PT100071A - Inibidores de enzimas conversoras de endotelina e seu processo de preparacao - Google Patents

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cycloalkyl
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Kazumi Shiosaki
Andrew S Tasker
Terry J Opgenorth
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Abbott Lab
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Description

73 516 4955.PG.01 -3-
MEMÓRIA DESCRITIVA
Este pedido é uma continuação em parte do Pedido de Patente U.S. na 649 649 apresentado a 31 de Janeiro de 1991.
Camoo Técnico O presente invento refere-se a compostos e composições que inibem enzima de conversão de endotelina (ECE), a processos para fazer esses compostos, a intermediários sintéticos empregues nestes processos e a métodos para a supressão da produção de endotelina, tratamento da hipertensão, insuficiência cardíaca congestiva, enfarte do miocárdio, lesão por reperfusão, angina coronária, vasoespasmo cerebral, insuficiência renal aguda, úlceração gástrica induzida por drogas anti-inflamatórias não esteróides, nefrotoxicidade induzida por cicloesporina, toxicidade induzida por endotoxina, asma e ateroesclerose, com esses compostos.
Arte Anterior A endotelina (ET) é um péptido com 21 aminoácidos que é produzido por células endoteliais. A ET é produzida por clivagem enzimática de uma ligação Trp-Val do péptido percursor da endotelina grande (Big ET). Esta clivagem é provocada por uma enzima de conversão de endotelina (ECE). Tem sido mostrado que a endotelina constrange artérias e veias, aumenta a pressão sanguínea arterial média, diminui o débito cardíaco, aumenta a contractilidade cardíaca in vitro. estimula a mitogénese em células do músculo liso vascular in vitro. contrai o músculo liso não vascular, incluindo a traqueia da cobaia, tiras de bexiga urinária humana e o útero da ratazana in vitro. aumenta a resistência das vias aéreas in vivo, induz a formação de úlceras gástricas, estimula a libertação do factor natriurético atrial in vitro e in vivo, aumenta os níveis de vasopressina, aldosterona e catecolaminas no plasma, inibe a libertação de renina in vitro e estimula a libertação de 73 516 4955.PG.01 -4-
gonadotropinas in vit.ro.
Um agente que suprima a produção de endotelina ou um agente que se ligue a endotelina espera-se que produza efeitos benéficos numa variedade de áreas terapêuticas. De facto, um anticorpo anti-endotelina mostrou, após infusão intra-renal, melhorar os efeitos adversos de isquemia renal ou resistência vascular renal e taxa de filtração glomerular (Kon, et al., J. Clin. Invest. 83. 1762 (1989)). Em adição, um anticorpo anti-endotelina atenuou os efeitos nefrotóxicos da cicloesporina administrada intravenosamente (Kon, ét al., Kidney Int. 37. 1487 (1990)) e atenuou a extensão do enfarte num modelo de enfarte do miocárdio induzido por ligação da artéria coronária (Watanabe, et al., Nature 344 114 (1990)).
Foi apresentada uma enzima de conversão de endotelina que pode ser inibida por pepstatina A (Wu-Wong, et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 171 1291 (1990)). Contudo, não são conhecidos outros inibidores desta enzima de conversão de endotelina.
Revelações do Invento
Estão de acordo com o presente invento os compostos inibidores da enzima de conversão de endotelina, de fórmula (I):
0H (I) na qual A é hidrogénio, um grupo protector de N, R1NHCH(R2)C(0)-, onde R>l é H ou um grupo protector de N e R2 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, carboxialquilo ou alcoxicarbonilalquilo; ou A é H02C(CH2)nC(0)- onde n é 1 a 3; B é -N(R4)CH(R3)C(0)-, onde R4 é hidrogénio ou alquilo inferior e
73 516 4955.PG.01 -5- R3 é alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; C é -N(Rjj)CH(Rg)C(0)-, onde Rg é hidrogénio ou alquilo inferior e R6 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; R é alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo ou heterocíclico biciclico; X é -CH2- ou -C(0)-; D é (1) -OR7 onde Rj é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; (2) -NR8R9, onde Rg e Rg são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo e -(CH2)m-Z onde mé2a8eZé -OH, heterocíclico, -SO3H, -C02R10 onde R10 é hidrogénio ou alquilo inferior ou Z é -NR11R12 onde R·^ e R12 são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo e cicloalquilalquilo; (3) -NHCH(R13)C(0)-, onde R13 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; ou (4) -NHCH(R13)C(0)NHCH(R14)C(0)-, onde R13 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo e R^4 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, aminocarbo-nilalquilo, cianoalquilo, carboxialquilo ou alcoxicarbonilalqui-lo; e
E (1) está ausente; (2) é -0R15 onde R15 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloal-
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quilo ou cicloalquilalquilo; ou (3) -NR16R17 onde R16 e R17 são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo e -(CH2)p-Y onde pé2a8eYé -OH, heterocíclico, -S03H, -C02R18 onde R18 é hidrogénio ou alquilo inferior ou Y é -NRigR20 onde Rig e R20 são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo e cicloalquilalquilo, ou um seu sal, éster ou pró-droga farmaceuticamente aceitáveis.
Estão de acordo com o presente invento os compostos inibidores da enzima de conversão de endotelina, de fórmula (II):
D-E 0P4 (II) na qual A é hidrogénio, um grupo protector de N, R1NHCH(R2)C(0)-, onde Rj é H ou um grupo protector de N e R2 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, carboxialquilo ou alcoxicarbonilalquilo; ou A é H02C(CH2)nC(0)- onde n é 1 a 3; B é -N(R4)CH(R3)C(0)-, onde R4 é hidrogénio ou alquilo inferior e R3 é alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; C é -N(R5)CH(R6)C(0)-, onde R5 é hidrogénio ou alquilo inferior e Rg é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo ? R é alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo ou heterocíclico bicíclico; P4 é hidrogénio, alquilo inferior ou benzilo; 73 516 4955.PG.01 7
X é -CH2- ou -C(O)-; D é (1) -0R7 onde R7 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; (2) -NRgRg, onde Rg e R9 são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo e -(CH2)m-Z onde mé2a8eZé -OH, hetero-cíclico, -SOgH, -C02R^o onde Rlo ® hidrogénio ou alquilo inferior ou Z é -NR11R12 onde R]^ e R12 são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo e cicloalquilalquilo; (3) -NHCH(R13)C(0)-, onde R13 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; ou (4) -NHCH(R13)C(0)NHCH(R14)C(0)-, onde R13 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo e R14 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, aminocarbo-nilalquilo, cianoalquilo, carboxialquilo ou alcoxicarbonilalqui-lo; e
E (1) está ausente; (2) é -OR25 onde R^ é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; ou (3) -NR16R17 onde R16 e R17 são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo e -(CH2)p-Y onde pé2a8eYé -OH, heterocíclico, -S03h, -C02R18 onde r18 é hidrogénio ou alquilo inferior ou Y é -NR19R20 onde R^g e R2Q são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo e cicloalquilalquilo, ou um seu sal, éster
ou pró-droga farmaceuticamente aceitáveis.
Estão de acordo com o presente invento os compostos inibi-dores da enzima de conversão de endotelina, de fórmula (III):
na qual
A é hidrogénio, um grupo protector de N, R-j_NHCH(R2)C(O)-, onde R-j_ é H ou um grupo protector de N e R2 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, carboxialquilo, alcoxicarbonilalquilo ou arilalcoxicarbonilalquilo; ou A é H02C(CH2)nC(0)- onde néla3; ou A é R^aC(0)- ou Rias(°)2” on(ie Rla ® um teterocíclico; ou A é (aminoalquil)(alquilJaminocarbo-nilo, (alquilaminoalquil)(alquil)aminocarbonilo, (dialquilamino- alquil)(alquil)aminocarbonilo, (aminoalquil)(alquil)aminosulfo-nilo, (alquilaminoalquil)(alquil)aminosulfonilo, (dialquilami- noalquil)(alquil)aminosulfonilo, (heterocíclicoalquil)(al
quil ) aminocarbonilo ou (heterocíclicoalquil)(alquil)aminosulf onilo ; B é -N(R4)CH(R3)C(0)-, onde R4 é hidrogénio ou alquilo inferior e R3 é alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; C é -N(Rg) CH(Rg) C (0) -, onde R5 é hidrogénio ou alquilo inferior e R6 é alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; R é alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo ou heterocíclico bicíclico; e R2i é alquilo inferior, cicloalquilo, ou cicloalquilalquilo; ou um seu sal, éster ou pró-droga farmacêuticamente aceitável.
Os centros quirais dos compostos do invento podem ser 73 516 4955.PG.01 -9-
4>:..... _ racémlcos ou assimétricos. As misturas racémicas, misturas de diastereómeros, bem como os diastereómeros simples dos compostos do invento estão incluídos no presente invento. Os termos configuração "S" e "R" têm o significado definido por IUPAC 1974 Recommendations, Secção E, Fundamental Stereochemistry, Pure Appl. Chem. (1976) 45, 13-30.
Os termos "Ala", "Asn", "Asp", "lie" e "Vai", como aqui usados referem-se a alanina, asparagina, ácido aspártico, isoleucina e valina, respectivamente. Em geral as abreviaturas dos aminoácidos usadas aqui seguem a IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclatura para os aminoácidos e péptidos (Eur. J, Biochem. 1984, 158. 9-31). O termo "grupo protector de N" ou "N protegido" como aqui usado refere-se a grupos que se destinam a proteger o terminal N de um aminoácido ou péptido ou a proteger um grupo amino contra reacções indesejáveis durante os procedimentos de síntese. Os grupos protectores de N comummente usados são apresentados em Greene, "Protective Groups In Organic Synthesis", (John Wiley & Sons, New York (1981)), que é aqui incorporado por referência. Os grupos protectores de N compreendem carbamatos, amidas, derivados N-alquilo, derivados aminoacetal, derivados N-benzilo, derivados imina, derivados enamina e derivados N-heteroatómicos. Em particular, os grupos protectores de N incluem formilo, acetilo, benzoílo, pivaloílo, fenilsulfonilo, benzilo, t-butiloxicarbonilo (Boc), benziloxicarbonilo (Cbz) e semelhantes. Os grupos protectores de N também incluem um resíduo L- ou D-aminoacilo que pode ele próprio estar N-protegido. 0 termo "grupo protector de 0" como aqui usado refere-se a um substituinte que protege grupos hidroxilo contra reacções indesejáveis durante os procedimentos de síntese, tais como os grupos protectores de 0 apresentados em Greene, "Protective Groups In Organic Synthesis", (John Wiley & Sons, New York (1981)). Os grupos protectores de 0 compreendem éteres metílicos substituídos, por exemplo, metoximetilo, benziloximetilo, 2-metoxietoximetilo, 2-(trimetilsilil)etoximetilo, t-butilo,
benzilo e trifenilmetilo; éteres de tetra-hidropiranilo? éteres etílicos substituídos, por exemplo, 2,2,2-tricloroetilo; éteres silílicos, por exemplo, trimetilsililo, t-butildimetilsililo e t--butildifenilsililo ; e ésteres preparados por reacção do grupo hidroxilo com um ácido carboxílico, por exemplo, acetato, benzoato, propionato e esmelhantes.
O termo "alquilo inferior" como usado aqui refere-se a radicais alquilo de cadeia linear ou ramificada contendo 1 a 6 átomos de carbono incluindo, não limitativamente, metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, sec-butilo, n-pentilo, 1-metilbutilo, 2,2-dimetilbutilo, 2-metilpentilo, 2,2-dimetilpropilo, n-hexilo e semelhantes. 0 termo "arilo" como usado aqui refere-se a um sistema em anel carbocíclico, monocíclico ou bicíclico, possuindo um ou mais anéis aromáticos incluindo, não limitativamente, fenilo, naftilo, tetra-hidronaftilo, indanilo e semelhantes. Os grupos arilo podem ser não substituídos ou substituídos com um, dois ou três substituintes seleccionados independentemente de entre alquilo inferior, haloalquilo, alcoxi, tioalcoxi, amino, alquilamino, dialquilamino, hidroxi, halo, mercapto, nitro, carboxaldeído, carboxi, carboalcoxi e carboxamida. Além destes, os grupos arilo substituídos incluem tetrafluorofenilo e pentafluorofenilo. 0 termo "arilalquilo" como usado aqui refere-se a um grupo arilo apenso a um radical alquilo inferior, por exemplo, benzilo e semelhantes. 0 termo "cicloalquilo" como aqui usado refere-se a um anel alifático possuindo 3 a 7 átomos de carbono incluindo, não limitativamente, ciclopropilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo e semelhantes. Os grupos cicloalquilo podem ser não substituídos ou substituídos com um, dois ou três substituintes seleccionados independentemente de entre alquilo inferior, haloalquilo, alcoxi, tioalcoxi, amino, alquilamino, dialquilamino, hidroxi, halo, mercapto, nitro, carboxaldeído, carboxi, alcoxicarbonilo e carboxamida. 73 516 4955.PG.01
-11- 0 termo "cicloalquilalquilo" como usado aqui refere-se a um grupo cicloalquilo apenso a um radical alquilo inferior, incluindo, não limitativamente, ciclo-hexilmetilo. 0 termo 11 carboxialquilo" como usado aqui refere-se a um radical alquilo inferior ao qual está apenso um grupo carboxilo (-COOH). O termo "alcoxicarbonilalquilo" como usado aqui refere-se a um radical alquilo inferior ao qual está apenso um grupo alcoxicarbonilo (i.e., -C(O)OR30 onde R30 é alquilo inferior). O termo "arilalcoxicarbonilalquilo" como usado aqui refere--se a um radical alquilo inferior ao qual está apenso um grupo arilalcoxicarbonilo (i.e., -C(O)OR50 onde R50 ® um grupo arilalquilo). O termo "aminocarbonilalquilo" como usado aqui refere-se a um radical alquilo inferior ao qual está apenso -C(0)NH2. 0 termo "cianoalquilo" como usado aqui refere-se a um radical alquilo inferior ao qual está apenso um grupo ciano (-CN). 0 termo "alquilamino" como aqui usado refere-se a R51NH-onde Rfj-l é um grupo alquilo inferior. 0 termo "dialquilamino" como aqui usado refere-se a R52R53N-onde R52 e R53 são seleccionados independentemente de entre alquilo inferior. 0 termo "aminoalquilo" como usado aqui refere-se a um radical alquilo inferior ao qual está apenso um grupo amino (-NH2)· O termo "alquilaminoalquilo" como usado aqui refere-se a um radical alquilo inferior ao qual está apenso um grupo alquilamino. 0 termo "dialquilaminoalquilo" como usado aqui refere-se a 73 516 4955.PG.01 -12-
um radical alquilo inferior ao qual está apenso um grupo dialquilamino. O termo "(aminoalquil)(alquil)aminocarbonilo" como aqui usado refere-se a R54R55NC(0)- onde R54 é um grupo aminoalquilo e R55 é um grupo alquilo inferior. 0 termo "(aminoalquil)(alquil)aminosulfonilo" como aqui usado refere-se a R54R55NS(0)2- onde R54 é um grupo aminoalquilo e R55 é um grupo alquilo inferior. 0 termo "(alquilaminoalquil)(alquil)aminocarbonilo" como aqui usado refere-se a RggRgyNC(O)- onde Rgg é um grupo alquilaminoalquilo e R57 é um grupo alquilo inferior. 0 termo "(alquilaminoalquil)(alquil)aminosulfonilo" como aqui usado refere-se a R56R57NS(0)2~ onde R56 é um grupo alquilaminoalquilo e R57 é um grupo alquilo inferior. 0 termo "(dialquilaminoalquil)(alquil)aminocarbonilo" como aqui usado refere-se a R58R59NC(0)- onde R58 é um grupo dialquilaminoalquilo e R59 é um grupo alquilo inferior. O termo "(dialquilaminoalquil)(alquil)aminosulfonilo" como aqui usado refere-se a R58R5gNS(O)2~ onde R58 é um grupo dialquilaminoalquilo e R59 é um grupo alquilo inferior. 0 termo "(heterociclicoalquil)(alquil)aminocarbonilo" como aqui usado refere-se a RgQRg^NC(O)- onde RgQ é um grupo heterociclicoalquilo e R61 é um grupo alquilo inferior. 0 termo "(heterociclicoalquil)(alquil)aminosulfonilo" como aqui usado refere-se a R60R61NS(0)2- onde R60 é um grupo heterociclicoalquilo e R61 é um grupo alquilo inferior. 0 termo "anel heterocíclico" ou "heterocíclico" como aqui usado refere-se a qualquer anel de 3 ou 4 membros contendo um heteroátomo seleccionado de entre oxigénio, azoto e enxofre; ou
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um anel de 5 ou 6 membros contendo um, dois ou três átomos de azoto; um átomo de azoto e um átomo de enxofre; ou um átomo de azoto e um átomo de oxigénio. 0 anel de 5 membros tem 0-2 ligações duplas e o anel de 6 membros tem 0-3 ligações duplas. Os heteroátomos de azoto podem opcionalmente ser quaternizados. O termo "heterocíclico" também inclui grupos bicíclicos nos quais qualquer um dos anéis heterocíclicos anteriores está fundido com um anel benzeno ou um anel ciclo-hexano ou outro anel heterocíclico (por exemplo, indolilo, quinolilo, isoquinolilo, tetra-hidroquinolilo, benzofurilo ou benzotienilo e semelhantes). Os heterocíclicos incluem: azetidinilo, pirrolilo, pirrolinilo, pirrolidinilo, pirazolilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, imidazolilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, piridilo, piperidinilo, pirazinilo, piperazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, oxazolilo, oxazolidinilo, isoxazolilo, isoxazolidinilo, morfolinilo, tiazolilo, tiazolidinilo, isotiazolilo, isotiazolidinilo, indolilo, quinolilo, isoquinolinilo, benzimidazolilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, furilo, tienilo e benzotienilo.
Os heterocíclicos podem ser não substituídos ou mono-substituídos ou dissubstituídos com substituintes seleccionados independentemente de entre hidroxi, halo, οχο (=θ), alquilimino (R*N= onde R* é um grupo alquilo inferior), amino, alquilamino, dialquilamino, alcoxi, polialcoxi, haloalquilo, cicloalquilo, arilo, arilalquilo, -C00H, -S03H e alquilo inferior. Além disso, os heterocíclicos contendo azoto podem ser N-protegidos. 0 termo "heterociclicoalquilo" como aqui usado refere-se a um grupo heterocíclico apenso a um radical alquilo inferior.
Compostos representativos do invento incluem: Éster etílico de N-{(S)-2-[(terc-butiloxicarbonil)amino]-3,3-dimetilbutanoil}-isoleucil-estatil; N-{(S)-2-[(terc-Butiloxicarbonil)amino]-3,3-dimetilbutanoil}-isoleucil-estatil-OH; Éster etílico de N-{(S)-2-[(terc-butiloxicarbonil)amino]-2-ciclo-
73 516 4955.PG.01 -14- hexilacetil}-isoleucil-estatil; N-{(S)-2-[(terc-Butiloxicarbonil)amino]-2-ciclo-hexilacetil}-isoleucil-estatil-OH; N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil carboxamida; N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil (4-hidroxibutil)carboxamida; N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil (5-hidroxiamil)carboxamida; N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil (6-hidroxi-hexil)carboxamida; Éster terc-butílico do ácido [ 1-[(N-Cbz-isoleucil-isoleucil)amino]-3-metilbutil(metoxi)fosfinil]acético; N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil-OH; N-Succinil-isoleucil-isoleucil-estatil-valil-OH; Éster etílico de N-Boc-ciclo-hexilalanil-isoleucil-estatil; Éster etílico de N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil-j8-alanil; N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil isobutil-carboxamida; N-Boc-ciclo-hexilalanil-isoleucil-estatil-OH; N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil-/3-alanil-OH; N-Boc-isoleucil-isoleucil-triptofanil carboxaldeído; Ácido (4S)-4-(N-Boc-isoleucil-isoleucil-amino)-5-(3-indolil)-3-hidroxipentanóico; Éster etílico de ácido (4S)-4-(N-succinil-isoleucil-isoleucil-amino)-5-(3-indolil)-3-hidroxipentanóico; N-[(4S)-4-(N-Boc-isoleucil-isoleucil-amino)-5-(3-indolil)-3-hidroxipentanoil]-valil-OH; N- [(4S)-4-(N-Boc-aspartil-isoleucil-isoleucil-amino)-5-(3-indolil)-3-hidroxipentanoil]-valil-OH; Ácido (4S)-4-(N-Boc-ciclo-hexilalanil-isoleucil-amino)-5-(3- indolil)-3-hidroxipentanóico; N-[(4S)-4-(N-Boc-ciclo-hexilalanil-isoleucil-amino)-5-(3-indolil)-3-hidroxipentanoil]-valil-OH; (2S,3R,4S)—2-(N—Boc—isoleucil—isoleucil—amino)—1—ciclo—hexil—3,4— di—hidroxi-6-metil-heptano; (2S,3R,4S)-2-(N-Succinilo-isoleucil-isoleucil-amino)-l-ciclo-hexil-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano; (2S,3R,4S)-2-(N-Boc-aspartil(j8-0-benzil)-isoleucil-isoleucil-amino)-l-ciclo-hexil-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano; (2Sf 3R,4S)-2-(N-Acetil-isoleucil-isoleucil-amino)-l-ciclo-hexil-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano; (2S,3Rf 4S)-2-(N-Boc-ciclo-hexilalanil-isoleucil-amino)-1-ciclo-
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hexil-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano; (2S,3R,4S)-2-(N-Boc-isoleucil-isoleucil-amino)-1-(2-naftil)-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano; (2S,3R,4S)-2-(N-Boc-ciclo-hexilalanil-isoleucil-amino)-1-(2-naftil)-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano; (2S,3R,4S)-2-(N-Boc-ciclo-hexilalanil-isoleucil-amino)-1-(1-naftil)-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano; N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil isopropilcarboxamida; Éster terc-butílico do ácido [1-[(N-Cbz-isoleucil-isoleucil)amino]-3-metilbutil(hidroxi)fosfinil]acético; N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil isoamilcarboxamida? N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil ciclo-hexilmetilcarboxamida; Éster terc-butílico do ácido [l-[N-(N-Cbz-[(S)-2-amino-3,3-dime-tilbutanoil])-isoleucil)amino]-3-metilbutil(hidroxi)fosfinil]-acético; [1-[(N-Cbz-isoleucil-isoleucil)amino]-3-metilbutil(hidroxi)-fosfinil]acetil isobutilcarboxamida; (2S,3R,4S)-2-(N-Boc-ciclo—hexilalanil—isoleucil-amino)-1-(3-indolil)-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano; N-Boc-ciclo-hexilalanil-isoleucil-estatil isobutilcarboxamida; N-Boc-ciclo-hexilalanil-isoleucil-estatil N-(2-(2-piridil)-etil)carboxamida; N-Boc-ciclo-hexilalanil-isoleucil-estatil N-(2-N/,N#-dimetilaminoetil)carboxamida; N-Boc-ciclo-hexilalanil-isoleucil-estatil N-(2-(morfolin-4-il)etil)carboxamida ?
Hidrocloreto de (2S,3R,4S)-2-{[N-(4-metilpiperazin-l-ilcarbonil)-ciclo-hexil-alanil-isoleucil]amino)-1-(2-naftil)-3,4-di-hidroxi--6-metil-heptcino; N-Boc-terc-butilalanil-isoleucil-estatil-OEt; N-Boc-terc-butilalanil-isoleucil-estatil-OH; (2S,3R, 4S)-2-{(N-Boc-aspartil(/8-0-benzil)-isoleucil-isoleucil]-amino}-1-(2-naftil)-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano; N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil N-(2-(2-piridil)etil)carboxamida; (2S,3R,4S)—2—{[N-succinil-ciclo-hexil-alanil-isoleucil]amino)-l-(2-naftil)-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano; (2S,3R,4S)-2-{[N-Boc-ciclo-hexil-alanil-isoleucil]amino}-1-(4-
terc-butilfenil)-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano; (2S,3R,4S)—2—{[N-acetil-ciclo-hexilalanil-isoleucil]amino)-1-(4--terc-butilfenil)-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano; (2S,3R,4S)-2-{[N-acetil-ciclo-hexilalanil-isoleucil]amino)-1-(2--naftil)-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano; N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil N-metil-N-isobutil-carboxamida; (2S,3R,4S)-2-{[N-(morfolin-l-il-carbonil)-ciclo-hexilalanil-iso-leucil]amino}-1-(2-naftil)-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano; (2S,3R,4S)-2-{[{N-(N,N-dimetilaminoetil)-N-metilamino)carbonil--ciclo-hexilalanil-isoleucil]amino)-1-(2-naftil)-3,4-di-hidroxi--6-metil-heptano; e (2S,3R,4S)—2-{[N-(4-metilpiperazin-l-il-sulfonil)-ciclo-hexil--alanil-isoleucil]amino}-1-(2-naftil)-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano.
Os compostos do invento podem ser preparados como se mostra nos Esquemas I-VII. Ao longo dos Esquemas os substituintes A, B, C, D, E, X, R, R-l, r2, etc. são definidos como anteriormente.
A abordagem sintética geral está representada no Esquema I. A amina livre ou o sal hidrocloreto (que foi convertido na sua base livre, in situ) do resíduo C-terminal .1 é acoplada com o aminoácido apropriadamente N-protegido 2 na sua porção ácido carboxílico usando métodos de acoplamento de péptidos Standard. O grupo protector de N do produto acoplado 3. é removido e o resíduo é convertido na sua base livre num passo separado ou in situ. O resíduo desprotegido é então acoplado ao ácido carboxílico de um aminoácido apropriadamente N-protegido 4. usando métodos de acoplamento de péptidos Standard. Finalmente, o péptido 5. pode ser convertido em I (A é hidrogénio, R1NHCH(R2)C(0)- ou H02C(CH2)nC(0)-) por remoção do grupo protector, opcionalmente, seguida por acoplamento do grupo R^HCHÍ R2 ) C( 0) - ou H02C(CH2)nC(0)-.
Alternativamente, o processo pode iniciar-se na extremidade N-terminal da molécula. Assim, a porção ácido carboxílico do aminoácido N-protegido 6. (onde A é um grupo protector de N ou R2NHCH(R2)C(0)-) é acoplada com 2 para proporcionar o péptido 7. 73 516 4955.PG.01 -17”
(R40 é alquilo inferior ou benzilo). 0 éster T_ é convertido no ácido carboxílico por hidrólise ou hidrogenação catalítica. O ácido carboxílico derivado de 1 é então acoplado a 1 para proporcionar I. Neste método alternativo/ quando A é H02C(CH2)nC(0)-, este substituinte (i.e. A) é introduzido durante o último passo da sequência. A síntese de estatina e de derivados de estatina 1. é ilustrada no Esquema II. 0 aminoácido N-protegido adequado 8. é convertido no seu 3,5-dimetilpirazolido usando 3,5-dimetilpirazolo e 1-hidroxibenzotriazolo e 1-(dimetilamino-propil)-3-etilcarbodiimida ou outras condições ou catalisadores de acoplamento apropriados. 0 pirazolido 9. resultante é reduzido com hidreto de alumínio e lítio ou outro agente de redução apropriado para se obter o aminoácido carboxaldeído 10. o enol éter de um acetato de alquilo (tal como acetato de etilo), preparado usando hexametildisilazida de lítio ou outra base apropriada, é feito reagir com o aldeído para se obter ο β-hidroxiéster 11. 0 hidroxiéster 11 pode ainda ser mais processado para dar 1..
Os compostos 1 onde X é CH2 são obtidos por meio do ácido derivado do éster 11. A hidrólise de 11 proporciona o ácido livre que é convertido no dimetilpirazolido lia como se descreveu anteriormente. A redução usando hidreto de alumínio e lítio ou outro agente de redução similar proporciona o aldeído 11b. 0 aldeído é redutivamente aminado com RgNH-E para proporcionar 11c. que pode ainda ser mais processado para dar ,1. A síntese dos derivados de fósforo da estatina ou dos derivados da estatina 14. é apresentada no Esquema III. Os derivados de éster do ácido [(benziloxicarbonil)amino-l-substi-tuído(metoxi)-fosfinil]acético 12: (P4 é alquilo inferior, R41 é alquilo inferior) podem ser preparados como descrito na literatura: Bartlett, P.A.; Kezer, W. B.; J. Am. Chem. Soc., 106. 4282 (1984). A N-desprotecção e desalquilação do ácido fosfínico (por exemplo, usando cianeto de potássio e 1,4,7,10,13,16-hexaoxa-ciclooctadecano em dimetilsulfóxido) proporciona 13.. 0 composto 73 516 4955.PG.01 -18-
12 também pode ser processado para dar o derivado 14., o qual pode então ser processado para dar compostos do invento II usando os métodos gerais delineados no Esquema I. 0 Esquema IV ilustra a síntese de 2-amino-l-substituído-3,4--di-hidroxi-alcanos 19. e é baseado num procedimento da literatura (Luly, J. R.; Hsiao, C. N.? BaMaung, N.; Plattner, J. J.; J. Org. Chem. 53., 6109 (1988)). O aminoácido 8. é N-protegido usando di-terc-butil-dicarbonato ou um outro grupo protector de N para dar 15. O ácido carboxílico 15. é reduzido usando complexo de borano-tetra-hidrofurano ou outro agente redutor apropriado para dar o álcool 16. Usando condições de oxidação apropriadas, tais como cloreto de oxalilo/dimetilsulfóxido/cloreto de metileno, seguido por trietilamina, obtém-se o aldeído intermediário. O tratamento com cianeto de trimetilsililo e iodeto de zinco proporciona a trimetilsil ciano-hidrina, que após reacção com um reagente de Grignard R2iMgCl (tal como cloreto de isobutilmagnésio) proporciona a hidroxi cetona 17.. A redução usando boro-hidreto de sódio ou outro agente de redução apropriado proporciona o diol 18. A remoção do grupo protector de N proporciona o amino-diol 19, que pode ser processado nos compostos do invento III usando os métodos gerais delineados no Esquema I. 0 Esquema V ilustra uma síntese alternativa de 18. A redução do éster 25. (R* é alquilo inferior e semelhantes), por exemplo, com boro-hidreto de sódio, proporciona 16.. A oxidação (por exemplo, a oxidação de Swern), seguida pela reacção com o reagente de Wittig apropriado (por exemplo, Ph3P+CH2R2iBr_/KO'tBu em dimetilformamida ou Ph3P+CH2R2iBr“/hexametildisilazida de potássio em tetra-hidrofurano) proporciona a olefina 26.. A oxidação (por exemplo, 0s04/N-metilmorfolina N-óxido), seguida por purificação (por exemplo, recristalização), dá 18. 0 Esquema VI ilustra uma preparação alternativa de 19. onde R21 é isobutilo. 0 ácido D-isoascórbico 27. pode ser convertido no lactol conhecido 29. (J. Am. Chem. Soc., 105. 3661 (1983)). A * reacção com Ph3P=CH(CH3)2 proporciona 10.. A oxidação ao aldeído 31. seguida sequencialmente por reacção com benzilamina e um 73 516 4955.PG.01 -19-
reagente de Grignard (i.e. RCI^MgBr/CeCI^) dá a amina ,32.. A desprotecção do grupo amino, a redução da olefina e a remoção do grupo protector do acetonido proporcionam .19. onde R2i é isobutilo.
Uma preparação alternativa da forma reduzida do composto 31. (i.e. 33.) é apresentada no Esquema VII. 0 epoxiálcool 34. (J. Am. Chem. Soc. , 109 r 1525 (1987)) é protegido e em seguida feito reagir com isopropil Grignard para dar 35.. A reacção com ácido canforsulfónico (CSA), seguida por ozonólise, dá o aldeído 33.. O composto 33. pode ser convertido em 19. adaptando o procedimento delineado no Esquema VI.
ESQUEMA I 1
OH HCI H2N
R 0
Re Z P = N- grupo protector
P-NH
O p-nh^oh r3
i s. z
J 73 516 4955.PG.01
-20- ESQUEM& II
OH OH O
J 73 516 4955.PG.01
-21- ESQUEMA III
0 0 CbzNH P. 0R<> o o >VYfsA T OH R kR 12 11
E
II
IA
ESQUEMA IV
H2NN^C02HR PS.
P-NH GQjH
L
16 N- grupo protector 11
1} oxidação2) Znl2, TMSCN 3) R21MgCI
III 73 516 4955.PG.01 -22-
ESQUEMA V
P-M C02R*
16 P s N-grupo protector ZÃ 1) oxidaçao 2) reacçao de Wittig
ESQUEMA VI
1. HA
2. "xr MeO 0Me TsOH
DiBAIH
IA 2_2
1.BnNH2 R \ 1. h2 OH BnNH—r . / NH, ^ JL ^ ^ 2· RCH2Mg'Br CeCI3 H \ H N "Xo 2. HCI, CH3OH / ÕH ' R 11 Bn = benzilo a_2 R21= isobutilo 11
/ •-r* 73 516 4955.PG.01 -23-
ESQUEMA VII
Os compostos úteis como intermediários para a preparação dos compostos de fórmula (I) incluem compostos de fórmula:
onde P-l é hidrogénio ou um grupo protector de N; P2 é hidrogénio ou um grupo o-protector; e R é alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo ou heterocíclico bicíclico; ou um seu derivado éster, halogeneto de ácido ou éster activado.
Os compostos úteis como intermediários para a preparação dos compostos de fórmula (II) incluem compostos de fórmula:
onde P«l é hidrogénio ou um grupo protector de N; P4 é hidrogénio, alquilo inferior ou benzilo; e R é alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo ou heterocíclico bicíclico; ou um seu derivado éster, halogeneto de ácido ou éster activado.
Os compostos úteis como intermediários para a preparação dos compostos de fórmula (III) incluem compostos de fórmula:
i onde P-l é hidrogénio ou um grupo protector de N; Ré alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo ou heterocíclico bicíclico; P2 e P3 são seleccionados independentemente de entre hidrogénio ou um grupo protector de O; e R21 é alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; ou um seu sal.
Os exemplos que se seguem servirão para ilustrar ainda a preparação dos compostos do invento.
Exemplo 1 éster etílico de N-(fSl-2-rfterc-butiloxicarbonillaminol-3.3-dimetilbutanoill-isoleucil-estatil
Exemplo la
Boc-Leucil-Γ 3.5-dimetilpirazolido] A mono-hidrato de Boc-Leu-OH (25 g, 0,10 mol), 3,5-dimetilpirazol (DMP) (11,6 g, 0,12 mol) e hidrato de 1-hidroxibenzotriazolo (HOBt) (16,2 g, 0,12 mol) combinados em 73 516 4955.PG.01 -25-
cloreto de metileno (CH2C12) (550 ml) e arrefecidos a 2 "C adicionou-se hidrocloreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDCI) (21,4 g, 0,11 mol). A mistura reaccional foi deixada aquecer até à temperatura ambiente, agitada durante a noite e concentrada sob pressão reduzida, o resíduo foi diluído com acetato de etilo (EtOAc) e lavado com H3P04 IN. As lavagens aquosas foram reextractadas com EtOAc e os extractos de EtOAc combinados foram lavados com H3P04 IN (2x), NaHCQ3 saturado (3x) e salmoura, secos (Na2S04) e concentrados sob vácuo para dar o composto do título sob a forma de um sólido branco. Verificou-se que o espectro de -^-H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 310 (M+H)+.
Exemplo lb Boc-Leucinal
Ao produto do Exemplo la (25 g, 81 mmol) dissolvido em tetra-hidrofurano anidro (THP) (350 ml) e arrefecido a -78 °C adicionou-se hidreto de alumínio e lítio (LAH) (5 g, 132 mmol) em 5 porções ao longo de 70 minutos. A seguir à adição, a mistura reaccional foi mantida a -78 °C durante mais 60 minutos e em seguida foi cuidadosamente vertida, com agitação vigorosa, em ácido cítrico a 10% (1200 ml). Esta mistura foi extractada com éter dietílico (Et20) (3x500 ml) e os extractos orgânicos combinados foram lavados com’salmoura, secos (MgS04) e concentrados sob vácuo para dar um resíduo pegajoso. Verificou-se que o espectro de -*-H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 216 (M+H)+.
Exemolo lc Éster etílico de Boc-estatil
Adicionou-se acetato de etilo, que tinha sido seco refluxando durante a noite em CaH2 e destilado, (14 ml, 0,143 mol) a THF recém-destilado (450 ml) e arrefeceu-se a -78 eC. Adicionou-se uma solução 1M de hexametildisilazida de lítio (IiHMDS) (120 ml) ao longo de 30 minutos sob uma atmosfera de N2. Após uma hora a -78 °C, adicionou-se o produto do Exemplo lb (8,5 73 516 4955.PG.01 0
-26- 'ia
g, 0,039 mol) em THF recém-destilado (50 ml) e a mistura reaccional foi agitada a -78 °C durante 70 minutos e em seguida interrompida por adição de HC1 IN (700 ml). Esta mistura foi extractada com Et20 (2x400 ml) e os extractos orgânicos lavados com solução saturada de NaHC03 (2x), salmoura, secos (MgS04) e concentrados sob vácuo para dar 11,6 g de um óleo cor-de-laranja. A cromatografia flash em sílica-gel (350 g), eluindo com EtOAc a 15% em hexanos, deu 4,9 g do composto do título. EM (DCI/NH3) m/e 304 (M+H)+. Verificou-se que o espectro de ^-H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta.
Exemplo ld
Sal HC1 do éster etílico de estatil O produto do Exemplo lc (203 mg, 0,67 mmol) dissolvido em HCl 4N em dioxano (3 ml) foi agitado à temperatura ambiente durante 1 hora e em seguida concentrado sob vácuo para dar o produto do título sob a forma de um óleo. EM (DCI/NH3) m/e 204 (M+H)+ da base livre. Verificou-se que o espectro de •'•H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta.
Exemplo le Éster etílico de N-Boc-isoleucil-estatil Ao produto do Exemplo ld (152 mg, 0,63 mmol) dissolvido em CH2C12 (3 ml) adicionou-se N-metilmorfolina (NMM) (0,07 g, 0,70 mmol) e a mistura reaccional foi arrefecida a 0 °C. Adicionou-se hemi-hidrato de Boc-Ile-OH (152 mg, 0,63 mmol) seguido por 1-hidroxibenzotriazolo (HOBT) e EDCI (134 mg, 0,70 mmol). A mistura reaccional foi agitada a o °C e deixada aquecer até à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reaccional foi diluída com EtOAc, lavada com H3PO4 IN (3x), NaHC03 saturado (3x) e salmoura, seca (Na2S04) e concentrada sob vácuo para dar um sólido. A recristalização em hexano originou o composto do título sob a forma de um sólido cristalino branco com um rendimento de 73%. Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 417 (M+H)+, 434 (M+H+NH3)+. 73 516 4955.PG.01 -27-
Exemplo lf
Sal HC1 do éster etílico de isoleucil-estatil O produto do Exemplo le (200 mg, 0,48 mmol) foi desprotegido como se descreveu no Exemplo ld para proporcionar um óleo que foi dissolvido em H20 (15 ml) e liofilizado, obtendo-se o composto do título sob a forma de um sólido branco amorfo (169 mg, 100%). Verificou-se que o espectro de RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (FAB+) m/e 304 (M+H)+.
Exemplo lq Ácido (S)-2-Γlterc-butiloxicarbonil)amino]-3,3-dimetilbutanóico A L-t-butilglicina (1/00 g, 7,6 mmol) dissolvida em NaOH IN (9,5 ml) e THF (8 ml) adicionou-se di-t-butildicarbonato (1,67 g, 7,6 mmol) em THF (1,5 ml). A mistura reaccional foi agitada durante a noite à temperatura ambiente e extractada com hexanos (3x). Os extractos orgânicos combinados foram lavados com NaHC03 saturado (2x). As camadas aquosas combinadas foram ajustadas a pH 2 com NaHS04 1,IN e reextractadas com ET20 (3x). Os extractos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos (Na2S04) e concentrados sob vácuo para dar o composto do título sob a forma de um óleo (1,70 g) que solidificou em repouso. EM (DCI/NH3) m/e 232 (M+H)+, 249 (M+H+NH3)+.
Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta.
Exemplo lh Éster etílico de N-f(S^-2-Γ(terc-butiloxicarbonilΪaminol-3.3-dimetilbutanoil\-isoleucil-estatil O produto do Exemplo lf (95 mg, 0,27 mmol) foi submetido a partição entre EtOAc (20 ml) e solução saturada de NaHC03 (30 ml). A fase aquosa foi extractada com mais EtOAc (2x10 ml) e os extractos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos (Na2S04) e concentrados sob vácuo para dar a base livre (80 mg, 94%) sob a forma de um pó branco. À base livre dissolvida em CH2C12 (8 ml) e arrefecida a 0 °C adicionou-se composto do Exemplo lg (58 mg, 0,25 mmol) seguido 73 516 4955.PG.01 -28-
por HOBT (41 mg, 0,3 mmol) e EDCI (53 mg, 0,28 mmol). A mistura reaccional foi deixada aquecer até à temperatura ambiente durante a noite. Adicionou-se EtOAc e a mistura foi lavada com H3P04 IN (3x), NaHC03 saturado (3x) e salmoura (2x), seca (Na2S04) e concentrada sob vácuo para dar um resíduo vítreo que foi cristalizado em hexano quente para dar o composto do título (120 mg, 91%) sob a forma de um sólido branco-sujo. ^ RMN (CDC13, 300 MHz) δ 0,8-1,0 (m, 12H), 1,00 (s, 9H), 1,05-1,95 (m, 9H), 1,44 (s, 9H), 2,48 (d, 2H), 3,4 (d largo, 1H), 3,75-4,3 (m, 6H), 5,18 (m, 1H), 6,25 (m, 2H). Anal. Cale. para C27H51N307: C, 61,22; H, 9,70; N, 7,93; Encontrado: C, 60,94; H, 9,78; N, 8,14. EM (FAB+) m/e 530 (M+H)+.
Exemt>lo 2 N-f(S)-2-Γ(terc-Butiloxicarbonil)amino1-3.3 -dimetilbutanoil>-isoleucil-estatil-OH 0 produto do Exemplo lh (46 mg, 0,087 mmol) em MeOH (2,5 ml) foi tratado com NaOH 2N (0,1 ml) e agitado à temperatura ambiente durante 3,5 horas. Adicionou-se uma alíquota adicional de NaOH 2N (0,1 ml) e continuou-se a agitação durante mais 2,5 horas. A mistura reaccional foi concentrada sob vácuo, dissolvida em H20 e acidificada a pH 1 com H3P04 1M. O produto foi extractado com EtOAc, lavado com H20 (2x), salmoura, seco (Na2S04) e concentrado sob vácuo para dar um sólido branco (44mg). % RMN (CDC13, 300 MHz) δ 0,83-1,03 (m, 12H), 1,00 (s, 9H), 1,03-1,66 (m, 5H), 1,44 (s, 9H), 1,95 (s largo, 1H), 2,56 (t largo, 2H), 3,7-4,3 (m, 4H), 5,16 (m, 1H), 6,75 (m, 2H). Anal. Cale. para C25H47N307 0,5 H20: C, 58,80; H, 9,47; N, 8,23; Encontrado: C, 58,63; H, 9,32; N, 8,20. EM (FAB+) m/e 502 (M+H)+, 519 (M+H+NH3)+.
Exemplo 3 Éster etílico de N-((S)-2-ffterc-butiloxicarbonil)amino1-2-ciclo- hexilacetil)-isoleucil-estatil
Exemnlo 3a Ácido (S)-2-amino-2-ciclo-hexilacético Reduziu-se L-fenilglicina (8,04 g, 53 mmol) por hidrogenação catalítica usando Pt02 em ácido acético a 80% (HOAc) (200 ml). 0 73 516 4955.PG.01 &
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catalisador foi removido por filtração e o HOAc foi removido sob pressão reduzida para dar o composto do título sob a forma de um sólido branco (7,8 g, 94%). Verificou-se que o espectro de 'H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (FAB+) m/e 158 (M+H)+.
Exemplo 3b Ácido (S)-2-Γ(terc-butiloxicarbonil)amino]-2-ciclo-hexilacético Ao produto do Exemplo 3a (974 mg, 6,2 mmol) dissolvido em NaOH IN (8 ml) adicionou-se THF (7 ml) seguido por di-t-butil-dicarbonato (1,34 g, 6,2 mmol) em THF (2 ml). A mistura reaccional foi agitada durante a noite à temperatura ambiente e em seguida adicionou-se NaOH 2N (2 ml). A mistura reaccional foi extractada com hexanos (3x) e os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de NaHC03 (2x). As camadas aquosas combinadas foram acidificadas a pH 2 com NaHS04 1,1M e extractadas com Et20 (2x). Os extractos etéreos foram secos (Na2S04) e concentrados sob vácuo para dar o composto do título (1,37 g, 86%). Verificou-se que o espectro de XH RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 275 (m+h+nh3)+.
Exemplo 3c Éster etílico de N-í(S)-2-r(terc-butiloxicarbonil)amino~)-2-ciclo- hexilacetil1-isoleucil-estatil Ao produto do Exemplo lf (47 mg, 0,15 mmol) dissolvido em CH2CI2 (5 ml) e arrefecido a 0 °C adicionou-se o produto do Exemplo 3b (38 mg, 0,15 mmol) seguido por HOBT (24 mg, 0,18 mmol) e EDCI (31 mg, 0,16 mmol). A mistura reaccional foi deixada aquecer até à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reaccional foi diluída com EtOAc, lavada com H3P04 1M (3x), NaHC03 saturado (3x) e salmoura, seca (Na2S04) e concentrada sob vácuo para dar um sólido branco (62 mg) que foi recristalizado em EtOAC/hexanos. % RMN (CDC13, 300 MHZ) δ 0,9 (m, 12H), 1,0-2,15 (m, 20H), 1,45 (s, 9H), 2,5 (d largo, 2H), 3,3-3,5 (d de d, 1H), 3,8-4,3 (m, 6H), 5,0 (t largo, 1H), 6,4 (m, 2H). Anal. Cale. para C29H53N3°7: C/ 62/67' H/ 9,61; N, 7,56; Encontrado: C, 62,41; H, 9,54; N, 7,51. EM (FAB) m/e 556 (M+H)+. 73 516 4955.PG.01 rs /;/ f/íf ^
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Exemplo 4 N-íí S Ϊ-2-Γ(terc-butiloxicarbonil)amino]-2-ciclo-hexilacetil1-isoleucil-estatil-OH 0 produto do Exemplo 3c foi hidrolisado em analogia ao Exemplo 2 para dar um sólido que foi recristalizado em CH2Cl2/hexano para dar o composto do título (24 mg, 81%). % RMN (CDC13, 300 MHZ) δ 0,85-1,00 (m, 12H), 1,45 (S, 9H) , 1,00-2,05 (m, 17H), 2,55 (t largo, 2H), 3,80-4,30 (m, 4H), 5,10 (m, 1H), 6,7-6,95 (m, 2H). Anal. cale. para C27H49N3O7 H20: C, 59,43; H, 9,42; N, 7,70; Encontrado: C, 59,51; H, 9,13; N, 7,67. EM (FAB) m/e 528 (M+H)+.
Exemplo 5 N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil carboxamida
Exemplo 5a Éster etílico de N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil carboxamida 0 acoplamento do produto do Exemplo lf (200 mg, 0,63 mmol) com hemi-hidrato de Boc-lle-OH (152 mg, 0,63 mmol) pelo método descrito no Exemplo le proporcionou material bruto que foi recristalizado em EtOAc/hexano para dar o composto do título sob a forma de um sólido branco cristalino (280 mg, 84%). Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (FAB) m/e 530 (M+H)+.
Exemplo 5b N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil-OH 0 produto do Exemplo 5a (274 mg, 0,52 mmol) foi hidrolisado pelo método descrito no Exemplo 2 para dar o composto do título sob a forma de um sólido branco (240 mg, 93%). Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (FAB) m/e 502 (M+H)+.
Exemplo 5c N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil carboxamida
Ao produto do Exemplo 5b (40 mg, 0,08 mmol) dissolvido em 73 516 4955.PG.01 -31-
THF (4 ml) e arrefecido a -5 °C adicionou-se N-metilmorfolina (NMM) (9 jlíI , 84 jumol) seguida por cloroformato de isobutilo (IBCF) (11 μΐ, 84 μπιοί). A mistura reaccional foi agitada durante 20 minutos e adicionou-se NH40H concentrado (25 μΐ, 0,36 mmol). Após 2,5 horas, o solvente foi removido sob pressão reduzida, o resíduo foi dissolvido em MeOH e diluído com CHC13 e lavado com H3P04 1M (2x), NaHC03 saturado (2x) e salmoura. A secagem (Na2S04) e concentração sob vácuo seguida por cromatografia flash eluindo com CHCl3/EtOH 93,5/6,5 proporcionou o composto do título (7 mg, 18%) sob a forma de um sólido branco. λΗ RMN (DMSO-d6, 300 MHz) δ 0,8 (m, 18H), 1,4 (S, 9H), 1,0-1,8 (m, 9H), 2,0-2,2 (m, 2H), 3,6-3,9 (m, 3H), 4,35 (d de d, 1H), 6,8-7,7 (m, 4H). Anal. Cale. para C25H48N4°6 H20: C' 59#97? H, 9,66; N, 11,19; Encontrado: C, 59,77; H, 9,46; N, 10,77. EM (FAB) m/e 501 (M+H)+.
Exemplo 6 N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil (4-hidroxibutilΪ carboxamida Pelo método descrito no Exemplo 5c, fizeram-se reagir o produto do Exemplo 5b (40 mg, 0,08 mmol) e 4-amino-l-butanol (7,7μ1, 84 μιηοΐ) para dar material bruto (32 mg, 70%). A cromatografia flash eluindo com CHCl3/EtOH 93,5/6,5 proporcionou o composto do título sob a forma de um sólido branco (16 mg, 35%). % RMN (CDC13 + CD3OD, 300 MHz) S 0,85-1,00 (m, 18H), 1,05-2,00 (m, 13H), 1,45 (s, 9H), 2,30 (m, 2H), 3,60-4,20 (m, 8H), 5,50 (d de d, 1H), 7,10 (m, 2H). Anal. Cale. para H20: C, 58,96; H, 9,90; N, 9,48; Encontrado: C, 58,67; H, 9,43; N, 9,26. EM (FAB) m/e 573 (M+H)+, 595 (M+Na)+.
Exemplo 7 N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil (5-hidroxiamil)carboxamida Pelo método descrito no Exemplo 5c, fizeram-se reagir o produto do Exemplo 5b (40 mg, 0,08 mmol) e 5-amino-l-pentanol (8,6 mg, 84 Mmol) para dar material bruto (41 mg, 87%). A cromatografia flash eluindo com CHCl3/Et0H 91,5/8,5 proporcionou o composto do título sob a forma de um sólido branco (16 mg, 34%). XH RMN (CDCI3 + CD3OD, 300 MHz) δ 0,90 (m, 18H), 1,00-2,00
73 516 4955.PG.01 -32 (m, 15H) , 1,45 (S, 9Η) , 2,30 (m, 2Η), 3,20 (m, 2Η) , 3,60 (t, 2Η), 3,85 (m, 3Η), 4,15 (d de d, 1H). Anal. Cale. para c3oH58N4°7: C, 61,40; H, 9,96; N, 9,55; Encontrado; C, 61,15; H, 9,97; N, 9,38. EM (FAB) m/e 587 (M+H)+.
Exemplo 8 N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil (6-hidroxi-hexil)carboxamida
Pelo método descrito no Exemplo 5c, fizeram-se reagir o produto do Exemplo 5b (40 mg, 0,08 mmol) e 6-amino-l-hexanol (9,8 mg, 84 jumol) para dar material bruto (40 mg, 83%). A cromatografia flash eluindo com CHCl3/EtOH 93,5/6,5 proporcionou o composto do título sob a forma de um sólido branco (22 mg, 46%). 1H RMN (CDCI3 + CD3OD, 300 MHz) S 0,9 (m, 18H), 1,05-2,00 (m, 17H), 1,45 (s, 9H), 2,30 (m, 2H), 3,10-4,20 (m, 8H), 5,55 (m, H permutável), 7,05-7,22 (m, H permutável). Anal. Cale. para C31H60N4°7: c' 61*97' h* 10,07; N, 9,32; Encontrado; C, 61,75; H, 9,82; N, 9,14. EM (FAB) m/e 601 (M+H)+, 623 (M+Na)+.
Exemplo 9 Éster terc-butílico do ácido Γ1-Γ(N-Cbz-isoleucil-isoleucil)amino1-3-metilbutil(metoxi)fosfinil1acético
Exemplo 9a Éster terc-butílico do ácido Γl-amino-3-metilbutil-(metoxi)fosfinil1acético
Dissolveu-se éster terc-butílico do ácido [l-(benziloxi-carbonil)amino-3-metilbutil(metoxi)fosfinil]acético, preparado pelo procedimento da literatura: Bartlett, P.A.; Kezer, W.B.; J. Am. Chem. Soc., 106. 4282 (1984), (357 mg, 0,86 mmol) em MeOH (11 ml) e hidrogenolisou-se sob H2 usando Pd/C a 10% (84 mg) durante aproximadamente uma hora. o catalisador foi removido por filtração e o solvente foi removido sob pressão reduzida para dar o composto do título sob a forma de um óleo (230 mg, 100%). Verificou-se que o espectro de -’-Η RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 280 (M+H)+.
73 516 4955.PG.01 -33-
Exemplo 9b Éster terc-butílico do ácido rl-rfN-Cbz-isoleucillamino]-3--metilbutil(metoxi ^ fosfinil1 acético Pelo método descrito no Exemplo le, acoplaram-se o produto do Exemplo 9a (213 mg, 0#76 mmol) e Cbz-Ile-OH (203 mg, 0,76 mmol). 0 processamento normal proporcionou o composto do título sob a forma de um óleo (402 mg, 100%). Verificou-se que o espectro de RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 393 (M+H)+, 410 (M+H+NH3)+.
Exemplo 9c Éster terc-butílico do ácido Γ1-Γ(H-isoleucillamino1--3-metilbutil(metoxi)fosfinillacético O produto do Exemplo 9b (390 mg, 0,74 mmol) dissolvido em MeOH (16 ml) foi tratado com Pd/C a 10% (105 mg) sob H2 durante 90 minutos. O catalisador foi removido por filtração e a solução concentrada sob vácuo para proporcionar o composto do título sob a forma de um óleo (260 mg, 90%). Verificou-se que o espectro de ^-H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 527 (M+H)+, 544 (M+H+NH3)+.
Exemolo 9d Éster terc-butílico do ácido Γ1-Γ(N-Cbz-isoleucil-isoleucil)aminol-3-metilbutil(metoxi)fosfinil1acético
Pelo método descrito no Exemplo le, acoplaram-se o produto do Exemplo 9c (250 mg, 0,64 mmol) e Cbz-Ile-OH (170 mg, 0,64 mmol). 0 processamento normal proporcionou produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel eluindo com MeOH a 1% em CHCl3 para proporcionar o composto do título (287 mg, 71%). ^ RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 0,9 (m, 18H), 1,00-2,00 (m, 9H), 1,45 (S, 9H), 2,95 (m, 2H), 3,75 (t, 3H), 4,00 (m, 1H), 4,4 (rn, 1H), 4,6 (m, 1H), 5,10 (m, 2H), 5,5 (d de d, 1H), 6,40 (d de d, 1H), 6,90 (d de d, 1H), 7,35 (m, 5H). Anal. Cale. para C32H54N3°8P: c' 60/08; H, 8,51; N, 6,57; Encontrado; C, 59,90; H, 8,52? N, 6,56. EM (FAB) rn/e 640 (M+H)+, 662 (M+Na)+. 73 516 4955.PG.01
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Exemplo 10 N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil-OH Exemplo 10a Éster benzílico de N-Boc-isoleucil-isoleucil A uma solução de Boc-Ile-0H.l/2H20 (3,00 g, 12,5 mmol) em THF (40 ml) arrefecida a -15 °C adicionou-se N-metilmorfolina (NMM) (1,51 ml, 1,39 g, 13,7 mmol) e cloformato de isobutilo (IBCF) (1,78 ml, 1,87 g, 13,7 mmol); a suspensão branca formada foi agitada a -15 °C durante 5 min e tratada com uma solução a 0 °C do sal p-toluenossulfonato de H-Ile-OBn (4,92 g, 12,5 mmol) e NMM (1,51 ml, 1,39 g, 13,7 mmol) em THF (10 ml)/dimetilformamida (DMF) (5 ml). A mistura reaccional foi agitada a -15 °C e deixada aquecer gradualmente até à temperatura ambiente. Após 4 horas, adicionou-se EtOAc; a mistura foi lavada com H3P04 1M (3x), NaHC03 saturado (2x) e salmoura, seca (MgS04) e concentrada sob vácuo para dar o composto do título (5,16 g, 95%) sob a forma de um óleo que solidifica em repouso. Verificou-se que o espectro de -*-Η RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 435 (M+H)+, 452 (M+H+NH3)+.
Exemplo 10b
N-Boc-isoleucil-isoleucil-OH
Uma solução do produto do Exemplo 10a (1,00 g, 2,30 mmol) em MeOH (25 ml) foi tratada com Pd/C a 10% (0,50 g) e colocada sob H2· Após uma hora, o catalisador foi removido por filtração através de Celite e o filtrado foi concentrado sob vácuo. 0 resíduo obtido foi dissolvido em EtOAc, lavado com HC1 1M e salmoura, seco (MgS04) e concentrado sob vácuo para dar o composto do título (729 mg, 92%) sob a forma de um óleo incolor. Verificou-se que o espectro de -*-H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 345 (M+H)+, 362 (M+H+NH3)+.
Exemplo 10c
Sal HC1 do éster etílico de estatil Agitou-se à temperatura ambiente, durante 2 horas, uma solução do produto do Exemplo lc (425 mg, 1,4 mmol) em HCl-HOAc
73 516 4955.PG.01 -35- (20 ml). Adicionou-se água e liofilizou-se a solução para dar o produto do título sob a forma de um óleo (302 mg, 90%). EM (DCI/NH3) m/e 204 (M+H)+.
Exemplo lOd Éster etílico de N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil 0 produto do Exemplo 10c (150 mg, 0,63 mmol) e o produto do Exemplo 10b (150 mg, 0,62 mmol) foram acoplados pelo método descrito no Exemplo le para dar o composto do título (130 mg, 40%). Verificou-se que o espectro de ^-H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 530 (M+H)+, 547 (M+H+NH3)+.
Exemplo lOe N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil-OH A uma solução do produto do Exemplo lOd (122 mg, 0,23 mmol) em MeOH (10 ml) a 0 °C adicionou-se uma solução de NaOH 1M (0,5 ml, 0,5 mmol). A mistura reaccional foi agitada a 0 e c durante 3 horas e concentrada sob vácuo para remover o MeOH. Adicionou-se EtOAc seguido de lavagem com H3P04 1M e salmoura, secagem (MgS04) e concentração sob vácuo para dar um sólido que foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel para dar Boc-Ile-Ile-Sta-OMe. Verificou-se que o espectro de -^-H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. Anal. Cale. para c26h49n3°7: c' 60,56; H, 9,58; N, 8,15; Encontrado: C, 60,35; H, 9,76; N, 8,14. EM (DCI/NH3) m/e 516 (M+H)+, 533 (M+H+NH3)+. A uma solução deste composto (33 mg, 0,064 mmol) em MeOH (7 ml) adicionou-se NaOH 1M (0,45 ml, 0,45 mmol); a mistura reaccional foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. 0 MeOH foi removido sob pressão reduzida, adicionou-se EtOAc seguido de lavagens com H3P04 1M e salmoura, secagem (MgS04) e concentração sob vácuo para dar um sólido branco que foi purificado por HPLC preparativa usando um gradiente de 1% TFA/H20 e CH3CN. As fraeções contendo o produto desejado foram concentradas para remover CH3CN, congeladas e liofilizadas para dar o composto do título sob a forma de um sólido branco (7 mg, /*&' -36- 73 516 4955.PG.01 22%). ΧΗ RMN (DMSO-d6, 300 MHz) δ 0,80 (m, 18H), 1,00-1,75 (m, 9H), 1,37 (S, 9H), 2,05-2,40 (m, 2H), 3,60-3,90 (m, 3H), 4,15 (m, 1H), 6,77 (d, 1H), 7,65 (m, 2H). Anal. Cale. para C25H47N307 0,25 trifluoroacetato (TFA): C, 57,77; H, 8,98; N, 7,93; Encontrado: C, 57,77; H, 8,98; N, 8,05. EM (FAB) m/e 502 (M+H)+, 524 (M+Na)+.
Exemplo 11
N-Succinil-isoleucil-isoleucil-estatil-valil-OH
Exemplo 11a
Sal HC1 do éster benzílico de isoleucil-isoleucil
Uma solução do produto do Exemplo 10a (2,00 g, 4,61 mmol) em HCl-HOAc (25 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. Adicionou-se mais uma alíquota de HCl-HOAc (10 ml) e continuou-se a agitação durante mais 4 horas. A mistura reaccional foi diluída com H20 e liofilizada para dar o composto do título (1,67 g, 98%) sob a forma de um sólido branco. Verificou-se que o espectro de ^-H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 335 (M+H)+.
Exemplo 11b Éster benzílico de N-f3-(metoxicarbonil)propionil)- -isoleucil-isoleucil
Uma solução do produto do Exemplo 11a (1,00 g, 2,70 mmol), N-metilmorfolina (NMM) (0,33 ml, 0,30 g, 3,00 mmol), succinato de metilo (380 mg, 2,88 mol), EDCI (570 mg, 2,97 mmol) e HOBT (450 mg, 3,33 mmol) em CH2C12 (50 ml) foi agitada a 0 °C permitindo-se que aquecesse até à temperatura ambiente durante a noite. O CH2C12 foi removido sob pressão reduzida, adicionou-se EtOAc seguido de lavagens com H3P04 1M (3x), NaHC03 saturado (3x) e salmoura. A secagem (MgS04) seguida por concentração sob vácuo proporcionou produto bruto que foi purificado por cromatografia flash eluindo com hexano/EtOAc 3:1 e depois 1:1 para dar o composto do título (701 mg, 58%) sob a forma de um sólido branco. Verificou-se que o espectro de % RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta.
73 516 4955.PG.01 -37 EM (DCI/NH3) m/e 449 (M+H)+, 466 (M+H+NH3)+.
Exemplo llc N-( 3-(Metoxicarbonil)propionil'l -isoleucil-isoleucil-OH O produto do Exemplo 11b (500 mg, 1,12 mmol) foi desbenzilado pelo procedimento descrito no Exemplo 10b. Verificou-se que o espectro de RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 359 (M+H)+, 376 (M+H+NH3)+.
Exemplo lld N-Boc-estatil-OH Δ uma solução do produto do Exemplo lc (257 mg, 0,85 mmol), em MeOH (7 ml) adicionou-se uma solução de NaOH 1M (1,7 ml, 1,7 mmol). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e processada pelo procedimento descrito no Exemplo 2 para dar o composto do título (203 mg, 87%) sob a forma de um sólido branco. Verificou-se que o espectro de ^H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 276 (M+H)+, 293 (M+H+NH3)+.
Exemplo lie Éster benzílico de N-Boc-estatil-valil 0 produto do Exemplo lld (150 mg, 0,59 mmol) e o sal p-to-luenossulfonato de H-Val-OBn (212 mg, 0,56 mmol) foram acoplados pelo método descrito no Exemplo le para dar o composto do titulo (0,189 g, 75%). Verificou-se que o espectro de ^-H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 465 (M+H)+, 482 (M+H+NH3)+.
Exemplo llf Éster benzílico de N-f3-fmetoxicarbonil)propionil)--isoleucil-isoleucil-estatil-valil 0 produto do Exemplo lie (125 mg, 0,27 mmol) foi desprotegido pelo método descrito no Exemplo 10c para dar H-Sta-Val-OBn.HCl (104 mg, 97%) sob a forma de um sólido branco. Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta.
73 516 4955.PG.01 -38 EM (DCI/NH3) m/e 365 (M+H)+.
Este dipéptido (83 mg, 0,21 mmol) foi acoplado com o produto do Exemplo llc (84 mg, 0,23 mmol) pelo método descrito no Exemplo le para dar material bruto que foi purifiçado por cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com 3% MeOH/CHCl3 para dar o composto do título (11 mg, 80%). Verificou-se que o espectro de -*-H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 705 (M+H)+.
Exemplo llq N-Succinil-isoleucil-isoleucil-estatil-valil O produto do Exemplo llf (100 mg, 0,14 mmol) foi desbenzilado por hidrogenação catalítica pelo método descrito no Exemplo 10b e purificado por HPLC preparativa para dar o ácido carboxílico. Verificou-se que o espectro de -*-H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. Anal. Cale. para C30H54N4O9 0,7 TFA: C, 54,30; H, 7,94; N, 8,07; Encontrado: C, 54,44; H, 8,06; N, 8,32. EM (FAB) m/e 615 (M+H)+, 637 (M+Na)+. A uma solução do ácido carboxílico (69 mg, 0,113 mmol) em CH3OH (5 ml) a 0 °C adicionou-se NaOH 1M (0,23 ml, 0,23 mmol). A mistura reaccional foi agitada a 0 °C permitindo-se que aquecesse até à temperatura ambiente durante a noite. Adicionou-se uma alíquota adicional de NaOH 1M (0,1 ml, 0,1 mmol) e a mistura reaccional foi de novo agitada durante a noite. 0 CH30H foi removido sob pressão reduzida, adicionou-se H20 e a solução foi liofilizada. 0 material obtido foi dissolvido em H20/acetona, filtrado e liofilizado para dar o composto do título (38,7 mg, 57%). ^ RMN (DMS0-d6, 300 MHz) δ 0,85 (m, 24H), 1,00-1,75 (m, 13H) , 2,00-2,55 (m, 6H), 3,65-3,90 (m, 2H), 4,15 (m, 3H), 7,5-7,9 (m, 4H). Anal. Cale. para C2gH52N4Og 0,4 TFA 1,0 H20: C, 53,87; H, 8,25; N, 8,43; Encontrado: C, 53,87; H, 7,95; N, 8,62. EM (DCI/NH3) m/e 601 (M+H)+. 73 516 β 4955.PG.01
M
Exemolo 12 Éster etílico de N-Boc-ciclo-hexilalanil-isoleucil-estatil
Exemplo 12a Éster benzílico de N-Boc-ciclo-hexilalanil-isoleucil Boc-Cha-OH (3,5 g, 12,9 mmol) e o sal p-toluenossulfonato de H-Ile-OBn (5,08 g, 12,9 mmol) foram acoplados usando o método descrito no Exemplo 10a para dar material bruto que foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com 15% EtOAc/hexano para dar o composto do título puro. Verificou-se que o espectro de ^ RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 474 (M+H)+, 492 (M+H+NH3)+.
Exemplo 12b Éster etílico de N-Boc-ciclo-hexilalanil-isoleucil-estatil O produto do Exemplo 12a (500 mg, 1,055 mmol) foi desbenzilado usando o método descrito no Exemplo 10b para dar o ácido carboxílico livre. Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 385 (M+H)+, 402 (M+H+NH3)+. O ácido carboxílico (172 mg, 0,45 mmol) e o produto do Exemplo 10c (107 mg, 0,45 mmol) foram acoplados usando o método descrito no Exemplo le para dar produto bruto (232 mg, 91%). A cromatografia flash em sílica-gel, usando hexano/EtOAc 3:1 proporcionou o composto do título (146 mg, 57%). 1H RMN (DMSO-dg, 300 MHz) S 0,8 (m, 15H), 1,00-1,73 (m, 19H), 1,40 (S, 9H), 2,15-2,43 (m, 2H), 3,65-4,20 (m, 6H), 4,90 (d de d, 1H), 6,93 (d de d, 1H), 7,60 (d de t, 2H), . Anal. Cale. para C30H55N3°7: C· 63/27? H, 9,70; N, 7,38; Encontrado: C, 63,14; H, 9,71; N, 7,34. EM (FAB) m/e 570 (M+H)+.
Exemplo 13 Éster etílico de N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil-/3-alanil
73 516 4955.PG.01 -40 Exemplo 13a Éster etílico de N-Boc-estatil-g-alanil 0 produto do Exemplo lld (292 mg, lf06 mmol) e 0-Ala-OEt (196 mg, 1,27 mmol) foram acoplados pelo método descrito no Exemplo 10a para dar o composto do título (355 mg, 89%) sob a forma de um sólido branco. Verificou-se que o espectro de % RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 375 (M+H)+.
Exemplo 13b Éster etílico de N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil-fl-alanil 0 produto do Exemplo 13a (343 mg, 0,92 mmol) foi desprotegido pelo método descrito no Exemplo ld para dar o sal HC1 (279 mg, 98%). Verificou-se que o espectro de RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 274. 0 sal HC1 (164 mg, 0,53 mmol) foi acoplado com o produto do Exemplo 10b (200 mg, 0,58 mmol) pelo método descrito no Exemplo 10a para dar material bruto (284 mg, 82%). A cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com 2% CH3OH/CHCl3 proporcionou o composto do titulo (141 mg, 41%) sob a forma de um sólido branco. 1H RMN (DMSO-dg, 300 MHZ) δ 0,80 (m, 18H), 1,17 (t, 3H), 1,37 (s, 9H) , 1,00-1,70 (m, 9H), 2,10 (m, 2H), 2,40 (t, 2H), 3,15-3,35 (m, 2H), 3,65 (m, 1H), 3,80 (t largo, 2H), 4,03 (q, 2H), 4,15 (m, 1H), 4,75 (d de d, 1H), 6,75 (d, 1H), 7,47-7,82 (m, 3H). Anal. Cale. para 03οΗ56Ν408: C, 60,00; H, 9,36; N, 9,33; Encontrado; C, 59,98; H, 9,40; N, 9,33. EM (FAB) m/e 601 (M+H)+.
Exemplo 14 N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil isobutilcarboxamida
Exemplo 14a N-Boc-estatil isobutilcarboxamida 0 produto do Exemplo lld (260 mg, 0,94 mmol) foi acoplado com isobutilamina (113 μΐ, 83 mg, 1,14 mmol) usando o método descrito no Exemplo 10a para dar o composto do título (280 mg, 73 516 4955.PG.01 -41-
90%) sob a forma de um sólido branco. Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 331 (M+H)+.
Exemplo 14b N-Boc-isóleucil-isoleucil-estatil isobutilcarhoxamida 0 produto do Exemplo 14a (233 mg, 0,706 mmol) foi desprotegido pelo método descrito no Exemplo ld para dar o sal HC1 (188 mg, 100%). Verificou-se que o espectro de -’-Η RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 231 (M+H)+. 0 sal HC1 (90 mg, 0,34 mmol) foi acoplado com o produto do Exemplo 10b (128 mg, 0,37 mmol) pelo método descrito no Exemplo 10a para dar material bruto (119 mg, 63%). A cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com CH3OH a 2% em CHClg deu o composto do título puro (27 mg, 14%) sob a forma de um sólido branco. EMN (DMSO-dg, 300 MHz) 5 0,80 (m, 24H), 1,35 (s, 9H), 1,00-1,85 (m, 10H), 2,10 (m, 2H), 2,85 (m, 2H), 3,75 (m, 3H), 4,26 (m, 1H), 4,77 (m, 1H), 6,75-6,95 (d de d, 1H), 7,40-7,70 (m, 3H). Anal. Cale. para C29H56N4o6 0,5 H20: c, 61,56; H, 10,15; N, 9,90; Encontrado: C, 61,49; H, 10,03; N, 9,86. EM (FAB) m/e 557 (M+H)+.
Exemplo 15
N-Boc-Ciclo-hexilalanil-isoleucil-estatil-OH 0 produto do Exemplo 12b (85 mg, 0,15 mmol) foi hidrolisado pelo método descrito no Exemplo 2 para dar o composto do título. 1H RMN (DMSO-dg, 300 MHz) 5 0,80 (m, 12H), 1,35 (s, 9H), 1,00-
EM (FAB) m/e 542 (M+H)+, 564 (M+Na)+.
Exemplo 16
N-Boc-Isoleucil-isoleucil-estatil-g-alanil-OH 0 produto do Exemplo 13 (100 mg, 0,17 mmol) foi hidrolisado 73 516 4955.PG.01
-42- ψβ'-·' ·,<#- pelo método descrito no Exemplo 2 para dar o composto do título (68,7 mg, 71%) sob a forma de um sólido branco. RMN (DMS0-d6, 300 MHz) δ 0,80 (m, 18H), 1,00-1,73 (m, 9H), 1,40 (s, 9H) , 2,10 (m, 2H), 2,35 (t, 2H), 3,20 (m, 2H), 3,66 (m, 1H), 3,80 (t largo, 2H), 4,15 (m, 1H), 4,75 (d largo, 1H), 6,75 (d, 1H), 7,45-7,80 (m, 3H), 12,15 (s largo, 1H). Anal. Cale. para C28H52N4°8! C' 58,72; H, 9,15; N, 9,78; Encontrado; C, 58,47; H, 9,21; N, 9,67. EM (FAB) m/e 573 (M+H)+.
Exemplo 17 N-Boc-Isoleucil-isoleucil-triptofanil carboxaldeído
Exemplo 17a
Sal HC1 de triptofanil (N-metoxi-N-metil)carboxamida A Boc-Trp-OH (5,00 g, 16,4 mmol) dissolvido em CH2C12 (100 ml) contendo trietilamina (TEA) (2,75 ml, 1,2 equiv.) adicionou-se hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxi-tris(dimetilamino)-fosfónio (reagente BOP) (8,72 g, 1,2 equiv.), hidrocloreto de N,0-dimetil-hidroxilamina (1,92 g, 1,2 equiv.) e TEA (2,75 ml, 1,2 equiv.). Depois de uma hora de agitação à temperatura ambiente, adicionou-se CH2C12 (50 ml) e lavou-se a mistura com ácido cítrico a 10%, NaHC03 saturado e salmoura, secou-se (Na2S04) e concentrou-se sob vácuo para dar um óleo amarelo que foi cristalizado em EtOAc/hexano. 0 grupo protector Boc foi removido pelo método descrito no Exemplo ld para dar o composto do título (5,02 g, 91%). Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta.
Exemplo 17b N-Boc-Isoleucil-triptofanil (N-metoxi-N-metil)carboxamida 0 produto do Exemplo 17a (2,45 g, 8,6 mmol) e Boc-Ile-OH (2,07 g, 8,6 mmol) foram acoplados usando o procedimento descrito no Exemplo 10a para dar material bruto que foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com EtOAc/hexano 1:1 para dar o composto do título (3,5 g, 88%). Verificou-se que o espectro de % RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (FAB) m/e 461 (M+H)+.
73 516 4955.PG.01 -43-
Exemplo 17c N-Boc-Isoleucil-isoleucil-triptofanil (N-metoxi-N- -metil)carboxamida 0 grupo protector Boc foi removido do produto do Exemplo 17b pelo método descrito no Exemplo ld para dar o sal hidrocloreto (604 mg, 1,53 mmol). Este composto foi acoplado com hemi-hidrato de Boc-lle-OH (368 mg, 1,0 equiv.) pelo método descrito no Exemplo 10a para dar produto bruto. A purificação por cromatografia flash em sílica-gel, usando EtOAc/hexano 1:1 proporcionou o composto do título (576 mg, 66%). Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. Obteve-se uma purificação adicional por HPLC preparativa de fase inversa eluindo com 0,1% TFA/H20 e CH3CN. Anal. Cale. para ^30Η47Ν5Ο6 0,25 TFA: C, 60,86; H, 7,91; N, 11,63; Encontrado: C, 60,83; H, 8,05; N, 11,75. EM (FAB) m/e 574 (M+H)+.
Exemplo 17d N-Boc-Isoleucil-isoleucil-triptofanil carboxaldeído Ao produto do Exemplo 17c (100 mg, 0,1745 mmol) dissolvido em THF (8 ml) sob N2 e arrefecido a 0 “C num banho de gelo adicionou-se hidreto de alumínio e lítio (LAH) 1M em THF (1,40 ml, 8,0 equiv.). Após 20 minutos a 0 °c, a mistura reaccional foi vertida em ácido cítrico a 10% (10 ml). Depois de se agitar à temperatura ambiente durante 30 minutos, adicionou-se ácido cítrico a 10% (10 ml) e a mistura foi extractada com EtOAc (3xl5ml). Os extractos orgânicos combinados foram lavados com NaHC03 saturado, ácido cítrico a 10% e salmoura, secos (Na2S04) e concentrados sob vácuo para dar um resíduo semi-sólido. Este produto bruto foi submetido a cromatografia flash em sílica-gel, usando EtOAc/hexano 1:1, como eluente, para dar o composto do título (16 mg, 18%). 1H RMN (CDC13, 300 MHz) δ 0,90 (m, 12H), 1,05-2,00 (m, 6H), 1,45 (S, 9H), 3,30 (t largo, 2H), 3,90 (m, 1H), 4,30 (m, 1H), 4,90 (m, 1H), 6,45 (d largo, 1H), 6,60 (s largo, 1H), 7,00-7,40 (m, 5H), 7,60 (d largo, 1H), 8,20 (s largo, 1H), 9,62 (s, 1H). Anal. Cale. para ^28**42^405: C, 65,35; H, 8,23; N, 10,89; Encontrado: C, 65,44; H, 8,53; N, 10,45. EM (FAB) m/e 515 (M+H)+, 537 (M+Na)+. -44- 73 516 4955.PG.01
Exemplo 18 Ácido (4S)-4-ÍN-Boc-isoleucil-isoleucil-amino)--5-(3-indolil)-3-hidroxÍpentanóico
Exemplo 18a N-Boc-triptofanil-Γ3.5-dimetilpirazolidol Fez-se reagir Boc-Trp-OH (6,00 g, 24,3 mmol) com 3,5-dime-tilpirazol (2,33 g, 1 equiv.) pelo método descrito no Exemplo la para dar material bruto que foi submetido a cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com hexano/EtOAc 2:1 para dar o composto do título (6,95 g, 75%). Verificou-se que o espectro de ·4ΐ RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta.
Exemplo 18b N-Boc-triptofanil carboxaldeído O produto do Exemplo 18a (4,00 g, 10,47 mmol) foi reduzido pelo método descrito no Exemplo lb para dar aldeído bruto que foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com hexano/EtOAc 2:1 para dar o composto do título (2,44 g, 81%). Verificou-se que o espectro de XH RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta.
Exemplo 18c Éster etílico do ácido (4SW-N-Boc-amino-5--(3-indolil)-3-hidroxipentanóico Usando o procedimento descrito no Exemplo lc, o produto do Exemplo 18b (2,44 g, 8,46 mmol) foi convertido em produto bruto que foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com hexano/EtOAc 2:1 para dar o composto do título (1,91 g, 60%). Verificou-se que o espectro de ^-H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta.
Exemplo 18d Éster etílico do ácido f4S^-4-fN-Boc-isoleucil-isoleucil-amino)--5-(3-indolil)-3-hidroxipentanóico 0 produto do Exemplo 18c (1,00 g, 2,66 mmol) foi desprotegido usando o procedimento descrito no Exemplo ld para dar o sal hidrocloreto (786 mg, 95%). Este sal hidrocloreto (604 73 516 4955.PG.01 -45-
___-jsjEtiaÊQfc»
mg, 1,94 mmol) foi convertido na sua base livre usando NaHC03 saturado (50 ml) e extractado após 30 minutos usando EtOAc. o EtOAc foi removido sob pressão reduzida para dar a base livre sob a forma de um óleo.
Ao produto do Exemplo 10b (666 mg, 1 equiv.) dissolvido em CHCI3 (8 ml) adicionou-se EDCI (445,6 mg, 1,2 equiv.) e HOBT (314 mg, 1,2 equiv.). Depois de se agitar durante 30 minutos, adicionou-se a amina livre em CHC13 (2 ml)/DMF (3 ml) e a mistura reaccional foi deixada agitar à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reaccional foi concentrada sob vácuo e adicionou-se EtOAc. A lavagem com NaHC03 saturado, H2O, H3PO4 IN e salmoura, secagem (Na2S04) e concentração sob pressão reduzida para dar o produto sob a forma de um óleo que foi purificado por cromatografia flash em silica-gel, eluindo com EtOAc/hexano 1:1 para dar o composto do título (381 mg, 33%). Verificou-se que o espectro de -*-H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (FAB) rn/e 603 (M+H)+.
Exemplo I8e Ácido (4S)-4-(N-Boc-isoleucil-isoleucil-amino)-5-(3-indol)-3- -hidroxipentanóico O produto do Exemplo 18d (61 mg, 101,3 mmol) foi hidrolisado usando o método descrito no Exemplo 2 para dar material bruto que foi purificado por HPLC preparativa para dar o composto do título. % RMN (CDCI3+CD3OD, 300 MHz) S 0,70-1,00 (m, 12H), 1,00-1,90 (m, 6H), 1,45 (s, 9H), 1,70 (m, 2H), 2,30 (m, 2H), 2,90-3,15 (m, 2H), 3,97 (m, 3H), 4,32 (d largo, 1H), 7,10 (m, 3H), 7,33 (d, 1H), 7,70 (t largo, 1H). Anal. Cale. para C3oH46N4°7 °'7 TFA: c> 57,62; H, 7,19; N, 8,56; Encontrado: C, 57,49; H, 7,25; N, 8,94. EM (DCI/NH3) m/e 575 (M+H)+, 592 (M+H+NH3)+.
Exemplo 19 Éster etílico do ácido f4S)-4-(N-succinil-isoleucil-isoleucil--amino^-5-(3-indolil^-3-hidroxipentanóico 0 produto do Exemplo 18d (41,1 mg, 68,3 mmol) foi desprotegido usando o método descrito no Exemplo ld para dar o
73 516 4955.PG.01 sal hidrocloreto. A este sal hidrocloreto dissolvido em DMF (1 ml) adicionou-se 4-(dimetilamino)piridina (DMAP) (20 mg), trietilamina (TEA) (5 gotas) e anidrido succinico (8,2 mg, 1,2 equiv.). A mistura reaccional foi agitada durante a noite à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa para dar o composto do título. l-H RMN (CDC13, 300 MHz) S 0,85 (m, 12H), 1,00-2,10 (m, 12H), 1,23 (t, 3H), 2,40-3,10 (m, 4H) , 3,03 (d de d, 1H), 3,70 (m, 1H), 4,12 (q, 2H), 4,00-4,50 (m, 2H), 6,30-7,30 (m, 5H), 7,33 (d largo, 1H), 7,66 (d largo, 1H), 8,10 (s largo, 1H). Anal. Cale. para C31H46N4Og 0,75 TFA: C, 56,72; H, 6,85; N, 8,14; Encontrado: C, 57,08; H, 7,01; N, 8,18. EM (FAB) m/e 603 (M+H)+.
Exemplo 20 N-Γ(4S^-4-(N-Boc-Isoleucil-isoleucil-amino^-5-(3-indolil)-3-
-hidroxioentanoil1-valil-OH
Exemplo 20a Éster benzílico de Ν-Γ(4S)-4-(N-Boc-amino)-5-(3-indolil)-3- -hidroxipentanoill-valil
0 produto do Exemplo 18c (90,2 mg, 0,24 mmol) foi hidrolisado pelo procedimento descrito no Exemplo 2 para dar produto bruto que foi purificado por HPLC preparativa para dar o ácido carboxílico desejado. Verificou-se que o espectro de -*-H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 349 (M+H)+, 366 (M+H+NH3)+.
Este ácido carboxílico (83,6 mg, 0,24 mmol) foi acoplado com o sal p-toluenossulfonato de Val-OBn (91,2 mg, 1,0 equiv.) pelo procedimento descrito no Exemplo 10a para dar material bruto que foi submetido a cromatografia flash em sílica-gel, usando EtOAc:hexano 1:1 como eluente para dar o composto do título (47,3 mg, 37%). Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 538 (M+H)+, 555 (M+H+NH3)+.
73 516 4955.PG.01 -47-
Exemplo 20b Éster benzílico de Ν-Γ(4Sl-4-(N-Boc-isoleucil-aminol-5-(3--indolil)-3-hidroxipentanoil1-valil 0 produto do Exemplo 20a foi desprotegido pelo método descrito no Exemplo ld para dar o sal hidrocloreto. Este sal (205 mg, 0,434 mmol) foi acoplado com hemi-hidrato de Boc-Ile-OH (104 mg, 1,0 equiv.) pelo método descrito no Exemplo le para dar um resíduo semi-sólido que foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com EtOAc/hexano 1:1 para dar, após cristalização em EtOAc/hexano 1:1, o composto do título (197 mg, 70%). Verificou-se que o espectro de -*-H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. Anal. Cale. para C36H50N4°7 0,25 TFA: C, 64,54; H, 7,46; N, 8,25; Encontrado: C, 64,76; H, 7,11; N, 8,25. EM (DCI/NH3) m/e 651 (M+H)+.
Exemplo 20c Éster benzílico de N-[(4S)-4-(N-Boc-isoleucil-isoleucil-amino1-5--(3-indolil)-3-tiidroxipentanoin -valil 0 produto do Exemplo 20b (104 mg, 0,16 mmol) foi desprotegido pelo método descrito no Exemplo ld para dar o sal hidrocloreto. Este sal foi acoplado com hemi-hidrato de Boc-Ile-OH (38,4 mg, 1,0 equiv.) pelo método descrito no Exemplo le e purificado pelo método descrito no Exemplo 20b para dar o composto do título (58 mg, 47%). Verificou-se que o espectro de •^H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. Anal. Cale. para C^Hgi^Og 0,8 EtOAc: C, 65,12; H, 8,14; N, 8,44; Encontrado: C, 65,18; H, 7,87; N, 8,86. EM (DCI/NH3) m/e 764 (M+H)+, 781 (M+H+NH3)+.
Exemplo 20d Ν-Γ(4S)-4-(N-Boc-Isoleucil-isoleucil-amino)-5-(3-indolil)-3-
-hidroxipentanoill-valil-OH A Pd/C a 10% (21 mg) em ácido acético (HOAc) sob N2 adicionou-se formato de amónio (10,8 mg, 3 equiv.). Após 10 minutos, adicionou-se o produto do Exemplo 20c (43,4 mg, 56,9 μιηοΐ) em HOAc (3 ml). A mistura reaccional foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. 0 catalisador foi removido por filtração e o HOAc foi removido sob pressão reduzida. 0 resíduo 73 516 4955.PG.01 £/ · ..
-48- foi retomado em H2o/CH3CN e liofilizado para dar o composto do título. ΧΗ RMN (DMSO—dg, 300 MHz) δ 0,80 (m, 18H), 1,00-1,50 (m, 3H), 1,35 (S, 9H), 1,70 (m, 2H), 2,00 (m, 2H), 2,30 (m, 1H), 2,70 (m, 1H), 3,00 (m, 1H), 3,70-4,30 (m, 6H), 6,80-7,90 (m, 6H) , 10,70 (m, 1H). Anal. Cale. para C35H55N508 0,5 TFA: C, 58,58; H, 7,55; N, 9,44; Encontrado: C, 58,67; H, 7,64; N, 9,34. EM (FAB) m/e 674 (M+H)+, 696 (M+Na)+.
Exemplo 21
N-Γ(4S)-4-(N-Boc-Aspartil-isoleucil-isoleucil-aminol-5-(3 -indolil)-3-hidroxipentanoil]-valil-OH
Exemplo 21a Éster benzílico de N-f(4S)-4-(N-Boc-aspartil(fl-O-benzil)--isoleucil-isoleucil-amino )-5-( 3-indolill-3-hidroxipentanoin- -valil O produto do Exemplo 20c (60,8 mg, 79,7 /imol) foi desprotegido usando o método descrito no Exemplo ld para dar o sal hidrocloreto. Este sal foi acoplado com Boc-Asp(/30Bn)-0H (30,9 mg, 1,2 equiv.) pelo método descrito no Exemplo le para dar material bruto que foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com EtOAc/hexano 1:1 para dar o produto do título (25,1 mg, 33%).
Exemplo 21b N-Γ f4S^-4-(N-Boc-Aspartil-isoleucil-isoleucil-aminol-5-(3--indolil)-3-hidroxipentanoil1-valil-OH A hidrogenação por transferência catalítica do produto do Exemplo 21a (25,1 mg, 26 jLtmol) pelo método descrito no Exemplo 20d proporcionou, depois de HPLC preparativa e liofilização, o composto do título. ΧΗ RMN (CDC13+CD30D, 300 MHz) δ 0,74-1,00 (m, 18H), 1,45 (s, 9H), 1,85 (m, 1H), 2,00 (m, 1H), 2,10-2,50 (m, 4H) , 2,60-3,20 (m, 10H), 3,95-4,50 (m, 10H), 6,90-7,15 (m, 6H), 7,60 (m, 1H). Anal. Cale. para CggHgQNgO-Q 1,0 TFA: C, 54,54; H, 6,81; N, 9,31; Encontrado: C, 54,32; H, 6,78; N, 9,38. EM (DCI/NH3) m/e 789 (M+H)+, 811 (M+Na)+, 833 (M+2Na-H)+. AÍ -49- AÍ -49- áaft-iissg®. 73 516 4955.PG.01
Exemplo 22 Ácido (4S)-4-(N-Boc-ciclo-hexilalanil-isoleucil-amino)-5-(3- -indolil)-3-hidroxipentanóico
Exemplo 22a Éster etílico de ácido (4S)-4-fN-Boc-ciclo-hexilalanil-isoleucil--amino)-5-(3-indolil)-3-hidroxipentanóico 0 produto do Exemplo 18c (255 mgf 0,678 mmol) foi desprotegido pelo método descrito no Exemplo ld e convertido na sua base livre como se descreveu no Exemplo 18d. O produto do Exemplo 12a foi desbenzilado como se descreveu no Exemplo 12b para dar o ácido carboxílico. A amina livre foi acoplada com o ácido carboxílico (312,4 mg, 1,2 equiv.) pelo método descrito no Exemplo le para dar, após cromatografia flash em silica-gel, usando EtOAc/hexano 1:1 como eluente, o composto do título (337 mg, 90%). Verificou-se que o espectro de RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) rn/e 643 (M+H)+.
Exemplo 22b Ácido (4S)-4-(N-Boc-ciclo-hexilalanil-isoleucil-amino)-5-(3- -indolil)-3-hidroxipentanóico 0 produto do Exemplo 22a (50 mg, 0,078 mmol) foi hidrolisado pelo método descrito no Exemplo 2 para dar, após HPLC preparativa, o composto do título. ^-H RMN (CDCI3, 300 MHz) 6 0,70-1,05 (m, 6H), 1,40 (2s, 9H), 1,05-2,60 (m, 13H), 3,1 (m, 2H), 4,00-4,45 (m, 3H), 4,90 (m, 1H), 6,60-7,20 (m, 4H), 7,33 (d, 1H) , 7,60 (2d, 2H) , 8,20 (m, 1H) . Anal. Cale. para ¢33^0^07 0,65 TFA: C, 59,80; H, 7,41; N, 8,13; Encontrado: C, 59,82; H, 7,37; N, 8,14. EM (FAB) m/e 615 (M+H)+, 637 (M+Na)+.
Exemplo 23
Ν-Γ(4S)-4-(N-Boc-Ciclo-hexilalanil-isoleucil-amino)-5-(3--indolil)-3-hidroxipentanoill-valil-OH
73 516 4955.PG.01
-50-
Exemplo 23a
Éster benzílico de N-r(4S)-4-(N-Boc-ciclo-hexilaianil-isoleucil--amino)-5-(3-indolil)-3-hidroxipentanoin-valil O produto do Exemplo 20a (493 mg, 0,918 mmol) foi desprotegido pelo método descrito no Exemplo ld para dar o sal hidrocloreto. O produto do Exemplo 12a foi desbenzilado como se descreveu no Exemplo 12b para dar o ácido carboxílico (423 mg, 1,2 equiv.). 0 sal hidrocloreto da amina e o ácido carboxílico foram acoplados usando o método descrito no Exemplo le para dar, após cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com EtOAc/hexano lil, o composto do título (217 mg, 30%). Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta.
Exemplo 23b N-Γ(4S}-4-(N-Boc-Ciclo-hexilalanil-isoleucil-amino\-5-(3--indolil)-3-hidroxipentanoil1-valil-OH A hidrogenação por transferência catalítica do produto do Exemplo 23a (40 mg, 0,05 mmol) pelo método descrito no Exemplo 20d proporcionou, depois de HPLC preparativa, o composto do título. 1H RMN (CDC13, 300 MHz) S 0,65 (m, 6H), 1,02 (t, 6H), 0,85-1,50 (m, 6H), 1,45 (2s, 9H), 1,70 (m, 7H), 2,25 (m, 2H), 2,30-3,20 (m, 4H), 3,40 (m, 1H), 4,03 (m, 2H), 4,20 (m, 1H), 4,35
(m, 2H), 4,95 (m, 1H), 6,60 (s largo, 1H), 6,90-7,50 (m, 1H), 8,40 (m, 10H). Anal. Cale. para C38H59N5°8 0,6 TFA: C, 60,18; H, 7,68; N, 8,95; Encontrado: C, 60,35; H, 7,74; N, 9,06. EM (FAB) m/e 714 (M+H)+, 736 (M+Na)+.
Exemplo 24 (2S,3R.4S^—2-(N-Boc—Isoleucil-isoleucil—amino)—1—ciclo—hexil—3,4— -di-hidroxi-6-meti1-heptano
Exemplo 24a (2S.3R.4S)-2-Amino-l-ciclo-hexil-3.4-di-hidroxi-6-metil-heptano Preparou-se (2S,3R,4S)-2-[(terc-butiloxicarbonil)amino]-1-ciclo-hexil-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano como se descreve na literatura: Luly, J.R.; Hsiao, C.N.; BaMaung, N.; Plattner, J.J. J.Org. Chem. 1988, 53, 6109. Este composto (413 mg, 1,2 mmol) foi
73 516 4955.PG.01 -51 desprotegido pelo método descrito no Exemplo ld para dar o sal hidrocloreto , o qual foi dissolvido em THF (2 ml) e tratado com NaOH IN a pH 12. A mistura foi extractada com CH2C12 (5x5 ml). Os extractos orgânicos combinados foram secos (K2C03) e concentrados sob vácuo para dar o composto do título (294 mg, 99%). Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta.
Exemplo 24b (2S.3R.4Sl-2-(N-Boc-Isoleucil-amino^-l-ciclo-hexil-3.4--di-hidroxi-6-metil-heptano 0 produto do Exemplo 24a (330 mg, 1,42 mmol) e hemi-hidrato de Boc-Ile-OH (342 mg, 1,42 mmol) foram acoplados pelo procedimento descrito no Exemplo 10a para dar o composto do título (558 mg, 86%). % RMN (CDCI3+CD3OD, 300 MHz) 5 0,85-1,00 (m, 12H), 1,10-2,00 (m, 19H), 1,45 (s, 9H) , 3,20 (d de d, 1H), 3,30 (d de t, 1H) 3,92 (t, 1H), 4,36 (d de t, 1H), 4,90 (s largo, 1H), 6,20 (d, 1H). Anal. Cale. para C25H48N2°5 0,25 H20: C, 65,11; H, 10,60; N, 6,07; Encontrado: C, 65,09; H, 10,48; N, 6,03. EM (FAB) m/e 457 (M+H)+.
Exemplo 24c (2S.3R.4S)-2-(N-Boc-Isoleucil-isoleucil-amino)-l-ciclo-hexil-3,4- -di-hidroxi-6-metil-heptano 0 produto do Exemplo 24b (156 mg, 0,34 mmol) foi desprotegido pelo método descrito no Exemplo ld para dar o sal hidrocloreto. O sal foi convertido na sua base livre usando o procedimento descrito no Exemplo 24a para dar a amina livre (121 mg, 100%). Verificou-se que o espectro de -*-H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 357 (M+H)+. A uma solução agitada de hemi-hidrato de Boc-Ile-OH (81 mg, 0,34 mmol) em THF (2 ml) a -20 "C adicionou-se NMM (37 μΐ, 0,34 mmol) seguido por IBCF (44μ1, 0,34 mmol), mantendo a temperatura a -17 eC ou a uma temperatura inferior. Após 20 minutos, adicionou-se uma solução da base livre anterior em THF (2 ml) , 73 516 4955.PG.01 -52- 6L ¥
- *p continuando a manter-se a temperatura abaixo de -17 °C. A mistura reaccional foi então deixada aquecer até à temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi submetido a partição entre EtOAc e NaHC03 saturado. A fase orgânica foi lavada com H3P04 IN e salmoura, seca (MgS04) e concentrada sob vácuo proporcionando um resíduo que foi cristalizado em THF/EtOAc 1:1 para dar o composto do título (181 mg, 93%). p.f. 178-179 eC. 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 0,94 (m, 18H), 1,00-2,25 (m, 13H), 1,45 (s, 9H), 3,18 (t, 1H), 3,35 (m, 1H), 3,88 (t, 1H), 4,22-4,45 (m, 3H), 5,02 (s largo, 1H), 6,56 (s largo, 1H), 6,80 (d largo, 1H). Anal. Cale. para C31H5gN306: C, 65,37; H, 10,40; N, 7,38; Encontrado: C, 65,02; H, 10,13; N, 7,38. EM (DCI/NH3) m/e 570 (M+H)+, 587 (M+H+NH3)+.
Exemplo 25 l2S.3R.4SW2-(N-Succinilo-isoleucil-isoleucil-amino^-l-ciclo--hexil-3.4-di-hidroxi-6-metil-heptano O produto do Exemplo 24c (67 mg, 0,11 mmol) foi desprotegido pelo método descrito no Exemplo ld para dar o sal hidrocloreto. O sal foi convertido na sua base livre usando o procedimento descrito no Exemplo 24a para dar o composto amino livre (55 mg, 100%). Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 470 (M+H)+. A amina (50 mg, 0,10 mmol) foi feita reagir com anidrido succínico (12 mg, 0,127 mmol, 1,2 equiv.) pelo método descrito no Exemplo 19 para dar o composto do título, p.f. 253-254 °C. 1H RMN (DMSO-dg, 300 MHz) δ 0,70-1,00 (m, 18H), 1,00-1,83 (m, 22H), 2,40 (m, 4H), 2,92 (d largo, 1H), 3,09 (t largo, 1H), 4,05-4,25 (m, 3H), 4,49 (d largo, 1H), 4,70 (s largo, 1H), 7,52 (d, 1H), 7,80 (d, 1H), 7,92 (d, 1H). Anal. Cale. para C3QH55N307 H20: C, 61,30; H, 9,77; N, 7,15; Encontrado: C, 60,95; H, 9,30; N, 7,19. EM (FAB) m/e 570 (M+H)+, 592 (M+Na)+. 73 516 4955.PG.01
-53-
Exemplo 26 (2S,3R,4S)-2—(N—Boc—Aspartil(fl-O—benzil)—isoleucil—isoleucil· -amino)-l-ciclo-hexil-3.4-di-hidroxi-6-metil-heptano 0 produto do Exemplo 24c foi desprotegido e convertido na sua base livre pelo método descrito no Exemplo 25 para dar o composto amino. O composto amino (100 mg, 0,21 mmol) foi acoplado com ácido N-(t-butiloxicarbonil)-/3-benzil-aspártico (69 mg, 0,21 mmol) pelo método descrito no Exemplo 10a para dar o material bruto que foi submetido a cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com um gradiente de 45 a 60% de EtOAc/hexanos para dar, após liofilização, o composto do título (145 mg, 88%). p.f. 175-184 °C. % RMN (CDC13, 300 MHz) 8 0,85-1,00 (m, 18H), 1,05-2,10 (m, 24H), 1,46 (s, 9H), 2,51 (d, 1H), 2,90 (m, 2H), 3,12 (t, 1H), 3,28 (m, 1H), 4,10 (t, 1H), 4,35 (m, 4H), 5,59 (d, 1H), 6,53 (d, 1H), 6,72 (d, 1H), 6,78 (d, 1H), 7,35 (m, 5H). Anal. Cale. para C42H70N4°9 0/5 h20: C' 64,36; H, 9,10; N, 7,15; Encontrado; C, 64,42; H, 8,89; N, 7,10. EM (FAB) m/e 775 (M+H)+.
Exemplo 27 (2S.3R.4S^-2-(N-Acetil-isoleucil-isoleucil-amino)-l-ciclo-hexil- -3.4-di-hidroxi-6-metil-heptano 0 produto do Exemplo 24c foi desprotegido e convertido na sua base livre pelo método descrito no Exemplo 25 para dar o composto amino. A uma solução agitada da amina (56,5 mg, 0,12 mmol) em THF adicionou-se acetilimidazol (14,6 mg, 0,13 mmol). A mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em EtOAc. Esta solução foi lavada com H20 e salmoura, seca e concentrada sob vácuo para dar um resíduo que foi submetido a cromatografia flash em sílica-gel para dar o composto do título (52,3 mg, 85%) sob a forma de cristais incolores, p.f. 247-248 °C. % RMN (DMS0-d6, 300 MHz) 8 0,83 (m, 18H), 1,00-1,80 (m, 22H), 1,83 (S, 3H), 2,92 (m, 1H), 3,08 (m, 1H), 4,10 (m, 1H), 4,20 (q, 2H), 4,50 (d, 1H), 4,71 (d, 1H), 7,52 (d, 1H), 7,82 (d, 1H), 7,91 (d, 1H). Anal. Cale. para C28H53N305 0,25 H20: C, 65,17; H, 10,41; N, 8,14; Encontrado; C, 64,92; H, 10,35; N, 8,00.
73 516 4955.PG.01 -54 EM (DCI/NH3) rn/e 512 (M+H)+.
Exemplo 28 f 2S. 3R, 4S) -2- (N-Boc-Ciclo-hexilalanil-isoleucil--amino) -1-ciclo--hexil-3.4-di-hidroxi-6-metil-heptano O produto do Exemplo 12a foi desbenzllado como se descreveu no Exemplo 12b para dar o ácido carboxílico livre. A uma solução agitada do produto do Exemplo 24a (38,9 mg, 0,16 mmol) em CH2CI2 anidro (3 ml) a 0 °C adicionaram-se, sucessivamente, o ácido carboxílico descrito acima (61,4 mg, 0,16 mmol, 1 equiv.), HOBT (33 mg, 0,21 mmol) e EDCI (33 mg, 0,172 mmol, 0,08 equiv.). A mistura foi agitada durante a noite, deixando-se aquecer até à temperatura ambiente. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi retomado em EtOAc e lavado com H3P04 IN (2x), NaHC03 saturado (2x) e NaCl saturado (2x), seco (MgS04) e concentrado sob vácuo proporcionando um resíduo que foi submetido a cromatografia flash para dar o composto do título (18 mg, 29%). p.f. 181-182 °C. % RMN (DMSO-dg, 300 MHz) S 0,83 (m, 12H), 1,00-1,80 (m, 30H), 1,37 (2s, 9H), 2,90-3,15 (m, 3H), 3,99 (m, 1H), 4,13 (m, 1H), 4,23 (t, 1H), 4,47 (d, 1H), 4,72 (d, 1H), 6,75 (d, 1H), 6,80 (d, 1H), 7,60 (d, 2H). Anal. Cale. para C34H63N306: C, 66,96; H, 10,41; N, 6,89; Encontrado: C, 66,91; H, 10,35; N, 6,77. EM (DCI/NH3) m/e 610 (M+H)+.
Exemplo 29 (2S.3R.4S)-2-(N-Boc-Isoleucil-isoleucil-amino)-l-f 2-naftil)-3.4- -di-hidroxi-6-meti1-heotano
Exemplo 29a (2S)-2-Γ(terc-Butiloxicarbonil)aminol-3-(2-naftil)propanol A L-2-naftilalanina (1,00 g, 3,18 mmol) foi protegida pelo método descrito no Exemplo lg para dar o composto protegido com terc-butiloxicarbonilo. (1,4 g, 96%). A uma solução agitada do ácido anterior (1,4 g, 4,4 mmol) em THF anidro (7 ml) a 0 °C adicionou-se lentamente complexo de borano-tetra-hidrofurano (BH3-THF) (13,2 ml, 13,2 mmol, excesso 73 516 4955.PG.01
-55- de 3 vezes). O banho de arrefecimento foi removido e a mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente. Após 10 minutos a 25 'C, a mistura foi de novo arrefecida a 0 "C e adicionou-se muito cuidadosamente uma solução de NaOH IN (5 ml). A solução fria foi extractada com Et20 (4x) e os extractos orgânicos combinados foram secos (MgS04) e concentrados sob vácuo proporcionando o composto do titulo (1,21 gf 90%) sob a forma de cristais incolores. Verificou-se que o espectro de -*-H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 302 (M+H)+.
Exemplo 29b (2S.3R)-2-((terc-Butiloxicarbonil)amino1-l-( 2-naftil)-3--hidroxi-6-metil-heptan-4-ona A uma solução agitada de dimetilsulfóxido anidro (DMSO) (394 μΐ, 5,47 mmol, 2,2 equiv.) em CH2Cl2 anidro (7 ml) a -70 °C adicionou-se lentamente uma solução 2M de cloreto de oxalilo (1,85 ml, 3,78 mmol, 1,5 equiv.) a uma taxa tal que a temperatura se manteve abaixo de -65 °C. Após 10 minutos, adicionou-se uma solução do produto do Exemplo 29a (750 mg, 2,48 mmol) em DMSO a 10% em CH2C12 (5 ml), mantendo-se de novo a temperatura a um valor inferior ou igual a -66 "C. A mistura foi agitada durante 15 minutos, adicionando-se lentamente, depois deste período, trietilamina seca (1,41 ml, 9,95 mmol, 4 equiv.) para precipitar sal sulfoxónio. Após 3 minutos, adicionou-se iodeto de zinco anidro (183 mg, 0,49 mmol, 0,2 equiv.). A mistura foi agitada vigorosamente durante 5 minutos, em seguida adicionou-se cianeto de trimetilsililo (TMSCN) (1,19 ml, 8,10 mmol, 3,5 equiv.) e a mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente. Após 60 minutos, a mistura foi de novo arrefecida a 0 "C e adicionou-se uma solução 2M de cloreto de i-butilmagnésio (13,5 ml, 27 mmol, 10,5 equiv.) em éter, mantendo-se a temperatura a um valor inferior ou igual a 0 °C. A mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 4 horas. A mistura foi vertida em EtOAc contendo gelo/H3P04 IN 1:1. A fase aquosa foi extractada com EtOAc e os extractos orgânicos combinados foram lavados com H3PO4 IN, H20 e NaCl saturado, secos (MgS04) e concentrados sob vácuo. 0 resíduo obtido foi submetido a 73 516 4955.PG.01 -56-
uj $ cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com 18% EtOAc/hexano para dar o composto do título (486 mg, 51%). Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 386 (M+H)+, 403 (M+H+NH3)+.
Exemplo 29c (2S.3R.4s)-2-r(terc-Butiloxicarbonil)amino1-1-(2-naftil)-3.4-di- -hidroxi-6-metil-heptano A uma solução agitada do produto do Exemplo 29b (480 mg, 1,24 mmol) em THF anidro (29 ml) à temperatura ambiente adicionou-se boro-hidreto de sódio (48 mg, 1,24 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi concentrada sob vácuo e vertida em solução de cloreto de sódio. Esta mistura foi extractada com EtOAc, seca (MgS04) e concentrada sob vácuo para dar um resíduo que foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com 30% EtOAc/hexanos para dar o composto do título (249 mg, 52%). Verificou-se que o espectro de ^-H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 388 (M+H)+, 405 (M+H+NH3)+.
Exemplo 29d (2S.3R,4s)-2-fN-Boc-Isoleucil-amino ^-1-f2-naftil)-3.4-di--hidroxi-6-metil-heptano 0 produto do Exemplo 29c (60 mg, 0,15 mmol) foi desprotegido pelo método descrito no Exemplo ld para dar o sal hidrocloreto. 0 sal foi convertido na sua base livre por dissolução em THF (1 ml) e ajuste do pH a 13 com NaOH IN. A mistura foi vertida em CH2Cl2 e a fase aquosa foi extractada com CH2C12. Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre K2C03 anidro e concentrados sob vácuo para dar a amina livre (45 mg, 100%). A amina livre (45 mg, 0,155 mmol) e hemi-hidrato de Boc-Ile-OH (37 mg, 0,155 mmol) foram acoplados pelo método descrito no Exemplo 10a para dar o composto do título (77 mg, 99%) sob a forma de cristais incolores. Verificou-se que o espectro de ·*·Η 73 516 4955.PG.01 β ι -57- j#/, ί’ι RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 501 (M+H)+, 518 (M+H+NH3)+.
Exemplo 29e (2S.3R.4S)-2-(N-Boc-Isoleucil-isoleucil-amino)-l-( 2-naftil)-3,4- di-hidroxi-6-metil-heptano 0 produto do Exemplo 29d (70 mg, 0,139 mmol) foi desprotegido pelo método descrito no Exemplo ld e convertido na sua base livre pelo método descrito no Exemplo 29d para dar a amina livre (56 mg, 100%). 0 hemi-hidrato de Boc-Ile-OH (33,5 mg, 0,139 mmol) e a amina livre (56 mg, 0,139 mmol) foram acoplados pelo método descrito no Exemplo 10a para dar o composto do título (85 mg, 99%) sob a forma de um sólido branco, p.f. 168-169 eC. ^-H RMN (CDCI3, 300 MHz) S 0,68-0,95 (m, 18H), 1,45 (s, 9H), 1,00-1,50 (m, 6H), 1,80 (m, 3H), 2,40 (S largo, 3H), 3,00-3,42 (m, 4H), 3,82 (t, 1H), 4,16 (m, 1H), 4,40 (q, 1H), 5,23 (d, 1H), 6,91 (d, 1H), 7,20 (d, 1H), 7,40 (d, 3H), 7,65-7,80 (m, 3H). Anal. Cale. para C35H55N3°6: c' 68/43; H, 9,03; N, 6,85; Encontrado: C, 68,37; H, 8,92; N, 6,79. EM (FAB) m/e 614 (M+H)+.
Exemplo 30 (2S.3R.4S)-2-(N-Boc-Ciclo-hexilalanil-isoleucil-amino)-l-(2--naftil)-3.4-di-hidroxi-6-metil-heptano Boc-Cha-OH (34,6 mg, 0,127 mmol) foi acoplado com (2S,3R,4S)-2-N-(Ile-amino)-1-(2-naftil)-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano (51 mg, 0,127 mmol), obtido da desprotecção do produto do Exemplo 29d pelo método descrito no Exemplo 29e, pelo método descrito no Exemplo 10a para dar, após recristalização em EtOAc/hexanos, o composto do título (57,6 mg, 70%) sob a forma de um sólido cristalino branco, p.f. 173-174 °C. 1H RMN (CDC13, 300 MHz) S 0,70-1,05 (m, 12H), 1,10-1,90 (m, 19H), 1,47 (s, 9H), 3,20 (m, 1H), 3,25 (d de d, 1H), 3,48 (m, 2H), 4,00-4,20 (m, 2H), 4,55 (m, 1H), 5,78 (d largo, 1H), 7,22-7,50 (m, 4H), 7,70-7,83 (m, 3H). Anal. Cale. para C3gH59N306: C, 69,80; H, 9,09; N, 6,43; Encontrado: C, 69,47; H, 9,02; N, 6,38. 73 516 4955.PG.01 -58-
EM (FAB) m/e 654 (M+H)+.
Exemplo 31 (2S.3R.4S ^-2—(N-Boc-Ciclo-hexilalanil-isoleucil-amino)-l-(1--naftil)-3.4-di-hidroxi-6-metil-heptano O produto do Exemplo 31 foi preparado em analogia com o método descrito no Exemplo 30 usando 1-naftilalanina em vez de 2-naftilalanina para dar o composto do titulo, p.f. 149-150 °C. RMN (CDCl3+CD3ODf 300 MHz) δ 0,82-1,90 (m, 31H), 1,44 (s, 9H), 3,26 (d de d, 1H), 3,38 (m, 2H), 4,05-4,23 (m, 3H), 4,62 (q, 1H), 7,30 (d largo, 1H), 7,45-7,57 (m, 7H), 7,72 (m, 1H), 7,83 (d de d, 1H), 8,19 (d, 1H). Anal. cale. para C38H59N306 0,5 H20: C, 68,85; H, 9,12; N, 6,34; Encontrado: C, 69,09; H, 9,10; N, 6,31. EM (FAB) m/e 654 (M+H)+, 671 (M+H+NH3)+.
Exemplo 32 N-Boc-Isoleucil-isoleucil-estatil isopropilearboxamida Ao produto do Exemplo 5b (50 mg, 0,1 mmol) em THF recém-destilado (5 ml) arrefecido a -5 °C adicionou-se NMM (11/5 μΐ, 0,105 mmol) seguido por IBCF (13,5 μΐ, 0,105 mmol); a mistura reaccional foi agitada a -5 °C durante 15 minutos. Adicionou-se isopropilamina (25,5 μΐ, 0,15 mmol) e a mistura reaccional foi deixada aquecer até à temperatura ambiente durante a noite. Adicionou-se EtOAc com uma pequena quantidade de MeOH e a mistura foi lavada com H3P04 IN (3x), NaHC03 saturado (3x) e salmoura, seca (Na2S04) e concentrada sob vácuo para dar um sólido branco (46 mg) que foi submetido a cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com CHCl3/EtOH 97/3 para dar um sólido amorfo. A cristalização em Me0H/H20 proporcionou o composto do título (32 mg, 59%). ΧΗ BMN (CDC13, 300 MHz) 5 0,86-1,05 (m, 18H), 1,05-2,15 (m, 15H), 1,46 (2s, 9H), 2,30 (m, 2H), 2,50 (d largo, 1H), 3,70 (d de t, 1H), 3,80-4,25 (m, 4H), 4,86-4,97 (m, 1H), 6,40-6,73 (m, 3H). Anal. Cale. para C28H54N40g 0,25 H20: C, 61,45; H, 10,04; N, 10,24; Encontrado: C, 61,48; H, 9,80; N, 10,10. EM (FAB) m/e 543 (M+H)+, 565 (M+Na)+. 73 516 4955.PG.01
//. 59-
Exemplo 33 Éster terc-butílico do ácido ΓΙ-ΓΝ-Cbz-isoleucil-isoleucil--aminol-3-metilbutil(hidroxi)fosfini11 acético 0 produto do Exemplo 9 (100 mg, 0,156 mmol) e complexo de KCN e 1,4,7,10,13,16-hexaoxaciclooctadecano (18-coroa-6) (48 mg, 0,146 mmol) foram dissolvidos em DMSO anidro (5 ml) e aquecidos a 70-80 °C durante 5 h e agitados à temperatura ambiente durante a noite. Adicionou-se EtOAc e a mistura foi lavada com H3PO4 IN e salmoura, seca (Na2S04) e concentrada sob vácuo para dar um sólido amorfo (91 mg). A cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com CHC13/MeOH/NH4OH 90/10/1 deu o composto do título (49 mg, 67% com base numa recuperação de 25 mg do produto do Exemplo 9). % RMN (CD3OD, 500 MHz) S 0,90 (m, 18H), 1,10-1,90 (m, 9H) , 1,47 (2s, 9H), 2,51-2,76 (m, 2H), 4,01 (t, 1H), 4,28 (m, 2H), 5,09 (m, 2H), 7,31 (m, 5H). Anal. Cale. para c3iH52N3°8p 0,25 NH40H: C, 58,68? H, 8,46; N, 7,17; Encontrado: C, 58,29? H, 8,44; N, 7,46. EM (FAB) rn/e 626 (M+H)+, 648 (M+Na)+, 670 (M+2Na)+.
Exemplo 34 N-Boc-Isoleucil-isoleucil-estatil isoamilearboxamida 0 produto do Exemplo 5b (50 mg, 0,1 mmol) foi feito reagir com isoamilamina (23 μΐ, 0,2 mmol) pelo método descrito no Exemplo 32 para dar um sólido branco (50 mg, 88%) que foi submetido a cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com CHCl3/EtOH 97/3 para dar um sólido amorfo. A cristalização em MeOH/H20 proporcionou o composto do título (24 mg, 42%). ·*·Η RMN (CDCI3, 300 MHz) <S 0,94 (m, 24H), 1,02-2,13 (m, 12H), 1,47 (2s, 9H) , 2,23-2,57 (m, 3H), 3,25 (m, 2H), 3,71 (d de t, 1H), 3,90 (m, 2H), 4,20 (m, 1H), 4,90 (2d, 1H), 6,40-6,60 (m, 2H), 6,70 (d, 1H). Anal. cale. para Ο30Η58Ν4Ο6 0,4 H20: C, 62,34; H, 10,25? N, 9,69; Encontrado: C, 62,21; H, 9,85; N, 9,42. EM (FAB) m/e 571 (M+H)+, 471 (M+H-Boc)+.
Exemnlo 35 N-Boc-Isoleucil-isoleucil-estatil ciclo--hexilmetilcarboxamida O produto do Exemplo 5b (50 mg, 0,1 mmol) foi feito reagir
73 516 4955.PG.01 -60-com ciclo-hexanometilamina (19,5 μΐ, 0,15 mmol) pelo método descrito no Exemplo 32 para dar um sólido branco (50 mg) que foi submetido a cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com CHCl3/EtOH 96,5/3,5 para dar um sólido amorfo, A cristalização em MeOH/H20 proporcionou o composto do título (31 mg, 52%). -^H KMN (CDC13, 300 MHz) δ 0,95 (m, 18H), 1,03-2,12 (m, 20H), 1,47 (2S, 9H), 2,24-2,70 (m, 3H), 3,10 (q, 2H), 3,68-4,04 (m, 3H), 4,21 (m, 1H), 4,90 (2d, 1H), 6,40-6,63 (m, 2H), 6,77 (d largo, 1H). Anal. Cale. para C32H60N406 0,25 H20: C, 63,91; H, 10,14; N, 9,32; Encontrado: C, 63,80; H, 9,88; N, 9,22. EM (FAB) m/e 597 (M+H)+, 619 (M+Na)+.
Exemplo 36 Éster terc-butílico do ácido fl-fN-fN-Cbz-Γ(S)-2-amino-3.3--dimetilbutanoil))-isoleucil}amino]- 3 --metilbutil(hidroxi)fosfinillacético
Exemplo 36a Éster terc-butílico do ácido n-rN-(N-Cbz-r(S)-2-amino-3.3--dimetilbutanoill)-isoleucil)amino1-3--metilbutil(metoxi)fosfinil1acético 0 produto do Exemplo 9c foi acoplado com ácido (S)-2-(benziloxicarbonil)-amino-3,3-dimetilbutanóico pelo método descrito no Exemplo le para dar o composto do título. Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta.
Exemplo 36b Éster terc-butílico do ácido [1-rN-(N-Cbz-Ç(S)-2-amino-3.3--dimetilbutanoil1)-isoleucil)amino1-3--metilbutil(hidroxi)fosfinillacético Ao produto do Exemplo 36a (115 mg, 0,18 mmol) dissolvido em DMS0 anidro (5 ml) adicionou-se KCN;l8-coroa-6 (52 mg, 0,16 mmol). A mistura reaccional foi aquecida a 70-80 °C durante 3 horas, arrefecida até à temperatura ambiente, e em seguida submetida a partição entre H3P04 1M e EtOAc. A fase orgânica foi lavada com salmoura, seca (Na2S04) e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar um resíduo que foi submetido a
73 516 4955.PG.01 -61-
cromatografia flash, eluindo com clorofórmio/metanol/hidróxido de amónio 90/10/1. o composto do título foi obtido sob a forma de um sólido amorfo (37 mg, 33%). ^ RMN (CDC13, 300 MHz) S 0,95 (m,
(m, 3H), 5,07 (q largo, 2H), 5,67 (s largo, 1H), 6,70 (s largo, 1H), 7,30 (m, 5H), 7,55 (s largo, 1H). EM (FAB) rn/e 626 (M+H)+, 648 (M+Na)+.
Exemplo 37 [l-rN-Cbz-Isoleucil-isoleucil-aminol-3-metilbutil--(hidroxi)fosfinillacetil isobutilcarboxamida
Exemplo 37a Ácido f1-fN-Cbz-isoleucil-isoleucil-amino1-3--metilbutil(hidroxi)fosfinil]acético O produto do Exemplo 9d (137 mg, 0,21 mmol) foi dissolvido em TFA (1,5 ml) e agitado à temperatura ambiente durante uma hora. 0 TFA foi removido sob pressão reduzida e azeotropado com tolueno (4x10 ml) para proporcionar o composto do título (125 mg, 100%) sob a forma de um sólido branco. Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (FAB) m/e 584 (M+H)+.
Exemplo 37b n-rN-Cbz-Isoleucil-isoleucil-aminol-3-metilbutil--(metoxi)fosfinil]acetil isobutilcarboxamida A isobutilamina (32 μΐ, 0,32 mmol) dissolvida em CH2Cl2 e arrefecida a 0 °C adicionou-se o produto do Exemplo 37a (126 mg, 0,22 mmol) em CH2C12 seguido de HOBT (36 mg, 0,26 mmol) e EDCI (46 mg, 0,24 mmol). A mistura reaccional foi deixada aquecer até à temperatura ambiente durante a noite e depois diluída com EtOAc. A lavagem com H3P04 1M (3x), NaHC03 saturado (3x) e salmoura, secagem (Na2S04) e concentração sob pressão reduzida proporcionaram material bruto (125 mg, 91%). A cromatografia flash, eluindo com MeOH a 1,75% em CHC13 proporcionou o composto do título (78 mg, 57%). Verificou-se que o espectro de ^-H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 639 (M+H)+, 656 (M+H+NH3)+. 0 -62- 73 516 4955.PG.01
Exemplo 37c ri-rN-Cbz-Isoleucil-isoleucil-amino1-3-metilbutil--(hidroxi)fosfinil1acetil isobutilcarboxamida 0 produto do Exemplo 37c (75 mg, 0,12 mmol) foi desmetilado pelo procedimento descrito no Exemplo 36b e purificado por cromatografia flash proporcionando o composto do título sob a forma de um sólido amorfo (13 mg, 17%). % RMN (CD3OD, 300 MHz) 5 0,80-1,00 (m, 24H), 1,05-1,90 (m, 10H), 2,70 (m, 2H), 3,04 (m, 2H), 4,00-4,28 (m, 3H), 5,09 (m, 2H), 7,33 (m, 5H). EM (FAB) m/e 625 (M+H)+, 663 (M+K)+.
Exemplo 38 (2S.3R.4S)-2-(N-Boc-Ciclo-hexilalanil-isoleucil-amino)-l-(3--indolil)-3 f 4-di-hidroxi-6-metil-heptano
Exemplo 38a Éster benzilico de N-Boc-triptofanilfN/-Boc^ A uma suspensão de hidrocloreto de éster benzílico de L-triptofano (lt00 g, 3,02 mmol) em benzeno (100 ml) adicionou-se, sucessivamente, hidróxido de sódio aquoso a 50% (10 ml), bissulfato de tetrabutilamónio (100 mg) e trietilamina (1,25 ml, 8,9 mmol, 2,96 equiv.) sem agitação, miciou-se a agitação vigorosa e, em seguida, adicionou-se dicarbonato de di-t-butilo (1,97 g, 9,05 mmol, 3 equiv.). Após agitação à temperatura ambiente durante 90 minutos, adicionou-se água (50 ml) e separaram-se as fases. A fase aquosa foi extractada com benzeno e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com ácido cítrico aquoso a 10% e salmoura, secas (MgS04) e concentradas sob vácuo. 0 resíduo obtido foi submetido a cromatografia flash eluindo com um gradiente de 15-25% de EtOAc em hexanos para dar o composto do título (902 mg, 60%) sob a forma de um sólido amorfo branco. Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta.
Exemplo 38b
N-Boc-Triptofanil(Nr-Boc^-OH A uma suspensão de 10% de paládio em carvão (250 mg) em metanol (2 ml) adicionou-se 1,3-ciclo-hexadieno (200 μΐ, 2,02 73 516 4955.PG.01 -63-
mmol, 2 equiv.). Depois da mistura ser agitada à temperatura ambiente durante 5 minutos, adicionou-se uma solução do produto do Exemplo 38a (500 mg, 1,01 mmol) numa mistura 1:1 de EtOAc e MeOH (2 ml). Após 2 horas, o catalisador foi removido por filtração e o solvente foi removido sob vácuo proporcionando o composto do título sob a forma de um sólido amorfo branco (334 mg, 82%). Verificou-se que o espectro de ^H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 405 (M+H)+, 422 (M+H+NH3)+.
Exemplo 38c (2S.3R f4S)-2-f(terc-Butiloxicarbonil)amino1-1-Γ1-N-(terc-buti-loxicarbonil)indol-3-ill-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano O produto do Exemplo 38b foi reduzido usando complexo BH3-THF pelo procedimento descrito no Exemplo 29a para dar o álcool; cujo espectro de -*-H RMN a 300 MHz se verificou ser consistente com a estrutura proposta, EM (DCI/NH3) m/e 391 (M+H)+, 408 (M+H+NH3)+. Pelo procedimento descrito no Exemplo 29b, o álcool foi então processado para se obter a heptanona; cujo espectro de % RMN a 300 MHz se verificou ser consistente com a estrutura proposta, EM (DCI/NH3) m/e 475 (M+H)+, 492 (M+H+NH3)+. A redução com boro-hidreto de sódio durante duas horas pelo procedimento descrito no Exemplo 29c proporcionou o composto di-hidroxi do título sob a forma de um sólido amorfo (324 mg, 68%). Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 477 (M+H)+, 494 (M+H+NH3)+.
Exemplo 38d (2S. 3R.4S)-2-(N-Boc-Ciclo-hexilalanil-isoleucil-amino)-1-Γ1-N--(terc-butiloxicarbonil)indol-3-in-3,4-di-hidroxi-6-metil- -heptano 0 produto do Exemplo 38c (251 mg, 0,52 mmol) foi dissolvido em HC1 4N em dioxano (2 ml) e agitado à temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura reaccional foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi submetido a partição entre THF-CH2C12 e NaOH IN. As fases foram separadas e a camada aquosa foi ainda extractada com THF-CH2C12. Os extractos orgânicos combinados foram secos (K2C03)
73 516 4955.PG.01 -64- e concentrados sob vácuo para dar a amina livre (198 mg# 100%). A amina livre (198 mg, 0,52 mmol) foi acoplada com hemi-hidrato de Boc-Ile-OH (127 mg, 0,52 mmol) pelo procedimento descrito no Exemplo 10a para dar Boc-Ile-[(2S,3R,4S)-2-amino-l-(1-[(terc-butiloxicarbonil)indol-3-il]-3,4-di-hidroxi-6-metil--heptano] sob a forma de um sólido amorfo (75 mg, 24%); EM (DCI/NH3) m/e 590 (M+H)+. A desprotecção e conversão na base livre foram efectuadas como anteriormente se descreveu para dar a amina livre (51 mg, 81%).
Boc-Cha-OH (28 mg, 0,102 mmol) foi acoplado com a amina livre (51 mg, 0,102 mmol) pelo procedimento descrito no Exemplo 10a para dar o composto do título (74 mg, 96%). Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (FAB) m/e 643 (M+H)+.
Exemplo 38e (2S,3R,4S)-2-(N-Boc-Ciclo-hexilalanil-isoleucil-amino)-1-(3--indolil)-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano A uma solução agitada do produto do Exemplo 38d (74 mg, 99 /mol) em THF (1 ml) adicionou-se NaOH 4N (1 ml). A solução bifásica foi agitada durante a noite à temperatura ambiente, diluída com MeOH (1 ml) para fazer a solução e agitada durante a noite à temperatura ambiente. A concentração sob vácuo proporcionou um resíduo aquoso que foi extractado com CH2C12/THF (8:2). A fase aquosa foi levada à neutralidade com NaHSO^ 1,1N e de novo extractada com EtOAc. Os extractos orgânicos combinados foram secos (MgS04) e concentrados sob vácuo proporcionando um resíduo que foi purificado por cromatografia flash e liofilizado para dar o composto do título (56 mg, 87%). % RMN (CDCI3+CD3OD, 300 MHZ) S 0,70 (m, 12H), 0,80-1,70 (m, 19H), 1,28 (s, 9H), 2,90 (d, 2H), 3,15 (m, 2H), 3,90-4,10 (m, 3H), 4,34 (m, 1H), 6,90 (m, 3H), 7,17 (d, 1H), 7,43 (d, 1H). EM (FAB) m/e 643 (M+H)+ 73 516 4955.PG.01 -65-
Exemolo 39 N-Boc-Ciclo-hexilalanil-isoleucil-estatil isobutilcarboxamida 0 composto resultante do Exemplo 15 (47 mg, 0,087 mmol) foi feito reagir com isobutilamina (21 μΐ, 0,22 mmol) pelo procedimento descrito no Exemplo 5c. O material bruto (45 mg) foi recristalizado em acetato de etilo quente e hexanos para dar o composto do título (35 mg, 68%). XH RMN (CDCI3+CD3OD, 300 MHz) δ 0,86-0,97 (m, 18H), 1,46 (s, 9H), 1,10-1,98 (m, 20H), 2,29 (m, 2H), 3,05 (m, 2H), 3,91 (m, 2H), 4,12 (m, 2H). Anal. Cale. para C32H60N4°6: c' 64/40? H, 10,13; N, 9,39; Encontrado: C, 64,59; H, 9,95; N, 9,07. EM (FAB) m/e 597 (M+H)+.
Exemplo 40 N-Boc-Ciclo-hexilalanil-isoleucil-estatil N-(2-(2--piridil)etil)carboxamida
Ao composto resultante do Exemplo 15 (30 mg, 55,45 μταοί) dissolvido em tetra-hidrofurano (2 ml) e arrefecido a 0 °C adicionou-se 1-hidroxibenzotriazol (HOBT) (9 mg, 1,2 equiv.) em DMF, 4-(dimetilamino)piridina (DMPA) (8,1 mg, 1,2 equiv.) e 1-amino-2-(2-piridil)etano (16,6 μΐ, 2,5 equiv.). Depois da mistura se tornar homogénea, adicionou-se EDCI (12,8 g, 1,2 equiv.). Após agitação à temperatura ambiente durante 3 dias, a mistura reaccional foi concentrada a pressão reduzida. 0 resíduo obtido foi purificado por HPLC preparativa e liofilizado para dar o produto do título (32,4 mg, 91%). 1H RMN (CDCI3, 300 MHZ) δ 0,87-1,00 (m, 12H), 1,46 (s, 9H), 1,20-1,82 (m, 19H), 2,04 (s largo, 1H), 2,27 (m, 1H), 2,38 (m, 1H), 3,41(m, 2H), 3,86 (m, 2H), 4,13 (m, 2H), 5,22 (m, 1H), 7,10 (m, 1H), 7,60-7,80 (m, 2H), 7,85 (d, 1H), 8,32 (t largo, 1H), 8,70 (m, 1H). Anal. Cale. para C35H59N5°6·1'25 TFA: c' 56/"'* H, 7,67; N, 8,87; Encontrado: C, 57,13; H, 7,70; N, 8,88. EM (DCI/NH3) m/e 646 (M+H)+.
Exemplo 41 N-Boc-Ciclo-hexilalanil-isoleucil-estatil N-f2-N/,N/--dimetilaminoetil)carboxamida 0 composto resultante do Exemplo 15 (30 mg, 55,45 /mol) foi feito reagir com N,N-dimetiletilenodiamina (15 μΐ, 2,5 equiv.)
73 516 4955.PG.01 -66- pelo procedimento descrito no Exemplo 40. A purificação por HPLC preparativa e liofilização proporcionaram o composto do título (31,8 mg, 94%). 1H RMN (CDC13, 300 MHz) S 0,85-1,00 (m, 18H), 1,45 (S, 9H), 1,00-1,80 (m, 19H), 2,25 (m, 1H), 2,45 (m, 1H), 3,01 (d, 2H), 3,22 (m, 1H), 3,50 (m, 1H), 3,93-4,20 (m, 4H), 5,59 (m, 1H), 7,40 (m, 1H), 8,03 (d largo, 1H), 8,45 (m, 1H), 9,63 (m, 1H). Anal. Cale. para 032Η61Ν506.1,1 TFA: C, 55,97; H, 8,46? N, 9,29; Encontrado: c, 55,71; H, 8,49? N, 9,50. EM (DCI/NH3) m/e 612 (M+H)+.
Exemplo 42 N-Boc-Ciclo-hexilalanil-isoleucil-estatil N-( 2-(morfolin-4- -il)etil)carboxamida O composto resultante do Exemplo 15 (30 mg, 55,45 μηιοί) foi feito reagir com N-(2-aminoetil)morfolina (18 μΐ, 2,5 equiv.) pelo procedimento descrito no Exemplo 40. A purificação por HPLC preparativa e liofilização proporcionaram o produto do título (24 mg, 66%). ΧΗ RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 0,84-1,00 (m, 12H), 1,45 (s, 9H), 1,00-1,77 (m, 19H), 2,20-2,47 (m, 2H), 2,40-3,05 (m, 7H), 3,20 (d largo, 1H), 3,53 (t largo, 1H), 3,85-4,28 (m, 7H), 5,60 (d largo, 1H), 7,50 (s largo, 1H), 8,20 (d largo, 1H), 8,7 (m, 1H). Anal. Cale. para C34H61N507.1,3 TFA: C, 55,36; H, 8,06; N, 8,35; Encontrado: C, 55,16? H, 8,14? N, 8,38. EM (DCI/NH3) m/e 654 (M+H)+.
Exemplo 43
Hidrocloreto de f2S.3R.4S)-2-([N-(4-metilpiperazin-l-il-carbo-nil)-ciclo-hexil-alanil-isoleucil]aminol-l-f 2-naftil)-3.4- -di-hidroxi-6-metil-heptano
Exemplo 43 N-(4-Metilpiperazin-l-il-carbonll)-ciclo-hexil-alanina A sal hidrocloreto de éster metílico de ciclo-hexil-alanina (1,00 g, 4,51 mmol) suspenso em tolueno (25 ml) adicionou-se bis(triclorometil)carbonato (trifosgénio) (669,2 mg, 0,5 equiv.). A mistura reaccional foi aquecida a 100 °C durante 3 horas e em seguida concentrada sob pressão reduzida proporcionando um resíduo semi-sólido. A este resíduo, dissolvido em cloreto de
meti leno (15 ml) e arrefecido a 0 "C, adicionou-se N-metilpiperazina (0f50 ml, 1,0 equiv.). Depois de se agitar durante 1 hora, a mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida proporcionando um resíduo semi-sólido. A cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com metanol a 4% em clorofórmio proporcionou o composto do título (629 mg, 45%).
Ao éster metílico (629 mg, 2,022 mmol) dissolvido em tetra-hidrofurano (16 ml) e água (2 ml) e arrefecido a 0 °C, adicionou-se mono-hidrato de hidróxido de lítio (169,7 mg, 2,0 equiv.) em água (2 ml). Após 90 minutos, removeu-se o tetra-hidrofurano sob pressão reduzida e acidificou-se a solução aquosa a pH 3 pela adição cuidadosa de HCl IN. Esta solução foi colocada numa coluna de Dowex 1-X8 e 50W-X8 tornada ácida por enchimento e equilíbrio com HCl IN. A coluna foi eluída com HCl 0,1N e HCl 1,0N. O composto do título foi obtido sob a forma de um sólido amorfo. EM (DCI/NH3) m/e 298 (M+H)+. Verificou-se que o espectro de ^H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta.
Exemnlo 43b
Hidrocloreto de f2S.3R.4S)-2-frN-(4-metilpjperazin-l-il-carbo-nil)-ciclo-hexil-alanil-isoleucil]aminol-l-f2-naftil)-3.4- -di-hidroxi-6-metil-heptano 0 composto resultante do Exemplo 29d (27,8 mg, 55,5 μιηοΐ) foi desprotegido como descrito no Exemplo ld proporcionando (2S,3R,4S)-2-N-(isoleucil-amino)-1-(2-naftil)-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano. 0 composto resultante do Exemplo 43a (18,1 mg, 61 μιηοΐ) foi acoplado com a amina anterior (22,2 mg, 0,91 equiv.) usando o procedimento descrito no Exemplo le para dar o produto bruto (31 mg, 76%). A cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com metanol a 20% em cloreto de metileno proporcionou o material puro. A amina livre foi retomada em HCl 4N em dioxano (1,5 ml) e em seguida concentrada a pressão reduzida proporcionando o sal hidrocloreto. 1H RMN (DMSO-dg, 300 MHz) δ 0,62-0,89 (m, 12H),
73 516 4955.PG.01 -68- 3,30 (s, 5,00 (d, (m, 4H). 8,87; N, 0,90-1,80 (m, 19H), 2,23 (m, 3H) , 2,90-3,20 (m, 4H), 3H) , 3,40-3,74 (ία, 3H) , 4,18 (m, 1H) , 4,32 (m, 1H) , 0,5H), 6,55 (d, 0,5H), 7,40-7,57 (m, 4H), 7,70-7,88 Anal. Cale. para C39H62C1N5°5*2'5 H20: C, 61,52; H, 9,20; Encontrado: C, 61,37; H, 8,98; N, 9,14. EM (FAB) m/e 680 (M+H)+.
Exemplo 44 N-Boc-terc-Butilalanil-isoleucil-estatil-OEt terc-Butilalanina (250 mg, 1,7 mmol) foi protegida pelo procedimento descrito no Exemplo lg. Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. EM (DCI/NH3) m/e 246 (M+H)+, 263 (M+H+NH3)+. A base livre do Exemplo lf (69 mg, 0,22 mmol) foi acoplada com o ácido carboxílico anterior (53 mg, 0,22 mmol) pelo procedimento descrito no Exemplo 3c. o produto foi recristalizado em acetato de etilo e hexanos para dar o composto do titulo (108 mg, 92%). 1H RMN (CDC13, 300 MHz) δ 0,86-0,99 (m, 21H), 1,27 (d de t, 3H), 1,46 (S, 9H), 1,00-2,07 (m, 8H), 2,47 (m, 2H), 3,40 (d de d, 1H), 3,97-4,27 (m, 6H), 4,85 (m, 1H) , 6,32 (m, 1H), 6,60 (m, 1H). Anal. Cale. para C28H53N3°7: C, 61,85; H, 9,82; N, 7,73; Encontrado: C, 62,05; H, 10,01; N, 7,52. EM (FAB) m/e 544 (M+H)+.
Exemplo 45 N-Boc-terc-Butilalanil-isoleucil-estatil-OH O composto resultante do Exemplo 44 (40 mg, 74 /ímol) foi hidrolisado pelo procedimento descrito no Exemplo 2 para dar, após recristalização em cloreto de metileno e hexanos, o composto do título (35 mg, 92%). ^ RMN (CDC13, 300 MHz) δ 0,85-1,00 (m, 21H), 1,46 (s, 9H), 1,03-2,03 (m, 8H) , 2,53 (t, 2H), 3,07-4,30 (m, 4H), 5,00 (d largo, 1H), 6,82 (d largo, 1H). Anal. Cale. para C26H49N3o7.l,o H20: C, 58,51; H, 9,63; N, 7,87; Encontrado: C, 58,65; H, 9,66; N, 7,89. EM (FAB) m/e 516 (M+H)+, 538 (M+Na)+. -69-
Exemplo 46 f 2S,3R,4S)-2-(ΓΝ-Boc-AspartiK g-O-benzill-isoleucil-isoleucill-amino1-1-(2-naftil)-3.4-di-hidroxi-6-metil-heptano O composto resultante do Exemplo 29 foi desprotegido pelo procedimento descrito no Exemplo ld para dar (2S,3R,4S)-2-N-(isoleucil-isoleucil-amino)-1-(2-naftil)-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano. Esta amina ( 41 mg, 0,079 mmol) foi acoplada com ácido Boc-aspártico(jS-O-benzil) (25,3 mg, 0,079 mmol) pelo procedimento descrito no Exemplo 10a para dar o produto bruto. A recristalização em acetato de etilo e hexanos proporcionou o composto do título (51 mg, 80%) sob a forma de cristais incolores. P.f. 178-179 eC. 1H RMN (CDC13, 300 MHz) δ 0,58 (m, 6H), 0,94 (m, 12H), 1,48 (s, 9H), 1,00-2,08 (m, 9H), 2,65 (s largo, 1H), 2,90-3,43 (m, 6H), 4,07-4,23 (m, 3H), 4,40 (d de d, 1H), 4,67 (d de d, 1H), 5,11 (d de d, 2H), 5,62 (d, 1H), 6,67 (d de d, 1H), 6,80 (d, 1H), 7,29-7,43 (m, 7H), 7,64-7,78 (m, 4H). Anal. Cale. para c, 67,46; H, 8,12; N, 6,84; Encontrado: C, 67,24; H, 7,95; N, 6,59. EM (FAB) m/e 819 (M+H)+.
Exemplo 47 N-Boc-Isoleucil-isoleucil-estatil N-(2-(2--piridil)etil)carboxamida 0 composto resultante do Exemplo lOe (48 mg, 95,8 μκιοί) foi feito reagir com 2-(2-aminoetil)piridina (29 /zl, 2,5 equiv.) pelo procedimento descrito no Exemplo 40. A purificação por HPLC seguida por liofilização proporcionou o produto do título. -*-H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 0,87-1,00 (m, 18H), 1,46 (s, 9H), 1,00-2,07 (m, 9H), 2,28 (m, 2H), 3,32 (t, 2H), 3,60-3,96 (m, 6H), 4,14 (t, 1H), 5,28 (d largo, 1H), 6,92 (m, 1H), 7,50-7,82 (m, 3H), 8,24 (t, 1H), 8,77 (d largo, 1H). Anal. Cale. para C32H55N5°6*1'65 TFA: C, 53,40; H, 7,19; N, 8,82; Encontrado: C, 53,07; H, 7,10; N, 9,25. EM (FAB) m/e 606 (M+H)+.
Exemplo 48 (2S.3R.4S)-2-(ΓΝ-Succinil-ciclo-hexil-alanil-isoleucinaminol-l--(2-naftil)-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano 0 composto resultante do Exemplo 30 (250 mg, 0,38 mmol) foi
73 516 4955.PG.01 desprotegido pelo procedimento descrito no Exemplo ld. Este hidrocloreto de amina foi reagido com anidrido succinico (7 mg, 1,05 equiv.) pelo procedimento descrito no Exemplo 19. A purificação por MPLC eluindo com metanol a 10% em cloreto de metileno contendo 1% de hidróxido de amónio e liofilização proporcionou o composto do título, p.f. 156-160 °C.-½ KMN (DMSO-d6, 300 MHz) δ 0,60-0,87 (m, 12H), 0,88-1,80 (m, 19H), 2,25-2,47 (m, 4H), 2,90-3,20 (m, 4H), 3,32 (d, 1H), 4,15 (t, 1H), 4,33 (m, 2H), 5,03 (d largo, 1H), 7,45 (m, 3H), 7,64-7,89 (m, 5H), 8,04 (d largo, 1H). Anal. Cale. para C37H55N307.H20: C, 66,14; H, 8,55; N, 6,25; Encontrado: C, 65,76; H, 8,61; N, 6,33. EM (FAB) m/e 654 (M+H)+.
Exemplo 49 (2S,3R,4S1-2-Í(N-Boc-Ciclo-hexil-alanil-isoleucil)amino>-1-(4--terc-butilfenil\-3.4-di-hidroxi-6-metil-heptano
Exemplo 49a 3 - í4-terc-Butil)fenilpropionato de terc-butilo A uma solução agitada de isopropilciclo-hexilamina anidra (5,18 ml, 31,5 mmol, 1,05 equiv.) em tetra-hidrofurano anidro (30 ml) a 0 °C adicionou-se n-butil-lítio (13,0 ml, 30,3 mmol, 1,01 equiv.). A solução resultante foi arrefecida a -75 eC e adicionou-se acetato de terc-butilo anidro (4,04 ml, 30 mmol) a iima taxa tal que a temperatura não excedeu -73 °C. A solução de enolato foi agitada durante 1 hora e, em seguida, adicionou-se l/3-dimetil-3,4,5,6-tetra-hidro-2(lH)-pirimidinona (DMPU) (3,80 ml, 30 mmol, 1 equiv.) seguida por uma solução pré-arrefecida de brometo de 4-terc-butilbenzilo recém-destilado (5,51 ml, 30 mmol, 1 equiv.) em tetra-hidrofurano (5 ml) uma taxa tal que a temperatura se manteve abaixo de -65 °C. O banho de arrefecimento foi removido e a mistura aquecida até à temperatura ambiente e vertida em bissulfato de sódio 1,1M e éter. As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com soluções de bicarbonato de sódio e cloreto de sódio (2x), seca (sulfato de magnésio) e concentrada sob vácuo proporcionando material bruto. A cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com éter a 5% em hexanos deu o composto do título (7,247 g, 92%) sob a forma de um -71- 4955.PG.01 óleo incolor.
Exemplo 49b Ácido terc-butil 3-í4-terc-Butil)fenilpropiónico A uma solução agitada do composto resultante do Exemplo 49a (7,24 g, 27,6 mmol) em cloreto de metileno anidro (8 ml) a 0 °C adicionou-se TFA (4 ml, 52 mmol, 1,9 equiv.). O banho de arrefecimento foi removido e a mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. Os voláteis foram movidos em vácuo para dar um sólido cristalino branco. 0 produto obtido foi dissolvido em hidróxido de sódio 3N (60 ml) e lavado com hexano (2x). A camada aquosa foi arrefecida a 10 °C e o pH ajustado a 1,0 por adição cuidadosa de HC1 3N (70 ml). 0 ácido precipitado foi extractado com éter (2x50 ml); os extractos orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio e concentrados em vácuo para dar o composto do título (5,14 g, 90%).
Exemplo 49c (4S)—3 —13 — f4-terc-Butilfenil)-1-oxopropil1-4--(fenilmetil)-2-oxazolidinona A uma solução agitada do composto resultante do Exemplo 49b (3,00 g, 14,54 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (100 ml) a -78 °C adicionou-se, sucessivamente, trietilamina anidra (2,63 ml, 18,9 mmol, 1,3 equiv.) e cloreto de pivaloílo recém-destilado (2 ml, 15,99 mmol, 1,1 equiv.). A mistura reaccional foi agitada a -78 °C durante 15 minutos, a 0 °C durante 45 minutos, e em seguida de novo arrefecida a -78 eC.
Num balão separado adicionou-se n-butil-lítio (solução 2,22M em hexanos) (6,9 ml, 15,3 mmol, 1,05 equiv.) a uma solução agitada da oxazolidinona (2,83 g, 15,99 mmol, 1,1 equiv.) em tetra-hidrof urano anidro (35 ml) a -78 °C a uma taxa tal que a temperatura não excedeu -72 °C. A solução de oxazolidinona fria foi transferida por meio de uma cânula para a solução de anidrido misto e a mistura reaccional foi agitada durante a noite deixando -se aquecer gradualmente até à temperatura ambiente . A reacção foi interrompida pela adição de hidrogenossulfato de sódio IN (120 ml) e a maior parte do tetra-hidrofurano foi removida sob
vácuo. A mistura aquosa resultante foi extractada com cloreto de metileno (3x50 ml) e os extractos orgânicos combinados foram lavados com soluções de bicarbonato de sódio e cloreto de sódio, secos sob sulfato de sódio e concentrados sob vácuo. O resíduo obtido foi submetido a cromatografia flash em sílica-gel eluíndo com acetato de etilo a 10% em hexanos para dar o produto do título (5,31 g, 76%). Verificou-se que o espectro de XH RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta.
Exemplo 49d ( 3 ( 2S) , 4S)-3-( 2-Azido-3-f terc-butilfenil^ -l-oxonropÍD--4-(fenilmetil)-2-oxazolidinona
A tetra-hidrofurano anidro (27 ml) a -78 °C adicionou-se uma solução de hexametildisilazida de potássio (18,96 ml, 9,48 mmol, 1,1 equiv) seguida por uma solução do composto resultante do Exemplo 49c (3,10 g, 8,66 mmol) a -78 ”C em tetra-hidrofurano anidro (41 ml) de modo que a temperatura não excedeu -75 "C. Após 30 minutos, adicionou-se rapidamente, através de uma cânula de furo largo, uma solução pré-arrrefecida de 2,4,6-triiisopropilbenzeno-sulfonil azida ("Trysl azide") (3,37 g, 10,92 mmol, 1,2 equiv) em tetra-hidrofurano anidro (29 ml). A mistura foi agitada durante 1 minuto depois de se ter completado a adição e em seguida adicionou-se ácido acético (2,27 ml, 39,8 mmol, 4,6 equiv) numa só porção. 0 banho de arrefecimento foi removido e substituído por um banho de água a 40 °C, deixando-se que a temperatura reaccional subisse rapidamente para 32 °C. Após 30 minutos a esta temperatura, a mistura foi vertida em salmoura e extractada com cloreto de metileno (2x). Os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução de bicarbonato de sódio, secos sob sulfato de magnésio e concentrados sob vácuo, obtendo-se material bruto. A purificação por cromatografia flash em sílica-gel eluindo com cloreto de metileno a 50% em hexanos proporcionou material parcialraente purificado que foi recromatografado com um gradiente de 45% a 100% de cloreto de metileno em hexanos para se obter o composto do título (2,09 g, 59%).
73 516 4955.PG.01
Exemplo 49e Ácido (2S)-2-Azido-3-(4-terc-butilfenil)propiónico Ao composto resultante do Exemplo 49d (2f09 g, 5,14 mmol) dissolvido em tetra-hidrofurano (38 ml) e água (12,8 ml) e arrefecido a 0 eC adicionou-se mono-hidrato de hidróxido de lítio (430 mg, 10,2 mmol, 2,0 eguiv). Após 30 minutos a esta temperatura, a mistura foi vertida em bicarbonato de sódio 0,5 N (60 ml) e concentrada sob pressão reduzida para remover o tetra-hidrof urano. A solução aquosa foi extractada com cloreto de metileno (4x) e depois ajustada a pH 1,0 por adição cuidadosa de ácido sulfúrico e extractada com éter (4x). Os extractos de éter combinados foram secos sob sulfato de magnésio e concentrados sob vácuo para dar o composto do título (1,27 g, 99%) sob a forma de cristais incolores.
Exemplo 49f (2S)-2-Boc-Amino-3-(4-terc-butilfenillpropan-1-ol A uma suspensão agitada de hidreto de alumínio e lítio (748 mg, 19,7 mmol, 4 equiv) em tetra-hidrof urano anidro (50 ml) a 0 °C adicionou-se uma solução do composto resultante do Exemplo 49e (1,22 g, 4,93 mmol) em tetra-hidrofurano (5 ml). 0 banho de arrefecimento foi removido e a mistura foi aquecida até à temperatura ambiente. Após 30 minutos, a mistura foi aquecida sob refluxo durante 2 horas. Depois de se arrefecer até à temperatura ambiente, adicionou-se cuidadosamente hidróxido de sódio 4N. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo obtido foi extractado com cloreto de metileno (3x). Os extractos orgânicos combinados foram secos sob carbonato de potássio anidro e concentrados sob vácuo para dar o composto amino (883 mg, 86%). 0 composto amino (836 mg, 4,03 mmol) foi protegido usando o procedimento descrito no Exemplo lg para dar material em bruto. A cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com acetato de etilo a 40% em hexanos deu o composto do título (957 mg, 77%). Verificou-se que o espectro de 1H RMN a 300 MHz era consistente com a estrutura proposta. -74- 73 516 4955.PG.01
Exemplo 49α f 2S,3R,4S)-2-Amino-l-(4-terc-butilfenil)-3,4-di-hidroxi-6- -meti1-heotano 0 composto resultante do Exemplo 49f (235 mg, 0,77 ramol) foi tratado em analogia com o procedimento descrito na literatura para o composto 1-ciclo-hexilo; Luly J.R.; Hsiao, C.N.? BaMaung, N.; Plattner, J.J. J. Org. Chem. 1988. 53, 6109. Este composto (58 mg, 0,147 mmol) foi desprotegido pelo procedimento descrito no Exemplo ld para dar o sal hidrocloreto. O sal foi submetido a partição entre cloreto de metileno e hidróxido de sódio IN. A camada aquosa foi ainda extractada com cloreto de metileno e os extractos orgânicos combinados foram secos sob carbonato de potássio anidro e concentrados sob vácuo para dar o composto do título (43,2 g, 100%) sob a forma de cristais incolores.
Exemplo 49h (2S,3R.4S)-2-frH-IsoleucilIamino1-1-(4-terc-butilfenil)-3,4-di- -hidroxi-6-metil-heptano 0 composto resultante do Exemplo 49g (43,2 mg, 0,147 mmol) foi acoplado com hemi-hidrato de Boc-xie-OH (35,4 mg, o,147 mmol) pelo procedimento descrito no Exemplo 10a para dar o composto do título sob a forma de um sólido branco, cristalino (74,7 mg, 100%). O grupo protector foi removido usando o procedimento descrito no Exemplo ld para dar o sal hidrocloreto. 0 sal foi tratado como se descreveu no Exemplo 49g para dar o composto do título (59,9 mg, 100%) sob a forma de cristais incolores.
Exemplo 49i (2S,3R,4S)-2-f rN-Boc-Ciclo-hexil-alanil-isoleucil1amino)-l-f 4--terc-butilfenil)-3.4-di-hidroxi-6-metil-heptano O composto resultante do Exemplo 49h (59,9 mg, 0,147 mmol) foi acoplado com Boc-Cha-OH (40,7 mg, 0,147 mmol) pelo procedimento descrito no Exemplo 10a para dar o composto do título (94,3 mg, 97%) sob a forma de um sólido branco que foi recristalizado em acetato de etilo e hexanos. p.f. 171-172 eC.^H RMN (CDC13, 300 MHz) 5 0,78-0,95 (m, 12H), 1,29 (m, 9H), 1,47 (s,
73 516 4955.PG.01 9H), 0,95-2,20 (m, 19H), 2,94 (m, 2H), 3,19-3,45 (m, 2H), 4,00 (m, 1H), 4,17 (m, 1H), 4,60 (d de d, 1H), 4,86 (d largo, 1H), 6,43 (d, 1H), 6,69 (d largo, 1H), 7,22 (d de d, 2H). Anal. Cale. para C38H65N306: C, 69,16; H, 9,93; N, 6,37; Encontrado: C, 69,66; H, 9,95; N, 6,07. EM (FAB) m/e 660 (M+H)+.
Exemplo 50 (2S.3R.4S)-2-(ΓΝ-Acetil-ciclo-hexil-alanil-isoleucil)amino1-1-(4--terc-butilf enil) -3.4-di-hidroxi-6-metil-heptano 0 composto resultante do Exemplo 49 (30,7 mg, 46 jumol) foi desprotegido pelo procedimento descrito no Exemplo ld para dar o sal hidrocloreto. 0 sal foi tratado como se descreveu no Exemplo 49g para dar a amina livre (26 mg, 100%) sob a forma de um sólido branco. A amina livre (26 mg, 46 μιαοί) foi reagida com acetil imidazol (5,5 mg, 49 μιαοί) pelo procedimento descrito no Exemplo 27 para dar o composto N-acetilo. A cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com acetato de etilo a 85% em hexanos deu o composto do título (18,7 mg, 67%). p.f. 199-201 °C.^H RMN (DMSO— dg, 300 MHZ) δ 0,64-0,90 (m, 12H), 1,26 (s, 9H), 0,90-1,80 (m, 19H), 1,83 (S, 3H), 2,74 (m, 1H), 3,05 (m, 2H), 3,32 (d, 1H) , 4,10-4,40 (m, 4H), 4,97 (d, 1H), 7,22 (d de d, 4H), 7,60 (d, 1H), 7,77 (d, 1H), 8,03 (d, 1H). Anal Cale para C35H59N305: C, 69,85; H, 9,88; N, 6,98; Encontrado: C, 70,03; H, 9,62; N, 6,19. EM (FAB) m/e 602 (M+H)+.
Exemplo 51 (2S.3R. 4S)-2-(ΓΝ-Acetil-ciclo-hexil-alanil-isoleucil1amino)-1-(2--naftil^-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano 0 composto resultante do Exemplo 30 (33 mg, 50 μιηοΐ) foi desprotegido usando o procedimento descrito no Exemplo ld e convertido na sua base livre pelo procedimento descrito no Exemplo 49g para dar a amina livre. A amina livre (27,9 mg, 0,050 mmol) foi acetilada usando acetil imidazol (6,0 mg, 0,054 mmol, 1,08 equiv) usando o procedimento descrito no Exemplo 27. A cromatografia flash em
sílica-gel, eluindo com acetato de etilo deu o produto do título (25,7 mg, 85%). p.f. 192-194 “0.% RMN (DMSO-dg, 300 MHz) 6 0,60-0,87 (m, 12H), 0,88-1,80 (m, 19H), 1,83 (s, 3H), 2,92-3,20 (m, 4H), 4,16 (m, 1H), 4,32 (d de d, 3H), 5,07 (d, 1H), 7,45 (m, 3H), 7,64-7,88 (m, 6H), 8,01 (d, 1H). Anal Cale para C35H53N305: C, 70,56; H, 8,97; N, 7,05; Encontrado: C, 71,34; H, 8,81; N, 6,53. EM (FAB) m/e 596 (M+H)+.
Exemplo 52 N-Boc-Isoleucil-isoleucil-estatil N-metil-N-isobutilcarboxamida 0 composto resultante do Exemplo 5b (37 mg, 0,074 mmol) foi reagido com N-metil-N-isobutilamina (8,8 μΐ, 0,074 mmol) pelo procedimento descrito no Exemplo 3c para dar produto bruto (29 mg). A cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com etanol a 3% em clorofórmio deu o produto do título (16 mg, 38%). 1H RMN (CDC13, 300 MHz) δ 0,75-0,88 (m, 24H), 1,47 (s, 9H), 0,90-2,00 (m, 12H), 2,32 (m, 2H), 2,85 (m, 2H), 3,10 (m, 2H) , 3,81 (m, 3H), 4,18 (m, 1H), 4,73 (m, 1H), 6,77 (m, 1H), 7,43-7,72 (m, 2H). Anal. Cale. para c3oH58N4°6.0,5 H20: C, 62,15; H, 10,26; N, 9,66; Encontrado: C, 61,95; H, 9,79; N, 9,35. EM (FAB) m/e 571 (M+H)+.
Exemplo 53 (2S.3R,4S)-2-tΓΝ-Morfolin-l-il-carbonil)ciclo-hexil-alanil--isoleucil1amino1-1-(2-naftil)-3.4-di-hidroxi-6-metil-
-heptano
Exemplo 53a N-(Morfolin-l-il-carbonil)-ciclo-hexil-alanina A sal hidrocloreto de éster metílico de ciclo-hexil-alanina (200 mg, 0,902 mmol) suspenso em tolueno (5 ml) sob azoto adicionou-se trifosgénio (133,8 mg, 0,5 equiv). A mistura reaccional foi aquecida a 100 °C durante 2 horas e em seguida concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo obtido foi retomado em cloreto de metileno (3 ml), arrefecido a 0 °C e tratado com morfolina (79 μΐ, 1,0 equiv). Após 10 minutos a 0 °c, a mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida para dar o éster metílico como um resíduo semi-sólido. EM (DCI/NH3) m/e 299 (M+H)+. 0 éster metílico (269 mg, 0,902 mmol) foi hidrolisado com hidróxido de lítio pelo procedimento descrito no Exemplo 43a para dar o composto do titulo (234 mg, 91%).
Exemplo 53b (2S.3R.4S)-2-írN-Morfolin-l-il-carbonil)-ciclo-hexil-alanil--isoleucillaminol-l-f 2-naftil)-3.4-di-hidroxi-6-metil- -heotano 0 composto resultante do Exemplo 53a (19,5 mg, 68,75 μταοί) foi acoplado com a amina livre (25 mg, 0,91 equiv) do Exemplo 29d que tinha sido desprotegida pelo procedimento descrito no Exemplo ld e convertido na sua base livre pelo procedimento descrito no Exemplo 49g, pelo procedimento descrito no Exemplo le para dar material em bruto (36,5 mg, 88%). A cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com acetato de etilo/hexanos 1:1 deu o composto do título (22,7 mg, 50%). % RMN (DMSO-dg, 300 MHz) S 0,63-0,87 (m, 12H), 0,90-1,75 (m, 19H), 2,90-3,20 (m, 3H), 3,30 (m, 2H), 3,53 (m, 2H), 4,18 (m, 1H), 4,32 (m, 1H), 5,02 (d, 0,5H), 6,50 (d, 0,5H), 7,45 (m, 1,5H), 7,60 (d, 0,5H), 7,71-7,87 (m, 2,5H). Anal Cale para C38H58N4°6*H20: C, 66,64; H, 8,83; N, 8,18; Encontrado: C, 66,69? H, 8,47? N, 8,06. EM (FAB) m/e 667 (M+H) + .
Exemplo 54 (2S.3R,4S)-2-f Γ(N-(N.N-Dimetilaminoetil)-N-metilamino1carbonil-ciclo-hexil-alanil-isoleucillaminol-l-f 2-naftil)-3.4-di- -hidroxi-6-metil-heptano
Exemplo 54a fN-(N.N-Dimetilaminoetil)-N-metilamino >carbonil-ciclo-hexil- alanina A hidrocloreto de éster metílico de ciclo-hexil-alanina (1,00 g, 4,51 mmol) suspenso em tolueno (25 ml) e aquecido a 100 °C sob azoto adicionou-se trifosgénio (669 mg, 0,5 equiv). Após 3,5 horas, a mistura reaccional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi dissolvido em cloreto de metileno e arrefecido a 0 °C. Adicionou-se N,N-dimetil-N'- metiletilenodiamina (0,51 ml, 1,0 equiv) e a mistura reaccional -78- 4955.PG.01 foi deixada agitar durante 1 hora. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida para dar o produto em bruto. A cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com metanol a 1-10% em clorofórmio deu o éster metílico (1,016 g, 72%). 0 éster metílico (1,016 g, 3,246 mmol) foi hidrolisado com hidróxido de lítio (272 mg, 2 equiv) pelo procedimento descrito no Exemplo 43a. A cromatografia de permuta iónica, eluindo com ácido clorídrico 0,1 N deu o composto do título sob a forma de um sólido branco amorfo (710 mg, 73%).
Exemplo 54b (2S.3Rf4S)-2-ff(N-(N.N-Dimetilaminoetil)-N-metilamino)carbonil-ciclo-hexil-alanil-isoleucil]amino>-l-(2-naftil^-3,4-di--hidroxi-6-metil-heptano 0 composto resultante do Exemplo 54a (20,6 mg, 68,75 μταοί) foi acoplado com a base livre do Exemplo 29d (25 mg, 0,91 equiv) que tinha sido desprotegida pelo procedimento descrito no Exemplo ld e convertido na sua base livre pelo procedimento descrito no Exemplo 49g, pelo procedimento descrito no Exemplo le para dar material em bruto. A cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com metanol a 2% em clorofórmio, seguida por HPLC preparativa, seguida por liofilização deu o composto do título. 1H RMN (DMSO-d6, 300 MHz) 5 0,67-0,86 (m, 12H), 0,90-1,80 (m, 19H), 2,78 (m, 5H), 2,90-3,25 (m, 8H), 3,54 (m, 2H), 4,15-4,38 (m, 2H), 5,07 (d, 1H), 6,43 (d, 1H), 7,45 (m, 2H), 7,64-7,90 (m, 6H). Anal Cale para C3gHg3N505.l,7 TFA: C, 58,15; H, 7,45; N, 8,00; Encontrado; C, 58,22; H, 7,58; N, 7,96. EM (FAB) m/e 682 (M+H)+.
Exemplo 55 (2S,3R.4S^—2 — fΓΜ-(4-Metilpiperazin-l-il-sulfonil\--ciclo-hexil-alanil-isoleucil)amino)-l-(2-naftil)-3,4-di--hidroxi-6-metil-heptano
Exemplo 55a N-(4-Metilpiperazin-l-il-sulfonil)-ciclo-hexilalanina A uma solução de N-metilpiperazina (1,48 ml, 13,3 mmol) em dioxano (6,7 ml) arrefecida a 0 °C adicionou-se ácido clorídrico
4Ν em dioxano (10 ml). A reacção foi muito exotérmica e a mistura foi agitada até a reacção arrefecer até à temperatura ambiente. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e caçado com éter (2x). 0 sólido obtido foi retomado em acetonitrilo (7 ml) e adicionou-se cloreto de sulfurilo (3,53 ml, 3,3 equiv). A mistura foi aquecida ao refluxo durante 24 horas e o produto removido por filtração e lavado com acetonitrilo/éter 1:1 (100 ml). Este material em bruto foi recristalizado em metanol e acetonitrilo quente para dar cloreto de 4-metilpiperazin-l-il-sulfonilo (1,36 g, 44%) sob a forma de um sólido branco, cristalino.
O sal hidrocloreto de éster metílico de ciclo-hexil-alanina (1,00 g, 4,51 mmol) suspenso em cloreto de metileno (6 ml) adicionou-se o cloreto de sulfonilo anterior (893 mg, 1,0 equiv) e trietilamina (2,01 ml, 3,2 equiv). A mistura reaccional foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo obtido foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel, eluindo com acetato de etilo para dar o éster metílico (409 mg, 29%). EM (DCI/NH3) m/e 348 (M+H)+. O éster metílico (409 mg, 1,174 mmol) foi hidrolisado com hidróxido de lítio (109 mg) pelo procedimento descrito no Exemplo 43a para dar material em bruto que foi purificado por cromatografia de permuta iónica, para dar o composto do título (341 mg, 87%).
Exemplo 55b (2Sr3R.4S)-2-f[N-(4-Metilpjperazin-l-il-sulfonil)--ciclo-hexil-alanil-isoleucil]aminol-l-f2-naftil)-3,4-di--hidroxi-6-metil-heptano 0 composto resultante do Exemplo 55a (22,9 mg, 68,75 μιηοΐ) foi acoplado com a base livre do Exemplo 29d (25 mg, 0,91 equiv) que tinha sido convertida no seu sal hidrocloreto pelo procedimento descrito no Exemplo ld e em seguida convertida na sua base livre pelo procedimento descrito no Exemplo 49g, pelo procedimento descrito no Exemplo le para dar produto em bruto (25,4 mg, 57%). A HPLC preparativa deu o produto do título.
<%) 73 516 4955.PG.01 -80- EMN (DMSO-dg, 300 MHz) δ 0,70-0,87 (m, 12H) , 0,95-1,80 (m, 19H), 2,27-2,70 (m, 2H), 2,75-3,20 (m, 11H), 3,50-3,94 (m, 5H) , 4,20-4,40 (m, 3H), 5,15 (d largo, 1H), 7,40-8,03 (m, 11H), 9,83 (s largo, 1H). Anal Cale para α38Η61Ν506.1,55 TFA: C, 55,30; H, 7,06; N, 7,84; Encontrado: C, 55,27; H, 7,07; N, 7,65. EM (FAB) m/e 716 (M+H)+.
Isolamento e Caracterização da Enzima do Conversão de Endotelina Prepararam-se membranas de plasma de pulmão de ratazanas e analisaram-se relativamente à actividade da enzima de conversão de endotelina como descrito anteriormente (Biochem. Biophys. Res. Commun. 171 1291 (1990)).
Fraccionamento por HPLC em Mono O
Solubilizaram-se membranas de plasma de pulmão de ratazanas (400 mg) por agitação a 4 °C durante 45 minutos em 50 ml de Tris-HCl 20 mM, pH 7,7 contendo ditiotreitol 2 mM e NOG 46 mM (Tampão C) . Os materiais insolubilizados foram removidos por centrifugação a 60 000 x g durante 30 minutos. Os materiais solubilizados foram injectados numa coluna Mono Q HR 10/10 (Pharmacia) e eluídos com gradientes de concentração de NaCl 0-1 M em 240 ml de Tampão C a 4 ml/minuto. (As fraeções activas de enzima de conversão de endotelina foram eluídas de NaCl 0,07 a 0,14 M). A absorvância a 280 nm foi controlada por um monitor LKB 2150 UVICORD SD. As fraeções foram analisadas relativamente à actividade da enzima de conversão de endotelina e por SDS-PAGE. 0 teor em proteína foi determinado pelo conjunto de Ensaio Bio-Rad Protein.
Fraccionamento por HPLC em Superose 12
As fraeções Mono Q contendo actividade da enzima de conversão de endotelina foram reunidas, concentradas a 25 mg/ml por Concentradores Amicon Macrosolute e em seguida aplicou-se uma amostra em Superose 12 (Pharmacia), o Tampão B (NaCl 100 mM, Hepes 50 mM, pH 7,4) foi usado como fase móvel. O caudal foi de 0,3 ml/minuto e recolheu-se a 0,6 ml/fracção. Cromatografaram-se em paralelo padrões de proteínas de massa molecular conhecida e azul de dextrana. A absorvância a 280 nm foi controlada como
73 516 4955.PG.01 -81- acima. As fracções foram analisadas relativamente à actividade da enzima de conversão de endotelina. As fracções contendo actividade da enzima de conversão de endotelina foram concentradas e analisadas por SDS-PAGE.
Fraccionamento por HPLC em Mono P
As fracções Superose 12 contendo actividade da enzima de conversão de endotelina foram reunidas e passadas através de colunas PD-10 (Pharmacia) para mudar para o tampão de partida (bis-Tris 25 mM, pH 6,9 por CH3COOH) . As amostras foram injectadas numa coluna Mono P HR 5/20 (Pharmacia). Depois da lavagem com o tampão de partida, a coluna foi eluída com um tampão contendo 9,5% de Polybuffer 96 e 0,5% de Polybuffer 74 ( ambos de Pharmacia) ajustado a pH 5,9 com ácido acético. Os valores do pH em cada fracção foram determinados. A absorvância a 280 nm foi controlada. As fracções foram analisadas relativamente à actividade da enzima de conversão de endotelina.
SDS-PAGE
As proteínas foram resolvidas por PhastGels (SDS-PAGE: gradiente 8-25; focalização isoeléctrica: pH 5-8) num Phastsystem de Pharmacia. Os geles foram visualizados por coloração com prata. A enzima tem uma massa molecular aparente de 90 KD, estimada por SDS-PAGE ou por filtração em gel e parece ser uma proteína de péptido único. (Ferver a amostra resultante da purificação por Mono Q sob condições redutoras não alterou os resultados da análise por SDS-PAGE). A enzima pode existir como isozima com pis a 6,2 e 6,3. Verificou-se que a actividade da enzima de conversão de endotelina após a purificação por Mono Q era óptima a pH 3,5 a 37 °C. A actividade da enzima de conversão de endotelina nas fracções Mono Q activas foi inibida por pepstatina A com uma IC50 de 5nM. A actividade da enzima de conversão de endotelina da enzima de conversão de endotelina solubilizada (P3 de pulmão de ratazana) não é inibida a 40 mM por TLCK, aprotinina, PMSF, E-64, bestatina, fosforamidon ou tiorfan. A actividade da enzima de conversão de endotelina das fracções de Mono Q activas foi
73 516 4955.PG.01 estimulada por catiões metálicos divalentes na ordem de Mn+2 >= Zn+2 > Ca+2 > Mg+2 >= Ba+2 = Co+2. A capacidade dos compostos do invento inibirem uma enzima de conversão de endotelina inibível por pepstatina A pode ser determinada de acordo com o seguinte ensaio.
Ensaio de Pesquisa de Inibidor de ECE
Num tubo de 1,5 ml, adicionou-se e submeteu-se a vortex um "cocktail" de ensaio contendo tampão de HEPES 50 mM-NaCl 100 mM (pH 7,4 e contendo 0,01% NaN3), MnCl2 (40 μΜ), pepstatina A (1 nM), Bestatina (40 μΜ), PMSF (40 μΜ), composto de teste (100 μΜ em DMSO) e enzima de conversão de endotelina solubilizada (P3 de pulmão de ratazana, ver Biochem. Biophys. Res. Commun. 171 1291 (1990)). A mistura anterior sem o composto de teste foi usada como controlo.
Depois de uma pré-incubação de 15 minutos a 37 °C, adicionou-se succinato de benzilo (100 μΜ), NaOAc, e Big ET (3 β<2). A mistura foi incubada durante 30 minutos a 37 °C, seguida por adição de pepstatina (40 μΜ) e TFA a 10% para parar a reacção. A mistura foi submetida a vortex, centrifugada e o sobrenadante foi retido para determinação por HPLC de Big Et, ET-1 e CTF. Os picos de ET foram detectados usando absorvância a 226 nm. Os cálculos da percentagem de inibição foram feitos com referência aos controlos baseados na quantificação dos picos da ET-1 e Big Et no final do período de incubação. A Tabela 1 mostra os valores de IC50 (concentração à qual os compostos de teste inibem a actividade da enzima em 50%) para compostos representativos do invento.
73 516 4955.PG.01
Inibição da Enzima de Conversão da Endotelina
Comoosto do Exemplo ic*0 (nM) 1 50 6 57 7 68 8 39 12 19 13 17 14 8 15 47 16 30 23 24 24 7 25 17 26 7 27 29 28 9 30 3 33 33 34 19 35 17 39 9/5 40 10 41 18 42 16 43 6 44 21 45 51 46 4 47 20 48 7 49 6 50 4 51 4 52 10 53 3 54 5 55 5 -84 73 516 4955.PG.01
Os dados indicam que os compostos do invento inibem a enzima de conversão de endotelina. A capacidade dos compostos do invento baixarem a pressão sanguínea pode ser demonstrada de acordo com os métodos descritos em Matsumura, et al., Eur. J. Pharmacol. 185 103 (1990) e em Takata, et al., Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 10 131 (1983). A capacidade dos compostos do invento para tratar insuficiência cardíaca congestiva pode ser demonstrada de acordo com o método descrito em Margulies, et al., Circulation 82. 2226 (1990). A capacidade dos compostos do invento para tratar enfarte do miocárdio pode ser demonstrada de acordo com o método descrito em Watanabe, et al., Nature 344 114 (1990). A capacidade dos compostos do invento para tratar angina coronária pode ser demonstrada de acordo com o método descrito em Heistad, et al., Circ Res. 54 711 (1984). A capacidade dos compostos do invento para tratar vasoespasmo cerebral pode ser demonstrada de acordo com o método descrito em Nakagomi, et al., J. Neurosurg. 66 915 (1987). A capacidade dos compostos do invento para tratar insuficiência renal aguda pode ser demonstrada de acordo com o método descrito em Kon, et al., J. Clin Invest. 83. 1762 (1989). A capacidade dos compostos do invento para tratar úlceração gástrica pode ser demonstrada de acordo com o método descrito em Wallace, et al., Am. J. Physiol. 256 G661 (1989). A capacidade dos compostos do invento para tratar nefrotoxicidade induzida por cicloesporina pode ser demonstrada de acordo com o método descrito em Kon, et al., Kidney Int. 37. 1487 (1990).
73 516 4955.PG.01 -85- A capacidade dos compostos do invento para tratar toxicidade (choque) induzida por endotoxina pode ser demonstrada de acordo com o método descrito em Takahashi, et al.f Clinicai SCI. 79 619 (1990). A capacidade dos compostos do invento para tratar asma pode ser demonstrada de acordo com o método descrito em Potvin e Varma, Can. J. Physiol and Pharmacol. 67 1213 (1989).
A capacidade dos compostos do invento para tratar ateroesclerose pode ser demonstrada de acordo com os métodos descritos em Bobik, et al., Am. J. Physiol. 258 C408 (1990) e Chobanian, et al., Hypertension 15. 327 (1990).
Os compostos do presente invento podem ser usados na forma de sais derivados de ácidos inorgânicos ou orgânicos.
Estes sais incluem, não limitativamente: acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, benzenossulfonato, bissulfato, butirato, camforato, camforsulfonato, digluconato, ciclopentanopropionato, dodecilsulfato, etanossulfato, gluco-heptanoato, glicerofosfato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, fumarato, hidrocloreto, hidrobrometo, hidro-iodeto, 2-hidroxi-etanossulfonato, lactato, maleato, metanossulfonato, nicotinato, 2-naftalenossulfonato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartarato, tiocianato, p-toluenossulfonato e undecanoato. Também, os grupos contendo azoto básico podem ser quaternizados com agentes tais como halogenetos de alquilo inferior, tais como cloreto, brometos e iodetos de metilo, etilo, propilo e butilo; sulfatos de dialquilo tais como sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo e diamilo, halogenetos de cadeia longa tais como cloretos, brometos e iodetos de decilo, laurilo, miristilo e estearilo, halogenetos de aralquilo tais como brometos de benzilo e fenetilo, e outros. Obtém-se assim produtos solúveis ou dispersáveis em água ou óleo.
Exemplos de ácidos que podem ser empregues para formar sais
73 516 4955.PG.01 -86-de adição de ácidos farmaceuticamente aceitáveis incluem ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, ácido sulfúrico e ácido fosfórico e ácidos orgânicos tais como ácido oxálico, ácido maleico, ácido succínico e ácido cítrico. Outros sais incluem sais com metais alcalinos ou metais alcalino-terrosos, tais como sódio, potássio, cálcio ou magnésio ou com bases orgânicas.
Os compostos do presente invento também pode ser usados na forma de ésteres. Exemplos de tais ésteres incluem um composto de fórmula I, II ou III substituído com hidroxilo que tenha sido acilado com um resíduo de aminoácido bloqueado ou não bloqueado, uma função fosfato, um resíduo hemisuccinato ou um resíduo acilo de fórmula R**C(0)- ou R**C(S)- em que R** é hidrogénio, alquilo inferior, haloalquilo, alcoxi, tioalcoxi ou haloalcoxi. Os ésteres de aminoácido de interesse particular são a glicina e lisina; contudo, também, podem ser usados outros resíduos de aminoácido, incluindo aqueles em que o grupo aminoacilo é - C( O) CH2NR2ooR201 em 3ue R200 e R201 sao seleccionados independentemente uns dos outros de entre hidrogénio e alquilo inferior ou o grupo -NR2ooR201 forma um anel heterocíclico contendo azoto. Estes ésteres servem como pró-drogas dos compostos do presente invento e servem para aumentar a solubilidade destas substâncias no tracto gastrintestinal. Estes ésteres também servem para aumentar a solubilidade para administração intravenosa dos compostos. As pró-drogas deste invento são metabolizadas in vivo para proporcionar o composto de fórmula I, II ou III substituído com hidroxilo. A preparação dos ésteres de pró-droga é efectuada pela reacção de um composto de fórmula I, II ou III substituído com hidroxilo com derivado acilo, fosforilo, hemisuccinilo ou aminoacilo activado definido como acima. O produto resultante é então desprotegido para dar o éster pró-droga desejado.
Os compostos do invento são úteis na inibição da enzima de conversão de endotelina inibível por pepstatina A no Homem ou noutro animal. Os compostos do presente invento também são úteis na supressão da produção de endotelina num ser humano ou noutro animal. Além disso, os compostos do presente invento são úteis
para o tratamento de hipertensão, insuficiência cardíaca congestiva, enfarte do miocárdio, lesão por reperfusão, angina coronária, vásoespasmo cerebral, insuficiência renal aguda, ulceração gástrica induzida por drogas anti-inflamatórias não esteróides, nefrotoxicidade induzida por cicloesporina, toxicidade induzida por endotoxina, asma e ateroesclerose num ser humano ou noutro animal.
A dose diária total administrada a um hospedeiro em doses simples ou divididas pode ser da ordem de , por exemplo, 0,001 a 1000 mg/kg de peso corporal diariamente ou mais usualmente de 1 a 500 mg. As composições de unidade de dosagem podem conter quantidades submúltiplas destes valores gue perfaçam a dose diária. A quantidade do ingrediente activo que pode ser combinada com os materiais portadores para produzir uma forma de dosagem única dependerão do hospedeiro a tratar e do modo de administração particular.
Deverá notar-se contudo que o nível de dose específico para qualquer paciente particular dependerá de uma variedade de factores que incluem a actividade do composto específico empregue, a idade, o peso corporal, a saúde em geral, sexo, dieta, tempo de administração, via de administração, taxa de excreção, combinação de drogas e severidade da doença particular a sofrer terapia.
Os compostos do presente invento podem ser administrados oral, parenteral, sublingualmente, por aspersão para inalação, rectalmente ou topicamente em formulações de unidades de dosagem contendo portadores, adjuvantes e veículos não tóxicos , farmaceuticamente aceitáveis, convencionais, como desejado. A administração tópica também pode envolver o uso de administração transdérmica tais como em pensos transdérmicos ou dispositivos de iontoforese. 0 termo parentérico como aqui usado inclui injecções subcutâneas, injecção intravenosa, intramuscular, intrastemal ou técnicas de infusão.
As preparações injectáveis, por exemplo as suspensões injectáveis aquosas ou.- ..oleaginosas, estéreis, podem ser formuladas de acordo com a arte conhecida, usando agentes de dispersão ou molhantes e agentes de suspensão adequados. A preparação injectável estéril também pode ser uma solução ou suspensão injectável estéril num diluente ou solvente não tóxico, parentericamente aceitável, por exemplo uma solução em 1,3-propanodiol. De entre os veículos e diluentes aceitáveis que podem ser empregues figuram a água, solução de Ringer e solução de cloreto de sódio isotónica. Em adição, os óleos fixos estéreis são convencionalmente empregues como solvente ou meio de suspensão. Para este fim pode ser empregue qualquer óleo fixo suave incluindo mono e diglicéridos sintéticos. Em adição, os ácidos gordos tais como ácido oleico têm utilidade na preparação de produtos injectáveis.
Os supositórios para administração rectal da droga podem ser preparados por mistura da droga com um excpiente não irritante adequado tal como manteiga de cacau e polietilenoglicóis que são sólidos a temperaturas ordinárias mas líquidos à temperatura rectal e que portanto fundirão no recto e libertarão a droga.
As formas de dosagem sólida para administração oral podem incluir cápsulas, comprimidos, pílulas, pós e grânulos. Nestas formas de dosagem sólidas, o composto activo pode ser misturado com pelo menos um diluente inerte tal como sacarose, lactose ou amido. Estas formas de dosagem podem também compreender, como prática normal, substâncias adicionais para além dos diluentes, p. exp. agentes lubrificantes tais como estearato de magnésio. No caso das cápsulas, comprimidos e pílulas, as formas de dosagem podem também compreender agentes tampão. Os comprimidos e pílulas podem, adicionalmente, ser preparados com revestimentos entéricos.
As formas de dosagem líquidas para administração oral podem incluir emulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamente aceitáveis contendo diluentes inertes comummente usados na arte, tais como água. Estas composições
também podem compreender adjuvantes tais como agentes molhantes, emulsionantes e agentes de suspensão, e adoçantes, aromatizantes e agentes de perfume.
Os compostos do presente invento também podem ser administrados sob a forma de lipossomas. Como é sabido na arte, os lipossomas são geralmente derivados de fosfolípidos ou de outras substâncias lipídicas. Os lipossomas são formados por cristais líquidos hidratados mono ou multi-lamelares que são dispersos num meio aquoso. Pode ser usado qualquer lípido não tóxico, fisiologicamente aceitável e metabolizável que seja capaz de formar lipossomas. As presentes composições na forma de lipossomas podem conter, em adição a um composto do presente invento, estabilizantes, conservantes, excipientes e similares. Os lípidos preferidos são os fosfolípidos e as fosfatidil colinas (lecitinas), tanto naturais como sintéticas.
Os processos para formar lipossomas são conhecidos na arte. Ver, por exemplo, Prescott, Ed., Methods in Cell Bioloav. Volume XIV, Academic Press, New York, N.Y. (1976), P. 33 e seg.
Embora os compostos do invento possam ser administrados como o único agente farmacêutico activo, eles podem também ser usados em combinação com um ou mais agentes cardiovasculares seleccionados independentemente de entre diuréticos, agentes bloqueadores adrenérgicos, vasodilatadores, bloqueadores dos canais de cálcio, inibidores da renina, inibidores da enzima de conversão da angiotensina (ACE), antagonistas da angiotensina II, activadores dos canais de potássio e outros agentes cardiovasculares.
Diuréticos representativos incluem hidroclorotiazida, clorotiazida, acetazolamida, amilorido, bumetanida, benztiazida, ácido etacrínico, furosemida, indacrinona, metolazona, espironolactona, triamtereno, clortalidona e semelhantes ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Agentes bloqueadores adrenérgicos representativos incluem
4955.PG.01 fentolamina, fenoxibenzamina, prazosina, terazosina, tolazina, atenolol, metoprolol, nadolol, propranolol, timolol, carteolol e semelhantes ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Vasodilatadores representativos incluem hidralazina, minoxidil, diazoxido, penta-ciano-nitrosil-ferrato ("nitroprus-side"), e semelhantes ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Bloqueadores dos canais de cálcio representativos incluem amrinona, benciclano, diltiazem, fendilina, flunarizina, nicardipina, nimodipinaf per-hexileno, verapamil, galopamil, nifedipina e semelhantes ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Inibidores da renina representativos incluem enalquireno, RO-42-5892, PD-134672 e semelhantes ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Antagonistas da angiotensina II representativos incluem DUP 753 e semelhantes.
Inibidores de ACE representativos incluem captopril, enalapril, lisinopril e semelhantes ou um seu sal f armaceuticamente aceitável.
Activadores dos canais de potássio representativos incluem pinacidil e semelhantes ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Outros agentes cardiovasculares representativos incluem agentes simpatolíticos, tais como metildopa, clonidina, guanabenz, reserpina e semelhantes ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
Os compostos do invento e o agente anti-hipertensivo podem ser administrados à dosagem clínica máxima recomendada ou a doses inferiores. Os níveis de dosagem dos compostos activos nas composições do invento podem variar de modo a obter-se uma
73 516 4955.PG.01 desejada resposta terapêutica, dependendo da via de administração, gravidade da doença e da resposta do paciente. A combinação pode ser administrada como composições separadas ou como uma única forma de dosagem contendo ambos os agentes.
Quando administrados como uma combinação, os agentes terapêuticos podem ser formulados como composições separadas que são dadas ao mesmo tempo ou em tempos diferentes, ou os agentes terapêuticos podem ser dados como uma composição única. 0 que se expôs é meramente ilustrativo do invento e não se destina a limitar o invento aos compostos apresentádos. As variações e alterações óbvias para o perito da arte consideram-se no âmbito e natureza do invento que são definidos nas reivindicações anexas.

Claims (12)

    73 516 4955.PG.01 -92- REIVINDICACÕES
  1. (1) —ORy onde Ry é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; (2) -NRgRg, onde Rg e Rg são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo e -(CH2)m-Z onde mé2a8eZé -OH, heterocíclico, -SOgH, -C02R10 onde R^0 é hidrogénio ou alquilo inferior ou Z é -NR-l-lR-i^ onde Rlx e R12 são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo e cicloalquilalquilo; (3) -NHCH(R13)C(0)-, onde R13 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; ou J (4) -NHCH(R13)C(0)NHCH(R14)C(0)-, onde R13 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo e R14 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, aminocarbo-nilalquilo, cianoalquilo, carboxialquilo ou alcoxicarbonilalqui-lo; e E (1) está ausente; (2) é -0R15 onde R15 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; ou (3) -NR16Ri7 onde R16 e R17 são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo e -(CH2)p-Y onde pé2a8eYé -OH, heterocíclico, -SO3H, -C02R18 onde R18 é hidrogénio ou alquilo inferior ou Y é -NRigR20 onde Rlg e R20 são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, ciclo-
    73 516 4955.PG.01 -98- alquilo e cicloalquilalquilo, caracterizado por compreender a reacção de um composto de fórmula: A-B-C-OH com um composto de fórmula:
    X-D-E ; ou processo de preparação de um composto de fórmula: R 0 /D“E A-B-C-NH P X OP4 na qual A é hidrogénio, um grupo protector de N, R1NHCH(R2)C(0)-í onde R^^ é H ou um grupo protector de N e R2 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, carboxialquilo ou alco-xicarbonilalquilo; ou A é H02C(CH2)nC(0)- onde n é 1 a 3; B é -N(R4)CH(R3)C(0)-, onde R4 é hidrogénio ou alquilo inferior e R3 é alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; C é -N(R5)CH(R6)C(0)-, onde R5 é hidrogénio ou alquilo inferior e Rg é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; R é alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo ou heterocíclico bicíclico; P4 é hidrogénio, alquilo inferior ou benzilo; X é —CH2— ou -C(0)-; D é (1) -ORy onde Ry é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; (2) -NRgRg, onde Rg e Rg são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo e -(CH2)m~Z onde mé2a8ezé -OH, heterocíclico, —S03H, -CO2R10 onde R10 ® hidrogénio ou alquilo inferior ou Z é -NR11R12 onde Ri;l e R12 são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, ciclo- 73 516 4955.PG.01 -99-
    alquilo e cicloalquilalquilo; (3) -NHCH(R13)C(0)-f onde R13 é hidrogénio, alquilo inferior, ci-cloalquilo ou cicloalquilalquilo; ou (4) -NHCH(R13)C(0)NHCH(R14)C(0)-, onde R13 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo e R14 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, aminocarbo-nilalquilo, cianoalquilo, carboxialquilo ou alcoxicarbonilalqui-lo; e E (1) está ausente; (2) é -OR15 onde R15 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; ou (3) -NR16R17 onde R16 e R17 são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo e -(CH2)p-Y onde pé2a8eYé -OH, hete-rocíclico, -so3H, -C02Ri8 onde R18 é hidrogénio ou alquilo inferior ou Y é -NR19R20 on^e Ri9 © R2q s©° seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo e cicloalquilalquilo, caracterizado por compreender a reacção de um composto de fórmula: A-B-C-OH
    com um composto de fórmu}»*
    1 - Composto caracterizado por ter a fórmula:
    na qual
    A é hidrogénio, um grupo protector de N, R1NHCH(R2)C(0)-/ onde R-l é H ou um grupo protector de N e R2 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, carboxialquilo, alcoxicarbonilalquilo ou arilalcoxicarbonilalquilo; ou A é H02C(CH2)nC(0)- onde n é 1 a 3; ou A é RlaC(0)- ou RlaS(0)2- onde Rla‘ ® um heterocíclico; ou A é (aminoalquil)(alquil)aminocarbo-nilo, (alquilaminoalquil)(alquil)aminocarbonilo, (dialquilamino- alquil)(alquil)aminocarbonilo, (aminoalquil)(alquil)aminosul-fonilo, (alquilaminoalquil)(alquil)aminosulfonilo, (dialquilami-noalquil)(alquil)aminosulfonilo, (heterociclicoalquil)(al quil) aminocarbonilo ou (heterociclicoalquil)(alquilJaminosul-fonilo; B é -N (R^) CH (R3) C (O) -, onde R^ é hidrogénio ou alquilo inferior e R3 é alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo;
    C é -N(R5)CH(R6)C(0)-, onde R5 é hidrogénio ou alquilo inferior e R6 é alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; R é alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo ou heterocíclico bicíclico; e R21 é alquilo inferior, cicloalquilo, ou cicloalquilalquilo;
    na qual A é hidrogénio, um grupo protector de N, R1NHCH(R2)C(0)-, onde R]^ é H ou um grupo protector de N e R2 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, carboxialquilo ou alcoxicarbonilalquilo; ou A é H02C(CH2)nC(0)- onde n é 1 a 3;
    B é -Ν(R4)CH(R3)C(Ο)-, onde R4 é hidrogénio ou alquilo inferior e R3 é alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; C é -N(R5)CH(Rg)C(O)-, onde Rg é hidrogénio ou alquilo inferior e Rg é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; R é alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo ou heterocíclico bicíclico; X é -CH2- ou -C(0)-; D é (1) -0R7 onde R7 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; (2) -NRgRg, onde Rg e Rg são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, W cicloalquilalquilo e -(CH2)m-Z onde mé2a8eZé -OH, heterocíclico, -S03H, -CO2R10 onde R10 é hidrogénio ou alquilo inferior ou Z é -NR11R12 onde Rn e Ri2 são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo e cicloalquilalquilo; (3) -NHCH(R«l3)C(0)-, onde R^3 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; ou (4) -NHCH(R13)C(0)NHCH(R14)C(0)-, onde R13 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo e R14 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, aminocarbo-nilalquilo, cianoalquilo, carboxialquilo ou alcoxicarbonilalqui- 0 lo; e E (1) está ausente; (2) é -0R15 onde R15 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; ou (3) -NR16R17 onde R16 e R17 são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo e -(CH2)p-Y onde pé2a8eYé -OH, heterocíclico, -S03H, -C02Rig onde R18 é hidrogénio ou alquilo inferior ou Y é -NRigR20 onde Rlg e R20 são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo e cicloalquilalquilo; ou Qj 73 516 4955.PG.01 -94- L
    A-B-C-NH I (C). na qual R 0
    A é hidrogénio, um grupo protector de N# R-lNHCH(R2)C(0)-, onde R^ é H ou um grupo protector de N e R2 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, carboxialquilo ou alco-xicarbonilalquilo; ou A é H02C(CH2)nC(0)- onde n é 1 a 3; B é -N(R4)CH(R3)C(0)-, onde R4 é hidrogénio ou alquilo inferior e R3 é alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; C é -N(R5)CH(R6)C(0)-, onde R5 é hidrogénio ou alquilo inferior e Rg é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; R é alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo ou heterocíclico bicíclico; P4 é hidrogénio, alquilo inferior ou benzilo; X é -CH2- ou -C(O)-; D é (1) -0R7 onde Ry é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; (2) -NRgRg, onde Rg e Rg são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, φ cicloalquilalquilo e -(CH2)m-Z onde mé2a8eZé -OH, heterocíclico, -S03H, -C02Riq on<*e Rio ® hidrogénio ou alquilo inferior ou Z é -NR11R12 onde R-^ e R12 são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo e cicloalquilalquilo; (3) -NHCH(R-l3)C(0)-, onde R^3 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; ou (4) -NHCH(R13)C(0)NHCH(R14)C(0)-, onde r13 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo e R14 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, aminocarbo-nilalquilo, cianoalquilo, carboxialquilo ou alcoxicarbonilalqui-lo; e E (1) está ausente; 73 516
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  2. 2 - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por X ser -C(0)- e R ser alquilo inferior, cicloalquilalquilo ou heterocíclico bicíclico ou R2i ser alquilo inferior e R ser alquilo inferior, cicloalquilalquilo, naftilo ou heterocíclico bicíclico.
    (2) é -OR15 onde R^g é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; ou (3) -NR16R17 onde R^g e R^y são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo e -(CH2)p-Y onde pé2a8eYé -OH, hete-rocíclico, -SO3H, -C02R18 onde R18 é hidrogénio ou alquilo inferior ou Y é -NR19R2o onde R19 e R2q são seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo e cicloalquilalquilo; ou um seu sal, éster ou pró-droga farmaceuticamente aceitáveis.
  3. 3 - Composto, caracterizado por ser seleccionado do grupo constituído por: (2S,3R,4S)-2-{(N-acetil-ciclo-hexilalanil-isoleucil)amino)-1-(4--terc-butilfenil)-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano; (2S,3R, 4S)-2-{(N-acetil-ciclo-hexilalanil-isoleucil)amino}-l-(2--naftil)-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano; N-Boc-isoleucil-isoleucil-estatil-N-metil-N-isobutil-carboxamida; (2S,3R,4S)-2-{(N-(morfolin-l-il-carbonil)-ciclo-hexilalanil-iso-leucil)amino}-1-(2-naftil)-3,4-di-hidroxi-6-metil-heptano; (2S, 3R, 4S) -2-{ ({N-(N,N-dimetilaminoetil) -N-metilamino}carbonil--ciclo-hexilalanil-isoleucil)amino}-l-(2-naftil)-3,4-di-hidroxi--6-metil-heptano; e (2S,3R,4S)-2-{(N-(4-metilpiperazin-l-il-sulfonil)-ciclo-hexil--alanil-isoleucil)amino}-1-(2-naftil)-3,4-di-hidroxi-6-metil--heptano.
  4. 4 - Processo de preparação de um composto de fórmula: R
    OH
    73 516 4955.PG.01
    na qual A é hidrogénio, um grupo protector de N, R1NHCH(R2)C(0)~/ onde R^ é H ou um grupo protector de N e R2 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, carboxialquilo, alcoxicarbonilalquilo ou arilalcoxicarbonilalquilo? ou A é H02C(CH2)nC(0)- onde n é 1 a 3; ou A é RlaC(0)- ou RlaS(0)2- onde Rla é um heterociclico; ou A é (aminoalquil)(alquil)aminocarboni-lo, (alquilaminoalquil)(alquil)aminocarbonilo, (dialquilaminoal- quil)(alquil)aminocarbonilo, (aminoalquil)(alquil)aminosulfonilo, (alquilaminoalquil)(alquil)aminosulfonilo, (dialquilaminoal- quil)(alquil)aminosulfonilo, (heterocíclicoalquil)(alquil)aminocarbonilo ou (heterocíclicoalquil)(alquil)aminosulfonilo?
    B é -N(R4)CH(R3)C(0)-, onde R4 é hidrogénio ou alquilo inferior e R3 é alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; C é -N(R5)CH(Rg)C(O)-, onde R5 é hidrogénio ou alquilo inferior e Rg é alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; R é alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo ou heterociclico bicíclico; e R21 é alquilo inferior, cicloalquilo, ou cicloalquilalquilo, caracterizado por compreender a reacção de um composto de fórmula: A-B-C-OH com um composto de fórmula:
    processo de preparação de um composto de fórmula:
    ,D-E na qual A é hidrogénio, um grupo protector de N, R1NHCH(R2)C(0)-, onde Rj
    73 516 4955.PG.01 -97-
    é H ou um grupo protector de N e R2 é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, carboxialquilo ou alco-xicarbonilalquilo; ou A é H02C(CH2)nC(0)- onde n é 1 a 3; B é -N(R4)CH(R3)C(0)-, onde R4 é hidrogénio ou alquilo inferior e R3 é alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo; C é -N(R5)CH(Rg)C(0)-, onde Rg é hidrogénio ou alquilo inferior e Rg é hidrogénio, alquilo inferior, cicloalquilo ou cicloalquilalquilo ; R é alquilo inferior, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo ou heterocíclico bicíclico; X é -CH2- ou —C(O)—; D é
  5. 5 - Composto da reivindicação 1, caracterizado por ser utilizado como inibidor da enzima de conversão de endotelina.
  6. 6 - composto da reivindicação 1, caracterizado por ser utilizado no tratamento da hipertensão.
  7. 7 - Utilização do composto da reivindicação l, caracterizado por ser para o fabrico de um medicamento para a inibição da enzima de conversão de endotelina.
  8. 8 - Utilização do composto da reivindicação 1, caracterizado por ser para o fabrico de um medicamento para o tratamento de -100- 73 516 4955.PG.01 hipertensão.
  9. 9 - Uso de acordo com a reivindicação 8, caracterizado por X ser -C(O)- e R ser alquilo inferior, cicloalquilalquilo ou heterocíclico bicíclico ou R21 ser alquilo inferior e R ser alquilo inferior, cicloalquilalquilo, naftilo ou heterociclico bicíclico.
  10. 10 - Uso de um composto da reivindicação 1 para o fabrico de um medicamento para supressão da produção de endotelina.
  11. 11 - Uso de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por X ser -c(0)- e R ser alquilo inferior, cicloalquilalquilo ou heterocíclico bicíclico ou R21 ser alquilo inferior e R ser alquilo inferior, cicloalquilalquilo, naftilo ou heterocíclico bicíclico.
  12. 12 - Uso de um composto da reivindicação 1 para o fabrico de um medicamento para o tratamento da hipertensão, insuficiência cardíaca congestiva, infarte do miocárdio, lesão por reperfusão, angina coronária, vasospasmo cerebral, insuficiência renal aguda, ulceração gástrica induzida por drogas não esteroidais anti-inflamatórias, nefrotoxicidade induzida por ciclosporina, toxicidade induzida por endotoxina, asma e aterosclerose. Lisboa, 20· «JÃN i:J92 Por ABBOTT LABORATORIES
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