PL51398B1 - - Google Patents

Description

Tylkoten ostatni sposób jest na tyle uproszczony, ze moze sie nadawac do sto¬ sowania w przemysle. Sposób ten polega na kom¬ binacji stracania leucynoaminopeptydazy siarcza¬ nem amonowym i ciaglej elektroforezie. Sposób ten jest jednak niedogodny w zwiazku ze stosowa - 513983 51 398 4 niem ciaglej elektroforezy, która polaczona jest z kosztowna aparatura i pozwala otrzymywac tylko stosunkowo male ilosci oczyszczonej leucynoami- nopeptydazy o aktywnosci Cx = 50 — 70.Zadaniem wynalazku bylo opracowanie metody przemyslowej otrzymywania dobrze oczyszczonej, krystalicznej leucynoaminopeptydazy o aktywnosci Cu co najmniej 150 w sposób jak najbardziej eko¬ nomiczny.Stwierdzono, ze mozna otrzymac krystaliczna leucynoaminopeptydaze o aktywnosci Cx przynaj¬ mniej 150, jezeli produkt homogenizacji soczewek ocznych wolów z roztworem NaCl oczyszczony wstepnie w znany sposób od obcej proteiny przez dodanie siarczynu cynku i ewentualnie chlorku manganu przy wartosci pH = 7,2 — 7,4 ogrzewa sie w temperaturze 48° — 54°C w ciagu 5 — 30 minut, korzystnie 10 —15 minut, usuwa wydzielony osad a z roztworu wytraca w znany sposób enzym przez dodanie stalego siarczanu amonowego lub przez doprowadzenie pH cp wartosci 4,9 odpowiadajacej punktowi izoelektrycznemu.Sposobem wedlug wynalazku w porównaniu z dotychczas znanjoni sposobami otrzymuje sie w ciagu krótkiego czasu krystaliczny ferment o opty¬ malnym stopniu czystosci i znacznie szerszych mozliwosciach stosowania.W nastepujacym przykladzie wyjasniono blizej sposób wedlug wynalazku.Przyklad. 12 g wolowych soczewek ocznych z mozliwie mlodych zwierzat (do okolo 2-letnich) homogenizuje sie ze 100 ml 0,9°/o-owego roztworu NaCL Do surowego homogenizatu wkrapla sie ostroznie na zmiane 1 molowy roztwpr MnCl2 i 1 molowy roztwór ZnS04 dopóki nie osiagnie sie stezenia 0,005 m MnCl2, wzglednie 0,006 m ZnS04.Jednoczesnie utrzymuje sie wartosc pH = 7,2 — 7,4 przez dodanie 1 mola roztworu NaOH. Powstajacy osad odwirowuje sie i odrzuca. Pozostalosc utrzy- 5 mu je sie przez 12 minut na lazni wodnej w tempe¬ raturze 54°C i wystepujacy przy tym osad usuwa sie przez odsaczenie. Przesacz stanowi juz preparat leucynoaminopeptydazy o wysokiej czystosci. Po dodaniu 0,35 g stalego siarczanu amonowego na 1 ml przesaczu rozpoczyna sie krystalizacja enzy¬ mu, która po 1 do 2 dniach w temperaturze 4°C jest zakonczona. Oddzielone krysztaly przemywa sie woda destylowana w celu doprowadzenia pH do wartosci = 5,0 — 5,5. Przez zmiane wartosci pH na 8 krysztaly przechodza do roztworu. Na ogól ze 100 g soczewek ocznych wolów otrzymuje sie 20 — 35 mg krystalicznego enzymu o ; aktywnosci Ci = 130 — 180. PL

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe Sposób otrzymywania czystej, krystalicznej leu¬ cynoaminopeptydazy z soczewek ocznych wolów, znamienny tym, ze produkt homogenizacji suro¬ wych soczewek ocznych wolów z roztworem chlor¬ ku sodowego, oczysaczony wstepnie w znany .spo¬ sób, przez wytracenie substancji balastowych przy pH = 7,2 — 7,4 za pomoca siarczanu cynku i ewen¬ tualnie chlorku manganu ogrzewa, sie w tempera¬ turze 54°C w ciagu 10—15 minut po czym wytra¬ cony osad oddziela sie a z przesaczu, wytraca w znany sposób leucynoaminopeptydaze przez do¬ danie stalego siarczanu amonowego lub przez do¬ prowadzenie pH roztworu do wartosci 4,9, odpo¬ wiadajacej punktowi izoelektrycznemu. 15 20 25 30 Bltk 594/66 r. 250 egz. A4. PL