PT1215213E

PT1215213E - Derivados bicíclicos de aminopirazonas, a sua preparação e as preparações farmacêuticas que os contenham

Info

Publication number: PT1215213E
Application number: PT01403227T
Authority: PT
Inventors: Tony Verbeuren; Alain Rupin; Marie-Odile Vallez; Guillaumede Nanteuil; Philippe Gloanec
Original assignee: Servier Lab
Priority date: 2000-12-14
Filing date: 2001-12-13
Publication date: 2007-03-30
Also published as: SI1215213T1; AU781614B2; EA004678B1; FR2818277B1; NZ516129A; KR20020048302A; HU0105328D0; EP1215213B1; CN1209363C; US6686358B2; CY1106376T1; MXPA01012895A; PL351199A1; EP1215213A2; DK1215213T3; EA200101204A1; AR031662A1; AU9723001A; HK1047101A1; BR0106129A

Description

1 DESCRIÇÃO "Derivados bicíclicos de aminopirazonas, a sua preparação e as preparações farmacêuticas que os contenham" A invenção presente diz respeito a novos derivados bicíclicos de amino-pirazinonas, ao processo para a sua preparação, às composições farmacêuticas que os contenham bem como à sua utilização como inibidores de proteases de serina aparentadas com a tripsina.

Uma dessas proteases de serina, a trombina, é o enzima chave da coagulação e desempenha um papel central na patologia das tromboses venosas e arteriais, nomeadamente por causa do seu forte poder de auto amplificação da cascata da coagulação (F. Toti et al., Sang, Thrombose, Vaisseaux 1992, 4, 483-494 e T.M. Reilly et al., Blood Coagulation and Fibrinolysis 1992, 3, 513-517). A inibição directa e específica da trombina é mais eficaz e apresenta menos riscos de hemorragia do que o tratamento pela heparina. Existem actualmente alguns inibidores directos da trombina, mas essas substâncias peptídicas apresentam o inconveniente de não serem actívas por via oral. Já foram descritos na literatura derivados que mimetizam péptidos, apresentando uma actívidade anti 2 trombotica por via oral. É nomeadamente c caso dos derivados do ácido borónico descritos nas patentes EP 293 831, EP 471 651, EP 615 978 e EP 792 883, e dos derivados descritos nos pedidos de patente WO 94 29336 e WO 95 23609.

Era portanto especialmente interessante sintetizar novos inibidores de proteases a serina, para se aumentar a potência e a selectividade dos compostos já descritos na literatura. A actividade desses novos compostos é tornada objectiva pelo aumento dos diferentes tempos de coagulação.

Para além disto, esses compostos são activos por via oral.

Mais especificamente, a invenção presente diz respeito a compostos com a fórmula (I) :

na qual: • Rx represente um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo (Cx-Cs) linear ou ramificado, substituído eventualmente com um ou mais grupos, idênticos ou diferentes, 3 seieccionados de entre arilo, heteroarilc, cicloalquilo e heterocicloalquilo,

represente um ciclo saturado com 4 a 7 membros podendo conter, para além do átomo de azoto, um ou dois heteroátomos seieccionados de entre 0, S, e grupos -NR3, em que R3 represente um átomo e hidrogénio ou um grupo alquilo (Ci~C6) linear ou ramificado, • n represente um inteiro tal que 1 < n < 6, • R2 represente um qualquer dos seguintes grupos: a:

s<K ^ MH NHj b:

em que: 4 V X represente um grupo CH ou um átomo de azoto, V Rí represente um átomo de hidrogénio ou de halogéneo, V R5 represente qualquer um dos seguintes grupos ♦ RaNHCOHN- no qual Ra represente um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo (Ci~C6) linear ou ramificado, ♦ RbS02NHC0(NH)p-, no qual Rb represente um grupo alquilo (Ci-C6) linear ou ramificado e p represente 0 ou 1, ♦ HON=C(NH2)-, HN=C(NHOH)-, ♦ Rc- (CH2)m-Y- no qual: Y represente CH2, 0, S ou RaN, m represente um número inteiro tal que 0 < m < 3,

Rc represente um heterocicio com 5 a 7 membros, saturado ou insaturado, contendo entre 1 e 4 heteroátomos seleccionados de 5 entre oxigénio, azoto ou enxofre, contendo eventualmente o heterociclo referido uma ou mais funções carbonilo, e sendo eventualmente substituído, com um ou mais substituintes, idênticos ou diferentes, que sejam átomos de halogénec, grupos alquilo (Ci—Cg) lineares ou ramificados, alcoxilo (Ci-Cg) lineares ou ramificados ou amino (ele próprio substituído eventualmente com um ou dois grupos alquilo (Ct-Cg) lineares ou ramificados), ou c: um sistema bicíclico com a fórmula

na qual: X é tal como foi definido acima e B, em conjunto com os átomos de carbono a que se liga, forma um grupo arilo ou um heterociclo com 5 ou 7 elementos, saturado ou insaturado, contendo entre 1 e 4 heteroátomos seleccionados de entre oxigénio, azoto ou enxofre, contendo eventualmente o heterociclo referido pelo menos uma função carbonilo e sendo eventualmente substituído, com um ou mais substituintes idênticos ou diferentes, que sejam átomos de halogéneo, grupos alquilo (Cb-Ce) linear ou ramificado, alcoxilo (Cq-Cg) linear ou ramificado ou amino (eventualmente substituído com um ou dois grupos alquilo (Ci—C6) linear ou ramificado), os seus isómeros, os seus N-óxidos, bem como os seus sais de adição a um ácido ou a uma base aceitáveis do ponto de vista farmacêutico.

Entre os ácidos aceitáveis do pcnto de vista farmacêutico, podem citar-se a título não limitativo os ácidos clorídrico, bromídrico, sulfúrico, fosfónico, acético, trifluoroacético, láctico, pirúvico, malónico, succínico, glutárico, fumárico, tartárico, maleico, cítrico, ascórbico, oxálico, metanossulfónico, benzenossulfóníco, canfórico, etc.

Entre as bases aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, podem citar-se a titulo não limitativo, o hidróxido de sódio, o hidróxido de potássio, a trietilamina, a tercbutilamina, etc.

Por grupo arilo, deve entender-se fenilo, bifenililo ou naftilo, sendo cada um destes substituintes substituído eventualmente com um ou mais substituintes idênticos ou diferentes, seleccionados de entre halogéneo, alquilo (Ci-C6) linear ou ramificado (eventualmente substituído com um grupo hidroxilo, carboxilo, amino (ele próprio eventualmente subs títuído com um ou dois grupos alquilo 0 1 1 o (30 linear ou ramificado) ou carbamoíl o (ele próprio eventualmente substituído com um ou dois grupos alquilo (Ci-C6) linear ou ramificado) ), alcoxilo 0 1 o / linear ou ramificado, hidroxilo, trihalogenoalquilo (Ci~C6) linear ou ramificado, trihalogenoalcoxilo (Ci-Cs) linear ou ramificado, amino (eventualmente substituído com um ou dois grupos alquilo (Ci-Cg) linear ou ramificado), alquilcarboniloxilo (Ci-C6) linear ou ramificado, carboximetoxilo e carbamoilmetoxilo (eventualmente substituído em N com um ou dois grupos alquilo (Ci-Cg) linear ou ramificado).

Por grupo heteroarilo, deve entender-se um grupo aromático mono- ou bicíclico com entre 5 e 12 membros contendo um, dois ou três heteroátomos seleccionados de entre oxigénio, azoto ou enxofre, devendo entender-se que o heteroarilo pode eventualmente ser substituído com um ou mais grupos, idênticos ou diferentes, seleccionados de entre halogéneo, alquilo (Ci-Cg) linear ou ramificado (eventualmente substituído com um grupo hidroxilo, carboxilo, amino (ele próprio eventualmente substituído com um ou dois grupos alquilo (C:—Ce) linear ou ramificado) ou carbamoílo (ele próprio eventualmente substituído com um ou dois grupos alquilo (Cx-C6) linear ou ramificado)), hidroxilo, alcoxilo (C x—C 6) linear ou ramificado, trihalogenoalquilo (C i—C 6) linear ou ramificado, fenilo, amino (eventualmente substituído em N com um ou diversos grupos alquilo (Ci-C6) linear ou ramificado), carboximetoxilo e carbamoilmetoxilo (eventualmente substituído com um ou dois grupos alquilo (Cb-Ce) linear ou ramificado).

Entre os grupos heteroarilo, podem citar-se a título não limitativo os grupos tienilo, piridilo, furilo, pirrolilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridazinilo.

Por grupo cicloalquilo, deve entender-se um grupo hidrocarbonado mono- ou bicíclico, saturado ou insaturado, com entre 3 e 12 membros, sendo ponto assente que o ciclo pode ser substituído eventualmente com um ou diversos grupos, idênticos ou diferentes, seleccionados de entre halogéneo, alquilo (Ch-Cg) linear ou ramificado, alcoxilo (Ci—C6) linear ou ramificado, hidroxilo, trihalogenoalquilo (Ci-Cg) linear ou ramificado, amino (substituído eventualmente com um ou diversos grupos alquilo (Ci-Ce) linear ou ramificado) e arilo.

Entre os grupos cicloalquilo, podem citar-se a título não limitativo os grupos ciclopentilo, ciclohexilo, indanilo, tetrahidronaftilo.

Por grupo heterocicloalquilo, deve entender-se um grupo mono- ou bicíclico, saturado ou insaturado, com entre 4 e 12 membros, contendo um, dois ou três heteroátomos seleccionados de entre oxigénio, azoto ou enxofre, esuado entendido que o heterociclo pode ser eventualmente substituído com um ou diversos grupos, idênticos ou diferentes, seleccionados de entre halogéneo, alquilo (Ci~ Ce) linear ou ramificado, alcoxilo (Ci-Cg) linear ou ramificado, hidroxilo, trihalogenoalquilo (Ci-Cg) linear ou - 9 - ramificado, amino (substituído eventualmente com um ou diversos grupos alquilo (Ci~C6) linear ou ramificado), arilo e diarilmetilo.

Entre os grupes heterocicloalquilo, podem citar-se a titulo não limitativo os grupes azetidinilo, pirrolidinilo, piperidilo, dihidrociclopenta[b]piridílo.

Os compostos preferidos com a fórmula (I) são aqueles para os quais n é igual a 1. 0 ciclo

tal como se definiu para a fórmula (I) é de preferência um grupo pirrolidinilo.

Quando N, representar um ciclo de pirrolidina, a configuração desse ciclo é de preferência S.

Os grupos Ri preferidos são os grupos alquilo (Ci-Cg) lineares ou ramificados substituídos com um ou diversos grupos arilo ou heteroarílo.

Num cenário ainda mais preferencial, os grupos Ri preferidos são os grupos alquilo (C x—C e) lineares ou ramificados substituídos com um ou diversos grupos fenilo 10 ou piridinilo. A título muito preferencial, os grupos Ri são os grupos (2,2-difenil)etilo ou (2-piridinil)etilo.

Quando R2 representar um grupo b, X representa de preferência um grupo CH e R5 de preferência um grupo HN=C (NHOH) - ou Rc-(CH2)m-Y· Neste caso, Rc será de modo ainda mais preferido um grupo piridina, pirrolidinona, imidazole ou imidazolina.

Quando R2 representar um sistema bicíclico c, este será de preferência tal que quer X represente um grupo CH e, neste caso, B represente um ciclo de morfolinona, isoxazole ou pirrole, quer X represente um átomo de azoto e, neste caso, B represente um ciclo fenilo.

Os compostos preferidos da invenção são: (6S)-N-{4-[amino(hidroxi-imino)metil]benzi1}-3-[(2,2-difenil-etil)amino]-4-oxo-4,6,7,8— tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-6-carboxamida, (6S) -N-{4-[amino(hidroxi-imino)metil]benzil}-4-oxo-3-{(2-(2-piridinil)etil]amino}-4,6,7,8— tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-6-carboxamidA, (6S)-N- [2-({[amino(imino)metil]amino)oxi)etil]-3-[(2,2-diFenil-etil)amino]-4-oxo-4,6,7,8- 11 tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-6-carboxarriida, (6S)-4-oxo-N-[(3-oxo-3,4-dihidro-2H-benzoxazin-8-il)metil]-3-{[2-(2-piridinil)etil]amino}-4,6,7,8-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-6-carboxamida, ( 6S)-4-oxo-3-{[2-(2-piridinil)etil]amino}-N-[2-(2-piridinil-metoxi)benzil]-4,6,7,8-tetrahidropirrolc[1,2— a]pirazina-6-carboxamida, (6S)-4-oxo-N- (2-[(2-oxo-3- pirrolidínil)oxi]benzil}-3-{[2-(2-piridinil)etil]amino}- 4.6.7.8- tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-6-carboxamida, (6S) -N-[2-(4,5-dihidro-lH-imidazol-2-ilmetoxi)benzil]-4-oxo-3-{[2-(2-piridinil)etil]amino}- 4.6.7.8- tetrahidropirrolo[1,2-a]pírazina-6-carboxamida, (6S) -N-[2-(lH-imidazol-2-ilmetoxi)benzil]-4-oxo-3-{[2-(2-piridinil)etil]amino}-4,6,7,8-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-6-carboxamida, (63) -N-[lH-indol-6-ilmetil)-4-oxo-3-( [2-(2-piridinil)etil]amino}-4,6,7,8-tetrahidropirrolo[1,2— a]pirazina-6-carboxamida A invenção contempla igualmente o processo de preparação dos compostos com a fórmula (I) caracterizado por se reduzir um composto com a fórmula (II): 12 12

(Π) COjBn na qual A tem o mesmo significado do que na fórmula (I), Ρχ representa um grupo protector da função amino e Bn representa o grupo benzílo, por intermédio de um agente redutor apropriado, para se obter o composto com a fórmula (III):

na qual A, Ρχ e Bn têm os mesmos significados que anteriormente, composto com a fórmula (III) do qual se transforma a função hidroxilo em metoxilo e depois em função ciano, por reacções clássicas da química orgânica, para se obter, depois de uma desprotecção da função amino, o composto com a fórmula (IV):

(IV) 13 na qual A e Bn têm o mesmo significado que anteriormente, composto com a fórmula (IV) que se faz reagir com cloreto de oxalilo para se obter o composto com a fórmula (V) :

O COjBn (V) na qual A e Bn têm o mesmo significado que anteriormente, composto com a fórmula (V) que se faz reagir com um composto com a fórmula (VI): (VI)

Rx-NH2 na qual Ri tem o mesmo significado que na fórmula (I), para se obter o composto com a fórmula (VII):

O C02Bn na qual A, Bn e Ri têm o mesmo significado que anteriormente, composto com a fórmula (VII) que se transforma em seguida por hidrogenação catalítica no composto com a

14 fórmula (VIII

R.HN

0 COjH

(VUD na qual A e R], têm o mesmo significado que anteriormente, composto com a fórmula (VIII) que se transforma em seguida, por hidrogenação catalítica em meio alcalino, no composto com a fórmula (IX):

O COjH m na qual A e Ri têm o mesmo significado que anteriormente, composto com a fórmula (IX) que se faz reagir com um composto com a fórmula (X):

(X) na qual n e R2 têm c mesmo significado que na fórmula (I), para se obter, após uma desprotecção eventual, o composto com a fórmula (I), 15 composto com a fórmula (I) que se transforma eventualmente no N-óxido correspondente, que se purifica, caso seja necessário, por uma técnica clássica de purificação, do qual se separam, caso tal se pretenda, os isómeros, por uma técnica clássica de separação, e que se transforma, se tal se pretender, nos seus sais de adição a um ácido ou a uma base aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Os compostos com a fórmula (II) são obtidos por benzilação dos ácidos correspondentes.

Os compostos da invenção presente, para além do facto de que são novos, apresentam propriedades farmacológicas especialmente interessantes. São inibidores potentes de proteases de serina aparentadas com a trípsina, que apresentam uma importante selectividade em relação à trombina, relativamente a outras proteases de serina da coagulação e da fibrinólise.

Estas propriedades tornam estes composto úteis para o tratamento das anginas estáveis ou não, das doenças de origem trombótica e/ou dando origem a complicações trombóticas, para o tratamento ou a prevenção do enfarte do miocárdio e das tromboses venosas ou arteriais, bem como para o tratamento das doenças vasculares e cardiovasculares tais como a aterosclerose, a arterite, a doença venosa, e para o tratamento de todas as doenças que implicam' ema 16 formação e/ou uma actividade da tronabina.

Eles podem igualmente ser utilizados em associação terapêutica com um trombolítico. A invenção diz também respeito às composições farmacêuticas que contenham como principio activo um composto com a fórmula (I) com um ou mais excipientes inertes, não tóxicos e apropriados. Entre as composições farmacêuticas de acordo com a invenção, podem citar-se mais em especial aquelas que convêm para a administração por via oral, parentérica (endovenosa ou subcutânea), nasal, os comprimidos simples ou drageifiçados, os comprimidos sublinguais, as gélulas, as tabletes, os supositórios, os cremes, as pomadas, os géis dérmicos, as preparações injectáveis, as suspensões bebíveis, etc. A posologia útil é adaptável consoante a natureza e a severidade da afecção, a via de administração bem como a idade e o peso do paciente. Esta posologia varia entre 1 e 500 mg por dia, numa ou em diversas parcelas.

Os exemplos seguintes ilustram a invenção mas não a limitam de nenhum modo.

As matérias-primas utilizadas são produtos conhecidos ou preparados de acordo com modos operatórios já conhecidos. 17

As estruturas dos compostos descritos nos exemplos forma determinadas de acordo com as técnicas especorofotométricas habituais (infravermelho, RMN, espectrometría de massa). EXEMPLO 1: (6S)-N- {4-[amino(hidroxi- imino)metil]benzil}-3-[(2,2-difeniletil) amino]-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidropirrolo[1,2-g]pirazina-6-carboxamida

Adicionam-se, a 2,5 mmoles de ácido (6S)-3-[(2,2-difeniletil)amino]-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-6-carboxílico obtido de acordo com o processo descrito no pedido FR 9907538 em 50 mL de dimetilformamida anidra, 0,9 g de cloridrato de 4-(aminometil)-Ν' -hidroxibenzenocarboximidamida obtida de acordo com o processo descrito em Synth. Comm. (28(23), 4419-4429, 1998), 1,3 mL de di-isopropiletilamina, e 0,4 g de hidroxibenzotriazole. Depois da solubilização, adicionam-se 0,9 g de tetrafluoroborato de O-benzotriazolil-tetrametiliso-urónio, e mantém-se a mistura reaccional de um dia para o outro sob agitação. Após uma filtração e uma evaporação, retoma-se o resíduo em acetato de etilo. Lava-se a fase orgânica, seca-se, filtra-se e evapora-se. Obtém-se o produto pretendido sob a forma de um sólido depois de se purificar o resíduo por cromatografia sobre sílica gel, utilizando como eluente uma mistura de diclorometano/metanol (95/5).

Espectro de massa: [ME]+ m/z = 522

EXEMPLO 2: (6S) -N- {4- [amino (hidroxi- imino)metil]benzil}-4-oxo-3-{(2-(2-piridinil) etil] amino}-· 4,6,7,8-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-6-carboxamida

Obtém-se o produto pretendido de acordo com o processo descrito no exemplo 1, substituindo c ácido {6S) — 3-[(2,2-difeniletil)amino]-4-oxo-4,6,7,8- tetrahídropirrolo[1,2-a]pirazina-6-carboxílico pelo ácido (6S)—3—{ [2 - (2-piridinil)etil]amino}-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidropirrolo-[1,2-a]pirazina-6-carboxílico.

Microanálise elementar: %c %H %N CctãL· cul â c2o 61,73 5, 63 21, 91 Determinado 62,03 5,50 21, 78 EXEMPLO 3 : Dicloridrato da_(6S) -N- [2- ({[amino(imino)metil]amino}oxi)etil]-3-[(2,2-difeniletil)amino]-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidropirrolo[1,2-g]pirazina-6-carboxamida

Passo _A: (6S)-N-[2-({[(terc- butiloxicarbonilamino)(terc-butiloxicarbonilimino)metil]-amino}oxi)etil]-3-[(2,2-difeniletil) amino]-4-oxo-4, 6,7,8-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-6-carboxamida

Obtém-se o produto pretendido de acordo com o processo descrito no exemplo 1, substituindo o cloridratc· 19 de 4-(aminometil)-Ν'-hidroxibenzenocarboximidamida pela N-(2-aminoetoxi)-Ν', Ν' '-(di-terc-butiloxicarbonil)guanidina.

Passo_B: Dicloxidrato de (6S) -N- [2- ({jamino (imino)metil]amino}oxi)etil]-3-[(2,2-difenil-etil) amino]-4-OXO-4,6, 7,8-tetrahidropirrolo[1,2-ajpirazina-6-carboxamida

Adicionou-se a 1,8 mmoles do composto descrito no passe precedente em 20 mL de diclorometano anidro, 10 rtiL de uma solução de ácido clorídrico, 4 M em dioxano. Agita-se o conjunto de um dia para o outro à temperatura ambiente. Depois de se evaporarem os solventes, retoma-se o resíduo em água. Filtra-se a solução e líofiliza-se para se obter o produto pretendido.

Espectro de massa: [M+E?] m/z = 475

Os exemplos seguintes foram preparados seguindo o processo descrito no exemplo 1, utilizando as matérias-primas correspondentes. EXEMPLO 4: (6S)-4-oxo~N~[(2-oxo-2,3-dihidro-lH- pirrolo[2,3-c]piridin-5-il)metil]-3~{[2-(2-piridinil)etil]amino}-4,6,7,8-tetrahidropirrolo[1,2-g]pirazina-6-carboxamida EXEMPLO 5 : (6S) -4-oxo-N- [ (2-OXO-2,3-dihidro-llf- imidazo[4,5-c]piridin-6-il)metil]-3-{[2-(2- piridinil)etil]amino}-4,6,7,8-tetrahidropirrolo[1,2-g]pirazina-6-carboxamida EXEMPLO 6: (6S)-4-oxo-N- [(2-oxo-2,3-dihidro-lH- benzimidazol-4-il)metil]-3-{[2-(2-piridinil)etil]amino}- 4.6.7.8- tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-6-carboxamida EXEMPLO 7 : (6S) -4-oxo-Jf- [ (2-oxo-2,3-dihidro-lH- benzimidazol-5-il)metil]-3-{[2-(2-piridinil)etil]amino}- 4.6.7.8- tetrahidropirrolo[1,2-a3pirazina-6-carboxamida EXEMPLO 8: (6S)-4-oxo-N- [(2-oxo-3,4-dihidro-2fl- benzoxazin-8-il)metil] -3-{ [2- (2-piridinil)etil]amino}-· 4.6.7.8- tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-6-carboxamida EXEMPLO 9: (6S)-4-oxo-y- Ç(2-oxo-3,4-dihidro-2H- 1,3-benzoxazin-8-il)metil]-3-{[2-(2-piridinil)etil3amino}- 4.6.7.8- tetrahidropirrolo[1,2-g]pirazina-6-carboxamida EXEMPLO 10: (6S)-4-oxo-3-{[2-(2- piridinil)etil3amino}-17- [2- (2-piridinilmetoxi)benzil] - 4.6.7.8- tetrahidropirrolo[1,2-g]pirazina-6-carboxamida EXEMPLO 11: (6S)-N-{2-[(2,4-dioxo-l,3-tiazolidin-5-il)metil]benzil}-4-oxo-3-{[2-(2~piridinil)6til3amino}- 4.6.7.8- tetrahidropirrolo[1,2-g]pirazina-6-carboxamida EXEMPLO 12: (6S)-N-{2-[(2,4-dioxo-l,3-tiazolidin-5-il)oxi]benzil}-4-oxo-3-{[2-(2-piridinil)etil] amino}- 21 4.6.7.8- tetrahidropirrolo[1,2-α]pirazina-6-carboxaiaida EXEMPLO 13: (6S)-A-oxo-N- {2-[(5-oxo-4,5-dihidro- 3g-l,2,4-triazol-3-il)oxi]benzil}-3-{[2-(2-piridinil)etil]amino}-4,6,7,8-tetrahidropirrolo[1,2-α] pirazina-6-carboxamida EXEMPLO 14: (6S)-4-oxo-N-{2-[(2-OXO-3- pirrolidinil)oxi]benzil}-3-{[2-(2-piridinil)etil]amino}- 4.6.7.8- tetrahidropirrolo[1,2-g]pirazina-6-carboxamida EXEMPLO 15: (6S)-N- [2-(4,5-dihidro-lH-imidazol-2-ilmetoxi)benzil]-4-oxo~3-{[2-(2-piridinil)etil]amino}- 4.6.7.8- tetrahidropirrolo[1,2-a3pirazina-6-carboxamida EXEMPLO 15: (6S)-N- [2-(lfl-imidazol-2- ilmetoxi)benzil]-4-oxo-3-{[2-(2-piridinil)etil]amino}- 4.6.7.8- tetrahidropirrolo[1,2-α]pirazina-6-carboxamida

ESTUDO FARMACOLÓGICO DOS DERIVADOS DA INVENÇÃO EXEMPLO A: Inibição da trombina e das proteases de serina da fibrinólise

Para avaliar ín vitro a actividade inibitória dos produtos da invenção sobre a trombina humana (Sigma, aotividade específica 3230 UNIH/mg), adicicnou-se fibrinogénio humano purificado (4 mM, Stago) (Fg) a uma quantidade determinada de trombina (0,7 nM) previamente incubada com, minutos). ou sem, o inibídor a testar (2 00 C, 10

Para avaliar in vitro a selectividade destes produtos em relação à plasmina, aplicou-se o mesmo protocolo à plasmina humana purificada (2 nM, Stago), utilizando-se como substrato um péptido paranitroanilinado: <Glu-Phe-Lys-pNA (0,50 mM, S 2403, Kabi).

Diluem-se os inibidores, os enzimas e os substratos no mesmo tampão (tampão fosfato 0,01 mM, pH 7,4, contendo cloreto de sódio 0,12 M e soro de albumina bovina a 0,05 I), e depois distribuem-se pelos poços de uma microplaca em poliestireno a volumes de 50 μΐ. A fibrina formada pela trombina ou pelo paranitroanilido libertado por acção da protease de serina é medida espectrofotometricamente a 405 nm passados 15 a 30 minutos de reacção a 20°C.

Quando se fez este teste, demonstrou-se nomeadamente que a concentração em nM que inibia 50 % da actividade enzimática (Ciso) da trombina, em relação à observada no controlo sem produto, é igual a 141 nM para o composto do exemplo 1, 313 nM para o composto do exemplo 2, 4 nM para o composto do exemplo 3, 136 nM para o composto do exemplo 10, 12 nM para o composto do exemplo 15, 140 nM para o composto do exemplo 17 e 22 nM para o composto do exemplo 18. 23 -

Os compostos da invenção são, por outro lado, muito selectivos em relação à trombina, relativamente a outras proteases de serina da fibrinólise (plasmina, tPa e u P a) . EXEMPLO B : Actividade anti-coagulante, medida do tempo de trombina e tempo de cefalina activada em seres humanos

Para avaliar a actividade anti-coagulante dos compostos da invenção, determinaram-se os tempos de trombina (TT) e os tempos de cefalina activada (TCA), em amostras de plasma humano. Utilizou-se um coagulómetro ST4. Retoma-se em água destilada um plasma pobre em plaquetas, liofilizado. Leva-se a cabo a determinação do TT com o reagente Thrombine Prest, e a do TCA com o reagente Céphaline PTT Automate. 0 inibidor ou o solvente (10 μΤ) é adicionado ao plasma (90 μΤ), e depois incuba-se durante 2 minutos a 37°C. Adicionam-se então 100 μ! de Thrombine Prest (TT) ou de Céphaline PTT Automate (TCA) e ínicia-se o cronómetro.

Nestas condições, o TT é da ordem de 18 segundos, o TCA é da ordem de 12 segundos. A actividade de um antagonista é avaliada pela sua capacidade de prolongar o TT e o TCA relativamente ao testemunho. O efeito dos inibídores é expresso pela concentração em μΜ, à qual o 24 tempo de coagulação é multiplicado por 2 (Ctt2).

Os compostos da invenção produziram prolongamentos dos tempos de coagulação que eram muito importantes, e exemplificam-se alguns Ctt2 na Tabela 1 adiante:

Tabela 1

Exemplo TT Ctt2 (μΜ) TC A Ctt2 (μΜ) 2 3, 6 20 3 0,10 \—[ t—1 15 0,19 1, 91 18 0,18 3,07

EXEMPLO DE COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA Fórmula de preparação para 1000 comprimidos doseados a 10 mg:

Composto do exemplo 1 10 g

Hidroxipropilcelulose 2 g

Amido de trigo 10 g

Lactose 100 g

Estearato de magnésio 3 g

Talco 3 g

Lisboa, 20 de Março de 2007

Claims

1 REIVINDICAÇÕES 1. Compostos com a fórmula (I):

na qual: ·· Rx represente um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo (Ci~C6) linear ou ramificado, substituído eventualmente com um ou mais grupos, idênticos ou diferentes, seleccionados de entre arilo, heteroarilo, cicloalquilo e heterocícloalquilo, represente um ciclo saturado com 4 a 7 membros podendo conter, para além do átomo de azoto, um ou dois heteroátomos seleccionados de entre 0, S, e grupos -NR3, em que R3 represente um átomo e hidrogénio ou um grupo alquilo (Ci—Ce) linear ou 2 ramificado, • n represente um inteiro tal que 1 < n < 6, • R2 represente um qualquer dos seguintes grupes: a: NH II »0^ -Cv, NH NHj b:

em que: V X represente um grupo CH ou um átomo de azoto, V R4 represente um átomo de hidrogénio ou de halogéneo, V R5 represente qualquer um dos seguintes grupos ♦ RaNHCOHN- no qual Ra represente um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo 3 (Cι—C6) linear ou ramificado, ♦ RbSCdNHCO (NH) P-, no qual Rb represente um grupo alquilo (Cl-Cg) linear ou ramificado e p represente 0 ou 1, ♦ HON=C(NH2) HN=C(NHOH)-, ♦ Rc-(CH2) m~~Y~ no qual: Y represente CH2, 0, S ou RaN, m represente um número inteiro tal que 0 < m d 3, Rc represente um heterociclo com 5 a 7 membros, saturado ou insaturadc-, contendo entre 1 e 4 heteroátomos seleccionados de entre oxigénio, azoto ou enxofre, contendo eventualmente o heterociclo referido uma ou mais funções carbonilo, e sendo eventualmente substituído, com um ou mais substituintes, idênticos ou diferentes, que sejam átomos de halogéneo, grupos alquilo C6) lineares ou ramificados, aicoxilo Cg) lineares ou ramificados ou amino 2 próprio substituído eventual mente com um ou dois grupos alquilo (C2 —C6) lineares ou ramificados), 4 ou c: um sistema bicíclico com a fórmula B na qual: X é tal como foi definido acima e B, em conjunto com os átomos de carbono a que se liga, forma um grupo arilo ou um heterociclo com 5 ou 7 elementos, saturado ou insaturado, contendo entre 1 e 4 heteroátomos seleccionados de entre oxigénio, azoto ou enxofre, contendo eventualmente o heterociclo referido pelo menos uma função carbonilo e sendo eventualmente substituído, com um ou mais substituintes idênticos ou diferentes, que sejam átomos de halogéneo, grupos alquilo {Ci~Cç) linear ou ramificado, alcoxilo (Ct-Ce) linear ou ramificado ou amino (eventualmente substituído com um ou dois grupos alquilo (Ci-Ce) linear ou ramificado), os seus isómeros, os seus N-cxídos, bem como os seus sais de adição a um ácido ou a uma base aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, estando assente que por grupo arilo, deve entender-se fenilo, bifenililo ou naftilo, sendo cada um destes substituintes substituído eventualmente com um ou mais substituintes idênticos ou diferentes, seleccionados 5 de entre halogéneo, alquilo (Cx-C6) linear ou ramificado (eventualmente substituído com um grupo hidroxilo, carboxílo, amino (ele próprio eventualmente substituído com um ou deis grupos alquilo (Cx-Cê) linear ou ramificado) ou carbamoílo (ele próprio eventualmente substituído com um ou dois grupos alquilo (Ci-C6) linear ou ramificado)), alcoxilo (Cx-Cg) linear ou ramificado, hidroxile, trihalogenoalquilo (Cx-C6) linear ou ramificado, trihalogenoalcoxiio (Cx-Cg) linear ou ramificado, amino (eventualmente substituído ccm um ou dois grupes alquilo (Ci-Có) linear ou ramificado), alquilearboniloxilo (Ci-Ce) linear ou ramificado, carboximetoxilo e earbamoílmetoxilo (eventualmente substituído em N com um ou dois grupos alquilo (Cx-C6) linear ou ramificado), por grupo heteroarilo, deve entender-se um grupo aromático mono- ou bicíciico com entre 5 e 12 membros contendo um, dois ou três heteroátomos seleccionados de entre oxigénio, azoto ou enxofre, devendo entender-se que o heteroarilo pode eventualmente ser substituído com um ou mais grupos, idênticos ou diferentes, seleccionados de entre halogéneo, alquilo (Cx-Cg) linear ou ramificado (eventualmente substituído com um grupo hidroxilo, carboxilo, amino (ele próprio eventualmente substituído com um ou dois grupos alquilo (Cx-Cg) linear cu ramificado) ou carbamoílo (ele próprio eventualmente substituído com um ou deis grupos alquilo (C χ—C 6) linear ou ramificado)), hidroxilo, alcoxilo (Ci-Cg) linear ou ramificado, trihalogenoalquilo (Cx-C6) linear ou ramificado, fenllo, 6 amino (eventualmente substituído em N com um ou diversos grupos alquilo (Ci-C6) linear ou ramificado), carboximetoxílo e carbamoílmetoxilo (eventualmente substituído com um ou dois grupos alquilo (Ci-C6) linear ou ramificado), por grupo cicloalquilo, deve entender-se um grupo hidrocarbonado mcno- ou bicíclico, saturado ou insaturado, com entre 3 e 12 membros, sendo ponto assente que o ciclo pode ser substituído eventualmente com um ou diversos grupos, idênticos ou diferentes, seleccionados de entre halogéneo, alquilo (Ci~Cg) linear ou ramificado, alcoxilo (Ci—Ce) linear ou ramificado, hidroxilo, trihalogenoalquilo (Ci-Ce) linear ou ramificado, amino (substituído eventualmente com um ou diversos grupos alquilo (Cq-Cg) linear ou ramificado) e arilo, por grupo heterocicloalquilo, deve entender-se um grupo mono- ou bicíclico, saturado ou insaturado, com entre 4 e 12 membros, contendo um, dois ou três heteroátomos seleccionados de entre oxigénio, azoto ou enxofre, estado entendido que o heterocíclo pode ser eventualmente substituído com um ou diversos grupos, idênticos ou diferentes, seleccionados de entre halogéneo, alquilo (Cq-Cg) linear ou ramificado, alcoxilo (Cq-Cg) linear ou ramificado, hidroxilo, trihalogenoalquilo (Ci—Ce) linear ou ramificado, amino (substituído eventualmente com um ou diversos grupos alquilo (Cq-Cg) linear ou ramificado), arilo e diarilmetilo. η I

2. Compostos com a fórmula. (I) de acordo com a reivindicação 1, nos quais n seja igual a 1.

3. Compostos com a fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, nos quais c ciclo. seja um ciclo de pirrolidinilo.

4. Compostos com a fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, nos quais Ri represente um grupo alquilo (Ci-Cg) linear ou ramificado, substituído com um ou diversos grupos arilo ou heteroarilo.

5. Compostos com a fórmula (I) de acordo com a reivindicação 4, nos quais o grupo arilo seja um grupo fenilo.

6. Compostos com a fórmula (I) de acordo com a reivindicação 4, nos quais o grupo heteroarilo seja o grupo piridinilo. reivindicação

7. Compostos com a fórmula (I) de acordo com a 1, nos quais R2 represente um grupo

Ck NH, - 8 -

8. Compostos com a fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, nos quais R2 represente um grupo

no qual V X represente um grupo CH ou um átomo de azoto, V R4 represente um átomo de hidrogénio ou de halogéneo, V P.5 represente qualquer um dos seguintes grupos ♦ RaNHCOHN- no qual Ra represente um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo (Ci—Ce) linear ou ramificado, ♦ RbS02NHC0 (NH) P-, no qual Rb represente um grupo alquilo (Ci-Cg) linear ou ramificado e p represente 0 ou 1, ♦ H0N=C(NH2)-, HN=C(NHOH)-, ♦ Rc- (CH2)no qual: - 9 - Y represente CH2, 0, S ou RaN, m represente um número inteiro tal que 0 - :t. < 3, Rc represente um heterociclo com 5 a 7 membros, saturado ou insaturado, contendo entre 1 e 4 heteroátomos seleccionados de entre oxigénio, azoto ou enxofre, contendo eventualmente o heterociclo referido uma ou mais funções carbonílo, e sendo eventualmente substituído, com um ou mais substituintes, idênticos ou diferentes, que sejam átomos de halogéneo, grupos alquilo (Ci-C6) lineares ou ramificados, alcoxilo (Ci-C6) lineares ou ramificados ou amino (ele próprio substituído eventualmente com um ou dois grupos alquilo (Ci-C6) lineares ou ramificados).

9. Compostos com a fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, nos quais R2 represente um sistema bícíclico com a fórmula

no qual X seja tal como foi definido acima e B, em conjunto com os átomos de carbono a que se liga, forme um grupo arilo ou um heterociclo com 5 ou 7 elementos, saturado ou insaturado, contendo entre 1 e 4 hetercátomos seleccionados de entre oxigénio, azoto ou enxofre, contendo eventualmente o heterociclo 10 referido pelo menos uma função carbonilo e sendo eventualmente substituído, com um ou mais substituintes idênticos ou diferentes, que sejam átomos de halogéneo, grupos alquilo (Ci-C6) linear ou ramificado, alcoxilo (Ci-Cg) linear ou ramificado ou amino (eventualmente substituído com um ou dois grupos alquilo (Ci-Cg) linear ou ramificado).

10. Composto com a fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, que seja a (6S)-A7-{ 4-[amino (hidroxi- imino)metil]benzil}-3-[(2,2-difenil-etil)amino]-4-oxo- 4.6.7.8- tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-6-carboxamida, os seus isómeros, o seu JV-óxido, bem como os seus sais de adição a um ácido ou a uma base aceitáveis do ponto de vista farmacêutico.

11. Composto com a fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, que seja a (6S)-2V-{4-[amino (hidroxi- imino)metil]benzil}-4-oxo-3-{(2-(2-piridinil)etil]amino}- 4.6.7.8- tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-6-carboxamida, bem como os seus sais de adição a um ácido ou a uma base aceitáveis do ponto de vista farmacêutico.

12. Composto com a fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, que seja a (6S)-77-[2- ({[amino(imino)metil]amino}oxi)etil]-3-[(2,2-difeniletil)amino]-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidropirrolo[1,2— a] pirazina-6-carboxamida, bem como os seus sais de adição a um ácido ou a uma base aceitáveis do ponto de vista 11 farmacêutico.

13. Composto com a fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, que seja a (6S)-4-oxo-W- [(3-oxo-3,4-dihidro-2ff-benzoxazin-8-il)metil]-3-{[2-(2- piridiníl)etil]amino}-4, 6,7,8-tetrahidropirrolo[1,2-a]pira zina-6-carboxamida, bem como os seus sais de adição a um ácido ou a uma base aceitáveis do ponto de vista farmacêutico.

14. Composto com a fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, que seja a (6S)-4-oxo-3~{[2-(2-pirídinil)etil]amino}-N-[2-(2-piridinil-methoxi)benzi1]- 4.6.7.8- tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-6-carboxamida, bem como os seus sais de adição a um ácido ou a uma base aceitáveis do ponto de vista farmacêutico.

15. Composto com a fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, que seja a (6S)-4-oxo-W-{2-[(2-oxo-3- pirrolidinil)oxi]benzil}-3-{[2-(2~piridinil)etil]amino}- 4.6.7.8- tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-6-carboxamida, bem como os seus sais de adição a um ácido ou a uma base aceitáveis do ponto de vista farmacêutico.

16. Composto com a fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, que seja a (6S)-N- [2-(4,5-dihidro-lH- imidazol-2-ilmethoxi)benzil]-4-oxo-3-{[2-(2- piridinil)etil]amino}-4,6,7,8-tetrahidrcpirrolo[1,2— a]pirazina-6-carboxamida, bem como os seus sais de adição 12 a um ácido cu a uma base aceitáveis do ponto de vista farmacêutico.

17. Composto com a fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, que seja a (6S)-AJ-[2-(lfl-imidazol-2-ilmetoxi)benzil] -4-oxo-3-{ [2- (2-piridiníl) etil]arrdno}~ 4,6,7,8-tetrahidropirrolo[1,2-a]pirazina-6-carboxamida, bem como os seus sais de adição a um ácido ou a uma base aceitáveis do ponto de vista farmacêutico.

18. Processo de preparação dos compostos com a fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por se reduzir um composto com a fórmula (II):

(II) C02Bn na qual A tem o mesmo significado do que na fórmula (I), Ρχ representa um grupo protector da função amino e Bn representa o grupo benzilo, por intermédio de um agente redutor apropriado, para se obter o composto com a fórmula (III) : C02B« (III) 13 na qual A, Pi e Bn têm os mesmos significados que anteriormente, composto com a fórmula (III) do qual se transforma a função hidroxilo em metoxilo e depois. em função ciano, por reacções clássicas da química orgânica, para se obter, depois de uma desprotecção da fur.ção amino, o composto com a fórmula (IV):

{IV} na qual A e Bn têm o mesmo significado que anteriormente, composto com a fórmula (IV) que se faz reagir com cloreto de oxalilo para se obter o composto com a fórmula (V) :

na qual A e Bn têm o mesmo significado que anteriormente, composto com a fórmula (V) que se faz reagir com um composto com a fórmula (VI): (VI) R1-NH2 14 na qual Ri tem o mesmo significado que na fórmula (I), para se obter o composto com a fórmula (VII): 14

na qual A, Bn e Ri têm o mesmo significado que anteriormente, composto com a fórmula (VII) que se transforma em seguida por hidrogenação catalítica no composto com a fórmula (VIII):

(ΥΠΙ) na qual A e Ri têm o mesmo significado que anteriormente, composto com a fórmula (VIII) que se transforma em seguida, por hidrogenação catalítica em meio alcalino, no composto com a fórmula (IX):

R qual A e íu têm o mesmo significado que 15 anteriormente, composto com a fórmula (IX) que se faz reagir com um composto com a fórmula (X):

(X) na qual n e R2 têm o mesmo significado que na fórmula (I), para se obter, após uma desprotecção eventual, o composto com a fórmula (I), composto com a fórmula (I) que se transforma eventualmente no N-óxido correspondente, que se purifica, caso seja necessário, por uma técnica clássica de purificação, do qual se separam, caso tal se pretenda, os ísómeros, por uma técnica clássica de separação, e que se transforma, se tal se pretender, nos seus sais de adição a um ácido ou a uma base aceitável do ponto de vista farmacêutico.

19. Composição farmacêutica contendo como princípio activo um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, em combinação com um ou diversos veiculos inertes, não tóxicos e aceitáveis do ponto de vista farmacêutico.

20. Composição farmacêutica de acordo com a 16 reivindicação 20, útil como inibidora de proteases de serina aparentadas com a tripsina.

21. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 20, útil como inibidora da trombina. Lisboa, 20 de Março de 2007