PT1221445E - Compostos pentacíclicos derivados de taxamos - Google Patents

Description

1 DESCRIÇÃO "COMPOSTOS PENTACICLICOS DERIVADOS DE TAXANOS"

CAMPO TÉCNICO A presente invenção refere-se a um derivado do taxol que se pode administrar por via oral e apresenta actividade antitumdral. *

TÉCNICA ANTERIOR 0 taxol é uma substância natural representada pela seguinte fórmula estrutural química, que se pode obter em pequena quantidade a partir da casca ou de outras partes de Taxus brevifolia.

Sabe-se que o taxol apresenta actividade antitumoral, e considera-se que o seu mecanismo de acção se baseia na sua aptidão para inibir a despolimerização de microtúbulos na divisão celular, de forma que a sua utilização clínica prevalece como um agente antitumoral que possui um mecanismo de acção diferente do dos agentes antitumorais convencionais.

Até à data tem-se obtido o taxol a partir de uma fonte natural mas apenas em uma quantidade extremamenté pequena. 2

Entretanto, têm-se apresentado derivados do taxol sintetizados utilizando um seu precursor, a 10-O-desacetilba-catina III, representado pela fórmula imediata, que se pode obter a partir das folhas e de outras partes de plantas Taxus em uma quantidade relativamente grande.

Entre eles, denominado "composto A") que possui uma estrutura derivada da fórmula seguinte tem chamado a atenção como um composto que revela actividade antitumoral igual ou superior à do taxol, apresentando-se em andamento o seu desenvolvimento como agente antitumoral.

Os inventores da presente invenção relataram que um composto obtido' mediante a conversão de um grupo hidroxilo formado pela redução da cetona em posição 9 e do grupo, hidroxilo na posição 10 em uma forma acetal ciclica apresenta acentuada actividade antitumoral (JP-A-9-12578, referindo-se a designação "JP-A" quando utilizada na presente invenção a 3 "um Pedido de Patente de invenção japonesa publicada não examinada"). 0 taxol·, o taxotere e o composto descrito na JP-A-9--12578 são promissores agentes antitumorais. No que respeita aos compostos referidos nos Exemplos da JP-A-9-12578 existe, porém, um obstáculo sob o ponto de vista da toxicidade, não se conhece a eficácia desses compostos por administração oral. Do ponto de vista, por exemplo, do alívio da ansiedade dos doentes no momento da administração e da economia médica, procura-se um derivado do taxol que se possa administrar por via oral.

Como resultado de uma prolongada investigação para obter um derivado do taxol que. possa assegurar grande segurança adequada para administração por via oral .mantendo ao mesmo tempo uma elevada actividade antitumoral e melhorando o problema da toxicidade, os inventores da presente invenção conduziram importantes estudos e obtiveram um composto (em seguida designado por "composto B") com a fórmula seguinte capaz de exibir uma significativa. . actividade antitumoral mesmo procedendo à sua administração oral por exemplo em um ensaio antitumoral realizado com murganhos.

0 problema da toxicidade desse composto melhorou em comparação com os compostos descritos nos Exemplos da JP-A-9- i 4 -12578. Contudo, não foi possível assegurar-se a sua Λ aplicabilidade na administração ao homem por via oral, porque um ensaio de metabolismo "in vitxo utilizando microssomas de fígado humano revelou que esse composto é metabolizado rapidamente nos microssomas hepáticos humanos.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

Com o objectivo de inibir a modificação dos compostos pelo seu metabolismo, os inventores levaram a cabo um novo estudo de design de fármacos e descobriram que um composto em que se introduz um grupo substituinte no anel da piridina da cadeia lateral em posição 13 é dificilmente metabolizado em microssomas hepáticos humanos, podendo garantir segurança adequada para administração por via oral, mantendo ao mesmo tempo a sua actividade antitumoral e melhorando também o problema da toxicidade, obtendo-se assim a realização bem sucedida da presente invenção.

Consequentemente, a presente invenção apresenta compostos representados pela fórmula geral seguinte ou um seu sal, um medicamento que contem um composto representado pela fórmula geral imediata ou um seu sal e um agente antitumoral que contem um composto representado pela fórmula geral seguinte ou um seu sal.

5 A presente invenção apresenta igualmente compostos intermédios (em seguida designados por "compostos intermédios da presente invenção") representados pela fórmula geral imediata para utilizar na produção do derivado de taxol, e a sua utilização.

5 I

Na fórmula geral seguinte, o símbolo R1 representa um grupo dimetilaminometilo ou um grupo morfolinometilo e o símbolo R2 representa um átomo de halogéneo ou um grupo alcoxi com 1 a 6 átomos de carbono. Exemplos preferidos do símbolo R2 incluem um grupo metoxi, um átomo de flúor e um átomo de cloro, mais preferivelmente um átomo de flúor e um grupo metoxi.

Especialmente preferido é um composto representado pela fórmula seguinte, a saber o (IS,2S,3R,4S,5R,8R,9S,10R,13S)-4--acetoxi-2-benzoiloxi-9,10[(IS)-2-(dimetilamino)etilidenodi-oxi]-5,20-epoxi-l-hidroxitax-ll-en-13-il(2R,3S)-3-(ter-buto-xicarbonilamino)-3-(3-fluoro-2-piridil)-2-hidroxipropionato, 6

ou um seu sal.

Também nos compostos intermédios da presente invenção mencionados antes, o simbolo R3 representa um grupo dimetilaminometilo, um grupo morfolinometilo ou um grupo vinilo, o símbolo R4 representa um grupo hidroxilo que pode comportar um grupo protector e o símbolo R5 representa um grupo alcoxi com 1 a 6 átomos de carbono ou um átomo de halogéneo, Além disso, a porção de linha tracejada entre a posição 6 e a posição 7 de uma· estrutura parcial nos compostos intermédios da presente invenção, representada pela fórmula seguinte

significa que a ligação dessa parte pode ser uma ligação dupla.

Nos compostos intermédios da presente invenção, exemplos do grupo protector do simbolo R4 incluem- um grupo trialquilsililo, um ' grupo benzilo, um· grupo benzilo substituído, o grupo 1-etoxietilo, o grupo benziloxicarbonilo e o grupo 2,2,2-tricloróetoxicarbonilo. Preferido entre esses grupos encontram-se um grupo trialquilsililo como o grupo triisopropilsililo, um grupo butilo terciário-dimetilsililo 7 ou.um grupo trietilsililo e o grupo benzilo, e especialmente preferidos são os grupos triisopropilsililo e benzilo.

Os compostos intermédios para a produção do derivado do taxol de acordo com a presente invenção pode utilizar-se seleccionando-o eventualmente em resposta ao produto de interesse final. Por exemplo, para a produção de um composto com a fórmula seguinte

ou um seu sal, é conveniente utilizar um composto de fórmula geral imediata

(.em que R6 representa um grupo triisopropilsililo, um grupo Jbutil terciário-dimetilsililo, um grupo trietilsililo ou um grupo benzilo) ou um seu sal, .ou um composto de fórmula geral, seguinte 8

{em que R7 representa o grupo triisopropilsililo, o .grupo butil tercbário-dimetilsililo, o grupo trietilsililo ou o grupo benzilo) ou um seu sal, ou um composto de fórmula geral seguinte

(em que R8 representa o grupo triisopropilsililo, o grupo . butil terciário-dimetilsililo, o grupo trietilsililo ou o grupo benzilo) oU um seu sal.

Um composto de acordo com a presente invenção pode ocorrer na sua forma livre ou sob a forma de um sal de adição de ácido. Exemplos do sal de adição de ácido incluem sais de ácidos inorgânicos como cloridratos, sulfatos, nitratos, bromidratos, iodidratos e fosfatos ou sais de ácidos orgânicos como acetatos, metanossulfonatos, benzenossulfonatos,. toluenossulfonatos, citratos, maleatos, fumaratos e lactatos. Pode ocorrer também sob a forma de um solirato, e exemplos do solvente incluem água, metanol, i 9 etanol, propanol, butanol, acetona, acetonitrilo, benzeno, tolueno, tetra-hidrofurano e N,N-dimetilformamida.

Um composto de acordo com a presente. Invenção pode sintetizar-se de acordo com um processo relatado na JP-A-9--12578, por exemplo, os processos de síntese seguintes. Nesse contexto, a reacção pode realizar-se protegendo os grupos substituintes com grupos protectores conforme os requisitos do momento, embora . a sequencia das operações da sua desprotecção não seja especialmente restrita. Método de Síntese 1:.

Um composto de fórmula geral (3).. obtém-se mediante condensação do composto de fórmula (1) com' um composto de· fórmula geral (2), na presença de uma base. Em seguida, remove-se o grupo protector do radical . hidroxi do assim obtido composto de fórmula geral (3) para se obter um composto de fórmula geral (4) . A sua olefína extrema converte-se em um diol utilizando um agente oxidante como o N-metilmorfolina-N-óxido na presença de um catalisador, o 10 tetraóxido de ósmio e cliva-se seguidamente mediante oxidação utilizando periodato de sódio e similares para produzir um aldeído. Seguidamente, realiza-se uma reacção redutora com a amina correspondente para se obter um composto de fórmula geral (5). Método de Síntese 2:

Um composto de fórmula geral (7) obtém-se condensando o composto de fórmula (6) com um composto de fórmula geral (2) como no Processo de Síntese 1 pelo mesmo método. Seguidamente, obtém-se um composto de fórmula geral (9) reduzindo a olefina (o alceno) nas posições 6 e 7 mediante hidrogenação, e por fim remove-se depois o grupo protector do radical hidroxi, obtendo-se assim um composto de fórmula geral (5). 11

Nos Processos de Síntese 1 e 2 anteriores, os materiais iniciais (1) e (6} podem sintetizar-se de acordo com o processo relatado na JP-A-9-12578. 0 composto (2) pode também sintetizar-se de acordo corri um processo de síntese conhecido para compostos β-lactâmicos descrito em alguma bibliografia (por exemplo, ver J. Am.Chem. Soc. 110, 1917 (1988)).

Nos processos de síntese anteriores os símbolos R1, R2 e R6 têm os significados definidos' antes. No que respeita às abreviaturas, Boc significa Um grupo butoxi tereiário-carbo-nilo., Ac significa um grupo acetilo e Bz um grupo benzoilo.

Além disso, um medicamento de acordo . com a presente invenção pode conseguir o' tratamento de cancros com base na sua acção antitumoral, constituindo exemplos do alvo a tratar diversos cancros como o cancro do pulmão, o cancro gastrintestinal, o cancro ovárico, o cancro uterino, o cancro da mama, o cancro do fígado, o cancro da cabeça e. do nariz, o cancro do sangue, o cancro renal e o tumor testicular.

Um composto de acordo com a presente invenção pode administrar-se sob a forma de diversos injectáveis como para .injecção endovenosa, injecção intramuscular e injecção subcutânea, ou por diferentes métodos de administração como administração oral e administração percutânea. Entre esses métodos de administração, a administração' por via oral é vantajosa do ponto de vista de alcançar os efeitos que descreveremos posteriormente. A administração por via oral pode abranger qualquer composto livre ou sob a forma de sais.

Quando se realizou um teste utilizando murganhos sem cancros, o composto de acordo, com a presente invenção não apresentou toxicidade renal. . 12

Um teste in vitro que utilize microssomas hepáticos humanos pode predizer a aplicabilidade do composto de acordo com a presente invenção sob a forma de uma preparação para administração oral. No caso de administração por via oral, o fármaco dissolve-se no tracto gastrintestinal, é metabolizado no tracto digestivo e fígado e entra seguidamente no sistema circulatório sanguíneo. Consequentemente, eonsidera-se que a metabolizaçâo do fármaco no fígado exerce influência sobre a manifestação da eficácia desse mesmo fármaco. Principalmente, é previsível que o composto da presente invenção e os seus compostos análogos sejam metabolizados através da CYP3A que é uma. enzima localizada nos '. microssomas hepáticos. Consequentemente, considerando a sua utilização na prática clínica é importante a previsão da metabolizaçâo através de um teste in vitro utilizando microssomas hepáticos.. Por exemplo, em Pharm. Tech. Japan, 13, 17-39, 1997 e J. Pharmacol. Exp. Ther., 283, 46-58, 1997 foi relatado que os valores previstos do metabolismo através de testes in vitro utilizando microssomas. hepáticos quase coincidem com os valores calculados em ensaios clínicos nó homem. Os microssomas hepáticos humanos podem adquirir-se por exemplo em Xenotech LLC, e a' determinação da taxa metabólica pode efectuar-se servindo-se da. informação . contida nos artigos científicos anteriores.

Quando se avalia a taxa do metabolismo de um fármaco em microssomas hepáticos, pode também calcular-se teoricamente a biodisponibilidade do mesmo (J. Pharmacol. Exp. Ther., 283, 46-58, 1997) . A biodisponibilidade. define-se comparativamente a um fármaco administrado como a quantidade e a velocidade desse fármaco que atinge o sangue da circulação sistémica (Pharmacokinetic Studies on Drug Development, editados por Yuichi Sugiyama, pág. 15, publicados por Yakuji Jiho.) . No

13 caso de administração oral, existem diversos- obstáculos até um fármaco passar para o sangue circulante, como a dissolução no tracto gastrintestinal, a passagem através da membrana mucosa do tracto -digestivo, e o metabolismo no tracto digestivo e no fígado. Consequentemente, considera-se que, entre indivíduos, os limites de variabilidade da .sua concentração sanguínea final, isto é a biodisponibilidade, tornam-se amplos em çomparação com o exemplo da sua administração directa no sangue circulante. Hellriegel et al. analisaram os valores da biodisponibilidade e a sua variabilidade individual (valor. CV) respeitantes -a 149 elementos de diversos fármacos do mercado e relataram que existe uma correlação negativa entre eles (Clin. Pharmacol. Ther., 60, 601-607, 1996). ' Ou seja, sabe-se que individualmente os limites· .de variabilidade da biodisponibilidade se tornam amplos quando os valores da biodisponibilidade diminuem.

No caso dos agentes antitumorais, estes administram-se a maioria das vezes em torno da dose máxima tolerada a fim de aumentar a velocidade da resposta, de forma que consequentemente os limites terapêuticos e os limites de toxicidade se aproximem e os limites de segurança se reduzam. Dessa forma, torna-se difícil utilizar um fármaco que revela amplos limites de variabilidade da biodisponibilidade individual como agente antitumoral.

Em conformidade com um composto de acordo com a presente invenção, reduziu-se a sua taxa ' metabólica nos microssomas hepático"humanos, e o valor teórico da biodisponibilidade da sua forma não transformada melhorou também. Portanto, previu--se que individualmente, os limites de variabilidade da biodisponibilidade do composto não· transformado seriam '14 menores. Devido ao seu efeito, é possível de um modo competente proceder . à administração oral de um composto de acordo com a presente invenção sob o ponto de vista da segurança aumentando os'limites dessa mesma segurança e sob o ponto de vista da expressão de. uma eficiente eficácia do fármaco. , .Neste contexto, o valor teórico da biodisponibilidade de um composto . não transformado é preferivelmente 0,4 ou mais, mais preferivelmente 0,7 ou mais. .

Além· disso, a aplicabilidade de um composto de acordo com a presente invenção, sob a forma de preparações orais-pode igualmente predizer-se através de um ensaio de biodisponibilidade (BA) utilizando macacos; A metabolização do composto B através de microssomas hepáticos de murganho e de cão é lenta, e a sua absorção oral característica é efectivamente excelente. Por outro lado, a sua metabolização pelos microssomas hepáticos de macaco é rapidamente muito semelhante'ao caso dos microssomas hepáticos humanos. Nesse caso, a absorção oral peculiar do composto (B) em macacos é baixa. Pelo contrário, a metabolização ' de um composto de acordo com a presente invenção, através de microssomas hepáticos de macaco é lentamente muito semelhante ão caso do.s microssomas hepáticos dos murganhos e dos cães. Consequentemente, quando se avaliou a biodisponibilidade (BA) utilizando macacos, com. o objectivo de confirmar a absorção oral melhorando o efeito através da inibição do metabolismo, confirmou-se que, em comparação com o composto (B) , se melhorou rapidamente a absorção oral em macacos utilizando um composto de acordo com a presente invenção.

No que . respeita aô processo para a fabricação de preparações farmacêuticas de medicamentos e de agentes 15 antitumorais, essas podem preparar-se seleccionando ' uma preparação farmacêutica apropriada em resposta ao seu método, de administração e empregando um processo de preparação geralmente utilizado. Entre as formas posológicas para um agente antitumoral de acordo com a presente invenção, comprimidos, pós, grânulos e cápsulas podem exemplificar-se como preparações para utilização na administração oral. Exemplos de outras formas posológicas incluem soluções', xaropes, elixires, e suspensões oleosas ou' aquosas. Entre elas, são vantajosas as cápsulas, os comprimidos e as soluções. No caso dos injectáveis podem, utilizar-se na preparação aditivos como um agente, estabilizador, um. agente anti-séptico e um agente solubilizante. Quando se prepara uma solução que pode conter essas substancias auxiliares sob a forma de uma preparação sólida por liofilização ou outro modo igual, esta pode utilizar-se como uma preparação farmacêutica que se dissolve antes da administração.

Soluções, suspensões e emulsões podem exemplificar-se sob a forma de preparações líquidas, podendo utilizar-se agentes aditivos como um agente suspensor e um agente emulsionante . quando se manipulam essas preparações farmacêuticas.

Para o tratamento de cancros em mamíferos, especialmente no homem, pode utilizar-se um composto de acordo com a presente invenção que quando administrado ao homem é conveniente que o seja uma vez por dia e que se repita a administração a intervalos apropriados.

No que respeita à dose, é conveniente administrá-lo entre os limites de aproximadamente 0,5 mg a 50 mg; 16 preferivelmente entre aproximadamente 1 mg e 20 mg, com base em 1 m2 da área superficial do corpo.

Com base nos exemplos seguintes descreve-se a presente invenção detalhadamente. Na descrição dos exemplos, utilizar--se-ão as seguintes abreviaturas. Boc significa um grupo .butoxi terciário-carbonilo, Ác significa um grupo acetilo, Bz significa um grupo benzoilo e TIPS significa um grupo triisopropilsílilo.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A Fig. 1 representa um gráfico' que mostra alterações devidas à passagem do tempo na quantidade do metabolito formado a partir dos respectivos compostos..

MÉTODO ESCOLHIDO PARA REALIZAR A PRESENTE INVENÇÃO (Exemplo 1)

Fase 1: (IS,2S,3R, 4S,5R,8R,9S,10R,13S)-4-acetoxi-2-benzoil-oxi-5,20-epoxi-l-hidroxi-9,10-(2-propenilidenodioxi)tax-11- 17 -en-13-.il (2R, 3S) -3- (ter .-butoxicarbonilamino) -3- (5-metoxi-2--piridil)-2-triisopropilsililoxipropionato

Umà porção de 300 mg de (IS,2S,3R,4S,5R,8R,9S,10R,13S)— -4-acetoxi-2-benzoiloxi-5,20-epoxi-l,13-di-hidroxi-9,10-(2--propenilidenodioxi)tax-ll-eno dissolveu-se em 10 ml de tetra-hidrofurano anidro, e misturou-se a.solução resultante com 0,63 ml de hexametildisilazida de litio (solução 1M em tetra-hidrofurano) à temperatura de -60 °C e agitou-se durante 25 minutos.. À mesma temperatura adicionou-se à solução reaccional uma porção de 5 ml de uma solução ' de tetra-hidrofurano contendo 280 mg de (3R,4Ξ)-l-(ter.-butoxi-carbonilo)-4-(5-metoxi-2-piridil)-3-triisopropilsililoxi-2--azetidinona, e agitou-se a mistura sob arrefecimento em gelo. durante 40 minutos. À solução reaccional adicionaram-se uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio e acetato de etilo para realizar a separação das camadas, e:extraiu-se a camada aquosa com acetato de etilo. Reuniram-se. as camadas orgânicas, lavàram-se com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secaram-se depois com sulfato de sódio anidro. Evaporou-se o solvente sob pressão reduzida e purificou-se o ' resíduo resultante utilizando . uma cromatografia ' em·.'coluna de gele de sílica' (solvente de desenvolvimento (developing solvent);; hexano:acetato de etilo = 5:1 (v/v)) para se obterem, 540 mg do composto do título. RMlíJ-1H (400 MHz, CDC13, TMS) δ: 0,89-0, 95 (21H,m) ,' l,32(3H,s), 1, 33-1,62 (3H,m) , l,41(9H,s), 1,52(3H,s), 1,65(3H,s}, l,82(3H,s), 1,92-2,32(3H,m), 2,49 (3H, sí) , 2,98 (1H, d, J=4,9Hz) , 3,85(3H,s), 4,20 (1H, d,'J-7,4Hz) , .4,22 (1H, d, J=6, 8Hz) , 4,32 (1H, d, J=8,3Hz) , 4,95(1H,s), 5,21(1H,d,J=5, 8Hz) , 5,26-5,29(2H,m) , 5,39- 5,47 (3H,m) , 5, 57 (1H, d, J=17,6Hz ) , 5,96-6, 02 (2H,m) , 6,11(1Η,similar ' a t,J=8,3Hz), 7,15(1H,dd,J=24,88Hz), 18 7,31(lH,d,J=8,8Hz), 7,44(2H,t,J=7,8Hz), 7,56(1H,t,J=7,8Hz), 8,13 (2H,d, J=7,8Hz) , 8,26 (lfí, d, J=3, OHz)..

Fase 2: (IS, 2S, 3R, 4S, 5R, 8R, 9S, 1-0 R, 13S) -4-acetoxi-2-benzoil-oxi-5,20-epoxi-l-hidroxi-9,10-(2-propenilidenodioxi)tax-11--en-13-il(2R,3S)-3-(ter.-butoxicarbonilamino)-2-hidroxi-3-{5--metoxi-2-piridil)propionato

Em 10 ml de tetra-hidrofurano anidro dissolveu-se uma porção de 530 mg do composto obtido na fase 1 anterior, adicionando-se à solução resultante sob arrefecimento em gelo 1,0 ml de fluoréto de tetrabutilãmónio (Uma solução 1M em tetra-hidrofurano) e agitou-se depois a mistura durante 30 minutos à mesma temperatura, À solução ' reaccional adicionaram-se água e acetato de etilo para realizar a separação das camadas, e extraiu-sé a . camada aquosa com acetato de etilo. Reuniram-se as camadas orgânicas, lavaram--se com uma solução aquosa .saturada de carbonato de hidrogénio e sódio e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio respeitando . a ordem referida e .secaram-se depois utilizando sulfato de sódio anidro. Evaporou-se o solvente sob pressão reduzida e purifiçou-se o residuo resultante utilizando uma cromatografia em coluna de gele de síliça {solvente de , desenvolvimento1 (developing solvent); hexano: acetato de etilo = 1:1 (v/v) } para se obterem 410 mg do composto do titulo, RMN-1]-: (400 MHz,· GDC13, TMS) δ: 1,2 6{3H,s), 1,43(9H,s), l,50(3H,s), 1,60-1,91(3H,m), 1, 64 (3H, s) , 1,7 4 ( 3H, s) , l,91(lH,s), 2,04-2,16 (2H,m) , ' 2,32- 2,37 (lH,m) , 2,34(3H,s), 2, 93 (1.H, d, J=5,3Hz)', .3,85(3H,s), 4,18 (1H, d, J=7,3Hz) ,. 4,22 (1H, d, J=8,3Hz) , 4,33 (1H, d, J=8,3Hz) , 4,79(lH,s largo), 4,.85 (1H,S largo),' 4,.92 (lH,s lârgo) , 5,23. (1H, d, J=5,8Hz) , 5,29-5,30 (2H,m) , 5, 4 6 (1H, d, J=10,3Hz)., 19 5,58(lH,d,J=17,1Hz), 5,90(1H,d,J=9,7Hz), 5,96-6, 03(2H,m), 6,.09 (1H, semelhante a t,J=8,4Hz); 7,22 (1H, dd, J=2,'4,8,8Hz) , 7,34 (lH,d,J=8,8Hz) , 7,47 (2H,t,J=7,8Hz) , 7,60 (1H, t., J=7,8Hz) , 8,13(2H,d,J=7,8Hz), 8,22(1H,d,J=2,4Hz). '

Fase 3: (IS,2S,3R,4S,5R,8R,9S,10R,13S)-4-acetoxi-2-benzoil- oxi-5,20-epoxi-l-hidroxi-9,10-f(IS)-2-(morfolino)etilidenodi-oxi]tax-ll-en-13-il(2R,3 S)-3-(ter.-butoxicarbonilamino)-2-hi-droxi-3-(5-metoxi-2-piridil)propionato

Em 5 ml de tetra-hidrofura.no dissolveu-se uma porção de.. 400 mg do composto obtido na fase 2 anterior, e misturou-se a solução resultante com 5 ml de acetona, 5 ml de água, .'5,9 mg de tetraóxido de ósmío e 270 mg de N-metilmorfolina-N-óxido e agito.u-s.e durante 4,5 horas à temperatura ambiente. À solução reaccional adicionaram-se acetato· de etilo e uma solução' aquosa a 10%. de tiossulfato de. sódio para conseguir, a separação da.s camadas, e extraiu-se a camada aquosa com acetato de etilo. Reuniram-se as camadas orgânicas, lavaram--se com uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio euma solução aquosa saturada de cloreto de sódio respeitando a ordem citada e secam-se depois com sulfato de sódio anidro. Evaporou-se o solvente sob pressão reduzida, dissolveu-se o resíduo resultante em 5 ml de tetra--hidrofurano e misturou-se 'depois a. solução com 5 ml de metanol, 5 ml de água e 990 mg de metaperiodato de sódio e agitou-se durante 1,5 horas à temperatura, ambiente. Para proceder à separação das, camadas adicionaram-se à solução reaccional acetato de etilo e água, e extraiu-se a camada aquosa com acetato de etilo. Reuniram-se as camadas orgânicas, lavaram-se com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secaram-se depois com sulfato, de sódio anidro... Evaporou-se o solvente sob pressão reduzida, 20 dissolveu-sé o resíduo resultante em 30 ml de etanol e misturou-se depois a solução com 0,2 ml de morfolina, 0,13 ml de ácido acético e 140 mg de cianoboro-hidreto de sódio e agitou-se durante 1 hora à temperatura ambiente. À solução reaccional adicionaram-se uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio, acetato de etilo e água para realizar a separação das camadas, e extraiu- se a camada aquosa: cóm acetato de etilo. Reuniram-se as camadas orgânicas, lavaram-se com uma solução aquosa saturada de cloreto de; sódio e secaram-se depois com sulfato de sódio anidro. Evaporou-se o solvente sob pressão reduzida ê purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna de . gele de sílica [solvente de desenvolvimento (developing solvent); clorofórmio:metanol = 50:1 (v/v)] para se obterem 220 mg do composto do título. Ponto de fusão: 160-161 °C. ΗΜΝ-1!: (400 MHz, CDC13, TMS) δ: 1,27(3K,s) , 1,43(9H,s}, 1,48(3H,s), 1, 60(3H,s) , 1, 72(3H,s) , 1,78-2,12(6H,m), 2,31-2,38 (lH,m), 2,34(3H,s), 2,58- 2,68 (4'H,m) , 2,71 (lH,dd,J=5,4,13,2Hz), 2,79(lH,dd,J=3,9,13,2Hz),' 2,93(1H,d,J=5,3Hz), 3,75 (4H,t; J=4, 9Hz);, , 3, 86 (3H,s) , 4,12 (1H,d, J=7,3Hz) , 4,21 (lH,d, J=8,3Hz) , 4,33 (1Η, d,. J-8,3Hz) , 4,76(lH,s largo), 4,8 5 (1H,s . largo), 4,92(lH,s), 5,04(1H,t,J=4,6Hz), 5,23(lH,d,J=6,9Hz), 5,29(1H,d,J=8,8Hz) , 5, 90(1H,d,J=9,3Hz), 5,98(1H,d,J=4,9Hz), 6,08(1H,semelhante a t,J=8,3Hz), 7,22(1H,dd,J-2,9,8,8Hz), 7,34(1H,d,J=8,8Hz), 7,47 (2H,t, J=7, 8-Hz) , 7,60 (lH,..t, J=7, 8Hz) , 8,13 (2H, d, J=7,8Hz), 8,22(iH,d,J=2,9Hz).

Análise elementar (para C49H65N30i5) Calculado: 0,62,87; H,7,00; N,4,49 Encontrado: C., 62, 66; H, 7,08; N, 4,28 21 (Exemplo 2}

Fase 1: (IS, 2S, 3R, 4S, 5R, 8R, 9S, 10R, 13S.)-4-acetoxi-2-benzoil-oxi-5,20-epoxi-l-hidroxi-9,10- (2-propenilidenodioxi) tax-11--en-13-il (2R, 3S.) -3- (ter . -butoxicarbonilamlno) -3- (5-cloro-2--piridil)-2-triisopropilsililoxipropionato

Repetindo a técnica da fase 1 do Exemplo 1 mas utilizando (3R, 4S) -l-,('ter,-butoxicarbonilo) -4- (5-cloro-2-piridilo).-3--triisopropil:sililoxi-2-azetidinona em vez de (3Rf 4S) -1- (ter--butoxicarbonilo)-4-(5-metoxi-2-piridil)-3-triisopropilsili-loxi-2-azetidinona obteve-^se o composto do titulo. RMN-1H (400 MH.z, CDC13, TMS) δ: 0,87-0,94 (2lH,m) , 1,18-1,69 (2H,m) , ' 1,31 (3H, s) 1,41 (9H, s) , 1,52(3H,s), . 1,65{3H,s}, l,82(3H,s),· 1,72-2,05(2H,m), 2,24- 2,34 (2H, m) , 2,48(3H,s), .2., 97 (lH,d, J=5, 4Hz) , 4,19-4, .23 (2H, m) , 4,33(lH,d,J=7,8Hz), 4,95(lH,s), 5,21(1H,d,J=5,8Hz),. 5,27- 5,31(2H,m), 5,42-5,47(3H,m), 5,58(1H,d,J=17,5Hz), 5,96- 6, 04 (2H,m) , 6,11 (1H, t, J-8,8Hz) , . .7,38 (1H, d, J=8,3Hz) , 7,44(2K,t,J=7,3Hz), . 7,57(1H,t,J=7,3Hz), 7,65 (lH, dd, J=8,3Hz, 2,5Hz) ,. . 8,13 (2H, d, J=7,3Hz) , 8,53(lH,d,J=2,5Hz: . 22

Fase 2.: (IS, 2S,3R, 4S, SR, 8R, 9S, 10R, 13.S) -4-acetòxi-2-benzoil-oxi-5, 20-epoxi-l-hidr.ox.i-9,10- (2-propenilidenodioxi)tax-11--en-13-il(2R,3S)-3-(ter.-butoxícarbonilamino)-3-(5-cloro-2--piridil)-2-hidroxipropionato .Realizando a técnica da fase 2 do Exemplo 1, mas utilizando como matéria-prima (material) o composto obtido na fase 1 anterior obteve-se o composto do titulo. RMN-1:! (400 MHz, ÇDC13,· TMS) δ: 1.2 6(3H,s), 1,22-1, 65(2H,m), ' l,43(9H,s), l,49(3H,s), 1,64(3H,s).,. 1,74(3H,s), 1,75-2,09(2H,m), 2,30-2,39(2H,m), 2,33(3H,s), 2,94(lH,d,J=4,9Hz), 4,18(1H,d,J=5,3Hz), 4,22 (lH,d, J=8.,3Hz) ,- 4,32 (1H, d, J=8, 3Hz) , 4,61(lH,s largo)., 4,92(2H,m), 5,24(1H,d,J=6,3Hz), 5,30(1H,d,J=6,8Hz), 5,36( 1H> d, J-9, 3H.z) , 5,46 (1H, d, j=10, 5Hz) , 5,58 (ÍH, d, J-17,5Hz) , 5,87 (lH,d, J=9,3Hz) ,. 5,96-6, 05 (2H,m) , 6,11 (1H, t, J=7,8Hz.) , 7,39(1H,d,J=8,3Hz)7,47(2H,t,J=7,3Hz), 7,60(1H,t ,J=7,3Hz),' 7,69 (1H, dd, j=8,3Hz , 2,4Hz) ,· , 8,12 (2H, d, j=7,3Hz) , 8,5l'(lH,d, J-2,4Hz)

Fase 3 : (IS, 2S, 3R, 4S, 5R, 8.R) 9S, 10R, 13S) -4-acetoxi-2-benzoiÍ-oxi-5,.20-epoxi-l-hidroxi-9,10- [(IS) -2- (morfo.lino) etilidenodi-oxi]tax-ll-en-13-il(2R,3S)-3-(ter.-butoxícarbonilamino)-3-(5--cloro-2-piridil)-2-hidroxipropionato 0 composto do titulo obteve-se realizando a técnica da fase ·3. do Exemplo 1, mas .. utilizando como matéria-prima (material) o composto obtido na fase 2 anterior.

Ponto de fusão: 146-150 °C RMN-'H (400 MHz., CDC13, TMS) δ: 1.2 6 (3H,.s ) , 1,20-1,72 (2H,m), l,43(9H,s), 1,4.8 (3H, s)., 1,63(3H,s), 1,73(3H,s), 1, 75-2,03(2H,m), 2,33(3H,s) , 2,30- 2,38 (2H,m) , 2,59-2,69 (4H,m) , : 2., 72 (1H, dd, J=5,4,13,2Hz) , 23 2,79(lH,dd, J=3,9,13,2Hz) , 2,92 {1H, d, J=4,9Hz ) 3,74(4H,t,J=4,9Hz),. 4,12(1H,d,J=7,9Hz), 4., 22 (1H, d, J=8,8Hz ) , 4,32 (lH,d, J=8,8Hz) , 4,59 {1H> a largo)., 4,91(2H,m), 5,05(lH,t,J=4,4Hz) , 5,24(1H,d,J=6,8Hz)/ 5,35(1H,d, J=9,3Hz) , 5,87 (1H, d, J=9, 8Hz) , 5,99 (1H, d, J=4,9Hz) , 6-, 10 {1H, t, J=8,0Hz) , 7,3 9 (1H, d, J=8, 3Hz) , 7,47 (2H, t, J=7,3Hz) , 7,60 (1H, t, J=7, ,3Hz) 7,69(1H,dd,J=8,3Hz,2,4Hz), 8,12(2Ή,d,J=7,3Hz), .8,50 (lR,d, J=2,'5Hz)

Análise elementar (para C48H62ClN3Oi4 · H20) .

Calculado: C, 60,15; 11,6,73; N, 4,38; Cl, 3, 70 Encontrado: C, 60,15; H, 6,74;. N, 4,-20; Cl, 3, 63 (Exemplo 3)

Fase 1: (IS,2S,3R,4S,5R,8R,9S,10R,13S)-4-acetoxi-2-benzoil- oxi-5,20-epoxi-l-hidroxi-9,10-(2-propenilidenodioxi]tax-11--en-.13-il (2R, 3S) -3- (ter. -butoxicarbonilamino) -3- (5-fluoro-2--piridil)-2-triisopropilsililpxipropionato O composto do titulo obteve-se realizando a técnica da fase 1 do Exemplo 1, mas utilizando (3R,4S)-1-{ter.-butoxi- 24 carbonilo) --4- (5-fluoro-2-piridÍlo) -3-triisopropilsililoxi-2--azetidinona em vez de. (3R, 4S}—1-(ter..-butoxicarbónilo) -4-.(5--metoxi-2-piridil)-3-triisopropilsililoxi-2-azetidinona FíMM-1H (400 MHz, CDCl3, TMS) δ: 0, 87-0,94 (2lH,m) , 1,20-1, 70 (2H,m) , l(31(3H,s')f l,41(9H,s), 1,52 (3H, s ) 1, 65 (3H, s)·, X, 82.(3H, s) , 1,75-2,07 (2H, m) , 2,26- 2.32 (2H,m) , 2,49(3H,s) , 2,97 (1H, d, J=5,4Hz) , 4,19-4,23 (2H.,m), 4.33 ( TH, d, J=8Hz) , 4,96 (1H, s) ,... 5,21(1H,d,J=5,9Hz), 5,27- 5,32 (2H,m) , 5,43-5,49 (3H,m) , 5,58 (lH,d,-J=17,5Hz) , 5,96- 6, 04 (2H,m) , 6., 12 {1H, t, J=8Hz) , 7,36-7,47 (4H,m) , 7,57 (lH,t, J=7,3 Hz) , 8,13 (2H,d, J=7,3Hz) , 8,43 (1-H, d, J=2,4Hz)..

Fase 2 ; (IS, 2S, 3R, 4:S, 5R, 8R, 9S, 10R, 13S) -4-acetoxi-2-benzoil-oxi-5,20-epoxi-l-hidroxi-9,10-(2-propenilidenodioxi)tax-11--en-13-il (2R, 3S) -3- (ter., -bu.toxicarbonilamino) -3- (5-f.luoro-2- -piridil)-2-hidroxipropionato ,

Realizando a técnica da fase 2 do Exemplo 1, mas utilizando como matéria-prima (material) o composto obtido na fase 1 anterior obteve-se o composto do título. RMN-1H (400 MHz, CDC13, TMS.) δ: 1,27 (3H, s)', .1,20-1,68 (2H,m) ,' l,44(9H,s), l,49(3H,s)., 1,64 (3H, s) , 1,74 (3H,s), 1,7.5-2,05 (2H,m) , 2,30-2,39 (2H,m) , 2,34(3H,s), 2,93 (lH,d,J=4,9Hz), 4,18(1H,d,J=6,8Hz) , 4,23(1H,d,J=8,3Hz), 4,33(lH,d,J=8,3Hz), 4,62(1H,d,. J=2,5Hz), 4,90-4,92 (2H,m) , 5,24 (1H, d, J=5, 8Hz) , 5,30 (1H, d, J=6, 8Hz) , 5,37 (1H, d, J=9, 3Hz) , 5,4 6 (1H, d, J=10,2Hz) , . 5., 58 (1H, d, J=17Hz) , 5,90(lH,d,J=10,2Hz), 5,96-6,05(2H,m), 6,10(1H,t,J=7,8Hz), 7,40-7,49 (4H,m) , '1 7,60 (1H., t, J=7,3Hz) , 8,12 (2H, d, J=7,3Hz) , 8,41(1H,s) .

Fase 3 : (IS, 2S, 3R, 4S, 5R, 8R, 9S, 10R, 13S) -4-acetoxi-2-b.enzoil- oxi-5, 20-epoxi-l-hi.droxi-9,10- [ (IS) - (2-morfolino) etilidenodi- 25 oxi]tax-ll-en-13-il(2R,3S)-3-(ter.-butoxicarbonilamino) -3-(5--fluoro-2-piridil)-2-hidroxipropionato O composto do titulo obteve-se realizando a técnica da fase 3 do Exemplo 1., mas utilizando como matéria-prima (material) o composto obtido na fase 2 anterior.

Ponto de fusão: 148-152 °C RMN-1H (400 MHz, CDC13, TMS) δ: 1,2 6 (3H, s) , 1,20-1, 69(2H,m) , 1,43(SH, s) , . l,48(.3H,s) , 1,62 (3H, s) , 1, 72(3H, s) , 1,75-2,02 (2H,ir.) , 2,33(3H,s), 2,30- 2,39 (2H,m) , 2,59-2,. 69 (4H,m) , ' .2,71 (1H, dd, J=5, 4,13,2Hz) , 2,79(lH,dd,J=3,9,13,2Hz), 2,92(1H,d,J=4,9Hz), 3,74(4H,t,J=4,9Hz), 4,12(1H,d,J=7,3Hz), 4,22(1H,d,J=8,3Hz), .4,32(1H,d,J=8,3Hz), 4,60(lH,s largo), 4,90-4,92(2H,m), 5,04 (.lH/t,: J=4 ,'9Hz) , 5,24 (1H, d, J=6, 8Hz) , . 5, 36 (1H, d, J=9,3Hz.) , 5,89(1H,d,J=9,8Hz),· 5,99(lH,d,J=4,9Hz), 6,09(lH,t,J=8,0Hz), 7,42-7,49 (3H,m) , 7, 60(1H,t,J=7,3Hz), 7,60(1H,t,J=7,3Hz), 8, 12 (2H,d, J=7,3Hz) , 8,4 0 (1H, s) .

Análise elementar (para C48H62FN3O14· H20) . .Calculado: C, 61,19; H,6, 85; N, 4,46; F,2,02 Encontrado: C,61,16; B,6,85; N,4,36;F,2,05 (Exemplo 4}

(1S, 2S, 3.R, 4S, 5R, 8R, 93,10R, 13S) -4-3θθ1οχί-2^βηζοϋοχί-9,10--[(IS)-2-(dimetilamino)etilidenodioxi]-5,20-epoxi-l-hidroxi-tax-ll-en-13-il(2R,3S)-3-(ter.-butoxicarbonilamino)-2-hidro- 26 xi-3- (5-metoxi-2-pirxd.il) propionato 0. composto do titulo obteve-se realizando a. técnica da fasè' 3 do Exemplo 1, mas utilizando, como . matéria -prima (material) o composto obtido na fase 2 do Exemplo 1 e dimetilamina (uma solução 2M em metanol) em vez de morfolina. RMN-1K (400 MHz, CDC13, TM3) δ:

7,34(lH, d,J~8,8Hz), 8,12(2H,d,J=7,8Ήζ), 7,23(lH,dd,;J=3,0,8,3Hz) , . 7,47(2H,t,J-7,8Hz), 7,60(1H,t,J=7,8Hz) 8,22 (1H, d, J=3> 0Hz) . (Exemplo 5)

(IS,2Ξ,3R,4S,5R,8R,9S,10R,13S)-4-acetoxi-2-benzoiloxi-9,10--[(IS)-2-(dimetilamino)etilidenodioxi]-5,20-epoxi-l-hidroxi-tax-ll-en-13-il(2R,3S)-3-(ter.-butoxicarbonilamino)-3-(5- . -fluoro-2-piridil)-2-hidroxipropionatò . 0 composto do titulo obteve-se realizando a técnica da fase 3 do Exemplo 1, mas utilizando como matéria-prima 27 (material) o composto obtido na fase 2 do Exemplo 3 e dimetilamina (uma solução 2M em metanol) em. vez de mprfolina. RMN-1H (400 MHz, CDCI3, TMS) δ: 1,26 (3H, s) , 1,20-1,70 (2H,m) , l,43(9H,s), l,48(3H,s), 1, 62 (3.H, s) , 1,73( 3H, s) , 1,75-2,01 (3H,rn) ,· 2,33(3H,s), 2,33 (6H, s) , . 2,32-2,39(2H,m), , 2,·6β (1H, dd, J=5, 4,13, 2Hz) , 2,74(lH,dd,J=4,0,13,2Hz), 2,93(1H,d,J=4,9Hz), 4,12(1H,d,J=7,3Hz), 4,22(1H,d,J=8,3Hz), 4,32(1H,d,J=8,3Hz), 4,90-4., 92 (2H,m) , 5,02 (1Η, t, J=5,4Hz).5,25 (1H, d, j=6, 8Hz), 5,36 (1H, d, J=6, 8Hz) , 5,90 (1H, d, J=8-, 8Hz) , . 5,99 (1H, d, J=4,9Hz) , 6, 09{1H,t,J=8,1Hz), 7,42-7,49 (4H,m) , . 7, 60(1Η,t,J=7,3Hz), 3,12 (2H, d, J=7,3Hz)· , 3,41 (lH,s) . ''' (Exemplo.. 6)

Fase 1: (IS, 2S, 3R, 4S, 5R, 8R, 9S,10R,13S)-4-acetoxi-2-benzoil- oxi-5,20-epoxi~l~hidroxi-9,10-(2-propenilidenodioxi)tax-11--en-13-il(2R,3S)-3-(ter.-butoxicarbonilamino)-3-(3-fluoro-2--piridil)-2-triisopropilsililòxipropionato 28 Q composto do titulo obteve-se realizando a técnica da fase 1 do Exemplo 1, mas utilizou-se (3R,43)-1-(ter.-butoxi-carbonilo)-4-(3-fluoro-2-piridil)-3-triisopropi.lsililqxi-2--azetidinona em vez de (3R,4S)-1-(ter.-butoxicaxbonilo}-4-(5--metoxi-2-piridil) -3“t.riisopropilsililoxi-2-az,etidinona. Ϊ^ΜΝ-^Ή (400 MHz, CDC13, TMS) δ: . . 0, 89-0,93 (21H,m) , ' .1,28(3H,s), l,39(9H,s), l,54(3H,s),. 1,66(3H,s), 1,82(3K,s), 1,61-1,64(3H,m) , 1, 89-1, 96 (2H,m) , 2,33-2,39(2H,m), 2,49(3H,s), 2,98(1Ή,d,J=4,8Hz) , 4,21- 4,23(2H,m), 4,36 (1H, d, J=7,8Hz) , . 4,96(2H,s largo), 5,2 0(lH, d,J=5,9Hz), 5,27(1H,d,J=6, 8Hz), 5,46(1H,d,J=9,8Hz), 5, 58 (lH,d, J=17,1Hz) , 5, 61 (1H, d, J=6,8Hz) , 5, 96-6,03 (2H,m) , 6,08-6,12(2H,m), ' 7,25-7,29(lH,m), 7,40(1H,t,J=8,3Hz), 7,47(1H,t,J=7,8Hz), 7,59(1H,t,J=7,8Hz), 8,16(2H,d,J=7,8Hz), 8,33(1H,d,7=3,4Hz).

Fase 2,: (IS, 2S, 3R, 4S., 5R, 8R, 9S, 10R, 13S)-4-acetoxi-2-benzoil- oxi-5,20-epoxi-l-hidroxi-9,10-(2-propeniÍidenodioxi)tax-11--en-13-il (2R, 3S) -3- (ter. -butoxicar.bonilamino) -3- (3-fluoro-2--piridil) -2-hidroxipropionáto. O composto do titulo obteve-se: realizando a técnica da fase' 2 do Exemple 1, mas. utilizando como matéria-prima (material) o composto obtido, na fase'1 anterior. ΕΜΝ-1:! (400 MHz, CDC13, TMS) 5: 1.30 (3H, s) , 1,41 ( 9H, s) , 1,51 (3H,.s) , l,65(3H,s), l,81(3H,s), 1,57-1, 63 (3H,m) , 1,89-1, 95 (2H,m) , 2,03-2,10 (1H,m)., 2,35 (3H, s) , ' 2,43-2,49 (lH,m) , 2,95 (1H, d, J=4,9Hz)., 4,20(1H,d,J=7,4Hz), 4,23(1H,d,J=8,8Hz}, 4,33{1H,d,J=8,3Hz), 4, 58 (lH,d, J=2,5Hz) , ' 4,92 (lH,s) , 5,24 (III, d, J=6, 4Hz ) , 5.31 (1H, d, J=6, 8Hz) , 5, 4 6 (lH,d, J=9, 8H'z) ,. 5,58 (lH,d, J=17,1Hz) , 5; 65 (1H, d, J=18,3Hz.)",. 5, 97-6, 05 (2H,m) , 6,10. (1H, t, J=8,8Hz), 29 6,21(lH,d, J=8,3Hz) . 7,29-7,32 (ΐΗ,ιίι) , 7, 43-7,49 (3H,m) , .7, 60 (1H, t, J=7,3Hz) , 8,14(2Ή, d,J=7,3Hz), 8,41 (1H, d, J=4,9Hz) .

Fase 3: (lS,2S,3R,4S,5R,8R,9S,10R,13S)-4-acetoxi-2-benzoil- oxi-5,20-epoxi-l-hidroxi-9./10- [ (IS) -2-(morfolino) etilidenodi-oxi]tax-ll-en-13-il(2R,3S)-3-(ter.-butoxicarbonilamino)-3-(3- -fluoro-2-piridil).-2-hidroxipropionato 0 composto do titulo obteve-se realizando a técnica da. fase 2 do E.xemplo 1, mas utilizando como matéria-prima (material) o composto obtido.na fase 1 anterior. RMN-1H .(400 .MHz, CDC13,· TMS) δ: 1,29 (3H,s) , 1,40( 9H, s) , l,4S(3H,s) ,. 1,61 (3K,s) , l,79(3H,s), 1,70-2,03(5H,m), . 2,30-2,44(2H,m), 2,35(3H,s), 2,61- 2,65 (4H,m) , 2,70-2:, 82 (2H.,m).,' 2,94 (lH,d, J=4,.8Hz) , 3,75(4H,t,J=4,9Hz), 4,14(1H,d,J=7,3Hz), 4,23(1H,d,J=8,3Hz), 4,33 (1H, d, J=7,8Hz),, 4,67 .(lH, s), ' 4., 92.(1H, s)", 5,05(1H,t,J-4,9Hz), ' 5,25(lH,d,J=7,3Hz), 5,65(1H,d,J=7,8Hz), 5,99(1Η,d,J=5,4Hz), 6,09(1H,t,J=7,8Hz), 6,20(1H,d,J=8,3Hz), 7,29-7,33(1Η,m), 7,43-7,49(3H,m), 7,60(1H,t,J=7,3Hz), 8,13{2H,d,J^7,3Hz), 8,40(lH,d,J=4,9Hz). . ; (Exemplo 7)

(IS,2S,3R,4S,5R,8R,9S,10R,13S)-4-acetoxi-2-benzoiloxi-9,10--[(lS}-2- (dimetilajnino) etilidenodioxi) -5,20-epoxi-l-hidroxi-tax-ll-en-13-il(2R,3S)-3-(ter.-butoxicarbonilamino)-3-(3--fluoro-2-piridil)-2-hidroxipropionato 30 O composto do título obteve-se realizando a técnica da fase 3 do Exemplo . 1, mas utilizou-se como matéria-prima (material) o composto obtido na fase 2 do Exemplo 6, e dimetilamina (solução 2M em metanol) em vez de morfolina. ΚΜΝ-^ (400 MHz, CDCI3, TMS) δ: 1,29(3H,s), 1,41{9Η,s), 1,49(3H,s) , 1, 63(3H,s), l,79(3H,s), 1, 86-2,· 08(5H,m) ,- 2, 32-2,38 (2H,m) , 2,34 (3H,s), 2,33 (cH,s) , 2,66(lH,dd,J=5,4,13,6Hz),. · 2,75(lH,dd,J=3,9,13,6Hz), 2, 94 (lH,d, J=4,9Hz) 4,14 (1H, d, J=6, 9Hz) , 4,23 (1H, d, J=8,3Hz)., 4,33 (1H, d, J=8,3Hz) , 4,68 (1H, d, J=2,9Hz)., '4,92 (1Η> s) , 5,02 (1H, t, J=4, 9Hz )·, . 5,25 (1H, d, 1=6,8Hz} , 5, 65 (1H, d,.'J=8,3Hz) 6.,Ό0 (1H, d, J= 4', 9Hz)', ' 6, 09 (1H., tJ= 7,8Hz, 6,21 (1H, d, J=8,3Hz) , 7,28-7,33(lH,m), 7,43-7,49(3H,m), 7,60(1H,t,J=7,3Hz), 8,14 (2H, d, J=7, 3Hz.) , 8,40 (lH,d, J=4,4Hz) .

31

Fase 1: (IS, 2S, 3R, 4S, 5R, 8R, 9S, 10R, 13S}-4-acetoxi~2-be.nzoil- oxi-5,20-epoxi-l-hidroxi-9., 10- (2-propenilidenodioxi]tax-6,11--dien-13-il (2R, 3S) -3- (ter,, -butoxicarbonilamino) -3-(5-metoxi--2-plridÍl)-2-triisopropilsililoxipropionato

Em 10 ml de tetra-hidrpfurano anidro dissolveu-se uma porção de 300 mg de (IS,2S,3R,4S,5R,8R,9S,10R,13S)-4-acetoxi--2-benzoiloxi-5, 20-epoxi-l,13-di-hidroxi-9,10- (2-propenilidenodioxi) tax-6,11-dieno., e misturou-se a solução resultante com 0,63 ml de hexamètildisilazida de litio (solução 1M em tetra-hidrofurano) à temperatura de -60 °C e agitou-se durante 20 minutos. À mesma temperatura ádicionou-se à solução reaccional uma porção de 5 ml de uma solução de tetra-hidrofurano contendo 280 mg de (3R,4S)-1-(ter. butoxi-carbonilo)-4-(5-metoxi-2-piridil)-3-triisopropilsililoxi-2--azetidinona, e agitou-se a mistura durante 30 minutos sob arrefecimento.com gelo.-À solução reaccional adicionaram-se uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio, e acetato de etilo para conseguir' a' separação das camadas, ,e extraiu-se a camada aquosa com acetato de etilo.. .Reuniram-se as camadas orgânicas, lavaram-se com uma solução aquosa.' saturada de' cloreto de sódio e secaram-sé depois com sulfato, de sódio anidro.. Evaporou-se o solvente sob pressão reduzida e purificou-se o. resíduo resultante por cromatografia· em coluna de gele de silica (eluição com hexano:acetato.de etilo = 5:1 (v/v)) para se obterem 530 mg do composto do titulo. RMN-il (400 MHz, CDC13, TMS) δ: 0. 87-0,93 (21H,m) , 1,29.(3H>.s ) , ' " 1,41 (9H, s) , 1,54 (3H,s) , 1, 69.(3H, s) , 1,75 (3H,s ) , 1,82 (lH,s) , 2,29 (1H, dd, J=9, 8,15,1Hz) , 2,40(1H,dd,J=8,8,15,1Hz), 2,53(3H,s), 3,13(1H,d,J=5,8Hz), 3,85 (3H, s) , 4,04 (1H, d, J=7,3Hz) , 4,30.(2H,s largo),. .4,90 (1H, d, J=3., 9Hz) , 5,20-5,23 (2H,m) , -5,28 (l.H,d, J=9, 8Hz) ,.. 5,38(1H,s), . 5,47-5,49(2H,m), , 5,60(1H,d,J=17,0Hz), 32 32 , 6, 09-6,.14 {2H,m) , 7,31 (1H, d, J=Q, 3Hz) , 5, 71 (1Η,dd, J=4,4,10,2Hz) , 5, 96-6, 06 (2H,m) 7,16(1H,dd,J=2,9,8,3Hz),

8,.26 (lH,d, J=2, 9Hz) .

Pase .2 : (IS, 2S, 3R, 4S, 5R, 8R, 9S, 10R, 13S) -4-acetoxi-2-benzoil- oxi-5,20-epoxl^l-hidroxi-9,10-[(IS)-2-(morfolino)etilidenodi-oxi] tax-6, ll-dien-13-il (2R, 3S) -3-.(ter. -butoxicarbonilamino) --3-(5-metoxi“2“piridil)“2-triisopropilsililoxlpropionato

Em: 5'ml de tetra.-hidrofurano dissolveu-se uma porção- de. 520 mg do composto obtido na fase 1 anterior, e misturòu-se a solução resultante com 5 ml de . acetona, 5 ml de água, 13 mg de tetraóxido de ósmio e.300 mg de N-metilmorfolina-N-óxido e agitou-se durante 7,5 horas à temperatura ambiente. À solução reaccional adicionaram-se. acetato de etilo e uma solução aquosa a ' 10% de . tiossulfato de sódio para . conseguir ' a separação das camadas, e , extraiu-se a .camada aquosa, com., acetato de etilo. Reuniram-se'as camadas- orgânicas, lavaram--se .com uma ;. solução , aquosa saturada de carbonato de. hidrogénio e sódio e uma. solução aquosa saturada de cloreto de sódio pela ordem descrita e secaram-se depois com sulfato de sódio anidro. Evaporou-se o solvente'sob pressão reduzida, dissolveu-se o resíduo resultante em 5 ml.de tetra-hidrofura-,no e. misturou-se depois a. .solução com 5. ml de metanol, 5 ml de água, e 1,1 g. de .metaperiodato de sódio e agitou-se durante 1,5 horas à temperatura ambiente. Λ .'solução reaccional adicionaram-se acetato de etilo e água para, conseguir a separação das camadas,· e extraiu-se a camada, aquosa com acetato de etilo.. Reuniram-se.as camadas orgânicas, lavaram--se com uma solução' aquosa saturada de cloreto de sódio e secaram-se depois com sulfato de sódio anidro.· Evaporou-se o solvente .sob pressão .reduzida, ' diss.o.lveu-se o' resíduo 33 resultante em 30 ml de etanol e misturou-se depois a solução sob arrefecimento com gelo com 0,22 ml de morfolina, 0,15 ml de ácido acético e 160 mg de cianoboro-hidreto de sódio e agitou-se durante 1 hora à temperatura ambiente. À solução reaccional adicionaram-se uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio, acetato de etilo e água para conseguir a separação das camadas, e extraiu-se. a camada aquosa com acetato de etilo.' Reuniram-se as camadas orgânicas, lavaram-se com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secaram-se depois com sulfato de sódio anidro. Evaporou-se o solvente sob pressão reduzida e purificou-se o resíduo resultante por cròmatografia em coluna de gele de sílica (eluição com hexano:acetato de etilo = 3:2 (v/v) ) para. se obterem 290 mg do . composto do título. RMN-1H . (400 MHz,..CDC13, TMS) δ:. 0,87-0, 93.(21H,m}, . 1,28 (3H,s) , l,41(9H,s), l,53{3H,s), 1,55(3H,s) , 1,73 (3H,s), l,80(lH,s), 2,26(1H,dd,J=8,8,15,1Hz), 2,'39 (1H, dd, J=9, 8,15,1Hz) , 2,53 (3H, s) , 2,60-2, 68 (4H,m) , 2,74(1H,dd,J=4,9,13,7Hz), 2,81(lH,dd,J=4,9,13,7Hz), 3,12(1H,d,J=5,4Hz), 3,7c(1H,t,J=4,8Hz), 3,85(3H,s), 3,93(lH,d,J=7,9Hz}, 4,30(2H,s), . 4,89(1H,d,J=3,9Hz), 5,02(1H,t,J=3,9Hz), 5,14(1H,d,J=7,3Hz), 5,27(1H,d,J=9,8Hz), 5,37(1H,o,J=l,5Hz), ' 5,47(1H,d,J=9,8Hz), 5,69(lH,dd,J=3,9,10,5Hz), 5,94(1H,d,J=5,3Hz), 6,07- 6,13(2E,m), 7,16(1H,dd,J=2,9,6,3Hz), , 7,30(1H,d,J=6,3Hz), 7,47(2h,t,J=7,8Hz), 7,58(1H,t,J-7,8Hz), 8,15(2Η,d,J=7,8Hz), 8,26(1H,d,J=2,9Hz).

Fase 3: (IS, 2S, 3R, 4S, 5R, 8R, 9S, 10R, 133).-4-acetoxi-2-benzoil~ oxi-5,20-epoxi-l-hidroxi-9,10-[(IS)-2-(morfolino)etilidenodi-oxi]tax-ll-en-13-il(2R,3S)-3-(ter.-butoxicarbonilamino)-3-(5--metoxi-2-piridil)-2-triisopropilsililoxipropionato 34

Em 10 ml de etanol dissolveu-se uma porção de 235 mg do composto obtido na fase 2 anterior,· e misturou-se a solução resultante com 235 mg de carvão . a 5% sobre paládio como catalisador (húmido)' e agitou-se durante 10 horas sob pressão de hidrogénio (392 kPa) Após remoção do catalisador por filtração, concentrou-se o filtrado para se obterem 230 mg do composto do título.· ΚΜΝ-1;! (400 MHz, CDC13, TMS) δ: 0., SS-0,.94 (21H,m)., l,30(3H,s), l,42<9H,s),. l,50(3H.,s), 1,60 (3H, s) , 1,79 (3H, s) , 1, 84-2,30 (7H,m) , 2,50(3H,s)·, 2,60- 2,84(4H,m), 2, 85-2, 92 (2H,m), 2, 95(1H,d,J=4,4Hz), 3,80(4H,t,J=4,4Hz) , 3,85 (3H,s), 4,17(1H,d,J=7,3Hz), 4,19.(lH,d, J=8,7Hz) , 4,33 (1H, d, J=8,3Hz) , 4,96(lH,s) , 5,10.(lH,s largo), 5,22-5,28(2H,m) , 5,40 (1H,s), 5,48(1H,d,J=10,3Hz) , 5, 96 (lH,d, J=4,9Hz) , 6,10 (1H, t, J=8,3Hz) , 7,12-7,17 (III,m) , 7,31 (lH,d.,.J=8,3Hz) , 7,45 (2H, t, J=7, 8Hz.) ,. 7,57 (1H, t, J^7,8Hz) , 8,13 (2H, d, J=7,8Hz) , 8,26,(1H, d, J=2, 9Hz) .

Fase 4 : . ;(1S, 2S, 3R, 4S', 5R, 8R, 9S, 10R, 13S) -4-acetoxi-2-benzoil- oxi-5,20-epoxi-l-hidrox.i“9,10- [ (1.S) -2- (morfolino.) etilidenodi-oxi] tax-ll-en-13-il (2R, 3S) -3-" (ter. -butoxicarbonilamino) -2-hi-droxi-3-(5-metoxi-2-piridil)propionato . Em 5 ml' de tetra-hidrofurano anidro dissolveu-se uma porção de 230 mg do composto obtido na fase 3 anterior, adicionou-se à solução resultante mediante arrefecimento com gelo '0,43 ml de fluoreto .de .tetrabutilamónio (solução 1M em tetra-hidrofurano) e agitou-se depois a mistura à mesma temperatura durante 30 minutos. À solução reaccional adicionaram-se uma solução aquosa saturada.' de cloreto de sódio· e acetato de etilo para conseguir a separação das camadas, e extraiu-se a camada aquosa com acetato de. etilo.. Reuniram-se as camadas orgânicas, .l.avaram-se .com uma solução 35 aquosa saturada de carbonato de .hidrogénio e sódio e uma solução aquosa saturada de cloreto de .· sódio respeitando a ordem descrita e secaram-se depois utilizando sulfato de sódio anidro. Evaporou-se o solvente sob pressão reduzida e purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna de gele de sílica (eluição com clorofórmio:metanol = .50:1 (v/v)) e recristalizou-se depois em solução aquosa de etanol para se obterem 110 mg do composto do título. Os dados da sua análise instrumental coincidiram com os do composto obtido na fase 3 do Exemplo 1. 35 (Exemplo 9)

Fase 4

Fase 1: (IS, 2S, 3R,4S,5R,8R,9S,10R,13S)-4-acetoxi-2-benzoil- 36 oxi-5,20-epox±-l-hidroxi-9,10-(2-propenilidenodioxi]tax-6,11-' -dien-13-il (2R, 3S) -3- (ter.-butoxícarbonilamino) -3-(3-fluor'o--2-piridil)-2-triisopropilsililoxipropionato O composto do ' titulo' obteve-se realizando a técnica da fase 1 do Exemplo 8, mas utilizando· a (3R,4S)-1-(ter. butoxicarbonil) -4- (3-f.luoro-2-piridil) -3-triisopropilsilil-oxi-2-azetidinona em .vez da (3R,4S)-l~(ter. butoxicarbonil)--4-(5-metoxi-2-piridil)-S-triisopropilsililoxi-^-azetidinona RMN-1H (400 MHz, CDCI3, IMS) δ: 0,88-0,92 (2.1H,m) , 1,33 (3H, s) , 1, 38 (9H, s) , 1,56(311,s), 1,76(3H,s), 2,41-2,45(2H,m) , 2,51(3H,s), 3,14(lH,d,J=5,8Hz),; 4,06 (lH,.d, J=7,8Hz) , 4,33(2H,s), 4,90 (1H, d, J“4,4IIz) , 4,94(1H,d,J=2,4Hz), 5,19-5,22 (2H,m), 5,48 (lH,d,J=10,3Hz), 5,. 58-5, 64 (2H,m) , 5, 70, (1H, dd, J=10, 3,4., 4Hz) , 5, 36-6,14 (5H,m) , 7,2 6-7,30(lH,m), 7,41 (1H,t, J=8,5Hz) , 7,49(2H,t,J=7,5Hz) , 7,59(1H,t,J=7,5Hz} , 8,17(2H,d,J=7,5Hz) , 8^40(1H,d,J-4,4Hz) .

Fase 2: (IS,2Ξ,3R,4S,5R>8R,9S,10R,13S)-4-acetoxi-2-benzoil- oxi-9,10-[(IS)-2-(dimetilamino)etilidenodioxi]-5,20-epoxi-l-. -hidroxitax-6., ll-dien-Í3-il (2R, 3S) -3- (ter . -butoxicarbonilami-no)-3-(3-fluoro-2-piridil}-2-triisopropilsililoxipropionato O composto do titulo obteve-se realizando a técnica da fase 2 do Exemplo 8/ mas utilizando o composto obtido na fase 1 ;anterior como matériâ-prima (material), e dimetilamina (solução 2M ,em metanol) em vez .de morfolina. λΜΝ-1?; (400 MHz, CDCI3, TMS) 5: 0,87-0,92(2lH,m), 1,32(3H,s), 1,38(9H,s),' l,55(3H/s), 1,57 (3H, s) , . 1,75 (3I-I, 3} , 2,39(5H,s), 2,42-2,45 (2H,m) , 2,51(3H,3), 2,66(1H,dd,J=5,1,13,2Hz), 2,74 (l'H,dd,J=4,2,13,2Hz) , 3,14 (1H, c, J=5,8Hz ) , 4,01(1H, d,J=7,9Hz), 4,32(2H,s), 4,90-4,94 (2H,m) , 37 5, 00 <lH,t, J=4,9Hz) , 5,15 (1H, d, J=7,9Hz) , 5, 63 (1H, d,.J=9,8Hz),, 5, 69 (1H, dd,J=9,8,4,4Hz) ,' 5, 95 (1H, d, J=5, 8Hz) ·, 6,.07-6,13 (3H,m) , 7,26-7,28 (lH,rti) , 7,41 (1H, t, J=9,2Hz) , 7,49 (2H, t, J=7,5Hz) , 7,59(1H,t,J=7,5Hz), 8,17(2H,d,J=7,5Hz), 8,40( 1Ή, d,J-4,4Hz) .

Fase 3: (IS,2S,3R,4S,5R,8R, 9S,10R/13S)-4-acetoxi-2-benzoil-oxi-9,10-[(IS)-2-(dimetilamino)etilidenodioxi]-5,20-epoxi-l--hidroxitax-ll-en-13-il(2R,33)-3^(ter.-butoxicarbonilamino)--3-(3-fluoro-2-piridil)-2-triisopropilsililoxipropionató O composto do título obteve-se realizando a técnica da fase 3 do Exemplo 8, mas ' utilizando como matéria-prima (material) p-composto obtido na fase 2 anterior. RKN--H (4 00 MH.z, CDC13, TMS) ò: 0,83-0,93(21H,m;, l,35(3H,s), 1,38(9H,s), 1,52(3H,s), 1,56- 2,07 (5H,m) , 1, 62 (3H, s) ,- 1, 81 (3H, s) , 2, 34-2, 43 (2H,m) , 2,38(6H,s), 2,49(3H,s), 2,66(lH,dd,J=5,4,13,2Hz), 2,74 (!H,dd, J=3,4,13,2Hz) , 2,98 (1H, d, J=5,4Hz) , :.4,17 (lH,d, J=7,3Hz),. 4,22 (111, d, J-7,8Hz) , 4,36(1H, d, J=8,3Hz) , 4,96 (2H,s) , 5,00 (lH,t, J=4,8Hz) , 5,22 (1H, d,CT=7,3Hz) , 5, 60(1H,d,J=8,8Hz), 5, 98(1H,d,J=4,9Hz), 6,08-6,10(2H,m) , 7,26-7,28(lH,m), 7,40(1H, t, J=9,2Hz), 7,48(2H,t,J=7,5Hz),: 7,59 (lH,t, J-7,5Hzj , 8,16 (2H,.d, J^7,.5Hz) , 8,40 (1H, d, J=3, 9Hz) .

Fase 4: (IS, 2S, 3R, 4S, 5R, 8R, 9S, 10R, 13S)-4-ace.toxi-2-benzoil-oxi-9,10-{(IS)-2-(dimetilamino)etilidenodioxi]-5,20-epoxi-l--hidroxit.ax-ll-en-13-il (2R, 3S) -3- (ter. -butoxicarbonilamino)--3-(3-fluoro-2-piridil)-2-hidroxipropionato 0 composto do título obteve-se realizando a técnica da fase 4 do. Exemplo . 8, mas utilizando como matéria-prima (material), o composto obtido na fase 3.anterior. Os dados da 38 sua análise instrumental coincidiram com os do composto obtido na fase 3 do Exemple 7. (Exemplo 10)

(IS, 2S, 3R, 4S, 5R, 8R., 9.S.,.10R,, 1.3S) -4-acetoxi-2-benzoiloxi-5,20--epoxÍ-l-hidroxi-9,10- (2-propenilidenodioxi] tax-6, l.l-dien-13- . -il (2R, 3S) -3- (ter .-butoxicarbonílamino) -3- (3-fluoto-2-piri-dil)-2-hidroxipropionato O composto .do titulo obteve-se realizando a técnica da fase 2 do Exemplo 1, mas utilizando como matèria-prima (material) o composto obtido na fase 1 do Exemplo 9. ΗΜΝ-^ (400 MHz, CDC13, TMS) δ: 1/29 (3H, s) , 1, 39 (9H, s) , 1,54 (3H, s) , 1, 60 (3H, s)., 1,74 (3H,s) , 1, 91 (1H, s) , 2,35-2,48.{2H,m)., 2,41(3H,s), 3,11 (1H, d, J=5, 4Hz) , 3,92 (1H, s largo), 4,03 (lH,d, J=7, 6Hz.) , . 4,27 (1H, d, J=8,1Hz) , 4,33(1H,d,J=8,2Hz) , 4,67 (lH,s largo) , 4,87 (1H,d,J=4,1Hz) , 5,22-5,25 (2H,m) ,. -5, 48 (1H, d, J=10,8Hz)., 5, 60 {1H, d, J=17,3Hz) , 5, 62-5, 64(lH,m), 5,69(1H, dd,J=4,1,10,3Hz), 5,98-6,13£4H,m), 6,21(1H,d,J—8,3Hz), 7,29-7,33(lH,m), . . 7,43-7,50(3H,m), 7,60 (1H, t, J=7,3Hz.) , .8,15 (2H, d, J=7, 6Hz) , 8,39 (1H, d, J=4, 6Hz) . 39

(IS,25,3R,.45,5R,8R,95,lOR,13S)-4-acetoxi-2-benzoiloxi-9,10-- [ (15) -2- (.dimetilamino) etilidenodioxi] -5,20-epoxi-l-hidroxi-tax-6, ll-dien-13-il (2R, 3S) -3- (ter. -butoxicarbonílamino). -3- (3--fluoro-2-piridil)-2-hidroxipropionato O composto do titulo obteve-se realizando a técnica da fase 2 do Exemplo 1, mas utilizando como matéria-prima (material) o composto obtido ria fase 2 do Exemplo 9. ΕΜΝ-1?: (4 00 MHz, CDC13, TMS) δ: 1,28(3 H,s), 1,39(9H,s), 1,52(3H,s), 1,57(3H,s), l,72(3H,s), 1,8 6 (1H, s.) , 2,27-2,46 (2K,m) , . ' 2,39(6H,s) , 2,41(3H,s) , 2,69(1H,dd,J=5,2,13,2Hz), 2,79(1H,dd,J-4,2,13,2Hz), 3,11 (1H.,d, J=5, 9Hz) :, 3, 98 (lH,d, J=7, 6Hz) , 4,28 (1 H, c, J=8, lllz) , 4,33(lK,d,J-8,3Hz), 4,66(1K,d,J=2,5Hz), 4,87(1H,d,J=4,1Hz), 5,0.2 (lH,dd, J=4,.2,4,8Hz)., 5,17 (1H, d, J=7 , 3Hz) , 5,62 (1H, d, J=8,5Hz) , 5, 68 (1H, dd, J=4,1,10", 3Hz) , 5,96(l.H,m), 6,10 (2H,m) , 6,20 (lH,d, J=6, 9Hz) , 7,27-7,60 ( 6II,m) , 8,15(2H,d,J-7,3Hz), 8,40(1H,d,J=4,6Hz). 40 (Exemplo 12)

Fase 1: 1.13,28,3R, 4S, 5R, 8R, SS,10R, 13S) -4-acetoxi-2-benzoii oxi-5,20-epoxi-1-hidroxi-9, 10-(2-propenilidenodioxi) tax-6,11--dien-13-il (2R, 33) —.2-benziloxi-3- (ter. -butoxicarbonilamino) --3-(3-fluoro-2-piridil)propionato O composto do título, obteve-se realizando a técnica da fasè 1 do Exemplo 8, mas utilizando a (3R, 4S) -3-benz.iloxi-l--(ter. butoxicarbonil)-4-(3-fluoro-2-piridil)-2-azetidinona em vez da (3R,4S)-1^(ter. butoxicarbonil)-4-(5“metoxi-2“piri-dil) “3-trii.sopropilsililoxi-2^azetidinona. RMN-1H (400 MHz, CDC13, TMS) δ: 1,32 (3H,s), 1,39 (9H, s) , 1, 56 <3H,.s)., l,59.(3H,s) , 1,77 (3H,s) , 1,85(1H,s), 2,31 (3H,s), 2,39(2H,m), 3,13(1H,d,J=6,1Hz), 4,07 (lH,d, J=7,6Hz) , 4,18 (1H, d, J=12,0Hz) ., .. 4,31(3H,m), 4,68 (1H, d, J=12,2Hz) , 4,90 {1Ή, d, J=4,2Hz) , .5,23 (2H, t, J=7., 1Hz) , 5,48 (1H, d, J=íl, 0Hz) ·, 5,5S(2H,m) , '5,70 (lH,dd, J=4,4,10,5Hz) , 6,02 (lH,m) , 6,13 (2H, d, J-10,2Hz)',... ' 6,26 (ÍH, d, J“9, 0Hz) , 6,88(2H,d,J=7,1Hz), : 7,19(3H,m), 7,29(2H,t,J=6,8Hz), 7,49(2H,t,J=7,8 Hz), 7,60(1H,t,J=7,3Hz), 8,16(2H, d,J=7,3Hz), 8,42(lH,m). 41

Fase 2 : (IS, 2S, 3R, 4S-, 5R, 8R, 9S, 10R, 13S) -4-acetoxi-2-benzoil oxi-9,10-[(IS)-2-(dimetilamino)etilidenodioxi]-5,20-epoxi-l--hidroxitax-6, ll-dien-13-11 (2R, 3S) -2-benziloxi-3- (ter.-bu-toxicarbonilamino)-3-(3-fluoro-2-piridil)propionato 0 composto dõ titulo obteve-se realizando a técnica da fase 2 do Exemplo 8, mas utilizando como matéria-prima (material) o composto obtido na fase 1 anterior, e dimetilamina (solução 2M em metanol) em vez de morfolina. RMN-1H (400' MHz, CDC13, TMS) 5: 1, 26(3H,s), 1,39(9H,s), 1,54(3H,s), 1,57(3H,s), 1,75(3H,s), 1, 82 (1H,s), 2,31(3H,s), 2, 36-2, 39 (2E,n) , 2,38(6H, s), 2,71(lE,dd,J=5,2,13,2Hz), : 2,77(1H,dd,J=4,1,13,2Hz), 3,12(1H,d,J=5,6Hz), 4, 02(1H, d,J=7,8Hz), 4,19(1H, d,J=12,2Hz), 4,31(2H,m;, 4,36(1H, d,J=2,9Hz), 4,68(1E, d,J-12,7Hz), 4,88 (lH, d, J=4,’ÍHz) , 5,01 (1E, t, J=4,7Hz) , 5,16 (1H, d, J=7,8Hz) , 5, 60(1H, d,J=8,8Hz), 5, 69(1E,dd,J=4,2,1C,3Ez) 5,93(1H,d;J=5,6Hz), 6,11(2H,m), " 6,23(1H,d,J=9,3Hz), 6, 88(2E,d,J=6,6Hz), . 7,16-7,31(5E,m), 6,48(1H,t,J=7,8Hz), 7,59 (lH, t, J=7,3Hz) 8,15 (2H, dd, J=l, 5, 7,1Hz) , 8,41(1H,d,J=2,9Ez).

Fase 3: (1S,2S,3R,43,5R,8R,3S,1CR,133)-4-£cetoxi-2-benzoil oxi-9,10-[(ÍS)-2-(dimetilamino)etilidenodioxi]-5,20-epòxi-l--hidroxitax-ll-en-13-il(2R,3S)-3-(ter,-butoxicarbonilamino)--3-(3-fluoro-2-piridil)-2-hidroxipropionato O composto do título obteve-se realizando, a1 técnica da fase 3 do Exemplo 8, mâs utilizando o composto obtido na fase 2 anterior como matéria-prima (material). Os seus dados da análise instrumental'coincidiram com os do composto obtido na fase 3 do Exemplo 7. 42 (Modelo experimental·1)

Por via subcutânea transplantaram-se era murganhos fibrossarcomas Meth A de murganhos (nome da linha: Balb/c) e, 6, 8 ou 10' dias (ou . apenas decorridos 6 dias) depois dó transplante, administrou-se por injec.ção endovenosa cada um dos compostos dissolvido em um solvente misto constituído por êtano.1, Tween 80 e glucose a 5% [5:5:90 (v/v) ] . Dissecou-se cada um· dos animais.no, 17° dia para examinar o peso tumoral, os números de plaquetas e a toxicidade renal.. Utilizaram-se seis murganhos em cada grupo.

Utilizando a fórmula seguinte calculou-se o efeito antitumoral. {1-(peso tumoral do grupo tratado com um composto/peso tumoral do grupo tratado com o solvente)} x 100 0 número de plaquetas foi definido por (plaquetas do grupo tratado com um composto./plaquetas do grupo tratado com o solvente) x 100.

Os achados de toxicidade renal·· registaram-se como "alterado" aquando da detecçâo de uma alteração como a da coloração ("fading") por observação macroscópica, durante a dissecção ou aquando da detecçâo de uma alteração como precipitação da substância hialina em gotas no citoplasma das células tubulares renais por inspecção histológica. 43

I

Quadro 1

Composto Dose (irig/Kg) Efeito anti--tumoral (S) Números plaquetas de (%) Achados de toxicidade renal Exemplo 51 da JP-A-9-12578 1,5 x 3 75 37 Alterado Exemplo 70 da JP-A-9-12578 0,98 x 3 78 . 55 Alterado Exemplo 81 da 2,2 x 3' 62 58 Alterado JP-A-9-12578 Exemplo 121 da 0,43 x 3 75 . . 57 Alterado JP-A-9-12578 Composto B 32,4 x. Ia’ 33 142 Não alterado Composto B 22,5 x 1 69 124 a): Três' mortes entre 6 animais utilizados (Modelo experimental 2)

Por via subcutânea transplantaraiti-se melanomas. 316/BL6 para murganhos- (C57BL/6), e 4 dias depois administrou-se cada; um dos· compostos. Kc caso de administração endovenosa, administrou-se o composto de fórmula A dissolvendo-o em um solvente misto"constituído por etanoi, Tween 80 e glucose a 5% [5:15:80 (v/v)], e o. composto do Exemplo 7 dissolvendo-o no : mesmo solvente misto de- [5:5:90 (v/v) ] .' No caso. de administração' por via. oral.,, administrou-se cada . um dos compostos ,suspendendo-o em., uma solução aquosa de carboximetilcelulose sódica a. 0,5%. Determinou-se o peso corporal cada 2 ou 3 dias .após,a administração, e dissecou-se cada um dos animais decorridos 15 dias do transplante para quantificar o peso tumoral.' 0 efeito antitumoral calculou^se. utilizando a fórmula seguinte. {l-{peso tumoral do grupo tratado com um composto/peso tumoral do grupo tratado com o solvente)} x 100

Em cada grupo ut.ilizaram-se seis murganhos. 44

Quadro 2

Dose (mg/Kg) Via de administração Efeito anti--tumoral (%) Composto (A) 180,0 Endovenosa 95,-7 600,0 oral 6,2 Composto (H) 20,0 Oral . . 97,4 13,3 '· Oral 90,5 Composto Exemplo 7 11, 9 . Endovenosa 95,5 7,9 .' Endovenosa 91,5 11,9 Oral .97,4 7,9 ' Oral. 91,5 (Modelo experimental 3) ·

Metabolismo no citocromo'P450 de micros somas humanos

Bissolveu-se cada uma das. ' amostras consideradas em acetonitrilo/água (1:1> v/v> até uma concentração de 5C0 μΜ, e misturou-se a solução resultante com microssomas hepáticos humariós (Xenotech LLC) e outros componentes como diversas coenzimas e uma solUção tampão e deixa-se desenvolver a reacção metabólica à temperatura de 37 °C. A solução reaccional era constituída por um tampão de um fosfato (0,076 M; concentração final, em seguida utilizar-se-á a mesma), a amostra, a apreciar (10 μΜ) ,. microsspmas hepáticos humanos (1 mg/ml) , glucose 6-fosfato (10 .-mM)', glucose 6-fosfato desidrogenase (1 unidade/ml) , cloreto de magnésio (4 mM) e nicotinamida.adenina dinucleótido fosfato reduzido (β-NADPH, 1 iriM) , tendo-se utilizado em 'uma. reacção . 500 μΐ dessa solução. Nesse . caso,. incubou-se , previamente . a ' solução reaccional sem β-NADPH à temperatura de 37 °C durante 2 minutos e .iniciou-se seguidamente a reacção adicionando uma solução aquosa de β-NADPH (50 mM,.10 μΐ). 45

Interrompeu-se a reacção adicionando 1 ml de acetonitrilo arrefecido era gelo 1, 2' ou 5 minutos após o início da reacção. Nêsse contexto, preparou-se uma amostra de 0 minutos após o início da reacção adicionando água em vez da solução aquosa do β-NADPH' e adicionou-se imediatamente 1 ml de acetonitrilo. A cada uma; dessas amostras adicionou-se uma porção de 100 μΐ de uma' substância' como padrão interno e centrifugou-se a solução rèaccional durante 15 minutos. Injectou-se o sobrenadante resultante em . um dispositivo de cromatograf ia liquida de' alta resolução (HPLC)' para determinar' a concentração da amostra em estudo..A quantidade reduzida a partir da concentração no minuto 0. do,- inicio da reacção· foi considerada como- ai quantidade'· produzida do metabolito (nmole/mg proteína). Representando graficamente a quantidade do metabolito. produzido, contra o tempo rèaccional e levando a cabo uma .regressão linear pelo método dos -mínimos quadrados, calculou-se'. a partir do. grau . de- inclinação . a quantidade do metabolito \ produzido por. minuto [taxa metabólica, constante k (nmol/min/mg proteína)] A partir da constante k assim obtida que representa a taxa metabólica {nmol/min/mg' proteína) , ca.lculou-se a depuração ("clearance") específica do. fígado (CLint) utilizando a fórmula seguinte CLint (ml/min/peso corporal em Kg) = k x (peso do fígado em g) / (Kg peso corporal) x (45 mg de proteínas microssomais)/(peso do fígado em g), em que o peso do, fígado por .1 Kg de peso corporal é 20 g. 46 . A partir da CLint calculou-se. também, a ' clearanee hepática (CLh) de, acordo ..com o modelo de "compartimentos bem agitados" ("well-stirred model") (J.· Pharmacol. Exp. Ther., 283, 46-58, 1997) CLh (ml/miri/peso corporal em Kg) = Q x CLint/(Q + CLint) , 0 valor teórico da biodisponibilidade (F) calculou-se a partir- da CLh utilizando a fórmula- seguinte. F = (1-CLh/Q) . . Além disso, calculou-se o valor teórico : da biodisponibilidade,do composto não transformado utilizando a fórmula 1-F.

Quadro 3

Composto (B) Ex . l Ex. ' 3 Ex. 7 Constante da taxa metabólica (mnol/min/mg proteínas) ' 0,59 0,15 0,02 0,08 CLint (ml/min/Kg). . . 53,1 13,5 1,8 . 7,2 Valor teórico F do composto não transformado 0,27 0, 60 0,92 0,74 Os resultados estão apres entados na Fig. 1 e no Quadro 1. Os valores . teóricos de F da forma não transformada dos compostos de acordo com a presente:, invenção são maiores do qúe 0,27, o valor teórico de F da forma não transformada do composto controlo (composto de fórmula B) , o que significa que ' se . suprime os limites de variabilidade da biodisponibilidade, se pode realizar mais rigorosamente a separação entre os limites terapêuticos. e os limites : da toxicidade e conseguentemente pode ocorrer administração oral. 47 (Modelo experimental 4)

Por via endovenosa ou oral administrou-se o composto de fórmula (B) a um macaco utilizando uma dose individual, e avaliaram-se as alterações na sua concentração sanguínea para calcular a AUCo.,». A AUCo_« representa a área sob a curva da concentração sanguínea ' versus o tempo relativa às concentrações de um fármaco.no sangue durante um período de tempo desde cerca do momento da administração (hora.0) até um período de témpó infinito e pode calcular-se de acordo com o processo (regra trapezoidal) descrito em Kiyoshi Yamaoka e Yusuke Tanigawara, Yakubutsu Sokudoron Nyumon (A Guide to 'Pharmacokinetics)’,- pág. ' 1Γ6-117. Além disso., calçulou-se. a ratão entre a AUC no momento da administração oral e a AUC no momento da administração endovenosa .como. BA. [bioavailability (biodisponibilidadè) ]-. oral. 0 ensaio do composto de fórmula B realizou-se utilizando indivíduos diferentes de macacos para a administração endovenosa, e oral, e o ensaio do composto do Exemplo 7 realizou-se utilizando os mesmos indivíduos de um grupo de 4 macacos para a, administração endovenosa e oral para calcular o valor médio da AUC.

Animal: Macaca irus fêmea; Processo de administração (composto de fórmula (B) ) [via endovenosa] EtOH:Tween 80:glucose a 5% = 5:5:90, [oral] solução 0,1N de HCl, (composto do Exemplo 7) [via endovenosa] β-0γϋ-3ΒΕ7 a 10% (pH = 3,5 em soro fisiológico), [via oral] tampão de um acetato a 4 0 mM (pH 4,0)

Quadro 4 AUC0„» (ng.h/ml) ' .Dose ' {mg/Kg) Endovenosa Oral BA Oral Composto B 1,6, .394,1 28,1 7,1 . Composto do Exemplo 7 . .1,8 993,8 620,6 . 62,4 48

APLICABILIDADE INDUSTRIAL

Qualquer composto de acordo com a presente invenção que se aperfeiçoou no que respeita à sua toxicidade não exibiu toxicidade renal. Através da sua administração a murganhos qualquer composto de acordo com a presente invenção apresentou elevado efeito antitumoral. Como qualquer composto de acordo com a presente invenção apresenta um grande valor teórico F da sua forma não transformada, os limites da variabilidade da biodisponibilidade são suprimidos o que permite a separação dos limites terapêuticos dos da toxicidade. Um composto de acordo com a presente invenção exibiu excelentes características de absorção por via oral em macacos. Consequentemente um composto de acordo com a presente invenção pode utilizar-se como agente antitumoral que se pode administrar por via,oral.

Lisboa, 30 de Setembro de 2008

Claims (13)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto representado pela seguinte fórmula geral

(na qual R1 representa um grupo dimetilaminometilo ou um grupo morfolinometilo e R2 representa um átomo de halogéneo ou um grupo alcoxi com la 6 átomos de carbono) ou um seu sal.

2. Composto ou um seu sal de acordo com a reivindicação 1., em que R2 representa um grupo metoxi ou um átomo de flúor.

3. Composto de acordo com a reivindicação 1., representado pela fórmula seguinte

ou um seu sal.

4. Medicamento que contém um composto ou um seu sal descrito em uma qualquer das reivindicações 1. a 3.. 2

5. Agente antitumoral que contém um composto ou um seu sal descrito em uma qualquer das reivindicações 1. a 3.

6. Composto representado pela seguinte fórmula geral

(na qual R3 representa um grupo dimetilaminometilo, um grupo morfolinometilo ou um grupo vinilo, R4 representa um grupo hidroxi que pode comportar um grupo protector e R5 representa um átomo de halogéneo ou um grupo alcoxi com 1 a 6 átomos de carbono, significando a porção da linha tracejada entre a posição 6 e a posição 7 da estrutura parcial representada pela seguinte fórmula i

que a ligação da referida porção pode tornar-se uma ligação dupla) ou um seu sal.

7. Composto de acordo com a reivindicação 6., representado pela seguinte fórmula geral

3 {na qual R6 representa um grupo triisopropilsililo, um grupo butildimetilsililo terciário, um grupo trietilsililo ou um grupo benzilo) ou um seu sal.

8. Composto de acordo com a reivindicação 6., representado pela seguinte fórmula geral

(na qual R7 representa um grupo triisopropilsililo, um grupo butildimetilsililo terciário, um grupo trietilsililo ou um grupo benzilo) ou um seu sal.

9. Composto de acordo com a reivindicação 6., representado pela seguinte fórmula geral

(na qual R8 representa um grupo triisopropilsililo, um grupo butildimetilsililo terciário, um grupo trietilsililo ou um grupo benzilo) ou um seu sal.

10. Utilização de um composto ou de um seu sal descrito em uma qualquer das reivindicações 6. a 9., para produzir um 4 composto ou um seu sal descrito em uma qualquer das reivindicações 1. a 3..

11. Utilização de acordo com a reivindicação 10., de um composto representado pela seguinte fórmula geral

(na qual R5 representa um grupo triisopropilsililo, um grupo butildimetilsililo terciário, um grupo trietilsililo ou um grupo benzilo) ou um seu sal, para a produção de um composto representado pela fórmula seguinte

ou um seu sal.

12. Utilização de acordo com a reivindicação 10., de um composto representado pela seguinte fórmula geral 5

(na qual R7 representa um grupo triisopropilsililo, um grupo butildimetilsililo terciário, um grupo trietilsililo ou um grupo benzilo) ou um seu sal, para a produção de um composto representado pela fórmula seguinte

ou um seu sal.

13. Utilização de acordo com a reivindicação 10., de um composto representado pela seguinte fórmula geral

(na qual R8 representa um grupo triisopropilsililo, um grupo butildimetilsililo terciário, um grupo trietilsililo ou um 6 grupo benzilo} ou um seu sal, para a produção de um composto representado pela fórmula seguinte)

ou um seu sal. Lisboa, 30 de Setembro de 2008