioproliferativa, a síndrome hemolítica-urémica, a nefropatia diabética, a nefroesclerose hipertensiva, o ateroma, a restenose arterial, as doenças autoimunes, a diabetes, a endometriose, a asma crónica, e em especial as doenças neoplásicas (tumores sólidos, mas também leucemias e outros "tumores líquidos", em especial as que expressarem c-kit, KDR, Flt-1 ou Flt-3), tais como em especial o cancro da mama, o cancro do cólon, o cancro do pulmão (em especial o cancro do pulmão de células pequenas), o cancro da próstata ou o sarcoma de 22 ΡΕ1546127

Kaposi. Um composto com a fórmula 1 (ou um seu N-óxido) inibe o crescimento de tumores e é especialmente adequado para impedir a disseminação metastásica de tumores e o crescimento de micrometástases.

Um composto com a fórmula 1 pode ser administrado por si só ou em conjunto com um ou mais outros agentes terapêutico, assumindo uma possível terapia de combinação a forma de combinações fixas ou sendo alternada a administração de um composto da invenção e de um ou mais agentes terapêuticos, ou sendo ambas independentes uma da outra, ou pela administração conjunta de combinações fixas e de um ou mais agentes terapêuticos. Um composto com a fórmula 1 pode além disto ou adicionalmente ser administrado numa terapia tumoral, tal como a terapia da leucemia, em combinação com a quimioterapia, a radioterapia, a imunoterapia, a intervenção cirúrgica, ou uma combinação destas. Também é possível como adjuvante uma terapia a longo termo, no contexto das outras estratégias de tratamento, tal como se descreveu acima. Outros tratamentos possíveis são uma terapia para se manter o estado do paciente depois da regressão do tumor, ou mesmo quimioterapia preventiva, por exemplo em pacientes em risco.

Os agentes terapêuticos para combinações possíveis são em especial um ou mais compostos antiprolife-rativos, citostáticos ou citotóxicos, por exemplo um agente quimioterapêutico ou diversos agentes seleccionados de entre o conjunto que inclui, mas que não se limita a, um 23 ΡΕ1546127 inibidor da biossíntese de poliamina, um inibidores de uma proteína quinase, em especial de uma proteína quinase de serina/treonina, tal como a proteína quinase C, ou de uma proteína tirosina quinase, tal como uma tirosina quinase do receptor de EGF, por exemplo PKI166, uma tirosina quinase do receptor de VEGF, por exemplo PTK787, ou uma tirosina quinase do receptor de PDGF, por exemplo STI571, uma citoquina, um regulador negativo do crescimento, , tal como TGF-β ou IFN-β, um inibidor de aromatase, por exemplo letrozole ou anastrozole, um inibidor da interacção de um domínio SH2 com uma proteína fosforilada, antiestrogéneos, inibidores de topoisomerase I, tais como irinotecan, inibidores de topoisomerase II, agentes activos nos micro-túbulos, por exemplo paclitaxel, discodermolido ou anepo-tilona, agentes alquilantes, antimetabolitos antineo-plásicos, tais como a gemcitabina ou a capecitabina, compostos de platina, tais como a carboplatina ou a cis-platina, compostos antiangiogénicos, agonistas de gonadorelina, anti-androgéneos, bisfosfonatos, por exemplo AREDIA® ou ZOMETA®, e trastuzumab. Os agentes preferidos para uma combinação são seleccionados de preferência de entre o conjunto constituído por indarrubicina, citarabina, interferão, hidroxiureia e bissulfan. A estrutura dos agentes activos identificada pelos seus números de código, nomes genéricos ou comerciais, pode ser obtida na edição actual do compêndio padrão "The Merck índex" ou de bases de dados, por exemplo Patents International (por exemplo IMS World Publications). Incorpora-se neste documento por citação o seu conteúdo correspondente. 24 ΡΕ1546127

Um composto consoante a invenção destina-se não apenas à gestão (profilática e de preferência terapêutica) de seres humanos, mas também ao tratamento de outros animais de sangue quente, por exemplo de animais com utilidade comercial, por exemplo roedores, tais como murinos, coelhos ou ratazanas, ou cobaias. Um tal composto pode também ser utilizado a titulo de padrão de referência nos sistemas destinados a testar que se descreveram acima, para permitir uma comparação com outros compostos.

Em geral, a invenção diz respeito também à utilização de um composto com a fórmula 1 ou a um seu N-óxido, para a inibição da actividade de tirosina quinase, quer in vitro quer in vivo.

Com os grupos de compostos preferidos com a fórmula 1 e seus N-óxidos que se mencionam adiante neste documento, podem usar-se de forma razoável todas as definições de substituintes constantes das definições gerais mencionadas acima neste documento, por exemplo, para substituir definições mais gerais com definições mais especificas ou em especial com definições caracterizadas como sendo preferidas.

Em especial, a invenção diz respeito a compostos com a fórmula 1, nos quais

Ri represente hidrogénio e R2 represente NR5R6, ou Ri represente NR5R6 e R2 represente; 25 ΡΕ1546127 R3 represente alquilo, fluoroalquilo, hidroxial-quilo ou carbamoílo, inferiores; R4 represente alquilo inferior; e R5 e R6 representem, independentemente um do outro, hidrogénio, alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior, alcoxil inferior-alquilo inferior, aciloxil inferior-alquilo inferior, carboxi-alquilo inferior, alcoxicarbonil inferior-alquilo inferior, amino-alquilo inferior, alquil-amino inferior-alquilo inferior, di(alquil inferior)amino-alquilo inferior, N-alquil inferior-piperidinilo, N-alquil inferior-pirrolidinilo, ou acilo inferior, ou R5R6 representem em conjunto alquileno com quatro, cinco ou seis átomos de carbono, oxa-alquileno inferior com um oxigénio e três ou quatro átomos de carbono, ou aza-alquileno inferior com um azoto e três ou quatro átomos de carbono, em que o átomo de azoto seja não substituído ou seja substituído com alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior ou alcoxil inferior-alquilo inferior, e em que o alquileno inferior possa em cada caso ser parcial ou totalmente insaturado e/ou os átomos de carbono do alquileno inferior possam ser substituídos com alquilo inferior, hidroxilo ou alcoxilo inferior; e um N-óxido ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico de um tal composto. 26 ΡΕ1546127

Mais sem especial, a invenção diz respeito a compostos com a fórmula 1, nos quais

Ri represente hidrogénio e R2 represente NR5R6, ou Ri represente NR5R6 e R2 represente; R3 represente trifluorometilo; R4 represente metilo; e R5 e R6 representem, independentemente um do outro, hidrogénio, alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior, alcoxil inferior-alquilo inferior, aciloxil inferior-alquilo inferior, carboxi-alquilo inferior, alcoxicarbonil inferior-alquilo inferior, amino-alquilo inferior, alquil-amino inferior-alquilo inferior, di(alquil inferior)amino-alquilo inferior, N-alquil inferior-piperidinilo, N-alquil inferior-pirrolidinilo, ou acilo inferior, ou R5R6 representem em conjunto alquileno com quatro, cinco ou seis átomos de carbono, oxa-alquileno inferior com um oxigénio e três ou quatro átomos de carbono, ou aza-alquileno inferior com um azoto e três ou quatro átomos de carbono, em que o átomo de azoto seja não substituído ou seja substituído com alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior ou alcoxil inferior-alquilo inferior, e em que o alquileno inferior possa em cada caso ser parcial ou totalmente insaturado e/ou os átomos de carbono do alquileno inferior possam ser substituídos com alquilo inferior, hidroxilo ou alcoxilo inferior; 27 ΡΕ1546127 e um N-óxido ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico de um tal composto.

Ri represente hidrogénio e R2 represente NR5R6, ou Ri represente NR5R6 e R2 represente; R3 represente trifluorometilo; R4 represente metilo; e R5 e R6 representem, independentemente um do outro, hidrogénio, alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior, amino-alquilo inferior, alquilamino inferior-alquilo inferior, di(alquil inferior)amino-alquilo inferior, N-alquil inferior-piperidinilo, ou acilo inferior, ou R5R6 representem em conjunto alquileno com quatro, cinco ou seis átomos de carbono, oxa-alquileno inferior com um oxigénio e três ou quatro átomos de carbono, ou aza-alquileno inferior com um azoto e três ou quatro átomos de carbono, em que o átomo de azoto seja não substituído ou seja substituído com alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior ou alcoxil inferior-alquilo inferior, e em que o alquileno inferior possa em cada caso ser parcial ou totalmente insaturado e/ou os átomos de carbono do alquileno inferior possam ser substituídos com alquilo inferior; 28 ΡΕ1546127 e um N-óxido ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico de um tal composto. São preferidos os compostos com a fórmula 1, nos quais

Ri represente hidrogénio e R2 represente nr5r6, ou Ri represente NR5R6 e R2 represente; R3 represente trifluorometilo; R4 represente metilo; e

Rs e Rê representem, independentemente um do outro, hidrogénio, metilo, etilo, 2-dimetilaminoetilo, 4-metil-l-piperidinilo, ou acetilo, ou R5R6 representem em conjunto alquileno com quatro ou cinco átomos de carbono, oxa-alquileno inferior com um oxigénio e quatro átomos de carbono, ou aza-alquileno inferior com um azoto e três ou quatro átomos de carbono, em que o átomo de azoto seja não substituído ou seja substituído com alquilo inferior, e em que o aza-alquileno inferior possa ser insaturado e/ou os átomos de carbono do aza-alquileno inferior possam ser substituídos com alquilo inferior; e um N-óxido ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico de um tal composto. 29 ΡΕ1546127 São especialmente preferidos os compostos com a fórmula 1, nos quais

Ri represente hidrogénio e R2 represente NR5R6, ou Ri represente NR5R6 e R2 represente; R3 represente trifluorometilo; R4 represente metilo; e R5 e R6 representem, independentemente um do outro, hidrogénio, metilo, etilo, 2-dimetilaminoetilo, 4-metil-l-piperidinilo, ou acetilo, ou R5R6 representem em conjunto pirrolidino, piperidino, morfolino, N-metilpi-perazino, lH-imidazolilo, lH-2-metilimidazolilo, 1H-4-metilimidazolilo ou 1H-2,4-dimetilimidazolilo; e um N-óxido ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico de um tal composto. São especialmente preferidos os compostos dos

Exemplos.

Em especial, a invenção diz respeito à utilização de um composto com a fórmula 1 ou à de um seu N-óxido, ou à de um possível tautómero de um destes, ou à de um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico de um tal composto, para a preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento de uma doença que reaja a uma inibição da 30 ΡΕ1546127 actividade de proteína quinase, em que a doença seja uma doença neoplásica.

Mais especificamente, a invenção diz respeito à utilização de um composto com a fórmula 1 ou a um seu N-óxido, ou a um possível tautómeros de um destes; ou ainda a um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico de um tal composto, para a preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento de uma leucemia que reaja à inibição da actividade de tirosina quinase da Raf e/ou da Abl.

Para além disto, a invenção diz respeito à utilização de um composto com a fórmula 1 ou de um seu N-óxido ou de um possível tautómero de um destes compostos, ou à de um seu sal aceitável do ponto de vista farmacêutico, para o tratamento de uma doença que reaja à inibição da actividade de tirosina quinase.

Pode preparar-se um composto da invenção por processos que, embora não hajam sido aplicados até à data aos novos compostos da invenção presente, são conhecidos por si próprios, em especial um processo caracterizado pelo facto de, para a síntese de um composto com a fórmula 1, se faça reagir um ácido benzóico substituído com a fórmula 2

COOH ΡΕ1546127 31 na qual Ri, R2 e R3 sejam tal como se definiram para um composto com a fórmula 1, ou de um seu derivado em que o grupo carboxilo -COOH esteja sob uma sua forma activada, com uma 3-(4-(3-piridil)-2-pirimidinamino)anilina com a fórmula 3

na qual R4 seja tal como foi definido para um composto com a fórmula 1, opcionalmente na presença de um agente desidratante e de uma base inerte, e/ou de um catalisador adequado, e opcionalmente na presença de um solvente inerte;

Em que as matérias-primas, compostos com as fórmulas 2 e 3, possam também estar presentes contendo grupos funcionais sob forma protegida caso tal seja necessário, e/ou sob a forma de sais, desde que esteja presente um grupo formador de sal e que a reacção da forma de sal seja possível; quaisquer grupos protectores num derivado protegido de um composto com a fórmula 1 sejam removidos; e, se tal se pretender, um composto com a fórmula 1 que se possa obter seja transformado noutro composto com a fórmula 1 ou num seu N-óxido, um composto livre com a 32 ΡΕ1546127 fórmula 1 seja transformado num sal, um sal de um composto com a fórmula 1 que se possa obter seja transformado no composto livre ou noutro sal, e/ou uma mistura de compostos isoméricos com a fórmula 1 seja separada nos seus isómeros individuais.

Um derivado do composto com a fórmula 2 no qual o grupo carboxílico se encontre sob uma forma activada é em especial um éster reactivo, um anidrido reactivo ou uma amida cíclica reactiva.

Os ésteres reactivos do ácido com a fórmula 2 são em especial ésteres insaturados no átomo de carbono que se liga ao grupo esterificante, por exemplo ésteres do tipo éster vinílico, tais como os próprios ésteres vinílicos (que se podem obter, por exemplo, por transesterificação de um éster correspondente com acetato de vinilo; método do éster vinílico activado), ésteres carbamoílvinílicos (que se podem obter, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente comum reagente de isoxazólio; 1,2-oxazólio ou método de Woodward), ou com ésteres de 1-alco-xil(inferior)vinilo (que se podem obter, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com um alcoxil(inferior ) acetileno; método do etoxiacetileno), ou ésteres de tipo amidino, tais como os ésteres amidino N,N'-dissubsti-tuídos (que se podem obter, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com uma carbodi-imida adequadamente N,N'-dissubstituída, por exemplo N,N'-diciclo-hexilcarbodi-imida; método da carbodi-imida), ou ésteres amidino N,N- 33 ΡΕ1546127 dissubstituídos (que se podem obter, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com uma cianamida N,N-dissubstituída; método da cianamida), ésteres arilicos adequados, em especial ésteres fenilico adequadamente substituídos com substituintes atractores de electrões (que se podem obter, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com um fenol adequadamente substituído, por exemplo 4-nitrofenol, 4-metilsulfonil-fenol, 2,4,5-triclorofenol, 2,3, 4,5, 6-pentacloro-fenol ou 4-fenildia-zofenol, na presença de um agente de condensação, tal como Ν,Ν'-diciclo-hexilcarbodi-imida; método dos ésteres arilicos activados), ésteres cianometílicos (que se podem obter, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com cloroacetonitrilo na presença de uma base; método dos ésteres cianometílicos), tioésteres, em especial não substituídos ou substituídos, por exemplo substituídos com nitro, feniltioésteres (que se podem obter, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com tiofenóis não substituídos ou substituídos, por exemplo substituídos com nitro, entre outros pelo método do anidrido ou o da carbodi-imida; método dos ésteres de tiol), aminoésteres ou amido ésteres (que se podem obter, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com um composto N-hidroxi-amino ou N-hidroxi-amido, por exemplo a N-hidroxissuccinimida, a N-hidroxi-piperidina, a N-hidroxi-ftalimida ou o 1-hidroxi-benzotriazole, por exemplo pelo método do anidrido ou o da carbodi-imida; método dos ésteres N-hidroxílicos activados), ou ésteres silílicos (que se podem obter, por exemplo, por tratamento do ácido 34 ΡΕ1546127 correspondente com um agente sililante, por exemplo hexametildissilazano, e reagem facilmente com grupos hidroxilo mas não com grupos amino).

Os anidridos do ácido com a fórmula 2 podem ser simétricos ou de preferência anidridos mistos desse ácido, por exemplo anidridos com ácidos inorgânicos, tais como os halogenetos de acilo, em especial os cloretos de acilo (que se podem obter, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com cloreto de tionilo, com pentacloreto de fósforo ou com cloreto de oxalilo; método do cloreto de acilo), azidas (que se podem obter, por exemplo, a partir de um éster do ácido correspondente através da hidrazida correspondente e por tratamento desta última com ácido nitroso; método da azida), anidridos com semi derivados de ácido carbónico, tais como os ésteres correspondentes, por exemplo semi ésteres dos ácidos alquil(inferior)carbónicos (que se podem obter, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com ésteres de alquilo inferior de ácidos halofórmicos, tais como o clorofórmico, ou com uma 1-alcoxil(inferior)carbonil-2-alcoxil(inferior)-1,2-di-hidro-quinolina, por exemplo 1-alcoxil(inferior)carbonil-2-etoxi-1,2-di-hidroquinolina; método dos anidridos mistos dos ácidos O-alquilcarbónicos), ou anidridos com ácido fosfórico dihalogenado, em especial diclorado (que se podem obter, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com oxicloreto de fósforo; método do oxicloreto de fósforo), ou anidridos com ácidos orgânicos, tais como os anidridos mistos com ácidos orgânicos carboxílicos (que se podem obter, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente 35 ΡΕ1546127 com um halogeneto de um ácido alcano(inferior)carboxílico ou fenilalcano(inferior)carboxílico, substituído ou não substituído, por exemplo cloreto de ácido fenilacético, cloreto de ácido piválico ou cloreto de ácido trifluoroacético; método dos anidridos mistos de ácido carboxílico), com ácidos organossulfúricos (que se podem obter, por exemplo, por tratamento de um sal, tal como um sal com metal alcalino, do ácido correspondente, com um halogeneto de ácido organossulfónico adequado, tal como o cloreto do ácido alcano(inferior)-, ou aril-, por exemplo metano- ou p-tolueno- sulfónico; método dos anidridos mistos com ácido sulfónico), ou com ácidos organofosfónicos (que se podem obter, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com um anidrido de ácido organofosfónico ou com um cianeto fosfónico adequado; método dos anidridos fosfónicos mistos), a anidridos simétricos (que se podem obter, por exemplo, por condensação do ácido correspondente na presença de uma carbodi-imida ou de 1-dietilamino-propino; método dos anidridos mistos).

As amidas cíclicas adequadas são em especial amidas com ciclos diaza com cinco membros e carácter aromático, tais como as amidas com imidazoles, por exemplo imidazole (que se podem obter, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com N,N'-carbonildi-imidazole; método do imidazoleto), ou com pirazoles, por exemplo 3,5-dimetil-pirazole (que se podem obter, por exemplo, por intermédio da hidrazida do ácido, por tratamento com acetilacetona; método do pirazoleto). 36 ΡΕ1546127

Formam-se os derivados do ácido com a fórmula 2 em que o grupo carboxilo esteja sob uma forma activada, de preferência in situ. Por exemplo, podem formar-se os ésteres de amidino N,N'-dissubstituido in situ pela reacção de uma mistura do ácido com a fórmula 2 com a amina com a fórmula 3 na presença de uma carbodi-imida N,N'-dissubs-tituida adequada, por exemplo N,N'-diciclo-hexilcarbodi-imida.

Podem formar-se anidridos mistos reactivos do ácido com a fórmula 2 com um ácido orgânico fosfónico in situ por reacção com, por exemplo, anidrido propilfosfónico ou com cianofosfonato de dietilo, na presença de uma base adequada, de preferência uma amina terciária, por exemplo trietilamina ou dimetilaminopiridina.

Pode levar-se a cabo a reacção de um modo conhecido por si próprio, dependendo as condições reaccionais em especial de se haver activado, e nesse caso de que maneira, o grupo ácido carboxilico do ácido carboxilico com a fórmula 2, em geral na presença de um solvente ou um diluente apropriados, ou de uma mistura destes e, caso seja necessário, na presença de um agente de condensação, o qual, por exemplo quando o grupo carboxilo que participa na reacção assume a forma de um anidrido, pode também ser um grupo que se ligue a um ácido, sob arrefecimento ou sob aquecimento, por exemplo numa gama de temperaturas de entre cerca de -30°C e cerca de +150°C, em especial a entre cerca de 0°C e +100°C, de preferência a entre a temperatura 37 ΡΕ1546127 ambiente (cerca de +20°C) e +70°C, num vaso reaccional aberto ou fechado e/ou sob uma atmosfera de gás inerte, por exemplo azoto. Os agentes de condensação habituais são, por exemplo, carbodi-imidas, por exemplo N,N'-dietil-, N,N'-dipropil-, N,N'-diciclo-hexil- ou N-etil-N'-(3-dimetilami-nopropil)-carbodi-imida, os compostos de carbonilo adequados, por exemplo carbonildi-imidazole, ou compostos de 1,2-oxazólio, por exemplo 3'-sulfonato de 2-etil-5-fenil-1,2-oxazólio e perclorato de 2-terc-butil-5-metil-isoxazólio, ou um composto de acilamino adequado, por exemplo 2-etoxi-1-etoxicarbonil-l,2-di-hidroquinolina. Os agentes de condensação que se ligam a ácido habituais são, por exemplo, carbonatos de metais alcalinos ou bicarbonatos, por exemplo carbonato ou hidrogenocarbonato de sódio ou de potássio (habitualmente em conjunto com um sulfato), ou bases orgânicas, tais como, habitualmente, piridina ou trietil-amina, ou trialquil(inferior)aminas estereoquimicamente impedidas, por exemplo N,N-di-isopropil-N-etil-amina.

Numa variante preferida, faz-se reagir o ácido carboxílico com a fórmula 2 com uma amina com a fórmula 3 num solvente adequado, tal como por exemplo N,N-dimetil-formamida, na presença de anidrido propilfosfónico ou de cianofosfanato de dietilo e trietilamina, durante entre 1 e 48 horas a entre 0°C e cerca de 50°C, de preferência à temperatura ambiente.

Caso um ou mais outros grupos funcionais estejam ou precisem de estar protegidos, por exemplo grupos 38 ΡΕ1546127 carboxilo, hidroxilo ou amino, num composto com a fórmula 2 ou 3, porque eles não devem tomar parte na reacção, a protecção é feita com grupos tais como os que são habitualmente utilizados na sintese de amidas, em particular de compostos peptidicos, e também de cefalosporinas e de penicilinas, bem como de derivados de ácidos nucleicos e de açúcares.

Os grupos protectores podem já estar presentes nos precursores e deverão proteger os grupos funcionais em questão contra reacções secundárias indesejáveis, tais como acilações, eterificações, esterificações, oxidações, solvó-lise, e reacções semelhantes. É uma caracteristica dos grupos protectores que eles se prestem facilmente, isto é sem reacções secundárias indesejáveis, a serem removidos, tipicamente por solvólise, redução, fotólise ou também pela actividade enzimática, por exemplo em condições análogas às condições fisiológicas, e que não estejam presentes nos produtos finais. 0 especialista sabe, ou pode facilmente estabelecer, quais os grupos protectores que são adequados para as reacções mencionadas acima e adiante neste documento. A protecção destes grupos funcionais por aqueles grupos protectores, os grupos protectores eles próprios, e as reacções para a sua remoção estão descritos por exemplo nos livros padrão de referência para a sintese peptidica tais como os citados acima neste documento, e in livros especializados sobre grupos protectores tais como o de J. 39 ΡΕ1546127 F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, Londres e Nova Iorque 1973, em "Methoden der Organischen Chemie" (Métodos da Química Orgânica), Houben-Weyl, 4a edição, Volume 15/1, Georg Thieme Verlag, Estugarda 1974, e em T. w. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", Wiley, Nova Iorque.

Nos passos adicionais de processo, levados a cabo tal como se pretenda, os grupos funcionais dos compostos de partida que não devam tomar parte nas reacções podem estar presentes sob forma não protegida, ou podem estar protegidos por exemplo com um ou mais dos grupos protectores mencionados acima neste documento sob a rubrica "grupos protectores". Removem-se então total ou parcialmente os grupos protectores de acordo com um dos métodos que se descreveram naquela rubrica.

Podem preparar-se os sais de um composto com a fórmula 1 com um grupo formador de sal, de uma maneira conhecida por si própria. Os sais de adição a ácidos dos compostos com a fórmula 1 podem ser obtidos portanto por tratamento com um ácido ou com um reagente de permuta aniónica adequado.

Os sais podem habitualmente ser transformados nos compostos livres, por exemplo por tratamento com agentes básicos adequados, por exemplo com carbonatos de metais alcalinos, com hidrogenocarbonatos de metais alcalinos, ou com hidróxidos de metais alcalinos, tipicamente com carbonato de potássio ou com hidróxido de sódio. 40 ΡΕ1546127

Podem separar-se as misturas estereoisoméricas, por exemplo misturas de diastereómeros, nos sus isómeros correspondentes, de uma maneira que é conhecida por si própria, recorrendo a métodos de separação adequados. Podem separar-se as misturas diastereoméricas nos seus diastereómeros individuais, por exemplo por intermédio de cristalização fraccionada, cromatoqrafia, distribuição por solventes, e procedimentos semelhantes. Esta separação pode ter luqar quer a nivel de um composto de partida, quer de um composto com a fórmula 1 ele próprio. Podem separar-se os enantiómeros através da formação de sais diastereomé-ricos, por exemplo pela formação de sais com um ácido quiral enantiomericamente puro, ou por intermédio de cromatografia, por exemplo por HPLC recorrendo a substratos cromatográficos com ligandos quirais.

Num composto com a fórmula 1 em que num seu grupo Ri ou R2 se encontre hidrogénio ligado a um átomo de azoto ou de oxigénio e seja necessário transformá-lo no composto correspondente no qual o hidrogénio seja substituído por alquilo inferior, isto pode ser levado a cabo por reacção, por exemplo com um composto de diazoalquilo inferior, em especial com diazometano, num solvente inerte, de preferência na presença de um catalisador em metal nobre, em especial sob forma dispersa, por exemplo cobre, ou um sal de metal nobre, por exemplo cloreto de cobre(I) ou sulfato de cobre (II). Também é possível uma reacção com halogenetos de alquilo, ou com outros alcanos inferiores contendo 41 ΡΕ1546127 grupos de saída, por exemplo álcoois de alquilos inferiores esterifiçados por um ácido organossulfónico forte, tal como um ácido metanossulfónico inferior, ou com ácido p-toluenosssulfónico. A alquilação tem lugar nas condições habituais de alquilação de amidas, em especial em solução aquosa e/ou na presença de solventes polares, tipicamente álcoois, por exemplo metanol, etanol, isopropanol, ou etilenoglicol, ou em solventes dipolares apróticos, por exemplo tetra-hidrofurano, dioxano, ou dimetilformamida, sempre eu aplicável na presença de catalisadores ácidos ou básicos, em geral a temperaturas de entre cerca de 0°C e o ponto de ebulição da mistura reaccional correspondente à mistura reaccional, de preferência entre 20°C e a temperatura de refluxo, se necessário sob pressão aumentada, por exemplo num tubo selado, e/ou sob gás inerte, tipicamente azoto ou árgon.

Deve enfatizar-se que também podem ocorrer reac-ções análogas às transformações mencionadas neste capítulo, a nível dos intermediários apropriados.

Todos os passos dos processo descritos neste documento podem ser levados a cabo sob condições reac- cionais conhecidas, de preferência sob aquelas que são especificamente mencionadas, na ausência ou mais habitualmente na presença de solventes ou de diluentes, de preferência aqueles que sejam inertes aos reagentes utilizados e capazes de os dissolver, na ausência ou na presença de catalisadores, agentes de condensação ou agentes neutra- 42 ΡΕ1546127 lizantes, por exemplo permutadores de iões, tipicamente permutadores de catiões, por exemplo sob a forma de H+, dependendo do tipo de reacção e/ou dos reagentes, a temperatura reduzida, normal ou elevada, por exemplo na gama de entre -100°C e cerca de 190°C, de preferência a entre cerca de -80°C e cerca de 150°C, por exemplo a entre -80°C e -60°C, à temperatura ambiente, a entre -20°C e 40°C ou à temperatura de ebulição do solvente utilizado, à pressão atmosférica ou num reactor fechado, quando apropriado sob pressão, e/ou sob uma atmosfera inerte, por exemplo sob árgon ou azoto.

Os sais podem estar presentes em todos os compostos de partida e nos transientes, caso estes compostos contenham grupos formadores de sais. Os sais também podem estar presentes durante a reacção desses compostos, desde que a reacção não resulte perturbada por causa disso.

Em todos os passos da reacção, podem separar-se as misturas isoméricas que se obtenham nos seus isómeros individuais, por exemplo diastereómeros ou enantiómeros, ou em quaisquer misturas de isómeros, por exemplo racematos ou misturas diastereoméricas. A invenção também diz respeito a aquelas formas do processo nas quais se parte de um composto que possa ser obtido em qualquer passo a título de transiente e se levam a cabo os passos restantes, ou a aquelas em que se interrompe o processo em qualquer estádio, ou de forma uma 43 ΡΕ1546127 matéria-prima nas condições reaccionais, ou se utiliza essa matéria-prima sob a forma de um derivado reactivo ou de um sal, ou se produz um composto que se possa obter por intermédio de um processo de acordo com a invenção, e se processa o composto in situ. Na concretização preferida, parte-se daquelas matérias-primas que levam a compostos descritos acima neste documento tal como se preferir, em especial como sendo particularmente preferidos, primaria-mente preferidos, e/ou preferidos acima de todos.

Na concretização preferida, prepara-se um composto com a fórmula 1 de acordo com, ou por analogia com, os processos e os passos processuais definidos nos Exemplos.

Também se podem obter os compostos com a fórmula 1, incluindo os seus sais, sob a forma de hidratos, ou os seus cristais podem incluir por exemplo o solvente utilizado para cristalização (presente nos solvatos). A invenção presente diz também respeito a composições farmacêuticas que incluam um composto com a fórmula 1 ou um seu N-óxido a titulo de ingrediente activo e que possa ser utilizado em especial no tratamento das doenças mencionadas no principio. São especialmente preferidas as composições para administração pelas vias entéricas, tais como a nasal, a bucal, a rectal ou, em especial, a administração por via oral, e para a administração por via parentérica, tal como a administração por 44 ΡΕ1546127 via endovenosa, intramuscular ou subcutânea, a animais de sangue quente, em especial a seres humanos. As composições incluem o ingrediente activo por si só, de preferência em conjunto com um veiculo aceitável do ponto de vista farmacêutico. A dosagem do ingrediente activo depende da doença que se vai tratar e da espécie, idade, massa corporal, e estado de saúde, dos dados farmacocinéticos individuais, e do modo de administração. A invenção presente diz especialmente respeito a composições farmacêuticas que incluem um composto com a fórmula 1, um seu tautómero, um N-óxido ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico, ou um seu hidrato ou um solvato, e pelo menos um veiculo aceitável do ponto de vista farmacêutico. A invenção também diz respeito a composições farmacêuticas para utilização num método para a gestão profilática ou em especial terapêutica do corpo humano ou de um animal, a um processo para a preparação destas (em especial sob a forma de composições para o tratamento de tumores), bem como a um método para o tratamento de doenças tumorais, em especial as que se mencionaram acima neste documento. A invenção também diz respeito a processos e à utilização de compostos com a fórmula 1 ou dos seus N-óxidos para a preparação de preparações farmacêuticas que incluam compostos com a fórmula 1 ou os seus N-óxidos a titulo de componentes activos (ingrediente activo). 45 ΡΕ1546127

Na concretização preferida, uma preparação farmacêutica é adequada para administração a um animal de sangue quente, em especial a seres humanos ou a mamíferos comercialmente utilizáveis que sofram de uma doença que reaja à inibição da actividade de tirosina quinase Abl, por exemplo a leucemia mielogenosa crónica (CML), a leucemia linfoblástica aguda (all), e outras semelhantes, e inclui uma quantidade efectiva de um composto com a fórmula 1 ou de um seu N-óxidos para inibição de uma proteína de fusão Bcr-Abl, também para a inibição de uma proteína de fusão mutante Bcr-Abl tal como Bcr-Abl T mutada E255K, E225V, F317L ou M351, ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico destas, caso estejam presentes grupos formadores de sais, em conjunto com pelo menos um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico. Numa concretização preferida, os compostos com a fórmula 1 ou os seus N-óxidos são úteis para o tratamento de leucemias resistentes ao tratamento com STI571. Os compostos com a fórmula 1 ou os seus N-óxidos são especialmente úteis para ultrapassar a resistência em relação ao tratamento com STI571. Os pacientes com leucemias resistentes a tratamentos com STI571 foram descritos em muitas publicações tais como em Susan Brandford et al. (Blood. 1 de Maio de 2002; 99(9): 3472-5), Christophe Barthe et al. ou Andreas Hochhaus et al. (Science. 21 de Setembro de 2001; 293(5538): 2163). De preferência, o termo "resistente" significa que o STI571 inibe o domínio funcional de Abl quinase respectivo com um IC50 que é superior ao que diz respeito ao domínio da Abl 46 ΡΕ1546127 quinase humana, isto é, superior a cerca de 0,025 μΜ, mais preferivelmente superior a cerca de 0,15 μΜ, mais preferivelmente ainda superior a cerca de 0,25 μΜ, e de preferência superior a cerca de 5 μΜ.

Noutra concretização preferida, uma preparação farmacêutica é adequada para administração a um animal de sangue quente, em especial a seres humanos ou a mamíferos comercialmente utilizáveis que sofram de uma doença que reaja à inibição da actividade de Raf quinase, por exemplo a leucemia mielogenosa crónica ou um tumor sólido tal como um tumor do cólon, do pulmão ou do pâncreas, e inclui uma quantidade efectiva de um composto com a fórmula 1 ou de um seu N-óxidos para inibição de Raf quinase, ou a um seu sal aceitável do ponto de vista farmacêutico, caso estejam presentes grupos formadores de sais, em conjunto com pelo menos um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico. É de igual modo preferida uma composição farmacêutica para a gestão profiláctica ou em especial terapêutica de doenças neoplásicas e de outras doenças proliferativas num animal de sangue quente, em especial um ser humano ou um mamífero com utilidade comercial e que necessite de um tal tratamento, em especial os que sofram de uma tal doença, que inclua a título de ingrediente activo e numa quantidade que seja activa do ponto de vista profilático ou em especial terapêutico contra as doenças referidas, um novo composto com a fórmula 1 ou os seus N-óxidos. 47 ΡΕ1546127

As composições farmacêuticas incluem entre cerca de 1 % e cerca de 95% de ingrediente activo, em formas de administração de dose única contendo, na concretização preferida, entre cerca de 20% e cerca de 90% de ingrediente activo e formas que não sejam do tipo de dose única que contenham na concretização preferida entre cerca de 5% e cerca de 20% de ingrediente activo. As formas de unidade de dose são, por exemplo, comprimidos revestidos e não revestidos, ampolas, frascos, supositórios, ou cápsulas. São formas de dosagem adicionais, por exemplo, unguentos, cremes, pastas, tinturas, batons, gotas, dispersões , aerossóis, etc. São exemplos as cápsulas contendo entre cerca de 0,05 g e cerca de 1,0 g de ingrediente activo.

As composições farmacêuticas da invenção presente são preparadas de uma maneira conhecida por si própria, por exemplo recorrendo a processos convencionais de mistura, granulação, revestimento, dissolução ou liofilização. É dada preferência à utilização de soluções do ingrediente activo, e também suspensões ou dispersões, em especial soluções aquosas isotónicas, dispersões ou suspensões que, por exemplo no caso de composições liofilizadas que incluam o ingrediente activo por si só ou em conjunto com um veículo, por exemplo manitol, pode ser preparada antes da sua utilização. As composições farmacêuticas podem ser esterilizadas e/ou podem conter excipientes, por exemplo conservantes, estabilizadores, 48 ΡΕ1546127 agentes molhantes e/ou emulsionantes, solubilizantes, sais para regular a pressão osmótica e/ou tampões, e são preparadas de um modo conhecido por si próprio, por exemplo por intermédio de processos convencionais de dissolução e de liofilização. As soluções ou suspensões referidas podem conter agentes de aumento de viscosidade, tipicamente carboximetilcelulose sódica, carboximetilcelulose, dextra-no, polivinilpirrolidona, ou gelatinas, ou também solubilizantes, tais como por exemplo Tween 80® [mono-oleato de polioxietileno-(20)-sorbitano; marca registada de ICI Américas, Inc, EUA].

As suspensões em óleo incluem como componentes oleosas os óleos vegetais, sintéticos ou semi sintéticos habituais para utilização em injectáveis. A respeito deles, pode fazer-se uma menção especial dos ésteres líquidos de ácidos gordos que contêm como componente de ácido gordo um ácido gordo com cadeia longa contendo entre 8 e 22, e em especial entre 12 e 22 átomos de carbono, por exemplo ácido láurico, ácido tridecílico, ácido mirístico, ácido penta-decílico, ácido palmítico, ácido margárico, ácido esteárico, ácido araquídico, ácido behénico ou os correspondentes ácidos insaturados, por exemplo ácido oleico, ácido eláidico, ácido erúcico, ácido brassídico ou ácido lino-leico, se tal se pretender com a adição de antioxidantes, por exemplo de vitamine E, de β-caroteno ou de 3,5-di-terc-butil-4-hidroxitolueno. A componente alcoólica destes ésteres de ácidos gordos apresenta no máximo 6 átomos de carbono e é monovalente ou polivalente, por exemplo um 49 ΡΕ1546127 álcool monovalente, divalente ou trivalente, por exemplo metanol, etanol, propanol, butanol ou pentanol ou os seus isómeros, mas em especial glicol e glicerol. A título de ésteres de ácidos gordos, portanto, mencionam-se os seguintes: oleato de etilo, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, "Labrafil M 2375" (trioleato de polioxietile-noglicerol da Gattefossé, Paris), "Labrafil M 1944 CS" (acilgliceróis insaturados poliglicolizados preparados por alcoólise de óleo de caroço de alperce e constituídos por acilgliceróis e ésteres de polietilenoglicol; Gattefossé, França), "Labrasol" (acilgliceróis poliglicolizados saturados preparados por alcoólise de TCM e constituído por acicliceróis e por ésteres de polietilenoglicol; Gattefossé, França), e/ou "Miglyol 812" (triacilglicerol de ácidos gordos saturados com comprimento de cadeia de entre C8 e C12, proveniente da Huis AG, Alemanha), mas em especial óleos vegetais tais como óleo de sementes de algodão, óleo de amêndoa, azeite, óleo de rícinos, óleo de gergelim, óleo de soja e mais especif icamente óleo de amendoim. 0 fabrico de preparações injectáveis é habitualmente levado a cabo sob condições de esterilidade, tal como também a operação de enchimento, em ampolas ou em frascos, e a selagem dos contentores.

Podem obter-se composições farmacêuticas para administração por via oral, por exemplo, combinando o ingrediente activo com um ou mais veículos sólidos, se tal 50 ΡΕ1546127 se pretender granulando uma mistura resultante, e processando a mistura ou os grânulos, e se tal se pretender ou for necessário, pela inclusão de mais excipientes sólidos, para se formarem comprimidos ou núcleos de comprimidos.

Os veículos adequados são em geral cargas, tais como açúcares, por exemplo lactose, sacarose, manitol ou sorbitol, preparações celulósicas, e/ou fosfatos de cálcio, por exemplo fosfato tricálcico ou hidrogenofosfato de cálcio, e também aglomerantes tais como amidos, por exemplo amido de milho, de trigo ou de batata, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, carboximetilcelulose sódica, e/ou polivinilpirrolidona, e/ou, se tal se pretender, desintegrantes, tais como os amidos que se mencionaram acima, e também o carboximetilamido, a polivinilpirrolidona com ligações cruzadas, o ácido algínico ou um seu sal, tal como o alginato de sódio. São excipientes adicionais os condicionadores do fluxo e os lubrificantes, por exemplo ácido silícico, talco, ácido esteárico ou os seus sais, tais como o estearato de magnésio ou de cálcio, e/ou o polietilenoglicol, ou derivados destes.

Podem colocar-se sobre os núcleos de comprimidos, revestimentos adequados, opcionalmente entéricos, pela utilização de, entre outras, soluções concentradas de açúcares que podem incluir goma arábica, talco, polivinilpirrolidona, polietilenoglicol e/ou dióxido de titânio, ou soluções de revestimento em solventes orgânicos 51 ΡΕ1546127 adequados, ou em misturas de solventes, ou, para a preparação de revestimentos entéricos, soluções de preparações de celulose que sejam adequadas, tais como as de ftalato de acetilcelulose ou ftalato de hidroxipropilmetil-celulose. Podem adicionar-se aos comprimidos ou aos revestimentos de comprimidos, corantes ou pigmentos, por exemplo com a finalidade de permitir a sua identificação ou para indicar doses diferentes de ingrediente activo.

Também se incluem nas preparações farmacêuticas para administração por via oral as cápsulas duras constituídas por gelatina, e também as cápsulas moles e seladas constituídas por gelatina e por um plastificante, tal como glicerol ou sorbitol. As cápsulas duras podem conter o ingrediente activo sob a forma de grânulos, por exemplo misturados com cargas, tais como amido de milho, aglomerantes, e/ou agentes de escorregamento, tais como talco ou estearato de magnésio, e opcionalmente estabilizadores. Em cápsulas moles, o ingrediente activo é de preferência dissolvido ou suspenso em excipientes líquidos adequados, tais como óleos gordos, óleos parafínicos ou polietilenoglicóis líquidos ou ésteres de ácidos gordos com etilenoglicol ou com propilenoglicol, aos quais se podem também adicionar estabilizantes e detergentes, por exemplo do tipo dos ésteres de ácidos gordos com polioxietileno-sorbitano. São composições farmacêuticas adequadas para administração por via rectal, por exemplo, supositórios que 52 ΡΕ1546127 são constituídos por uma combinação de ingredientes activos e uma base para supositórios. São bases adequadas para supositórios, por exemplo, determinados triacilgliceróis naturais ou sintéticos, hidrocarbonetos parafínicos, polietilenoglicóis ou alcanóis superiores.

Para administração por via parentérica, são especialmente adequadas as soluções aquosas de um ingrediente activo sob uma forma solúvel em água, por exemplo a de um sal solúvel em água, ou suspensões de base aquosa para injecção, as quais contenham substâncias capazes de aumentar a viscosidade, por exemplo carboximetilcelulose sódica, sorbitol e/ou dextrano, e, se tal se pretender, estabilizantes. 0 ingrediente activo, opcionalmente em conjunto com excipientes, pode também assumir a forma de um liofilizado e pode depois ser levado a uma solução antes da sua administração parentérica, pela adição de solventes adequados.

Podem também empregar-se como soluções para infusão as soluções tais como as que são utilizadas, por exemplo, para a administração parentérica. São conservantes apropriados, por exemplo, os antioxidantes, tais como o ácido ascórbico, ou microbi-cidas, tais como o ácido sórbico ou o ácido benzóico. A invenção diz também respeito a um processo ou a um método para o tratamento de um dos estados patológicos 53 ΡΕ1546127 descritos acima neste documento, em especial de uma doença que reaja a uma inibição da actividade de tirosina quinase, e particularmente uma doença neoplásica correspondente. Os compostos com a fórmula 1 ou os seus N-óxidos podem ser administrados tal e qual ou em especial sob a forma de composições farmacêuticas, a titulo profilático ou terapêutico, de preferência numa quantidade que seja efectiva contra as doenças referidas, a um animal de sangue quente, por exemplo um ser humano, que necessitem de um tal tratamento. No caso de um indivíduo que tenha uma massa corporal de cerca de 70 kg, a dose diária administrada é de entre cerca de 0,05 g e cerca de 5 g, de preferência entre cerca de 0,25 g e cerca de 1,5 g, de um composto da invenção presente. A invenção presente diz respeito também à utilização de um composto com a fórmula 1 ou de um seu N-óxido, ou de um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico destes, em especial de um composto com a fórmula 1 que seja caracterizado como sendo preferido, ou de um seu sal aceitável do ponto de vista farmacêutico, tal e qual ou sob a forma de uma formulação farmacêutica com pelo menos um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico, para a gestão terapêutica e também profilática de uma ou mais das doenças mencionadas acima neste documento, de preferência uma doença que reaja à inibição de uma proteína quinase, em especial uma doença neoplásica, mais especificamente de uma leucemia que reaja à inibição da tirosina quinase Abl, ou de um tumor que reaja à inibição da Raf quinase. 54 ΡΕ1546127 A quantidade, a composição da dose preferida, bem como a preparação das formulações farmacêuticas (medicamentos) que se devem utilizar, foram descritas acima. São também objecto desta invenção novas matérias-primas e/ou intermediários, bem como os processos para a sua preparação. Na concretização preferida, essas matérias-primas são utilizadas e as condições reaccionais são seleccionadas de modo a permitir a obtenção dos compostos preferidos.

As matérias-primas com as fórmulas 2 e 3 são conhecidas, estão disponíveis no comércio, ou podem ser sintetizadas por analogia ou de acordo com métodos que são conhecidos na técnica.

Exemplos

Exemplo 1 4-Dietilamino-N-[4-metil-3-{[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino}fenil}-trifluorometil-benzamida

Adiciona-se uma solução a cerca de 50% de anidrido propilfosfónico em Ν,Ν-dimetilformamida (Fluka, Buchs, Suiça; 1,14 mL, 1,8 mmol), a uma mistura agitada de 4-metil-N-[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-1,3-benzenodi-amina (277,3 mg, 1 mmol), ácido 4-dietilamino-3-(trifluo- 55 ΡΕ1546127 rometil)-benzóico (261,3 mg, 1 mmol) e trietilamina (1,33 mL, 9,6 mmol) em 3 mL de N,N-dimetilformamida. Depois de se agitar durante 24 horas à temperatura ambiente, trata-se a mistura com uma solução aquosa semi saturada de hidrogenocarbonato de sódio e extraiu-se três vezes com acetato de etilo. Seca-se o conjunto dos extractos orgânicos (Na2S04) e separa-se o solvente por evaporação sob pressão reduzida. Purifica-se o produto obtido por cromato-grafia em coluna sobre silicagel, utilizando diclorometa-no/metanol como eluente. Misturam-se as fracções puras, evapora-se e cristaliza-se o resíduo a partir de acetona para se obter o composto em título sob a forma de um sólido branco. RMN ( de 1h (400 MHz, DMSO- -d6, δ): 0,96 (t r 6H) ; 2,23 (s, 3H); 3,02 (q, 4H) 1; 7,23 (d , 1H) ; 7, 44 (d, 1 H) ; 7, 48 (dd, 1H) ; 7,51- -7,54 i ;m, 1H) r 7, 66 (d, 1H); 8, 06 (d, 1H) ; 8,21 (dd, 1H) ; 8, 24 (m, 1H) ; 8 ,48 (dt, 1H) ; 8, 52 (d, 1H) ; 8,68 (dd, 1H) ; 9,0 ( s, 1H) ; 9, , 28 (d, 1H) ; 10, 34 (s, 1H) .

Exemplo 1.1: 4-Dietilamino-3-(trifluorometil)-benzonitrilo

Agita-se durante 16 horas num reactor bem fechado uma mistura de 4-bromo-3-(trifluorometil)-benzonitrilo (Yonezawa et al., Synthetic Communications (1996), 26, 1575-1578; 6,0 g, 24 mmol), dietilamina (8,3 mL, 80 mmol) e 25 mL de N,N-dimetilacetamida. trata-se a mistura

Depois de se arrefecer 56 ΡΕ1546127 reaccional com uma solução aquosa semi saturada de hidrogenocarbonato de sódio e extrai-se três vezes com acetato de etilo. A mistura dos extractos é seca (Na2S04) e evapora-se o solvente sob pressão reduzida para secar. Purifica-se o produto em bruto por cromatografia em coluna sobre silicagel, eluindo com hexano/acetato de etilo para se obter o composto em titulo sob a forma de um óleo cor de laranja. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ): 0,96 (t, 6H) ; 3,08 (q, 4H); 7,61 (d, 1H); 8,04 (dd, 1H); 8,16 (d, 1H).

Exemplo 1.2: Ácido 4-dietilamino-3-(trifluorometil)-ben-zóico

Agita-se durante 20 horas a 95°C uma mistura de 4-dietilamino-3-(trifluorometil)-benzonitrilo (1,21 g, 5 mmol), 12 mL de ácido acético e 8 mL de ácido clorídrico concentrado (a 37%) . Depois de arrefecer, evapora-se a mistura reaccional à secura sob pressão reduzida. Dissolve-se o resíduo e numa solução semi saturada de carbonato de sódio quente, ajusta-se o pH a 5-6 pela adição gota a gota de ácido clorídrico 2M. Separa-se o precipitado formado por filtração, lava-se com água e seca-se em vazio para se obter um sólido branco. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, 6): 0,94 (t, 6H) ; 3,02 (q, 4H); 7,58 (d, 1 H); 8,11-8,16 (m, 2H) ; 13,35 (lg., 1H) . 57 ΡΕ1546127

Exemplo 2 N-[4-Metil-3-{4-(3-piridinil)-2-pirimidinil}amino]fenil]-4-(1-pirrolidinil)-3-(trifluorometil)-benzamida

Prepara-se o composto em título por um método análogo ao descrito no Exemplo 1, utilizando 4-metil-N-[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-1,3-benzenodiamina e 4—(1— pirrolidinil)-3-(trifluorometil)-benzóico como matérias-primas . RMN de 1 H (400 MHz , DMSO-de, δ): 1,91 -1,96 (m, 4H) ; 2, 22 (S, 3H); 3,38- 3,46 (m, 4H) ; 7,06 (d, 1H) ; 7,20 (d, 1H) r 7, 43 (d, 1H); 7 348 (dd, 1H) ; 7,50 -7, 54 (m, 1H) ; 8, 05 -8, 07 (m, 2H) ; 8,24 (d, 1H) ; 8, 48 (dt, 1H) ; 8,51 (d, 1H) ; 8, 68 (dd, 1H) Γ- cr» co (s, 1H) ; 9, 28 (m, 1H) ; 10, 08 (s, 1H) .

Exemplo 2.1: 4-(1-Pirrolidinil)-3-(trifluorometil)-benzo- nitrilo

Prepara-se o composto em título utilizando um método análogo ao descrito no Exemplo 1.1, partindo de 4-bromo-3-(trifluorometil)-benzonitrilo e de pirrolidina (Fluka, Buchs, Suiça), com uma temperatura reaccional de 95°C. RMN de *Η (400 MHz, DMSO-d6, δ): 1,90-1, 96 (m, 4H) ; 3,39-3,47 (m, 4H) ; 7,03 (d, 1H) ; 7,75 (dd, 1H) ; 7,99 (d, 1H). 58 ΡΕ1546127

Exemplo 2.2: Ácido 4-(1-pirrolidinil)-3-(trifluorometil)-benzóico

Prepara-se o composto em título utilizando um método análogo ao descrito no Exemplo 1.2, partindo de 4-(1-pirrolidinil)-3-(trifluorometil)-benzonitrilo. Cristaliza-se o produto em bruto a partir de cloreto de meti-leno/metanol. RMN de :Η (400 MHz, DMSO-d6, δ): 1,90-1, 97 (m, 4H); 3,38-3, 45 (m, 4H); 7,01 (d,lH); 7,90 (dd, 1H); 8,10 (d, 1H); 12,65 (lg., 1H).

Exemplo 3 N-[4-Metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]fenil]-4-(4-morfolinil)-3-(trifluorometil)-benzamida.

Prepara-se o composto em título utilizando um método análogo ao descrito no Exemplo 1, partindo de 4-metil-N[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-1,3-benzenodiamina e de ácido 4-(4-morfolinil)-3-(trifluorometil)-benzóico como matérias-primas. RMN de (400 MHz, DMSO -d6, δ) : 2, 23 (S, 3H) ; 2, 96 (m, 4H) ; 3, 74 (m, 4H) ; 7,23 (d, 1H) ; 7, 44 (d, 1H) ; 7, 48 (dd, 1H) , r 7, 52 (ddd, , 1H); 7,66 (d, 1H) ; 8, , 07 (d, 1H) ; 8, 23- -8,25 (m, 2H) ; 8 ,48 (dt, 1H); 8 1,52 (d, 1H) ; 8 ,69 (dd, 1H) ; 8,99 (s, 1H) ; 9, 28 ( m, 1H); 10, 34 ( :s, ih). 59 ΡΕ1546127

Exemplo 3.1: 4-(4-Morfolinil)-3-(trifluorometil)-benzoni- trilo

Prepara-se o composto em título recorrendo a um método análogo ao descrito no Exemplo 1.1, partindo de 4-bromo-3-(trifluorometil)-benzonitrilo e de morfolina (Flu-ka, Buchs, Suiça), com uma temperatura reaccional de 95°C. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ): 3,00 (m, 4H) ; 3,72 (m, 4H); 7,60 (d, 1H); 8,09 (dd, 1H) ; 8,19 (d, 1H) .

Exemplo 3.2: Ácido 4-(4-morfolinil)-3- (trifluorometil)-benzóico

Prepara-se o composto em título recorrendo a um método análogo ao descrito no Exemplo 1.2, partindo de 4-(4-morfolinil)-3-(trifluorometil)-benzonitrilo. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2,92-3,01 (m, 4H) ; 3,68-3, 76 (m, 4H) ; 7,58 (d, 1H) ; 8,12-8,19 (m, 2H) ; 13,25 (lg., 1H).

Exemplo 4 N-[4-Metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino] fenil] -4-(1-piperidinil)-3-(trifluorometil)-benzamida.

Prepara-se o composto em título recorrendo a um 60 ΡΕ1546127 método análogo ao descrito no Exemplo 1, partindo de 4-metil-N-[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-1,3-benzenodiamina e de ácido 4-(1-piperidinil)-3-(trifluorometil)-benzóico a titulo de matérias-primas. RMN de (400 MHz, DMSO-d6, δ): 1,51-1,70 (m, 6H) ; 2,23 (s, 3H) ; 2, 89-2, 95 (m, 4H) ; 7,22 (d, 1H) ; 7,44 (d, 1H); 7,48 (dd, 1H); 7,52 (ddd, 1H); 7,57 (d, 1H); 8,06 (d, 1H); 8,18-8,23 (m, 2H) ; 8,48 (dt, 1H) ; 8,51 (d, 1H) ; 8,68 (dd, 1H); 8,99 (s, 1H); 9,28 (d, 1H); 10,30 (s, 1H).

Exemplo 4.1: 4-(1-Piperidinil)-3-(trifluorometil)-benzonitrilo

Prepara-se o composto em titulo recorrendo a um método análogo ao descrito no Exemplo 1.1, partindo de 4-bromo-3-(trifluorometil)-benzonitrilo e de piperidina (Fluka, Buchs, Suiça), com uma temperatura reaccional de 95°C. RMN de (400 MHz, DMSO-d6, δ): 1,51-1,59 (m, 2H) ; 1,59-1, 68 (m, 4H) ; 2,93-3,00 (m, 4H) ; 7,51 (d, 1H) ; 8,03 (dd, 1H); 8,14 (d, 1H).

Exemplo 4.2: Ácido 4-(1-piperidinil)-3-(trifluorometil)-benzóico

Prepara-se o composto em titulo recorrendo a um 61 ΡΕ1546127 método análogo ao descrito no Exemplo 1.2, partindo de 4-(1-piperidinil)-3-(trifluorometil)-benzonitrilo. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, δ: 1,51-1,59 (m, 2H); 1,59-1, 69 (m, 4H) ; 2,89-2,97 (m, 4H) ; 7,49 (m, 1H) ; 8,10-8,15 (m, 2H); 13,19 (lg., 1H).

Exemplo 5 4-(4-Metil-l-piperazinil)-N-[4-metil-3-[[4-(3-piridinil) -2-pirimidinilamino]fenil]-3-(trifluorometil)-benzamida

Prepara-se o composto em título recorrendo a um método análogo ao descrito no Exemplo 1, partindo de 4-metil-N-[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-1,3-benzenodiamina e de 4-(4-metil-l-piperazinil)-3-(trifluorometil)-benzóico a título de como matérias-primas. RMN de ^ (400 MHz, DMSO-de, δ): 2,23 (s, 3H) ; 2,39-2,48 (s lg., 3H); 2, 63-2, 85 (lg., 4H) ; 3,00-3, 09 (m lg., 4H) ; 7,23 (d, 1H) ; 7,44 (d, 1H) ; 7,49 (dd, 1H) ; 7,52 (ddd, 1H) ; 7,64 (d, 1H) ; 8,07 (d, 1H) ; 8,23-8,25 (m, 2H) ; 8,48 (dt, 1H); 8,52 (d, 1H) ; 8,69 (dd, 1H) ; 9,0 (s, 1H) ; 9,28 (m, 1H); 10,35 (s, 1H).

Exemplo 5.1: Ácido 4- (4-metil-l-piperazinil)-3-(trifluorometil)-benzóico

Agita-se num reactor fechado, durante 14 horas a 62 ΡΕ1546127 95°C, uma mistura de 4-bromo-3-(trifluorometil)-benzonitri-lo (Yonezawa et ai., Synthetic Communications (1996) 26, 1575-8; 2,47 g, 12 mmol), l-metilpiperazina (Fluka, Buchs, Suiça, 5,33 mL, 48 mmol) e 15 mL de N,N-dimetilacetamida. Depois de arrefecer, evapora-se a mistura reaccional à secura sob pressão reduzida e trata-se o resíduo com uma solução aquosa semi saturada de carbonato de sódio extraindo-se em seguida com acetato de etilo. Seca-se em seguida a mistura dos extractos (Na2S04) e evapora-se o solvente sob pressão reduzida. Purifica-se o produto em bruto por cromatografia em coluna sobre silicagel, eluindo com cloreto de metileno/metanol, para se obter o 4— (4— metil-l-piperazinil)-3-(trifluorometil)-benzonitrilo sob a forma de um óleo amarelo claro. Adiciona-se uma mistura constituída por 30 mL de dioxano, 15 mL de água e 11,25 mL de solução aquosa 2M de hidróxido de sódio a 4-(4-metil-l-piperazinil)-3-(trifluorometil)-benzonitrilo, e agita-se a mistura reaccional durante 16 horas a 95°C. Depois de arrefecer, evapora-se a mistura. Trata-se o resíduo resultante com água, ajusta-se o pH a -5-6 com uma solução 1 M de ácido clorídrico e separa-se o solvente por evaporação sob pressão reduzida. Trata-se o resíduo com metanol quente, separa-se o sal insolúvel e evapora-se o filtrado para se obter o composto em título em bruto, o qual se utiliza no passo seguinte sem purificação adicional. RMN de *Η (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2,28 (s, 3H) ; 2,50-2,58 (m, 4H); 2,94-3,02 (m, 4H); 7,52 (m, 1H); 8,11-8,17 (m, 2H); 13,19 (lg., 1H). 63 ΡΕ1546127

Exemplo 6 4-(lH-Imidazol-l-il)-N-[4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]fenil]-3-(trifluorometil)-benzamida.

Prepara-se o composto em título por um método análogo ao que foi descrito para o Exemplo 1, partindo de 4-metil-N-[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-1,3-benzenodi-amina e de ácido 4-(lH-imidazol-l-il)-3-(trifluorometil)-benzóico como matérias-primas. RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2,25 (s, 3H) ; 7,12-7,15 (m, 1H) ; 7,26 (d, 1H) ; 7, 43-7,55 (m, 4H) ; 7,78 (d, 1H); 7,91 (s, 1H); 8,12 (lg., 1H); 8,38-8,42 (m, 1H); 8,46-8,54 (m, 3H); 8,67-8,70 (m, 1H); 9,01 (s, 1H); 9,27-9,30 (m, 1H); 10,57 (s lg., 1H).

Exemplo 6.1: 4-(lH-Imidazol-l-il)-3-(trifluorometil)-benzo-nitrilo

Prepara-se o composto em título por um método análogo ao que foi descrito para o Exemplo 1.1, partindo de 4-cloro-3-(trifluorometil)-benzonitrilo (Lancaster Synthe-sis, GmbH) e de imidazole (Fluka, Buchs, Suíça), com uma temperatura reaccional de 110°C. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ): 7,13 (m, 1H) ; 7,47 (s, 1H); 7,85 (d, 1H) ; 7,91 (s, 1H) ; 8,37 (dd, 1H) ; 8,57 (m, 1H). 64 ΡΕ1546127

Exemplo 6.2: Ácido 4-(lH-imidazol-l-il)-3-(trifluorometil)-benzóico

Agita-se durante 16 horas a 95°C uma mistura de 4-(lH-imidazol-l-il)-3-(trifluorometil)-benzonitrilo (1, 99 g, 8,4 mmol), 12 mL de ácido acético e 6 mL de ácido clorídrico 12 M (a 37%) . Depois de se arrefecer a mistura reaccional sob pressão reduzida em água ajusta-se o pH a 5-6 pela adição gota a gota de solução 1 M de hidróxido de sódio. Separa-se o precipitado por filtração, lava-se com água e seca-se em vazio para se obter o composto em titulo sob a forma de um sólido. RMN de (400 MHz, DMSO-d6, δ): 7,13 (s, 1H) ; 7,47 (s, 1H); 7,75 (d, 1H) ; 7,91 (s, 1H) ; 8,31-8,39 (m, 2H); 13,84 (lg., 1H).

Exemplo 7 4-(2-Metil-lH-imidazol-l-il)-N-[4-metil-3-[[4-(3-piridi-nil)-2-pirimidinil]amino]fenil]-3-(trifluorometil)- benzamida.

Prepara-se o composto em titulo por um método análogo ao que foi descrito para o Exemplo 1, partindo de 4-metil-N-[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-1,3-benzenodi-amina e de ácido 4-(2-metil-lH-imidazol-l-il)-3-(trifluoro-metil)-benzóico como matérias-primas. 65 ΡΕ1546127 RMN de :Η (400 MHz , DMSO-de, δ) : 2,09 (s, 3H) ; 2,26 (s, 3H) ; 6,96 (d, 1H) ; 7,24 -7,28 (m, 2H) ; 7, 45 (d, 1H) ; 7,50 -7,55 (m, 2H) ; 7, 78 (d, 1H); 8,12 (d, 1H) ; 8,40 (m, 1H) ; 8,46- -8,51 (m, 2H) ; 8, 53 (d, 1H); 8,69 (dd, 1H) ; 9,03 (s, 1H); 9,30 (d, 1H); 10,59 (s, 1H).

Exemplo 7.1: 4-(2-Metil-lH-imidazol-l-il)-3-(trlfluorome-til)-benzonitrilo

Prepara-se o composto em título por um método análogo ao que foi descrito para o Exemplo 1.1, partindo de 4-cloro-3-(trifluorometil)-benzonitrilo (Lancaster Synthe-sis, GmbH) e de 2-metil-imidazole (Fluka, Buchs, Suíça), com uma temperatura reaccional de 145°C durante 38 horas. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2,06 (s, 3H) ; 6,95 (m, 1H); 7,25 (m, 1H) ; 7,86 (d, 1H) ; 8,39 (dd, 1H) ; 8,58 (m, 1H).

Exemplo 7.2: Ácido 4-(2-metil-lH-imidazol-l-il)-3-(trifluorometil) -benzóico

Agita-se durante 16 horas a 95°C uma mistura de 4-(2-metil-lH-imidazol-l-il)-3-(trifluorometil)-benzonitrilo (1,01 g, 4 mmol), 6 mL de ácido acético e 3 mL de ácido clorídrico 12 M (a 37%). Depois de arrefecer, evapora-se a mistura reaccional à secura sob pressão reduzida. Evapora-se o resíduo resultante duas vezes com tolueno, dissolve-se 66 ΡΕ1546127 em água e ajusta-se o pH a 5-6 pela adição gota a gota de uma solução 1 M de hidróxido de sódio. Extrai-se a fase aquosa por duas vezes com n-butanol e evapora-se a fase orgânica para se obter o composto em titulo sob a forma de um sólido beige. RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2,06 (s, 3H) ; 6,98 (d, 1H); 7,28 (lg., 1H) ; 7,75 (m, 1H) ; 8,34-8,38 (m, 2H) .

Exemplo 8 4-(4-Metil-lH-imidazol-l-il)-N-[4-metil-3-[[4-(3-piridi-nil)-2-pirimidinil]amino]fenil]-3-(trifluorometil)-benzamida.

Prepara-se o composto em titulo por um método análogo ao que foi descrito para o Exemplo 1, partindo de 4-metil-N-[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-1,3-benzenodi-amina e de ácido 4-(4-metil-lH-imidazol-l-il)-3-(trifluorometil) -benzóico como matérias-primas. RMN de 1ti (400 MHz, DMSO-de, δ): 2, 19 (S, 3H) ; 2,25 (s, 3H) ; 7,16 (S, 1H); 7,26 (d, 1H) ; 7, 45 (d, 1H); 7,49-7,56 (m, 2H) ; 7, 72-7, 77 (m, 2H) ; 8,12 dg • r 1H); 8,38 (d lg., 1H) ; 8,45-8,51 (m, 2H) ; 8,53 (d, 1H) r 8,69 (dd, 1H); 9,01 (s, 1H); 9,29 (m, 1H); 10,55 (s, 1H). 67 ΡΕ1546127

Exemplo 8.1: 4-H-imidazol-l-il)-3-(trifluorometil)-benzo-nitrilo

Prepara-se o composto em título por um método análogo ao que foi descrito para o Exemplo 1.1, partindo de 4-cloro-3-(trifluorometil)-benzonitrilo (Lancaster Synthe-sis, GmbH) e de 4-(5)metil-imidazole (Fluka, Buchs, Suíça), com uma temperatura reaccional de 145°C durante 14 horas. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2,17 (s, 3H) ; 7,16 (s lg., 1H) ; 7,76 (s lg., 1H) ; 7,81 (d, 1H) ; 8,34 (dd, 1H) ; 8,53-8,57 (m, 1H).

Exemplo_8.2:_Ácido_4- (4-metil-lH-imidazol-l-il) -3- (trifluorometil)-benzóico

Agita-se durante 16 horas a 95°C uma mistura de 4-(4-metil-lH-imidazol-l-il)-3-(trifluorometil)-benzonitrilo (1,01 g, 4 mmol), 6 mL de ácido acético e 3 mL de ácido clorídrico 12 M (a 37%). Depois de arrefecer, evapora-se a mistura reaccional à secura sob pressão reduzida. Evapora-se o resíduo resultante duas vezes com tolueno, dissolve-se em água e ajusta-se o pH a 5-6 pela adição gota a gota de uma solução 1 M de hidróxido de sódio. Extrai-se a fase aquosa por duas vezes com n-butanol e evapora-se a fase orgânica para se obter o composto em título sob a forma de um sólido amarelo claro. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2,18 (s, 3H) ; 7,16 (s lg., 1H); 7,69-7,77 (m, 2H); 8,30-8,37 (m, 2H). 68 ΡΕ1546127

Exemplo 9 4-(2,4-Dimetil-lH-imidazol-l-ivl)-N-4-metil-3-[[4-3-piridi-nil)-2-pirimidinil]amino]fenil]-3-(trifluorometil)-benzamida.

Prepara-se o composto em título por um método análogo ao que foi descrito para o Exemplo 1, partindo de 4-metil-N-[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-1,3-benzenodi-amina e de ácido 4-(2,4-dimetil-lH-imidazol-l-il)-3-(tri-fluorometil)-benzóico como matérias-primas. RMN de 1H (400 MHz , DMSO-de, δ): 2,03 (s, 3H); 2,11 (s, 3H) ; 2, 25 (s, 3H) ; 6,94 (s, 1H) ; 7,26 (d, 1H); 7, 45 (d, 1H) ; 7, 49- -7,55 (m, 2H); 7, 74 (d, 1H); 8,11 (d, 1H) ; 8,38 (dd, 1H) ; 8, 45 (d, 1H) ; 8,49 (dt, 1H) ; 8,53 (d, 1H) ; 8,69 (dd, 1H) ; 9,02 (s, 1H) ; 9,29 (d, 1H) ; 10, 57 (s, 1H) .

Exemplo 9.1 :4-(2,4-Dimetil-lH-imidazol-l-il)-3-(trifluoro-metil)-benzonitrilo

Prepara-se o composto em título por um método análogo ao que foi descrito para o Exemplo 1.1, partindo de 4-cloro-3-(trifluorometil)-benzonitrilo (Lancaster Synthe-sis, GmbH) e de 2,4-dimetil-imidazole (Trans World Chemicals), com uma temperatura reaccional de 145°C durante 20 horas. 69 ΡΕ1546127 RMN de XH (400 MHz, DMSO-de, δ): 2,01 (s, 3H) ; 2,09 (s, 3H); 6,93 (s, 1H) ; 7,81 (d, 1H) ; 8,36 (dd, 1H) ; 8,54 (d, 1H).

Exemplo 9.2: Ácido 4-(2,4-dimetil-lH-imidazol-l-il)-3-(tri-fluorometil)-benzóico

Agita-se durante 16 horas a 95°C uma mistura de 11 mL de dioxano, 5,5 mL de água e 4,9 mL de solução aquosa 2 M de hidróxido de sódio a 4-(4-2,4-dimetil-lH-imidazol-l-il)-3-(trifluorometil)-benzonitrilo (0,65 g, 2,45 mmol). Depois de arrefecer, evapora-se a mistura reaccional à secura sob pressão reduzida. Depois de arrefecer, evapora-se a mistura à secura sob pressão reduzida. Trata-se o residuo resultante com água, ajusta-se o pH a ~5-6 com ácido clorídrico 2 M e extrai-se a fase aquosa por duas vezes com n-butanol. Evapora-se o conjunto dos extractos orgânicos para se obter o composto em titulo sob a forma de um sólido. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2,14 (s, 3H) ; 2,18 (s, 3H); 7,18 (s lg., 1H); 7,81 (d, 1H); 8,31-8,44 (m, 2H) .

Exemplo 10 3-(lH-imidazol-l-il)-N-[4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]fenil]-5-(trifluorometil)-benzamida.

Prepara-se o composto em titulo por um método 70 ΡΕ1546127 análogo ao que foi descrito para o Exemplo 1, partindo de 4-metil-N-[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-1,3-benzenodi-amina e de ácido 3-(lH-imidazol-l-il)-5-(trifluorometil)-benzóico como matérias-primas. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2,26 (s, 3H); 7,19 (s, 1H); 7,27 (d, 1H) ; 7,45 (d, 1H) ; 7, 49-7, 56 (m, 2H); 8,02 (lg., 1H); 8,11 (s lg., 1H); 8,21 (s, 1H); 8,30 (s, 1H); 8, 45-8, 54 (m, 4H) ; 8,69 (dd, 1H) ; 9,01 (s, 1H) ; 9,30 (m, 1H); 10,50 (s. lg., 1H).

Exemplo 10.1: 3-(ΙΗ-imidazol-l-il)-5-(trifluorometil)-ben- zonitrilo

Prepara-se o composto em título por um método análogo ao que foi descrito para o Exemplo 1.1, partindo de 3-fluoro-5-(trifluorometil)-benzonitrilo (Lancaster Synthe-sis, GmbH) e de imidazole (Fluka, Buchs, Suiça), com uma temperatura reaccional de 110°C durante 24 horas. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ) : : 7,17 (s, 1H); 8,03 (m, 1H) ; 8,32 (s, 1H); 8 .46 (s lg., 1H) ; 8, 54 (d, 1H) ; 8,62 (m, 1H) .

Exemplo 10.2: Ácido 3-(lH-imidazol-l-il)-5-(trifluorome-til)-benzóico

Prepara-se o composto em título utilizando um método análogo ao descrito no Exemplo 6.2, partindo de 3-(lH-imidazol-l-il)-5-(trifluorometil)-benzonitrilo. 71 ΡΕ1546127 RMN de 1n (400 MHz, DMSO-de, δ) : 7,17 8, 03 (s, 1H); 8,12 (s, 1H); 8 ,35 (s, 1H) ; 8,41 8, 53 (s, 1H) ; 13,90 dg., ih). (s, 1H); (s, 1H);

Exemplo 11 3- (2-Metil-lH-imidazol-l-il)-N-[4-metil-3[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]fenil]-5-(trifluorometil)-benzamida.

Prepara-se o composto em título por um método análogo ao que foi descrito para o Exemplo 1, partindo de 4- metil-N-[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-1,3-benzenodi-amina e de ácido 3-(2-metil-lH-imidazol-l-il)-5-(trifluoro-metil)-benzóico como matérias-primas. RMN de (400 MHz, DMSO-de, δ): 2,25 (s, 3H); 2,37 (s, 3H) ; 6,99 (d, 1H); 7, 26 (d, 1H) ; 7, 45 (d, 1H) ; 7, 49- 7,54 (m, 3H) ; 8,10-8,15 (m, 2H) ; 8,35 (m, 2H) ; 8, 48 (dt, 1H) ; 8,53 (d, 1H); 8,68 (dd, 1H) ; 9,01 (s, 1H) ; 9, 29 (m, 1H); 10,49 (s, 1H).

Exemplo 11.1: 3-(2-Metil-lH-imidazol-l-il)-5-(trifluoro metil) -benzonitrilo

Prepara-se o composto em título por um método análogo ao que foi descrito para o Exemplo 1.1, partindo de 3-fluoro-5-(trifluorometil)-benzonitrilo (Lancaster Synthe-sis, GmbH) e de 2-metil-imidazole (Fluka, Buchs, Suiça), com uma temperatura reaccional de 145°C durante 24 horas. 72 ΡΕ1546127 RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2,36 (S, 3H) ; 6,97 (d, 1H); 7,48 (d, 1H); 8,26 (s lg., 1H); 8,41 (m, 1H); 8,46 (s lg., 1H).

Exemplo 11.2: Ácido 3-(2-metil-lH-imidazol-l-il)-5-(tri-fluorometil)-benzóico

Prepara-se o composto em título utilizando um método análogo ao descrito no Exemplo 9.2, partindo de 3-(2-metil-lH-imidazol-l-il)-5-(trifluorornetil)-benzonitrilo. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2,33 (s, 3H) ; 6,97 (d, 1H); 7,48 (d, 1H); 8,10 (lg., 1H); 8,15 (lg., 1H); 8,22 (lg., 1H).

Exemplo 12 3-(4-Metil-lH-imidazol-l-il)-N-[4-metil-3-[[4-(3-piridi-nil)-2-pirimidinil]amino]fenil]-5-(trifluorometil)-benzamida.

Prepara-se o composto em título por um método análogo ao que foi descrito para o Exemplo 1, partindo de 4-metil-N-[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-1,3-benzenodi-amina e de ácido 3-(4-metil-lH-imidazol-l-il)-5-(trifluoro-metil)-benzóico como matérias-primas. RMN de (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2,20 (s, 3H) ; 73 ΡΕ1546127 2,26 (s, 3H) ; 2H) ; 7,72 (s, 1H); 8,39-8,55 (m, 1H); 10,48

Exemplo 12.1: 7,27 (d, 1H); 1H); 8,12 (lg., (m, 4H) ; 8,69 (s, 1H) . 7,45 (d, 1H); 1H); 8,18 (s, (m, 1H); 9,01 7,49-7,56 (m, 1H); 8,25 (s, (s, 1H); 9,31 3-(4-Metil-lH-imidazol-l-il)-5-(trifluorome- til)-benzonitrilo

Prepara-se o composto em título por um método análogo ao que foi descrito para o Exemplo 1.1, partindo de 3-fluoro-5-(trifluorometil)-benzonitrilo (Lancaster Synthe-sis, GmbH) e de 4(5)-metil-imidazole (Fluka, Buchs, Suiça), com uma temperatura reaccional de 145°C durante 24 horas. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2,18 (S, 3H) ; 7,74 (m, 1H); 8,27 (s lg., 1H); 8,39 (s lg., 1H); 8,43 (d, 1H); 8,56 (s lg., 1H).

Exemplo 12.2: Ácido 3-(4-metil-lH-imidazol-l-il)-5-(tri-fluorometil)-benzóico

Prepara-se o composto em título utilizando um método análogo ao descrito no Exemplo 9.2, partindo de 3-(4-metil-H-imidazol-l-il)-5-(trifluorometil)-benzonitrilo. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2,27 (s, 3H) ; 8,00 (s, 1H); 8,18 (s, 1H); 8,40 (m); 8,47 (lg., 1H). 74 ΡΕ1546127

Exemplo 13 N-[4-Metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]fenil]-3-(4-morfolinil)-5-(trifluorometil)-benzamida.

Prepara-se o composto em título por um método análogo ao que foi descrito para o Exemplo 1, partindo de 4-metil-N-[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-1,3-benzenodi-amina e de ácido 3-(4-morfolinil)-5-(trifluorometil)-ben-zóico como matérias-primas. RMN de XH (400 MHz, DMSO-de, δ) : 2,24 (s, 3H) ; 3,28- -3,32 (m, 4H); 3 , 75-3 ,79 (m, 4H) ; 7,23 (d, 1H) ; 7,39 (lg., 1H) ; 7, 44 (d, 1H) ; 7,48 (dd, 1H); 7 ,51 (ddd, 1H) ; 7, 65 dg., 1H :); 7,73 (lg ., 1H); 8,07 (d, 1H) ; 8,47 (dt, 1H) ; 8,52 (d, 1H); 8 , 68 i [dd, 1H) ; 8,98 (s, 1H) ; 9,29 (m, 1H) ; 10,32 (s, 1H).

Exemplo 13.1: 3-(4-Morfolinil)-5-(trifluorometil)-benzoni- trilo

Prepara-se o composto em título por um método análogo ao que foi descrito para o Exemplo 1.1, partindo de 3-fluoro-5-(trifluorometil)-benzonitrilo (Lancaster Synthe-sis, GmbH) e de morfolina, com uma temperatura reaccional de 105°C durante 14 horas. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ): 3,25-3,35 (m, 4H) ; 3, 69-3, 77 (m, 4H); 7,49 (s lg., 1H); 7,56 (s lg., 1H); 7,66 (s lg., 1H). 75 ΡΕ1546127

Exemplo 13.2: Ácido 3-(4-Morfolinil)-5-(trifluorometil)-benzóico

Prepara-se o composto em título utilizando um método análogo ao descrito no Exemplo 9.2, partindo de 3-(4-morfolinil)-5-(trifluorometil)-benzonitrilo . RMN de (400 MHz, DMSO-d6, δ): 3,20-3,28 (m, 4H); 3,69-3,77 (m, 4H); 7,21 (s lg., 1H); 7,33 (s lg., 1H); 7,43 (s lg., 1H).

Exemplo 14 3- (4-Metil-l-piperazinil)-N-[4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]fenil]-5-(trifluorometil)-benzamida.

Prepara-se o composto em título por um método análogo ao que foi descrito para o Exemplo 1, partindo de 4- metil-N-[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-1,3-benzenodi-amina e de ácido 3-(4-metil-l-piperazinil)-5-(trifluorometil) -benzóico como matérias-primas. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2,24 (s, 6H) ; 2,46-2,50 (m, 4H); 3,30-3,36 (m, 4H); 7,24 (d, 1H); 7,37 (s lg., 1H); 7,44 (d, 1H); 7,49 (dd, 1H); 7,52 (dd, 1H); 7,62 (S lg., 1H); 7,72 (s lg., 1H); 8,08 (d, 1H); 8,47 (dt, 1H); 8,52 (d, 1H); 8,70 (dd, 1H) ; 8,99 (s, 1H) ; 9,30 (d, 1H) ; 10,31 (s, 1H) . 76 ΡΕ1546127

Exemplo 14.1: 3-(4-Metil-l-piperazinil)-5-(trifluorometil)-benzonitrilo

Prepara-se o composto em título por um método análogo ao que foi descrito para o Exemplo 1.1, partindo de 3-fluoro-5-(trifluorometil)-benzonitrilo (Lancaster Synthe-sis, GmbH) e de 1-metilpiperazina (Fluka, Buchs, Suiça). RMN 1R (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2,22 (s, 3H); 2,41-2,46 (m, 4H); 3,31-3,37 (m, 4H); 7,48 (s lg., 1H); 7,52 (s lg., 1H); 7,65 (s lg., 1H).

Exemplo 14.2: Ácido 3-(4-metilpiperazinil)-(trifluorometil )-benzóico

Adiciona-se uma mistura constituída por 50 mL de dioxano, 25 mL de água e 18, 75 mL de solução aquosa 2 M de hidróxido de sódio a 3-(4-metil-l-piperaziniyl)-5-(trifluo-rometil)-benzonitrilo (2,69 g, 10 mmol) e agitou-se a mistura reaccional durante 16 horas a 95°C. Depois de arrefecer, evapora-se a mistura à secura sob pressão reduzida. Trata-se o resíduo resultante com água, ajusta-se o pH a ~5-6 com ácido clorídrico 2 M. Separa-se o precipitado por filtração e extrai-se por duas vezes com n-butanol. Evapora-se a mistura dos extractos orgânicos para se obter o composto em título. RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2,41 (s, 3H) ; 2, 69-2, 76 (m, 4H) ; 3, 37-3, 42 (m, 4H) ; 7,45 (s lg., 1H) ; 7,55 (s lg., 1H) ; 7,70 (s lg., 1H) . 77 ΡΕ1546127

Exemplo 15 4-[[2-(Dimetilamino)etil]metilamino]-N-[4-meti1-3-[[4 —(3 — piridinil)-2-pirimidinil]amino]fenil]-3-(trifluorometil)- benzamida.

Prepara-se o composto em título utilizando um método análogo ao descrito no Exemplo 1, partindo de 4- metil-N- [4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-1,3-benzenodiamina e ácido 4-[[2-(dimetil-amino)etil]metilamino]-3-(trifluorometil ) -benzóico como matérias-primas. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2,10 (s, 6H) ; 2,23 (s, 3H); 2,35 (m, 2H) ; 2,78 (s, 3H) ; 3,14 (m, 2H) ; 7,22 (d, 1H); 7,43 (d, 1H); 7,48 (dd, 1H); 7,51 (ddd, 1H); 7,59 (d, 1H); 8,07 (d, 1H) ; 8,16-8,23 (m, 2H) ; 8,48 (dt, 1H) ; 8,51 (d, 1H); 8,68 (dd, 1H) ; 8,99 (s, 1H) ; 9,28 (m, 1H); 10,28 (s, 1H) .

Exemplo 15.1: 4-[[2-(Dimetilamino)etil]metilamino]-3-(tri fluorometil) -benzonitrilo

Prepara-se o composto em título por um método análogo ao que foi descrito para o Exemplo 1.1, partindo de 4-cloro-3-(trifluorometil)-benzonitrilo (Lancaster Synthe-sis, GmbH) e de N,N,N'-trimetil-l,2-etanodiamina (Fluka, Buchs, Suiça). 78 ΡΕ1546127 RMN de XH (400 MHz, DMSO-de, δ): 2, 09 (s, 6H); 2,38 (t, 2H) ; 2, 86 (s, 3H); 3,24 (t, 2H) ; 7, 45 (d, 1H); 7, 94 (dd, 1H) ; 8, 09 (d, 1H) .

Exemplo 15.2: Ácido 4-[ [2-(dimetilamino)etil]metilamino]-3-(trifluorometil)-benzóico

Adiciona-se uma mistura constituída por 25 mL de dioxano, 12,5 mL de água e 9,4 mL de solução aquosa 2 M de hidróxido de sódio a 4-[[2-(dimetilamino)etil]metilamino]-3-(trifluorometil)-benzonitrilo (1,35 g, 5 mmol), e agita-se a mistura reaccional durante 16 horas a 95°C. Depois de arrefecer, evapora-se a mistura à secura sob pressão reduzida. Trata-se o resíduo que se obtém com água, ajusta-se o pH a ~5 com ácido clorídrico 1 M e evapora-se a mistura à secura sob pressão reduzida. Trata-se o resíduo sólido com metanol, filtra-se a suspensão, e evapora-se o filtrado para se obter o composto em título. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ) : 2,57 (s, 6H) ; 3H) ; 2, 96 (m, 2H) ; 3,38 (m, 2H) ; 7, 62 (d, 1H) ; 8,11-8,16 (m, 2H) .

Exemplo 16 4- [Metil-(l-metil-4-piperidinil)amino]-N-[4-metil-3-[[4—(3 — piridinil)-2-pirimidinil]amino]fenil]-3-(trifluorometil)-benzamida.

Prepara-se o composto em título utilizando um 79 ΡΕ1546127 método análogo ao descrito no Exemplo 1, partindo de 4-metil-N-[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-1,3-benzenodiamina e ácido 4-[metil(l-metil-4-piperidinil)amino]-5-(trifluoro-metil)-benzóico como matérias-primas. RMN de XH (400 MHz r DMSO-de, , δ): 1, 46- -1, 57 (m, 2H) ; 1,62 :-1,68 (m, 2H) ; 1,79- -i, 88 (m, 2H); 2, 13 (S, 3H); 2,23 (s, 3H); 2,64 (s, 3H) ; 2, 73- -2,80 (m, 2H) t 2,87- -2,97 (m, 1H) ; 7,22 (d, 1H) ; 7,43 (d, r 1H); 7, 48 (dd r 1H) ; 7,51 (ddd , 1H) ; 7,66 (d, 1H) j ; 8,06 (d, 1H) ; 8, 11 '-8, 24 (m, 2H) ; 8,48 (dt, 1H); 8,51 (d, 1H) ; 8, 68 (dd, 1H) ; 8, 99 (s, 1H) ; 9,28 (m, 1H); 10,32 (s, 1H) .

Exemplo 16.1: Ácido 4-[metil-(l-metil-4-piperidinil)amino]-3-(trifluorometil)-benzóico

Prepara-se o composto em titulo por um método análogo ao que foi descrito para o Exemplo 5.1, partindo de 4-cloro-3-(trifluorometil)-benzonitrilo (Lancaster Synthe-sis, GmbH) e de l-metil-4-(metilamino)-piperidina (Aldrich, Buchs, Suiça). Leva-se a cabo a hidrólise subsequente do nitrilo com hidróxido de sódio numa mistura de dioxano com água, tal como se descreveu no Exemplo 5.1. RMN de 1h (400 MHz, DMSO-dê, δ): 1,77-1, 86 (m, 4H) ; 2,54 (s, 3H); 2,63 (s, 3H); 2, 65-2, 74 (m); 3,13-3,23 (m); 7,63 (d, 1H); 8,12-8,17 (m, 2H). 80 ΡΕ1546127

Exemplo 17 3-Etilamino-N- [4-metil-3-[[4-(3-pirldlnll)-2-pirimidinil]-amino]fenil]-5-(trifluorometil)-benzamida.

Prepara-se o composto em título utilizando um método análogo ao descrito no Exemplo 1, partindo de 4-metil-N-[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-1,3-benzenodiamina e ácido 3-etilamino-5-(trifluorometil)-benzóico como matérias-primas . RMN de 1 H (400 MHz, DMSO-de , δ): 1,19 (t, 3H) ; 2,23 (s, 3H) ; 3,14 : (m, 2H); 6 ;, 36 (t, 1H); i 6,98 (s lg • r 1 H); 7, 22 (d, 1H); 7,32 (s lg., 1H) ; 7, 37 (s lg., 1H); 7, 43 (d, 1H) ; 7, 48 (dd, 1H) ; 7, 51 (dd, 1H) ; 8,06 (d, 1H) ; 8, 48 (dt, 1H) ; : 8,51 (d, 1H) ; 8, 68 (dd, 1H) ; 9,00 (s, 1H) ; 9, 28 (m, 1H) ; 10,25 (s, 1H) .

Exemplo 17.1: Éster metílico do ácido 3-etilamino-5-(trifluorometil) -benzóico

Agita-se a 65°C durante 14 horas uma mistura de éster metílico do ácido 3-amino-5-(trifluorometil)-benzóico (J. Med. Chem. (1969) 12, 299-303; 4,23 g, 19,3 mmol), carbonato de potássio (8,0 g, 57,9 mmol) e iodoetano (3,12 mL, 38,6 mmol) em 20 mL de N, N-dimetilf ormamida, num reactor bem fechado. Depois de arrefecer, separa-se a 81 ΡΕ1546127 mistura reaccional por filtração e evapora-se o filtrado à secura sob pressão reduzida. Trata-se o resíduo com água e extrai-se por três vezes com acetato de etilo. Seca-se a mistura dos extractos (Na2S04) e evapora-se o solvente sob pressão reduzida. Purifica-se o resíduo que se obtém por cromatografia em coluna sobre silicagel, eluindo com hexano/cloreto de metileno (a 1:1). RMN de 'h (400 MHz, DMSO-d6, δ): 1,18 (t, 3H) ; 3,10 (m, 2H); 3,85 (s, 3H); 6,46 (t, 1H); 7,02 (lg., 1H) ; 7,29 (S lg., 1H); 7,37 (lg., 1H).

Exemplo 17.2: Ácido 3-etilamino-5-(trifluorometil)-benzóico

Agita-se durante 4 horas a 70°C uma mistura de éster metílico de 3-etilamino-5-(trifluorometil)-benzóico (1,38 g, 5,6 mmol), 5,5 mL de solução aquosa 1M de hidróxido de sódio e 12 mL de etanol. Depois de arrefecer, evapora-se a mistura à secura sob pressão reduzida. Dissolve-se o resíduo que se obtém em água, ajusta-se o pH a 5 com ácido clorídrico 1 M. Separa-se o precipitado por filtração, lava-se com água e seca-se em vazio para se obter o composto em título. RMN de (400 MHz, DMSO-d6, δ): 1,18 (t, 3H) ; 3,10 (m, 2H); 6,39 (m, 1H); 6,99 (s lg., 1H); 7,29 (s lg., 1H); 7,36 (s lg., 1H); 13,15 (lg., 1H). 82 ΡΕ1546127

Exemplo 18 3- Acetilamino-N-[4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidi-nil]amino]fenil]-5-(trifluorometil)-benzamida.

Adiciona-se cianofosfonato de dietilo (Aldrich, Buchs, Suiça; 0,66 mL, 4,0 mmol) a uma mistura agitada de 4- metil-N- [4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]-1,3-benzenodi-amina (554 mg, 2,0 mmol), ácido 3-acetilamino-5-(trifluorometil ) -benzóico (495 mg, 2,0 mmol) e trietilamina (1,12 mL, 8,0 mmol) em 10 mL de N,N-dimetilformamida a 20°C, sob uma atmosfera de árgon. Depois de se agitar durante 18 horas a 20°C, trata-se a mistura com uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio e extrai-se com acetato de etilo. Seca-se o conjunto dos extractos (MgS04), filtra-se e separa-se o solvente por evaporação sob pressão reduzida para se obter um produto em bruto. Purifica-se o produto em bruto por cromatografia em coluna sobre silicagel, eluindo com diclorometano/metanol/amoníaco. Misturam-se as fracções puras, separa-se o solvente por evaporação sob pressão reduzida, e cristaliza-se o resíduo a partir de acetato de etilo/hexano para se obter o composto em título sob a forma de um sólido cristalino de cor creme. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ): 2,10 (s, 3H); 2,23 (s, 3H); 7,22 (dd, 1H) ; 7,43 (dd, 1H) ; 7, 45-7, 50 (m, 1H) ; 7,51-7,54 (m, 1H) ; 7,97 (d, 1H) ; 8,04 (d, 1H) ; 8,24 (dd, 1H); 8,28 (m, 1H); 8,49 (dt, 1H); 8,50 (dd, 1H) ; 8,68 (dd, 1H); 8,99 (s, 1H); 9,25 (d, 1H); 10,43 (dd, 1H). 83 ΡΕ1546127

Exemplo 18.1: Ácido 3-acetilamino-5-(trifluorometil)-ben-zóico

Agita-se a 22°C durante 14 horas uma mistura de ácido 3-nitro-5-(trifluorometil)benzóico (5,10 g, 20 mmol) e anidrido acético (2,1 mL, 22 mmol) em 50 mL de piridina. Evapora-se então a mistura sob pressão reduzida para se obter um residuo que se trata com ácido clorídrico 2 M e se extrai por três vezes com acetato de etilo. Lava-se o conjunto dos extractos com água, seca-se (MgSCM e separa-se o solvente por evaporação sob pressão reduzida para se obter o produto em bruto que se purifica por recristalização a partir de acetato de etilo/hexano para se obter o composto em título sob a forma de um sólido cristalino beige, p. f. 194-220°C. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6, δ): 7,80 (d, 1H) ; 8,27 (d, 1H); 8,35 (d, 1H) ; 10,46 (s, 1H) ; 13,50 (s lg., 1H) .

Exemplo 18.2: Ácido 3-amino-5- (trifluorometil)-benzóico

Hidrogena-se uma solução de ácido 3-nitro-5-(trifluorometil)benzóico (Lancaster Synthesis GmbH; 11,75 g, 50 mmol) em etanol (300 mL) à pressão atmosférica, sobre níquel de Raney (1 g) a 40°C. Ao fim de 8 horas havia sido absorvida a quantidade de hidrogénio calculada. Filtra-se então a mistura reaccional e evapora-se o solvente sob 84 ΡΕ1546127 pressão reduzida para se obter o produto em bruto que se purifica por recristalização a partir de éter dietili-co/hexano para se obter o composto em titulo sob a forma de um sólido cristalino beige, p. f. 134-139°C. RMN de (400 MHz, DMSO-d6, δ): 5,86 (s lg., 2H) ; 7,02 (d, 1H) ; 7,24 (d, 1H) ; 7,38 (d, 1H) ; 13,11 (s lg., 1H).

Exemplo 19 Cápsulas Moles

Preparam-se 5.000 cápsulas de gelatina, contendo cada uma delas 0,05 g de um dos compostos com a fórmula 1 mencionados nos Exemplos precedentes, como se descreve adiante: suspende-se 250 g de ingrediente activo em pó em 2 L de Lauroglykol® (laurato de propilenoglicol, Gattefossé S. A., Saint Priest, França) e mói-se num pulverizador húmido para se obter uma dimensão de partícula de entre 1 e 3 μπι. Introduzem-se então porções de 0,419 g da mistura em cápsulas de gelatina moles, por intermédio de uma máquina de encher cápsulas.

Exemplo 20

Dados farmacocinéticos

Formula-se o composto com a fórmula 1 que se 85 ΡΕ1546127 pretende testar por administração a murinos fêmea OFl da IFACREDO, França, dissolvendo-o primeiro em N-metil-pirrolidona (NMP), e depois diluindo com PEG300 a uma concentração final de 10 % em volume de NMP: 90 % em volume de PEG300, produzindo-se uma solução límpida do composto. Ajustaram-se as concentrações de modo a proporcionar-se um volume constante de 10 mL/kg de massa corporal. Prepara-se o composto imediatamente antes da sua utilização. Administra-se o composto por via oral por alimentação forçada para se proporcionarem dosagens de 50 mg/kg. Nas alturas de tempo previamente fixadas anestesiam-se os murinos (4 de cada vez) com solução a 3 % de isoflurano em oxigénio de pureza medicinal, e obtêm-se amostras de sangue por punção cardiaca, directamente para tubos heparinizados (ca. 30 IU/mL). Os animais são em seguida sacrificados sem recobrarem da anestesia. Prepara-se plasma a partir do sangue por centrifugação (10.000 x g, 5 minutos) e ou se analisam imediatamente ou se armazenam a -70°C. Às amostras de plasma (10-250 μΡ) são por exemplo adicionados 5 μΡ de padrão interno, misturam-se com 200 μΡ de NaOH 0,1 M e 500 μΡ de clorofórmio em tubos de Eppendorf de 1,5 mP, e agitam-se vigorosamente durante 10 minutos num agitador de Eppendorf. Em seguida, centrifuga-se a mistura (3 minutos a 10.000 x g), transfere-se a fase orgânica para um novo tubo de Eppendorf e evapora-se à secura numa centrífuga em vácuo (Speedvac 5301). Dissolve-se o resíduo seco por exemplo em 250 μΡ de solução a 10 % em volume de 86 ΡΕ1546127 acetonitrilo em água, contendo 0,1 % de ácido fórmico. A análise subsequente é levada a cabo por exemplo por cromatografia liquida de elevado desempenho ligada a uma espectrometria de massa, (HPLC/MS-MS) utilizando um equipamento de HPLC da série Agilent 1100 (Agilent, Paio Alto, CA, EUA) com um desgasificador de vácuo, uma bomba binária, e um compartimento de colunas termostatizado, em combinação com um sistema de auto amostragem arrefecido (HTS pal, CTCAnalytics, Zwingen, Suiça). A amostra (5-15 pL) é injectada por exemplo por sobre uma coluna Ultra Phenyl (com dimensão de partícula de 3 pm, 50 x 1 mm; Restek, Bellefonte, EUA) com uma coluna de guarda (4x2 mm) contendo o mesmo material (Phenomenex, Torrance, EUA) . Depois de se estabelecer o equilíbrio, por exemplo com água, e de um período de latência de 1 minuto, a amostra é eluída por com um gradiente linear de 0-100 % de acetonitrilo em água contendo 0,2 % em volume de ácido fórmico, ao longo de um período de 11 minutos a um caudal de 60 pL/minuto. Prepara-se a coluna para a amostra seguinte por exemplo levando a cabo um novo equilíbrio durante 3 minutos com 100 % de água, como condições iniciais. A separação é levada a cabo por exemplo a uma temperatura de coluna de 40°C. Introduz-se o efluente da coluna por exemplo directamente na fonte de iões de um espectrómetro de massa de quadrupolo com três estádios (Quattro Ultima™, Micromass, Manchester, Reino Unido) controlado por um programa Masslynx™ 3.5 (Micromass, 87 ΡΕ1546127

Manchester, Reino unido) utilizando uma técnica de ionização de electroaspersão no modo positivo (IEA +).

Detecta-se o composto por MS/MS a seguir à fragmentação dos iões originais. 0 limite de quantificação é determinado a, por exemplo, 0,002 nmol/L. Constrói-se uma curva de calibração com quantidades conhecidas de composto, incluindo uma quantidade fixa de padrão interno no plasma que é processado tal como se descreveu acima. A concentração das amostras desconhecidas é calculada a partir de uma representação da razão da área do pico resultante seleccionado do analito, em relação ao produto do seu padrão interno (ordenada), e em relação à sua concentração nominal (abcissa). Leva-se a cabo uma análise de regressão utilizando o programa Quadlynx™, Masslynx™ 3.5 (Micromass, Manchester, Reino Unido).

Exemplo 21

Dados sobre inibição in vitro

Na tabela adiante são listados os dados sobre inibição enzimática (c-Abl, Bcr-Abl) in vitro. Os valores de IC50 (em nM) são expressos sob a forma de uma gama, adentro da qual as medições individuais de IC50 se encontram. Os valores médios correspondentes (± Desvio Padrão) para o composto designado como STI571 são de 170+23 nM (c-Abl, IC50; 23 determinações) e de 198+7 nM (Bcr-Abl, IC50; 71 determinações) . 88 ΡΕ1546127

Exemplo c-Adl, IC50 (nM) Bcr-Adl, IC50 (nM) 1 50-100 200-500 2 10-60 100-300 3 40-100 20-100 4 60-110 80-200 5 5-50 30-100 6 5-20 10-50 7 5-20 10-50 8 5-20 10-50 9 5-20 20-80 10 5-20 10-50 11 5-20 10-50 12 5-20 10-50 13 5-20 20-80 14 5-20 30-180 15 5-20 50-200 16 5-20 50-200 17 10-70 20-60 18 13

Lisboa, 25 de Outubro de 2007

Claims

ΡΕ1546127 1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto com a fórmula 1

na qual Ri represente hidrogénio e R2 represente NR5R6, ou Ri represente NR5R6 e R2 represente hidrogénio; R3 represente alquilo, fluoroalquilo, hidroxi-alquilo ou carbamoilo, inferiores; R4 represente hidrogénio, alquilo inferior ou halogéneo; e R5 e R6 representem, independentemente um do outro, hidrogénio, alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior, alcoxil inferior-alquilo inferior, aciloxil inferior-alquilo inferior, carboxi-alquilo inferior, alcoxicarbonil inferior-alquilo inferior, amino-alquilo inferior, alquil-amino inferior-alquilo inferior, di(alquil inferior)amino- 2 ΡΕ1546127 alquilo inferior, N-alquil inferior-piperidinilo, N-alquil inferior-pirrolidinilo, ou acilo inferior, ou R5R6 representem em conjunto alquileno com quatro, cinco ou seis átomos de carbono, oxa-alquileno inferior com um oxigénio e três ou quatro átomos de carbono, ou aza-alquileno inferior com um azoto e três ou quatro átomos de carbono, em que o átomo de azoto seja não substituído ou seja substituído com alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior ou alcoxil inferior-alquilo inferior, e em que o alquileno inferior possa em cada caso ser parcial ou totalmente insaturado e/ou os átomos de carbono do alquileno inferior possam ser substituídos com alquilo inferior, hidroxilo ou alcoxilo inferior; e um N-óxido ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico de um tal composto.
2. Um composto com a fórmula 1, de acordo com a reivindicação 1, no qual Ri represente hidrogénio e R2 represente NR5R6, ou Ri represente NR5R6 e R2 represente; R3 represente alquilo, fluoroalquilo, hidroxi-alquilo ou carbamoílo, inferiores; R4 represente alquilo inferior; e Rs e R6 representem, independentemente um do 3 ΡΕ1546127 outro, hidrogénio, alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior, alcoxil inferior-alquilo inferior, aciloxil inferior-alquilo inferior, carboxi-alquilo inferior, alcoxicarbonil inferior-alquilo inferior, amino-alquilo inferior, alquil-amino inferior-alquilo inferior, di(alquil inferior)amino-alquilo inferior, N-alquil inferior-piperidinilo, N-alquil inferior-pirrolidinilo, ou acilo inferior, ou R5R.6 representem em conjunto alquileno com quatro, cinco ou seis átomos de carbono, oxa-alquileno inferior com um oxigénio e três ou quatro átomos de carbono, ou aza-alquileno inferior com um azoto e três ou quatro átomos de carbono, em que o átomo de azoto seja não substituído ou seja substituído com alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior ou alcoxil inferior-alquilo inferior, e em que o alquileno inferior possa em cada caso ser parcial ou totalmente insaturado e/ou os átomos de carbono do alquileno inferior possam ser substituídos com alquilo inferior, hidroxilo ou alcoxilo inferior; e um N-óxido ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico de um tal composto.
3. Um composto com a fórmula 1 de acordo com a reivindicação 1, no qual Ri represente hidrogénio e R2 represente NR5R6, ou Ri represente NR5R6 e R2 represente; R3 represente trifluorometilo; 4 ΡΕ1546127 R4 represente metilo; e R5 e R6 representem, independentemente um do outro, hidrogénio, alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior, alcoxil inferior-alquilo inferior, aciloxil inferior-alquilo inferior, carboxi-alquilo inferior, alcoxicarbonil inferior-alquilo inferior, amino-alquilo inferior, alquil-amino inferior-alquilo inferior, di(alquil inferior)amino-alquilo inferior, N-alquil inferior-piperidinilo, N-alquil inferior-pirrolidinilo, ou acilo inferior, ou R5R6 representem em conjunto alquileno com quatro, cinco ou seis átomos de carbono, oxa-alquileno inferior com um oxigénio e três ou quatro átomos de carbono, ou aza-alquileno inferior com um azoto e três ou quatro átomos de carbono, em que o átomo de azoto seja não substituído ou seja substituído com alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior ou alcoxil inferior-alquilo inferior, e em que o alquileno inferior possa em cada caso ser parcial ou totalmente insaturado e/ou os átomos de carbono do alquileno inferior possam ser substituídos com alquilo inferior, hidroxilo ou alcoxilo inferior; e um N-óxido ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico de um tal composto.
4. Um composto com a fórmula 1 de acordo com a reivindicação 1, no qual 5 ΡΕ1546127 Ri represente hidrogénio e R2 represente NR5R6, ou Ri represente NR5R6 e R2 represente; R3 represente trifluorometilo; R4 represente metilo; e R5 e Rg representem, independentemente um do outro, hidrogénio, alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior, amino-alquilo inferior, alquilamino inferior-alquilo inferior, di(alquil inferior)amino-alquilo inferior, N-alquil inferior-piperidinilo, ou acilo inferior, ou R5R6 representem em conjunto alquileno com quatro, cinco ou seis átomos de carbono, oxa-alquileno inferior com um oxigénio e três ou quatro átomos de carbono, ou aza-alquileno inferior com um azoto e três ou quatro átomos de carbono, em que o átomo de azoto seja não substituído ou seja substituído com alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior ou alcoxil inferior-alquilo inferior, e em que o alquileno inferior possa em cada caso ser parcial ou totalmente insaturado e/ou os átomos de carbono do alquileno inferior possam ser substituídos com alquilo inferior; e um N-óxido ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico de um tal composto.
5. Um composto com a fórmula 1 de acordo com a reivindicação 1, no qual 6 ΡΕ1546127 Ri represente hidrogénio e R2 represente NR5R6, ou Ri represente NR5R6 e R2 represente; R3 represente trifluorometilo; R4 represente metilo; e R5 e Rg representem, independentemente um do outro, hidrogénio, metilo, etilo, 2-dimetilaminoetilo, 4-metil-l-piperidinilo, ou acetilo, ou R5R6 representem em conjunto alquileno com quatro ou cinco átomos de carbono, oxa-alquileno inferior com um oxigénio e quatro átomos de carbono, ou aza-alquileno inferior com um azoto e três ou quatro átomos de carbono, em que o átomo de azoto seja não substituído ou seja substituído com alquilo inferior, e em que o aza-alquileno inferior possa ser insaturado e/ou os átomos de carbono do aza-alquileno inferior possam ser substituídos com alquilo inferior; e um N-óxido ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico de um tal composto.
6. Um composto com a fórmula 1 de acordo com a reivindicação 1, no qual Ri represente hidrogénio e R2 represente NR5R6, ou Ri represente NR5R6 e R2 represente; R3 represente trifluorometilo; 7 ΡΕ1546127 R4 represente metilo; e r5 e R6 representem, independentemente um do outro, hidrogénio, metilo, etilo, 2-dimetilaminoetilo, 4-metil-l-piperidinilo, ou acetilo, ou R5R6 representem em conjunto pirrolidino, piperidino, morfolino, N-metilpipe-razino, lH-imidazolilo, lH-2-metilimidazolilo, lH-4-metil-imidazolilo ou 1H-2,4-dimetilimidazolilo; e um N-óxido ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico de um tal composto.
7. Um processo para a síntese de um composto com a formula 1

ou de um seu N-óxido, em que os símbolos Ri, R2, R3 e R4 sejam tais como se definiram na reivindicação 1, caracterizado por se fazer reagir um composto com a fórmula 2 ΡΕ1546127

na qual Ri, R2 e R3 sejam tais como se definiram para um composto com a fórmula 1, ou um seu derivado no qual o seu grupo carboxilo -COOH esteja prsente sob uma sua forma activada, com uma amina com a fórmula 3

na qual R4 seja tal como se definiu para um composto com a fórmula 1, opcionalmente na presença de um agente desidratante e de uma base inerte e/ou de um catalisador adequado, e opcionalmente na presença de um solvente inerte; em que os compostos de partida acima com as fórmulas 2 e 3 também possam estar presentes com grupos funcionais sob formas protegidas caso tal seja necessário, e/ou sob a forma de sais, desde que esteja presente um grupo formador de sal e a reacção seja possivel sob a forma salina; 9 ΡΕ1546127 sendo removidos quaisquer qrupos protectores num derivado protegido do composto com a fórmula 1; e, se tal se pretender, sendo um composto com a fórmula 1 que deste modo se obtenha, noutro composto com a fórmula 1 ou num seu N-óxido, sendo um composto com a fórmula 1 transformado num sal, sendo um sal que se possa obter de um composto com a fórmula 1 transformado no composto livre ou noutro sal, e/ou uma mistura de compostos isoméricos com a fórmula 1 seja separada nos seus isómeros individuais.
8. Uma composição farmacêutica contendo a titulo de ingrediente activo um composto com a fórmula 1 de acordo com a reivindicação 1, ou um seu N-óxido, ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico destes, em conjunto com um veiculo aceitável do ponto de vista farmacêutico.
9. A utilização de um composto com a fórmula 1 de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou de um seu N-óxido ou de um possível tautómero de qualquer destes, ou de um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico de um daqueles compostos, para a preparação de uma composição farmacêutica para o tratamento de uma doença que reaja a uma inibição da actividade da tirosina quinase.
10. A utilização de acordo com a reivindicação 9, em que a doença seja uma doença neoplásica. 10 ΡΕ1546127
11. A utilização de acordo com a reivindicação 9, em que a doença seja uma leucemia que reaja à inibição da actividade de tirosina quinase da Raf e/ou da Abl. Lisboa, 25 de Outubro de 2007