PT100014B - Processo para a preparacao de acido (6r)-tetra-hidrofolico - Google Patents

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Description

A presente invenção refere-se a um processo para a preparação do ácido N[-4-[[(2-amino-1,4,5,6,7,8-hexa -hidro-4-oxo-(6S)-pteridinil)-metil]-amino]-benzoiH-L-glutâmi co (no seguimento designado por ácido (6S)-tetra-hidrofólico) e dos seus sais e do ácido N-[4-[[(2-amino-1,4,5,6,7,8-hexa -hidro-4-oxo-(6R)-pteridinil)-metil]-amino]-benzoil] -L-glutâmico (no seguimento designado por ácido (6R)-tetra-hidro£ólico) e dos seus sais.
Os derivados do ácido tetra-hidrofólico contêm 2 centros assimétricos. Assim, devido à síntese destes derivados de ácido fólico, do ácido N-(pteroil)-L-glutâmico, o átomo de carbono opticamente activo, contido no resíduo de ácido glutâmico, está presente na forma L, enquanto o átomo de carbono opticamente activo que aparece devido à hidrogenação da ligação dupla nas posições 5-6 do radical pteroílo está presente na forma racémica, a forma (6R,S). Os derivados sintéticos do ácido tetra-hidrofólico são, portanto, constituídos por uma mistura a 1:1 de dois diastereómeros. Na ocorrência natural, por exemplo no fígado, o tetra-hidrofolato encontra-se apenas numa forma de diastereómero, estando o ácido 5,6,7,8-tetra-hidrofólico na forma (6S).
Como medicamento, os tetra-hidrofolatos são usados principalmente sob a forma de sal de cálcio do ácido
5-£ormil-5,6,7,8-tetra-hidrofólico (Leucovin) ou do ácido
5-metil-5,6,7,8-tetra-hidro£ólico, para o tratamento da anemia megaloblástica de ácido fólico, como antídoto para reforçar a tolerância aos antagonistas do ácido fólico, em especial de aminopterina e Methotrexat na terapêutica do cancro (leucovorin rescue) para reforçar o efeito terapêutico de 5-fluoruracil e do tratamento de doenças de auto-imunidade, tais como a psoríase e a artrite reumática, e ainda para reforço da tolerância a determinados antiparasitas, por exemplo Trimethoprim-sulfamethoxazol, na quimioterapia.
ácido tetra-hidrofólico serve de composto inicial para a preparação de diversos derivados do ácido tetra-hidrofólico.
Os esforços para a produção de ácido (6S)~ ou (óR)-tetra-hidrofólico conduziram até agora aos processos seguintes:
- processos enzimáticos
- processos físico-químicos
- processos químicos.
Os processos enzimáticos compreendem uma redução, normalmente realizada quimicamente, de ácido fólico para obter ácido 7,8-di-hidrofólico e, em seguida, a redução enzimática do mesmo para obter o ácido (6S)-5,6,7,8-tetra-hidrofólico, por exemplo de acordo com L. Rees e outros, Tetrahedron, 42(1 ) (1986) 117-36 ou patente de invenção europeia EP-A2-0 356 934. Mas estes processos, no passo químico, só dificilmente param na fase de ácido 7,8-di-hidrofólico, dando também origem, no passo enzimático, tipicamente a um rendimento espacio-temporal muito baixo, exigem co-factores caros, tais como NADPH e exigem uma metodologia de trabalho muito complexa. Os processos até agora conhecidos para a preparação enzimática de ácido tetra-hidrofólico opticamente puro não são apropriados para a produção deste composto à escala técnica.
- 3 A separação dos pares de diastereómeros por cromatografia foi também investigada [J. Feeney e outros, Biochemistry, 20 (1981), 18373 . Estes processos não são apropriados para a produção dos diastereómeros à escala técnica.
É também conhecida no grupo dos processos físico-químicos, uma redução assimétrica, de ácido fólico em eléctrodos quirais. [ S. Kwee e outros, Bioelectrochem. Bioenerg. 7 (1980) 693-6983. Porém, devido às concentrações de ácido fólico (tipicamente 10 M) durante a redução e a separação, realizável apenas com dificuldade, do indutor assimétrico depois de efectuada a redução, estas reacções não podem ser utilizadas para a produção técnica.
No domínio da síntese química há possibilidade da hidrogenação assimétrica de ácido fólico na presença de um catalisador opticamente activo, mais ou menos segundo P.H. Boyle e outros, J. Chem. Soe, Chem. Commun., 10 (1974) 375-6. Mas isso exige a utilização de catalisadores muito caros, os quais, depois de efectuada a catálise homogénea, só com grande dispêndio podem separar-se do produto.
Por conseguinte, não existia até agora qualquer processo utilizável tecnicamente para a obtenção de ácido tetra-hidrofólico opticamente puro.
Existe, portanto, a necessidade de se dispor de um processo utilizável tecnicamente e económico para a preparação de ácido tetra-hidrofólico opticamente puro.
Verificou-se agora, surpreendentemente, que, a partir de soluções aquosas de ácido (6R,S)-tetra-hidrofólico ou dos seus sais, após adição de ácidos sulfónicos ou de ácido sulfúrico, se obtêm os sais de adição correspondentes ópticos de ácido tetra-hidrofólico concentrados. Estes sais podem separar-se por filtração. A partir do filtrado pode isolar-se o sal de adição diastereómero. Em seguida, os dois sais podem ser também purificados, tanto química como opticamente, por recristalização e/ou libertação do ácido tetra-hidrofólico e salificação ulterior. Que na cristalização do sal de adição do ácido sulfónico ou do ácido sulfúrico se verifique uma separação óptica é tanto mais
- 4 surpreendente, quanto é certo que por preparação/recristalização de outros sais, por exemplo do sal de adição do ácido clorídrico, não pode verificar-se qualquer concentração óptica [ W. Frick e outros, Helv. Chim. Acta, 57 (1974) 2758-61 1. Também com outros ácidos fortes, tais como o ácido bromídrico, o ácido iodídrico, o ácido azótico, o ácido fosfórico, o ácido fórmico, o ácido oxálico, o ácido clorodicloro- e tricloroacético não pode obter-se qualquer concentração de uma das formas epímeras do ácido tetra-hidrofólico.
objecto da presente invenção é um processo para a produção de ácidos (6S)- e (6R)-tetra-hidro£ólicos, bem como dos seus sais de adição de ácido sulfónico ou de ácido sulfúrico, que consiste em fazer reagir ácido (6R,S)-tetra-hidrofólico com um ácido sulfónico ou com ácido sulfúrico, cristalizar fraccionadamente o sal de adição de ácido obtido e, se fôr necessário, libertar e isolar, a partir dos sais de adição de ácido diastereómeros obtidos, por tratamento com uma base, os ácidos (6S)- e/ou (6R)-tetra-hidrofólico.
ácido (6R,S)-tetra-hidrofólico utilizado pode estar quer sob a forma de produto isolado, quer, também, de preferência, sob a forma de produto de uma redução de ácido fólico directamente in situ.
Os ácidos sulfónicos apropriados para o processo segundo a presente invenção são ácidos sulfónicos aromáticos com 6 a 14 átomos de carbono, ácidos sulfónicos aralifáticos com 7 a 9 átomos de carbono ou ácidos sulfónicos alifáticos com 1 a 3 átomos de carbono.
Como ácidos sulfónicos aromáticos podem considerar-se principlamente o ácido benzenossulfónico, ácidos toluenossulfónicos, ácidos xilossulfónicos, ácidos nitrobenzenossulfónicos, ácidos clorobenzenossulfónicos, ácidos nitrotoluenossulfónicos, ácidos naftalenossulfónicos, ácidos naftalenossulfónicos substituídos, ácidos naftalenodissulfónicos, ácidos canforossulfónicos, ácidos benzimidazolssulfónicos, ácidos benzamidazolssulfónicos substituídos, tais como ácido 2-£enilbeuzimidazol-5~sulfónico e muitos outros mais.
- 5 Como ácido sulfónico aralifático interessa considerar de preferência o ácido fenilmetanossulfónico e como ácidos sulfónicos alifáticos preferem-se o ácido metanossulfónico e o ácido etanossulfónico.
Os sais de adição preferidos para o processo segundo a presente invenção são os sais de adição dos ácidos benzolsulfónico, toluenossulfónico e sulfúrico.
A cristalização é efectuada num meio polar. É então apropriada sobretudo a água ou uma mistura de água e de ácidos carboxílicos alifáticos inferiores solúveis na água, em especial ácido acético e ácido láctico, ou amidas líquidas solúveis na água, como a formamida, a dimetilformamida, a dimetilacetamida, 1-metilpirrolidona, 2-piperidona. A mistura contém usualmente pelo menos 50% de água. A utilização de uma destas misturas aumenta normalmente a pureza óptica do produto, podendo, no entanto, baixar o rendimento. Conforme o objectivo visado e o composto inicial, em cada caso, pode obter-se o óptimo das condições de reacção por tentativas sistemáticas, sem dificuldade.
Devido à sensibilidade do ácido tetra-hidrofólico à oxidação, recomenda-se a utilização de um meio de protec ção contra a oxidação, tal como 2-mercaptoetanol.
Na cristalização, em regra, em. primeiro lugar precipita-se o sal de adição do ácido (6S)-tetra-hidro£ólico- o composto diastereómero (6R) concentra-se nos filtrados.
A partir dos sais obtidos, pode de novo libertar-se de maneira muito simples, por adição de uma base, o ácido tetra-hidrofólico opticamente mais concentrado.
Como outra possibilidade de purificação, tanto química como óptica, refere-se a recristalização dos sais de adição dos ácidos (6S) ou (6R)-tetra-hidrofólico e/ou a salificação efectuada de novo a seguir à libertação do ácido tetra-hidrofólico, com um ácido sulfónico e/ou ácido sulfúrico.
Por meio deste processo podem obter-se de maneira muito simples e particularmente económica os ácidos (6S)~ e (6R)-tetra-hidrofólicos e os seus sais de bases ou de ácidos fortes.
A presente invenção refere-se igualmente à utilização dos sais (6S)— e (6R)-tetra-hidrofólicos e seus sais de adição de ácidos sulfónicos ou do ácido sulfúrico para a preparação do ácido 5,1 O-metileno-tetra-hidrofólico e seus sais de bases ou de ácidos fortes por tratamento com formaldeído. Deve então ter-se em atenção que a partir do ácido (6S)-tetra-hidro£ólico, por reacção com formaldeído, se obtém o ácido 5,10-metileno-(6R)-tetra-hidrofólico e a partir do ácido (6R)-tetra-hidrofólico analogamente se obtem o ácido 5,1 0-metileno-(6S)-tetra-hidrofólico.
Exemplos para ilustrar a invenção
Para a determinação do teor do ácido tetra-hidrofólico, dos ácidos 5-formil-, 5-metil- e 5,10-metileno-tetra-hidrofólico, utilizou-se o seguinte processo de HPLC (cromatografia líquida de alta pressão).
Meio líquido A: ΝΑ^,ΗΡΟ^ 0,03 M + KHgPO^ 0,03 M em água
Meio líquido B: 1 parte de (NA2HP04 0,03 M + KHgPO^ 0,03 M em água) 3 partes de metanol ajustou-se depois o pH para 7,8 com ácido fosfórico
Gradiente: dentro de 25 minutos, de 2% de meio líquido B a 95% de meio líquido B
Colunas: ODS (Hypersil)
Detecção: UV - 300 nm
Para a determinação da fracção (6S) do ácido
tetra-hidrofólico utilizou-se o seguinte processo HPLC
(cromatografia em fase líquida de alta pressão).
Transformação: dissolver ácido tetra-hidrofólico ou sal de adição em acetonitrilo/água a 1:1 · e fazer reagir com isotiocianato de 2,3,4,6-tetra-o-acetil-p-D-glucopiranosilo
- 7 Meio líquido: 2,5 partes de acetonitrilo
1,5 partes de metanol
6,0 partes de ácido cítrico 0,02 M
Colunas: RP-8 (Lichrospher)
Detecção: UV - 270 nm
Exemplo 1
Dissolveram-se 14,3 g de ácido tolueno-4-sulfónico (150 Mole%), à temperatura de 60°C, sob atmosfera de azoto, em 440 ml de água contendo 0,1% de 2-mercaptoetanol. Durante 5 minutos introduziram-se 25,0 g de ácido (6R,S)-tetra-hidrofólico puro. Arrefeceu-se a suspensão resultante até 40°C. Após 2 a 5 horas, filtrou-se o produto separado, lavou-se com água e depois com etanol.
Obtiveram-se 16.9 g de sal de adição de ácido tolueno-4-sulfónico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico com um teor da fracção (6S) de 86,7%; determinado por meio de HPLC.
Por recristalização do produto obtido, em uma mistura de 110 ml de N, N'-dimetilformamida e 220 ml de água, obtém-se o sal de adição do ácido tolueno-4-sulfónico do ácido (6S )-tetra-hidrofólico com um teor de (6S) de 97,5%, determinado por meio de HPLC.
-60,6° (c = 0,5% em DMF)
Para a libertação do ácido (6S)-tetra-hidrofólico arrefeceram-se 170 ml de água, contendo 0,1% de 2-mercaptoetanol, em atmosfera de azoto, até 10°C. Introduziram-se 5,0g do sal de adição do ácido tolueno-4-sulfónico do ácido (68)-tetra-hidrofólico. A esta suspensão juntam -se, gota a gota, 4 ml de hidróxido de sódio 2N. Depois de arrefecer até 2o C, separou-se por filtração o produto precipitado e lavou-se com água e depois com etanol.
Obtiveram-se 3,7g de ácido (6S)-tetra-hidrofólico com um teor de (6S) de 97,7%, determinado por meio de HPLC.
- 8 [«] 25 = -44,5° (c = 1% em água)
D
Exemplo 2
Dissolveram-se 13g de ácido tolueno-4-sulfónico (135 Mole%), à temperatura de 20° C, sob atmosfera de azoto, em 200 ml de ácido acético e 200 ml de água, contendo 0,2% de 2-mercaptoetanol. Introduziram-se rapidamente 25,0g de ácido (6R,S)-tetra-hidrofólico puro. Inoculou-se a solução com uma pequena quantidade de sal de adição autêntico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico do ácido tolueno-4-sulfónico. Após 5 horas, filtrou-se o produto separado e lavou-se com ácido acético/água e depois com etanol.
Obtiveram-se 12,7g de sal de adição de ácido tolueno-4-sulfónico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico com um teor de (6S) de 93,6%, determinado por meio de HPLC.
Fez-se a suspensão de 10,Og do sal de adição de ácido tolueno-4-sulfónico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico obtido, a 25 °C e sob atmosfera de azoto, em 100 ml de água e ajustou-se com hidróxido de sódio a 30% para um pH > 3,5. Depois ajustou-se o pH da solução obtida, com ácido clorídrico a 37%, para um valor inferior a 1. Após 12 horas, recolheu-se por filtração o produto separado, lavou-se com água e depois com etanol.
Obtiveram-se 8,9g de sal de adição de ácido
tolueno-4-sulfónico do ácido (6 S)-tetra-hidrofólico,
com um teor de 99,7% da fracção (6S ); determinado por
meio de HPLC.
[a] 25 = -62,0° D (c = 0,5% em DMF)
Exemplo 3
Dissolveram-se 14,30g de ácido tolueno-4-
-sulfónico (150 Mole%), à 27° C sob atmosfera de azoto, em 220 ml de L( + )-ácido láctico e 220 ml de água, contendo 0,2% de mercaptoetanol. Adicionaram-se rapidamente 25,0g de ácido (6R,S)-tetra-hidrofólico. Inoculou-se a solução
- 9 resultante com uma pequena quantidade de sal de adição autêntico do ácido (6S)-tetra-hidro£ólico do ácido tolueno-4-sulfónico e arrefeceu-se até 20°C. Após 15 a 20 horas, recolheu-se por filtração o produto separado e lavou-se com ácido láctico/água e depois com etanol.
Obtiveram-se 15,1g de sal de adição de ácido tolueno-4-sulfónico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico, com um teor de 92,5% da fracção (6S); determinada por meio de HPLC.
Exemplo 4
Dissolveram-se 14,3g de ácido tolueno-4-sulfónico (150 Mole%), a 27° C sob atmosfera de azoto, em 110 ml de 1-metil-2-pirrolidona e 110 ml de água, contendo 0,4% de 2-mercaptoetanol. Adicionaram-se rapidamente 25,0g de ácido (6R-S)-tetra-hidrofólico puro. Diluiu-se a solução com 220 ml de água e arrefeceu-se até 20° C. Após 15 a 20 horas, recolheu-se por filtração o produto separado e lavou-se com 1-metil-2-pirrolidona/água e depois com etanol.
Obtiveram-se 13,3g de sal de adição do ácido tolueno-4-sulfónico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico com um teor da fracção (6S) de 94,7%; determinado por meio de HPLC.
Exemplo 5
Dissolveram-se 11 , 5g de ácido tolueno-4-sulfónico (150 Mole%), a 27° C, sob atmosfera de azoto, em 90 ml de Ν,Ν'-dimetilformamida e 90 ml de água, contendo 0,4% de 2-mercaptoetanol. Adicionaram-se rapidamente 20g de ácido (6R-S)-tetra-hidrofólico puro. Dilui-se a solução com 180 ml de água e arrefeceu-se até 20° C. Após 15 a 20 horas, filtrou-se o produto separado, lavou-se com Ν,Ν'-dimetilformamida/água e depois com etanol.
Obtiveram-se 11,3g de sal de adição do ácido tolueno-4-sulfónico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico com um teor da fracção (6S) igual a 91,4%; determinado por HPLC.
Exemplo 6
Dissolveram-se 11, 5g de ácido tolueno-4-sulfónico (150 Mole%) a 27° C, sob atmosfera de azoto, em 100 ml de N,N'-dimetilacetamida e 80 ml de água, contendo 0,4% de 2-mercaptoetanol. Adicionaram-se rapidamente 20g de ácido (6R,S)-tetra-hidro£ólico puro. Diluiu-se a solução com 160 ml de água e arrefeceu-se até 20° C. Após 15 a 20 horas, filtrou-se o produto separado, lavou-se com Ν,Ν'-dimetilacetamida/água e depois com etanol.
Obtiveram-se 11, Og de sal de adição do ácido tolueno-4-sulfónico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico com um teor da fracção (6S) de 91,5%; determinado por HPLC.
Exemplo 7
Dissolveram-se 12g de ácido benzenossulfónico (150 Mole%), à temperatura de 70° C, sob atmosfera de azoto, em 440 ml de água, contendo 0,1% de 2-mercaptoetanol. Durante 5 minutos adicionaram-se 25,Og de ácido (6R,S)-tetra -hidrofólico puro. Arrefeceu-se a suspensão resultante até à temperatura de 60 °C. Após 2 a 5 horas, filtrou-se o produto separado e lavou-se com água e depois com etanol.
Obtiveram-se 13,8g do sal de adição de ácido benzenossulfónico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico com um teor da fracção (6S) de 92,4%, determinado por HPLC.
Suspenderam-se 10,Og do sal de adição do ácido benzenossulfónico do ácido (6S)-tetra-hidro£ólico, a 25°C, sob atmosfera de azoto, em 100 ml de água e ajustou-se para pH > 3,5 com hidróxido de sódio a 30%. Ajustou-se depois 0 pH da solução assim obtida para um valor inferior a 1, com ácido clorídrico a 37%. Após 12 horas, filtrou-se o produto separado, lavou-se com água e depois lavou-se com etanol.
Obtiveram-se 9,0g do sal de adição do ácido benzenossulfónico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico com um teor da fracção (6S) de 99,8%, determinado por HPLC.
[α] 25 = -63,5° (c = 1% em DMF)
D
No caso da substituição das 150 Moles% de ácido benzenossulfónico por 55 Mole% de ácido benzenossulfónico e 50 Mole% de ácido clorídrico, obtiveram-se, nas mesmas condições de cristalização, 12,7g do sal de adição do ácido benzenossulfónico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico, com um teor da fracção (6S) de 91,6%, determinado por HPLC.
Para a libertação do ácido (6R)-tetra-hidrofólico, ajustou-se o pH ao valor 3,5, com hidróxido de sódio. Depois de arrefecer até 5°C, filtrou-se o produto separado, lavou-se com água e depois com etanol.
Dissolveram-se 10g do resíduo assim obtido em 150 ml de água, contendo 0,1% de 2-mercaptoetanol e 39 ml de ácido sulfúrico 2N, à temperatura de 50° C, sob atmosfera de azoto. Depois de arrefecimento lento durante 15 horas até 20°C e em seguida 12 horas de repouso, filtrou-se o produto separado, lavou-se com água e depois com etanol.
Obtiveram-se 9,7g do sal de adição de ácido sulfúrico do ácido (6R)-tetra-hidrofólico, com um teor da fracção (6R) de 97,7%, determinado por HPLC.
Exemplo 8
Misturaram-se 30 ml de ácido sulfúrico 2N, a 60° C, com 130 ml de água, contendo 0,2% de 2-mercaptoetanol, e com 164 ml de ácido acético. Dentro de 5 minutos adicionaram-se 20 g de ácido (6R,S)-tetra-hidrofólico puro. Arrefeceu-se a solução obtida até 50° C. Após 1 hora, filtrou-se o produto separado, lavou-se com água/ácido acético e depois com etanol.
Obtiveram-se 11, Og do sal de adição do ácido sulfúrico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico com um teor da fracção (6S) de 65,5%, determinado por HPLC.
Por recristalização dupla de 10g do sal de adição do ácido sulfúrico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico, em uma mistura de dimetilformamida/água a 1:3, obtiveram
-se 3,9g do sal de adição do ácido sulfúrico do ácido (6S)-tetra-hidro£ólico com um teor da fracção (6S) de 94,3%, determinado por HPLC.
Exemplo 9
Fez-se reagir, de acordo com o processo descrito na literatura, por exemplo em R.L. Blakley e outros, Folates and Pterins, 1_ (1984) 93-104 (6R, S)-ácido-tetra-hidrofólico preparado in situ, directamente, ainda com ácido tolueno-4-sulfónico.
Suspenderam-se 50g de ácido fólico, mais ou menos segundo C. Temple, J.Med. Chem., 22 (1979) 731, a 25° C, sob atmosfera de azoto, em 200 ml de água. Ajustou-se o pH da solução para 12, com cerca de 40g de hidróxido de sódio a 30%. Depois da adição de 25g de boro-hidreto de sódio (630 Mole%) em 110 ml de água, aqueceu-se a mistura reaccional a 7O°-75°C e manteve-se a essa temperatura durante 90 minutos. Na solução de sal de sódio de (6R,S)-tetra-hidrofólico assim obtida, dissolveram-se, depois do arrefecimento a 25°C, 30g de ácido tolueno-4-sulfónico (150 Mole%), em 200 ml de ácido acético, gota a gota. Após 12 horas, filtrou-se o produto separado, lavou-se com ácido acético/água e depois com etanol.
Obtiveram-se 32,9g do sal de adição do ácido tolueno-4-sulfónico do ácido (õS)-tetra-hidrofólico, com um rendimento de 82% e um teor da fracção (6S) de 95,4%, determinado por HPLC.
Suspenderam-se 3,0g do sal de adição do ácido tolueno-4-sulfónico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico assim obtido, a 25 °C, sob atmosfera de azoto, em 30 ml de água e ajustou-se o pH para 11,6, com hidróxido de sódio a 30%. Â solução assim obtida juntaram-se, gota a gota, 0,9g de ácido tolueno-4-sulfónico (120 Mole%), dissolvidos em 36 ml de ácido acético. Com 2,2g de ácido clorídrico a 37% ajustou-se depois o pH da solução para um valor inferior a 1. Após 12 horas, filtrou-se o produto separado, lavou-se com ácido acético/água e depois com etanol.
- 13 Obtiveram-se 1 ,81 g de sal de adição do ácido tolueno—4-sul£ónico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico com um rendimento de 100% e um teor da fracção (6S) de 98,9%, determinado por HPLC.
Exemplo 10
Por substituição do ácido tolueno-4-sulfónico no Exemplo 9 por uma quantidade equivalente de ácido benzenossulfónico foi possível preparar da mesma maneira também o sal de adição do ácido benzenossulfónico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico.
Obtiveram-se 32,2g do sal de adição do ácido benzenossulfónico do ácido (6S)-tetra-hidroPólico com um teor de 80% e um teor da fracção (6S) de 94,2%, determinado por HPLC.
Exemplo 11
Por substituição do ácido tolueno-4-sulfónico no Exemplo 9 por uma quantidade equivalente de ácido sulfúrico foi possível preparar da mesma maneira também o sulfato de ácido (6S)-tetra-hidrofólico.
Obtiveram-se 27,1g de sulfato do ácido (6S)— -tetra-hidrofólico, com um teor de 85% e um teor da fracção (6S) de 69,2%, determinado por HPLC.
Exemplos 12 a 1 8
Do mesmo modo que nos Exemplos 1 a 8 descritos antes foi possível preparar:
12. Sal de adição do ácido metanossulfónico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico.
13. Sal de adição do ácido etanossulfónico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico.
14. Sal de adição do ácido fenilmetanossulfónico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico.
15. Sal de adição do ácido canfor-10-sulfónico do
ácido (6S)-tetra-hidrofólico.
16. Sal de adição do ácido naftaleno-1-sulfónico
do ácido (6S)- -tetra-hidrofólico.
17. Sal de adição do ácido naftaleno-2-sulfónico
do ácido (6S)- -tetra-hidrofólico.
18. Sal de adição do ácido naftaleno-1,5-dissulfónico
do ácido (6S)- -tetra-hidrofólico.
Exemplo 19
Dissolveram-se 50g do sal de adição do ácido sulfúrico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico, a 20° C, sob atmosfera de azoto, em 500 ml de água e 200 ml de hidróxido de sódio . 2N. Depois da adição de 7,5 ml de formaldeído a 36% (125 Mole%) misturou-se na solução uma mistura de 275 ml de ácido acético glacial e 275 ml de ácidosulfúrico 2N. Depois de arrefecer até 2o C, filtrou-se o produto separado e lavou-se com etanol.
Obtiveram-se 39,6g de ácido 5,10-metileno-(6R)-tetra-hidrofólico com um teor de 98,6% e uma fracção (6R) de 99,6%, determinado por HPLC.
Exemplo 20
Dissolveram-se 28g do sal de adição do ácido benzenossulfónico do ácido (6S)-tetra-hidrofólico obtido de acordo com o Exemplo 10, a cerca de 25°C, sob atmosfera de azoto, em 130 ml de água com hidróxido de sódio a 30%. Depois da adição de 44 ml de ácido fórmico a 36%, dividiu-se a solução e misturou-se uma das metades com 3g de NaBH^ . Após 12 horas, acidificou-se por adição de 10 ml de ácido clorídrico. Filtrou-se o produto separado e lavou-se com água e com etanol.
Obtiveram-se 11 g de ácido 5-metil-(6S)-tetra-hidrofólico com um teor de 95,8% e um teor da fracção (6S) de 99,5%, determinado por HPLC.
- 15 Misturou-se a outra metade da solução com cloreto de cálcio em excesso, £iltrou-se o produto separado e lavou-se com água e com etanol.
Obtiveram-se 14,5g do sal de cálcio do ácido 5-formil-(6S)-tetra-hidrofólico com um teor de 96,2% e um teor da fracção (6S) de 99,7%, determinado por HPLC.

Claims (4)

  1. REIVINDICAÇÕES
    12. - Processo para a preparação de ácidos (6S)e (6R)-tetra-hidrofólico e dos seus sais de adição de ácidos sulfónicos ou de ácido sulfúrico, caracterizado pelo facto de se fazer reagir o ácido (6R,S)-tetra-hidrofólico com um ácido sulfónico ou com ácido sulfúrico, se fazer a cristalização fraccionada do sal de adição de ácido obtido e, caso seja desejado, libertar e isolar, a partir dos sais de adição de ácido diastereómeros obtidos, por tratarrtento com uma base, o ácido (6S)-tetra-hidrofólico e/ou o ácido (6R)-tetra-hidrofólico.
    22. - Processo de acordo com a reivindicação 1 , caracterizado pelo facto de a cristalização ser realizada em um meio polar, de preferência em água ou em uma mistura de água e de um ácido carboxílico inferior, alifático, solúvel na água, em especial com ácido acético, ácido láctico ou uma mistura de água e de uma amida líquida solúvel em água, em especial metilpirrolidona, formamida, dimetilformamida ou dimetilacetamida.
  2. 39. - Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 e 2, caracterizado pelo facto de se utilizar como ácido sulfónico um ácido sulfónico aromático com 6 a 14 átomos de carbono, um ácido sulfónico aralifático com 7 a 9 átomos de carbono ou um ácido sulfónico alifático com 1 a 3 átomos de carbono.
  3. 4°. - Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 1, 2 e 3, caracterizado pelo facto de se utilizar como sal de adição o sal de adição do ácido benzenossulfónico, do ácido tolueno-4-sulfónico ou do ácido sulfúrico.
  4. 59. - Benzenossulfonato do ácido (6S)-tetra-hidrofólico
    - 17 e benzenossulfonato do ácido (6R)-tetra-hidrofólico.
    65. - Tolueno-4-sulfonato do ácido (6S)-tetra-hidrofólico e tolueno-4-sulfonato do ácido (6R)-tetra-hidrofólico.
    75. - Sulfato do ácido (6S)-tetra-hidrofólico e sulfato do ácido (ôR)-tetra-hidrofólico.
    82. - Sais de adição do ácido (6S)-tetra-hidro£ólico e dos ácidos metanossulfónico, etanossulfónico, fenilmetanossulfónico, canfcr-1 O-sulfónico, naftaleno-1-sulfónico, naftaleno-2-sulfónico, naftaleno-1,5-dissulfónico.
    92. - Utilização dos ácidos (6S)- ou (6R)-tetra-hidrofólico ou dos seus sais de adição e de um ácido sulfónico ou de ácido sulfúrico preparados de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 , 2, 3 ou 4, como compostos iniciais para a preparação dos ácidos opticamente puros, ácido 5,1O-metileno-tetra-hidrofólico, ácido 5-metil-tetra-hidrofólico ou ácido 5-formil-tetra-hidrofólico ou dos seus sais de bases ou ácidos fortes.
    102. - Utilização dos sais dos ácidos (6S) — ou (6R)-tetra-hidrofólico e do ácido sulfúrico ou de um ácido sulfónico como componente de um medicamento ou como compostos iniciais para a preparação de um medicamento.
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