PL46586B1 - - Google Patents

Description

Wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania an¬ tybiotyku zawierajacego l,4Hdwiu(p-hyidroksyfe- nylo)-'2^^d(wai^izariitrylo- tyik ten sklada sde ze skladowych X, Y, Z, przy czym X stawowi glówna czesc zawarta w mie¬ szaninie w ilosci £itW7i0i%. Ta glówna, czesc X pod wzgledem clhemicznyim jest zdefiniowana jako 14^iwu-(p^h3rdrokByfeinylo)-2i^3-dwu-izoni- trylo-bi*tadiien-(il,3). Wiadomo, ze antybiotyk ten odznacza sie temwstaibtilnjoscda i dzialaniem wdeLow^rtosciowym.Bo wytwarzania tego aintytokrtylkiu znany Jest sposób, wedlug którego hoduje sie kultury ples¬ ni sposobem powierzchniowym na podlozu Cza- *) Wlasciciel patentu oswiadczyl, ze twórca wynalaiakii jeslt Gerhard Barwaild. p©k-Ooxa z dodatkiem 0,6% arutolizjatu droz¬ dzowego, aiz do zestarzenia sie micelli, po ozym roztwór hodowli odrzuca sie a-wysoisizona ma¬ se. miceHli stasuje do otnzymandia antybiotyku* Mleelle te ekstrahuje sie orgainicznymii roz- puisizcaadn^taml, zwiniszcza eterem, acetonem, alkoholem, octanem etylu i imnymi i przez od- desityllotwaaiie ojtrzymnuje sie zanieczyszczony jeszcze antybiotyk tótóry nastepnie przemywa sie eterem naftowymi lub lekka benzyna i roz¬ puszcza sie na goraco w organicznych roz¬ puszczalnikach jak alkohol, aceton, lub diok¬ san a w koncu wytraca /woda. Oczyszczany w ten sposób aotylbioitylk pnzeprowadza sie nas¬ tepnie w znane postacie stasowania leków jak puder, masc, czopki itd.Ten znamy sposób posiada te wade, ze kul¬ ture powierzchniowa tnzeba przeprowadzic przezwtfele kolb szklanych, tak ze do sciagniecia po¬ zywki, sterylizacji, zaszczepienia i oddzielenia starej micelli na dradize filtracji iitd. potrzeba duzego nakladu pracy, wysokiego nakladu ma¬ terialowego i kosztów, a przede wszystkiem duzych powierzchni produkcyjnych, w których panuja uregulowane warunki.Te wymienione czynnika, wzglednie zwiazane z tym naklady techniczne powoduja powstawa¬ nie wysokich kosztów. Do tego dochodzi to, ze nie zawsze mozliwe jest scisle kontrolowac i sterowac procesem fermentacyjnym pnzez dlu¬ gi okres hodowli kultury trwajacej 28 dni, poniewaz kazdy zaimkniietty system biologiczny posiada swojewtoisne cechy. Poza tymsposób jest szczególnie niekorzystny, poniewaz antybiotyk trzeba ekstrahowac dopiero z micelli, przy czym moga powstawac straity na -skutek nie- caffloowiitej ekstrakcji. Poniewaz mlicella zawie¬ ra stosunkowo male ilosci antyibiotyku, wobec tego w tych warunkach ekstrakcja w stosunku do osiagnietej wydajnosci jtest bardzo praco¬ chlonna. Równiez znana jest wzmianka o spo- scble podpowierzchniowej hodowli kultur. Dos¬ wiadczenia w tym kierunku nie doprowadzily jeldnak do zadnego wyniku, tak ze trzeba stwierdzic, ze dotychczas nie zosital opisany sposób wytwarzania tego antybiotyku metoda pod|powierzchniowa.Zadaniem wynalazku jest usuniecie opisa¬ nych wad wystepujacych w znanych sposobach wytwaitzania tego antybiotyku.Stwierdzono, ze przy zastosowaniu jako ma¬ terialni do szczepienia specjalnego szczepu Pe- nicMium wyhodowamigo w dowolny znany spo¬ sób, który dodaje sie w ilosci okolo 5% jako indkulum do kultury glównej, osiaga sie przy dobrym napowietrzaniu i wfielodniowym mie¬ szaniu (zaszczepionego roztworu kultury w tem¬ peraturze okolo 24—3(0oC rozpad rozlozyscie rosnacej micelli, przy czym nastepuje on po okolo 8 dniach i prowadzi do uwolnienia i wy¬ tracenia antybiotyku do rocattworu hodowli.Stwierdzono poza tym, ze 'jako indkulum dla naistrpnej hodowli glównej mozna z powodze- miem stosowac czesc odbudowanej hodowli glównej', która sklada sie z reszt micelli i za¬ rodników.Roztwór hodowli — po skonczonej hodowli oddziela sie przez filtracja, odwirowanie lub odstanie od czesci dbalych i odrzuca. Te stale czesci skladaja sie zasadniczo z wytraconego antybiotyku jak tez z resztek micelli; nieroz- puszczalLnyloh soli i produktów odbudowy bial¬ ka. W ten sposób otrzymuje sie znacznie ak¬ tywniejszy produkt posredni, anizeli przedsta¬ wia go stara micella z produkcji powierzch¬ niowej. Przez rozklad micelli pozostalosc jest stosunkowo mala, przez co zostaje ulatwione otrzymanie stosunkowo czystego produktu.Stwierdzono wreszcie, ze mozna osiagnac da¬ leko wyzsza wydajnosc, jezeli roztwór hodowli po zaczynajacym sie rozkladzie micelM spusci sie ze zbiornika dla •kultury do duzych naczyn v zatpasowych i przeprowaldzi aultoiize w opty¬ malnych warunkach specyficznych fermentów, az do calkowitego rozkladu czesci micelli. Prze¬ róbke oddzielonych substancji stalych, które praktycznie skladaja Sie tylko jeszcze z anty¬ biotyku, produktów odbudowy biaiJka, soli nie¬ rozpuszczalnych i innych prowadzi sie iw opi¬ sany sposób.Wedlug wynailaizku inna mozliwosc przerób¬ ki polega na 'tym, ze oddzielony mieoczyszczo- ny antybiotyk rozpuszcza sie w roztworze al¬ kalicznym, roztwór uwalnia znanymi sposoba¬ mi od stalych czesci, a z wstepnie oczyszczo¬ nego roztworu wydziela sie antybiotyk przez adsorbcje, zobojetnienie lub wytrzasanie z roz¬ puszczalnikami nierozpuszczalnymi w wodzie.Przez porównawcze badanie znanego anty¬ biotyku zawierajacego l,4K|wu-(ip-hydroksyfe- nylo) - 2^ *¦ dwu - izonitrylo - butadien - (,1,3) z antybiotykiem wytworzonym sposobem wedlug wynalazku stwierdzono jednakowa czynnosc biologiczna. Równiez wlasciwosci fizyczne i che¬ miczne sa takie same.Powyzsze przyklady objasniaja blizej sposób wedlug wynalazku.Przyklad I. Material zarodnikowy spec¬ jalnego szczepu Pienicillium hoduje sie poprzej¬ sciu przez agar na prosie w temperaturze 27 °C i po HO-dniowej hodowli stosuje do szczepie¬ nia po HO ml roztworu pozywki, np. Czapek— Doxa w hodowli wstrzasanej. Tak otrzymana sidnie irozmniozona hodowle wstepna dodaje sie w ilosci 5% jako inokulum do ilO 1 hodowli posredniej i z tego po dobrym rozwojiu stasuje 5 i do zaszczepienia lOOi 1 hodowli glównej.Roztwór hodowli glównej jest taki sam jak roztwór pozywki stosowany w sposobie Emer- sa. W temperaturze 27°C przy energicznym mieszaniu i niapowietrzaniiu w stosunku 1 : 1 osiaga sie po okolo 8 dniach rozklad micelli, po czym mozna fermentacje przerwac. Zanie¬ czyszczony anitybiotyfc wytracony z roztworu hodowli oddziela sie od cieklych skladnikówroztworu pozyiwki na drodze saczenia, wirowa¬ nia lub odstania i oczyszcza znanymi sposoba- j tui. Wydajnosc czystego kompleksu antybioty¬ ku (X, Y, Z) wynosi W g na illCKO litrów iOz-' tworu pozywM.Przyklad II. Przy wytwarzaniu materia¬ lu do zaszczepiania i ^przy fermentacji poste¬ puje sie tak jak w przykladzie I, jednak po rozpoczetym rozpadizie micelM, który nastepuje p3 okolo 5 dniach odprowadza sie hodowle p KJpowierzdhindowa i podidaje daflszej autolizie w naczyniu zapasowym, która prowadzi ido c ilkowiitego rozpadu micefllli. Oddzielenie iprze¬ róbka nastepuje jak w przykladzie I.Przyklad III. W procesie fermentacji i przeróbki postepuje sie j.ak w przykladnie I lub II, z ta róznlica, ze czesci micelii czynnej Y dowli glównej stosuje sie jako inokulum d * nastepnej hodowli.Przyklad IV. W celu otrzymania anty¬ biotyku zanieczyszczonego produktami odbu¬ dowy micelli wizgledmie bialkia, nieTozpusizazal- nymi sodami i innymi postepuje sie jak w przy¬ kladach I, II lub III. Ten zanieczyszczony an¬ tybiotyk rozpuszcza sie przez zalkaliizowanie p tzostalosci, roztwór oddziela sde cd stalych skladników a produkt surowy wzbogaca przez zobojetnienie, adsoilbcje lub wytrzasane z roz- pusaczailnifciem nierozpuszczalnym w wodzie. PL

Claims (3)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania antybiotyku zawiera¬ jacego 1,4 - dwu-Jizcnitryilo-buAadien^ (1,3), znamienny tym, ze hoduje sie kullture specjalnego szczepu Penicilliium metoda podpowierach- nicwa az do rozpadu maisy miceili, nastep¬ nie antybiotyk uwalniajacy sie wczasie roz¬ padu miicelli i wytwarzajacy sie w roztwo¬ rze hodowli oddziela sie raizem z reszta mi- oelli i innymi stalymi substancjami z roz¬ tworu hodowli i poddaje chemicznej prze- rólbce luib hodowle odprowadza sie do zbior¬ nika zapasowego od chwili rozpadu mdceMi, przechowuje az do calkowitej autolizy, a na- stejpnie po oddzieleniu roztworu hodowli poddaje dalszej chemicznej obróbce.
2. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze antybiotyk wytracony w roztworze hodowli na skutek rozpadu miceili po odsttaniu sde w naczyniu do ihcdowli odjpusizcza sie w po¬ staci wzbogaconej lub 'oddziela od roztworu hodowli normalnymi sposobami rozdziela¬ nia np. przez odwirowanie, rozpuszcza przez izalkaOiizowande, nastepnie uwalnia od sta¬ lych pozostalosci i po przesaczeniu wstepnie oczyszczonej postaci poddaje dalszej che¬ micznej obróbce.
3. 3. Sposób wedlug zasitrz. 1 i % znamienny tym. ze czesc czynnej kultury glównej stosuje sie jako inckulum dla roztworu pozywki hodowli glównej nastepnego wsadu tanku fermentacyjnego. VEB Arzneinnittelwerk Dres den Zastepca: mgr Józef Kaminski rzecznik patentowy WDA 115 23.11.62 100 B-5 PL