PT1406899E - Derivados de fenilacetamido-tiazole, processo para a sua preparação e a sua utilização como agentes antitumorais - Google Patents

Derivados de fenilacetamido-tiazole, processo para a sua preparação e a sua utilização como agentes antitumorais Download PDF

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PT1406899E
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Gabriella Traquandi
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Anna Vulpetti
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Description

ΡΕ1406899 ι
DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE FENILACETAMIDO—TIAZOLE, PROCESSO PARA A SUA PREPARAÇÃO E A SUA UTILIZAÇÃO COMO AGENTES ANTITUMORAIS"
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO Área da Invenção A presente invenção está relacionada com derivados de fenilacetamido-tiazole, com um processo para a sua preparação, com composições farmacêuticas que os contêm, e com a sua utilização como agentes terapêuticos, particularmente no tratamento de cancro e doenças celulares proli-ferativas.
Discussão dos Antecedentes Vários fármacos citotóxicos como, e.g., fluoro-uacilo (5-FU), doxorubicina e camptotecinas, danificam o ADN ou afectam as vias metabólicas celulares causando assim, em muitos casos, um bloqueio indirecto do ciclo celular. Assim, ao produzir uma lesão irreversível tanto às células normais como às células tumorais, estes agentes resultam em toxicidade e efeitos secundários significativos . 2 ΡΕ1406899 A este respeito, são desejáveis compostos com aptidão para funcionar como agentes antitumorais altamente especificos que conduzem selectivamente à frenação das células tumorais e apoptose, com eficácia comparável mas toxicidade reduzida em relação aos fármacos actualmente disponíveis. É sabido que o progresso através do ciclo celular é governado por uma série de pontos de verificação e controlo, também referidos como pontos de restrição, que são regulados por uma família de enzimas conhecidas como cinases dependentes de ciclina (cdk) . Por sua vez, as próprias cdk são reguladas a muitos níveis como, por exemplo, ligação a ciclinas. A activação e inactivação coordenada de diferentes complexos de ciclina/cdk são necessárias para o progresso normal através do ciclo celular. Tanto as críticas transições Gl-S e G2-M são controladas pela activação de diferentes actividades de ciclina/cdk. Em Gl, pensa-se que tanto CdK4/ciclina D e CdK2/ciclina E medeiam o início da fase-S. 0 progresso através da fase-S requer a actividade de CdK2/ciclina A enquanto que a activação de cdc2 (cdkl)/ciclina A e cdc2/ciclina B são necessárias para o início de mitose. Para uma referência geral a ciclinas e cinases dependentes de ciclina, ver, por exemplo, Kevin R. Webster et al., em Exp. Opin. Invest. Drugs, 1998, Vol. 7 (6), 865-887. Os pontos de verificação e controlo são deficientes nas células tumorais em parte 3 ΡΕ1406899 devido ao desregulamento da actividade de cdk. Por exemplo, a expressão alterada de ciclina E e cdks foi observada em células tumorais, e o apagamento do gene KIP p27 inibidor de cdk em murganhos mostrou resultar numa incidência de cancro mais elevada.
Existem provas cada vez mais numerosas que apoiam a ideia de que as cdk são enzimas que limitam a taxa no ciclo de progresso celular e, como tal, representam alvos moleculares para intervenção terapêutica. Em particular, a inibição directa da actividade de cdk/ciclino cinase deverá ser útil para restringir a proliferação desregulada de uma célula tumoral.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO É objectivo da invenção proporcionar compostos que sejam úteis no tratamento de doenças celulares proli-ferativas associadas com um ciclo celular alterado dependente da actividade de cinase. É outro objecto proporcionar compostos que tenham actividade inibidora de cdk/ciclino cinase.
Os presentes inventores verificaram agora que determinados fenilacetamido-tiazoles têm actividade inibidora de cdk/ciclino cinase e são assim úteis em terapêutica como agentes anti-tumorais, e não possuem, em termos de toxicidade e de efeitos secundários as limitações ante-riormente referidas associadas com os fármacos antitumorais actualmente disponíveis. 4 ΡΕ1406899
Mais especificamente, os fenilacetamido-tiazoles da invenção são úteis no tratamento de vários cancros incluindo, mas sem se limitar a: carcinomas como carcinoma da bexiga, mama, cólon, rim, fígado, pulmão, incluindo cancro do pulmão de células pequenas, esófago, vesícula biliar, ovário, pâncreas, estômago, cervical, tiróide, próstata e pele incluindo carcinoma de células escamosas; tumores hematopoiéticos de linhagem linfóide incluindo leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma não de Hodgkin, linfoma de células cabeludas e linfoma de Burkett; tumores hematopoiéticos de linhagem mielóide, incluindo leucemias mielógenas agudas e crónicas, síndroma mielodisplásico e leucemia promielo-cítica; tumores de origem mesenguimal, incluindo fibrossar-coma e rabdomiossarcoma; tumores do sistema nervoso central e periférico, incluindo astrocitoma neuroblastoma, glioma e schwanomas; outros tumores, incluindo melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteossarcoma, xerodermia pigmentosa, ceratocantoma, cancro folicular da tiróide e sarcoma de Kaposi.
Devido ao papel chave das cdk na regulação da proliferação celular, estes derivados de fenilacetamido-tiazole são também úteis no tratamento de várias doenças celulares proliferativas tais como, por exemplo, hiperpla-sia benigna da próstata, polipose adenomatosa familiar, neurofibromatose, psoríase, proliferação de células vascu- 5 ΡΕ1406899 lares lisas associada com aterosclerose, fibrose pulmonar, artrite, glomerulonefrite e estenose e restenose pós-cirúrgica.
Os compostos da invenção podem ser úteis no tratamento de doença de Alzheimer, como sugerido pelo facto de cdk5 estar envolvido na fosforilação da proteína tau (J. Biochem. 117, 741-749, 1995).
Os compostos desta invenção, como moduladores de apoptose, podem também ser úteis no tratamento de cancro, infecções virais, prevenção do desenvolvimento de SIDA em indivíduos infectados por HIV, doenças auto-imunes e doenças neurodegenerativas.
Os compostos desta invenção podem ser úteis na inibição de angiogenese e metástases tumorais.
Os compostos da invenção podem também actuar como inibidores de outras proteíno cinases, e.g., proteíno cinase C em diferentes isoformes, Met, PAK-4, PAK-5, ZC-1, STLK-2, DDR-2, Aurora 1, Aurora 2, Bub-1, PLK, Chkl, Chk2, HER2, raf1, MEK1, MAPK, EGF-R, PDGF-R, FGF-R, IGF-R,PI3K, cinase "weel", Src, Abl, Akt, MAPK, ILK,MK-2, IKK-2,Cdc7, Nek, e assim ser eficaz no tratamento de doenças associadas com outras proteíno cinases.
Os compostos da invenção são também úteis no tratamento e prevenção de alopecia induzida por radioterapia ou quimioterapia. ΡΕ1406899 6
Assim, a presente invenção proporciona a utilização de um derivado de fenilacetamidotiazole representado pela fórmula (I)
A
em que R é um grupo Ci-C4 alquilo de cadeia linear ou ramificada;
Ri é um grupo de fórmula (Ila-e)
em que r3 é seleccionado do grupo que consiste em amino, aminometilo (-CH2-NH2) , hidroximetilo (-CH20H) , C1-C4 alquilo de cadeia linear ou ramificada ou é um heterociclo com 5 ou 6 membros com 1 ou 2 heteroátomos seleccionados de azoto, oxigénio e enxofre; desde que quando R é hidrogénio, então R3 é diferente de metilo ou piridil-3-ilo; 7 ΡΕ1406899 ou um seu sal f armaceut icamente aceitável, para o fabrico de um medicamento para tratar doenças celulares proliferativas associadas com um ciclo celular alterado dependente da actividade de cinase, pela administração a um mamífero que dele necessite de uma quantidade eficaz do derivado de fenilacetamidotiazole de fórmula (I).
Numa forma de realização preferida a utilização acima descrita, a doença celular proliferativa é selecci-onada do grupo que consiste em cancro, doença de Alzheimer, infecções virais, doenças auto-imunes e doenças neurode-generativas.
Tipos de cancro específicos que podem ser tratados incluem carcinoma, carcinoma de células escamosas, tumores hematopoiéticos de linhagem mielóide ou linfóide, tumores de origem mesenquimal, tumores do sistema nervoso central e periférico, melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteossarcoma, xerodermia pigmentosa, ceratocantoma, cancro folicular da tiróide e sarcoma de Kaposi.
Em outra forma de realização preferida da utilização acima descrita, a doença proliferativa celular é se-leccionada do grupo que consiste em hiperplasia benigna da próstata, polipose adenomatosa familiar, neuro-fibromatose, psoríase, proliferação de células vasculares lisas associada com aterosclerose, fibrose pulmonar, artrite, glome-rulonefrite e estenose e restenose pós-cirúrgica. 8 ΡΕ1406899
Além disso, a utilização da invenção proporciona inibição de angiogenese e metástese tumoral. 0 método da invenção pode também proporcionar inibição do ciclo celular ou inibição dependente de cdk/ciclina.
Além do acima exposto, a utilização objecto da presente invenção proporciona tratamento e prevenção de alopecia induzida por radioterapia ou quimioterapia. A presente invenção proporciona também um derivado de fenilacetamido-tiazole representado pela fórmula (I)
em que R é um grupo metilo;
Ri é um grupo de fórmula (Ila-e);
O em que R2 é hidrogénio ou um grupo C1-C6 alquilo de cadeia linear ou ramificada e o grupo hidroxilo no anel (IIc) está em qualquer uma das posições livres; 9 ΡΕ1406899 R.3 é seleccionado do grupo que consiste em amino, aminometilo (-CH2-NH2) , hidroximetilo (-CH20H) , Ci-C4 alquilo de cadeia linear ou ramificada ou é um heterociclo com 5 ou 6 membros com 1 ou 2 heteroátomos seleccionados de azoto, oxigénio e enxofre; desde que quando R é hidrogénio, então R3 é diferente de metilo ou piridil-3-ilo; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. A presente invenção inclui também métodos de sintetizar os derivados de fenilacetamido-tiazole representados pela fórmula (I). Uma composição farmacêutica que compreende os derivados de fenilacetamido-tiazole representados pela fórmula (I) está também incluída na presente invenção .
Uma apreciação mais completa da invenção e muitas das suas resultantes vantagens será prontamente obtida quando esta se tornar mais bem compreendida por referência à descrição pormenorizada que se segue.
DESCRIÇÃO PORMENORIZADA DA INVENÇÃO São conhecidos na técnica vários aminotiazoles, por exemplo como herbicidas, intermediários sintéticos ou até como agentes terapêuticos. Entre estes estão, como 10 ΡΕ1406899 exemplo, 2-benzamido-l,3-tiazoles como agentes anti-alér-gicos (EP-A-261503, Valeas S. p. A.); 5-alquil-2- fenilal-quilcarbonilamino-1,3-tiazoles como inibidores de cinase de proteína C (WO 98/04536, Otsuka Pharmaceutical Co.); 5-ariltio-2-acilamino-l,3-tiazoles como agentes antitumorais (EP-A-412404, Fujisawa Pharm. Co.); 4-amino-2-carbonil-amino-1,3-tiazoles como inibidores de cinase dependente de ciclina (WO 99/21845, Agouron Pharmaceutical Inc.); aminotiazoles entre os quais estão 5-alcenil-2-acilamino-tiazoles como inibidores de cinase dependente de ciclina (WO 99/65884, Bristol-Myers Squibb Co.); fenilacetamido-tiazoles substituídos por grupos cicloalquil-alquilo como activadores de glucocinase, úteis no tratamento de diabetes tipo II (WO 01/85707, Hoffmann-La Roche AG).
Além disso, dois pedidos de patentes internacionais WO 00/26202 e WO01/14353 (US 6 114 365) , ambas em nome de Pharmacia & Upjohn S. p. A., descrevem classes alargadas de derivados de amido-tiazole que possuem actividade inibidora de cinase dependente de células.
Os compostos objecto da presente invenção estão dentro do âmbito da fórmula geral do WO 00/26202 e WO01/14353 mas não estão aí especificamente exemplificados.
Os compostos de fórmula (I) podem ter átomos de carbono assimétricos e podem por isso existir como misturas racémicas ou como isómeros ópticos individuais que estão todos dentro do âmbito da presente invenção. 11 ΡΕ1406899
Como exemplo, o átomo de carbono ao qual o próprio R está ligado é um átomo de carbono assimétrico e, assim, tanto os isómeros ópticos (R) e (S) dos compostos de fórmula (I), bem como a mistura racémica (R,S) ou qualquer outra mistura que compreenda uma maioria de um ou dois isómeros ópticos (R) ou (S) estão dentro do âmbito da invenção.
Do mesmo modo, a utilização como um agente antitumoral de todos os isómeros possíveis e das suas misturas e de metabolitos e dos bio-percurssores farmaceu-ticamente aceitáveis (também referidos como pro-fármacos) dos compostos de fórmula (I) estão também dentro do âmbito da presente invenção.
Na presente descrição, como será evidente para o especialista na técnica, o átomo de azoto, sendo parte das unidades Ri de fórmula (lie), está directamente ligado, na fórmula (I), à unidade fenileno.
Na presente descrição, a menos que contrariamente especificado, com o termo Ci-C4 alquilo de cadeia linear ou ramificada, pretendemos incluir quaisquer dos grupos metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo e sec-butilo.
Com o termo heterociclo com 5 ou 6 membros com 1 ou 2 heteroátomos seleccionados entre azoto, oxigénio ou enxofre, pretendemos incluir um grupo tal como, por exemplo, furano, pirrole, imidazole, pirazole, tiofeno, tiazo- 12 ΡΕ1406899 le, isotiazole, oxazole, isoxazole, piridina, pirazina, pirimidina, piridazina, pirrolidina, pirrolina, imidazoli-dina, imidazolina, pirazolidina, pirazolina, piperidina, piperazina, morfolina e outros semelhantes.
Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de fórmula (I) incluem os sais de adição de ácido e de base com ácidos ou bases inorgânicas ou orgânicas, respec-tivamente. Exemplos dos ácidos acima incluem, por exemplo, ácido nítrico, clorídrico, bromídrico, sulfúrico, percló-rico, fosfórico, acético, trifluoroacético, propiónico, glicólico, láctico, oxálico, malónico, málico, maleico, tartárico, cítrico, benzóico, cinâmico, mandélico, metanos-sulfónico, isetiónico e salicílico.
Do mesmo modo, as bases adequadas são, por exemplo, hidróxidos de metais alcalinos ou alcalino-terrosos bem como aminas orgânicas, e.g., aminas alifáticas, piperidina e outras semelhantes.
Uma classe de compostos preferidos de fórmula (I) da invenção são aqueles em que R é metilo.
Dentro desta classe de compostos preferidos de fórmula (I), são mais preferidos aqueles em que Ri é um grupo de fórmula (lie) em que R3 é metilo ou piridilo, incluindo assim piridil-4-ilo, piridil-3-ilo ou piridil-2-ilo. 13 ΡΕ1406899
Exemplos de compostos de fórmula (I) da invenção, opcionalmente na forma de sais farmaceuticamente aceitáveis, são: 4. (2 S)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(2-oxo-l-pirrolidinil)fenil]propanamida; 5. 2-[4-(3-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil)fenil]-N-(5-isopropil-1,3-tiazol-2-il)acetamida; 6 . 2-{4-[(3S)-3-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil)fenil}-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)acetamida; 7. 2—{4—[(3R)-3-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil]fenil}-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)acetamida; 8. 2-[4-(3-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil)fenil]-N-(5-isopropil-1,3-tiazol-2-il)propanamida; 9. 2-{4-[(3S)-3-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil]fenil}-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-i1)propanamida; 10. 2-{4-[(3R)-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil]fenil}-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 11. (2R)—2—{4—[(3S)-3-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil]fe-nil}-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 12. (2S)—2—{4—[(3S)-3-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil]fenil }-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 14 ΡΕ1406899 13. (2R)—2—{4—[(3R)-3-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil] fenil}-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 14. (2S)-2-{4-[(3R)-3-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil]-fenil}-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 15. N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(2-oxo-l,3-oxazolidin-3-il)fenil]acetamida; 16. N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(2-oxo-l,3-oxazolidin-3-il)fenil]propanamida; 17. (2R)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(2-oxo- 1.3- oxazolidin-3-il)fenil]propanamida; 18. (2S)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(2-oxo- 1.3- oxazolidin-3-il)fenil]propanamida; 19. N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(2-oxo-l-imi-dazolidinil)fenil]acetamida; 1. (2S)—2—[4—(acetilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 2. (2R)-2-[4-(acetilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 3 . 2-[4-(acetilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 15 ΡΕ1406899 4. (2S)-2-{4-[(aminocarbonil)amino]fenil}-N-(5-iso-propil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 5. (2R)—2—{4—[(aminocarbonil)amino]fenil}-N-(5-iso-propil-1,3-tiazol-2-il)-propanamida; 6 . 2-4-[(aminocarbonil)amino]fenil}-N-(5-isopropil-l, 3-tiazol-2-il)propanamida; 7 . 2-{4-[(aminocarbonil)amino]fenil}-N-(5-isopropil- 1,3-tiazol-2-il)acetamida; 8. (2S)—2—[4—(glicilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 9. (2R)-2-[4-(glicilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 10. 2-[4-(glicilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l, 3-tia-zol-2-il)propanamida; 11. N-l-(4-{2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-2-oxoetil}fenil)glicinamida; 12. N-(4-{ (IS)-2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2-oxoetil}fenil)nicotinamida; 39. N-(4-{(IR)-2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-l-metil-2-oxoetil}fenil)nicotinamida; 16 ΡΕ1406899 40. Ν-(4-{2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino] -1-metil-2-oxoetil}fenil)nicotinamida; 41. N-(4-{(lS)-2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2-oxoetil}fenil)piridino-2-carboxamida; 42. N-(4-{(IR)-2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-meti1-2-oxoetil}fenil)piridino-2-carboxamida; 43. N-(4-{2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2-oxoetil}fenil)piridino-2-carboxamida; 44. N-(4-{2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-2-oxoetil}fenil)piridino-2-carboxamida; 45. N-(4-{(IS)-2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-meti1-2-oxoetil}fenil)isonicotinamida; 46. N-(4-{(lR)-2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-meti1-2-oxoetil}fenil)isonicotinamida; 47. N-(4-{2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2-oxoetil}fenil)isonicotinamida; 48. N-(4-{2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-2-oxoetil}fenil)isonicotinamida.
Os compostos de fórmula (I), objecto da invenção, 17 ΡΕ1406899 podem ser obtidos por um processo que compreende fazer reagir 2-amino-5-isopropil-l,3-tiazole com um composto de fórmula (III) :
«i m n em que R e Ri são como acima definido e R' é hidroxilo ou um grupo separável adequado e, opcionalmente, convertendo-os nos seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
Em alternativa, os compostos de fórmula (I) em que Ri é um grupo de fórmula (lie), podem ser obtidos por um processo que compreende: a') quando R3 é diferente de amino, fazer reagir um composto de fórmula (IV)
com um composto de fórmula (V) R3-COX (V) em que R e R3 sao como acima definido e X é hidroxilo ou um grupo separável adequado; 18 ΡΕ1406899 a' ') quando R3 é amino, fazer reagir um composto de fórmula (IV) com cianato de potássio; e, opcionalmente, converter os compostos de fórmula (I) assim obtidos em qualquer dos passos a') ou a'') nos seus sais farma- ceuticamente aceitáveis. 0 processo acima é um processo de analogia que pode ser realizado de acordo com métodos bem conhecidos na técnica. A reacção entre 2-amino-5-isopropil-l,3-tiazole com o composto de fórmula (III) em que R' é hidroxilo pode ser realizada na presença de um agente de acoplamento como, por exemplo, carbodiimida, i.e., 1,3-diciclo-hexilcarbo-diimida, 1,3-diisopropilcarbodiimida, 1-(3-dimetilaminopro-pil)-3-etilcarbodiimida, N-ciclo-hexilcarbodiimida, ou N'-metil-poliestireno, opcionalmente na presença de uma base terciária como trietilamina, N-metilmorfolina, N,N-diiso-propiletilamina, piridina ou dietilaminometil-poliestireno. A reacção ocorre num solvente adequado, como, por exemplo, acetato de etilo, diclorometano, clorofórmio, tetra-hidrofurano, éter dietilico, 1,4-dioxano, acetoni-trilo, tolueno ou N,N-dimetilformamida, a uma temperatura na gama desde -10°C até à temperatura de refluxo, preferencialmente desde 0°C até à temperatura ambiente, e durante um período de tempo adequado, i.e., desde cerca de 30 minutos até cerca de 8 dias. 19 ΡΕ1406899
Alternativamente, esta mesma reacção pode ser também realizada de acordo com um método anidrido misto, que é através da utilização de um cloroformato de alquilo, como cloroformato de etilo, isobutilo ou isopropilo na presença de uma base terciária como trietilamina, N,N-diisopropiletilamina ou piridina.
Além disso esta reacção é realizada num solvente adequado como, por exemplo, tolueno, diclorometano, clorofórmio, tetra-hidrofurano, acetonitrilo, éter dietílico, 1,4-dioxano ou N,N-dimetilformamida, a uma temperatura na gama de desde -30°C até à temperatura ambiente. A reacção entre 2-amino-5-isopropil-l,3-tiazole com o composto de fórmula (III) em que R' é um grupo separável adequado, por exemplo um átomo de halogéneo, pode ser realizada na presença de uma base terciária como tri-etilamina, N,N-diisopropiletilamina ou piridina, num solvente adequado como acetato de etilo, tolueno, diclorometano, clorofórmio, éter dietílico, tetra-hidrofurano, acetonitrilo ou N,N-dimetilformamida, a uma temperatura na gama de desde -10°C até à temperatura de refluxo.
De acordo com uma forma de realização preferida da invenção, o processo para preparar os compostos de fórmula (I) é realizado pela utilização de compostos de fórmula (III) em que R' é hidroxilo ou um átomo de halogéneo, preferencialmente cloro. 20 ΡΕ1406899 É evidente para o especialista na técnica que a reacção de amidação de acordo com o passo a') do processo é realizada de uma forma análoga, entre o derivado amino de fórmula (IV) e o derivado ácido carboxilico de fórmula (V), substancialmente como acima descrito.
Como exemplo, a preparação do composto de fórmula (I) em que R3 é metilo, de acordo com o passo a') é realizada fazendo reagir o derivado de fórmula (IV) com cloreto de acetilo (V) ou, possivelmente com seus agentes acetilantes análogos, e.g. anidrido acético. A reacção ocorre na presença de uma base adequada como trietilamina, N-metilmorfolina, N,N-diisopropiletil-amina, piridina ou dietilamino-poliestireno, num solvente adequado como acetato de etilo, diclorometano, tetra-hidrofurano ou acetonitrilo, a uma temperatura na gama desde 0°C até à temperatura ambiente.
Dentro dos composto de fórmula (V), X é hidroxilo ou um grupo separável adequado como, por exemplo, um átomo de halogéneo. Preferencialmente, X é hidroxilo ou um átomo de cloro.
De acordo com o passo a1') do processo, o composto intermediário de fórmula (IV) é feito reagir com cianato de potássio, de acordo com métodos convencionais para preparar derivados de ureido [compostos de fórmula (I) 21 ΡΕ1406899 com R3 como amino] , num solvente adequado, por exemplo acetonitrilo, e na presença de ácido trifluoroacético. A salificação opcional de um composto de fórmula (I) ou, alternativamente, a conversão de um seu sal no composto livre, podem ser realizadas de acordo com métodos convencionais. 0 2-amino-5-isopropil-l, 3-tiazole de partida é um composto conhecido que pode ser facilmente obtido de acordo com métodos conhecidos, por exemplo como descrito nos exemplos de trabalho.
Do mesmo modo, os compostos de fórmula (III) em que R' é hidroxilo ou um grupo separável adequado são conhecidos ou podem ser preparados de acordo com métodos convencionais.
Os compostos de fórmula (III) em que Ri é um grupo de fórmula (lie) podem ser preparados fazendo reagir os compostos de fórmula (VI) em que R é como acima definido, com um derivado de ácido carboxílico adequado de fórmula (V) para obter qualquer derivado de fórmula (III) em que R3 é diferente de amino ou, alternativamente, com cianato de potássio para obter o derivado de fórmula (III) em que R3 é amino. As condições operativas utilizadas são convencionais e correspondem às anteriormente descritas, quando se refere a reacções de amidação, ou quando se refere à preparação de grupos ureído, respectivamente. ΡΕ1406899 22
Os compostos de fórmula (IV) em que é R descrito como acima podem ser preparados por um processo que compre ende: a) fazer reagir os compostos de fórmula (XIII) em que R é como acima descrito
com 5-isopropil-2-amino-l,3-tiazole, preparados por métodos convencionais, na presença de um agente de acoplamento adequado como uma carbodiimida como diciclo-hexil-carbodiimida, diisopropilcarbodiimida, 1-(3-dimetilami-nopropil)-3-etilcarbodiimida, dando os compostos de fórmula (XIV) em que R é como acima descrito
R b) e hidrolisar os compostos de fórmula (XIV) em meio ácido, por exemplo na presença de ácido clorídrico ou ácido sulfúrico em etanol, ou com ácido fórmico ou ácido trifluo-roacético em diclorometano, à temperatura ambiente durante 23 ΡΕ1406899 um período de tempo desde cerca de 2 horas até cerca de 12 horas. A reacção de acordo com o passo a) acima ocorre num solvente adequado como, por exemplo, diclorometano, clorofórmio, tetra-hidrofurano, éter dietílico, 1,4-dioxa-no, acetonitrilo, tolueno ou N,N-dimetilformamida a uma temperatura na gama desde -10°C até à temperatura ambiente. Em alternativa, os compostos de fórmula (XIV) podem ser preparados pela conversão dos compostos de fórmula (XIII) nos derivados de cloreto de acilo correspondentes com cloreto de tionilo ou cloreto de oxalilo num solvente adequado como tolueno, diclorometano, tetra-hidrofurano, acetato de etilo, a uma temperatura na gama desde 0°C até à temperatura ambiente e subsequentemente fazendo-os reagir com 5-isopropil-2-amino-l,3-tiazole na presença de uma base adequada como trietilamina, N,N-metilmorfolina, N,N-diisopropiletilamina ou piridina, num solvente adequado como acetato de etilo, diclorometano, tetra-hidrofurano, acetonitrilo, N,N-dimetilformamida, a uma temperatura na gama desde 0°C até à temperatura ambiente.
Os compostos de fórmula (XIII) em que R é como acima descrito podem ser preparados fazendo reagir os compostos de fórmula (VI) com anidrido tercbutoxicar-bonílico num solvente adequado como misturas de água/1,4-dioxano, na presença de uma base como carbonato de sódio à temperatura ambiente durante um período de tempo desde cerca de 4 até cerca de 12 horas. 24 ΡΕ1406899
Os compostos de fórmula (III) em que R' é um grupo separável são convenientemente preparados de acordo com métodos conhecidos começando a partir dos derivados de ácido carboxilico correspondentes de fórmula (III) em que R' é hidroxilo.
Como exemplo, os compostos em que R' é um átomo de halogéneo, por exemplo cloro, são preparados fazendo reagir os derivados de fórmula (III) em que R' é hidroxilo com cloreto de oxalilo ou tionilo, de acordo com métodos convencionais para preparar halogenetos de acilo. Esta reacção é tipicamente realizada na presença de quantidades catalíticas de N,N-dimetilformamida e na presença de um solvente adequado, por exemplo diclorometano, tetra-hidrofurano, acetato de etilo ou tolueno, a uma temperatura na gama desde 0°C até à temperatura de refluxo.
Além disso, os compostos de fórmula (IV) podem ser preparados através de reacções de amidação como acima descrito, fazendo reagir 2-amino-5-isopropil-l,3-tiazole com um composto de fórmula (VIII).
Por sua vez, os compostos de fórmula (VIII) e (V) , se não estiverem comercialmente disponíveis per se, são conhecidos ou são facilmente preparados de acordo com métodos conhecidos. A partir de tudo acima exposto, é evidente para o 25 ΡΕ1406899 especialista na técnica que quando se preparam os compostos de fórmula (I) de acordo com qualquer uma das variantes do processo acima referidas, os grupos funcionais opcionais nos materiais de partida ou seus intermediários e que poderiam originar reacções secundárias indesejadas, precisam de ser convenientemente protegidos de acordo com técnicas convencionais.
Do mesmo modo, a conversão destes últimos nos compostos desprotegidos livres pode ser realizada de acordo com procedimentos conhecidos.
Apenas a titulo de exemplo, os grupos amino podem ser convencionalmente protegidos como grupos terc-butoxi-carbonil-amino (BOC) através de reacção com dicarbonato de di-terc-butilo, num solvente adequado como misturas de água/1,4-dioxano e na presença de uma base, e.g., carbonato de sódio, operando à temperatura ambiente e durante um período de tempo que varia desde cerca de 4 horas até cerca de 12 horas.
Qualquer desprotecção subsequente pode ser então realizada por hidrólise com ácido, por exemplo na presença de ácido clorídrico ou ácido sulfúrico em etanol, ou com ácido fórmico ou ácido trifluoracético em diclorometano, operando à temperatura ambiente à temperatura ambiente durante um período de tempo que varia desde cerca de 2 horas até cerca de 12 horas. 26 ΡΕ1406899
Como será prontamente compreendido, se os compostos de fórmula (I) preparados de acordo com o processo acima descrito forem obtidos como uma mistura de isómeros, a sua separação nos isómeros simples de fórmula (I), de acordo com técnicas convencionais, está dentro do âmbito da presente invenção.
As técnicas convencionais para a resolução de racematos incluem, por exemplo, cristalização fraccionada de derivados de sal diastereoisoméricos ou HPLC quiral preparativa.
Farmacologia
Os compostos de fórmula (I) são activos como inibidores de cdk/ciclina e podem ser utilizados no tratamento de vários tumores tais como, por exemplo, carcinomas, e.g., carcinoma mamário, carcinoma do pulmão, carcinoma da bexiga, carcinoma do cólon, tumores dos ovários e endo-metriais, sarcomas, e.g., de tecidos macios e sarcomas ósseos, e as doenças hematológicas tais como, e.g., leucemias .
Além disso, os compostos de fórmula (I) são também úteis no tratamento de outras doenças celulares proliferativas como psoriase, proliferação de células vasculares lisas associada com ateroscelerose e estenose e restenose pós-cirúrgica e no tratamento de doença de Alzheimer. 27 ΡΕ1406899 A actividade inibidora de putativos inibidores de cdk/ciclina foi determinada pela primeira vez com um método baseado na utilização de uma placa de 96 poços MultiScreen-PH (Millipore) , na qual se colocou papel de filtro de fosfocelulósico no fundo de cada poço permitindo a ligação de substrato com carga positiva após um passo de lavagem/ filtração.
Quando uma unidade fosfato marcada com radio-actividade foi transferida por ser/threo cinase para a histona ligada ao filtro, a luz emitida foi medida num contador de cintilações, de acordo com o protocolo seguinte :
Reacção de cinase: 1,5 microM de substrato Hl histona, 25 microM de ATP (0,5 microCiP33gamaATP) , 100 ng de complexo de Ciclina A/cdk2, 10 microM de inibidor num volume final de 100 microl de tampão (TRIS HC1 10 nM pH 7,5, MgCl2 10 mM, 7,5 mM DDT) foram adicionados a cada poço de uma placa com 96 poços com fundo em forma de U. Após 10 minutos de incubação a 37°C, a reacção foi parada por 20 microl de EDTA 120 mM.
Captura: Transferiu-se 100 microl de cada poço de placa MultiScreen para permitir a ligação do substrato ao filtro fosfocelulósico. As placas foram então lavadas 3 vezes com 150 microl/poço de PBS Ca++/Mg++livre e filtradas por sistema de filtração MultiScreen. 28 ΡΕ1406899
Detecção: Deixou-se os filtros secar a 37°C, em seguida adicionou-se 100 microl/poço de mistura cintilante e detectou-se histona 1 33P marcada por contagem de radioactividade no instrumento Top-Count.
Resultados: Os dados foram analisados e expressos como % de inibição em relação à actividade total da enzima ( = 100%) .
Quando o número de compostos a serem testados se tornou consistente, surgiu a necessidade de um ensaio de rastreio rápido e homogéneo. Assim estabeleceu-se um método de ensaio baseado na utilização de tecnologia SPA (Amersham Pharmacia Biotech). O ensaio consiste na transferência da unidade fosfato marcada com radioactividade pela cinase para um substrato biotinilado. 0 produto biotinilado 33-P marcado é deixado ligar-se às esferas SPA revestidas com streptavidina (capacidade de biotina 130 pmol/mg) e a luz emitida foi medida num contador de cintilações.
Ensaio de inibição da actividade cdk2/Ciclina A
Reacção de cinase: 4 microM de substrato de histona Hl biotinilada no laboratório (Sigma# H-5505), 10 microM de ATP (0,1 microCi P33gama-ATP) , 4,2 ng de complexo de cdk2/Ciclina A, inibidor num volume final de 30 microl de tampão (TRIS HC1 10 mM pH 7,5, MgCl2 10 mM, DTT 7,5 + 0,2 mg/mL de BSA) foram adicionados a cada poço de uma placa 29 ΡΕ1406899 com 96 poços com fundo em forma de U. Após 30 minutos de incubação à temperatura ambiente, a reacção foi parada por 100 microl de PBS + 32 mM de EDTA + 0,1% de Triton X-100 + 500 microM de ATP, contendo 1 mg de esferas SPA. Em seguida um volume de 110 microl é transferido para Optiplate.
Após 20 minutos de incubação para captura de substrato, adicionou-se 100 microl de CsCl 5 M para permitir a estratificação das esferas no cimo da placa e deixou-se em repouso durante 4 horas antes de contagem de radioactividade no instrumento Top-Count.
Determinação de CI50: os inibidores foram testados a diferentes concentrações desde 0,0015 até 10 microM. Os dados experimentais foram analisados pelo programa de computador GraphPad Prizm utilizando a equação logística de quatro parâmetros: y=fundo+(cimo-fundo)1+10Λ(log IC50)*declive)) em que x é o logaritmo da concentração do inibidor, y é a resposta; y começa no fundo e vai até ao cimo com uma forma sigmóide.
Ki em cdk/Ciclina A
Método experimental: a reacção foi realizada em tampão (10 mM de Tris, pH 7,5, 10 mM de MgCl2, 0,2 mg/mL de BSA, 7,5 mM de DTT) contendo 3,7 nM de enzima, histona e ATP 30 ΡΕ1406899 (razão constante de frio/ATP marcado 1/3000). A reacção foi parada com EDTA e o substrato capturado sobre fosfomembrana (placas de 96 poços Multiscreen de Millipore). Após lavagem exaustiva, as placas multi rastreio são lidas num contador. O controlo (tempo zero) para cada concentração de ATP e histona foi medido.
Concepção experimental: as velocidades de reacção são medidas em diferentes quatro concentrações de ATP, substrato (histona) e inibidor. Concebeu-se uma matriz de concentração de 80-pontos em volta dos valores respectivos de ATP e de substrato Km, e os valores de inibição CI50 (0,3, 1,3, 9 vezes os valores Km ou CI50). Uma experiência de curso temporal preliminar na ausência de inibidor e nas diferentes concentrações de ATP e substrato permite a selecção de um único tempo final (10 min) na gama linear de reacção para a experiência de determinação de Ki.
Estimativas de parâmetros cinéticos: os parâmetros cinéticos foram estimados por regressão de mínimos quadrados não linear simultânea utilizando [Eq.l] inibidor competitivo em relação a ATP, mecanismo aleatório) utilizando o conjunto de dados completo (80 pontos): PM1
Kq ¥ — · a*Ka· Khs· & * Kã ·Β+$ *Kb ·Λ4·Λ*Β ¥&*/*
Ki em que A = [ATP], B = [substrato], I = [inibidor], Vm velocidade máxima, Ka, Kb, Ki as constantes de disso- 31 ΡΕ1406899 ciação de ATP, substrato e inibidor respectivamente, alfa e bata o factor de cooperatividade entre substrato e ligação de ATP e substrato e ligação de inibidor respectivamente.
Além disso os compostos seleccionados foram ca-racterizados num painel de ser/threo cinases estritamente relacionadas com o ciclo celular (cdk2/CiclinaE, cdkl/ CiclinaBl, cdk5/p25, cdk4/CiclinaDl).
Ensaio de inibição de actividade de cdk2/Ciclina E
Reacção de cinase: 10 microM de substrato de histona Hl biotinilada no laboratório (Sigma #H-5505), 30 microM de ATP (0,3 microCi P33gama-ATP) , 4 ng de complexo de GST-Ciclina E/Cdk2, inibidor num volume final de 30 microl de tampão (TRIS HC1 10 mM pH 7,5, MgCl2 10 mM, DTT 7, 5 mM + 0,2 mg/mL de BSA) foram adicionadas a cada poço de uma placa com 96 poços com fundo em forma de U. Após 60 minutos de incubação à temperatura ambiente, a reacção foi parada por 100 microl de PBS + 32 mM de EDTA + 0,1% Triton X-100 + 500 microM de ATP, contendo 1 mg de esferas SPA. Em seguida um volume de 110 microl é transferido para Optiplate.
Após 20 minutos de incubação para captura de substrato, adicionou-se 100 microl de CsCl 5 M para permitir a estratificação de esferas para o cimo da placa e deixou-se em repouso durante 4 horas antes de se contar a radioactividade no instrumento Top-Count. 32 ΡΕ1406899
Determinação de CI50: ver acima Ensaio de inibição de actividade de cdkl/Ciclina Bl
Reacção de cinase: 4 microM de substrato de histona Hl biotilinada no laboratório (Sigma # H-5505), 20 microM de ATP (0,2 microCiP33gama-ATP) , 3 ng de complexo de cdkl/Ciclina B, inibidor num volume final de 30 microl de tampão (TRIS HC1 10 mM pH 7,5, MgCl2 10 mM, DTT 7,5 mM + 0,2 mg/mL de BSA) foram adicionados a cada poço de uma placa com 96 poços com fundo em forma de U. Após 20 minutos de incubação à temperatura ambiente, a reacção foi parada por 100 microl de PBS + 32 mM de EDTA + 0,1 % Triton X-100 + 500 microM de ATP, contendo 1 mg de esferas SPA. Em seguida um volume de 110 microl é transferido para Optiplate.
Após 20 minutos de incubação para a captura de substrato, adicionou-se 100 microl de CsCl 5 M para permitir a estratificação das esferas par o cimo da Optiplate e deixou-se em repouso durante 4 horas antes de se realizar a contagem no instrumento Top-count.
Determinação de CI50: ver acima Ensaio de inibição da actividade de cdk5/p25 O ensaio de inibição da actividade de cdk5/p25 foi realizado de acordo com o protocolo seguinte. 33 ΡΕ1406899
Reacção de cinase: 10 microM de substrato de histona Hl biotinilada (Sigma# H-5505), 30 microM de ATP (0,3 microCi P33 gama-ATP), 15 ng de complexo de CDK5/p25, inibidor num volume final de 30 microl de tampão (TRIS HC1 10 mM pH 7,5, MgCl2 10 mM, DTT 7,5 mM + 0,2 mg/mL de BSA) foram adicionados a cada poço de uma placa com 96 poços com fundo em forma de U. Após 30 minutos de incubação à temperatura ambiente, a reacção foi parada por 100 microl de PBS + 32 nM de EDTA + 0,1% Triton X- qOO + 500 microM de ATP, contendo 1 mg de esferas SPA. Então um volume de 110 microl é transferido para Optiplate.
Após 2 0 minutos de incubação para captura de substrato, adicionou-se 100 microl de CsCl 5 M para permitir a estratificação das esferas para o cimo da placa e deixou-se repousar 4 horas antes de se contar a radio-actividade no instrumento Top-Count.
Determinação de CI50: ver acima Ensaio de inibição de actividade de cdk4/Ciclina Dl
Reacção de cinase: 0,4 uM microM de substrato GST-Rb de rato (769-921) (# sc-4112 de Santa Cruz), 10 microM de ATP (0,5 microCi P33gama-ATP) , 100 ng de baculovirus expressos GST-cdk4/GST-CiclinDl, concentrações adequadas de inibidor num volume final de 50 microl de tampão (TRIS HC1 10 mM pH 7,5, MgCl2 10 mM, 7,5 mM de DTT + 0,2 mg/mL de 34 ΡΕ1406899 BSA) foram adicionados a cada poço de uma placa com 96 poços com fundo em forma de U. Após 40 minutos de incubação a 37°C, a reacção foi parada por 20 microl de EDTA 120 mM.
Captura: 60 microl foram transferidos de cada poço para placa Multiscreen, para permitir a ligação do substrato ao filtro fosfocelulósico. As placas foram então lavadas 3 vezes com 150 microl/poço de PBS Ca++/Mg++ livre e filtradas por sistema de filtração Multiscreen.
Detecção: deixou-se os filtros secar a 37°C, em seguida adicionou-se 100 microl/poço de mistura de cintilação e fragmento Rb 33Pmarcado foi detectado por contagem de radioactividade no instrumento Top-Count.
Determinação de CI50: ver acima
De acordo com os ensaios de inibição acima, os compostos de fórmula (I) da invenção mostraram possuir uma notável capacidade de inibição de cdk.
Como exemplo, quando testado contra cdk2/ciclina A, o composto representativo da invenção (2S)—2—[4— (acetilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propa-namida mostrou uma capacidade de inibição, expressa como CI50 de 11 nM.
Surpreendentemente, a referida actividade de inibição foi marcadamente superior do que a de um composto 35 ΡΕ1406899 muito próximo da técnica anterior, utilizado para fins comparativos. Na realidade, quando testado contra cdk2/ci-clina A como anteriormente descrito, o composto N-(5-isopropil-1,3-tiazol-2il)-2-[4-(acetilamino)fenil]acetamida do WO 01/14353 (ver exemplo 4, nas páginas 32, 33 do mesmo), mostrou um valor de CI50 de 110 nM.
Outro composto representativo da invenção, nomeadamente N-(5-isopropil-l,3-tiazo2-il)-2-[4-(2-oxo-l-pirro-lidinil) fenil]acetamida mostrou, quando testado contra cdc2/ciclina A, uma actividade superior marcada semelhante.
Até agora, os novos compostos da invenção possuem inesperadamente uma actividade inibidora de cdk significativamente mais elevada do que a dos compostos mais próximos da técnica anterior do WOOl/14353 e são assim particularmente vantajosos em terapêutica contra doenças proliferativas associadas com um ciclo celular alterado dependendo da actividade de cinase.
Ao restringir a proliferação desregulada de células tumorais, os compostos de fórmula (I) são por isso úteis em terapêutica no tratamento de vários tumores tais como, por exemplo, carcinomas, e.g., carcinoma mamário, carcinoma da bexiga, carcinoma do cólon, tumores endome-triais ovarianos, sarcomas, e.g., sarcomas de tecidos moles e ósseos, e as doenças hematológicas tais como, e.g., leucemias. 36 ΡΕ1406899
Além disso, os compostos de fórmula (I) são também úteis no tratamento de outras doenças celulares proli-ferativas como psoriase, proliferação de células lisas associada com ateroesclerose e estenose e restenose pós-cirúrgica, e no tratamento de doença de Alzheimer.
Os compostos da presente invenção podem ser administrados como agentes únicos ou, alternativamente, em combinação com outros tratamentos anticancro como terapia de radiação ou regime de quimioterapia em combinação com agentes citostáticos ou citotóxicos, agentes do tipo antibiótico, agentes alquilantes, agentes antimetabolitos, agentes hormonais, agentes imunológicos, agentes tipo interferão, inibidores de ciclooxigenase (e.g., inibidores de COX-2), inibidores de metaloprotease de matriz, inibidores de telomerase, inibidores de tirosino cinase, agentes do receptor do factor anticrescimento, agentes anti-HER, agentes anti-EGFR, agentes anti-angiogenese (e.g., inibidores de angiogenese), inibidores de farnesil transferase, inibidores da via de transdução de sinal ras-raf, inibidores do ciclo celular, outros inibidores de cdk, agentes de ligação a tubulina, inibidores de topoisomerase I, inibidores de topoisomerase II e outros semelhantes.
Como exemplo, os compostos da invenção podem ser administrados em combinação com um ou mais agentes quimio-terapêuticos tais como, por exemplo, exemestano, formesta-no, anastrozole, letrozole, fadrozole, taxano e derivados como paclitaxel ou docetaxel, taxanos encapsulados, CPT-11, 37 ΡΕ1406899 derivados de camptotecina, glicosidos de antraciclina, e.g., doxurubicina, idarubicina, epirubicina, etoposido, navelbine, vinblastina, carboplatina, cisplatina, estra-mustina fosfato, celecoxib, tamoxifeno, raloxifeno, Sugen SU-5416, Sugen SU-6668, Herceptina, e outros semelhantes, opcionalmente com as suas formulações lipossómicas.
Se forem formulados como uma dose fixa, estes produtos de associação empregam os compostos desta invenção dentro da gama de dosagem descrita abaixo e o outro agente farmaceuticamente activo dentro da gama de dosagem aprovada .
Os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados sequencialmente com agentes anti-cancro conhecidos quando uma formulação de associação é inapropriada.
Os compostos de fórmula (I) da presente invenção, adequados para administração a um mamífero, e.g., a seres humanos, podem ser administrados pelas vias usuais e o nível de dosagem depende da idade, peso, patologias do doente e via de administração.
Por exemplo, uma dose adequada adoptada para administração oral de um composto de fórmula (I) pode estar na gama desde cerca de 10 até cerca de 500 mg por dose, desde 1 a 5 vezes por dia.
Os compostos da invenção podem ser administrados 38 ΡΕ1406899 numa variedade de formas de dosagem, e.g.f oralmente, em forma de comprimidos, cápsulas ou comprimidos revestidos com película, soluções ou suspensões líquidas; rectalmente na forma de supositórios; parentericamente, e.g., intramuscularmente ou através de injecção intravenosa e/ou intratecal e/ou intraespinal ou perfusão. A presente invenção inclui também composições farmacêuticas que compreendem um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável em associação com um excipiente farmaceuticamente aceitável, que pode ser um veículo ou um diluente.
As composições farmacêuticas que contêm os compostos da invenção são geralmente preparadas seguindo métodos convencionais e são administradas numa forma farmacêutica adequada.
Por exemplo, as formas orais sólidas podem conter, conjuntamente com o composto activo, diluentes, e.g., lactose, dextrose sacarose, sacarose, celulose, amido de milho ou amido de batata; lubrificantes, e.g., sílica, talco, ácido esteárico, magnésio ou estearato de cálcio, e/ou polietilenoglicóis, agentes aglutinantes, e.g. amidos, goma arábica, gelatina metilcelulose, carboximetilcelulose ou polivinil pirrolidona; agentes desintegrantes, e.g., amido, ácido algínico, alginatos ou glicolato de amido sódico; misturas efeverscentes, matéria corante; edulco-rantes; agentes molhantes como lecitina, polisorbatos, 39 ΡΕ1406899 laurilsulfatos; e, em geral, substâncias não tóxicas e farmacologicamente inactivas utilizadas em formulações farmacêuticas. Estas preparações farmacêuticas podem ser preparadas de forma conhecida, por exemplo, através de processos de mistura, granulação, aglomeração, revestimento com açúcar ou película.
As dispersões líquidas para administração oral podem ser, e.g., xaropes, emulsões e suspensões.
Como exemplo, os xaropes podem conter, como veículo, sacarose ou sacarose com glicerina e/ou manitol e sorbitol.
As suspensões e as emulsões podem conter, como exemplos de veículos, goma natural, ágar, alginato de sódio, pectina, metilcelulose, carboximetilcelulose ou álcool polivinílico. A suspensão ou soluções para injecções intramusculares podem conter, conjuntamente com o composto activo, um veículo farmaceuticamente aceitável, e.g., água estéril, azeite, oleato de etilo, glicóis, e.g., propileno-glicol e, se desejado, uma quantidade adequada de clori- drato de lidocaína.
As soluções para injecções intravenosas ou per-fusões podem conter, como veículo, água estéril ou preferencialmente podem ser na forma de soluções estéreis, 40 ΡΕ1406899 aquosas, isotónicas, de soro fisiológico ou podem conter propilenoglicol como veiculo.
Os supositórios podem conter, conjuntamente com o composto activo, um veiculo farmaceuticamente aceitável, e.g.f manteiga de cacau, polietilenoglicol, tensoactivo de éster de ácidos gordos de polioxietileno sorbitano ou lecitina.
Com o objectivo de melhor ilustrar a presente invenção, quem colocar qualquer limitação à mesma, dão-se agora os exemplos seguintes, dos quais os exemplos 20-27 dizem respeito a compostos reivindicados.
Exemplo 1
Preparação de 2-amino-5-isopropil-l,3-tiazole
Dissolveu-se 3-metilbutiraldeído (2 mL; 18,6 mmol) em 15 mL de 1,4-dioxano. Adicionou-se 40,4 mL (18,6 mmol) de uma solução de 2% v/v de bromo em 1,4-dioxano a 0°C. A mistura foi mantida à temperatura ambiente com agitação durante 2 horas, em seguida adicionou-se 2,83 g (37,2 mmol) de tioureia e 5 mL de etanol.
Após 6 horas à temperatura ambiente, a solução foi evaporada até à secura, o resíduo foi dissolvido em CH2CI2 e o produto extraído com ácido clorídrico 1 M; a camada aquosa foi tornada básica pela utilização de hidrato 41 ΡΕ1406899 de amónio a 30% e foi extraída novamente com CH2CI2. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e evaporada em vácuo. 0 resíduo foi cromatografado numa coluna em gel de sílica, eluindo com ciclo-hexano-acetato de etilo para dar 1,1 g (rendimento de 42%) do composto em epígrafe. 1H-NMR (DMSO-de) δ ppm: 6,6 (s, 2H, NH2) ; 6,58 (s, 1H, tiazole CH); 2,9 (m, 1H, CHMe2); 1,18 (s, 3H, MeCHMe); 1,17 (s, 3H, MeCHMe).
Exemplo 2 Ácido 2-(4-aminofenil)propanóico
Dissolveu-se 10 g (0,05 mol) de ácido 2 — (4 — nitrofenil) propanóico numa mistura de 5 mL de água e 100 mL de metanol e adicionou-se 0,65 g de Pd/C a 5%. A mistura foi submetida a hidrogenação a 60 psi durante 2 horas à temperatura ambiente. Após a separação do catalisador por filtração em celite, o metanol foi evaporado sob vácuo e o composto em epígrafe foi cristalizado a partir de água depois de arrefecimento (7 g,; 85% de rendimento). ESI ( + ) MS: m/z 166 (100, MH+) ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 7,08-6,71 (2d, 4H, CH-fenilo, J=7,l Hz), 3,76 (q, 1H, CH-Me, J=7,6 Hz), 1,53 (d, 3H, CH3, 7,6 Hz). ΡΕ1406899 42
Exemplo 3 Ácido (2S)-2-(4-aminofenil)propanóico e ácido (2R)-2- (4- aminofenil)propiónico A 4,34 g de ácido 2-(4-aminofenil)propanóico, adicionou-se 26 mL de água e 3,94 g de ácido L-( + )-tartárico. A mistura foi aquecida a 80°C com agitação até solução total. 0 aquecimento foi então parado e a solução arrefeceu espontaneamente. Após 24 horas, 3,8 g de tartarato levorotatório foram filtrados e secos. A solução que continha o tartarato dextrorotatório foi concentrada sob vácuo a 40°C para evaporar cerca de 10 mL de água. A solução foi então arrefecida a 30°C e adicionou-se 1,047 g de hidrato de sódio.
Recolheu-se ácido ( + )-(2S)-2-(4-aminofenil)propa-
O A nóico por filtração e secou-se para dar 1,36 g (aD =+73,0°; C=0,1% em metanol). Tratando o tartarato levorotatório com hidrato de sódio obteve-se ácido (-)-(2R)—2—(4-aminofenil)propanóico.
Exemplo 4 Ácido[4-(2-oxo-l-pirrolidinil)fenil]acético 8,8 g (0,058 mol) de ácido 4-aminofenilacético foram dissolvidos em 350 mL de N,N-dimetilformamida e adicionou-se 10 g (0,058 mol) de 6,6-dimetil-5,7-dioxaespiro(2,5)octano-4,8-diona e a mistura foi agitada a 43 ΡΕ1406899 temperatura de refluxo durante 8 horas. 0 solvente foi então evaporado sob vácuo e o produto em bruto foi purificado por cromatografia numa coluna em gel de sílica utilizando uma mistura de hexano/acetato de etilo 7/3 como eluente, dando assim 6,53 g (51% de rendimento) do composto em epígrafe. ESI (+) MS: m/z 220 (100, MH+); 1H-NMR (400 MHz, DMS0-d6) ppm: 7,19-7,68 (2d, 4H, CH-fenilo, J=8,7 Hz), 3,43 (s, 2H, CH2Ph), 3,85 (m, 2H, CH2N), 2,57 (m, 2H, CH2C0), 2,10 (m, 2H, CH2).
Trabalhando de uma forma análoga, pode preparar-se os compostos seguintes, começando a partir dos derivados apropriados de ácido carboxílico: Ácido 2-[4-(2-oxo-l-pirrolidinil)fenil]propanóico; ESI (+) MS: m/z 234 (100, MH+); 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 7,17-7,66 (2d, 4H, CH- fenilo, J=8,6 Hz), 3, 76 (q, 1H, CHMe, J=7,6 Hz), 1,53 (d 3H, CH3, J=7,6 Hz ) , 3, 84 (m, 2H, CH2N), 2,61 (m, 2H CH2C0), 2,15 (m, 2H , CH2) Ácido (2R)-2-[4-(2-oxo-l-pirrolidinil)fenil]propanóico ; Ácido (2S)—[4—(2-oxo-l-pirrolidinil)fenil]propanóico. ΡΕ1406899 44
Exemplo 5 N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-4-(2-oxo-l-pirrolidi-nil)fenil]acetamida 2,5 g (11,4 mmol) de ácido [ 4-(2-oxo-l-pirro-lidinil) fenil]acético foram dissolvidos em 150 mL de diclorometano e adicionou-se sucessivamente 1,54 g (11,4 mmol) de N-hidroxibenzotriazole e 2,18 g (11,4 mmol) de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida a 0°C. Após 30 minutos à mesma temperatura, 1,35 g (5,7 mmol) de 5-isopropil-2-amino-l,3-tiazole dissolvido em 40 mL de diclorometano foram adicionados gota a gota. Após 6 horas à temperatura ambiente a mistura foi lavada com uma solução de hidrogenocarbonato de sódio saturado. A camada orgânica foi separada, seca sobre sulfato de sódio e concentrada a pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia numa coluna em gel de sílica (hexano-acetato de etilo 7/3) para dar 1,17 g (60% de rendimento) do composto em epígrafe. ESI (+) MS: m/z 344 (100, MH+); 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 7,48-7,51 (m, 4H, CH- fenilo) , 3,68 (s, 2H, CH2Ph) , 7,51 (s, 1H, CH-tiazole) , 3,91 (m, 1H, CH-isopropilo) , 1,39 (d, 6H, CH3, J=7,l Hz) 3,83 (m, 2H, CH2N), 2,60 (m, 2H, CH2CO), 2,15 (m, 2H, CH2).
Trabalhando de uma forma análoga pode preparar-se 45 ΡΕ1406899 os compostos seguintes, começando a partir dos derivados de ácido carboxilico apropriados: N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(2-oxo-l-pirrolidinil)fenil]propanamida; (2R)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(2-oxo-l-pirrolidinil)fenil]propanamida; (2S)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(2-oxo-l-pirrolidinil)fenil]propanamida; N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(2-oxo-l-imidazolidinil)fenil]acetamida; N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(2-oxo-l-imidazolidinil)fenil]propanamida; (2R)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(2-oxo-l-imidazolidinil)fenil]propanamida; (2S)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(2-oxo-l-imidazolidinil)fenil]propanamida.
Exemplo 6 Ácido_(2S)-2-{4-[(terc-butoxicarbonil)amino]fenil}propa- nóico 12 g (73 mmol) de ácido (2S)-2-(4-aminofenil) 46 ΡΕ1406899 propanóico suspensos em 140 mL de 1,4-dioxano e 140 mL de água foram tratados com 7,6 g (73 mmol) de carbonato de sódio dissolvido em 70 mL de água. A solução resultante, arrefecida até 4°C, foi tratada com 17,2 g (79 mmol) de anidrido tercbutoxicarbonilico agitada de um dia para o outro permitindo a temperatura chegar até à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado, a fase aquosa foi lavada com 150 mL de acetato de etilo, diluída com 200 mL do mesmo solvente, tratada, com agitação, com 130 mL de hidrogenosulfato de potássio 1 M aquoso. A camada orgânica foi separada e a fase aquosa extraída com mais acetato de etilo.
Os extractos orgânicos combinados, lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secos sobre sulfato de sódio, foram evaporados e obteve-se 18,18 g (94% de rendimento) do composto em epígrafe após trituração com hexano e filtração. ESI (+) MS: m/z 266 (100, MH+); 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 7,47-7,52 (m, 4H, CH-fenilo) , 3,76 (q, 1H, CHMe, J=7,6 Hz), 1,53 (d, 3H, CH3, J=7,6), 1 51 (s, 9H, tertbutilo).
Trabalhando de uma forma análoga pode-se preparar os compostos seguintes, começando a partir dos derivados de ácido carboxílico apropriados: - 47 - ΡΕ1406899 Ácido (2R)-2-{4-[(terc-butoxicarbonil)amino]feniljpro-panóico; Ácido 2-{4-[(terc-butoxicarbonil)amino]fenilJpropanói- co; Ácido 4-[(terc-butoxicarbonil)amino]fenilacético; ESI (+) MS: m/z 252 (100, MH+); 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 7,45-7,51 (2d, 4H, CH-fenilo, J=8,8 Hz), 3,43 (s, 2H, CH2Ph),1 51 (s, 9H, tertbutilo).
Exemplo 7 (2S) -2-(4-aminofenil)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)pro-panamida 265 mg (1 mmol) de ácido (2S)-2-{4-[(terc-butoxicarbonil) amino] fenil }propanóico foram tratados a 4°C com 0,146 mL (2 mmol) de cloreto de tionilo. A mistura reac-cional foi agitada durante 2,5 horas e a temperatura foi gradualmente aumentada até à temperatura ambiente. A mistura foi evaporada até à secura, retomada com tetra-hidrofurano e totalmente evaporada. Este produto em bruto foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação. Foi dissolvido em 3 mL de tetra-hidrofurano seco e adicionado gota a gota a uma solução de 113 mg (0,8 mmol) de 5-isopropil-2-amino-l,3-tiazole e 0,14 ml (1 mmol) de 48 ΡΕ1406899
trietilamina em 5 mL de tetra-hidrofurano à temperatura ambiente. Após 3 horas o solvenete foi evaporado, o produto em bruto redissolvido em diclorometano e adicionou-se 1 mL de ácido trifluoroacético. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. A evaporação do solvente deixou um óleo que foi tratado com uma solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio e extraída várias vezes com diclorometano. Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de sódio e evaporados para dar 115 mg (50% de rendimento global) do composto em epígrafe.
Trabalhando de uma forma análoga podem-se preparar os compostos seguintes, começando a partir dos derivados de ácido carboxílico apropriados: (2R)—2—(4-aminofenil)-N-(5-isopropil-l, 3-tiazol-2-il) propanamida; 2-(4-aminofenil)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; (4-aminofenil)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)acetamida.
Exemplo 8 Ácido 2-(4-([(2-cloroetoxi)carbonil]amino}fenil)propnóico 1 g (6 mmol) de ácido 2-(4-aminofenil)propanóico 49 ΡΕ1406899 foi dissolvido em 30 mL de diclorometano. A mistura foi arrefecida até 0°C e adicionou-se 1,24 mL (12 mmol) de cloroformato de 2-cloroetilo. Após 30 minutos adicionou-se 2,27 g (12 mmol) de fosfatododeca-hidrato de sódio em porções e a mistura reaccional foi mantida com agitação durante 3 horas. Adicionou-se então ácido clorídrico 0,5 N até o pH ficar ácido e o produto foi extraido com diclorometano. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e evaporada para dar um óleo que deu, após cristalização de éter diisopropilico, 1,3 g (93% de rendimento) do composto em epígrafe. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 7,47-7,58 (2d, 4H, CH- fenilo, J=9,0 Hz), 3,75 (q, 1H, CH-Me, J=7,6 Hz), 4,31 (m, 2H, CH2C1), 3,62 (m, 2H, CH20), 1,53 (d, 3H, CH3, 7,6 Hz)
Trabalhando de uma forma análoga pode-se preparar os compostos seguintes, começando a partir dos derivados de ácido carboxílico apropriados: Ácido (2R)-2-(4-{[(2-cloroetoxi)carbonil]amino}fenil)-propanóico; Ácido (2S)—2—(4—{[(2-cloroetoxi)carbonil]amino}fenil)-propanóico; Ácido (4—{[(2-cloroetoxi)carbonil]amino}fenil)acético; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 7,44-7,60(2d, 4H, CH- 50 ΡΕ1406899 fenil, J=8.8 Hz), 3.43 (s, 2H, CH2Ph), 4.30 (m, 2H,CH2C1), 3.63 (m, 2H, CH20).
Exemplo 9 2-[4-(2-oxo-l,3-oxazolidin-3-il)fenil]propanóico 500 mg (1,85 mmol) de ácido 2-(4-{[(2-cloro-etoxi)carbonil]amino}fenil)propanóico foram dissolvidos em 10 mL de N, N-dimetilf ormamida e adicionou-se 0,55 mL (3,7 mmol) de 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno à temperatura ambiente. Após 2 horas com agitação a mistura foi vertida em 150 mL de água acidificada com ácido clorídrico 1 N e extraída com acetato de etilo. Os extractos orgânicos foram secos sobre sulfato de sódio e evaporados até à secura para dar 350 mg (80% de rendimento) do composto em epígrafe, cristalizado a partir de uma mistura de acetato de etilo-éter diisopropílico. ESI (+) MS: m/z 236 (100,MH+); 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 7,08-7,35 (2d, 4H, CH- fenilo, J=8,6 Hz), 3,76 (q, 1H, CH-Me, J=7,6 Hz), 3,80 (m, 2H, CH2N), 4,45 (m, 2H, CH20), 1,53 (d, 3H, CH3, 7,6 Hz)
Trabalhando de uma forma análoga pode preparar-se os compostos seguintes, começando a partir dos derivados de cloro adequados: 51 ΡΕ1406899 Ácido (2R)-2-[4-(2-oxo-l,3-oxazolidin-3-il)fenil]pro-panóico; Ácido (2S)-2-[4-(2-oxo-1,3-oxazolidin-3-il)fenil]pro-panóico; Ácido [4-(2-oxo-1,3-oxazolidin-3-il)fenil]acético; ESI (+) MS: m/z 222 (100, MH+); 1H-NMR (400 MHz, DMS0-d6) ppm: 7,10-7,38 (2d, 4H, CH- fenilo, J=8,7 Hz), 3,43 (s, 2H, CH2Ph), 3,79(m, 2H, CH2N), 4, 45 (m, 2H, CH20) .
Exemplo 10 N-(4-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(2-oxo-l,3-oxazolidin-3il)fenil]propanamida 460 mg (1,96 mmol) de ácido 2-[ 4-(2-oxo-l,3-oxazolidin-3-il)fenil]propanóico foram suspensos em 15 mL de diclorometano e 0,22 mL (2,5 mmol) de cloreto de oxalilo e adicionou-se uma gota de N,N-dimetilformamida a 0°C. Após 2 horas com agitação o solvente foi evaporado, o produto em bruto redissolvido com 15 mL de tetra-hidrofurano e vertido numa solução de 250 mg (1,764 mmol) de 5-isopropil-2-amino-1,3-tiazole e 2,2 mL (11,76 mmol) de N,N-diisopropil-etilamina em 11 mL do mesmo solvente a 0°C. 52 ΡΕ1406899 A temperatura reaccional foi gradualmente aumentada até à temperatura ambiente e após 5 horas o solvente foi evaporado sob vácuo, o produto em bruto foi redis- solvido em diclorometano e lavado com água. A camada orgânica foi finalmente seca sobre sulfato de sódio, evaporada e o resíduo foi cromatografado numa coluna em gel de sílica, dando 450 mg (71% global) do composto em epígrafe. ESI (+) MS: m/z 360 (100, MH+); 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 6,88 (s, 4H, CH- fenilo), 3,85 (q, \—1 CHMe, J=6, 8 Hz), 1,25 (d, 3H, CH3, J=6,8 Hz) 7,55 (S, 1H, CH-tiazol), 3,90 (m, 1H, CH isopropilo), 1,38 (d, 6H, CH3-isopropilo, J= 7,0 Hz), 3, 80 (m, 2H, CH2N), 4,40 (m, 2H, CH20).
Trabalhando de uma forma análoga pode preparar-se os compostos seguintes, começando a partir dos derivados de ácido carboxílico apropriados: N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(2-oxo-l,3-oxazolidin-3-il)fenil]acetamida; ESI (+) MS: m/z 346 (100, MH+); 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 7,58 (m, 4H, CH- fenilo) , 3,66 (s, 2H, CH2), 7,51 (s, 1H, CH-tiazol), 3,91 (m, 1H, CH-isopropilo) , 1,39 (d, 6H, CH3-isopropilo, J=7,l
Hz), 3,79 (m, 2H, CH2N), 4,45 (m, 2H, CH20). 53 ΡΕ1406899 (2R)-Ν-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(2-oxo-l, 3-oxazolidin-3-il)fenil]propanamida; (2S)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(2-oxo-l,3-oxazolidin-3-il)fenil]propanamida; N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(3-metil-2-oxo-l-imidazolidinil)fenil]acetamida; N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(3-metil-2-oxo-l-imidazolidinil)fenil]propanamida; (2R)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(3-meti1-2-oxo-l-imidazolidinil)fenil]propanamida; (2S)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-2-[4-(3-meti1-2-oxo-l-imidazolidinil)fenil]propanamida.
Exemplo 11 2-(4-aminofenil)propanoato de metilo 10 g (0,06 mol) de ácido 4-aminofenilpropanóico foram suspensos em 100 mL de metanol. A mistura reaccional foi arrefecida até 0°C e 10 mL de ácido sulfúrico a 96% foram adicionados gota a gota. A solução resultante foi mantida à temperatura ambiente de um dia para o outro e em seguida foi vertida em água gelada, basificada com hidrato de amónio a 30% e extraída várias vezes com diclorometano. 54 ΡΕ1406899 A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio para dar 10 g (93% de rendimento) do composto em epígrafe como um óleo. ESI (+) MS: m/z 180 (100, MH+); 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 6,50-6,94 (2d, 4H, CH-fenilo, J=8,6 Hz), 3,70 (q, 1H, CHMe, J=7,2 Hz), 1,48 (d, 3H, CH3, J=7,2 Hz), 3,50 (s, 3H, CH30).
Trabalhando numa forma análoga pode-se preparar os compostos seguintes, começando a partir de derivados de ácido carboxílico: (2R)-2-(4-aminofenil)propanoato de metilo; (2S)-2-(4-aminofenil)propanoato de metilo; 2-(4-aminofenil)acetato de metilo; ESI ( + ) MS: m/z 166 (100, MH+) ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 6,49-7,00 (2d, 4H, CH-fenilo, J=8,0 Hz), 3,55 (s, 2H, CH2Ph), 3,48 (s, 3H, CH30).
Exemplo 12 2-[4-({(2-cloroetil)amino]carbonil}amino)fenil]propanoato de metilo 700 mg (3,9 mmol) de 2-(4-aminofenil)propanoato 55 ΡΕ1406899 de metilo foram dissolvidos em 10 mL de diclorometano e adicionou-se 0,4 mL (4,68 mmol) de isocianato de 2-cloro-etilo à temperatura ambiente. Após 2 horas o precipitado que se formou foi recolhido por filtração e seco sob vácuo, dando 1 g (90% de rendimento) do composto em epígrafe. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 7,28-7,53 (2d, 4H, CH-
fenilo, J=9,0 Hz), 3,69 (q, \—1 CHMe, J=7,1 Hz) , 1,44 (d 3H, CH3, J=7,1 Hz ), 3,48 (s, 3H, CH30), 3,50 (m, 2H CH2C1), 3,31 (m, 2H, CH2N).
Trabalhando de uma forma análoga, pode-se preparar os compostos seguintes, começando a partir dos derivados de amino apropriados: (2R)—2—[4—({ [(2-cloroetil)amino]carbonil}amino)fenil] propanoato de metilo; (2S)—2—[4—({[(2-cloroetil)amino]carbonil}amino)fenil] propanoato de metilo; 2-[4-({[(2-cloroetil)amino]carbonil}amino)fenil]acetato de metilo.
Exemplo 13 2-[4-(2-oxo-l-imidazolidinil)fenil]propanoato de metilo 950 mg (3,3 mmol) de 2-[4-({(2-cloroetil)amino]- 56 ΡΕ1406899 carbonil}amino)fenil]propanoato de metilo foram dissolvidos em 20 mL de N, N-dimetilf ormamida e adicionou-se 2 mL de 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno. A mistura reaccional foi mantida à temperatura ambiente durante 6 horas. Adicionou-se 500 mL de uma mistura 1/1 de hexano/acetato de etilo e a fase orgânica foi lavada com ácido clorídrico 1 N, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio e evaporada até à secura, dando 760 mg (92% de rendimento) do composto em epígrafe. ESI (+) MS: m/z 249 (100, MH+); 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 7,19-6,82 (2d, 4H, CH- fenilo, J=8,6 Hz), 3,69 (q, 1H, CHMe, J=7,2 Hz), 1,48 (d, 3H, CH3, J=7,2 Hz), 3,50 (s, 3H, CH30), 3,85 (m, 2H, CH2N), 3, 48 (m, 2H, CH2NH) .
Trabalhando de uma forma análoga pode preparar-se os compostos seguintes, começando a partir dos derivados de cloro apropriados: (2R)-2-[4-(2-oxo-l-imidazolidinil)fenil]propanoato de metilo; (2S)-2-[4-(2-oxo-l-imidazolidinil)fenil]propanoato de metilo; 2-[4-(2-oxo-l-imidazolidinil)fenil]acetato de metilo. 57 ΡΕ1406899
Exemplo 14 Ácido 2-[4-(2-oxo-l-imidazolidinil)fenil]propanóico 850 mg (3,42 mmol) de 2-[4-(2-oxo-l-imidazoli-dinil)fenil]propanoato de metilo foram dissolvidos em 30 mL de metanol e adicionou-se 10 mL de uma solução saturada de carbonato de sódio. Após uma noite à temperatura ambiente o metanol foi evaporado e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo, acidificada com ácido clorídrico 1 N e extraída novamente com diclorometano. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e evaporada para dar 400 mg (50% de rendimento) do composto em epígrafe. ESI (+) MS: m/z 235 (100, MH+); 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 7,03-7,33 (2d, 4H, CH-
fenilo, J=8,6 Hz ), (q, \—1 CHMe, J=7,6 Hz) , 1,53 (d 3H, CH3, J=7,6 Hz), 3,84 (m, 2H, CH2N) , 3,48 (m, 2H CH2NH).
Trabalhando de uma forma análoga pode-se preparar os compostos seguintes, começando a partir dos derivados de éster adequados. Ácido (2R)—2—[4—(2-oxo-l-imidazolidinil)fenil]propa nóico ; Ácido (2S)—2—[4—(2-oxo-l-imidazolidinil)fenil]propa nóico; 58 ΡΕ1406899 Ácido 2-[4-(2-oxo-l-imidazolidinil)fenil]acético; Ácido (2R)—2—[4—(3-meti1-2-oxo-1-imidazolidinil)fenil ] propanóico; Ácido (2S)—2—[4—(3-meti1-2-oxo-1-imidazolidinil)fenil ] propanóico; Ácido 2-[4-(3-meti1-2-oxo-1-imidazolidinil)fenil]propanóico ; ESI (+) MS: m/z 249 (100, MH+); 1H-NMR (400 MHz, DMS0-d6) ppm: 7,14-7,35 (2d, 4H, CH-fenilo, J=8,5 Hz), 3,76 (q, 1H, CHMe, J=7,6 Hz), 1,52 (d, 3H, CH3, J=7, 6 Hz), 3,20 (m, 2H, CH2NMe) , 3,70 (m, 2H, CH2NPh), 2,75 (s, 3H, CH3N); Ácido 2-[4-(3-meti1-2-oxo-1-imidazolidinil)fenil]acético .
Exemplo 15 2-[4-(3-metil-2-oxo-l-imidazolidinil)fenil]propanoato_de metilo 248 mg (1 mmol) de 2-[4-(2-oxo-l-imidazolidinil)-fenil]propanoato de metilo em N,N-dimetilformamida sob 59 ΡΕ1406899 atmosfera de árgon, foram tratados com 120 mg (3 mmol) de hidreto de sódio a 60%. Após 20 minutos adicionou-se 0,068 mL (1,1 mmol) de iodeto de metilo. Após 2 horas a reacção foi vertida em água gelada, diluída com 10 mL de hexano-acetato de etilo 1/1 e lavada duas vezes com ácido clorídrico 2 N. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, evaporada, purificada por cromatografia (hexano/acetato de etilo 6/4) para dar 105 mg (40% de rendimento) do composto em epígrafe. ESI ( + ) MS: m/z 263 (100, MH+) ; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) ppm: 6,93-7,19 (2d, 4H, CH- fenilo, J=8,4 Hz), 3,69 (q, 1H, CHMe, J=7,2 Hz), 1,48 (d, 3H, CH3, J=7, 2 Hz), 3,35 (m, 2H, CH2NMe) , 3,70 (m, 2H, CH2NPh), 2,74 (s, 3H, CH3N), 3,44 (s, 3H, CH30).
Trabalhando de forma análoga, pode-se preparar os compostos seguintes, começando a partir dos derivados de éster apropriados: (2R)-2-[4-(3-metil-2-oxo-l-imidazolidinil)fenil]propa-noato de metilo; (2S)—2—[4—(3-metil-2-oxo-l-imidazolidinil)fenil]pro-panoato de metilo; 2-[4-(3-meti1-2-oxo-1-imidazolidinil)fenil]acetato de metilo. 60 ΡΕ1406899
Exemplo 16 (2S)-2-{4-[(3S)-3-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil}fenil-N-(5-isopropil-1,3-tiazol-2-il)propanamida 158 mg (1 mmol) de [(4S)-2,2-dimetil-5-oxo-l,3-dioxolan-4-il]acetaldeído e 290 mg (1 mmol) de (2S)—2—(4— aminofenil)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida foram dissolvidos em 10 mL de trifluoroetano, tratados com cianoboro-hidreto de (Poliestirilmetil)trimetilamónio (No-vabiochem, carga: 3,0-4,5 mmol/g) e agitados de um dia para o outro à temperatura ambiente. Sob estas condições, a amina secundária derivada de aminação redutiva produziu espontaneamente o ilactam. A resina foi separada por filtração e lavada com metanol. A evaporação do filtrado seguida por cromatografia "flash" do produto em bruto deu 269 mg (72% de rendimento) do composto em epígrafe.
Trabalhando de uma forma análoga pode preparar-se os compostos seguintes, começando a partir dos derivados amino correspondentes e o (2,2-dimetil-5-oxo-l,3-dioxolan-4-il) acetaldeído apropriado: 2-[4-(3-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil)fenil]-N-(5-isopropil-1,3-tiazol-2-il)acetamida; 2-{4-[(3S)-3-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil]fenil}-N-(5-isopropil-1,3-tiazol-2-il)acetamida; 61 ΡΕ1406899 2—{4—[(3R)-3-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil]fenil}-N-(5-isopropil-1,3-tiazol-2-il)acetamida; 2-[4-(3-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil)fenil]-N-(5-isopropil-1,3-tiazol-2-il)propanamida; 2-{4-[(3S)-3-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil]fenil}-N-(5-isopropil-1,3-tiazol-2-il)propanamida; 2-{4-[(3R)-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil]fenil}-N-(5-isopropil-1,3-tiazol-2-il)propanamida; (2R)— 2 —{4 — [ (3S)-3-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil]fenil}-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; (2S)-2-{4-[(3 S)-3-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil]fenil}-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; (2R)-2-{4-[(3R)-3-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil]fenil}-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; (2 S)— 2 —{4 —[(3R)-3-hidroxi-2-oxo-l-pirrolidinil]fenil}-N- (5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida.
Exemplo 17 4-[(IS)-2-cloro-l-metil-2-oxoetil]fenilcarbamato de terc-butilo Ácido (2S)—2—{4—[(terc-butoxicarbonil)amino]fe 62 ΡΕ1406899 nil}propanóico (4,2 g, 15,85 mmol) foi dissolvido em tetra-hidrofurano anidro (48 mL) , adicionou-se uma gota de N,N-dimetilformamida e adicionou-se gota a gota cloreto de oxalilo (1,49 mL, 17,43 mmol) a +4°C, sob uma atmosfera de árgon. A mistura reaccional foi agitada durante 2 horas e a temperatura reaccional foi gradualmente aumentada até à temperatura ambiente. A mistura foi evaporada até à secura; o sólido esbranquiçado foi retomado com ciclo-hexano, filtrado e bem lavado com ciclo-hexano e seco sob vácuo. 0 cloreto de acilo foi obtido em 84% de rendimento e utilizado sem mais purificação no passo seguinte.
Trabalhando de uma forma análoga pode-se preparar os compostos seguintes começando a partir do derivado de aminoácido correspondente: 4-[(IR)-2-cloro-l-metil-2-oxoetil]fenilcarbamato de terc-butilo; 4-(2-cloro-l-metil-2-oxoetil)fenilcarbamato de terc-butilo; 4-(2-cloro-2-oxoetil)fenilcarbamato de terc-butilo.
Exemplo 18 4-{(lS)-2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-l-metil-2-oxoetil}fenilcarbamato de terc-butilo A 2-amino-5-isopropil-l,3-tiazole (1,63 g, 11,48 63 ΡΕ1406899 mmol), dissolvido em tetra-hidrofurano anidro (50 mL) , adicionou-se dietilaminometil-poliestireno (Fluka, carga: 3,2 mmol g 1, 3,98 g) . A mistura reaccional foi agitada suavemente e tratada gota a gota, a +4°C, sob atmosfera de árgon com 4- [ (IS)-2-cloro-l-metil-2-oxoetil]fenilcarbamato de terc-butilo (3,61 g, 12,756 mmol) dissolvido em tetra-hidrofurano (40 mL).
Após 1 hora a +4 C seguida por mais 2 horas à temperatura ambiente, adicionou-se tris-(aminoetil)-amina poliestireno (Novabiochem, carga: 3,2 mmol g_1, 2,3 g) para sequestrar qualquer cloreto de acilo não reagido conjuntamente com o seu ácido correspondente. Após agitação durante 1 hora as resinas foram filtradas e lavadas várias vezes com diclorometano e metanol. A evaporação dos voláteis deixou um sólido amarelo amorfo que foi submetido ao passo seguinte sem mais purificação. ESI ( + ) MS: m/z 390 (100, MH+) ; XH NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm : 11,98 (s, 1H), 9,24 (s, 1H), 7,35 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 7,2 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 7,10 (s, 1H), 3,85 (q, 1H, J = 7,0 Hz), 3,1 (m, 1H, J = 6,8 Hz), 1,44 (s, 9H), 1,36, (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,22 (d, 6H, J = 6,8 Hz).
Trabalhando de uma forma análoga pode-se preparar os compostos seguintes começando a partir do derivado de cloreto de acilo correspondente: — 64 — ΡΕ1406899 4-{(IR)-2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2- oxoetil}fenilcarbamato de terc-butilo; 4-{2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-meti1-2-oxoetil}fenilcarbamato de terc-butilo; 4-{2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-2-oxoetil} fenilcarbamato de terc-butilo; p.f. 179-180°C; ΤΗ NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm : 12,1 (s, 1H), 9,22 (s, 1H), 7,35 (d, 2H), 7,19 (s, 1H), 7,15 (d, 2H), 3,6 (s, 2H) , 1, 43 (s, 9H) , 1, 11 (d, 6H) .
Exemplo 19 (2S)-2-(4-Aminofenil)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)pro-panamida 4-{(IS)—2—[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2-oxoetil}fenilcarbamato de terc-butilo em bruto foi tratado com um mistura 8:2 de diclorometano e ácido tri-fluoroacético (130 mL) , à temperatura ambiente com agitação. Após 2,5 horas os voláteis evaporaram-se o produto em bruto foi dissolvido numa quantidade mínima de metanol (15 mL) e adicionados gota a gota a uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (200 mL) com agitação. Precipitou-se um sólido branco que foi filtrado e lavado várias vezes com água. Após secagem a 40°C, sob vácuo, obteve-se2,96 g 65 ΡΕ1406899 de um sólido cristalino esbranquiçado (TLC: diclorome-tano/metanol 95:5) em 89% de rendimento (dois passos). ES I ( + ) MS: m/z 290 (100, MH + ); NMR ( 400 MHz , DMSO-d6) : δ 11,86 (s, 1H) f 7, 10 (s, 1H) , 6, 97 (d , 2H, J = 2,0 Hz) r 6, 47 (d, 2H, J = 2, 0 Hz) , 4, 92 (s , 2H) , 3,85 (q , 1H, J = 7,0 Hz), 3,1 (m, 1H, r J = = 6,8 Hz) , 1, 31 (d, 3H, 7,0 Hz), 1,22 (d. Oh ix > <q II > co hz; );
Calculado para Ci5H19N3OS : C, 62,25; H, 6,62; N, 14,52; S, 11,08. Encontrado: C, 57,93; H, 6,16; N, 13,07; S, 9,53.
Trabalhando de uma forma análoga pode-se preparar os compostos seguintes a partir do carbamato de terc-butilo correspondente: (2R)-2-(4-aminofenil)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 2-(4-aminofenil)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 2-(4-aminofenil)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)aceta- mida; p.f. 165-166°C; NMR (400 MHz, DMSO-d6) : 5 ppm: 11,98 (s, 1H) , 7,13 66 ΡΕ1406899 (s, 1H), 7-6,6 (m, 4H), 5,9 (s, 2H), 3,55 (s, 2H), 3,08 (m, 1H), 1,12 (d, 6H).
Exemplo 20 (2S)-2-[4-(Acetilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida (2S)—2—(4-aminofenil)-N-(5-isopropil-l, 3-tiazol-2-il)propanamida (1,6 g, 5,54 mmol) foi dissolvido em piridina (18 mL) e tratado a +4 C, sob uma atmosfera de árgon, com anidrido acético gota a gota (627 pL, 6,648 mmol) . Após 1,5 horas a temperatura foi aumentada até à temperatura ambiente e após mais 1,5 horas a mistura reaccional foi adicionada lentamente a 300 mL de água gelada com agitação. Ocorreu a precipitação de um sólido pegajoso. A extracção da fase aquosa com diclorometano (300 mL, 100 mL x 2) seguida pela lavagem da fase orgânica primeiro com HC1 2 N (200 mL) , em seguida com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (100 mL) e finalmente com uma pequena quantidade de solução aquosa saturada de cloreto de sódio até ficar neutra, secagem sobre sulfato de sódio e evaporação dos voláteis deu 1,62 g do produto em bruto. Mais purificação por cromatografia em coluna (diclorometano, metanol 95:5) deu 1,58 g do composto puro como um sólido amorfo esbranquiçado (rendimento de 86%) . ESI (+) MS: m/z 332 (100, MH+); 67 ΡΕ1406899 ΤΗ NMR (400 ΜΗζ, DMSO-d6): δ 12, 00 (s, 1Η) , 9,95 (s,
1H) , 7, 48 (d, 2H, J = 8,2 Hz) , 7,24 (d, 2H, J = 8,2 Hz) 1 , 7, 10 (s, 1H) , 3,87 (q, 1H, 7,1 Hz) , 3,05 (m, 1H, J = 6, . 8 Hz) , 1, 99 (s, 3H) , 1,37 (d, 3H, J = 7, r 1 Hz ), 1 ,21 (d, 6H, J = 6,8 Hz);
Análise calculada C17H21N3O2S: C, 61,61; Η, 6.39; N, 12,68; S, 9,67. Encontrada: C, 61,11; H, 6,45; N, 12,48; S, 9,31;
Excesso enantiomérico: 99,5 % (HPLC quiral).
Trabalhando de uma forma análoga pode-se preparar os compostos seguintes começando a partir dos derivados amino correspondentes: (2R)-2-[4-(acetilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 2-[4-(acetilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida.
Exemplo 21 (2S)-2-{4-[(Aminocarbonil)amino]fenil}-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida (2S)-2-(4-aminofenil)-N-(5-isopropil-l, 3-tiazol- 68 ΡΕ1406899 2-il) propanamida (289 mg, 1 mmol) foi dissolvida em acetonitrilo, tratada com ácido trifluoroacético (153, uL, 2 mmol) e com cianato de potássio (162 mg, 2 mmol), à temperatura ambiente, agitada até ficar homogénea e deixada em repouso de um dia para o outro. 0 solvente foi evaporado e o resíduo foi retomado com acetato de etilo. A fase orgânica foi lavada primeiro com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e em seguida com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio e evaporada. 0 óleo amarelo resultante foi purificado por cromatografia de coluna (diclorometano, metanol 96:4) para dar 205 mg do composto em epígrafe como um sólido branco (rendimento: 62%). ESI ( + ) MS: m/z 333 (100, MH+) ; NMR (40 0 MHz, DMSO-d e) ' δ 11, Γ 9 5 (s, 1H), 8,6 (s, K 1—1 7, 30 (d, 2H, J = 8,7 Hz ) , 7, 17 (d, 2H, J = 8, 7 Hz) , 7, 10 (S , 1H), 5,75 (s, 2H) , 3 , 83 (q, 1H, J = 6,9 Hz), 3,07 (m, 1H, J = 6 1—1 N 00 36 (d, 3H, j = 6,9 Hz) , 1,22 (d, 6H, J = 6,8 Hz);
Análise calculada para C16H20N4O2S: C, 57,81; H, 6,06; N, 16,85; S, 9,65. Encontrada: C, 56,73; H, 6,06; N, 16,28; S, 7,54.
Trabalhando de uma forma análoga pode preparar-se os compostos seguintes começando a partir do derivado amino correspondente: 69 ΡΕ1406899 (2R)—2—{4—[(aminocarbonil)amino]fenil}-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 2-{4-[(aminocarbonil)amino]fenil}-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 2-{4-[(aminocarbonil)amino]fenil}-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)acetamida.
Exemplo 22 Éster terc-butílico do ácido ({4-[(S)-1-(5-isopropil-tiazol-2-ilcarbamoil)-etil]-fenilcarbamoíl}-metil)-carbâmico (2S)—2—(4-aminofenil)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida (289 mg, 1 mmol) e Boc-gly-OH (210 mg, 1,2 mmol) dissolvidos em diclorometano (10 mL) foram tratados com N-ciclo-hexilcarbodiimida, N'-metil poliestireno (Novabiochem, carga: 1,93 mmol g_1, 1,04 g) . A mistura foi agitada suavemente durante uma hora e em seguida mantida em repouso a +4°C de um dia para o outro. A resina foi filtrada e bem lavada com diclorometano. A evaporação do solvente deixou um óleo amarelo (pureza HPLC: 93%, medida a 254 nm) , que foi submetido à transformação seguinte sem mais purificação. ESI ( + ) MS: m/z 447 (100, MH+) ; 70 MHz, DMSO-de) : 12 O O (s, 1H) , 9, 95 (s, 8,5 Hz) , 7, 26 (d, 2H, J = 8,5) , 7, 11 (s, J = = 6,1 Hz) , 3,0 ' (q, . 1H , J = 7, 1 Hz) , 6,1 Hz) , 3,06 (m, 1H, J = = 6,8 Hz) r 1,35 3H, J = 7, 1 H 2 '-) , δ 1, 21 (d, 6H , J 6,8 ΡΕ1406899 XH NMR (400 1H) , 7, 49 (d, 2H, k·. B i—1 6,96 (t, 1H 3,26 (d, 2H, J = (s, 9H) , 1,37 (d, Hz) .
Trabalhando de uma forma análoga pode-se preparar os compostos seguintes começando a partir do derivado amino correspondente: Éster terc-butilico do ácido ({4-[(R)-1-(5-isopropil-tiazol-2-ilcarbamoil)-etil]-fenilcarbamoil}-metil)-carbâmico; Éster terc-butilico do ácido ({4-[1-(5-isopropil-tiazol-2-ilcarbamoil)-etil]-fenilcarbamoil}-metil)-carbâmico; Éster terc-butílico do ácido ({4-[(5-isopropil-tiazol-2-ilcarbamoil)-metil]-fenilcarbamoil}-metil)-carbâmico.
Exemplo 23 (2S)-2-[4-(Glicilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida Éster terc-butilico do ácido ({4-[(S)-1-(5-iso 71 ΡΕ1406899 propil-tiazol-2-ilcarbamoil)-etil]-fenilcarbamoí1}-metil) -carbâmico foi tratado com uma mistura 9:1 de diclorometano e ácido trifluoroacético (10 mL) à temperatura ambiente, agitado durante 1,5 horas e em seguida evaporado. O óleo restante foi dissolvido na quantidade mínima de etanol absoluto (~5 mL) e adicionado gota a gota a uma solução aquosa de bicarbonato de sódio saturado (50 mL), com agitação. A fase aquosa foi extraída com diclorometano, lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio e evaporada. A purificação do produto em bruto por cromatografia em coluna (diclorometano, metanol 9.1 + TEA a 1%) deu 217 mg do composto puro (rendimento global: 63%). ESI (+) MS: m/z 347 (100, MH+); NMR (400 MHz, DMSO-d6) : δ 7,54 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 7,26 (d, 2H, J= 8,7 Hz), 7,11 (s, 1H) , 1,21 (d, 6H, J = 6,8 Hz), 3,88 (q, 1H, J= 7,1 Hz), 3,05 (m, 1H, J = 6,8 Hz), 1,37 (d, 3H, J = 7,1 Hz) ;
Análise calculada para C17H22N4O2S: C, 58, 94; H, 6,40; N, 16,17; S, 9,25. Encontrada: C, 56,88; H, 6,56; N, 15,07; S, 7,69;
Trabalhando de uma forma análoga pode-se preparar os compostos seguintes começando a partir do éster terc-butílico do ácido carbâmico correspondente: 72 ΡΕ1406899 (2R)-2-[4-(glicilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 2-[4-(glicilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l, 3-tiazol-2-il)propanamida; N- (4-{2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-2-oxoetil}fenil)glicinamida.
Exemplo 24 N—(4—{(lS)-2-[(5-Isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2-oxoetil}fenil)nicotinamida
Tratou-se cloridrato de cloreto de nicotinoílo (762 mg, 4,15 mmol) em piridina (30 mL) , a +4°C, sob uma atmosfera inerte, com agitação, com (2S)-2-(4-aminofenil)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida (800 mg, 2,77 mmol) dissolvida em piridina (19 mL) . Após 2 horas a reacção foi deixada chegar até à temperatura ambiente e deixada em repouso de um dia para o outro. No dia seguinte, a reacção foi completada pela adição de mais cloridrato de cloreto de nicotinoílo (254 mg) . A mistura reaccional foi adicionada gota a gota a gelo esmagado e água (600 mL), com agitação mas o precipitado que se formou era bastante pegajoso. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (300 mL, 100 mL x 2). Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de sódio e os voláteis foram 73 ΡΕ1406899 evaporados deixando 1,56 g de óleo amarelo. Mais purificação por cromatografia (diclorometano, metanol 95:5) deu 967 mg do composto em epígrafe (rendimento: 89%). ESI ( + ) MS: m/z 395 (100, MH+) ; ΧΗ NMR (400 MHz f DMSO -d6) : δ 12 , 05 (S, 1H) , 10, 40 (s, 1H) , 9, 04' -9, 09 (m f 1H ) , 8 , 70-8 , 76 i (m, 1H) , 8,22 -8, 28 (m, 1H) , 7, 69 (d , 2H, J = 8,5 Hz) , 7,50- 7,57 (m, 1H) , 7, 33 (d, 2H, J = = 8 ,5 Hz) , 7, 12 (s, 1H) , 3,92 : (q, 1H, , J = 7, 1 Hz) , 3,07 (m f 1H, J = 6, 8 Hz) , 1,40 (d, 3H, J = 7, 1 Hz) r 1,22 (d, 6H, J = 6,8 Hz );
Análise calculada para C21H22N4O2S: C, 63, 94; H, 5,62; N, 14,20; S, 8,13. Encontrada: C, 63,49; H, 5,65; N, 14,10; S, 8,10.
Excesso enantiomérico: 99,5 % (HPLC quiral).
Trabalhando de uma forma análoga pode-se preparar os compostos seguintes a partir do derivado amino correspondente : N-{(IR)-2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino] -1-metil-2-oxoetil}fenil)nicotinamida; N- (4-{2 - [ (5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2- oxoetil}fenil)nicotinamida. 74 ΡΕ1406899
Exemplo 25 N-(4-{(lS)-2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2-oxoetil}fenil)piridino-2-carboxamida (2S)—2—(4-aminofenil)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida (289 mg, 1 mmol) foi dissolvida em diclo-rometano (10 mL) e tratada primeiro com ácido picolínico (148 mg, 1,2 mmol) dissolvido na quantidade mínima de DMF em seguida com ciclo-hexilcarbodiimida-N'-metil poliestireno (Novabiochem, carga: 1,93 mmol g-1, 1,04 g) e agitado num agitador orbital durante o fim de semana. Uma vez que o derivado amina de partida ainda estava presente, adicionou-se mais ácido picolínico em porções (148 mg x 3) conjuntamente com mais N-ciclo-hexilcarbodiimida-N'-metil-poliestireno (1 g). No dia seguinte os solventes estavam evaporados e o produto em bruto foi purificado por cromatografia (diclorometano, acetato de etilo 8:2) dando 231 mg do composto puro como um sólido amorfo branco (rendimento: 59%). ESI (+) MS: m/z 395 (100, MH+); NMR (400 MHz, DMSO-de) : δ 12,04 (s, 1H), 10,57 (s, 1H) , 8 ,70 (m, 1H) , 8,12 \—1 8,04 (m, 1H), Ί3 o 00 r- 2H, J = 8, 5 Hz) , 7,66 (m, 1H), 7,33 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,11 (s, 1H ), 3,91 (q, 1H, J = 7, 1 Hz) , 3,07 (m, 1H, J = 6,8 Hz) , i ,41 (d, 3H, J = 7 ,1 Hz), 1 ,22 (d, 6H, J = 6,8 Hz) f 75 ΡΕ1406899
Análise calculada para C21H22N4O2S: C, 63, 94; H, 5,62; N, 14,20; S, 8,13. Encontrada: C, 61,91; H, 5,71; N, 13,92; S, 7,31.
Trabalhando de uma forma análoga, pode-se preparar os compostos seguintes começando a partir dos derivados amino correspondentes: N-(4—{(IR)-2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2-oxoetil}fenil)piridino-2-carboxamida; N-(4-{2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2-oxoetil}fenil)piridino-2-carboxamida; N-{2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-2-oxoetil}-fenil)piridino-2-carboxamida.
Exemplo 26 N—(4-{(IS)-2-[(5-Isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2-oxoetil}feninil)isonicotinamida (2S)—2—(4-aminofenil)-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida (289 mg, 1 mmol) foi dissolvida em diclo-rometano (10 mL) e tratada primeiro com ácido isonicotinico (148 mg, 1,2 mmol) dissolvido na quantidade minima de DMF em seguida com ciclo-hexilcarbodiimida-N'-metil-poliesti-reno (Novabiochem, carga: 1.93 mmol g”1, 1,04 g) e agitada num agitador orbital durante o fim de semana. Uma vez que o 76 ΡΕ1406899 derivado amino de partida (2S)-2-(4-aminofenil)-N-(5-isopropil-1,3-tiazol-2-il)propanamida ainda estava presente, adicionou-se mais ácido isonicotinico em porções (148 mg x 3) conjuntamente com mais N-ciclo-hexilcarbodiimida-Ν'-metil poliestireno (1 g, 0.5 g) . Após dois dias os solventes foram evaporados e o produto em bruto foi purificado por cromatografia (diclorometano, metanol 9:1) dando 231 mg do composto puro como um sólido amorfo esbranquiçado (rendimento: 59%). ESI ( + ) MS: m/z 395 (100, MH+) ; 1H NMR (400 MHz, DMSO-de) : δ 12 04 (s, 1H) , 10,45 (s, 1H), 8,75 (d, 2H, J = 6,1 Hz), 7,83 (d, 2H, J= 6,1 Hz), 7,68 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,35 (d, 2H, J = 8,5), 7,12 (s, 1 H), 3,91 (q, 1H, J= 7,1 Hz), 3,07 (m, 1H, J = 6,8 Hz), 1,41 (d, 3H, J = 7,1 Hz), 1,23 (d, 6H, J = 6,8 Hz);
Análise calculada para C21H22N4O2S: C, 63, 94; H, 5,62; N, 14,20; S, 8,13. Encontrada: C, 62,74; H, 5,75; N, 13,94; S, 8,13.
Excesso enantiomérico: 99,5 %(HPLC quiral).
Trabalhando de uma forma análoga pode-se preparar os compostos seguintes começando a partir dos derivados amino correspondentes: N-{(IR)-2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2-oxoetil}fenil)isonicotinamida; 77 ΡΕ1406899 Ν- (4-{2 - [ (5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2- oxoetil}fenil)isonicotinamida; N-(4-{2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-2-oxoetil}fenil)isonicotinamida.
Exemplo 27
Acetato de 2-[(4-{(IS)-2-[(5-Isopropil-l,3-tiazol-2-il) amino]-l-metil-2-oxoetil}fenil)amino]-2-oxoetilo
Dissolveu-se (2S)—2—(4-aminofenil)-N-(5-isopropil-l ,3-tiazol-2-il)propanamida (3,6 g, 12,46 mmol) em di-clorometano (60 mL) , tratado primeiro com N,N-diisopro-piletilamina (2,6 mL, 14,95 mmol) e em seguida, a +4oC, sob uma atmosfera de árgon, com cloreto de acetoxiacetilo (1,61 mL, 14,95 mmol) em diclorometano (40 mL) . Após uma hora a reacção foi diluída com diclorometano, lavada com HC1 1 N, em seguida com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e finalmente com uma pequena quantidade de solução aquosa saturada de cloreto de sódio até ficar neutra. A secagem sobre sulfato de sódio e evaporação dos voláteis deu em rendimento quantitativo e em forma pura o composto desejado como um sólido amorfo amarelo. ESI (+) MS: m/z 390 (100, MH+); NMR (400 MHz, DMS0-d6) : δ 10,01 (s, 1H) , 7,49 (d 78 ΡΕ1406899 2H, J = 8,8 Hz), 7, 28 (d, 2H, J= 8 ,8 Hz), 7, 11 (s, 1H) 4,60 ( (s, 2H), 3, 88 (q, 1H, J = = 6, 9 Hz), 3, 06 (m, 1H, J ^ 6,8 Hz ) , 2,09 (s, 3H) , 1,38 (d, 3H, J = 6,9 Η; 0 < 1, 22 (d 6Η, J = 6,8 Hz);
Trabalhando de uma forma análoga pode-se preparar os compostos seguintes começando a partir do derivado amino correspondente:
Acetato de 2-{(IR)-2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-amino]-1-metil-2-oxoetil}fenil)amino]-2-oxoetilo;
Acetato de 2-[(4—{2—[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)-amino]-1-meti1-2-oxoetil}fenil)amino]-2-oxoetilo;
Acetato de 2-[(4-{2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino] -2-oxoetil}fenil)amino]-2-oxoetilo.
Exemplo 28 (2S)-2-[4-(Glicoloílamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida
Acetato de 2-[ (4-{(IS)-2-[(5-Isopropil-l,3-tia-zol-2-il)amino]-1-metil-oxoetil}fenil)amino]-2-oxoetilo (5 g, 12,85 mmol) em tetra-hidrofurano (80 mL) foi tratado mono-hidrato de hidróxido de litio (1,08 g, 25,27 mmol) em água (80 mL) à temperatura ambiente. Após uma hora a reacção foi parcialmente evaporada, a fase aquosa foi 79 ΡΕ1406899 neutralizada com hidrogenosulfato de potássio 1 M aquoso e extraída com acetato de etilo. A fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio e evaporada. A purificação do produto em bruto por cromatografia "flash" (diclorometano/acetona 9:1) deu 3,82 g do composto em epígrafe como um sólido branco (rendimento: 86%). ESI ( + ) MS: m/z 348 (100, MH+) ; XH NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) : δ 12 ,01 (s, 1H) , , 9, 58 (s, 1H) , 7, 60 (d, 2H, J = 8,5 Hz ) , 7, 25 (d, 2H, J = 8, 5 Hz) , 7, 11 (d , 1H, J = 1,0 Hz), 5, 59 (t, 1H, J = 5,9 Hz) r 3, 93 (d, 2H, J= 5,9 Hz) , 3, 88 (q, 1H, J = 7,1 Hz) , 3, 05 ( :m, 1H, J = 6,9 Hz, J = 10 Hz) , 1,38 (d, 3H, J = 7,1 Hz) , 1, 21 (d, 6H, J = 6,9 Hz);
Excesso enantiomérico: 99,5 % (HPLC quiral); [a]D +207° (C=1, CH30H);
Análise calculada para: C17H21N3O3S: C, 58, 77; H, 6,09; N, 12,09; S, 9,23. Encontrada: C, 58,58; H, 6,25; N, 11,65; S, 9,12.
Trabalhando de uma forma análoga pode-se preparar os compostos seguintes a partir do derivado amino correspondente : 80 ΡΕ1406899 (2R)-2-[4-(glicoloilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 2-[4-(glicoloilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l, 3-tiazol-2-il)propanamida; 2-[4-(glicoloilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)acetamida.
Lisboa, 5 de Janeiro de 2007

Claims (24)

  1. ΡΕ1406899 1 REIVINDICAÇÕES 1. Utilização, para o fabrico de um medicamento para tratar doenças celulares proliferativas associadas com um ciclo celular alterado dependente da actividade de cinase, pela administração a um mamífero que dele necessite de uma quantidade eficaz, de um derivado de fenilacetamido-tiazole representado pela fórmula (I)
    em que R é um grupo Ci-C4 alquilo linear ou ramificado; Rx é um grupo de fórmula (lie) em que R3 é seleccionado aminometilo (-CH2-NH2),
    m do grupo que hidroximetilo consiste em amino, (-CH20H), Ci-C4 al quilo linear ou ramificado ou é um heterociclo com 5 ou 6 2 ΡΕ1406899 membros com 1 ou 2 heteroátomos seleccionados entre azoto, oxigénio e enxofre; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  2. 2. A utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a doença celular proliferativa é seleccionada do grupo que consiste em cancro, doença de Alzheimer, infec-ções virais, doenças auto-imunes e doenças neurode-generativas.
  3. 3. A utilização de acordo com a reivindicação 2, em que o cancro é seleccionado do grupo que consiste em carcinoma, cancro de células escamosas, tumores hemato-poéticos de linhagem mielóide ou linfóide, tumores de origem mesenquimal, tumores do sistema nervoso central e periférico, melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteos-sarcoma, xerodermia pigmentosa, ceratocantoma, cancro folicular da tiróide e sarcoma de Kaposi.
  4. 4. A utilização de acordo com a reivindicação 1 em que a doença celular proliferativa é seleccionada do grupo que consistem em hiperplasia benigna da próstata, polipose adenomatosa familiar, neuro-fibromatose, psoriase, proliferação de células lisas vasculares associada com aterosclerose, fibrose pulmonar, artrite, glomerulonefrite e estenose e restenose pós-cirúrgica.
  5. 5. A utilização de acordo com a reivindicação 1 3 ΡΕ1406899 que proporciona angiogenese tumoral e inibição de metás-tases.
  6. 6. A utilização de acordo com a reivindicação 1 que proporciona tratamento ou prevenção de alopecia induzida por radioterapia ou quimioterapia.
  7. 7. A utilização de acordo com a reivindicação 1 que compreende ainda submeter o mamífero que dela necessita a uma terapêutica de radiação ou regime de quimioterapia em combinação com pelo menos um agente citostático ou cito-tóxico.
  8. 8. A utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o mamífero que dele necessita é um ser humano.
  9. 9. Utilização de um composto como definido na reivindicação 1, para o fabrico de um medicamento para inibir a actividade de cinase dependente de ciclina por contacto da referida cinase com uma quantidade eficaz.
  10. 10. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o referido medicamento compreende uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) seleccionado do grupo que consiste em (2S)-2-[4-(acetilamino)fenil]-N-(5-iso- propil-l,3-tiazol-2-il)propanamida, N-(4-{(IS)—2—[(5-iso-propil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-meti1-2-oxoetil}fenil)-nicotinamida e N-(4-{(IS)-2-[(5-isopropil-l, 3-tiazol-2-il)amino]-1-meti1-2-oxoetil}fenil)isonicotinamida. 4 ΡΕ1406899
  11. 11. Um derivado de fenilacetamido-tiazole representado pela fórmula (I)
    em que R é um grupo Ci-C4 alquilo linear ou ramificado; Ri é um grupo de fórmula (lie) Ar* O m em que R3 é seleccionado de um grupo que consiste em amino, aminometilo (-CH2-NH2), hidroximetilo (-CH2OH) , C1-C4 al quilo de cadeia linear ou ramificada ou é um heterociclo com 5 ou 6 membros com 1 ou 2 heteroátomos seleccionados entre azoto, oxigénio e enxofre; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
  12. 12. Derivado de fenilacetamido-tiazole de fórmula (I), de acordo com a reivindicação 11, em que R é metilo. 5 ΡΕ1406899
  13. 13. Derivado de fenilacetamido-tiazole de fórmula (I), de acordo com a reivindicação 11, em que R3 é seleccionado do grupo que consiste em metilo, piridil-4-ilo ou piridil-3-ilo.
  14. 14. Derivado de fenilacetamido-tiazole de fórmula (I), de acordo com a reivindicação 11, que é seleccionado do grupo que consiste em (2S)-2-[4-(acetil-amino)fenil]-N(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida, N-(4-{(IS)—2—[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-meti1-2-oxoetil}fenil)nicotinamida e N-(4-{(IS)—2—[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2-oxoetil}fenil)isonicoti-namida.
  15. 15. Derivado de fenilacetamido-tiazole de fórmula (I), de acordo com a reivindicação 11, opcionalmente na forma de um sal farmaceuticamente aceitável, seleccionado do grupo que consiste em: 1) (2S)-2-[4-(acetilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 2) (2R)-2-[4-(acetilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 3) 2-[4-(acetilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 6 ΡΕ1406899 4) (2S)—2—{4—[(aminocarbonil)amino]fenil}-N-(5-iso-propil-1,3-tiazol-2-il)propanamida; 5) (2R)—2—{4—[(aminocarbonil)amino]fenil}-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il) propanamida; 6) 2-{4-[(aminocarbonil)amino]fenil}-N-(5-isopropil- 1.3- tiazol-2-il)propanamida; 7) 2-{4-[(aminocarbonil)amino]fenil}-N-(5-isopropil- 1.3- tiazol-2-il)acetamida; 8) (2S)—2—[4—(glicilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 9) (2R)—2—[4—(glicilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)propanamida; 10) 2-[4-(glicilamino)fenil]-N-(5-isopropil-l,3-tia-zol-2-il)propanamida; 11) N-l-(4-{2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-2-oxoetil}fenil)glicinamida; 12) N-(4-{(lS)-2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2-oxoetil}fenil)nicotinamida; 13) N-(4-{(IR)-2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-meti1-2-oxoetil}fenil)nicotinamida; 7 ΡΕ1406899 14) Ν-(4-{2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino] -1-metil-2-oxoetiljfenil)nicotinamida; 15) N-(4-{(IS)-2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-l-metil-2-oxoetil}fenil)piridino-2-carboxamida;
  16. 16) N-{(IR)-2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2-oxoetiljfenil)piridino-2-carboxamida;
  17. 17) N-(4-{2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2-oxoetiljfenil)piridino-2-carboxamida; 18) N-(4-{2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-2-oxoetiljfenil)piridino-2-carboxamida; 19) N-(4-{(lS)-2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2-oxoetiljfenil)isonicotinamida; 20) N-{(IR)-2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino] -1-metil-2-oxoetiljfenil)isonicotinamida; 21) N-(4-{2-[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-1-metil-2-oxoetiljfenil)isonicotinamida; 22) N—(4—{2—[(5-isopropil-l,3-tiazol-2-il)amino]-2-oxoetil}fenil)isonicotinamida. ΡΕ1406899
  18. 18. Um processo de acordo com a reivindicação 17, em que R' é hidroxilo ou um átomo de cloro.
  19. 19. Uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um derivado de fenilacetamido-tiazole de fórmula (I), como definido na reivindicação 11, e pelo menos um excipiente, veiculo e/ou diluente farmaceuticamente aceitável.
  20. 20. Uma composição farmacêutica de acordo com a 9 ΡΕ1406899 reivindicação 19 que compreende ainda um ou mais agentes quimioterapêuticos.
    20. Um processo para preparar os compostos de fórmula (I) ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, como definido na reivindicação 11, processo esse que compreende fazer reagir 2-amino-5-isopropil-l,3-tiazole com um composto de fórmula (III)
    m em que R e Ri são como definido na reivindicação 11 e R' é hidroxilo ou um grupo separável adequado e, opcionalmente, convertê-los em seus sais farmaceuticamente aceitáveis. 17. 16, em que R' Um processo de acordo com a reivindicação é hidroxilo ou um átomo de halogéneo.
  21. 21. Um produto ou estojo ("kit") que compreende um composto de fórmula (I) como definido na reivindicação 11 ou uma sua composição farmacêutica como definido na reivindicação 19, e um ou mais agentes quimioterapêuticos, como uma preparação combinada para utilização simultânea, separada ou sequencial em terapêutica anti-cancro.
  22. 22. Um composto de fórmula (I), como definido na reivindicação 11, para utilização como medicamento.
  23. 23. Utilização de um composto de fórmula (I), como definido na reivindicação 11, no fabrico de um medicamento com actividade de cinase dependente do ciclo celular.
  24. 24. Utilização de um composto de fórmula (I), como definido na reivindicação 11, no fabrico de um medicamento com actividade anti-tumoral. Lisboa, 5 de Janeiro de 2007
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