PT1539857E - Derivados de aldeído de polietileno glicol - Google Patents
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Description
1
Descrição
DERIVADOS DE ALDEÍDO DE POLIETILENO GLICOL A presente invenção é relativa a aldeídos de polietileno glicol e a métodos relativos ao fabrico e à utilização de tais derivados, tal como na peguilação de polipéptidos e de outras biomoléculas. O polietileno glicol ("PEG") é um poliéter neutro, linear ou ramificado, disponível numa variedade de pesos moleculares. A estrutura do PEG é HO- (CH2-CH2-0) n.H, em que n indica o número de repetições da unidade de óxido de etileno no PEG. O PEG e derivados do PEG foram utilizados para modificar diversas biomoléculas. Quando ligado a tais moléculas, o PEG aumenta a sua solubilidade e aumenta a sua dimensão, mas tem um efeito diminuto sobre as propriedades desejáveis. Vantajosamente, as biomoléculas conjugadas com PEG podem apresentar uma retenção aumentada e um metabolismo mais lento, no corpo.
Para tais aplicações foram desenvolvidos diversos derivados do PEG. Estes derivados do PEG encontram-se descritos, por exemplo, na Patente U.S. 5 252 714; Patente U.S. 5 672 662; 2
Patente U.S. 5 959 265; Patente U.S. 5 990 237; e Patente U.S. 6 340 742.
Foram utilizadas duas abordagens gerais para a funcionalização do PEG: (1) alteração do grupo hidroxilo terminal, através de uma série de reacções, para um grupo funcional mais activo e/ou (2) reacção do PEG, sob condições controladas, com compostos bifuncionais de modo a que um dos seus grupos funcionais reaja com o polímero de PEG e o outro permaneça activo. Na generalidade dos casos, têm de realizar-se diversos passos para se obterem os derivados do PEG desejados. Os derivados do PEG desejados são frequentemente produzidos em baixos rendimentos e requerem um processo de purificação complexo para os isolar. Adicionalmente, os derivados do PEG podem apresentar ligação não específica às biomoléculas de interesse, o que pode resultar em múltiplos PEGs ligados a uma única biomolécula e/ou ligação do PEG no site activo. Ligações múltiplas de PEG podem causar dificuldades na purificação da biomolécula peguilada. Ligações múltiplas de PEG, e/ou peguilação no site activo, podem também conduzir a actividade diminuída, da biomolécula.
Seria, pois, vantajoso proporcionar derivados do PEG melhorados, adequados à conjugação com uma diversidade de outras moléculas, incluindo polipéptidos e outras 3 biomoléculas contendo um grupo α-amino. Existe uma necessidade de proporcionar derivados do PEG que possam ser produzidos com elevado rendimento e pureza, e que possam ser conjugados para proporcionar biomoléculas com características de desempenho melhoradas.
Estes e outros objectos da presente invenção são descritos abaixo, em maior detalhe.
Os compostos da invenção são derivados aldeído do polietileno glicol, da fórmula geral (I): R1-(CH2CH20)n-CH2CH2-X-Y-NH-(CH2)p-CH0 (i) em que Ri é seleccionado de entre halogénio, epóxido, maleimida, dissulfureto de ortopiridilo, tosilato, isocianato, hidrazina hidrato, halogeneto cianúrico, N-succinimidiloxi, sulfo-N-succinimidiloxi, 1- benzotriazoliloxi, 1-imidazoliloxi, p-nitrofeniloxi, e
O
II -CH2CH2-0-(CH2)m-C-NH-(CH2)p-CH0, X é O ou NH, Y é seleccionado do grupo que consiste em 4 ff fH f ° 1*5· '(CH2)m'C-, -C-, -(CH^^-CH-ÍC^)^, ~C- (NH-CH-C) Z é uma cadeia lateral de um aminoácido, m é de 1 a 17, n é delOalOOOO, epédela3. A presente invenção também proporciona um composto da fórmula (II):
O
II
Rr(CH2CH20)n-CH2CH2-0-(CH2)m-C-NH-(CH2)p-CH0 (II) em que Ri, m, n e p são definidos como acima.
Uma outra concretização preferida da presente invenção proporciona um composto bifuncional aldeído de polietileno glicol da fórmula (VIII):
O O II « OHC-(CH2)p-NH-C-(CH2)m-0-CH2CH2-(CH2CH20)n-CH2CH2-0-(CH2)m-C-
NH-(CH2)p-HO em que m, n, e p são definidos como acima. 5 A presente invenção também proporciona compostos intermédios da fórmula (IX):
Rr(CH2-CH2-0)n-CH2-CH2-X-Y-NH-(CH2)pCH-(0CH2-CH3)2 (IX) em que Ri, X, Y, Z, m, n e p são definidos como acima. A presente invenção proporciona, ainda, compostos intermédios da fórmula (X):
O
II R,-(CH2CH2-0)„-CH2-CH2-0-(CH2)„-C-NH-(CH2)p-CH-(0CH2-CH3)2 (X) em que Ri, m, n e p são definidos como acima.
Também proporciona um composto intermédio da fórmula (XI): (CH3CH20)2-CH-(CH2)p-NH-C-(CH2)(„-0-CH2CH2-(CH2-CH2-0)n-CH2CH2-0-(CH2)m-C-NH- (CH^p-CH-ÍOCHí-Hafe (XI) em que cada um de m, n e p é igual ou diferente e e definido como acima. 6 A presente invenção proporciona, ainda, um método para a produção de um aldeído de polietileno glicol que compreende hidrolisar um composto da fórmula (IX):
Rr(CH2-CH2-0)n-CH2GH2-X-Y-NH-(CH2)p-CH-(0CH2-CH3)2 (IX) para produzir um aldeído de polietileno glicol da fórmula (I) = R1-(CH2CH20)n-CH2CH2-X-Y-NH-(CH2)p-CHO (I) em que Ri, X, Y, Z, m, n e p são definidos como acima.
Se a presente invenção é relativa a um "método de produção", isso significa um "processo de produção". A presente invenção também proporciona um método de produção de um aldeído de polietileno glicol que compreende a hidrólise de um composto da fórmula (X):
O
II
Rr(CH2-CH2-O)n*CH2CH2-0-(CH2)m-C-NH-(CH2)p-CH-(0CH2-CH3)2
W para produzir um aldeído de polietileno glicol da fórmula (II) : 7 Ο (Η) R1-(CH2CH20)n-CH2CH2'0-(CH2)m-C-NH-(CH2)p-CH0 em que RXí m, n e p são definidos como acima. A presente invenção proporciona um método de produção de um aldeído de polietileno glicol que compreende a hidrólise de um composto da fórmula (XVII):
O O | · i (CH3CH20)2-CH-(CH2)p-NH-C.(CH2)m.0-CH2CHr(CH2-CHr0)„-CH2CHa-0*{CH2)M-C-NH- (CH2)p-CH-(OCH2-H3)2 (XVII) para produzir um aldeído de polietileno glicol da fórmula (VIII):
O
O OHC-(CH2)p*NH-C-(CH2)m-O-CH2CH2-(CH2CH2O)n-CH2CH2-O-(CH2)m-C-NH-(CH2)p-CH0 em que m, n, e p são definidos como acima. A presente invenção proporciona uma variedade de compostos e de produtos químicos intermédios e de métodos que poderão ser utilizados em ligação com a peguilação de polipéptidos e de outras biomoléculas. A presente invenção proporciona 8 uma nova estrutura química para aldeídos de polietileno glicol.
Os compostos da invenção são derivados aldeído de polietileno glicol, da fórmula geral (I): R1-(CH2CH2O)n-CH2CH2-X-Y-NH-(CH2)p-CH0 (I) em que Ri é definido como acima, X é 0 ou NH, Y é seleccionado do grupo que consiste em O OII l!
OH
O O.(CH2)m.C-, -C“, -(CH2)1.a'CH-(CH2)1.a, -C^NH-CH-H), -5> Z é uma cadeia lateral de um aminoácido, m é de 1 a 17, n é de 10 to 10 000 e p é de 1 a 3.
Rx é um grupo funcional capaz de reagir com alguns outros grupos funcionais, tais como uma amina e/ou um sulfidrilo num péptido e/ou numa proteína. Ri é um grupo funcional capaz de reagir facilmente com grupos electrófilos ou nucleófilos de outras moléculas, em contraste com os grupos que, para reagir, requerem catalisadores potentes ou condições de reacção muito pouco práticas. O aldeído de 9 polietileno glicol é bifuncional e pode, assim, ligar-se por ligação covalente a duas entidades químicas. O termo "halogénio" significa flúor, cloro, bromo ou iodo.
Um cap Rx preferido, geralmente reactivo, é
O
II -CH2CH2-0-(CH2)m-C-NH-(CH2)p-CH0. A utilização deste grupo Ri resulta num aldeído de polietileno glicol com grupos aldeído em ambas as extremidades do aldeído de polietileno glicol. E de acordo com isso, o aldeído de polietileno glicol resultante apresenta propriedades de ligação em ambas as extremidades. Deve notar-se, no entanto, que estes compostos bifuncionais não têm necessidade de ser perfeitamente simétricos, e que, na fórmula, os primeiros m, n e/ou p podem ser iguais ou diferentes aos/dos segundos m, n e/ou p. É preferido, no entanto, que o composto seja simétrico, significando isso que ambos os m's representados têm o mesmo valor, ambos os n's têm o mesmo valor e ambos os p's têm o mesmo valor. 10
Nos compostos da presente invenção X é O ou NH. De preferência, X é O. Além disso, Y é seleccionado do grupo que consiste em 10 O OU I!
OH
O em que Z é uma aminoácido. cadeia
O
O lateral de um
Z
Na presente invenção, m é de 1 a 17. Numa concretização preferida, m é de 1 a 14. Numa mais preferida m é de 1 a 7, e ainda mais preferida, m é de 1 a 4. Na mais preferida m é 1.
No caso de um grupo Y com a estrutura geral: o grupo Y apresenta uma ligação ao aminoácido através de uma ligação peptídica. De acordo com isso, esta estrutura geral resulta em estruturas específicas tão simples como:
OII ofi -c-nh-ch2-c- 11 quando uma única glicina é utilizada como aminoácido. Quando Z é CH3, então o aminoácido é alanina. Se Z é CH2OH, o aminoácido é serina.
Obviamente, são possíveis estruturas mais complexas quando são utilizados mais e diferentes aminoácidos, como pode ser verificado por um exame das várias estruturas de aminoácidos apresentadas abaixo. De preferência, utiliza-se apenas um aminoácido. 12 ÇOiH NHj—|—H CHj COjH JIHj—1—.H CHjCHaCHjNHCNHj ÇOaH NHg-j-H CHjCNH2 0 ÇOjH NH2—I—H ; CHj^OH O Alanina Arginina Asparagina Ácido Aspártico ÇO2H NHj—1—H CHjSH COjH HHj—-j—H H ÇO^ NHj—I—H CHaCHjCHHj 0 ÇOjH NHa—1—H CH2CH2«j»H 0 Cisteína Glicina Glutamina Ácido Glutâmico
Na presente invenção, n é de 10 a 10 000. Numa concretização preferida da presente invenção n é de 20 a 5 000. De preferência, n é de 50 a 2 500, ainda mais preferida n é de 75 a 1 000. Na mais preferida, n é de 100 a 750.
Na presente invenção, p é de 1 a 3. De preferência, p é 3. ÇOjH HHj—[—H ÇHjkA Wh Histidina NHa—|—H ch3xC^ch2ch3 Isoleucina NH.
ÇOjH !—I-H CHjÇHCHj CH3 Leucina
ÇOjH NHj—J—H CHíCHjCHjCHjNHj Lisina COaH 9a—l—H Prolina oo^h NH2—J—H CHjOH Serina
ÇOjH NH»——H CHaCHjSCHa Metionina ÇOjHHí-Q Feniialanina ÇOjH NH2—I—H (jJHCHj OH Treonina
COjH NH2—-j—H
ÇO*H**»+H_jT\ CHj—^ >—OH
ÇOjH NHj—|—H ,CH \—/ CW3X 'CHj
Tirosina
Valina 13 A presente invenção inclui, mas não se encontra limitada a, compostos da fórmula I, os quais são compostos das fórmulas II-VI, como segue: (A)
O
Rr(CH2CH20)„-CH2CH2-O-(CH2)m-C-NH-(CH2)p-CHO(ll) (B)
RrCCHíCHíOln-CHíCHsO-C-NH-íCHdp-CHOPH) (C) o
Rr(CHzCH2O)n-CH2CH2-NHl?*NH-(CH2>p-CHO0V) (D)
OH I L cH2-N H- (CH2VCHO (V)
Rr(CH2CH20)n-CH2CH2-0-CKr CH- ^ 14 (Ε) 0 i
Rr(CH2CH20)n-CH2CH2-0-C-NH-CH-C-NH-(CH2)p-CH0 (VI). Ζ
Os compostos preferidos da presente invenção estão abrangidos pelo grupo A acima. Em conformidade, a presente invenção proporciona um composto da fórmula (II):
O I!
Rr(CH2CH2O)n-CH2CH2-0-(CH2)m'C>NH-(CH2)p-CHO (II) em que Ri, m, n e p são como definidos acima.
Outra concretização preferida da presente invenção proporciona um composto aldeído de polietileno glicol, bifuncional, da fórmula (VIII):
O O ii · ii 0HC-(CH2)p-NH-C-(CH2)m-O-CH2CHr(CH2CH2O)n-CH2CH2-0-(CH2)m-C-NH-
(CH2)p-CHO (VIII) em que m, n e p são definidos como acima. 15 A presente invenção também proporciona uma variedade de produtos químicos intermédios que podem ser convertidos nos compostos aldeído de polietileno glicol, da invenção, acima descritos. Estes produtos intermédios incluem compostos da fórmula (IX): R1-(CH2-CH2-0)n-CH2-CH2-X-Y-NH-(CH2)p-CH-(0CH2-CH3)2 (IX) em que Rlf X, Y, Z, m, n e p são definidos como acima. A presente invenção proporciona, ainda, produtos intermédios da fórmula (X):
O
II
Rr(CH2-CHrO)n-CH2'CH2-0-(CH2)m-C-NH-(CH2)p-CH-(OQH2-CH3)2 (X) em que Ri, m, n e p são definidos como acima.
Também são proporcionados compostos intermédios da fórmula (XI) :
O O li ii (CH3CH20)2-CH-(CH2)p-NH-C-(CH2)m-0-CH2CH2-(CH2-CH2-0)n-CH2CHz-0-(CH2)m-C-NH- (CH2)p-CH-(OCHrCH3)2 (XI)
Os compostos da presente invenção poderão ser produzidos por qualquer método adequado, utilizando reagentes e 16 métodos conhecidos. No entanto, a presente invenção proporciona um método específico de produção de um aldeído de polietileno glicol que compreende a hidrólise de um composto da fórmula (IX): R1-(CH2-CH2-O)n-CH2CH2-X-Y-NH-(0H2)p-CH-(OCH2-CH3)2 (,x) para produzir um aldeído de polietileno glicol da fórmula 17
Rr(CH2CH20)n-CH2CH2-X-Y-NH-(CH2)p-CH0 (I) em que Ri, X, Y, Z, m, n, e p são definidos como acima. De preferência, a hidrólise é catalisada por ácido. Catalisadores ácidos adequados incluem: ácido trifluoroacético, ácido clorídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico e ácido nítrico. De preferência, o ácido é ácido trifluoroacético.
Os compostos aldeído de polietileno glicol da fórmula (II) também podem ser produzidos por qualquer método adequado. No entanto, com carácter meramente exemplificativo, aldeídos de polietileno glicol da fórmula (II) podem ser produzidos como segue: Primeiro, o polietileno glicol é seco. Em segundo lugar, o polietileno glicol é deixado reagir com um derivado halogenado de ácido acético. Hidrolisando a mistura da reacção obtém-se um ácido PEG carboxílico. Alternativamente, o produto ácido PEG carboxílico pode também ser derivado da oxidação directa do PEG, após o passo de secagem. Depois, o ácido PEG carboxílico é tratado com um derivado amina de acetal dietílico para produzir uma PEG acetal amina, que é deixada reagir com um ácido carboxílico halogenado para produzir um aldeído de polietileno glicol da fórmula. 0 produto aldeído de polietileno glicol é então recolhido e purificado. 18 O produto aldeído de polietileno glicol pode ser recolhido e purificado por qualquer processo adequado. Com carácter meramente exemplificativo, o produto aldeído de polietileno glicol pode ser extraído com diclorometano. A fase orgânica ser seca sobre sulfato de sódio, filtrada, concentrada e precipitada com éter dietílico. O produto, aldeído de PEG, ser recolhido por filtração e seco no vácuo. A presente invenção proporciona, assim, um método de produção de aldeído de polietileno glicol compreendendo a hidrólise de um composto da fórmula (X):
O (X)
Rr(CHrCH2-O)n-CH2CH2-0-(CH2)m-C-NH-(CH2)p-CH-(OCH2-CH3)2 para produzir um aldeído de polietileno glicol da fórmula (II) :
O il (H)
Ri-(CH2CH20)„-CH2CH2-0-(CH2)m-C-NH-(CH2)p-CH0 acima definidos. em que Ri, m, n e p são como 19 O composto da fórmula (X) pode ser produzido por reacção de um composto da fórmula (XII): R1-(CH2-CH2-0)n-CH2CH2-0-(CH2)m-COOH (XII) com um composto da fórmula (XIII): H2N-(CH2)p-CH-(OCH2-CH3)2 (XIII).
Outro método para produzir ácido PEG ou ácido PEG carboxílico é a oxidação directa. Neste caso, podem ser utilizados oxidantes, tais como Cr03 ou K2Cr207/H2S04, HN03 na presença de vanadato de amónio ou de reagente de Jones (Cr03 e H2S04) · O composto da fórmula (XII) pode ser produzido por hidrólise de um composto da fórmula (XIV): R1-0-(CH2-CH2-0)n-CH2CH2-0-(CH2)m-C00R3 (XIV) em que R3 é um CJ.-C4 alquilo linear ou ramificado. O composto da fórmula (XIV) pode ser produzido por reacção de um composto da fórmula (XV): 20
Rr(CH2-CH2-0)n-CH2-CH2-0H (XV) com um composto da fórmula (XVI): R2-(CH2)m-COOR3 (XVI) em que R2 é halogénio. De preferência R2 é bromo ou cloro. Compostos adequados da fórmula (XVI) incluem bromoacetato de terc-butilo, bromoacetato de metilo, bromoacetato de etilo, cloroacetato de terc-butilo, cloroacetato de metilo, e cloroacetato de etilo. Outros reagentes que podem ser utilizados neste passo de reacção, isto é, substitutos da fórmula (XVI) são, por exemplo, bromoacetato de terc-butilo, bromoacetato de metilo, bromoacetato de etilo, cloroacetato de terc-butilo, cloroacetato de metilo, e cloroacetato de etilo na presença de terc-butóxido de potássio, de um hidreto de metal alcalino tal como hidreto de sódio ou de naftaleto de potássio. De preferência, o composto da fórmula (XVI) é bromoacetato de terc-butilo.
Compostos das fórmulas (III)-(VI) (também identificados, respectivamente, como Grupos B-E) podem ser produzidos, igualmente, por quaisquer processos adequados. No entanto, com carácter meramente exemplificativo podem utilizar-se os 21 seguintes esquemas de reacção para produzir compostos das fórmulas (III)-(VI) (Grupos B-E).
Tal como com os aldeídos de polietileno glicol discutidos acima, os aldeídos bifuncionais de polietileno glicol podem ser produzidos por quaisquer processos adequados. A presente invenção proporciona um método para a produção de um aldeído de polietileno glicol compreendendo a hidrólise de um composto da fórmula (XVII):
O O (CH3CH20)2-CH-(CH2)p-NH-C-(CH2)m-0-CH2CH2-(CH2-CH2-O)n-CH2CH2-O-(CH2)m-C-NH- (CH2)p-CH*(0CHrCH3)2 (XVII) para produzir um aldeído de polietileno glicol da formula (VIII): D ii
0HC-(CH2)p-NH-C-(CH2)m-O-CH2CH2-(CH2CH20)n-CH2CH2-O-(CH2)m-C-NH
(CH2)p-CHO (VIII) em que m, n e p são como acima definidos. 22 O composto da fórmula (VI) pode ser produzido por reacção de um composto da fórmula (XVIII): H00C-(CH2)m-0-CH2CH2-(CH2-CH2-O)n-CH2CH2-O-(CH2)m-COOH (XVIII) com um composto da fórmula (XIX): H2N-(CH2)p-CH-(OCH2-CH3)2 (XIX). 0 composto da fórmula (XVIII) pode ser produzido por hidrólise de um composto da fórmula (XX): R300C-(CH2)m-CH2CH2-0-(CH2-CH2-0)n-CH2CH2-0-(CH2)m-C00R3 (XX) em que R3 é um Ci-C4 alquilo linear ou ramificado. 0 composto da fórmula (XX) pode ser produzido por reacção de um composto da fórmula (XXI): H0-CH2CH2-(CH2-CH2-O)n-CH2CH2-OH (XXI) com um composto da fórmula (XVI): (XVI) R2-(CH2)m-COOR3 23 em que R2 é halogénio.
As composições de aldeído de polietileno glicol da presente invenção, discutidas acima, podem ser utilizadas para delas derivar uma variedade de moléculas, incluindo biomoléculas, utilizando quaisquer métodos adequados.
Os compostos de aldeído de PEG, da presente invenção, são específicos do si te N- terminal para a peguilação de péptidos e de outras biomoléculas. Os aldeídos de PEG da presente invenção formam um conjugado com o N-terminal do grupo α-amino da biomolécula ou proteína, formando uma ligação estável, amina secundária, entre o PEG e a biomolécula ou proteína.
As biomoléculas peguiladas com aldeídos de PEG da presente invenção mostram reprodutibilidade no número e localização da ligação ao PEG, daí resultando uma estratégia de purificação menos complicada. Esta peguilação específica em relação ao site pode resultar num conjugado em que o site de peguilação se situa longe do site em que a biomolécula ou o péptido se liga aos receptores da célula, o que permitirá que as biomoléculas, as proteínas ou os péptidos peguilados retenham a maior parte da ou toda a sua actividade biológica. Os aldeídos de PEG da presente 24 invenção podem reagir com quaisquer biomoléculas que contenham um grupo alfa (a) amino.
Dependendo do aldeído de polietileno glicol seleccionado o polietileno glicol pode encontrar-se ligado por ligação covalente a uma biomolécula numa extremidade (aldeído de polietileno glicol monofuneional) ou em ambas as extremidades (aldeído de polietileno glicol bifuncional).
Tal como se afirmou, os aldeídos de polietileno glicol da presente invenção podem ser utilizados para peguilação específica do site N-terminal. A ligação N-terminal, específica do site, resulta em polipéptidos peguilados que evitam reticulação e derivações múltiplas de um único polipéptido. Para produzir esta ligação covalente, específica do site, poderão ser utilizadas quaisquer condições de reacção adequadas. Geralmente, o pH da mistura da reacção é suficientemente ácido para activar o a-aminoácido do polipéptido a peguilar. Tipicamente, o pH é de cerca de 5,5 a cerca de 7,4, de preferência de cerca de 6,5.
Assim, é fornecido um método para ligar uma molécula de polietileno glicol a um polipéptido, compreendendo: a reacção de pelo menos um polipéptido da fórmula (XXII): 25 25 νη2β (XXII); com uma molécula de aldeído de polietileno glicol da fórmula (I) : (I)
Rr(CH2CH20)n-CH2CH2-X-Y-NH-(CH2)p-CH0 em que R1( X, Y, Z, m, nep são como definidos acima; para produzir um composto da fórmula (XXIII): (XXIII)
Rr(CH2CH20)n-CH2CH2-X-Y-NH-(CH2)p-NHB em que a molécula de aldeído de polietileno glicol se encontra ligada ao grupo amino N-terminal do polipéptido.
Os compostos da fórmula (XXII) poderão ser qualquer polipéptido, incluindo interferão-alfa, interferão-beta, "consensus" interferão, eritropoietina (EPO), factor de estimulação de colónia de granulócitos (GCSF), factor de estimulação de colónia de granulócitos/macrófagos (GM-CSF), interleuquinas (incluindo IL-2, IL-10 e IL-12), e factor de estimulação de colónia.
Os compostos da fórmula (XXII) poderão ser também imunoglobulinas, tais como IgG, igE, IgM, IgA, IgD, e as 26 suas subclasses e os seus fragmentos. Os termos "anticorpo" ou "fragmentos de anticorpo" referem-se a anticorpos policlonais e monoclonais, a uma imunoglobulina ou a um anticorpo inteiro ou a qualquer fragmento funcional de uma molécula de imunoglobulina que se liga ao antigénio alvo. Exemplos de tais fragmentos de anticorpo incluem Fv (variável de fragmento), Fv em cadeia única, regiões determinantes complementares (CDRs), VL (região variável de cadeia leve), VH (região variável de cadeia pesada), Fab (fragmento de ligação ao antigénio), F(ab)2', e qualquer combinação destes ou de qualquer outro grupo funcional de um péptido de imunoglobulina capaz de se ligar a um antigénio alvo.
Tal como referido, o composto peguilado pode ser preparado por qualquer processo desejado. As condições, por exemplo, o pH, deverão ser seleccionadas de modo a favorecer a peguilação, específica do site, de grupos a-amino.
Geralmente, os polipéptidos podem ser peguilados com compostos de polietileno glicol da invenção, adicionando o composto da fórmula (XXII), e o reagente PEG num intervalo de relação molar de 1:1 a 1:100. O concentrado da reacção pode ser, então, colocado num tampão de borato, fosfato ou tris, à temperatura ambiente ou a 4°C durante 5 a 24 horas num intervalo de pH de 5,5 a 9,0. A relação molar do 27 reagente PEG para péptido/proteínas é geralmente de 1:1 a 100:1. A concentração de péptido/proteínas é geralmente de 1 a 10 mg/ml. A concentração de tampão é habitualmente de 10 a 500 mM. O composto peguilado pode ser isolado ou purificado por qualquer processo desejado. Com carácter meramente exemplificativo, a mistura da reacção resultante pode ser diluída com um tampão de equilíbrio (20 mM Tris, pH 7,5) e a mistura resultante ser depois aplicada numa coluna de Q-Sepharose. Depois da mistura ser aplicada na coluna QA, é lavada com o tampão de equilíbrio, eluída com 75 M NaCl; eluída com 200 mM NaCl; eluída com 1 M NaCl; e regenerada com 1 M HOAc + 1 M NaCl e 0,5 NaOH. Utilizando HPLC de fase reversa, é possível separar e isolar o produto monopeguilado, em N-terminal, de outros subprodutos na mistura. Cada produto recolhido pode ser confirmado por Espectrometria de Massa "Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization- Time of Flight" (MALDI-TOF).
Numa concretização preferida do método de peguilação da invenção, um polipéptido da fórmula (XXII): (xxii); nh2b 28 reage com uma molécula de aldeído de polietileno glicol da fórmula (II):
Rr(CH2CH20)n-CH2CH2-0-(CH2)m-C0-NH-(CH2)p-CH0 (I!) em que RX/ m, n e p são definidos como acima; para produzir um composto da fórmula (XXIV):
Rr(CH2CH20)n-CH2CH2-0-(CH2)m-C0-NH-(CH2)p-NHB (XXIV) em que a molécula de aldeído de polietileno glicol se encontra ligada ao grupo amino N-terminal do polipéptido.
Ilustrações adicionais da utilização dos compostos da presente invenção são divulgados nos Pedidos de Patente U.S., submetidos em simultâneo, intitulados "Polipéptido T20 Peguilado" N°. de Série US 60/398 195 submetido em 24 Julho, 2002, e "Polipéptido T1249 Peguilado" N° . de Série US 60/398 190 submetido em 24 Julho, 2002, e N° . de Série US 60/439 213 submetido em 10 de Janeiro, 2003, os quais são incorporados por referência como se fossem aqui reproduzidos na totalidade.
Além disso, é proporcionado um método para ligar uma molécula de polietileno glicol a um polipéptido compreendendo: 29 a reacção de um polipéptido da fórmula (XXII): NH2B (XXII); com uma molécula de aldeído de polietileno glicol da fórmula (VIII):
o O
OHC-tCHaJp-NH-O-íCHám-O-CHaCHHCHaCHzOJn-CHaCHa-O-CC^U-LNH-íCHaJp-CHO (VIII) em que cada um de m, n e p é igual ou diferente e é definido como acima; para produzir um composto da fórmula (XXV): I \\
V-HN-(CH2)p-NHO(CH2)m-0-CH2CH2-(CH2CH20)n-OH2CH20-(CH2)rn-C-NH*(CH2)p-CH2-NHB (XXV) em que a molécula de aldeído de polietileno glicol se encontra ligada ao grupo amino N-terminal dos polipéptidos.
Em concretizações preferidas, p é 3, mélenéde 100 a 750; ou p é 2, mélenéde 100 a 750; oupél, mél, e n é de 100 a 750. 30
Os polipéptidos peguilados podem ser utilizados de qualquer modo desejável. No entanto, adequadamente, são utilizados para preparar composições farmacêuticas, por adição e mistura com um excipiente farmaceuticamente aceitável. Tais composições farmacêuticas podem ser na forma de dose unitária. Podem ser soluções ou suspensões injectáveis, sistemas transdérmicos ou qualquer outra forma desejada.
Para ilustrar ainda mais a presente invenção fornecem-se os seguintes exemplos. Estes exemplos são apenas ilustrativos.
EXEMPLOS
Exemplo 1
Preparação de Compostos de Aldeído de PEG
Cinco gramas de PEG (peso molecular de 1000 a 60000 daltons) em 50 a 100 ml de tolueno são secos azeotropicamente por refluxo durante 1 a 3 horas, seguidos da remoção de 20 a 30 ml de tolueno. A solução resultante é arrefecida até à temperatura ambiente depois adicionam-se à solução de PEG terc-butóxido de potássio (excesso, 1 a 10 molar) em 20-50 ml de terc-butanol absoluto e 20-50 ml de tolueno. A mistura resultante é depois agitada durante duas horas à temperatura ambiente sob atmosfera de árgon. 31
Bromoacetato de terc-butilo (excesso, 1 a 10 molar) é adicionado à reacção através de seringa e a mistura da reacção é agitada durante a noite à temperatura ambiente sob uma atmosfera de árgon. Dependendo da dimensão pretendida para o grupo "m" definido na fórmula (XVI), o bromoacetato de terc-butilo pode ser substituído por outro derivado halogenado do ácido acético, por exemplo, ácido propiónico, ácido butírico, etc. A solução da reacção é então concentrada em evaporador rotativo e o resíduo precipitado por adição de éter dietílico. 0 produto precipitado, PEG éster carboxi terc-butílico, é separado por filtração e seco no vácuo. O PEG éster carboxi terc-butílico (4 g) é então dissolvido em 50 a 100 ml de 1 N hidróxido de sódio e a solução agitada à temperatura ambiente durante a noite. 0 pH da mistura é ajustado para 2,5 a 3,0 por adição de 1 a 6 N ácido clorídrico, e a mistura extraída com diclorometano. A fase orgânica é então seca sobre sulfato de sódio, filtrada, concentrada e precipitada com éter dietílico. O produto, ácido PEG-carboxílico, é recolhido por filtração e seco no vácuo. 32 0 ácido PEG-carboxílico (3 g) é então dissolvido em diclorometano anidro (20-30 ml) seguido da adição do acetal dietílico de 4-aminobutiraldeído (excesso, 1-5 molar), 1-hidroxibenzotriazole (excesso, 1-5 molar) e diciclo-hexilcarbodiimida (excesso, 1-5 molar). Dependendo da dimensão desejada para o grupo "p" definido na fórmula (XIII), o acetal dietílico do 4-aminobutiraldeído pode ser substituído por outro derivado amina do acetal dietílico, por exemplo, acetal dietílico de 3-aminopropionaldeído ou acetal dietílico de 2-aminoacetaldeído. A mistura resultante é agitada durante a noite à temperatura ambiente sob gás árgon. A mistura da reacção é filtrada, concentrada e precipitada com uma mistura de 2-propanol e éter dietílico (1:1). O produto PEG acetal é seco no vácuo, durante a noite. O produto PEG acetal é então dissolvido em 10 - 200 ml de 1 - 90% CF3COOH e a solução é agitada à temperatura ambiente durante a noite. O pH da mistura é ajustado para 6,0 por adição de solução de 1 N NaOH, adiciona-se então cloreto de sódio (10 %p) e o pH da solução é ajustado para 7,0 por adição de 1 N NaOH. A mistura é, então, extraída com diclorometano. A fase orgânica é seca sobre sulfato de sódio, filtrada, concentrada e precipitada com éter 33 dietílico. O produto, aldeído de PEG, é recolhido por filtração e seco no vácuo.
Exemplo 2
Preparação de mPEGi0K-butanoaldeído 0 esquema seguinte representa um esquema geral de reacção para a preparação de mPEGi0k-butanoaldeído: 34
Esquema de reacção para mPEGiok-butanoaldeído terc-Butóxido de potássio DH Bromoacetato de terc-butilo
Acetal dietílico 4-aminobutiraldeído (3)
ΌΗ 1-Hidroxibenzotriazole/^1 diciclo-hexilcarbodiimida '( O G>B haE)a“ 10% cf3cooh„ (5) Hs
-O
H
Primeiro, carboximetil PEG (mPEG) com peso molecular de 10000 daltons (30,0 g, 3 mmole) em 300 ml de tolueno foi seco azeotropicamente a refluxo durante 2 horas, seguido pela remoção de 100 ml de tolueno. A solução resultante foi arrefecida à temperatura ambiente depois adicionou-se à solução PEG terc-butóxido de potássio (0,68 g, 6 mmole) em 2 0 ml de terc-butanol absoluto e 2 0 ml de tolueno (1) . A mistura resultante foi agitada durante duas horas à temperatura ambiente sob árgon. 35
Bromoacetato de terc-butilo (1,00 ml, 6,75 mmole) foi adicionado à reacção através de uma seringa e a reacção foi agitada durante a noite à temperatura ambiente sob árgon. A solução da reacção foi concentrada em evaporador rotativo. O resíduo foi precipitado por adição de éter dietílico. 0 produto precipitado foi separado por filtração e seco no vácuo. Rendimento: 28 g. RMN (d6-DMS0): 1,40 ppm (t, 9H, -CH3) ; 3,21 ppm (s, -OCH3) ; 3,50 ppm (s, -0-CH2CH2-0-) ; 3,96 ppm (s, 2H, -0-CH2-C00-). A seguir, éster terc-butílico de mPEGiok-carboximetil (20 g) foi dissolvido em 200 ml de 1 N hidróxido de sódio e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante a noite (2) . O pH da mistura foi ajustado para 2,5 por adição de 6 N ácido clorídrico e a mistura foi extraída com diclorometano (50 ml, 4 0 ml e 3 0 ml) . A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada, concentrada e precipitada com éter dietílico. O produto, ácido m-PEGiok-carboximetil, foi recolhido por filtração e seco no vácuo. Rendimento: 18 g. RMN (d6-DMSO) : 3,21 ppm (s, -OCH3) ; 3,5 ppm (s, -O-CH2CH2-O-) ; 3,99 ppm (s, 2H, -0-CH2-C00H) . O ácido mPEGiok-carboximetil (3 g, 0,3 mmole) foi dissolvido em diclorometano anidro (20 ml) seguido da adição de acetal dietílico de 4-aminobutiraldeído (50 mg, 0,3 mmol), 1-hidroxibenzotriazole (40 mg, 0,3 mmole) e de diciclo- 36 hexilcarbodiimida (80 mg, 0,39 mmole) (3). A mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente sob árgon. A mistura da reacção foi filtrada, concentrada e precipitada com uma mistura de 2-propanol e éter dietílico (1:1). 0 produto, mPEGiok-butanoacetal, foi seco no vácuo durante a noite. Rendimento: 2,7 g. RMN (d6-DMS0): 1,07-1,12 ppm (t, 6H, (-0-CH2-CH3) 2) ; 1,46 ppm (m, 4H, -NHCH2CH2CH2-CH-) ; 3,08- 3,11 ppm (q, 2H, -NHCH2CH2CH2CH-) ; 3,21 ppm (s, -OCH3) ; 3,5 ppm (s, -0-CH2CH2-0-) ; 3,85 ppm (s, 2H, -0-CH2C0-NH-) ; 4,44 ppm (t, 1H, -NHCH2CH2CH2CH-); 7,67 ppm (-NH-).
Finalmente, o mPEGiok-butanoacetal (5 g, 0,5 mmole) foi dissolvido em 50 ml de 10% CF3COOH e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante a noite (4). O pH da mistura foi ajustado para 6,0 por adição de uma solução 1 N NaOH, e adicionou-se cloreto de sódio (10 %p) e depois o pH da solução foi ajustado para 7,0 por adição de 1 N NaOH. A mistura foi extraída com diclorometano. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada, concentrada e precipitada em éter dietílico. O produto, mPEGiok- butanoaldeído (5) , foi recolhido por filtração e seco no vácuo. Rendimento: 4,1 g (82%). RMN (d6-DMS0): 3,21 ppm (s, -0CH3) ; 3,5 ppm (s, -0-CH2CH2-0) ; 3,85 ppm (s, 2H, -0-CH2- C0-NH-); 7,67 ppm (-NH-); 9,66 ppm (-CHO-). 37
Exemplo 3
Preparação de mPEG10k-acetal aldeído mPEGiok-acetal aldeído foi preparado por dissolução de mPEGiok-acetal dietílico (1 g, Peso Mol. 10000), que foi preparado de acordo com o processo do Exemplo 1, em 10 ml de 80% ácido trifluoroacético (Aldrich, 99+%). A solução da reacção foi agitada durante a noite à temperatura ambiente sob árgon gás. Adicionou-se, então, gota a gota 1 N NaOH à solução da reacção até se obter um pH de 6,0. A seguir, adicionou-se à solução acima NaCl (10 %p) . O pH foi então ajustado para 6,95 ± 0,05 por adição de 0,1 N NaOH. A solução foi então extraída com diclorometano. A fase orgânica foi então seca sobre sulfato de sódio, filtrada, concentrada e precipitada com éter dietílico. O produto, mPEGiok-a-cetal aldeído, foi recolhido por filtração e seco no vácuo. Rendimento: 0,85 g (85%).
Exemplo 4
Preparação de mPEGiok-propionaldeído mPEGiok-propionaldeído foi preparado por dissolução de mPEGiok-propionacetal (2 g, Peso Mol. 10000), o qual foi preparado de acordo com o processo do Exemplo 1, em 2 0 ml 38 de 80% ácido trifluoroacético (Aldrich, 99+%). A solução da reacção foi agitada durante a noite à temperatura ambiente sob ãrgon gás. Adicionou-se, então, gota a gota 1 N NaOH à solução da reacção até se obter um pH de 6,0. A seguir, adicionou-se à solução acima NaCl (10 %p) . O pH foi então ajustado para 6,95 ± 0,05 por adição de 1 N NaOH. A solução foi então extraída com diclorometano. A fase orgânica foi então seca sobre sulfato de sódio, filtrada, concentrada e precipitada com éter dietílíco. O produto, mPEG10k-propi-onaldeído, foi recolhido por filtração e seco no vácuo. Rendimento: 1,8 g (90%).
Exemplo 5
Preparação de PEG2Qk-di-butanoaldeído PEG20k-di-butanoaldeído foi preparado por dissolução de acetal dietílico de PEG2ok-di-butiraldeído (3,1 g, Peso Mol. 20,000), o qual foi preparado de acordo com o processo do Exemplo 1, em 20 ml de 80% ácido trifluoroacético (Aldrich, 99 + %) . A solução da reacção foi agitada durante a noite à temperatura ambiente sob árgon gás. Adicionou-se, então, gota a gota 1 N NaOH à solução da reacção até se obter um pH de 6,0. A seguir, adicionou-se à solução acima NaCl (10 %p). O pH foi então ajustado para 6,95 ± 0,05 por adição de 0,1 N NaOH. A solução foi então extraída com diclorometano. 39 A fase orgânica foi então seca sobre sulfato de sódio, filtrada, concentrada e precipitada com éter dietílico. O produto, PEG20k-di-butanoaldeído, foi recolhido por filtração e seco no vácuo. Rendimento: 2,5 g (81 %) .
Exemplo 6
Preparação de mPEG20k-butanoaldeído mPEG2ok-butanoaldeído foi preparado por dissolução de acetal dietílico de mPEG2ok“butiraldeído (3,0 g, Peso Mol. 20000), 0 qual foi preparado de acordo com o processo do Exemplo 1, em 30 ml de 80% ácido trifluoroacético (Aldrich, 99+%). A solução da reacção foi agitada durante a noite à temperatura ambiente sob árgon gás. Adicionou-se, então, gota a gota 1 N NaOH à solução da reacção até se obter um pH de 6,0. A seguir, adicionou-se à solução acima NaCl (10 %p). O pH foi então ajustado para 6,95 ± 0,05 por adição de 1 N NaOH. A solução foi então extraída com diclorometano. A fase orgânica foi então seca sobre sulfato de sódio, filtrada, concentrada e precipitada com éter dietílico. O produto, mPEG20k-butanoaldeído, foi recolhido por filtração e seco no vácuo. Rendimento: 2,5 g (83,3%). 40
Exemplo 7
Preparação de mPEG2ok-butanoaldeído mPEG20k-butanoaldeído foi preparado por dissolução de acetal dietílico de mPEG20k-butiraldeído (14,7 g, Peso Mol. 20000), o qual foi preparado de acordo com o processo do Exemplo 1, em 200 ml de 10% ácido trifluoroacético (Aldrich, 99+%). A solução da reacção foi agitada durante a noite à temperatura ambiente sob árgon gás. Adicionou-se, então, gota a gota 1 N NaOH à solução da reacção até se obter um pH de 6,0. A seguir, adicionou-se à solução acima NaCl (10 %p). 0 pH foi então ajustado para 6,95 ± 0,05 por adição de 0,1 N NaOH. A solução foi então extraída com diclorometano. A fase orgânica foi então seca sobre sulfato de sódio, filtrada, concentrada e precipitada com éter dietílico. 0 produto, mPEG20k-butanoaldeído, foi recolhido por filtração e seco sob vácuo. Rendimento: 13,1 g (89%).
Lisboa, 18 de Dezembro de 2006
Claims (20)
1 Reivindicações 1. Um composto da fórmula (I) R1-(CH2CH20)n-CH2CH2-X-Y-NH-(CH2)p-CH0 (I) em que Ri é seleccionado do grupo que consiste em halogénio, epóxido, maleimida, dissulfureto de ortopiridilo, tosilato, isocianato, hidrazina hidrato, halogeneto cianúrico, N-succinimidiloxi, sulfo-N-succinimidiloxi, 1- benzotriazoliloxi, 1-imidazoliloxi, p-nitrofeniloxi, e O II -CH2CH2-0-(CH2)m-C-NH-(CH2)p-CH0, X é 0 ou NH, Y é seleccionado do grupo que consiste em O o OH || w -(CHj)m-C-, -C-, -(CHJ^-ÒH-tCHj),^ -C-(NH-ChJ)m, Z é uma cadeia lateral de um aminoãcido, m é de 1 a 17, n é de 10 a 10 000, e 2 p é de 1 a 3.
2. Um composto, de acordo com a reivindicação 1, da fórmula (III) O Rr(CH2CH20)n-CH2CHrO-C>NH-(CH2)p-CHO(II!)
3. Um composto, de acordo com a reivindicação 1, da fórmula (IV) O Rr(CH2CH20)n-CH2CHrNH-C-NH-(CH2)p-CH0(IV)
4. Um composto, de acordo com a reivindicação 1, da fórmula (V) OH Rr(CH2CH20)n-CH2CH2-0-CH2- CH- CH2-NH-(CH2)p-CHO (V)
5. Um composto, de acordo com a reivindicação 1, da fórmula (VI) O o ^ I] Rr(CH2CH20)n-CH2CH2-0-C-NH-ÇH-C-NH^CH2)P'CHO (V,)
6. Um composto da fórmula (II) O Rr(CH2CH20)„-CH2CH2-0-(CH2)m”C-NH-(CH2)P-CHO (II) 3 em que Ri é seleccionado do grupo que consiste em halogénio, epóxido, maleimida, dissulfureto de ortopiridilo, tosilato, isocianato, hidrazina hidrato, halogeneto cianúrico, N-succinimidiloxi, sulfo-N-succinimidiloxi, 1- benzotriazoliloxi, 1-imidazoliloxi, p-nitrofeniloxi, e O II -CH2CH2-0-(CH2)m-C-NH-(CH2)p-CH0, m é de 1 a 17, né de 10 a 10 000, e p é de 1 a 3.
7. Um composto, de acordo com a reivindicação 6, em que p é 3 .
8. Um composto da fórmula (VIII) II Η 0HC-(CHa)p-NH-C-(CH2)m“0-CH2CHr(CH2CH20)n-CH2CH2-0-(CH2)m-C-NH- (CH2)p-CHO em que (VIII) 4 m é de 1 a 17, né de 10 a 10 000, e p é de 1 a 3 .
9. Um composto da fórmula (IX) R1-(CH2-CH2-0)n-CH2-CH2-X-Y-NH-(CH2)p-CH-(0CH2-CH3)2 (IX) em que Ri é seleccionado do grupo que consiste em halogénio, epóxido, maleimida, dissulfureto de ortopiridilo, tosilato, isocianato, hidrazina hidrato, halogeneto cianúrico, N-succinimidiloxi, sulfo-N-succinimidiloxi, 1- benzotriazoliloxi, 1-imidazoliloxi, p-nitrofeniloxi, e O 1! -CH2CH2-0-(CH2)m-C-NH-(CH2)p-CH0, X é 0 ou NH, Y é seleccionado do grupo que consiste em 0 0 OH-(CH2)mA, -C-, -(CH2)^-CH-(CH2)^, O A 1-5> z Z é uma cadeia lateral de um aminoácido, 5 in é de X a. 17, n é de 10 a 10 000, e p é de 1 a 3.
10. Um composto da fórmula (X) O li Rr(CH2-CH2-0)„-CH2-CH2-0-(CHzWC-NH-(CH2)p.CH-(OCH2-CH3)2 (X) em que rx é seleccionado do grupo que consiste em halogénio, epóxido, maleimída, dissulfureto de ortopiridilo, tosilato, isocianato, hidrazina hidrato, halogeneto cianúrico, N-succinimidiloxi, sulfo-N-succinimidiloxi, 1- benzotriazoliloxi, l-imidazoliloxi, p-nitrofeniloxi, e O -CH2CH2-0-(CH2)m-C-NH-(CH2)p-CH0, m é de 1 a 17, n é de 10 a 10 000, e p é de 1 a 3.
11. Um composto da fórmula (XI) 6 (CH3CH20)2.CH.(CH2)p*NH-C-(CH2)m-0-CH2CH2-(CH2-CH2-0)n-CH2CH2<HCH2)m-C*NH- (CH2)p-CH-(0CHrCH3)2 ^ em que m é de 1 a 17, n é de 10 a 10 000, e p é de 1 a 3.
12. Um processo de produção de um aldeído de polietileno gliool, que compreende a hidrólise de um composto da fórmula (IX) R1-(CH2-CH2-0)n-CH2-CH2-X-Y-NH-(CH2)p-CH-(OCH2-CH3)2 (IX) para produzir um aldeído de polietileno glicol da fórmula (I) Rr(CH2CH20)n-CH2CH2-X-Y-NH-(CH2)p-CHO (I) em que Ri é seleccionado do grupo que consiste em halogénio, epóxido, maleimida, dissulfureto de ortopiridilo, tosilato, isocianato, hidrazina hidrato, halogeneto cianúrico, N-succinimidiloxi, sulfo-N-succinimidiloxi, 1- benzotriazoliloxi, 1-imidazoliloxi, p-nitrofeniloxi, e 7 Ο -CH2CH2-0-(CH2)m-C-NH-(CH2)p-CH0, X é Ο ou NH, Y é seleccionado do grupo que consiste em O OII OH u Z é uma cadeia lateral de um aminoácido, m é de 1 a 17, né de 10 a 10 000, e p é de 1 a 3.
13. Um processo de produção de um aldeído de polietileno glicol, que compreende a hidrólise de um composto da fórmula (X) O II Rr(CH2-CH2-0)n-CH2-CH2-0-(CH2)m-C-NH-(CH2)p-CH-(0QH2-CH3)2 (X) para produzir um aldeído de polietileno glicol da fórmula (II) 8 Ο Rr{CHaCH20)„-CH2CH2-0-(CH2)m-C»NH-(CH2)p-CHO (II) em que Ri é seleccionado do grupo que consiste em halogénio, epóxido, maleimida, dissulfureto de ortopiridilo, tosilato, isocianato, hidrazina hidrato, halogeneto cianúrico, N-succinimidiloxi, sulfo-N-succinimidiloxi, 1- benzotriazoliloxi, 1-imidazoliloxi, p-nitrofeniloxi, e O II -CH2CH2-0-(CH2)m-C-NH-(CH2)p-CHQt m é de 1 a 17, n é de 10 a 10 000, e p é de 1 a 3.
14. Um processo, de acordo com a reivindicação 13, em que um composto da formula (X) s produzido por reacçao de um composto da fórmula (XII) Rr(CH2-0H2-0)n-CH2CH2-0-(CH2)m-C00H (XII) com um composto da fórmula (XIII) (XIII). H2N-(CH2)p-CH-(OCH2-CH3)2 9
15. Um processo, de acordo com a reivindicação 14, em que um composto da fórmula (XII) é produzido por hidrólise de um composto da fórmula (XIV) R1-0-(CH2-CH2-0)n-CH2CH2-O-(CH2)m-C00R3 (XIV) em que R3 é um Ci-C4 alquilo linear ou ramificado.
16. Um processo, de acordo com a reivindicação 15, em que um composto da fórmula (XIV) é produzido por reacção de um composto da fórmula (XV) R1-(CH2-CH2-0)n-CH2-CH2-0H (XV) com um composto da fórmula (XVI) R2-(CH2)m-COOR3 (XVI) em que R2 é halogénio.
17. Um processo de produção de um aldeído de polietileno glicol, que compreende a hidrólise de um composto da fórmula (XVII) ° í? (CH3CH20)rCH-(CH2)p-NH-C-(CHa)m-0-CH2CHr(CH2-CHrO)„-CH2CHrO-(CH2)m-C-NH- (CH2)p-CH-(0CHrCH3)2 (XVII) 10 para produzir um aldeído de polietileno glicol da formula (VIII) II 11 0HC-(CH2)p-NH-C-(CH2)m-O-CH2CH2-(CH2CH2O)n-CH2CH2-O-(CH2)m-C-NH- (CH2)p-CHO (VIH) em que m é de 1 a 17, n é de 10 a 10 000, e p é de 1 a 3.
18. Um processo, de acordo com a reivindicação 17, em que um composto da fórmula (VIII) é produzido por reacção de um composto da fórmula (XVIII) HOOC-(CH2)m-0-CH2CH2-(CH2-CH2-0)n-CH2CHrO-(CH2)m-COOH (XVIII) com um composto da fórmula (XIX) (XIX)· H2N-(CH2)p-CH-(OCH2-CH3)2 11
19. Um processo, de acordo com a reivindicação 18, em que um composto da fórmula (XVIII) é produzido por hidrólise de um composto da fórmula (XX) R3OOC-(CH2)m-CH2CH2-0-(CH2-CH2-0)n-CH2CH2-0-(CH2)m-COOR3 (XX) em que R3 é um C1.-C4 alquilo linear ou ramificado.
20. Um processo, de acordo com a reivindicação 19, em que um composto da fórmula (XX) é produzido por reacção de um composto da fórmula (XXI) H0-CH2CH2-(CH2-CH2-0)n-CH2CH2-0H (XXI) com um composto da fórmula (XVI) R2-(CH2)m-COOR3 (XVI) em que R2 é halogénio. Lisboa, 18 de Dezembro de 2006
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