PT101088A - Metodo para produzir peracil-glicosidos esteroidais - Google Patents

Description

Fundamentos do Invento O presente invento relaciona-se com processos para a síntese de glicósidos esteroidais, e particularmente com a preparação de peracil-glicósidos esteroidais usados como intermediários para a sua produção.

Tigogenina-beta-O-celobiósido é um composto conhecido tendo utilidade no tratamento da hipercolesterolémia e da ateros-clerose (Malinow, Patentes dos E.U.A. No. 4.602.003 e 4.602.005; Malinow et al., Steroids, vol. 48, pp. 197-211, 1986). Cada patente apresenta uma síntese diferente deste composto a partir de octa-acetato de alfa-D-celobiose; a primeira pela via de brometo hepta-acetato de glicosilo que é acoplado com tigogenina na presença de carbonato de prata, e finalmente hidrolisado; e a segunda pela via directa de cloreto de estanho catalisado por acoplamento do octa-acetato de celobiose com tigogenina em cloreto de metileno, seguindo-se de novo hidrólise. Em Malinow et al., a reacção de octa-acetato de celobiose com tetrabrometo de titânio deu origem a brometo hepta-acetato de celobiosilo, o qual foi acoplado com tigogenina por meio de cianeto de mercúrio, sendo em seguida hidrolisado. Todos estes métodos apresentam graves desvantagens para produção do material a granel a ser utilizado como droga farmacêutica. Um objectivo desejável, atingido pelo presente invento, foi o de inventar métodos sintéticos que evitam reagentes tóxicos e/ou dispendiosos, e que produzem de um modo limpo o desejado tigogenina beta-O-celobió-sido, evitando passos de purificação demasiadamente longos e dispendiosos.

Schmidt, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., vol. 25, pp. 212-235 (1986) publicou a síntese e reacções de tricloroacetimi-datos de O-glicosilo formados pela reacção de açúcares possuindo um grupo 1-hidroxi (mas com outros grupos hidroxi protegidos, por exemplo, por benzilo ou acetilo) com tricloroacetonitrilo na presença de uma base. Existe uma formação preferencial do alfa--anómero quando é utilizado hidreto de sódio como base, e formação preferencial do beta-anómero quando a base é carbonato de potássio. 0 alfa anómero de tricloroacetimidato de tetrabenzil-glucosilo quando acoplado com colesterol deu origem a misturas anoméricas que variaram com o catalisador (ácido p-toluenossulfó-nico ou trifluoreto eterato de boro) e com a temperatura (-40 a + 20°C). Por outro lado, foi referido que os anómeros tanto alfa como beta de análogo tetra-acetilglucosilo produziram exclusivamente produtos beta-anoméricos.

Assim, existe uma busca contínua neste campo da técnica para encontr métodos aperfeiçoados de sínteses estereocontroladas de glicósidos esteroidais.

Sumário do Invento

Este invento é dirigido a um processo para a síntese de hepta-alcanoato de tigogenina-β-Ο-, ll-cetotigogenina-β-Ο-, hecogenina-β-Ο-, ou diosgenina-fi-O-celobiósido que proporciona uma maior selectividade β-anomérica e rendimentos aumentados. O processo é particularmente útil para a preparação de hepta-alcanoato de tigogenina-B-O-celobiósido, o qual é um intermediário para o agente hipocolesterolémico conhecido tigogenina-fi-O-celo-biósido. O processo compreende a reacção de hepta-alcanoato de brometo de α-celobiosilo com β-tigogenina, ΙΙ-β-cetotigogenina, β-hecogenina ou β-diosgenina na presença de fluoreto de zinco ou de cianeto de zinco em condições apropriadas para formar o hepta-alcanoato de tigogenina-β-Ο-, ll-cetotigogenina-β-Ο, hecogenin-β-Ο-, ou diosgenin-B-O-celobiósido. 4

Outros aspectos e vantagens tornar-se-ão aparentes a partir da especificação e reivindicações.

Descrição Detalhada do Invento

De preferência o sal de metal usado na reacção estereo-específica de um hepta-alcanoato de brometo de α-celobiosilo com β-tigogenina, ll-ceto-õ-tigogenina, β-hecogenina ou β-diosgenina é fluoreto de zinco ou cianeto de zinco. É especialmente preferido que o sal de metal seja fluoreto de zinco. É preferido que seja usado cerca de 0,5 equivalentes a cerca de 4 equivalentes e especialmente preferido cerca de 1,5 equivalentes a cerca de 2,25 equivalentes de sal de metal.

Pode também ser preferido conduzir o acoplamento activado por fluoreto de zinco ou de cianeto de zinco na presença de sais adicionais de zinco tais como haletos de zinco (por exemplo, brometo de zinco, cloreto de zinco, iodeto de zinco) ou sais básicos de zinco (óxido de zinco, hidróxido de zinco, fluoreto hidroxi de zinco, carbonato de zinco, etc) a fim submeter a tampão ou activar o promotor (isto é, sal de metal fluoreto de zinco ou cianeto de zinco). Trialquil terciãrio-aminas (por exemplo, di-isopropiletil-amina, trietilamina, tributilamina), tetra-alquilureias (por exemplo, tetrametilureia, tetraetilureia) ou dialquilanilinas (por exemplo, di-isopropilanilina, dibutil-anilina) são também tampões de reacção úteis. Os aditivos atrás referidos são geralmente utilizados a 10-50% equivalentes molares dos promotores.

Embora possa ser utilizado qualquer um dos brometos de alfa-celobiosilo substituídos com (C -C^) alcanoato é preferível que seja usado o acetato (isto é, C1). Podem ser preparados a partir de materiais de partida convencionais de acordo com 5

\ ν métodos descritos em K. Freudenberg e W. Nagai, Ann., 494,63 (1932) (por exemplo Exemplo 3). É preferido que que seja utilizado cerca de 0,5 equivalentes a cerca de 3 equivalentes, e é especialmente preferido cerca de 1 equivalente a cerca de 2 equivalentes de brometos de alfa-celobiosilo substituidos com (C-C.) alcanoato. '1 4'

Pode ser utilizado qualquer solvente de reacção inerte. Tal como é usada atrás e em qualquer outro ponto desta descrição, a expressão "solvente de reacção inerte" refere-se a um solvente que não reage ou se decompõe com materiais de partida, reagentes, intermediários ou produtos de um modo que afecte prejudicialmente o rendimento do produto desejado. Em geral, o solvente pode compreender um única entidade, ou pode conter múltiplos componentes. De preferência o solvente é um solvente inerte de reacção não prótica e é especialmente preferido que o solvente seja acetonitrilo devido ã excelente estereoselectividade que ele proporciona. Outros solventes incluem cloreto de metileno, acetato de etilo e nitrometano. É preferível que a reacção seja catalisada com ácido visto este facto aumentar a selectividade do produto β-celobiósi-do em comparação com o produto anomérico α-celobiósido. De preferência são utilizados ácidos minerais. Ácido bromídrico revelou ser particularmente eficaz para aumentar o rendimento do produto β-celobiósido. Outros ácidos preferidos incluem o ácido clorídrico, fluorídrico e sulfúrico. É preferido que seja utilizado cerca de 0,05 equivalentes a cerca de 2 equivalentes, e especialmente preferido que seja utilizado cerca de 0,1 equivalentes a cerca de 0,5 equivalentes de catalisador ácido. A preparação de β-tigogenina é descrita por Rubin nas Patentes dos E.U.A. Nos. 2.991.282 e 3.303.187, por B. Loken na 6

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Patente dos E.U.A. No. 3.935.194 e Caglioti et al., Tetrahedron 19, 1127 (1963). A sua estrutura é indicada a seguir.

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A preparação de β-hecogenin é descrita num artigo sobre Steroidal Sapogenins por Russell E. Marker et al., em J. Amer. Chem. Soc., 69, 2167-2211 (1947). A sua estrutura é indicada a seguir.

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ll-Ceto-B-tigogenina desvia o grupo carbonilo da posição 12 para a posição 11 da estrutura atrás indicada. 11-Ceto--β-tigogenina é preparada a partir dé hecogenin pelo processo que se segue. De acordo com o processo de Conforth. et al., (J. Chem. Soc., 1954. 907), hecogenin é acetilada, brominada, tratada com hidróxido de sódio e reduzida com zinco para dar origem ao análogo 12-hidroxi-ll-ceto. 0 análogo 12-hidroxi-ll-ceto é então 7

acetilado e reduzido com cálcio e amónia para dar origem a 11-cetotigogenina. A preparação de β-diosgenin é descrita em "Diosgenin and Other Steroidal Drug Precursors" by Asolkar, L.V., Chadra, Y.R., e Rawat, P.S., Council of Scientific and Industrial Research, New Delhi, índia, 183 páginas, 1979 e também em T. Kawasaki et al., Chem, Pharm. Buli., Japan 10μ 698 (1962). A sua estrutura é indicada mais abaixo.

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De preferência utiliza-se cerca de 1 equivalente a cerca de 2 equivalentes do esteroide. É especialmente preferido que seja utilizado cerca de 1 equivalente a cerca de 1,5 equivalentes do esteroide.

Deve-se utilizar qualquer meio ambiente ou condições (por exemplo, temperatura, tempo, solvente) apropriados para (isto é, capaz de) formar o desejado hépta-alcanoato de tigogeni-na-, 11-cetotigogenina-, hecogenina- ou diosgenina-beta-O-celo-biósido. Contudo, é preferido que a reacção ocorra a uma temperatura de cerca de 20°C a cerca de 100°C e de preferência de cerca de 50°C a cerca de 65°C. Abaixo de cerca de 20°C a reacção pode ser lenta e acima de cerca de 100°C podem ocorrer reacções secundárias indesejáveis (por exemplo anomerização). Esta reacção 8

é realizada convenientemente à pressão ambiente, contudo, podem ser utilizadas pressões de cerca de 0,5 a cerca de 3 atmosferas.

De preferência o esteroide, sal de metal e solvente são aquecidos até refluxo e suficiente solvente é destilado azeotró-picamente a fim de remover substancialmente toda a água. Então o brometo hepta-acetato de celobiosilo é adicionado à mistura anterior e aquecido durante cerca de 0,5 a cerca de 6,0 horas, tipicamente sob azoto. Os compostos desejados são então isolados por métodos convencionais.

Por exemplo, os glicósidos podem ser precipitados a partir da mistura da reacção filtrada crua (por exemplo solução do produto acetonitrilo) pela adição de cerca de 25% a 75% de água e o restante álcool (por exemplo metanol). A precipitação do produto a partir de metanol/acetonitrilo aquoso requere menor processamento do que um isolamento extractivo, e proporciona um produto com maior pureza.

Os peracil-glicósidos esteroidais podem ser desacetila-dos por métodos convencionais tais como tratamento com trietil-amina em metanol, resinas de permuta aniónica básica ou metóxido de sódio em solventes metanol ou metanol/THF (por exemplo Exemplo 2 mais abaixo). Por exemplo, o produto desacetilado pode ser preparado por refluxo em metanol/THF usando uma quantidade não catalítica de metóxido de sódio seguindo-se processamento convencional. 0 metóxido em excesso é usado a fim de decompor o açúcar fluoro, se estiver presente qualquer fluoreto hepta-acetato de β-celobiosilo, de outro modo a desacetilação seria catalítica em metóxido de sódio. 0 tigogenil-B-O-celobiósido ou produtos análogos são então isolados por métodos convencionais tais como filtração.

Embora o processo anterior tenha como finalidade sintetizar glicósidos esteroidais da configuração B, os a-anóme-ros termodinâmicamente estáveis são acessíveis por isomerização catalisada com ácido dos B-glicósidos. Por exemplo, hepta-alca-noato de tigogenil-a-O-celobiósido pode ser preparado a partir de hepta-alcanoato de β-0-celobiósido por aquecimento do B-glicósido numa solução de cloreto de metileno contendo brometo de hidrogénio. A influencia da reacção estoiquiométrica, temperatura, solventes, crivos moleculares, e brometo de hidrogénio vestigial sobre a estereoselectividade e rendimento do hepta-acetato de tigogenil-B-O-celobiósido (usando o processo do Exemplo 1) são resumidos no Quadro 1.

Quadro 1

Acoplamentos Glicosídicos Activados com Fluoreto ou Cianeto de Zinco com Tigogenina

Etrui valentes Solvente Crivos Tenrx>/Tero. /?-Glicosiao •liccsi l-3r Activaâor i icooer.in Rendim- 2.00 ZnF.(4.03) 1.0 CH3CN No 2.5 hr5/55° C 72% 1.53 ZnF.(3.00) 1.0 CH3CN No 2.5 hrs/55°C 53% 0.53 ZnF.(I.OO) 1.0 CHSCN No 3.0 hrs/55°C 32% 0.50 ZnF:(1.03) Hbr (C.35) 1.0 CH.CN No 1.5 hrs/55°C 30% 2.00 Zr\F;{4.00) 1.0 CH.CIj No 3.0 h:s/43°C 1C%_ 25%( ^-anóxero) 2.00 ZnF.(í.OO) 1.0 Tolueno 4 A 20 hrs/S5°C 4*% 2.30 Z^r:(4.00) 1.0 CHjC!,/CH3CN No (2/‘V 1.5 h:s/ô5°C 54% 1.00 ZnF.(2.00) Hbr(0.75) 2.0 CHjCN No 1.0 hrs/£5°C 30% 0.50 ZaFj(0.50) 1.0 CHjCN No 22 hrs/50°C 3E% 2.00 ZnF.(4.00) 1.0 CH3CN No 1.75 h:s/30°C 73% 0.50 ZnF,(0.50) 1.0 CH.CN No 1.75 h.rs/30°G 53% 1.25 2nF,(2.25) 1.0 CH.CN No 1.75 hrs/50oC 51% 2.00 Zn(CN).(4.00) 1.0 CHjCN No 2.0 hrs/55°C 53% 2.10 Zn(CN)2(5.50) 1.0 CH,CN No 3.0 hrs/B5°C 35% 1.50 Zn(CN),(4.00) 1.0 CHjCN No 2.5 hrs/£5°C 45% 11

0 acoplamento de glicósido activado com fluoreto de zinco foi repetido com hecogenin e diosgenin em processos análogos ao acoplamento glicosídico de β-tigogenina do Exemplo 1 referido mais abaixo. Os resultados com estes outros esteroides são resumidos no Quadro 2.

Quadro 2

Acoplamentos Glicosídicos mediados com Fluoreto de Zinco com hecogenin ou Diosgenin

Equivalentes Glicosil-Br Activador Esterol Colesterol 2.00 2.25 (1.0) 2.00 2.25 Hecogenin (1.0) 2.00 2.25 Diosgenin (1.0)

Solvente Crivos Tenpo/Temp. Rendim. /f-Glicosido CH3CN No 2.25 hrs/65°C 53% CH-CN No 3.0 hrs/65°C 72% CH3CN No 2.5 hrs/55°C 55%

Este invento representa um progresso significativo no campo dos glicósidos esteroidais ao proporcionar métodos suficientes para preparar peracil-glicósidos esteroidais. Os produtos finais desacetilados são úteis como agentes anti-hipercolestero-lémicos.

Deve ser tomado em consideração que o invento não se limita às apresentações particulares aqui indicadas e descritas, mas que na realidade podem ser feitas várias alterações e modificações sem afastamento do espírito e âmbito deste novo conceito tal como é definido pelas reivindicações que se seguem.

Exemplo 1

Hepta-acetato de Tiqoctenil-fi-O-Celobiósido A um frasco seco equipado com um agitador mecânico, 13

termómetro, e cabeça de destilação foram adicionados β-tigogenina (4,16 g; 0,01 mole), fluoreto de zinco anidro (4,13 g; 0,04 mole), e 160 ml de acetonitrilo seco. A pasta foi aquecida até refluxo (85°C) e 90 ml de produtos destilados foram removidos por cima enquanto 60 ml de acetonitrilo seco, fresco eram adicionados à pasta. A mistura foi arrefecida até 25°C e então a amostra foi removida para uma determinação Karl Fisher (K.F.= 0,02% HO).

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Hepta-acetato de brometo de a-celobiosilo (14,00 g; 0,02 mole) foi adicionado ao frasco, e em seguida a pasta agitada foi aquecida até 65°C sob uma atmosfera de azoto. A mistura foi mantida a 65°C durante 2,5 horas altura em que cromatografia1 de placa delgada (cpd) revelou que a reacção se encontrava completa. A reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente e foram adicionados 130 ml de cloreto de metileno. A pasta pouco consistente foi filtrada através de Celite e o filtrado (300 ml) foi lavado com uma solução saturada de bicarbonato de sódio (70 ml) seguindo-se uma lavagem aquosa (70 ml). Depois da camada orgânica ser seca sobre sulfato de sódio anidro (20 gramas) e filtrada, a solução foi então concentrada até 50 ml pela via de uma destilação à pressão atmosférica. Duzentos mililitros de 2B-etanol foram adicionados ao concentrado quente e a solução turva foi concentrada até aproximadamente 50 ml. A pasta pouco consistente foi arrefecida até 25°C sendo então granulada durante 90 minutos à temperatura ambiente. 0 produto crú foi filtrado, a massa foi lavada com 25 ml de 2B-etanol, sendo então seca a 40°C in vacuo durante 17 horas para dar origem a 10,8 gramas de sólidos cristalinos brancos (p.f. = 226-231°C).

Os sólidos foram dissolvidos em 25 ml de cloreto de metileno e em seguida foram adicionados 75 ml de 2B-etanol. A pasta pouco consistente foi aquecida até refluxo (760 mm) e 35 ml do produto destilado foram removidos por cima. A pasta resultante 14

foi arrefecida até â temperatura ambiente sendo então granulada durante 90 minutos. O β-glicósido foi filtrado, sendo então seco a 40°C in vacuo durante 18 horas para dar origem a 9,65 gramas de um sólido cristalino branco (p.f. = 229-234°C). Cromatografia1 de . 2 placa delgada e cromatografia liquida de pressão elevada (clpe) revelam que o produto contem 77% (p/p) de hepta-acetato de β-0-celobiósido e 15% (p/p) de hepta-acetato de fluoreto de α-celobiosilo. 0 hepta-acetato de fluoreto de α-celobiosilo é muito fácilmente removido do produto durante o passo de desaceti-lação.

Exemplo 2

Tiqoqenil-ft-O-celobiõsido

Hepta-acetato de tigogenil-B-O-celobiósido crú (50,0 g; 0,048 moles) foi dissolvido em 250 ml de tetra-hidrofurano e 250 ml de metanol mantendo-se entretanto sob uma atmosfera de azoto. A solução nevoenta foi filtrada através de uma camada de Celite sendo então adicionada ao filtrado uma solução de metóxido de sódio (0,46 g; 0,008 moles) em metanol (10 ml). A solução foi aquecida até refluxo (60°C) e mantida sob refluxo durante 1,25 horas gerando uma pasta branca espessa. Uma porção alíquota da reacção foi removida e analisada por cromatografia de placa delgada a qual indicou que a reacção se encontrava completa. A pasta foi concentrada removendo 200 ml de produto destilado e em seguida foram adicionados 200 ml de água à pasta sob refluxo. Outros 200 ml de produto destilado foram removidos, e acrescentou-se água adicional (200 ml) . A pasta foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada. A massa do produto foi lavada com água (50 ml) sendo então deslocada a seco sobre o filtro. A massa húmida com água foi aquecida até refluxo (65°C em 600 ml de THF e 92 ml de água). DARGO G-60 (1,53 gramas) foi adicionado à 15

solução, agitado durante 15 minutos, e em seguida a mistura foi filtrada através de Celite. A solução foi concentrada por remoção de. 460 ml de produtos destilados e foram então adicionados 460 ml de metanol. A adição de metanol e a sequência de concentração foram repetidas duas vezes de novo removendo uma adição de 800 ml de produtos destilados e foram adicionados 800 ml de metanol fresco. A pasta resultante foi arrefecida até 20°C sendo então granulada durante uma hora. 0 produto foi filtrado, passada por metanol fresco (50 ml), e em seguida a massa húmida foi de novo transformada em pasta em 300 ml de metanol fresco (24°C). O produto foi filtrado e em seguida seco a 40°C in vacuo durante a noite. Tigogenil β-0-celobiósido (24,4 g; 0,036 moles) foi isolado com um rendimento total de 74%. As propriedades espectrais e físicas eram idênticas âs de uma amostra autentica.

Exemplo 3

Hepta-acetato de brometo de a-D-Celobiosilo

Hepta-acetato de brometo de α-D-celobiosilo foi preparado a partir de octa-acetato de α-D-celobiose e brometo de hidrogénio em ácido acético glacial usando um processo modificado de Freudenberg and Nagari(l) .

Uma solução a 20% (p/p) de brometo de hidrogénio (178,7 g; 0,44 mole de HBr) em ácido acético glacial foi preparada fazendo borbulhar brometo de hidrogénio gasoso em ácido acético glacial até se obter uma densidade de 1,212. Num reactor seco separado mantido sob uma atmosfera de azoto, octa-acetato de a-D-celobiose (50,0 g; 0,074 moles) foi dissolvido em 408 ml de (1) K. Freudenberg and W. Nagari, Ann., 494, 63 (1932). cloreto de metileno. A solução HBr/HOAC foi adicionada à solução de dissacárido a fim de dar origem a uma solução amarela. Depois da solução ser agitada durante 2 horas a _ 17-25°C, uma pequena porção alíquota de solução foi removida para um ensaio de acabamento da reacção. Quando a cromatografia(2) de placa delgada indicou que a reacção se encontrava completa, a solução foi arrefecida até 10°C e adicionou-se 0,5 litro de água. A mistura foi agitada durante 10 minutos, a agitação foi interrompida, e deixou-se que as camadas se separassem. A camada de cloreto de metileno foi decantada e em seguida lavada com 7,5% p/p de solução de bicarbonato de sódio (0,5 litros) seguindo-se água (0,5 litros). Finalmente, a solução de cloreto de metileno foi seca sobre 8 gramas de sulfato de magnésio anidro sendo então filtrada. A massa de MgS04«hidrato foi lavada com cinquenta mililitros de cloreto de metileno, e o filtrado e produto de lavagem foram combinados. A solução de cloreto de metileno foi concentrada até aproximadamente 0,15 litro por uma destilação atmosférica sendo então arrefecida até à temperatura ambiente. Éter di-isopropílico (0,6 litro) foi adicionado lentamente durante 15 minutos com agitação a fim de gerar uma pasta espessa. 0 produto foi granulado durante 1 hora a 25°C, filtrado, e em seguida seco in vacuo a 40°C durante 45 horas. Hepta-acetato de brometo de a-celobiosilo (47,6 g; 92% rendimento) foi obtido sob a forma de um sólido cristalino branco (p.f. = 192-194°C) cujo espectro RMN (CDC13) era consistente com a sua estrutura. (2) Placas CPD Gel Sílica 60F-254 Pré-revestidas Merck usando eluente tolueno/ãcido acético. As Placas foram pulverizadas com 10% (p/p) de íkSO em água e aquecidas para carbonização, depois das placas estarem desenvolvidas).

Exemplo 4

Hepta-acetato de ll-Cetotiqoqenil-3-0-Celobiósido A um frasco de fundo redondo com 3 tubuladuras, de um litro equipado apropriadamente foram adicionados acetonitrilo (305 ml), 11-cetotigogenina (5,00 g; 0,011 moles), e fluoreto de zinco cristalino, romboédrico (1,65 g; 0,016 moles). A pasta foi aquecida até refluxo (80°C) e em seguida 100 ml de produto destilado foi removido por cima. A pasta foi arrefecida até à temperatura ambiente, e em seguida foram adicionados 15,39 g (0,022 moles) de hepta-acetato de brometo de α-celobiosilo. A mistura da reacção foi aquecida de novo até 60-65°C sendo então mantida a 60-65°C durante 2 horas. A amostra da reacção foi removida para um ensaio sobre o acabamento da reacção. O ensaio de cromatografia de placa delgada (EtOAc/hexanos 1,5:1) revelou a desaparição completa do material de partida brometo de glicosilo sendo assim a reacção arrefecida até 25°C e adicionados 152 ml de cloreto de metileno. Após agitação durante 10 minutos, a mistura foi filtrada através de Celite e a massa de filtração foi lavada com 25 ml de CH Cl . 0 filtrado e o produto de lavagem da reacção u Cà combinados foram lavados com água (81 ml), solução saturada de bicarbonato de sódio (75 ml), e água (137 ml). A camada orgânica foi finalmente seca sobre 11 gramas de sulfato de magnésio anidro. 0 MgSC>4 foi filtrado e lavado sob pressão reduzida até um quarto do seu volume original (300 ml). Foi adicionado 2B-etanol (250 ml) e a solução resultante foi concentrada até metade do volume (170 ml). A pasta foi arrefecida até 20-25°C sendo então granulada durante 1 hora. Os sólidos cerosos brancos foram filtrados, lavados com 2B-etanol fresco (50 ml), e em seguida secos in vacuo a 40°C durante a noite. Foi isolado hepta-acetato de ll-cetotigogenil-B-O-celobiósido (9,7 gramas; p.f. = 205-219°C) com um rendimento total de 84%. As caracterizações cromatográfica e espectral foram idênticas a uma amostra autentica de hepta-ace-tato de ll-cetotigogenil-B-O-celobiósido. ll-Cetotigogenil-β-Ο--celobiósido crú poderia também ser isolado com um rendimento de 64% pela sequência de isolamento aquoso que se segue: A mistura da reacção que se segue foi diluida com acetonitrilo fresco adicional (50 ml) sendo então filtrada através de celite. Foi adicionado metanol (290 ml) ao filtrado e a solução resultante foi aquecida sob refluxo (65°C) durante uma hora. Cem mililitros de água desionizada foram adicionados lentamente â solução sob refluxo para dar origem a uma mistura enevoada. Após 20 minutos sob refluxo (72°C), a mistura foi arrefecida lentamente sendo então granulada a 23-25°C durante 1 hora. O produto crú foi filtrado e lavado com água. A massa filtrada foi suspensa em 2B-etanol (75 ml) e a mistura foi aquecida até refluxo. A mistura foi então arrefecida até à temperatura ambiente, filtrada, e os sólidos foram secos in vacuo a 40°C durante a noite. Foi isolado hepta-acetato de ll-cetotigogenil-B-O-celobiósido com um rendimento total de 64%.

Exemplo 5 ll-Cetotiaoqenil-B-O-Celobiósido

Hepta-acetato de ll-cetotigogenil-fi-O-celobiósido (9,7 g; 9,2 mmoles) foi suspenso em 50 ml de metanol e 50 ml de tetra-hidrofurano. O sistema foi expurgado com azoto adicionando--se então uma solução de metóxido de sódio (0,10 g; 1,9 mmoles) em metanol (1 ml). A solução foi aquecida até refluxo (61°C) sendo então mantida sob refluxo durante 1 hora. Cromatografia de placa delgada (CH2C12/metanol 4:1) da pasta resultante revelou que a reacção se encontrava completa. 0 tetra-hidrofurano foi removido da reacção por uma destilação atmosférica e deslocamento eventual com metanol (220 ml). Foi recolhido um total de 180 ml 19

de produto destilado. A pasta foi arrefecida até 20-25°C sendo então granulada durante a noite. O produto foi filtrado, lavado com metanol (2 x 20 ml) e então a massa húmida foi de novo transformada em pasta (24 horas) em 100 ml de água desionizada. Após filtração e secagem in vacuo a 25°C durante a noite, foram isolados 4,7 gramas de ll-cetotigogenil-fi-o-celobiósido com um rendimento total de 65,5%. O produto revelou ser homogéneo por cromatografia de placa delgada e caracterizações analíticas foram consistentes com a estrutura do produto.

Exemplo 6

Geração de Ácido Bromídrico In Situ

Brometo hepta-acetato de a-celobiosilo (5,00 g; 7,15 mmole) e 50 ml de acetonitrilo foram adicionados a um frasco de fundo redondo de 75 ml equipado com um agitador mecânico, termómetro, e cabeça de destilação sob vácuo. O sistema foi expurgado com azoto e então a pressão foi reduzida até aproximadamente 425 mm Hg. A solução foi aquecida até 56-58°C e aproximadamente 13 ml de produto destilado foram removidos por cima. A solução foi arrefecida até á temperatura ambiente e o vácuo foi libertado lentamente. Cloreto de metileno (37 ml) foi adicionado à solução de brometo de glicosilo sendo então a solução extraída com água (2 x 25 ml). As fases aquosas foram combinadas e em seguida tituladas até um ponto final de fenolftaleina usando solução de NaOH 0,1005 N.

Os miliequivalentes de ácido HBr contidos na solução de hepta-acetato de brometo de α-celobiosilo antes e depois de eliminação azeotrópica são referidos mais abaixo. A eliminação azeotrópica aumentou o ácido tratável de 8 a 10 vezes aproximadamente dependendo do conteúdo de água. 20

' ϊ ι ÁCIDOS TITULADOS Solução Inicial de Hepta-acetato de Brometo de a-Celobiosilo 2,1 miliequivalentes Solução Azeotropada de Hepta-acetato e Brometo de a-Celobiosilo 16,9 miliequivalentes

Quando a destilação azeotrópica foi usada no Exemplo 1 para secar a solução de brometo de glicosilo e para aumentar o seu conteúdo de ácido, o tempo de reacção diminuiu para 1,0 hora a 65°C. Além disso, foram mantidos elevados rendimentos e elevada selectividade β-anomérica.

Exemplo 7

Isolamento Aquoso de Hepta-acetato de Tigoqenil—O-Celobiósido

Um acoplamento glicosxdico mediado por fluoreto de zinco de B-tigogenina (0,915 mole) com brometo hepta-acetato de a-celobiosilo (1,830 mole) em acetonitrilo foi conduzido de acordo com o processo do Exemplo 1. Uma vez a reacção completa, a mistura da reacção crua foi submetida a um método aquoso para dar origem a hepta-acetato de tigogenil-B-O-celobiósido de elevada qualidade pela sequência que se segue.

A mistura da reacção crua foi filtrada através de Celite a fim de proporcionar aproximadamente 20 litros de um filtrado de côr dourada. 0 filtrado foi aquecido (55-60°C) e concentrado sob pressão reduzida até cerca de 10 litros. A solução concentrada foi arrefecida até 50°C e foram adicionados 5,0 litros de metanol. Subsequentemente, 7,5 litros de água desionizada foram adicionados lentamente durante 30 minutos. Um sólido precipitou a partir da solução uma vez carregados 2 litros de água. A mistura foi aquecida até refluxo (73°C) e em seguida mantida sob refluxo durante 2 horas. A pasta foi arrefecida até 25°C e granulada durante a noite, o produto crú foi filtrado, lavado com metanol (2 x 1,5 litros), e em seguida seco in vacuo a 40°C. 0 sólido crú (1,01 kg) era 95,5% puro por ensaio de croma-tografia líquida de pressão elevada. Além disso, o produto crú continha apenas 1,3% de hepta-acetato de tigogenil-a-O-celobiósi-do e nenhum hepta-acetato de fluoreto de β-celobiosilo.

Hepta-acetato de tigogenil-fi-O-celobiõsido crú (1,0 kg) foi transformado em pasta em 10,2 litros de 2B-etanol sob azoto e a mistura foi aquecida até refluxo (78°C). Depois da pasta estar sob refluxo durante 1,5 horas, a mistura foi arrefecida até 25°C e em seguida granulada durante 12 horas. 0 produto foi filtrado, lavado com etanol fresco (2 x 300 ml), e finalmente seco in vacuo a 40°C durante a noite. Hepta-acetato de β-0-celobiósido (0,89 kg) foi isolado com um rendimento total de 74% a partir de tigogenina. O produto cristalino branco tinha uma pureza de 98,9% por cromatografia líquida de pressão elevada e continha apenas 0,5% (p/p) do α-anómero isomérico.

Lisboa, 23 de Novembro de 1992

J. PEREIRA DA CRUZ Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR COROON, 10 -A 3.fi 1200 LISBOA

Claims (9)

1. REIVINDICAÇÕES is. - Processo para a síntese de hepta-alcanoato de tigogenina-, 11-cetotigogenina-, hecogenina- ou diosgenina-B-O--celobiósido, caracterizado por compreender: a reacção do hepta-alcanoato de brometo de a-celobio- silo

   em que R é C -C4, com um esteroide seleccionado de entre o grupo consistindo em β-tigogenina, ll-ceto-B-tigogenina, β-hecogenina e β-diosgenina, na presença de fluoreto de zinco ou de cianeto de zinco em condições capazes de formar o referido hepta-alcanoato de tigogenina-, 11-cetotigogenina-, hecogenina- ou diosgenina-B--O-celobiõsido.
2. 22. - Processo tal como foi indicado na reivindicação 1, caracterizado por o sal de metal ser fluoreto de zinco, R ser metilo e a reacção ocorrer num solvente inerte à reacção não prótico. carac-
3. 32. - Processo de acordo com a reivindicação 2, terizado por o esteroide ser β-tigogenina ou ll-ceto-B-tigoge-nina.
4. 42. - Processo de acordo com a reivindicação 3, carac-terizado por a referida reacção ser catalisada com ácido.
5. 52. - Processo de acordo com a reivindicação 4, carac-terizado por o catalisador ácido ser ácido bromídrico ou fluorí-drico.
6. 62. - Processo de acordo com a reivindicação 5, carac-terizado por a reacção ocorrer na presença adicional de brometo de zinco, cloreto de zinco, iodeto de zinco, fluoreto hidroxi de zinco, óxido de zinco, carbonato de zinco, hidróxido de zinco, uma trialguil terciário-amina, uma tetra-alquil-ureia ou uma N,N-dialquilanilina.
7. 72. - Processo de acordo com a reivindicação 6, carac-terizado por a referida reacção ocorrer a de cerca de 20°C a cerca de 100°C, serem usados cerca de 1 a cerca de 2 equivalentes ll-ceto-B-tigogenina, serem usados cerca de 0,5 a cerca de 4 equivalentes de fluoreto de zinco, e serem usados cerca de 0,5 a cerca de 3 equivalentes de brometo hepta-alcanoato de a-celobio-silo.
8. 82. - Processo de acordo com a reivindicação 7, carac-terizado por o solvente ser acetonitrilo e serem usados cerca de 0,05 a cerca de 2 equivalentes de ácido bromídrico.
9. 92. - Processo de acordo com a reivindicação 2, carac-terizado por os peracil-fí-glicósidos 1-O-esteroidais serem - 3 - precipitados a partir do acetonitrilo pela adição de cerca de 25% a 75% de água e do restante álcool. 10a. - Processo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por compreender adicionalmente o passo de desaceti-lação de hepta-alcanoato de tigogenil-B-O-celobiósido a fim de formar o tigogenil-B-O-celobiósido. lia. - Processo de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por a desacetilação ocorrer por tratamento com metõxido de sódio em metanol. 12a. - Processo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por o esteroide ser 11-cetotigogenina. Lisboa, 23 de Novembro de 1992

   Agente Oficiai da Propriedade Industrial RUA VtCTOR CORDON, 10-A 3.fi 1200 LISBOA