PL87746B1 - - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wyodreb¬ niania cefalosporyny C z roztworów wodnych na drodze wytwarzania soli chinolinowych N-acyloce- falosporyny C.

Opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 3160631 dotyczy wyodrebniania sodowej pochod¬ nej cefalosporyny C, rozpuszczonej w wodzie za pomoca kwasnego weglanu sodu i acetonu o tem¬ peraturze 0°C, a nastepnie traktowania otrzyma¬ nej mieszaniny roztworem chlorku benzoilu w ace¬ tonie. Otrzymana mieszanine reakcyjna ekstrahuje sie chloroformem, zakwasza i N-acylowana cefa- losporyne C ekstrahuje sie ketonem izobutylome- tylowym. Dwualkilowe estry N-acylocefalospory- ny C wyodrebnia sie za pomoca duzej ilosci roz¬ puszczalników organicznych.

Opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 3234223 opisuje uzycie grupy ochronnej 2,4-dwu- nitrofenyloaminowej w stosunku do cefalospory¬ ny C w czasie jej rozszczepienia majacego na ce¬ lu otrzymanie kwasu 7-aminocefalosporanowego lecz opis ten nie podaje sposobu otrzymywania zwiazku wyjsciowego 2,4-dwunitrofenylocefalospo- ryny C.

Opis patentowy Stanów Zjednoczonych Amery¬ ki nr 3467654 opisuje zastosowanie acetonu w ce¬ lu oddzielenia zanieczyszczen od cefalosporyny C, nastepnie adsorpcje cefalosporyny C z oczyszczo¬ nego przesaczu na anionowym wymieniaczu jono- wym i wymywanie cefalosporyny C z zywicy za pomoca buforu kwasowego.

W znanych sposobach wyodrebniania cefalospo¬ ryny C lub jej pochodnych z brzeczki fermenta¬ cyjnej stosowano rozpuszczalniki organiczne. Pod¬ czas przeprowadzania znanych sposobów powstaje emulsja powodujaca trudnosci w odzyskaniu roz¬ puszczalnika. W niektórych przypadkach stosowa¬ no mieszaniny rozpuszczalników organicznych, ta¬ kie jak octan etylu i etanol lub izopropanol. Jako dobry rozpuszczalnik do ekstrakcji N-acylocefa- losporyny C stosowano cykloheksanon. Jednakze zastosowanie na wieksza skale cykloheksanonu powoduje równiez powstanie emulsji.

Obecnie stwierdzono, ze etapy ekstrakcji roz¬ puszczalnikiem organicznym moga byc pominiete.

Mozna wiec uniknac trudnosci zwiazanych z wy¬ twarzaniem sie emulsji i odzyskiwaniem rozpusz¬ czalnika, wiaze sie to równiez z uproszczeniem procesu i tym samym wymaga mniej kosztownej aparatury do jego przeprowadzania.

Sposób wyodrebniania zwiazków cefalosporyny C z roztworów wodnych wedlug wynalazku pole¬ ga na tym, ze roztwór wodny zawierajacy cefa- losporyne C miesza sie z bezwodnikiem chloro- octowopropionowym lub z bezwodnikiem propio- nowym, po czym mieszanine reakcyjna poddaje sie reakcji w temperaturze 0—30°C przy wartosci pH okolo 7—11, przy czym wytwarza sie Nracylo- cefalosporyna C, nastepnie do otrzymanej mie- 87 74687 3 szaniny dodaje sie chinoline w nadmiarze molo¬ wym w stosunku do N-acylocefalosporyny, po czym odczyn mieszaniny reakcyjnej doprowadza sie do wartosci pH 2,0—3,4 za pomoca srodka za¬ kwaszajacego, a nastepnie utrzymuje sie miesza- 5 nine reakcyjna w temperaturze 0—30°C i wydzie¬ la sól chinolinowa N-acylocefalosporyny C w po¬ staci krysztalów.

Cefalosporyna C, otrzymana w procesie fermen¬ tacji ma budowe strukturalna okreslona wzorem 1, 10 w którym R oznacza grupe HOOC^CH(NH2)— —(CH2)3—. Jest ona równiez znana pod nazwa kwas 7 - (5'-aminoadipoiloamido) - cefalosporanowy.

Posiada on sFal6a'-3ynnosc antybiotyczna, lecz jest waznym zródlem rodnika kwasu 7-aminocefalospo- 15 ranowego (7-ACA),\o wzorze 2, przedstawionego w postaci jpnj|, oboj^naczego, z którego moga byc wytworzone i stosowane sole aminowe i kationo¬ we. Antybiotyki, takie jak cefalotyna i cefalory- dyna sa otrzymywane z 7-ACA znanymi sposoba- 20 mi. Rózne pochodne antybiotyków 7-ACA otrzy¬ muje sie za pomoca acylowania grupy 7-amino- wej 7-ACA odpowiednimi kwasami acylowymi, chlorkami acylowymi lub innymi odpowiednimi postaciami reaktywnymi tych grup acylowych i/lub przez zastapienie grupy acetoksylowej zwia¬ zanej z 3-metylowym atomem wegla odpowiedni¬ mi grupami nukleofilowymi, co jest opisane w li¬ teraturze naukowej. Z powyzszego wynika, ze ce¬ falosporyna C, pochodzaca z fermentacji jest bar¬ dzo cennym produktem, który jest szczególnie waz¬ ny jako material wyjsciowy do wytwarzania wie¬ lu bardziej czynnych antybiotyków.

Wynalazek dotyczy sposobu wyodrebniania ce- falosporyny C z wodnego roztworu brzeczki fer¬ mentacyjnej, jak równiez z czesciowo oczyszczo¬ nych brzeczek fermentacyjnych i „eluatów zy¬ wicznych" zawierajacych cefalosporyne C przed reakcja wydzielenia grupy 7-aminoadipoilowej.

Wyrazenie „cenne cefalosporyny C" jest uzywa¬ ne w niniejszym opisie na oznaczenie cefalospo¬ ryny C i zwiazków podobnych do cefalosporyny C jak dezacetylocefalosporyna C, które sa wytwarza¬ ne w procesie fermentacji.

Jakosc produktów otrzymanych tym sposobem 45 porównana z produktami otrzymanymi wedlug poprzednich sposobów (N-acylowana cefalospory¬ na C) jak i wydajnosci produktu sa lepsze w tym procesie w stosunku do wydajnosci otrzymanych w procesach ekstrakcji rozpuszczalnikami orga- 50 nicznymi.

Wodny roztwór cefalosporyny C moze stanowic brzeczke fermentacyjna, do której dodaje sie je¬ den lub wiele pomocniczych srodków do przesa¬ czania aby po tych zabiegach i przesaczeniu 55 otrzymac przesaczona brzeczke fermentacyjna. Ta brzeczka jest nazywana w niniejszym opisie brzeczka „nietraktowana".

Roztwór wodny cefalosporyny C moze byc rów¬ niez zatezonym, zawierajacym metanol roztworem 60 brzeczki fermentacyjnej zawierajacym cefalospo¬ ryne C. Taki roztwór wodny nazywany jest w ni¬ niejszym opisie brzeczka „czesciowo traktowana".

Roztwór wodny cefalosporyny C moze pochodzic równiez z roztworu cefalosporyny C, który byl 65 746 4 traktowany co najmniej jedna zywica wymie¬ niajaca jony (wymieniaczy jonowych) w celu dal-( szego oczyszczenia roztworu cefalosporyny C. Ten ostatni roztwór wodny jest nazywany w opisie „eluatem zywicznym" cefalosporyny C. Pocho¬ dzenie i czystosc roztworu wodnego zawieraja¬ cego cefalosporyne C ma pewien wplyw na ilosc bezwodnika stosowanego do acylowania cefalospo¬ ryny C w roztworze. Gdy acylowanie prowadzone jest w brzeczce „nietraktowanej", stosuje sie 8—9 moli bezwodnika na 1 mol cefalosporyny C. Przy brzeczce „czesciowo traktowanej" stosuje sie 4—6 moli bezwodnika na 1 mol cefalosporyny C. Dla „eluatów zywicznych" cefalosporyny C stwierdzo¬ no, ze najlepsze rezultaty acylowania osiaga sie przy uzyciu 1,5—3,0 moli bezwodnika na 1 mol cefalosporyny C.

Pierwszy etap procesu, to znaczy etap acylo¬ wania, jest przeprowadzany przy wartosci pH oko¬ lo 7—11, najkorzystniej przy wartosci pH 8,5—9,5.

Wartosc pH powinna byc utrzymana poprzez dok¬ ladne sledzenie przebiegu reakcji i dodawanie za¬ sady, gdy wartosc pH roztworu obniza sie ze wzgledu na tworzenie sie kwasu w reakcji acylo¬ wania. Jako alternatywne rozwiazanie wartosc pH moze byc utrzymana przez zastosowanie odpowied¬ nich buforów, na przyklad boranu sodowego lub kwasu borowego z dodatkiem wodorotlenku sodu.

Innymi czynnikami buforujacymi, które moga byó stosowane, sa mieszaniny weglan/dwuweglan, zlo¬ zone z ich soli sodowych lub potasowych lub tez bufory fosforanowe.

Acylowanie moze byc przeprowadzone w kaz¬ dej temperaturze od temperatury krzepniecia da temperatury okolo 30°C. Korzystnie utrzymuje sie podczas acylowania temperature 10—20°C, a najkorzystniej, okolo 15—20°C. Te temperature utrzymuje sie za pomoca chlodzenia. Gdy etap acylowania jest zakonczony, mieszanine reakcyj¬ na traktuje sie chinolina, izochinolina lub równo¬ rzedna zasada w molowym nadmiarze w stosunku do cefalosporyny C zawartej w roztworze wod¬ nym. Ogólnie biorac, od 1,5 do okolo 12 moli chi¬ noliny moze byc uzyte na mol N-acylocefalospo¬ ryny C. Jest korzystne uzycie co najmniej 2 molf chinoliny na mol cefalosporyny C chociaz wieksze ilosci chinoliny moga byc takze stosowane. Sto¬ sunek molowy od 2—4 moli chinoliny na mol ce¬ falosporyny C jest wystarczajacy dla osiagniecia calkowitego przereagowania N-acylowanej cefalo¬ sporyny C. Gdy dodawanie chinoliny do wodnej mieszaniny reakcyjnej cefalosporyny C zostalo zakonczone, kwasowosc mieszaniny doprowadza sie do wartosci pH 2,0—3,5 za pomoca srodka zakwa¬ szajacego, którym moze byc kazdy odpowiedni kwas, np. kwas siarkowy lub chlorowcowodorowy.

Korzystnie ze wzgledów ekonomicznych stosuje- sie kwas siarkowy. W tych warunkach pozostawia sie mieszanine, korzystnie przy zastosowaniu mie¬ szania, w temperaturze 0—30°C, zwykle w tempe¬ raturze 10—20°C w ciagu okolo 1 godziny, zwykle okolo 20 minut i w tym czasie zachodzi krysta¬ lizacja. Gdy krystalizacja jest zakonczona, sól chinolinowa N-acylocefalosporyny C wydziela sie z wodnej mieszaniny reakcyjnej znanym sposo-87 746 bem, takim jak odwirowywanie lub odsaczanie, przemywanie woda, a nastepnie rozpuszczalnikiem organicznym takim jak octan etylu i suszenie od¬ powiednimi metodami jak w zlozu fluidalnym przez okolo 2 godziny w temperaturze 60°C, do zawartosci okolo 3% wody (wedlug pomiaru me¬ toda Karola Fischera).

Na poczatku procesu korzystnie stosuje sie lug wodny cefalosporyny C o mocy 30000 do 50000 mikrogramów/ml (oznaczonej metoda próby amidu nikotynowego) (30 do 50 mg/ml) lub tez 40000 do 60000 mikrogramów/ml (metoda próby ultrafioleto¬ wej-UV) 40 do 60 mg/ml. Wyzsza moc w poczat¬ kowych lugach wodnych, daje breje krystaliczna soli chinolinowej N-acylocefalosporyny C zbyt gesta, by mogla byc obrabiana we wlasciwy spo¬ sób. Nizsza moc lugu moze prowadzic do wolniej¬ szej krystalizacji, a takze pojawienia sie siarczanu sodu w produkcie, gdy rozcienczenie mieszaniny buforowym eluatem zywicznym jest przyczyna niskiej mocy. Wlasciwe stezenie lub rozcienczenie roztworu moze byc osiagniete przed lub po acy- lowaniu. Najkorzystniejszy lug wodny cefalospory¬ ny C posiada aktywnosc od 40000—50000 mikro- gramów/mg (okreslona metoda amidu nikotyno¬ wego lub 50000—55000 mikrogramów/mg cefalospo¬ ryny C okreslona metoda próby ultrafioletowej).

Najlepsza zasada, stosowana podczas acylowania dla regulowania wartosci pH, jest wodorotlenek sodu buforowany boraksem. Stosuje sie 4,5 mola wodorotlenku sodu na 3 mole czteroboranu sodo¬ wego. Stezenia wodorotlenku sodu do 6-molarnych (25%) sa zadawalajace, stezenie boraksu 1-molarne jest zwykle wystarczajace. Wartosc pH podczas acylowania wynoszaca okolo 9 jest bliska optimum.

Wartosc pH 7,5 lub 10,5 daja nizsze wydajnosci.

Temperatura reakcji acylowania, która nie prze¬ kracza 20°C jest najwlasciwsza. Temperatura po¬ wyzej 25°C i ponizej 15°C sa mniej korzystne.

Reakcja acylowania jest w zasadzie zakonczona w czasie 2 do 2,5 minuty. Chociaz stosowany jest przecietny czas reakcji 10—15 minut by zapew¬ nic calkowite zakonczenie reakcji.

W niektórych przypadkach moze byc pozadane przechowanie mieszaniny reakcyjnej N-acylowa- nej cefalosporyny C ze wzgledu na kolejnosc kry¬ stalizacji i inne problemy produkcyjne. W takim przypadku ze wzgledu na maksimum stabilnosci, wartosc pH mieszaniny ustawia sie na 5,0—5,5 za pomoca 30% kwasu siarkowego i chlodzi w czasie przechowywania do 10—15°C.

Sól chinolinowa N-acylowanej cefalosporyny C powstaje z dobra wydajnoscia przy uzyciu 2 do 6 moli chinoliny na mol cefalosporyny C, oznaczo¬ nej metoda ultrafioletowa. Obecnosc 2,5 mola chi¬ noliny na mol cefalosporyny C powinna zapewnic obecnosc co najmniej 2 moli na wypadek róznic w maksimum zawartosci cefalosporyny C.

Korzystnie otrzymana sól chinolinowa N-acylo¬ wanej cefalosporyny C przemywa sie woda w ce¬ lu usuniecia zanieczyszczen, glównie rozpuszczal¬ nych w wodzie, takich jak borany, siarczany, pro¬ dukty hydrolizy bezwodnika, nadmiaru chinoliny i innych rozpuszczalnych zanieczyszczen. Po prze¬ myciu woda, krystaliczna sól korzystnie przemywa 40 45 50 55 60 65 sie octanem etylu w celu usuniecia zanieczyszczen rozpuszczalnych w rozpuszczalnikach organicznych i aby czesciowo usunac wode z placka filtracyjne¬ go. Daje to dodatkowo latwiejsze wysuszenie plac¬ ka. Rozpuszczalniki mieszajace sie z woda (alko¬ hole, aceton, acetonitryl) nie nadaja sie do prze¬ mywania poniewaz ich wodne roztwory czesciowo rozpuszczaja produkt i powoduja zmniejszenie wy¬ dajnosci i trudnosci w operowaniu odfiltrowanym plackiem. Placek soli chinolinowej N-acylocefalo¬ sporyny C moze byc suszony ogólnie znanymi me¬ todami. Korzystnie suszenie produktu przeprowa¬ dza sie w zlozu fluidalnym przez 1,5 do 3 godzin w temperaturze okolo 60°C do zawartosci wody 3,5% lub mniej, oznaczonej metoda Karola Fische¬ ra.

Nastepujacy przyklad porównawczy ilustruje typowy przebieg procesu w którym na poszczegól¬ nych etapach stosowano rozpuszczalniki organiczne.

Przyklad porównawczy. Porcje 500 ml „zywicz¬ nego eluatu" wodnego cefalosporyny C (zawiera¬ jaca 45,27 mg cefalosporyny C/ml) zadaje sie 8,2 g kwasu borowego. Temperatura mieszaniny obniza sie do 10°C za pomoca chlodzenia woda z lodem, a wartosc pH roztworu ustawia sie na okolo 9,0 za pomoca 25% wodorotlenku sodu (44 ml). Do tej mieszaniny dodaje sie 55 ml roztworu bezwod¬ nika chloro-octowo-propionowego w octanie etylu (2 równowazniki bezwodnika w stosunku do cefa¬ losporyny C). Wartosc pH mieszaniny w czasie acylowania utrzymywano miedzy 9,0 a 9,5. Po za¬ konczeniu acylowania mieszanina jest ekstrahowa¬ na mieszanina 500 ml octanu etylu i 68 ml ety- nolu. Wartosc pH mieszaniny ekstrahowanej usta¬ wiono na 1,5 za pomoca 30% kwasu siarkowego (80 ml). Powstaje niewielka emulsja. Te emulsje rozdzielono na warstwe wodna i warstwe rozpusz¬ czalnika organicznego otrzymujac 575 ml warstwy rozpuszczalnika organicznego. Warstwa rozpusz¬ czalnika organicznego zawierala 35,7 mg N-acylo¬ wanej cefalosporyny C na milimetr wedlug ozna¬ czenia metoda ultrafioletowa. Do tego ekstraktu organicznego dodaje sie 34,5 ml chinoliny, miesza sie calosc przez 20 minut, chlodzi i przesacza. Sól chinolinowa N-acylowanej cefalosporyny C prze¬ mywa sie octanem etylu i suszy pod zmniejszo¬ nym cisnieniem w temperaturze 40°C przez cala noc. Wydajnosc soli chinolinowej N-acylowanej cefalosporyny C wynosi 28,7 g. Posiada ona czys¬ tosc 89% zgodnie z wynikiem analizy metoda ultrafioletowa. W stosunku do „eluatu zywicznego" wydajnosc wynosila 73,4%.

Mieszanine acylujaca przygotowano za pomoca reakcji propionianu sodu z chlorkiem kwasu chlo¬ rooctowego w octanie etylu. Mieszanine zawiera¬ jaca powstaly bezwodnik stosowano jako srodek acylujacy.

Nastepujace przyklady ilustruja sposób wedlug wynalazku.

Przyklad I. Przez dodanie 42 ml roztworu bezwodnika chlorooctowopropionowego przygoto¬ wanego w reakcji propionianu sodu i chlorku kwa¬ su chlorooctowego w octanie etylu (2 równowaz¬ niki bezwodnika na jeden cefalosporyny C) 500 ml wodnego „eluatu zywicznego,, cefalosporyny C, za-87 746 8 wierajacego 33,0 mg cefalosporyny C na milimetr poddaje sie acylowaniu. Temperature mieszaniny ustala sie na okolo 20°C podczas gdy pH miesza¬ niny utrzymywane jest przy wartosci 9,0 przez dodanie buforu z boranu sodu (60 ml). Gdy acy- Jowanie jest zakonczone, dodaje sie 26,2 ml chi¬ noliny, a wartosc pH obniza sie do 3,3 przez do- danig Gl ml 30% kwasu siarkowego. Mieszanine jnissza sie przez 2 godziny aby zapewnic dokon¬ czenie reakcji, a nastepnie chlodzi do temperatury okolo 159C i saczy. Krystaliczny produkt soli chi¬ nolinowej N^acyiowanej cefalosporyny C przemy¬ wa sie woda i suszy przez noc w temperaturze 409C pod zmniejszonym cisnieniem. Wydajnosc produktu wynosi 22,5 g. Jego czystosc 97,l°/«.

Oznacza to 86% wydajnosci z „eluatu zywicowego".

Przyklad II, Ten przyklad ilustruje sposób krystalizacji z wody jako korzystna metode otrzy¬ mywania soli chinolinowej N-acylowanej cefalo¬ sporyny C, z „brzeczki przesaczonej". Porcje przesa¬ czu, otrzymana z pelnej brzeczki fermentacyjnej cefalosporyny C traktuje sie najpierw 13 gramami osiemnastowodzianu siarczanu glinu i 10 ml 6,6*70 polietylenoiminy na litr brzeczki, zawierajacej ,8 g cefalosporyny C, a nastepnie 2 jednostka¬ mi objetosciowymi metanolu na kazda jednostke objetosci przesaczu. Osad odsacza sie i odrzuca.

Przesacz zateza sie do objetosci 530 ml. Zatezony przesacz chlodzi sie do temperatury 10°C i acy- luje 105 ml roztworu bezwodnika chlorooctowo- propionowego (zaklada sie uzycie 5 równowazni¬ ków bezwodnika na równowaznik cefalosporyny C). Wartosc pH mieszaniny utrzymuje sie przy 9,0 za pomoca 145 ml buforu boranowego. Po za¬ konczeniu acylowania dodaje sie 39 ml chinoliny.

Wartosc pH ustala sie na 2,9 za pomoca 105 ml % kwasu siarkowego. Zakwaszona mieszanine miesza sie przez 30 minut w czasie, w którym za¬ chodzi krystalizacja soli chinolinowej N-acyloce¬ falosporyny C. Mieszanine chlodzi sie do tempe¬ ratury okolo 15°C, saczy i przemywa osad woda.

Po wysuszeniu przez noc w temperaturze 40°C pod zmniejszonym cisnieniem otrzymuje sie 32,5 g produktu soli chinolinowej N-acylocefalosporyny C.

Czystosc oznaczona za pomoca analizy ultrafiole¬ towej wynosila 95,4%, co daje wydajnosc z brzeczki przesaczonej 81,5%.

Przyklad III. Do roztworu 21,0 g kwasu bo¬ rowego w 200 ml roztworu soli sodowej cefalospo¬ ryny C zmieszanej z octanem sodu, a zawieraja¬ cym 40,4 mg/ml cefalosporyny C, okreslanego ja¬ ko „eluat zywicowy", który to roztwór zostal zbu- forowany boranem sodu, dodano w ciagu 10 minut roztwór 50,6 g bezwodnika propionowego w 150 ml octanu etylu w celu zablokowania azotu amino¬ wego. Temperature 15—20°C utrzymywano za po¬ moca lazni wodnej, a wartosc pH 8,5—9,0 za po¬ moca 25% roztworu wodorotlenku sodu. Gdy war¬ tosc pH ustalila sie (co nastapilo mniej wiecej 3 minuty po zakonczeniu dodawania bezwodnika), obnizono ja do wartosci 2,5 za pomoca 30% wa¬ gowych kwasu siarkowego, a nastepnie dodano 75 g srodka ulatwiajacego saczenie. Mieszanine przesaczono, a do przesaczu dodano 91,5 ml chi¬ noliny. Wartosc pH ponownie zwiekszono do 3,5 za pomoca kwasu siarkowego i mieszanine mie- szano 30 minut w temperaturze pokojowej. Mie¬ szanine przechowano przez noc w chlodni (5°C).

Sól chinolinowa N-propionylocefalosporyny C, któ¬ ra powstala, zostala odsaczona, przemyta woda i wysuszona w temperaturze 40°C pod zmniejszo- l0 nym cisnieniem. Produkt wazyl 81,2 g (czystosc 07,6%) co oznaczalo wydajnosc 84,6% z „eluatu zywicznego". 40

Claims (9)

Zastrzezenia patentowe

1. Sposób wyodrebniania cefalosporyny C.z roz¬ tworów wodnych, znamienny tym, ze roztwór wodny zawierajacy cefalosporyne C miesza sie z bezwodnikiem chlorooctowopropionowym lub z bkz- 20 wodnikiem propionowym, po czym otrzymana mieszanine reakcyjna poddaje sie reakcji w tem¬ peraturze 0—30°C przy wartosci pH okolo 7—11, przy czym wytwarza sie N-acylocefalosporyna C, nastepnie do otrzymanej mieszaniny dodaje sie 25 chinoline w nadmiarze molowym w stosunku do N-acylocefalosporyny, po czym odczyn mieszaniny reakcyjnej doprowadza sie do wartosci pH 2,0—3,4 za pomoca srodka zakwaszajacego, a nastepnie mieszanine reakcyjna utrzymuje sie w tempera- 30 turze 0—30°C i wydziela sól chinolinowa N-acylo¬ cefalosporyny C w postaci krysztalów.

2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze stosuje sie stezenie cefalosporyny C w roztworze wodnym wynoszacym okolo 30—50 mg/ml miesza- 35 niny wodnej.

3. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze reakcje prowadzi sie w temperaturze okolo 10—20°C.

4. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze stosuje sie roztwór wodny cefalosporyny C, uprzed¬ nio potraktowany co najmniej jednym wymienia¬ czem jonowym dla czesciowego oczyszczenia roz¬ tworu wodnego cefalosporyny C.

5. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako roztwór wodny cefalosporyny C stosuje sie czesciowo zatezona, traktowana metanolem, brzecz¬ ka fermentacyjna cefalosporyny C.

6. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako roztwór wodny cefalosporyny C stosuje sie nietraktowana brzeczke fermentacyjna cefalospo¬ ryny C.

7. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze w celu wytworzenia N-acylocefalosporyny C reakcje prowadzi sie przy wartosci pH okolo 8,5—9,5.

8. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze chinoline stosuje sie w ilosci okolo 2—4 równo¬ wazników na kazdy równowaznik N-acylocefalo¬ sporyny C.

9. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze bezwodnik stosuje sie w ilosci okolo 1,5—3 rów¬ nowazników na kazdy równowaznik cefalospory¬ ny C.8T 746 R-C0-NH-CH-Ch^CH2 0 C —Nv#d-CH2-OCCH, O i COOH Wzori H?N-CH-C^ ^CH2 0 0 V _ C00 Wzór Z