PL208536B1

PL208536B1 - Środek pobudzający porost włosów

Info

Publication number: PL208536B1
Application number: PL366407A
Authority: PL
Inventors: Sang-Nyun Kim; Ho-Jeong Ahn; Chang-Woo Lee; Min-Ho Lee; Jung-Hun Kim; Jong-Il Kim; Seung-Jin Kim; Ho-Song Cho; Heon-Sik Lee; Hyun-Jin Kim
Original assignee: Lg Household & Health Care Ltd
Priority date: 2001-05-11
Filing date: 2002-05-11
Publication date: 2011-05-31
Also published as: EP1387660A4; CA2446971A1; EP1387660A1; KR100465012B1; JP4214181B2; RU2291682C2; JP2004530685A; KR20020086041A; AU2002258271B2; CN1507339A; PL366407A1; US6790830B2; TR200301931T2; CN1248671C; ATE473730T1; ZA200308532B; RU2003135846A; WO2002092032A1; BRPI0209619B1; US20030207798A1

Description

Niniejszy wynalazek dotyczy środka pobudzającego porost włosów, zawierającego jako składnik czynny podstawioną w pozycji 3 pochodną cyklosporyny A, którą to pochodną stanowi [D-2-metylotio-Sar³]cyklosporyna A. Niniejszy wynalazek dotyczy dalej postaci tego środka pobudzającego porost włosów.

Stan techniki

Skalp ludzki średnio zawiera około 100000 do 150000 włosów. Każdy z włosów ma trzy główne stadia wzrostu: anagen, katagen i telogen, po których włos wypada. Ten cykl wzrostu włosa jest powtarzalny, a czasy trwania poszczególnych cykli różnią się między sobą, i mieszczą się w zakresie około 3 do 6 lat. Tak więc, osoba dorosła normalnie traci dziennie średnio 50 do 100 włosów. Generalnie termin łysienie odnosi się do zjawiska, w którym czas trwania anagenowej fazy wzrostu ulega skróceniu, a procent włosów w fazie katagenu i telogenu wzrasta, przez co nadmiernie i nienormalnie wzrasta liczba traconych włosów.

Istnieje wiele teorii wyjaśniających utratę włosów, w tym na przykład słabe krążenie krwi, nadmierna funkcja męskich hormonów płciowych, nadmierne wytwarzanie i sekrecję łoju, pogorszenie stanu skalpu przez nadtlenki, bakterie, itp., czynniki dziedziczne, starzenie, stres, itp. Jednakże jasne i pewne mechanizmy nie zostały ujawnione. Ostatnio obserwuje się tendencję do wzrostu populacji cierpiącej na utratę włosów, ze względu na zmieniające się zwyczaje żywieniowe i stres dotykający ludzi w nowoczesnym środowisku społecznym. Spada również wiek osób dotkniętych łysieniem, a ponadto wzrasta populacja kobiet cierpią cych na łysienie.

Jednym z najczęściej stosowanych preparatów do leczenia i profilaktyki łysienia jest preparat zawierający minoksydyl. Są dwa środki na porost włosów, które zostały zarejestrowane przez Food and Drug Administration w USA, a jednym z tych zatwierdzonych środków na porost włosów jest minoksydyl. Pierwotnie minoksydyl opracowano jako lek przeciwnadciśnieniowy do obniżania ciśnienia krwi. Jednakże, po tym jak podczas stosowania tego leku zaobserwowano jako działanie uboczne efekt porostu włosów, stał się on sławny jako środek na odrastanie włosów. Chociaż mechanizm działania minoksydylu jako środka na porost włosów nie jest w pełni zrozumiały, zakłada się że minoksydyl zwiększa przepływ krwi przez rozszerzenie naczyń krwionośnych, przez co korzenie włosów są zaopatrywane w więcej składników odżywczych, czego skutkiem jest pobudzenie wzrostu włosów.

Pośrednie poparcie dla takiego modelu zwiększenia przepływu krwi stanowią ostatnie doniesienia, że minoksydyl zwiększa ekspresję naczyniowego czynnika wzrostu śródbłonka (VEGF), czynnika wzrostu związanego z rozszerzeniem naczyń w brodawce skórnej, która stanowi główną komórkę składową korzeni włosów. Doniesiono także o innym efekcie minoksydylu niż działanie rozszerzające naczynia w mechanizmie odrastania włosów, a mianowicie opisano, że minoksydyl pobudza aktywację brodawek skórnych w korzeniach włosów inkubowanych in vitro, oraz wzrost mieszków włosowych w hodowli tkankowej in vitro. Fakty te wskazują, że minoksydyl może działać bezpośrednio na korzenie włosów jako czynnik wzrostowy.

Ponadto, do leczenia łysienia stosowany jest finasteryd, główny składnik wprowadzonego do sprzedaży przez firmę Merck leku Propecia. Hamuje on konwersję męskiego hormonu testosteronu do dihydrotestosteronu, który jest silniejszym męskim hormonem płciowym niż testosteron. Tabletka zawierająca 1 mg finasterydu zarejestrowana została w USA przez FDA w grudniu roku 1997, jako środek pobudzający porost włosów do leczenia łysienia typu męskiego jedynie u mężczyzn i jest obecnie dostępna w sprzedaży. Badania kliniczne wykazały, że ma ona silne działanie pobudzające porost włosów. Pojawiły się jednak doniesienia, że finasteryd może jako działanie uboczne hamować męskie funkcje seksualne. Ponieważ ani finasteryd ani minoksydyl nie wykazują w badaniach klinicznych doskonałego działania oraz istnieje obawa co do działań ubocznych, prowadzonych jest wiele badań w celu opracowania nowych i ulepszonych środków pobudzających porost włosów.

Leki z rodziny cyklosporyn mają czynność immunosupresyjną. Są również skuteczne w hamowaniu wzrostu wirusów, grzybów, pierwotniaków, itp., oraz wywierają różne efekty fizjologiczne, takie jak nefrotoksyczność, hepatotoksyczność, nadciśnienie, powiększenie ozębnej, działanie zwiększające porost włosów, i tak dalej, jako działania uboczne. Cyklosporyna A, która stanowi cyklosporynę reprezentatywną, jest cyklicznym peptydem, mającym niżej podany wzór chemiczny, zawierającym 11 aminokwasów, w tym kilka N-metyloamino-kwasów i D-alaninę jako resztę w pozycji nr 8.

PL 208 536 B1

MeBmt—Abu—Sar —MeLeu—Val—MeLeu—Ala—DAIa—MeLeu—MeLeu—MeVal 12345678 9 10 11

[Wzór strukturalny 1] gdzie MeBmt oznacza N-metylo-(4R)-4-[(E)-2-butenylo]-4-metylo-L-treoninę, Abu oznacza kwas

L-a-aminomasłowy, Sar oznacza sarkozynę, MeLeu oznacza N-metylo-L-leucynę, Val oznacza L-walinę, Ala oznacza L-alaninę, DAla oznacza D-alaninę, MeVal oznacza N-metylo-L-walinę.

Aminokwasowa forma cyklosporyny A o powyższym wzorze chemicznym 1 ma konfigurację L, jeśli nie wskazano inaczej. Numerowanie reszt aminokwasów rozpoczyna się od MeBmt i kontynuuje zgodnie z ruchem wskazówek zegara, to jest 1 dla MeBmt i 11 dla ostatniej reszty MeVal (N-metylo-L-waliny) jak pokazano we wzorze strukturalnym 1. Nomenklatura różnych pochodnych, w tym cyklosporyn A do Z, jest zgodna z typowo stosowanymi metodami (Helv. Chim. Acta, 1987, 70:13-36). Na przykład, jeśli Abu w pozycji 2 cyklosporyny A jest zastąpiona przez L-alaninę, L-treoninę, L-walinę lub L-norwalinę, tak utworzone pochodne nazywane są odpowiednio cyklosporyna B, cyklosporyna C, cyklosporyna D lub cyklosporyna G. Ponadto, kiedy reszty aminokwasowe pochodnych cyklosporyny różnią się od reszt cyklosporyny A, pochodne są nazywane przez opisanie podstawnika. Na przykład, jeśli sarkozyna, będąca resztą aminokwasowa nr 3 cyklosporyny A, jest zastąpiona przez N-metylo-D-Abu³ lub N-metylo-D-Nva³, tak utworzone pochodne nazywane są odpowiednio [N-metylo-D33

-Abu³]cyklosporyna A lub [N-metylo-D-Nva³]cyklosporyna A. Stosowane są przy tym typowe skróty dla aminokwasów, to znaczy skrótem dla N-metylo-L-leucyny jest MeLeu, N-metylo-L-izoleucyny Melle, N-metylo-L-waliny MeVal, N-metylo-L-alaniny MeAla, N-metylo-L-norwaliny MeNva, L-leucyny Leu, L-izoleucyny Ile, sarkozyny Sar, L-seryny Ser, L-waliny, Val, L-alaniny Ala, D-alaniny DAla, kwasu L-aminomasłowego Abu, L-treoniny Thr, i L-norwaliny Nva. Nazwą pochodnej cyklosporyny, która w reszcie aminokwasowej 7 jest podstawiona siarką zamiast tlenu karbonylowego może być cyklosporyno-7-tioamid lub [⁷ψ⁸ CS-NH]cyklosporyna, według różnych odnośników literaturowych (Helv. Chim. Acta. 74: 1953-1990, 1991; J. Org. Chem. 58: 673-677, 1993; J. Org. Chem. 59: 7249-7258, 1994).

Jak dotąd, możliwości rozwoju cyklosporyn jako środka na porost włosów badało wiele grup badaczy. W szczególności prowadzono rozległe badania w zwierzęcych testach pobudzania wzrostu włosów, w ludzkim łysieniu plackowatym (J. Am. Acad. Dermatol., 1990, 22:242-250), ludzkim łysieniu typu męskiego (J. Am. Acad. Dermatol., 1990, 22:251-253 i Skin Pharmacol, 1994, 7:101-104), oraz w hamowaniu efektu wypadania włosów w wyniku chemioterapii w modelach zwierzęcych (Am. J. Pathol., 1997, 150:1433-1441). W eksperymentach porównawczych prowadzonych na grzbietach myszy pokazano, że efekt cyklosporyny na porost włosów jest około 100 razy lepszy niż minoksydilu. W oparciu o te stwierdzenia podjęto próby zastosowania cyklosporyny w leczeniu łysienia typu męskiego i zgłoszono wiele zgłoszeń patentowych.

Na przykład, w japońskich publikacjach patentowych Kokai nr Sho 60-243008, Sho 62-19512 i Sho 62-19513 ujawniono zastosowanie pochodnych cyklosporyny jako czynnika na porost włosów. W publikacji patentu europejskiego nr 0414632B1 mówi się o pochodnych cyklosporyny modyfikowanych w pozycji 8, a w publikacji PCT nr 93/17039 o izocyklosporynie. Ponadto, w patencie USA nr 5 807 820 i patencie brytyjskim nr 2 218 334A, jako kontynuację zastosowania cyklosporyn jako środków odbudowujących włosy ujawniono cyklosporyny o doskonałym wchłanianiu transdermalnym. Natomiast opis zgłoszenia patentowego P-353744 ujawnia środki do leczenia łysienia i pobudzania wzrostu włosów zawierające jako składnik aktywny pochodną cyklosporyny A modyfikowaną grupą hydroksylową w pozycji 4, a zgłoszenie patentowe WO 0051558 przedstawia środek pobudzający środek porost włosów zawierający pochodną cyklosporyny A o działaniu immunosupresyjnym.

Patent USA nr 4771122B1 dotyczy pochodnych cyklosporyny A podstawionych w pozycji 3, które wykazują właściwości immunosupresyjne, przeciwzapalne lub przeciwpasożytnicze, podczas gdy zgłoszenie patentowe P-324531 ujawnia pochodną cyklosporyny do stosowania do ochrony przed infekcjami wirusowymi.

Ujawnienie wynalazku

Niniejszego wynalazku dokonano w związku z powyższymi problemami, związanymi z działaniami ubocznymi cyklosporyny A, a jego celem jest dostarczenie środka pobudzającego porost włosów zawierającego pochodną cyklosporyny jako składnik czynny, który wykazuje doskonałą zdolność pobudzania porostu włosów.

PL 208 536 B1

Twórcy wynalazku przeprowadzili syntezę i badania rozmaitych środków pobudzających porost włosów zawierających analog cyklosporyny w pozycji 3, przedstawiony poniższym wzorem 1, jako składnik czynny, który jest wytwarzany przez syntetyzowanie rozmaitych jego pochodnych i badanie ich działania pobudzającego porost włosów, w celu opracowania nowego środka pobudzającego porost włosów.

[Wzór 1] gdzie:

A oznacza N-metylo-(4R)-4-[(E)-2-butenylo]-4-metylo-L-treoninę , kwas (2S,3R,4R,6E)-3-sulfhydrylo-4-metylo-2-(metyloamino)-6-oktenowy lub kwas (2S,4R,6E)-3-okso-4-metylo-2-(metyloamino)-6-oktenowy;

B oznacza kwas L-aminomasł owy (Abu), L-alaninę (Ala), L-treoninę (Thr), L-walinę (Val) lub L-norwalinę (Nva);

C oznacza D-aminokwas przedstawiony wzorem ogólnym 1,

CH3NH-CH(R)-COOH [wzór ogólny 1] w którym:

R jest wybrany z grupy składającej się z wodoru prostych lub rozgałęzionych grup alkilowych, alkenylowych lub alkinylowych, C1-C6, niepodstawionych lub podstawionych jedną lub więcej niż jedną z grup wybranych z grupy składającej się z grupy aminowej, hydroksylowej, halogenu, haloalkilu, grupy estrowej, alkoksylu, grupy cyjanowej, grupy nitrowej, grupy alkiloaminowej i dialkiloaminowej, i -X- R' przedstawiony wzorem ogólnym 2 below,

-X- R' [wzór ogólny 2] w którym:

X oznacza atom tlenu lub siarki, i

R' jest wybrany z grupy składającej się z wodoru, i prostych lub rozgałęzionych grup alkilowych, alkenylowych lub alkinylowych C1-C6, niepodstawionych lub podstawionych jedną lub więcej niż jedną z grup wybranych z grupy skł adają cej się z grupy aminowej, hydroksylowej, halogenu, haloalkilu, alkoksylu, grupy cyjanowej, grupy nitrowej, grupy alkiloaminowej i dialkiloaminowej;

D oznacza N-metylo-L-leucynę, γ-hydroksy N-merylo-L-leucynę lub L-walinę;

E oznacza L-walinę lub L-norwalinę;

F oznacza N-metylo-L-leucynę, γ-hydroksy-N-metylo-L-leucynę lub L-leucynę;

G oznacza L-alaninę lub L-alaninotioamid ([⁷ψ⁸ CS-NH], NH-CHCH3-CS-);

H oznacza D-aminokwas przedstawiony wzorem ogólnym 3,

-NH-CH(CH2R)-COOH [wzór ogólny 3] w którym:

R' oznacza atom wodoru lub X-R' przedstawiony wzorem ogólnym 4,

-X- R [wzór ogólny 4] w którym:

X oznacza atom tlenu lub siarki, i

R' jest wybrany z grupy składającej się z wodoru, i prostych lub rozgałęzionych grup alkilowych, alkenylowych lub alkinylowych C1-C6, niepodstawionych lub podstawionych jedną lub więcej niż jedną z grup wybranych z grupy składającej się z grupy aminowej, hydroksylowej, halogenu, haloalkilu, grupy estrowej, alkoksylu, grupy cyjanowej, grupy nitrowej, grupy alkiloaminowej i dialkiloaminowej;

I oznacza N-metylo-L-leucynę, γ-hydroksy-N-metylo-L-leucynę lub L-leucynę;

J oznacza N-metylo-L-leucynę, γ-hydroksy-N-metylo-L-leucynę lub

L-leucynę; i,

K oznacza N-metylo-L-walinę lub L-walinę.

Przebadano również środki pobudzające porost włosów zawierające analog cyklosporyny w pozycji 3, przedstawiony poniższym wzorem 2,

PL 208 536 B1

MeBmt-A-e-C-C-E-F-G-H-l-Meyal

[wzor 2] w którym:

MeBmt oznacza N-metylo-(4R)-4-[(E)-2-butenylo]-4-metylo-L-treoninę;

A' oznacza kwas L-amino-masłowy, L-alaninę, L-treoninę, L-walinę lub L-norwalinę;

B' oznacza kwas N-metylo-D-aminomasłowy, N-metylo-D-norwalinę, D-2-(metyloamino)heksa-4-ynoil, D-2-(metyloamino)pent-4-ynoil, D-2-metylotio-sarkozynę, N-metylo-O-propenylo-D-serynę lub N-metylo-D-serynę;

C' oznacza N-metylo-L-leucynę, γ-hydroksy-N-metylo-L-leucynę lub L-walinę;

D' oznacza L-walinę lub L-norwalinę;

E' oznacza N-metylo-L-leucynę, γ-hydroksy N-metylo-L-leucynę lub L-leucynę;

F' oznacza L-alaninę lub L-alaninotioamid ([⁷ψ⁸ CS-NH], NH-CHCH3-CS-);

G' oznacza D-alaninę lub D-serynę;

H' oznacza N-metylo-L-leucynę, γ-hydroksy N-metylo-L-leucynę lub L-leucynę;

I' oznacza N-metylo-L-leucynę, γ-hydroksy N-metylo-L-leucynę lub L-leucynę; i MeVal oznacza N-metylo-L-walinę.

Przebadano również środki pobudzające porost włosów zawierające analog cyklosporyny w pozycji 3, przedstawiony poniższym wzorem 3, jako składnik czynny,

MeBmt-A''-B-MeLeu-Val-MeLeiJ-Ala-DAIa”MeLeu-MeLeu-MeVal

[wzór 3] w którym:

MeBmt oznacza N-metylo-(4R)-4-[(E)-2-butenylo]-4-metylo-L-treoninę;

A oznacza L-alaninę, L-treoninę, L-walinę lub L-norwalinę;

B oznacza kwas N-metylo-D-aminomasłowy, N-metylo-D-norwalinę, D-2-(metyloamino)heksa4-ynoil, D-2-(metyloamino)pent-4-ynoil, D-2-metylotiosarkozynę, N-metylo-O-propenylo-D-serynę lub N-metylo-D-serynę;

MeLeu oznacza N-metylo-L-leucynę;

Val oznacza L-walinę;

Ala oznacza L-alaninę;

DAla oznacza D-alaninę; i

MeVal oznacza N-metylo-L-walinę.

Twórcy nieoczekiwanie stwierdzili, że cele niniejszego wynalazku można osiągnąć przez dostarczenie środka pobudzającego porost włosów, który zawiera jako składnik czynny analog cyklosporyny w pozycji 3, który to analog stanowi [D-2-metylotio-Sar³]cyklosporyna A. Inne środki pobudzające porost włosów zawierające jako składnik aktywny pozostałe, zdefiniowane powyżej analogi stanowią jedynie tło niniejszego wynalazku.

W korzystnym wariancie wykonania przedmiotem wynalazku jest środek pobudzający porost włosów zawierający w składzie analog cyklosporyny w pozycji 3, który stanowi [D-2-metylotio-Sar³]cyklosporyna A, który może być w postaci formulacji ciekłej, spreju, żelu, pasty, emulsji, kremu, odżywki lub szamponu. Środki pobudzające porost włosów zawierające w składzie pozostałe, zdefiniowane powyżej analogi cyklosporyny w pozycji 3, które mogą być w postaci formulacji ciekłej, spreju, żelu, pasty, emulsji, kremu, odżywki lub szamponu, stanowią jedynie tło niniejszego wynalazku.

Krótki opis rysunków

Powyższe i inne cele, cechy i inne zalety niniejszego wynalazku będą lepiej zrozumiałe z poniższego szczegółowego opisu, wziętego razem z załączonymi rysunkami, gdzie:

Fig. 1 przedstawia widmo ¹H-NMR [N-metylo-D-Abu³]cyklosporyny A;

Fig. 2 przedstawia widmo ¹³C-NMR [N-metylo-D-Abu³]cyklosporyny A;

Fig. 3 przedstawia widmo ¹H-NMR [N-metylo-D-Nva³]cyklosporyny A;

Fig. 4 przedstawia widmo ¹³C-NMR [N-metylo-D-Nva³]cyklosporyny A;

Fig. 5 przedstawia widmo ¹H-NMR [D-2-(metyloamino)heksa-4-ynoilo³]cyklosporyny A;

PL 208 536 B1

Fig. 6 przedstawia widmo ¹³C-NMR [D-2-(metyloamino)heksa-4-ynoilo³]cyklosporyny A;

Fig. 7 przedstawia widmo ¹H-NMR [D-2-(metyloamino)pent-4-ynoilo³]cyklosporyny A;

Fig. 8 przedstawia widmo ¹³C-NMR [D-2-(metyloamino)pent-4-ynoilo³]cyklosporyny A;

Fig. 9 przedstawia widmo ¹H-NMR [D-2-(metylotio)-Sar³]cyklosporyny A;

Fig. 10 przedstawia widmo ¹³C-NMR [D-2-(metylotio)-Sar³]cyklosporyny A;

Fig. 11 przedstawia widmo ¹H-NMR [N-metylo-O-propenylo-D-Ser³]cyklosporyny A;

Fig. 12 przedstawia widmo ¹³C-NMR [N-metylo-O-propenylo-D-Ser³]cyklosporyny A;

Fig. 13 przedstawia widmo ¹H-NMR [N-metylo-D-Ser³]cyklosporyny A; i

Fig. 14 przedstawia widmo ¹³C-NMR [N-metylo-D-Ser³]cyklosporyny A.

Najlepszy sposób realizacji wynalazku

Wynalazek zostanie dalej opisany szczegółowo w połączeniu z różnymi przykładami. Przykłady te dostarczono wyłącznie dla celów ilustracji i nie należy niniejszego wynalazku interpretować jako ograniczonego do tych przykładów.

W celu opracowania nowego środka o działaniu pobudzającym porost włosów twórcy niniejszego wynalazku zsyntetyzowali chemicznie różne analogi cyklosporyny w pozycji 3 i zbadali ich działanie pobudzające porost włosów.

P r z y k ł a d 1: Synteza analogów cyklosporyny w pozycji 3

Ogólna metoda alkilowania cyklosporyny A była następująca. Do tetrahydrofuranu (THF) dodano diizopropyloaminę ((i-Pr)2NH) i dodano roztwór n-butylolitu (BuLi) w heksanie w atmosferze azotu w temperaturze -78°C, po czym mieszano przez 30 minut. Do tak wytworzonego roztworu LDA (diizopropyloamidek litowy) dodano cyklosporynę A w THF, mieszano przez 1 h i dodano elektrofil.

1-1: Synteza [N-metylo-D-Abu³]cyklosporyny A: Związek 1

Zgodnie z powyższą ogólną metodą, do roztworu 10 równoważników LDA dodano 1,0 g cyklosporyny A w 50 ml THF w temperaturze -78°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny w temperaturze -78 °C i dodano 0,4 ml jodku etylu. Kiedy temperatura roztworu doszła do temperatury pokojowej, roztwór mieszano przez jeszcze 24 godziny i dodano 20 ml wody, po czym zatężono. Do pozostałości dodano eter (Et2O), przemyto kolejno wodą i nasyconym roztworem chlorku sodu, i wysuszono nad bezwodnym MgSO4. Po zatężeniu, pozostałość poddano chromatografii kolumnowej na silikażelu (100 g silikażelu, dichlorometan:alkohol metylowy = 96:4), a następnie HPLC, otrzymując 0,1 g związku tytułowego.

Ciężar cząsteczkowy związku oznaczono za pomocą analizy FAB MS (ZMS AX 505H). Dla potwierdzenia struktury cząsteczkowej, przeprowadzono pomiary magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR) na aparacie 600 MHz (Bruker) dla ¹H-NMR i 150 MHz (Bruker) dla ¹³C-NMR, a widma przedstawiono na figurach odpowiednio 1 i 2.

1-2: Synteza [N-metylo-D-Nva³]cyklosporyny A: Związek 2

Zgodnie z ogólną metodą, do roztworu 10 równoważników LDA dodano 1,0 g cyklosporyny A w 50 ml THF w temperaturze -78°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny w temperaturze -78°C i dodano 0,41 ml jodku propylu. Kiedy temperatura roztworu doszła do temperatury pokojowej, roztwór mieszano przez jeszcze 24 godziny i dodano 20 ml wody, po czym zatężono. Do pozostałości dodano eter (Et2O), przemyto kolejno wodą i nasyconym roztworem chlorku sodu, i wysuszono nad bezwodnym MgSO4. Po zatężeniu, pozostałość poddano chromatografii kolumnowej na silikażelu (100 g silikażelu, dichlorometan:alkohol metylowy = 96:4), a następnie HPLC, otrzymując 0,12 g związku tytułowego. Ciężar cząsteczkowy związku oznaczono za pomocą analizy FAB MS (ZMS AX 505H). Dla potwierdzenia struktury cząsteczkowej, przeprowadzono pomiary magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR) na aparacie 600 MHz (Bruker) dla ¹H-NMR i 150 MHz (Bruker) dla ¹³C-NMR, a widma przedstawiono na figurach odpowiednio 3 i 4.

1-3: Synteza [D-2-(metyloamino)heksa-4-ynoilo³]cyklosporyny A: Związek 3

Zgodnie z ogólną metodą, do roztworu 10 równoważników LDA dodano 1,0 g cyklosporyny A w 50 ml THF w temperaturze -78°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny w temperaturze -78°C i dodano 0,73 ml 1-bromo-2-butynu. Kiedy temperatura roztworu doszła do temperatury pokojowej, roztwór mieszano przez jeszcze 24 godziny i dodano 20 ml wody, po czym zatężono. Do pozostałości dodano eter (Et2O), przemyto kolejno wodą i nasyconym roztworem chlorku sodu, i wysuszono nad bezwodnym MgSO4. Po zatężeniu, pozostałość poddano chromatografii kolumnowej na silikażelu (100 g silikażelu, dichloro-metan:alkohol metylowy = 96:4), a następnie HPLC, otrzymując 0,13 g związku tytułowego. Ciężar cząsteczkowy związku oznaczono za pomocą analizy FAB MS (ZMS AX 505H). Dla potwierdzenia struktury cząsteczkowej, przeprowadzono pomiary magnetycznego rezonansu jąPL 208 536 B1 drowego (NMR) na aparacie 600 MHz (Bruker) dla ¹H-NMR i 150 MHz (Bruker) dla ¹³C-NMR, a widma przedstawiono na figurach odpowiednio 5 i 6.

1-4: Synteza [D-2-(metyloamino)pent-4-ynoilo³]cyklosporyny A: Związek 4

Zgodnie z ogólną metodą, alkilowanie przeprowadzono stosując THF (200 ml), (i-Pr)2NH (3,2 ml),

BuLi (8 ml), cyklosporynę A (3,76 g) w 50 ml THF i bromek propargilu (3,57 g). Kiedy temperatura roztworu doszła do temperatury pokojowej, roztwór mieszano przez jeszcze 24 godziny i dodano 40 ml wody, po czym zatężono. Do pozostałości dodano eter (Et2O), przemyto kolejno wodą i nasyconym roztworem chlorku sodu, i wysuszono nad bezwodnym MgSO4. Po zatężeniu, pozostałość poddano chromatografii kolumnowej na silikażelu (100 g silikażelu, dichlorometamalkohol metylowy = 96:4), a następnie HPLC, otrzymując związki tytułowe 3 (0,18 g) i 4 (0,08 g). Ciężar cząsteczkowy związku oznaczono za pomocą analizy FAB MS (ZMS AX 505H). Dla potwierdzenia struktury cząsteczkowej, przeprowadzono pomiary magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR) na aparacie 600 MHz (Bruker) dla ¹H-NMR i 150 MHz (Bruker) dla ¹³C-NMR, a widma przedstawiono na figurach odpowiednio 7 i 8.

1-5: Synteza [D-2-(metylotio)-Sar³]cyklosporyny A: Związek 5

Zgodnie z ogólną metodą, alkilowanie przeprowadzono stosując THF (100 ml), (i-Pr)2NH (1,6 ml), BuLi (4,0 ml), cyklosporynę A (1,0 g) w 30 ml THF i disulfid metylowy (Me2S2) (1,5 ml). Roztwór mieszano przez 14 godziny w temperaturze 0°C i dodano 20 ml wody, po czym zatężono. Do pozostałości dodano eter (Et2O), przemyto kolejno wodą i nasyconym roztworem chlorku sodu, i wysuszono nad bezwodnym MgSO4. Po zatężeniu, pozostałość poddano chromatografii kolumnowej na silikażelu (100 g silikażelu, dichlorometan:alkohol metylowy = 50:1 ~ 96:4), a następnie HPLC, otrzymując związki tytułowe 5 (0,36 g) i 6 (0,05 g). Ciężar cząsteczkowy związku oznaczono za pomocą analizy FAB MS (ZMS AK 505H). Dla potwierdzenia struktury cząsteczkowej, przeprowadzono pomiary magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR) na aparacie 600 MHz (Bruker) dla ¹H-NMR i 150 MHz (Bruker) dla ¹³C-NMR, a widma przedstawiono na figurach odpowiednio 9 i 10.

1-6: Synteza [N-metylo-O-propenylo-D-Ser³cyklosporyny A: Związek 6

Zgodnie z ogólną metodą, [D-metyloserynę³]cyklosporynę A (0,62 g, 0,5 mmoli), chlorek tetrabutyloamoniowy (0,11 g, 0,5 mmoli), i bromek arylowy (0,24 g, 2,0 mmoli) rozpuszczono w dichlorometanie (50 ml), następnie dodano 30% NaOH (1,5 ml), i mieszaninę mieszano przez 2 godziny. Dodano 50 ml dichlorometanu, roztwór przemyto kolejno wodą i nasyconym roztworem chlorku sodu, i wysuszono nad bezwodnym MgSO4. Zatężoną pozostałość poddano chromatografii kolumnowej na silikażelu (100 g silikażelu, dichlorometan:alkohol metylowy = 97:3), a następnie HPLC, otrzymując 0,4 g związku tytułowego. Ciężar cząsteczkowy związku oznaczono za pomocą analizy FAB MS (ZMS AX 505H). Dla potwierdzenia struktury cząsteczkowej, przeprowadzono pomiary magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR) na aparacie 600 MHz (Bruker) dla ¹H-NMR i 150 MHz (Bruker) dla ¹³C-NMR, a widma przedstawiono na figurach odpowiednio 11 i 12.

1-7: Synteza [N-metylo-D-Ser³cyklosporyny A: Związek 7

Zgodnie z ogólną metodą, do roztworu 10 równoważników LDA dodano 1,0 g cyklosporyny A w 50 ml THF w temperaturze -78°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny w temperaturze -78°C i dodano 2,0 g paraformaldehydu. Kiedy temperatura roztworu doszła do temperatury pokojowej, roztwór mieszano przez jeszcze 24 godziny i dodano 20 ml wody, po czym zatężono. Do pozostałości dodano eter (Et2O), przemyto kolejno wodą i nasyconym roztworem chlorku sodu, i wysuszono nad bezwodnym MgSO4. Po zatężeniu, pozostałość poddano chromatografii kolumnowej na silikażelu (100 g silikażelu, dichlorometan:alkohol metylowy = 96:4), a następnie HPLC, otrzymując 0,3 g związku tytułowego. Ciężar cząsteczkowy związku oznaczono za pomocą analizy FAB MS (ZMS AX 505H). Dla potwierdzenia struktury cząsteczkowej, przeprowadzono pomiary magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR) na aparacie 600 MHz (Bruker) dla ¹H-NMR i 150 MHz (Bruker) dla ¹³C-NMR, a widma przedstawiono na figurach odpowiednio 13 i 14.

Przykład preparatywny 1: tonik do włosów

1-1: Wytwarzanie toniku do włosów, zawierającego [N-metylo-D-Abu³]cyklosporynę A

Poszczególne składniki złączono i wymieszano, otrzymując trzy całkowicie rozpuszczone kompozycje toników do włosów, o składach przedstawionych poniżej w tabeli 1. Stwierdzono, że kompozycja 1 z tabeli 1 ma działanie pobudzające porost włosów na poziomie podobnym do typowego toniku do włosów, zawierającego 0,1% cyklosporyny A, jak zbadano w eksperymencie na zwierzętach według opisanego w dalszej części przykładu testowego.

PL 208 536 B1

T a b e l a 1: formulacja toniku do włosów (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
etanol	40,0	40,0	40,0
[N-metylo-D-Abu³]cyklosporyna A	0,1	1,0	8,0
octan tokoferolu	0,1	0,1	0,1
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3
Tween 20	0,5	0,5	0,5
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo
woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu

₃

1-2: Wytwarzanie toniku do włosów, zawierającego [N-metylo-D-Nva ]cyklosporynę A Poszczególne składniki złączono i wymieszano, otrzymując trzy całkowicie rozpuszczone kompozycje toników do włosów, o składach przedstawionych poniżej w tabeli 2. Stwierdzono, że kompozycja 1 z tabeli 2 ma działanie pobudzające porost włosów na poziomie podobnym do typowego toniku do włosów, zawierającego 0,1% cyklosporyny A, jak zbadano w eksperymencie na zwierzętach według opisanego w dalszej części przykładu testowego.

T a b e l a 2: formulacja toniku do włosów (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
etanol	40,0	40,0	40,0
[N-metylo-D-Nva³]cyklosporyna A	0,1	1,0	8,0
octan tokoferolu	0,1	0,1	0,1
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3
Tween 20	0,5	0,5	0,5
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo
woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu

₃

1-3: Wytwarzanie toniku do włosów, zawierającego [D-2-(metyloamino)heksa-4-ynoilo ]cyklosporynę A

Poszczególne składniki złączono i wymieszano, otrzymując trzy całkowicie rozpuszczone kompozycje toników do włosów, o składach przedstawionych poniżej w tabeli 3. Stwierdzono, że kompozycja 1 z tabeli 3 ma działanie pobudzające porost włosów na poziomie podobnym do typowego toniku do włosów, zawierającego 0,1% cyklosporyny A, jak zbadano w eksperymencie na zwierzętach według opisanego w dalszej części przykładu testowego.

PL 208 536 B1

T a b e l a 3: formulacja toniku do włosów (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
etanol	40,0	40,0	40,0
[D-2-(metyloamino)heksa-4-ynoilo³]cyklosporyna A	0,1	1,0	8,0
kwas salicylowy	0,1	0,1	0,1
octan tokoferolu	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3
Tween 20	0,5	0,5	0,5
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo
woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu

₃

1-4: Wytwarzanie toniku do włosów, zawierającego [D-2-(metyloamino)pent-4-ynoilo ]cyklosporynę A

Poszczególne składniki złączono i wymieszano, otrzymując trzy całkowicie rozpuszczone kompozycje toników do włosów, o składach przedstawionych poniżej w tabeli 4. Stwierdzono, że kompozycja 1 z tabeli 4 ma działanie pobudzające porost włosów na poziomie podobnym do typowego toniku do włosów, zawierającego 0,1% cyklosporyny A, jak zbadano w eksperymencie na zwierzętach według opisanego w dalszej części przykładu testowego.

T a b e l a 4: formulacja toniku do włosów (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
etanol	40,0	40,0	40,0
[D-2-(metyloamino)pent-4-ynoilo³]cyklosporyna A	0,1	1,0	8,0
octan tokoferolu	0,1	0,1	0,1
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3
Tween 20	0,5	0,5	0,5
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo
woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu

₃

1-5: Wytwarzanie toniku do włosów, zawierającego [D-2-metylotio-Sar ]cyklosporynę A

Poszczególne składniki złączono i wymieszano, otrzymując trzy całkowicie rozpuszczone kompozycje toników do włosów, o składach przedstawionych poniżej w tabeli 5. Stwierdzono, że kompozycja 1 z tabeli 5 ma działanie pobudzające porost włosów na poziomie podobnym do typowego toniku do włosów, zawierającego 0,1% cyklosporyny A, jak zbadano w eksperymencie na zwierzętach według opisanego w dalszej części przykładu testowego.

PL 208 536 B1

T a b e l a 5 : formulacja toniku do włosów (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
etanol	40,0	40,0	40,0
[D-2-(metylotio)-Sar³]cyklosporyna A	0,1	1,0	8,0
octan tokoferolu	0,1	0,1	0,1
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3
Tween 20	0,5	0,5	0,5
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo
woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu

₃

1-6: Wytwarzanie toniku do włosów, zawierającego [N-metylo-O-propenylo-D-Ser ]cyklosporynę A

Poszczególne składniki złączano i wymieszano, otrzymując trzy całkowicie rozpuszczone kompozycje toników do włosów, o składach przedstawionych poniżej w tabeli 6. Stwierdzono, że kompozycja 1 z tabeli 6 ma działanie pobudzające porost włosów na poziomie podobnym do typowego toniku do włosów, zawierającego 0,1% cyklosporyny A, jak zbadano w eksperymencie na zwierzętach według opisanego w dalszej części przykładu testowego.

T a b e l a 6: formulacja toniku do włosów (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
etanol	40,0	40,0	40,0
[N-metylo-O-propenylo-D-Ser³]cyklosporyna A	0,1	1,0	8,0
octan tokoferolu	0,1	0,1	0,1
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3
Tween 20	0,5	0,5	0,5
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo
i woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu

₃

1-7: Wytwarzanie toniku do włosów, zawierającego [N-metylo-D-Ser ]cyklosporynę A Poszczególne składniki złączono i wymieszano, otrzymując trzy całkowicie rozpuszczone kompozycje toników do włosów, o składach przedstawionych poniżej w tabeli 7. Stwierdzono, że kompozycja 1 z tabeli 7 ma działanie pobudzające porost włosów na poziomie podobnym do typowego toniku do włosów, zawierającego 0,1% cyklosporyny A, jak zbadano w eksperymencie na zwierzętach według opisanego w dalszej części przykładu testowego.

PL 208 536 B1

T a b e l a 7: formulacja toniku do włosów (jednostka: % wagowy)

1 Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
etanol	40,0	40,0	40,0
[N-metylo-D-Ser³]cyklosporyna A	0,1	1,0	8,0
octan tokoferolu	0,1	0,1	0,1
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3
Tween 20	0,5	0,5	0,5
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo
woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu

Przykład preparatywny 2: krem do włosów

2-1: Wytwarzanie kremu do włosów, zawierającego [N-metylo-D-Abu ]cyklosporynę A

Poszczególne składniki fazy olejowej i fazy wodnej zmieszano w oddzielnych pojemnikach i każdą z mieszanin doprowadzono do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie do temperatury 80°C. Dwie fazy zmieszano ze sobą, zemulgowano i ochłodzono do temperatury pokojowej. Domieszano dodatki, takie jak środek zapachowy i barwnik, otrzymując trzy kremy do włosów, o składach podanych poniżej w tabeli 8. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, ze składnikami fazy olejowej i wodnej włącznie.

Stwierdzono, że kompozycja 1 z tabeli 8 ma działanie pobudzające porost włosów na poziomie podobnym do znanego kremu do włosów zawierającego 0,1% cyklosporyny A, jak zbadano w eksperymencie na zwierzętach według opisanego w dalszej części przykładu testowego.

T a b e l a 8: formulacja toniku do włosów (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
parafina	5,0	5,0	5,0
alkohol cetostearylowy	5,5	5,5	5,5
wazelina	5,5	5,5	5,5
monostearynian gliceryny	3,0	3,0	3,0
eter polioksyetylenooktylododecylowy	3,0	3,0	3,0
propyloparaben	0,3	0,3	0,3
[N-metylo-D-Abu³]cyklosporyna A	0,1	1,0	8,0
gliceryna	7,0	7,0	7,0
glikol dipropylenowy	20,0	20,0	20,0
polietylenoglikol	5,0	5,0	5,0
woda	do bilansu, z wyłączeniem środka zapachowego i barwnika
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo

₃

2-2: Wytwarzanie kremu do włosów, zawierającego [N-metvlo-D-Nva ]cyklosporynę A Poszczególne składniki fazy olejowej i fazy wodnej zmieszano w oddzielnych pojemnikach i każdą z mieszanin doprowadzono do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie do temperatury 80°C. Dwie fazy zmieszano ze sobą, zemulgowano i ochłodzono do temperatury pokojowej. Domieszano

PL 208 536 B1 dodatki, takie jak środek zapachowy i barwnik, otrzymując trzy kremy do włosów, o składach podanych poniżej w tabeli 9. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, ze składnikami fazy olejowej i wodnej włącznie.

Stwierdzono, że kompozycja 1 z tabeli 9 ma działanie pobudzające porost włosów na poziomie podobnym do znanego kremu do włosów zawierającego 0,1% cyklosporyny A, jak zbadano w eksperymencie na zwierzętach według opisanego w dalszej części przykładu testowego.

T a b e l a 9: formulacja toniku do włosów (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
parafina	5,0	5,0	5,0
alkohol cetostearylowy	5,5	5,5	5,5
wazelina	5,5	5,5	5,5
monostearynian gliceryny	3,0	3,0	3,0
eter polioksyetylenooktylododecylowy	3,0	3,0	3,0
propyloparaben	0,3	0,3	0,3
[N-metylo-D-Nva³]cyklosporyna A	0,1	1,0	8,0
gliceryna	7,0	7,0	7,0
glikol dipropylenowy	20,0	20,0	20,0
polietylenoglikol	5,0	5,0	5,0
woda	do bilansu, z wyłączeniem środka zapachowego i barwnika
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo

₃

2-3: Wytwarzanie kremu do włosów, zawierającego [D-2-(metyloamino)heksa-4-ynoilo ]cyklosporynę A

Poszczególne składniki fazy olejowej i fazy wodnej zmieszano w oddzielnych pojemnikach i każdą z mieszanin doprowadzono do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie do temperatury 80°C. Dwie fazy zmieszano ze sobą, zemulgowano i ochłodzono do temperatury pokojowej. Domieszano dodatki, takie jak środek zapachowy i barwnik, otrzymując trzy kremy do włosów, o składach podanych poniżej w tabeli 10. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, ze składnikami fazy olejowej i wodnej włącznie.

Stwierdzono, że kompozycja 1 z tabeli 10 ma działanie pobudzające porost włosów na poziomie podobnym do znanego kremu do włosów zawierającego 0,1% cyklosporyny A, jak zbadano w eksperymencie na zwierzętach według opisanego w dalszej części przykładu testowego.

T a b e l a 10: formulacja toniku do włosów (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
1	2	3	4
parafina	5,0	5,0	5,0
alkohol cetostearylowy	5,5	5,5	5,5
wazelina	5,5	5,5	5,5
monostearynian gliceryny	3,0	3,0	3,0
eter polioksyetylenooktylododecylowy	3,0	3,0	3,0
propyloparaben	0,3	0,3	0,3
[D-2-(metyloamino)heksa-4-ynoilo³]cyklosporyna A	0,1	1,0	8,0

PL 208 536 B1 cd. tabeli

1	2	3	4
gliceryna	7,0	7,0	7,0
glikol dipropylenowy	20,0	20,0	20,0
polietylenoglikol	5,0	5,0	5,0
woda	do bilansu, z wyłączeniem środka zapachowego i barwnika
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo

₃

2-4: Wytwarzanie kremu do włosów, zawierającego [D-2-(metyloamino)pent-4-ynoilo ]cyklosporynę A

Poszczególne składniki fazy olejowej i fazy wodnej zmieszano w oddzielnych pojemnikach i każdą z mieszanin doprowadzono do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie do temperatury 80°C. Dwie fazy zmieszano ze sobą, zemulgowano i ochłodzono do temperatury pokojowej. Domieszano dodatki, takie jak środek zapachowy i barwnik, otrzymując trzy kremy do włosów, o składach podanych poniżej w tabeli 11. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, ze składnikami fazy olejowej i wodnej włącznie.

Stwierdzono, że kompozycja 1 z tabeli 11 ma działanie pobudzające porost włosów na poziomie podobnym do znanego kremu do włosów zawierającego 0,1% cyklosporyny A, jak zbadano w eksperymencie na zwierzętach według opisanego w dalszej części przykładu testowego.

T a b e l a 11: formulacja toniku do włosów (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
parafina	5,0	5,0	5,0
alkohol cetostearylowy	5,5	5,5	5,5
wazelina	5,5	5,5	5,5
monostearynian gliceryny	3,0	3,0	3,0
eter polioksyetylenooktylododecylowy	3,0	3,0	3,0
propyloparaben	0,3	0,3	0,3
[D-2-(metyloamino)pent-4-ynoilo³]cyklosporyna A	0,1	1,0	8,0
gliceryna	7,0	7,0	7,0
glikol dipropylenowy	20,0	20,0	20,0
polietylenoglikol	5,0	5,0	5,0
woda	do bilansu, z wyłączeniem środka zapachowego i barwnika
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo

₃

5: Wytwarzanie kremu do włosów, zawierającego [D-2-metylotio-Sar ]cyklosporynę A

Poszczególne składniki fazy olejowej i fazy wodnej zmieszano w oddzielnych pojemnikach i każdą z mieszanin doprowadzono do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie do temperatury 80°C. Dwie fazy zmieszano ze sobą, zemulgowano i ochłodzono do temperatury pokojowej. Domieszano dodatki, takie jak środek zapachowy i barwnik, otrzymując trzy kremy do włosów, o składach podanych poniżej w tabeli 12. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, ze składnikami fazy olejowej i wodnej włącznie.

Stwierdzono, że kompozycja 1 z tabeli 12 ma działanie pobudzające porost włosów na poziomie podobnym do znanego kremu do włosów zawierającego 0,1% cyklosporyny A, jak zbadano w eksperymencie na zwierzętach według opisanego w dalszej części przykładu testowego.

PL 208 536 B1

T a b e l a 12: formulacja toniku do włosów (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
parafina	5,0	5,0	5,0
alkohol cetostearylowy	5,5	5,5	5,5
wazelina	5,5	5,5	5,5
monostearynian gliceryny	3,0	3,0	3,0
eter polioksyetylenooktylododecylowy	13,0	3,0	3,0
propyloparaben	0,3	0,3	0,3
[D-2-metylotio-Sar³]cyklosporyna A	0,1	1,0	8,0
gliceryna	7,0	7,0	7,0
glikol dipropylenowy	20,0	20,0	20,0
polietylenoglikol	5,0	5,0	5,0
woda	do bilansu, z wyłączeniem środka zapachowego i barwnika
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo

₃

2-6: Wytwarzanie kremu do włosów, zawierającego [N-metylo-O-propenylo-D-Ser ]cyklosporynę A

Poszczególne składniki fazy olejowej i fazy wodnej zmieszano w oddzielnych pojemnikach i każdą z mieszanin doprowadzono do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie do temperatury 80°C. Dwie fazy zmieszano ze sobą, zemulgowano i ochłodzono do temperatury pokojowej. Domieszano dodatki, takie jak środek zapachowy i barwnik, otrzymując trzy kremy do włosów, o składach podanych poniżej w tabeli 13. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, ze składnikami fazy olejowej i wodnej włącznie.

Stwierdzono, że kompozycja 1 z tabeli 13 ma działanie pobudzające porost włosów na poziomie podobnym do znanego kremu do włosów zawierającego 0,1% cyklosporyny A, jak zbadano w eksperymencie na zwierzętach według opisanego w dalszej części przykładu testowego.

T a b e l a 13: formulacja toniku do włosów (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
1	2	3	4
Parafina	5,0	5,0	5,0
alkohol cetostearylowy	5,5	5,5	5,5
Wazelina	5,5	5,5	5,5
monostearynian gliceryny	3,0	3,0	3,0
eter polioksyetylenooktylododecylowy	3,0	3,0	3,0
Propyloparaben	0,3	0,3	0,3
[N-metylo-O-propenylo-D-Ser³]cyklosporyna A	0,1	1,0	8,0
Gliceryna	7,0	7,0	7,0
glikol dipropylenowy	20,0	20,0	20,0
polietylenoglikol	5,0	5,0	5,0
woda	do bilansu, z wyłączeniem środka zapachowego i barwnika
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo

PL 208 536 B1 ₃

2-7: Wytwarzanie kremu do włosów, zawierającego [N-metylo-D-Ser ]cyklosporynę A

Poszczególne składniki fazy olejowej i fazy wodnej zmieszano w oddzielnych pojemnikach i każdą z mieszanin doprowadzono do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie do temperatury 80°C. Dwie fazy zmieszano ze sobą, zemulgowano i ochłodzono do temperatury pokojowej. Domieszano dodatki, takie jak środek zapachowy i barwnik, otrzymując trzy kremy do włosów, o składach podanych poniżej w tabeli 14. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, ze składnikami fazy olejowej i wodnej włącznie.

Stwierdzono, że kompozycja 1 z tabeli 14 ma działanie pobudzające porost włosów na poziomie podobnym do znanego kremu do włosów zawierającego 0,1% cyklosporyny A, jak zbadano w eksperymencie na zwierzętach według opisanego w dalszej części przykładu testowego.

T a b e l a 14: formulacja toniku do włosów (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
parafina	5,0	5,0	5,0
alkohol cetostearylowy	5,5	5,5	5,5
wazelina	5,5	5,5	5,5
monostearynian gliceryny	3,0	3,0	3,0
eter polioksyetylenooktylododecylowy	3,0	3,0	3,0
propyloparaben	0,3	0,3	0,3
[N-methy-D-Ser³]cyklosporyna A	0,1	1,0	8,0
gliceryna	7,0	7,0	7,0
glikol dipropylenowy	20,0	20,0	20,0
polietylenoglikol	5,0	5,0	5,0
woda	do bilansu, z wyłączeniem środka zapachowego i barwnika
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo

₃

3-1: Wytwarzanie szamponu zawierającego [N-metylo-D-Abu ]cyklosporynę A

Zmieszano wszystkie składniki, z wyjątkiem środka zapachowego, barwnika i wody, i doprowadzono mieszaninę do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie podczas mieszania. Ochłodzono do temperatury pokojowej, po czym wymieszano mieszaninę ze środkiem zapachowym i barwnikiem. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, otrzymując trzy szampony, o składach podanych poniżej w tabeli 15.

T a b e l a 15: formulacja toniku do włosów (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
1	2	3	4
sól sodowa kwasu POE-laurylosiarkowego (roztwór wodny o stężeniu 30% wagowych)	40,0	40,0	40,0
dietanoloamid kwasów tłuszczowych oleju palmowego	3,0	3,0	3,0
glikol propylenowy	2,0	2,0	2,0
kwas metyloparaoksybenzoesowy	0,2	0,2	0,2
etanol	2,0	2,0	2,0
[N-metylo-D-Abu³]cyklosporyna A	1,0	3,0	10,0
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3

PL 208 536 B1 cd. tabeli

1	2	3	4
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo
woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu

3-2: Wytwarzanie szamponu zawierającego [N-metylo-D-Nva³]cyklosporynę A

Zmieszano wszystkie składniki, z wyjątkiem środka zapachowego, barwnika i wody, i doprowadzono mieszaninę do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie podczas mieszania. Ochłodzono do temperatury pokojowej, po czym wymieszano mieszaninę ze środkiem zapachowym i barwnikiem. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, otrzymując trzy szampony, o składach podanych poniżej w tabeli 16,

T a b e l a 16: formulacja szamponu (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
sól sodowa kwasu POE-laurylosiarkowego (roztwór wodny o stężeniu 30% wagowych)	40,0	40,0	40,0
dietanoloamid kwasów tłuszczowych oleju palmowego	3,0	3,0	3,0
glikol propylenowy	2,0	2,0	2,0
kwas metyloparaoksybenzoesowy	0,2	0,2	0,2
etanol	2,0	2,0	2,0
[N-metylo-D-Nva³] cyklosporyna A	1,0	3,0	10,0
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo
woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu

₃

3-3: Wytwarzanie szamponu zawierającego [D-2-(metyloamino)heksa-4-ynoilo ]cyklosporynę A

Zmieszano wszystkie składniki, z wyjątkiem środka zapachowego, barwnika i wody, i doprowadzono mieszaninę do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie podczas mieszania. Ochłodzono do temperatury pokojowej, po czym wymieszano mieszaninę ze środkiem zapachowym i barwnikiem. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, otrzymując trzy szampony, o składach podanych poniżej w tabeli 17.

T a b e l a 17: formulacja szamponu (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
1	2	3	4
sól sodowa kwasu POE-laurylosiarkowego (roztwór wodny o stężeniu 30% wagowych)	40,0	40,0	40,0
dietanoloamid kwasów tłuszczowych oleju palmowego	3,0	3,0	3,0
glikol propylenowy	2,0	2,0	2,0
kwas metyloparaoksybenzoesowy	0,2	0,2	0,2
etanol	2,0	2,0	2,0
[D-2-(metyloamino)heksa-4-ynoilo³]cyklosporyna A	1,0	3,0	10,0
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3

PL 208 536 B1 cd. tabeli

3-4: Wytwarzanie szamponu zawierającego [D-2-(metyloamino)pent-4-ynoilo³]cyklosporynę A

Zmieszano wszystkie składniki, z wyjątkiem środka zapachowego, barwnika i wody, i doprowadzono mieszaninę do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie podczas mieszania. Ochłodzono do temperatury pokojowej, po czym wymieszano mieszaninę ze środkiem zapachowym i barwnikiem. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, otrzymując trzy szampony, o składach podanych poniżej w tabeli 18.

T a b e l a 18: formulacja szamponu (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
sól sodowa kwasu POE-laurylosiarkowego (roztwór wodny o stężeniu 30% wagowych)	40,0	40,0	40,0
dietanoloamid kwasów tłuszczowych oleju palmowego	3,0	3,0	3,0
glikol propylenowy	2,0	2,0	2,0
kwas metyloparaoksybenzoesowy	0,2	0,2	0,2
etanol	2,0	2,0	2,0
[D-2-(metyloamino)pent-4-ynoilo³]cyklosporyna A	1,0	3,0	10,0
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo
woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu

₃

3-5: Wytwarzanie szamponu zawierającego [D-2-metylotio-Sar ]cyklosporynę A

Zmieszano wszystkie składniki z wyjątkiem środka zapachowego, barwnika i wody, i doprowadzono mieszaninę do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie podczas mieszania. Ochłodzono do temperatury pokojowej, po czym wymieszano mieszaninę ze środkiem zapachowym i barwnikiem. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, otrzymując trzy szampony, o składach podanych poniżej w tabeli 19.

T a b e l a 19: formulacja szamponu (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
1	2	3	4
sól sodowa kwasu POE-laurylosiarkowego (roztwór wodny o stężeniu 30% wagowych)	40,0	40,0	40,0
dietanoloamid kwasów tłuszczowych oleju palmowego	3,0	3,0	3,0
glikol propylenowy	2,0	2,0	2,0
kwas metyloparaoksybenzoesowy	0,2	0,2	0,2
etanol	2,0	2,0	2,0

PL 208 536 B1 cd. tabeli 19

1	2	3	4
[D-2-metylotio-Sar³]cyklosporyna A	1,0	3,0	10,0
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo
woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu '

₃

3-6: Wytwarzanie szamponu zawierającego [N-metylo-O-propenylo-D-Ser ]cyklosporynę A

Zmieszano wszystkie składniki z wyjątkiem środka zapachowego, barwnika i wody, i doprowadzono mieszaninę do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie podczas mieszania. Ochłodzono do temperatury pokojowej, po czym wymieszano mieszaninę ze środkiem zapachowym i barwnikiem. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, otrzymując trzy szampony, o składach podanych poniżej w tabeli 20.

T a b e l a 20: formulacja szamponu (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
sól sodowa kwasu POE-laurylosiarkowego (roztwór wodny o stężeniu 30% wagowych)	40,0	40,0	40,0
dietanoloamid kwasów tłuszczowych oleju palmowego	3,0	3,0	3,0
glikol propylenowy	2,0	2,0	2,0
kwas metyloparaoksybenzoesowy	0,2	0,2	0,2
etanol	2,0	2,0	2,0
[N-metylo-O-propenylo-D-Ser³]cyklosporyna A	1,0	3,0	10,0
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo
woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu

₃

3-7: Wytwarzanie szamponu zawierającego [N-metylo-D-Ser ]cyklosporynę A

Zmieszano wszystkie składniki, z wyjątkiem środka zapachowego, barwnika i wody, i doprowadzono mieszaninę do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie podczas mieszania. Ochłodzono do temperatury pokojowej, po czym wymieszano mieszaninę ze środkiem zapachowym i barwnikiem. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, otrzymując trzy szampony, o składach podanych poniżej w tabeli 21.

T a b e l a 21: formulacja szamponu (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
1	2	3	4
sól sodowa kwasu POE-laurylosiarkowego (roztwór wodny o stężeniu 30% wagowych)	40,0	40,0	40,0
dietanoloamid kwasów tłuszczowych oleju palmowego	3,0	3,0	3,0
glikol propylenowy	2,0	2,0	2,0

PL 208 536 B1 cd. tabeli

1	2	3	4
kwas metyloparaoksybenzoesowy	0,2	0,2	0,2
etanol	2,0	2,0	2,0
[N-metylo-D-Ser³]cyklosporyna A	1,0	3,0	10,0
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo
woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu

Przykład preparatywny 4: odżywka do włosów

4-1: Wytwarzanie odżywki do włosów zawierającej [N-metylo-D-Abu³]cyklosporynę A Poszczególne składniki fazy olejowej i fazy wodnej zmieszano w oddzielnych pojemnikach i każdą z mieszanin doprowadzono do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie do temperatury 80°C. Dwie fazy zmieszano ze sobą, zemulgowano i ochłodzono do temperatury pokojowej. Domieszano dodatki, takie jak środek zapachowy i barwnik, otrzymując trzy odżywki do włosów, o składach podanych poniżej w tabeli 22. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, ze składnikami fazy olejowej i wodnej włącznie.

T a b e l a 22: formulacja szamponu (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
cetanol	3,0	3,0	3,0
samoemulgowalny monostearynian gliceryny	2,0	2,0	3,0
Skwalen	10,0	10,0	10,0
[N-metylo-D-Abu³]cyklosporyna A	1,0	5,0	10,0
glikol propylenowy	2,0	2,0	2,0
Chlorek stearylodimetylobenzyloamoniowy (roztwór wodny o stężeniu 25% wagowych)	8,0	8,0	8,0
kwas metyloparaoksybenzoesowy	0,2	0,2	0,2
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3
woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo

₃

4-2: Wytwarzanie odżywki do włosów zawierającej [N-metylo-D-Nva ]cyklosporynę A Poszczególne składniki fazy olejowej i fazy wodnej zmieszano w oddzielnych pojemnikach i każdą z mieszanin doprowadzono do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie do temperatury 80°C. Dwie fazy zmieszano ze sobą, zemulgowano i ochłodzono do temperatury pokojowej. Domieszano dodatki, takie jak środek zapachowy i barwnik, otrzymując trzy odżywki do włosów, o składach podanych poniżej w tabeli 23. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, ze składnikami fazy olejowej i wodnej włącznie.

PL 208 536 B1

T a b e l a 23: formulacja szamponu (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
cetanol	3,0	3,0	3,0
samoemulgowalny monostearynian gliceryny	2,0	2,0	3,0
skwalen	10,0	10,0	10,0
[N-metylo-D-Nva³]cyklosporyna A	1,0	5,0	10,0
glikol propylenowy	2,0	2,0	2,0
chlorek stearylodimetylobenzyloamoniowy (roztwór wodny o stężeniu 25% wagowych)	8,0	8,0	8,0
kwas metyloparaoksybenzoesowy	0,2	0,2	0,2
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3
woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo

4-3: Wytwarzanie odżywki do włosów zawierającej [D-2-(metyloamino)heksa-4-ynoilo³]cyklosporynę A

Poszczególne składniki fazy olejowej i fazy wodnej zmieszano w oddzielnych pojemnikach i każdą z mieszanin doprowadzono do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie do temperatury 80°C. Dwie fazy zmieszano ze sobą, zemulgowano i ochłodzono do temperatury pokojowej. Domieszano dodatki, takie jak środek zapachowy i barwnik, otrzymując trzy odżywki do włosów, o składach podanych poniżej w tabeli 24. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, ze składnikami fazy olejowej i wodnej włącznie.

T a b e l a 24: formulacja szamponu (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
cetanol	3,0	3,0	3,0
samoemulgowalny monostearynian gliceryny	2,0	2,0	3,0
skwalen	10,0	10,0	10,0
[D-2-(metyloamino)heksa-4-ynoilo³]cyklosporyna A	1,0	5,0	10,0
glikol propylenowy	2,0	2,0	2,0
chlorek stearylodimetylobenzyloamoniowy (roztwór wodny o stężeniu 25% wagowych)	8,0	8,0	8,0
kwas metyloparaoksybenzoesowy	0,2	0,2	0,2
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3
woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo

PL 208 536 B1

4-4: Wytwarzanie odżywki do włosów zawierającej [D-2-(metyloamino)pent-4-ynoilo³]cyklosporynę A

Poszczególne składniki fazy olejowej i fazy wodnej zmieszano w oddzielnych pojemnikach i każdą z mieszanin doprowadzono do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie do temperatury 80°C. Dwie fazy zmieszano ze sobą, zemulgowano i ochłodzono do temperatury pokojowej. Domieszano dodatki, takie jak środek zapachowy i barwnik, otrzymując trzy odżywki do włosów, o składach podanych poniżej w tabeli 25. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, ze składnikami fazy olejowej i wodnej włącznie.

T a b e l a 25: formulacja szamponu (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
cetanol	3,0	3,0	3,0
samoemulgowalny monostearynian gliceryny	2,0	2,0	3,0
skwalen	10,0	10,0	10,0
[D-2-(metyloamino)pent-4-ynoilo³]cyklosporyna A	1,0	5,0	10,0
glikol propylenowy	2,0	2,0	2,0
chlorek stearylodimetylobenzyloamoniowy (roztwór wodny o stężeniu 25% wagowych)	8,0	8,0	8,0
kwas metyloparaoksybenzoesowy	0,2	0,2	0,2
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3
woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo

₃

4-5: Wytwarzanie odzywki do włosów zawierającej [D-2-metylotio-Sar ]cyklosporynę A Poszczególne składniki fazy olejowej i fazy wodnej zmieszano w oddzielnych pojemnikach i każdą z mieszanin doprowadzono do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie do temperatury 80°C. Dwie fazy zmieszano ze sobą, zemulgowano i ochłodzono do temperatury pokojowej. Domieszano dodatki, takie jak środek zapachowy i barwnik, otrzymując trzy odżywki do włosów, o składach podanych poniżej w tabeli 26. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, ze składnikami fazy olejowej i wodnej włącznie.

T a b e l a 26: formulacja szamponu (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
cetanol	3,0	3,0	3,0
samoemulgowalny monostearynian gliceryny	2,0	2,0	3,0
Skwalen	10,0	10,0	10,0
[D-2-metylotio-Sar³]cyklosporyna A	1,0	5,0	10,0
glikol propylenowy	2,0	2,0	2,0
chlorek stearylodimetylobenzyloamoniowy (roztwór wodny o stężeniu 25% wagowych)	8,0	8,0	8,0
kwas metyloparaoksybenzoesowy	0,2	0,2	0,2
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3
Woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo

PL 208 536 B1

4-6: Wytwarzanie odżywki do włosów zawierającej [N-metylo-O-propenylo-D-Ser³]cyklosporynę A

Poszczególne składniki fazy olejowej i fazy wodnej zmieszano w oddzielnych pojemnikach i każdą z mieszanin doprowadzono do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie do temperatury 80°C. Dwie fazy zmieszano ze sobą, zemulgowano i ochłodzono do temperatury pokojowej. Domieszano dodatki, takie jak środek zapachowy i barwnik, otrzymując trzy odżywki do włosów, o składach podanych poniżej w tabeli 27. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, ze składnikami fazy olejowej i wodnej włącznie.

T a b e l a 27: formulacja szamponu (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
cetanol	3,0	3,0	3,0
samoemulgowalny monostearynian gliceryny	2,0	2,0	3,0
skwalen	10,0	10,0	10,0
[N-metylo-O-propenylo-D-Ser³]cyklosporyna A	1,0	5,0	10,0
glikol propylenowy	2,0	2,0	2,0
chlorek stearylodimetylobenzyloamoniowy (roztwór wodny o stężeniu 25% wagowych)	8,0	8,0	8,0
kwas metyloparaoksybenzoesowy	0,2	0,2	0,2
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3
Woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
Barwnik	typowo	typowo	typowo

₃

4-7: Wytwarzanie odżywki do włosów zawierającej [N-metylo-D-Ser ]cyklosporynę A Poszczególne składniki fazy olejowej i fazy wodnej zmieszano w oddzielnych pojemnikach i każdą z mieszanin doprowadzono do całkowitego rozpuszczenia przez ogrzewanie do temperatury 80°C. Dwie fazy zmieszano ze sobą, zemulgowano i ochłodzono do temperatury pokojowej. Domieszano dodatki, takie jak środek zapachowy i barwnik, otrzymując trzy odżywki do włosów, o składach podanych poniżej w tabeli 28. Dodano wodę do 100% całkowitej wagi, ze składnikami fazy olejowej i wodnej włącznie.

T a b e l a 28: formulacja szamponu (jednostka: % wagowy)

Składniki	Kompozycja 1	Kompozycja 2	Kompozycja 3
cetanol	3,0	3,0	3,0
samoemulgowalny monostearynian gliceryny	2,0	2,0	3,0
Skwalen	10,0	10,0	10,0
[N-metylo-D-Ser³]cyklosporyna A	1,0	5,0	10,0
glikol propylenowy	2,0	2,0	2,0
chlorek stearylodimetylobenzyloamoniowy (roztwór wodny o stężeniu 25% wagowych)	8,0	8,0	8,0
kwas metyloparaoksybenzoesowy	0,2	0,2	0,2
kwas salicylowy	0,3	0,3	0,3
L-mentol	0,3	0,3	0,3
Woda	do bilansu	do bilansu	do bilansu
środek zapachowy	typowo	typowo	typowo
barwnik	typowo	typowo	typowo

PL 208 536 B1

Przykład testowy: Test działania pobudzającego porost włosów przez pochodne cyklosporyny według wynalazku

Zastosowano myszy C57BL/6 płci żeńskiej w wieku 6 do 7 tygodni. Po usunięciu za pomocą golarki elektrycznej włosów na środku grzbietu myszy zważono i przypisano przypadkowo do grup testowych przy równomiernym rozkładzie wagi. Myszom dano jeden dzień na adaptację. Od następnego dnia myszom nanoszono przez 30 dni jeden raz dziennie na grzbiet cyklosporynę A i pochodne cyklosporyny A (Związki 1 do 7) uzyskane za pomocą HPLC w przykładzie 1 w ilościach 100 μl (stężenie 0,1% w/v). Wyniki określano wizualnie jako stopień odrostu włosów. Zbadano szybkości odrastania nowych włosów na odpowiednich obszarach z usuniętymi włosami.

Jak jest widoczne z tabeli 29, pochodne cyklosporyny według wynalazku mają istotne działanie pobudzające porost włosów w porównaniu z grupą kontrolną, w której myszom nanoszono tylko wehikulum. Pochodne wykazują znaczące działanie pobudzające porost włosów w porównaniu z cyklosporyną A. Jednocześnie w okresie 30 dni porównanie wyglądu grzbietów wykazało, że zarówno w grupach kontrolnych jak i grupach testowych nie występuje specyficzne podrażnienie skóry.

T a b e l a 29: Ocena pochodnych cyklosporyny w oparciu o odrastanie włosów u myszy

Zastosowany związek	wehikulum	cyklosporyna A	1	2	3	4	5	6	7
Współczynnik powierzchniowy odrastania włosów (%)	35	91	95	91	95	96	93	94	90

Na podstawie powyższych wyników pochodne cyklosporyny, w tym pochodną cyklosporyny według wynalazku, można formułować w dowolnej formie, w tym formach ciekłych, sprejach, żelach, pastach, emulsjach, kremach, odżywkach, szamponach i podobnych. Dostępne są różnorodne formy, aczkolwiek biorąc pod uwagę wysokie zapotrzebowanie handlowe, najbardziej preferowane są toniki do włosów, odżywki i szampony. Jak ujawniono w powyższym przykładzie testowym, pochodne cyklosporyny wykazują doskonałe działanie pobudzające porost włosów w porównaniu z kontrolą.

Stosowalność przemysłowa

Jak widać z powyższego opisu, niniejszy wynalazek dostarcza środka pobudzającego porost włosów, zawierającego jako składnik czynny pochodną cyklosporyny A podstawioną w pozycji 3 cy₃ klosporyny A, którą stanowi [D-2-metylo-Sar³]cyklosporyna A, i która wykazuje doskonałe działanie pobudzające porost włosów.

Claims

1. Środek pobudzający porost włosów, znamienny tym, że zawiera [D-2-metylotio-Sar³]cyklosporynę A jako składnik czynny.

2. Środek pobudzający porost włosów według zastrz. 1, znamienny tym, że jest w postaci formulacji wybranej z grupy składającej się z formulacji ciekłej, spreju, żelu, pasty, emulsji, kremu, odżywki i szamponu.