PL209342B1 - Sposób selektywnej ekstrakcji, oczyszczania i enzymatycznej modyfikacji podjednostki α' sojowej β-konglicyniny, jej fragmenty polipeptydowe i ich zastosowanie oraz kompozycje farmaceutyczne, dodatki lub produkty spożywcze zawierające te fragmenty polipeptydowe - Google Patents
Sposób selektywnej ekstrakcji, oczyszczania i enzymatycznej modyfikacji podjednostki α' sojowej β-konglicyniny, jej fragmenty polipeptydowe i ich zastosowanie oraz kompozycje farmaceutyczne, dodatki lub produkty spożywcze zawierające te fragmenty polipeptydoweInfo
- Publication number
- PL209342B1 PL209342B1 PL370294A PL37029403A PL209342B1 PL 209342 B1 PL209342 B1 PL 209342B1 PL 370294 A PL370294 A PL 370294A PL 37029403 A PL37029403 A PL 37029403A PL 209342 B1 PL209342 B1 PL 209342B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- subunit
- conglycinin
- polypeptide fragments
- treatment
- mac
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 230000009144 enzymatic modification Effects 0.000 title claims abstract description 5
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 title description 2
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 title description 2
- 108700037728 Glycine max beta-conglycinin Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 23
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 23
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims abstract description 4
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 28
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 26
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 14
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 13
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 10
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 8
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 7
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 7
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 6
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 6
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 6
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 claims description 6
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 claims description 6
- 230000007170 pathology Effects 0.000 claims description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 5
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 claims description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000002778 food additive Substances 0.000 claims description 3
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 2
- 101710094135 Beta-conglycinin alpha' subunit Proteins 0.000 abstract 1
- 239000003398 denaturant Substances 0.000 abstract 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 12
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 7
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 7
- 230000000260 hypercholesteremic effect Effects 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 3
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 102000000853 LDL receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010001831 LDL receptors Proteins 0.000 description 2
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 2
- KNHUKKLJHYUCFP-UHFFFAOYSA-N clofibrate Chemical compound CCOC(=O)C(C)(C)OC1=CC=C(Cl)C=C1 KNHUKKLJHYUCFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001214 clofibrate Drugs 0.000 description 2
- 239000013578 denaturing buffer Substances 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 229940001941 soy protein Drugs 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920004011 Macrolon® Polymers 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- -1 bisulfite ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 235000021004 dietary regimen Nutrition 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- CJWQYWQDLBZGPD-UHFFFAOYSA-N isoflavone Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC(OC)=C1C1=COC2=C(C=CC(C)(C)O3)C3=C(OC)C=C2C1=O CJWQYWQDLBZGPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002515 isoflavone derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008696 isoflavones Nutrition 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 235000019710 soybean protein Nutrition 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001631 vena cava inferior Anatomy 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/168—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
- A23J1/14—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from leguminous or other vegetable seeds; from press-cake or oil-bearing seeds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
- A23J3/14—Vegetable proteins
- A23J3/16—Vegetable proteins from soybean
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/185—Vegetable proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/06—Ethanol, i.e. non-beverage
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C13—SUGAR INDUSTRY
- C13K—SACCHARIDES OBTAINED FROM NATURAL SOURCES OR BY HYDROLYSIS OF NATURALLY OCCURRING DISACCHARIDES, OLIGOSACCHARIDES OR POLYSACCHARIDES
- C13K1/00—Glucose; Glucose-containing syrups
- C13K1/06—Glucose; Glucose-containing syrups obtained by saccharification of starch or raw materials containing starch
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób selektywnej ekstrakcji, oczyszczania i enzymatycznej modyfikacji podjednostki α' sojowej β-konglicyniny. Przedmiotem wynalazku są również fragmenty polipeptydowe i amino-końcowy fragment polipeptydowy podjednostki α' β-konglicyniny sojowej i ich zastosowanie do wytwarzania leku do leczenia tych patologii, które wymagają obniżenia poziomu cholesterolu i/lub trójglicerydów w osoczu, w szczególności hiperlipidemii. Ponadto przedmiotem wynalazku są kompozycje farmaceutyczne, dodatki lub produkty spożywcze zawierające te fragmenty polipeptydowe.
Znane właściwości obniżania cholesterolu przez soję i jej pochodne wynikają z zawartości izoflawonów (Kirk i in., 1998) i białek (Anderson i in., 1995).
Białka sojowe składają się głównie z glicynin (frakcja 11S) i β-konglicynin (frakcja 7S), przy czym ta druga składa się z trzech podjednostek, nazwanych α, α' i β (Thanh i Shibasaki, 1976). Badania przeprowadzone na białkach sojowych wykazały, że frakcja 7S (Lovati i in., 1992, 1996), a zwłaszcza podjednostka α' (Manzoni i in., 1998), ma zdolność aktywacji receptora LDL, jest więc w szczególności odpowiedzialna za redukcję poziomu cholesterolu w osoczu. W rzeczywistości, działanie na linię komórek wątroby 7S globuliną indukuje rozległą degradację podjednostek α i α' i stymulację aktywności receptora LDL, podczas gdy podjednostki β nie są degradowane i receptor nie jest aktywowany. Ponadto, mutanty soi, w których frakcja 7S nie zawiera podjednostki α', nie są zdolne do modyfikacji aktywności receptora nawet w wysokich stężeniach.
Z tych obserwacji doświadczalnych wynika, że potrzebne są metody wytwarzania β-konglicyniny w czystej postaci, jak również metody odzyskiwania i oczyszczania podjednostki α', z której przez działanie enzymami można później otrzymać specyficzne sekwencje aminokwasowe, bez potrzeby stosowania syntezy peptydu.
Sposób sugerowany przez Than'a i in. (1975 i 1976) i zmodyfikowany później przez O'Keefe'a i in. (1991) umożliwia oddzielenie glicynin i β-konglicynin na podstawie ich różnych rozpuszczalności przy różnym pH; jednakże zanieczyszczenie jest wciąż duże i wymagana jest filtracja żelowa lub chromatografia powinowactwa, które są kosztowne i trudne do przeprowadzenia na skalę przemysłową. Także modyfikacja sugerowana przez Nagano i in. (1992), chociaż umożliwia zwiększenie czystości frakcji, jest wciąż kosztowną metodą, którą można stosować tylko na skalę laboratoryjną.
Ostatnio, Wu i in. (1999), opisali sposób oddzielania glicynin i konglicynin na skalę półprzemysłową. Glicyniny wytrąca się w dwóch kolejnych ekstrakcjach wodnych przy pH 8,5, po których na supernatant działa się roztworem wodorosiarczynu o stężeniu 0,98 g/l, podczas gdy konglicyniny wytrąca się przez dodanie 0,25 M NaCl do ługów macierzystych po wytrącaniu glicynin, i następnie wyregulowanie pH do 4,8. Sposób umożliwia traktowanie dużych ilości substancji wyjściowej, a także zapewnia wysokie wydajności białka, ale czystość frakcji jest wciąż niezadowalająca; w szczególności β-konglicynina ulega degradacji, w znacznym stopniu podczas diafiltracji z zastosowaniem wody, co jest działaniem koniecznym, stosowanym w celu zmniejszenia nadmiaru jonów wodorosiarczynowych i usunięcia soli.
Powyżej cytowane metody nie tylko nie pozwalają na uzyskanie czystej β-konglicyniny, lecz co więcej, żadna z nich nie przewiduje oddzielenia i oczyszczenia podjednostki α'.
Przedmiotem wynalazku jest sposób selektywnej ekstrakcji, oczyszczania i enzymatycznej modyfikacji podjednostki α' sojowej β-konglicyniny, obejmujący następujące etapy:
a) ekstrakcję odtłuszczonej zmielonej soji z zastosowaniem wodnego roztworu wodorosiarczynu sodu o stężeniu 0,80 g/L - 1,20 g/L przy pH w zakresie od 6,0 do 6,9, z wytworzeniem rozpuszczalnej frakcji białkowej wzbogaconej w β-konglicyninę;
b) wytrącanie frakcji β-konglicyninowej uzyskanej według etapu a) przez działanie 35-60% etanolem;
c) oczyszczanie wytrąconej frakcji uzyskanej według etapu b) metodą chromatografii powinowactwa z zastosowaniem metalu (MAC) z użyciem mocznika jako środka denaturującego, w celu oddzielenia podjednostki α';
d) obróbkę enzymatyczną podjednostki α' uzyskanej według etapu c) z zastosowaniem enzymu proteolitycznego i następnie oczyszczanie metodą chromatografii MAC;
e) wytrącanie podjednostki α' z zastosowaniem acetonu.
Korzystnie ekstrakcję prowadzi się z zastosowaniem 15 objętości roztworu wodorosiarczynu sodu o stężeniu 0,98 g/l przy pH 6,4.
PL 209 342 B1
Korzystnie wytrącanie w etapie b) prowadzi się z zastosowaniem 40% etanolu.
Korzystnie MAC w etapie c) prowadzi się na macierzy sprzężonej z cynkiem lub niklem, a korzystniej na macierzy sprzężonej z cynkiem.
Korzystnie stosuje się macierz składającą się z agarozy - kwasu iminodioctowego.
Korzystnie jako enzym proteolityczny w obróbce enzymatycznej w etapie d) stosuje się chymotrypsynę.
Korzystnie podjednostkę α' i frakcję wzbogaconą w β-konglicyninę stabilizuje się przez liofilizację.
Przedmiotem wynalazku są również fragmenty polipeptydowe podjednostki α' β-konglicyniny sojowej, otrzymywane wyżej określonym sposobem.
Przedmiotem wynalazku jest również amino-końcowy fragment polipeptydowy, otrzymywany za pomocą wyżej określonego sposobu po obróbce chymotrypsyną.
Ponadto przedmiotem wynalazku jest zastosowanie fragmentów polipeptydowych lub aminokońcowych fragmentów polipeptydowych podjednostki α' β-konglicyniny sojowej do wytwarzania leku do leczenia tych patologii, które wymagają obniżenia poziomu cholesterolu i/lub trójglicerydów w osoczu, w szczególności hiperlipidemii.
Ponadto przedmiotem wynalazku są kompozycje farmaceutyczne zawierające fragmenty polipeptydowe lub amino-końcowe fragmenty polipeptydowe podjednostki α' β-konglicyniny sojowej, same lub w połączeniu z innymi aktywnymi składnikami, z domieszką odpowiednich nośników.
Przedmiotem wynalazku są również dodatki lub produkty spożywcze zawierające fragmenty polipeptydowe lub amino-końcowe fragmenty polipeptydowe podjednostki α' β-konglicyniny sojowej.
Poniżej przedstawiono wynalazek bardziej szczegółowo.
β-konglicynina jest wzbogacana jak pokazano na fig. 1. Substancję wyjściową stanowi mączka sojowa, odtłuszczona przez usunięcie frakcji lipidowej z zastosowaniem rozpuszczalników. Materiał ekstrahuje się wodnym roztworem wodorosiarczynu sodu przy słabo kwasowym pH. Stosuje się roztwór o objętości w zakresie od 14 to 16 razy większej na masę substancji wyjściowej, korzystnie od 14,5 do 15,5 razy większej. Stężenie wodorosiarczynu mieści się w zakresie od 0,80 do 1,20 g/l, korzystnie od 0,90 do 1,10 g/l, najkorzystniej od 0,95 do 1,05 g/l. Ekstrakcję prowadzi się w czasie pomiędzy 14 i 18 godzin w temperaturze w zakresie od -2 do 8°C. Zgodnie z korzystnym rozwiązaniem wynalazku, ekstrakcję prowadzi się przez 16 godzin z zastosowaniem 15 objętości roztworu wodorosiarczynu o stężeniu 0,98 g/l i pH 6,4, w temperaturach w zakresie od 0 do 4°C.
Przy tym pH i w tej temperaturze, rozpuszczalność glicynin jest bardzo mała i dlatego wytrącają się razem z innym nierozpuszczalnym materiałem. Osad oddziela się przez odwirowanie i rozpuszczalną frakcję traktuje się 35-60% (objętość/objętość) wodnym roztworem etanolu, korzystnie 40% wodnym roztworem etanolu, w temperaturach w zakresie od 20 do 30°C, korzystnie w temperaturze pokojowej 25°C. Supernatant odwirowuje się, a osad, składający się głównie z β-konglicynin, poddaje się liofilizacji. Uzyskany proszek poddaje się obróbce w kolejnym etapie (fig. 2).
Wybór oddzielenia i oczyszczenia podjednostki α' metodą, MAC (Ostrove i Weiss, 1990) jest związany z jej zdolnością, do koordynacyjnego wiązania jonów metalu, takiego jak Zn2+ i Ni2+, ponieważ ta podjednostka ma większą zawartość histydyny niż podjednostki α i β (Thanh i 'Shibasaki, 1978).
Stosowano macierz sprzężoną z cynkiem lub niklem, korzystnie z cynkiem. Zgodnie z korzystnym rozwiązaniem wynalazku, macierz składa się z kwasu iminodioctowego-agarozy. Liofilizowany materiał białkowy zawiesza się w buforze denaturującym składającym się z 50 mM Tris, 0,5 M NaCl o pH 7,2 i zawierającym 5 do 8 M mocznika, korzystnie 5 M. W tych warunkach, podjednostka α' selektywnie łączy się z macierzą, a podjednostki α i β można usunąć przez wymywanie z powyższego buforu; następnie podjednostkę α' wymywa się z zastosowaniem 0,1 M imidazolu w takim samym buforze lub w wodzie destylowanej.
Frakcję białkową wzbogaconą w podjednostkę α' zbiera się i poddaje działaniu rozpuszczalników organicznych wytrącających białka, korzystnie zimny aceton. Aceton stosuje się w objętościach w zakresie od 2 do 5 krotności objętości frakcji, korzystnie 3 do 4 objętości, w temperaturze w zakresie pomiędzy -10 i -30°C, korzystnie w temperaturze pomiędzy -15 i -25°C. Zgodnie z korzystnym rozwiązaniem wynalazku, stosuje się 3 objętości acetonu w temperaturze -20°C. Uzyskany osad oddziela się przez odwirowanie, ponownie zawiesza w etanolu, korzystnie w 95% etanolu, następnie odwirowuje i liofilizuje. Liofilizat zawiera 94% materiału białkowego i jest 10 razy bardziej wzbogacony w podjednostkę α' w stosunku do substancji wyjściowej.
Tabela 1 przedstawia wydajności ekstrakcji β-konglicyniny i podjednostki α' z mączki sojowej.
PL 209 342 B1
T a b e l a 1
Frakcja białkowa | Substancja wyjściowa | Wydajność ekstrakcji (%) |
β-konglicynina | Odtłuszczona mączka | 18,7 |
Podjednostka α' | β-konglicynina | 11,0 |
Podjednostka α' | Odtłuszczona mączka | 2,1 |
Fragmenty polipeptydowe podjednostki α' wytwarza się poddając liofilizat z poprzedniego etapu obróbce enzymatycznej z zastosowaniem enzymu proteolitycznego. Zgodnie z korzystnym rozwiązaniem wynalazku, enzymem proteolitycznym jest chymotrypsyna i uzyskany fragment składa się głównie z amino-końcowej części o masie cząsteczkowej 28000 Da.
Procedura jest następująca: liofilizat z poprzedniego etapu rozpuszcza się w stężeniu 5 mg/ml w 0,2 M NH4HCO3 zawierają cym 1,6 M mocznika przy pH w zakresie od 7,5 do 8,5. Chymotrypsynę dodaje się w stosunku wagowym od 1:10 do 1:50, korzystnie w stosunku wagowym 1:25 do substratu i inkubuje w temperaturze 37°C, mieszają c przez 24 godziny. Nastę pnie przeprowadza się etap metodą MAC, jak opisano powyżej.
Materiał wymywany imidazolem zawiera trzy fragmenty polipeptydowe, głównie fragment o masie cząsteczkowej 28000 Da, zawierający N-końcową część podjednostki α'.
Podawanie podjednostki α' i jej fragmentu otrzymanego w wyniku trawienia chymotrypsyna szczurom (tabela 2) potwierdziło, że są one zdolne do wyraźnego zmniejszenia poziomu cholesterolu i całkowitych trójglicerydów w osoczu. W szczególności, fragment podjednostki α' otrzymany w wyniku trawienia chymotrypsyna wykazał nie tylko większą skuteczność w zmniejszeniu poziomu cholesterolu niż inne składniki soi, lecz także niż klofibrat i dał porównywalne wyniki w przypadku trójglicerydów.
Wyniki doświadczeń biologicznych sugerują, że produkty dające się otrzymać sposobem według wynalazku, w szczególności podjednostkę α' i jej fragmenty, można stosować jako leki, w szczególności do leczenia tych patologii, które wymagają obniżenia poziomu cholesterolu i/lub trójglicerydów w osoczu. Wspomniane związki można stosować, same lub w połączeniu z innymi aktywnymi czynnikami z domieszką odpowiednich nośników, w celu otrzymywania kompozycji farmaceutycznych, w szczególnoś ci do leczenia hiperlipidemii. Ponadto, moż na je takż e stosować do otrzymywania dodatków do pożywienia lub produktów spożywczych przy reżimach dietetycznych określonych powyżej wymienionymi warunkami.
P r z y k ł a d y
Pierwszy etap: oczyszczanie 7S globuliny z soi
Substancją wyjściową była zmielona soja, odtłuszczona według metody Soxhlet, z zastosowaniem pentanu jako rozpuszczalnika.
Białka ekstrahowano roztworem 0,98 g/l NaHSO3 w ilości 15 objętości odtłuszczonej, zmielonej soi, przez 16 godzin w temperaturach w zakresie od 0 do 4°C, utrzymując pH 6,4. Po odwirowaniu, supernatant potraktowano 40% etanolem (objętość/objętość) w temperaturze pokojowej. Uzyskany osad, wzbogacony w β-konglicyninę i zawierający podjednostkę α' w stężeniu dwukrotnie wyższym niż w substancji wyjściowej, był liofilizowany.
Drugi etap: oczyszczanie podjednostki α'
Frakcję wzbogaconą β-konglicyniną ponownie zawieszono w buforze denaturującym (50 mM Tris, 0,5 M NaCl, pH 7,2) zawierającym 5 M mocznika i oczyszczono metodą MAC na macierzy agaroza-kwas iminodioctowy (Sigma) sprzężonej z cynkiem. Niezwiązany materiał białkowy wymywano stosując taki sam bufor jak powyżej, podczas gdy związany materiał białkowy, składający się głównie z podjednostki α', wymywano z zastosowaniem 0,1 M imidazolu w tym samym buforze lub w wodzie destylowanej.
Na frakcję wzbogaconą podjednostka α' działano 3-4 objętościami acetonu w temperaturze -20°C; uzyskany osad zawieszono w 40% etanolu w temperaturze pokojowej, następnie odwirowano i poddano liofilizacji. Uzyskany proszek zawierał 94% białek i 10-krotnie większą, ilość podjednostki α' niż substancja wyjściowa.
Trzeci etap: obróbka enzymatyczna podjednostki α'
Liofilizat z powyższego etapu rozpuszczono w stężeniu 5 mg/ml w 0,2 M NH4HCO3 zawierającym 1,6 M mocznika, przy pH w zakresie od 7,5 do 8,5. Następnie roztwór potraktowano chymotrypsyną w stosunku wagowym 1:25 do substratu białkowego i inkubowano w temperaturze 37°C miePL 209 342 B1 szając przez 24 godziny, a następnie oczyszczono metodą MAC jak opisano powyżej. Materiał zatrzymany przez żywicę i wymyty 0,1 M imidazolem zawierał trzy fragmenty polipeptydowe, przy czym główny miał masę cząsteczkową 28000 Da i składał się z N-końcowej części podjednostki α'.
Doświadczenia biologiczne
Zwierzęta
Użyto szczury CD SPF/VAF płci męskiej, o wadze 75-100 g. Zwierzęta umieszczono w klatkach makrolonowych (4-5 zwierząt na klatkę) w warunkach automatycznie kontrolowanego oświetlenia (cykl 12 godzin światła/12 godzin ciemności), temperatury (21 ± 1°C) i wilgotności (60 ± 5%).
Protokół doświadczalny
Po 7 dniach aklimatyzacji, zwierzęta podzielono losowo na siedem grup po 20 szczurów każda (tabela 2). Przez 28 dni, w jednej grupie utrzymywano normalną dietę (cod. 014RF25C; Mucedola
S.r.l., Settimo Milanese, MI, Italy), podczas gdy inne poddano diecie hipercholesterolemicznej składającej się z 1% cholesterolu, 0,5% kwasu cholinowego i 25% uwodornionego oleju kokosowego (batch 332000, preparation 01.09.2000; Laboratorio Dottori Piccioni, Gessate, MI, Italy), z nieograniczonym dostępem do wody. Pożywienie podawano codziennie (40 g, o godzinie 09.00 rano.), a ilość niespożytego pokarmu ważono. Doświadczenie prowadzono następująco.
Grupa 1 (kontrolna): zwierzęta utrzymywano na normalnej diecie i przez 28 dni podawano im doustnie 0,5% roztwór karboksymetylocelulozy.
Grupa 2: zwierzęta utrzymywano na diecie hipercholesterolemicznej i przez 28 dni podawano im doustnie roztwór 0,5% karboksymetylocelulozy.
Grupa 3: zwierzęta utrzymywano na diecie hipercholesterolemicznej i przez 28 dni podawano im doustnie klofibrat w dawce 200 mg/kg.
Grupa 4: zwierzęta utrzymywano na diecie hipercholesterolemicznej i przez 28 dni podawano im doustnie pełny ekstrakt białkowy z soi (TPE) w dawce 200 mg/kg.
Grupa 5: zwierzęta utrzymywano na diecie hipercholesterolemicznej i przez 28 dni podawano im doustnie β-konglicyninę w dawce 50 mg/kg.
Grupa 6: zwierzęta utrzymywano na diecie hipercholesterolemicznej i przez 28 dni podawano im doustnie podjednostkę α' w dawce 10 mg/kg.
Grupa 7: zwierzęta utrzymywano na diecie hipercholesterolemicznej i przez 28 dni podawano im doustnie fragment podjednostki α' otrzymany w wyniku trawienia chymotrypsyną w dawce 1 mg/kg.
Całkowity poziom cholesterolu i trójglicerydów w osoczu zmierzono pod koniec 28 dnia eksperymentu, po 16 godzinach postu. Zwierzęta znieczulono eterem etylowym i pobrano krew z dolnej żyły głównej do probówek zawierających EDTA (1 mg/ml). Po odwirowaniu przez 15 minut w temperaturze 4°C przy 3000 obrotów na minutę, osocze oddzielono, zamrożono i przechowywano w temperaturze -20°C aż do przeprowadzenia pomiarów.
Całkowite stężenie cholesterolu i trójglicerydów w osoczu (przedstawione w tabeli 2) określono zgodnie z typowymi testami enzymatycznymi.
T a b e l a 2
Grupa doświadczalna | Całkowite stężenie cholesterolu (mg/dL) | Całkowite stężenie trójglicerydów (mg/dL) |
Grupa 1 | 55,4 ± 3 | 105,1 ± 7,2 |
Grupa 2 | 284,1 ± 10,3 | 226,9 ± 12,6 |
Grupa 3 | 191,2 ± 8,0 | 139,1 ± 5,8 |
Grupa 4 | 236,1 ± 10,2 | 176,9 ± 8,1 |
Grupa 5 | 196,4 ± 7,6 | 146,7 ± 5,9 |
Grupa 6 | 182,2 ± 12,1 | 150,1 ± 9,8 |
Grupa 7 | 175,8 ± 7,9 | 140,3 ± 7,4 |
PL 209 342 B1
ODSYŁACZE LITERATUROWE
Anderson J.W., Bryan M.J., Cook-Newall M-E., 1995 N. Engl. J. Med. 333, 276-282.
Kirk E.A., Sutherland P., Wang S.A., Chait A., LeBoeuf R.C., 1998 Journal of Nutrition. 128,
954-959.
Lovati M R., Manzoni C, Corsini A., Granata A., Frattini R., Fumagalli R., Sirtori C, 1992 J. Nutr. 122, 1971-1978.
Lovati M.R., Manzoni C, Corsini A., Granata A., Fumagalli R., Sirtori C, 1996 J. Nutr. 126, 2831-2842.
Manzoni C, Lovati M.R., Gianazza E., Morita Y., Sirtori C, 1998 J. Agric. Food. Chem. 46, 2481-2484.
Nagano T., Hirotsuka M., Mori H., Kohyama K., Nishinari K., 1992 J. Agric. Food. Chem. 40, 941-944.
O'Keefe S.F., Wilson L.A., Resurreccion A.P., Murphy P.A., 1991 J. Agric. Food. Chem. 39, 1022-1027.
Ostrove S., Weiss S., 1990 Methods in Enzimology 182, 371-379.
Thanh V.H., Okubo K., Shibasaki K., 1975 Plant Physiol. 56:19-22.
Thanh V.H., Shibasaki K., 1976 J. Agric. Food. Chem. 24, 1117-1121.
Thanh V.H., Shibasaki K., 1978 J. Agric. Food. Chem. 26, 695-698.
Wu S., Murphy P.A., Johnson L.A., Fratzke A.R., Reuber M.A. 1999 JAOCS 76, 285-293.
Claims (17)
1. Sposób selektywnej ekstrakcji, oczyszczania i enzymatycznej modyfikacji podjednostki α' sojowej β-konglicyniny, znamienny tym, że w następujących etapach przeprowadza się:
a) ekstrakcję odtłuszczonej zmielonej soi z zastosowaniem wodnego roztworu wodorosiarczynu sodu o stężeniu 0,80 g/L - 1,20 g/L przy pH w zakresie od 6,0 do 6,9, z wytworzeniem rozpuszczalnej frakcji białkowej wzbogaconej w β-konglicyninę;
b) wytrącanie frakcji β-konglicyninowej uzyskanej według etapu a) przez działanie 35-60% etanolem;
c) oczyszczanie wytrąconej frakcji uzyskanej według etapu b) metodą chromatografii powinowactwa z zastosowaniem metalu (MAC) z użyciem mocznika jako środka denaturującego, w celu oddzielenia podjednostki α';
d) obróbkę enzymatyczną podjednostki α' uzyskanej według etapu c) z zastosowaniem enzymu proteolitycznego i następnie oczyszczanie metodą chromatografii MAC;
e) wytrącanie podjednostki α' z zastosowaniem acetonu.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że ekstrakcję prowadzi się z zastosowaniem 15 objętości roztworu wodorosiarczynu sodu o stężeniu 0,98 g/l przy pH 6,4.
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że wytrącanie w etapie b) prowadzi się z zastosowaniem 40% etanolu.
4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że MAC w etapie c) prowadzi się na macierzy sprzężonej z cynkiem lub niklem.
5. Sposób według zastrz. 4, znamienny tym, że MAC w etapie c) prowadzi się na macierzy sprzężonej z cynkiem.
6. Sposób według zastrz. 4, albo 5, znamienny tym, że stosuje się macierz składającą się z agarozy - kwasu iminodioctowego.
7. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako enzym proteolityczny w obróbce enzymatycznej w etapie d) stosuje się chymotrypsynę.
8. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że podjednostkę α' i frakcję wzbogaconą w β-konglicyninę stabilizuje się przez liofilizację.
9. Fragmenty polipeptydowe podjednostki α' β-konglicyniny sojowej, znamienne tym, że otrzymywane są sposobem określonym w zastrz. 1-8.
10. Amino-końcowy fragment polipeptydowy, znamienny tym, że otrzymywany jest sposobem określonym w zastrz. 7.
PL 209 342 B1
11. Zastosowanie fragmentów polipeptydowych podjednostki α β-konglicyniny sojowej określonych w zastrz. 9 do wytwarzania leku do leczenia tych patologii, które wymagają obniżenia poziomu cholesterolu i/lub trójglicerydów w osoczu.
12. Zastosowanie według zastrz. 11 do wytwarzania leku do leczenia hiperlipidemii.
13. Zastosowanie amino-końcowych fragmentów polipeptydowych określonych w zastrz. 9 do wytwarzania leku do leczenia tych patologii, które wymagają obniżenia poziomu cholesterolu i/lub trójglicerydów w osoczu.
14. Kompozycje farmaceutyczne, znamienne tym, że zawierają fragmenty polipeptydowe określone w zastrz. 9, same lub w połączeniu z innymi aktywnymi składnikami, z domieszką odpowiednich nośników.
15. Kompozycje farmaceutyczne, znamienne tym, że zawierają fragmenty polipeptydowe określone w zastrz. 10, same lub w połączeniu z innymi aktywnymi składnikami, z domieszką odpowiednich nośników.
16. Dodatki lub produkty spożywcze, znamienne tym, że zawierają fragmenty polipeptydowe określone w zastrz. 9.
17. Dodatki lub produkty spożywcze, znamienne tym, że zawierają fragmenty polipeptydowe określone w zastrz. 10.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
IT2002MI000147A ITMI20020147A1 (it) | 2002-01-29 | 2002-01-29 | Estrazione purificazione e modificazione di polipeptidi da seme di soia |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
PL370294A1 PL370294A1 (pl) | 2005-05-16 |
PL209342B1 true PL209342B1 (pl) | 2011-08-31 |
Family
ID=11449014
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL370294A PL209342B1 (pl) | 2002-01-29 | 2003-01-27 | Sposób selektywnej ekstrakcji, oczyszczania i enzymatycznej modyfikacji podjednostki α' sojowej β-konglicyniny, jej fragmenty polipeptydowe i ich zastosowanie oraz kompozycje farmaceutyczne, dodatki lub produkty spożywcze zawierające te fragmenty polipeptydowe |
Country Status (21)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US7465467B2 (pl) |
EP (1) | EP1469741B1 (pl) |
JP (1) | JP4522706B2 (pl) |
KR (1) | KR100991641B1 (pl) |
CN (1) | CN100558243C (pl) |
AT (1) | ATE341943T1 (pl) |
AU (1) | AU2003208346B8 (pl) |
CA (1) | CA2474106C (pl) |
CY (1) | CY1107514T1 (pl) |
DE (1) | DE60308994T2 (pl) |
DK (1) | DK1469741T3 (pl) |
ES (1) | ES2274208T3 (pl) |
HK (1) | HK1073590A1 (pl) |
IL (1) | IL163225A (pl) |
IT (1) | ITMI20020147A1 (pl) |
NO (1) | NO327156B1 (pl) |
PL (1) | PL209342B1 (pl) |
PT (1) | PT1469741E (pl) |
RU (1) | RU2300898C2 (pl) |
SG (1) | SG152048A1 (pl) |
WO (1) | WO2003063608A1 (pl) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6171640B1 (en) * | 1997-04-04 | 2001-01-09 | Monsanto Company | High beta-conglycinin products and their use |
CN100469257C (zh) * | 2002-11-12 | 2009-03-18 | 不二制油株式会社 | 分离大豆蛋白及其生产方法 |
WO2005055735A1 (ja) * | 2003-12-11 | 2005-06-23 | Fuji Oil Company, Limited | 改良大豆7sたん白及びその製造法 |
JP5382840B2 (ja) * | 2005-08-23 | 2014-01-08 | 特定非営利活動法人プライメイト・アゴラ | サルモデルで薬効が確認された骨粗鬆症の予防又は治療剤 |
BRPI0918680A2 (pt) * | 2008-12-31 | 2015-08-25 | Solae Llc | "composição de proteína de soja hidrolisada, fração da proteína, produto alimentício, processo para a fabricação de uma fração de proteína, processo para a produção de um produto de proteína e produto alimentício" |
EP2264054A1 (en) * | 2009-06-17 | 2010-12-22 | Indena S.p.A. | Cloning, yeast expression, purification and biological activity of a truncated form of the soybean 7S globulin alfa ' subunit involved in Hep G2 cell cholesterol homeostasis |
ES2460898T3 (es) * | 2009-06-17 | 2014-05-14 | Indena S.P.A. | Clonación, expresión de levaduras, purificación y actividad biológica de la región de extensión de la subunidad alfa' de la globulina 7S de soja involucrada en la homeostasis del colesterol de células Hep G2 |
CN101904406B (zh) * | 2010-07-02 | 2012-07-25 | 山西大学 | 一种葵花籽多肽的制备方法和用途 |
CN104163767B (zh) * | 2014-07-25 | 2017-01-18 | 湖北泓肽生物科技有限公司 | 一种氨基酸和多肽水溶性物质的纯化方法 |
CN114874301A (zh) * | 2022-05-10 | 2022-08-09 | 吉林农业大学 | 不同亚基组成β-伴大豆球蛋白的制备方法及应用 |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4409248A (en) * | 1981-08-10 | 1983-10-11 | A. E. Staley Manufacturing Company | Heat-gelling and foam-stabilizing enzymatically modified vegetable isolates |
JPH06197788A (ja) * | 1993-01-06 | 1994-07-19 | Fuji Oil Co Ltd | 蛋白質の製造法 |
CN1082345C (zh) | 1996-03-28 | 2002-04-10 | 不二制油株式会社 | 蛋白水解产物的制备方法 |
DE69737059D1 (de) * | 1996-06-14 | 2007-01-18 | Du Pont | Suppressi0n spezifischer klassen von soja-sojasamenproteingenen |
US6171640B1 (en) * | 1997-04-04 | 2001-01-09 | Monsanto Company | High beta-conglycinin products and their use |
US6365802B2 (en) * | 1998-08-14 | 2002-04-02 | Calgene Llc | Methods for increasing stearate content in soybean oil |
FR2784029B1 (fr) * | 1998-10-05 | 2001-01-05 | Pharmascience Lab | Methode de prevention et/ou de traitement cosmetique des vergetures de la peau et utilisation en dermatologie |
JP2002541851A (ja) * | 1999-04-15 | 2002-12-10 | カルジーン エルエルシー | イソプレノイド合成に関与するタンパク質の核酸配列 |
CA2274414A1 (en) | 1999-06-11 | 2000-12-11 | Universite Laval | Dietary fish protein for use in restoring normal insulin function insulin-resistant individuals |
AUPQ877300A0 (en) * | 2000-07-13 | 2000-08-03 | Johnson & Johnson Pacific Pty Limited | Topical treatment of skin |
US7541329B2 (en) * | 2002-04-18 | 2009-06-02 | Monsanto Technology Llc | Oil body associated protein compositions and methods of use thereof for reducing the risk of cardiovascular disease |
ATE446969T1 (de) * | 2003-08-20 | 2009-11-15 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Stabilisierungsmittel für enzyme |
BRPI0606249A2 (pt) * | 2005-01-14 | 2009-06-09 | Solae Llc | fórmula nutricional e método de alimentação de crianças humanas |
-
2002
- 2002-01-29 IT IT2002MI000147A patent/ITMI20020147A1/it unknown
-
2003
- 2003-01-27 AT AT03706387T patent/ATE341943T1/de active
- 2003-01-27 PL PL370294A patent/PL209342B1/pl unknown
- 2003-01-27 RU RU2004123201/13A patent/RU2300898C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2003-01-27 JP JP2003563319A patent/JP4522706B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2003-01-27 AU AU2003208346A patent/AU2003208346B8/en not_active Ceased
- 2003-01-27 CN CNB038028050A patent/CN100558243C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2003-01-27 DK DK03706387T patent/DK1469741T3/da active
- 2003-01-27 DE DE60308994T patent/DE60308994T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2003-01-27 EP EP03706387A patent/EP1469741B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-01-27 KR KR1020047011441A patent/KR100991641B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2003-01-27 PT PT03706387T patent/PT1469741E/pt unknown
- 2003-01-27 CA CA2474106A patent/CA2474106C/en not_active Expired - Fee Related
- 2003-01-27 ES ES03706387T patent/ES2274208T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-01-27 SG SG200506973-7A patent/SG152048A1/en unknown
- 2003-01-27 US US10/502,582 patent/US7465467B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2003-01-27 WO PCT/EP2003/000798 patent/WO2003063608A1/en active IP Right Grant
-
2004
- 2004-07-27 IL IL163225A patent/IL163225A/en not_active IP Right Cessation
- 2004-07-27 NO NO20043186A patent/NO327156B1/no not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-07-21 HK HK05106163.3A patent/HK1073590A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-11-28 CY CY20061101709T patent/CY1107514T1/el unknown
-
2008
- 2008-04-17 US US12/104,473 patent/US7901718B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-01-26 US US13/013,966 patent/US8257758B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US8257758B2 (en) | Process for the extraction, purification and enzymatic modification of soy 7S globulin alpha' subunit for use as hypocholesterolemizing agent | |
CN101641111B (zh) | 包含用于治疗肥胖症的菜蓟与菜豆提取物的制剂 | |
Kapravelou et al. | Health promoting effects of Lupin (Lupinus albus var. multolupa) protein hydrolyzate and insoluble fiber in a diet-induced animal experimental model of hypercholesterolemia | |
CN109007857A (zh) | 改善男性精子质量的特殊膳食用食品配方及其制备方法 | |
JP5504301B2 (ja) | Ii型糖尿病の治療のためのルーピンコングルチンの使用 | |
US7541329B2 (en) | Oil body associated protein compositions and methods of use thereof for reducing the risk of cardiovascular disease | |
Higuchi et al. | Participation of lectin in biological effects of raw winged bean seeds on rats | |
AU2003208346A1 (en) | A process for the extraction, purification and enzymatic modification of soy 7S globulin alpha' subunit for use as hypocholesterolemizing agent | |
JP4461680B2 (ja) | 血中中性脂肪低減用組成物 | |
EP1024709B1 (en) | Use of an organ-specific nutritional composition | |
Czerwiński et al. | Response of rats to a moderate intake of soyabean lectin | |
KR20040022392A (ko) | 김 단백질을 함유한 조성물 및 식품 | |
CN118044619A (zh) | 一种促进胃肠道黏膜修复的组合物和产品 |