PL202680B1 - Nowe pochodne pirymidyno-2,4,6-trionu, środek farmaceutyczny i zastosowanie tych pochodnych - Google Patents

Nowe pochodne pirymidyno-2,4,6-trionu, środek farmaceutyczny i zastosowanie tych pochodnych

Info

Publication number
PL202680B1
PL202680B1 PL357385A PL35738500A PL202680B1 PL 202680 B1 PL202680 B1 PL 202680B1 PL 357385 A PL357385 A PL 357385A PL 35738500 A PL35738500 A PL 35738500A PL 202680 B1 PL202680 B1 PL 202680B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
phenyl
pyrimidine
piperazin
trione
chlorophenoxy
Prior art date
Application number
PL357385A
Other languages
English (en)
Other versions
PL357385A1 (pl
Inventor
Frank Grams
Hans-Willi Krell
Herbert Leinert
Ernesto Menta
Gerd Zimmermann
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of PL357385A1 publication Critical patent/PL357385A1/pl
Publication of PL202680B1 publication Critical patent/PL202680B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/52—Two oxygen atoms
    • C07D239/54—Two oxygen atoms as doubly bound oxygen atoms or as unsubstituted hydroxy radicals
    • C07D239/545—Two oxygen atoms as doubly bound oxygen atoms or as unsubstituted hydroxy radicals with other hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A61K31/515—Barbituric acids; Derivatives thereof, e.g. sodium pentobarbital
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

Przedmiotem wynalazku są nowe pochodne pirymidyno-2,4,6-trionu, środek farmaceutyczny i zastosowanie tych pochodnych do wytwarzania leków. Zwią zki te wykazują znaczą ce dział anie przeciwnowotworowe i przeciwprzerzutowe.
W normalnych tkankach istnieje równowaga pomię dzy syntezą i rozkł adem. Macierz pozakomórkowa jest rozkładana przez proteinazy, które należą do co najmniej trzech grup metaloproteinaz macierzy. Są to kolagenazy, żelatynazy i stromelizyny. Normalnie istnieją specyficzne inhibitory dla tych enzymów katabolicznych, takie jak makroglobuliny α2 i TIMP (= inhibitor tkankowy metaloproteinaz (MMP)), tak że nie zachodzi nadmierny rozkład macierzy pozakomórkowej. Adamalizyny stanowią pokrewną grupę proteinaz.
Znaczącym składnikiem adamalizyn jest TACE (enzym konwertujący α-TNF).
Scharakteryzowano co najmniej 17 różnych oraz wysoce homologicznych rodzajów MMP, w tym kolagenazę fibroblastu śródmiąższowego (MMP-1, HFC), kolagenazę neutrofilową (MMP-8, HNC), dwie żelatynazy, stromelizyny (takie jak HSL-1) i HPUMP (najnowszy przegląd, patrz Birkedal-Hansen H., Moore W.G.I., Bodden M.K., Windsor L.J., Birkedal-Hansen B., DeCarlo A., Engler J.A., Critical Rev., Oral Biol. Med. (1993) 4, 197-250. Proteinazy te wykazują liczne wspólne cechy strukturalne i funkcjonalne, ale różnią się nieco specyficznością względem substratów. Tylko HNC i HFC są zdolne do rozszczepiania natywnych kolagenów trójhelisowych typu I, II i III w pojedynczym wiązaniu, z wytworzeniem fragmentów o długości stanowiącej 3/4 i 1/4 długości natywnego łańcucha. Obniża to temperaturę topnienia kolagenu, tak że staje się on dostępny do dalszego zaatakowania przez inne enzymy rozkładające macierz.
Jednakże niekontrolowany nadmierny rozkład tej macierzy jest charakterystyczny dla wielu stanów patologicznych, np. w obrazie klinicznym reumatoidalnego zapalenia stawów, zapalenie kości i stawów oraz stwardnienia rozsianego, w tworzeniu przerzutów nowotworowych, owrzodzenia rogówki, chorobach zapalnych i inwazyjnych oraz w chorobach kości i zębów.
Można przypuszczać, że na patogenezę tych obrazów klinicznych można korzystnie oddziaływać przez podawanie inhibitorów metaloproteinazy macierzy. Liczne związki są znane z literatury (patrz np. artykuł przeglądowy D.E. Levy, A.M. Ezrin Emerging Drugs 2, 205-230 (1997), M. Whittaker, P. Brown, Curr. Opin. Drug Discovery Dev. (1998), 1(2), 157-164, lub są opisane w literaturze patentowej, głównie z ugrupowaniem kwasu hydroksamowego, grupą tiolową lub fosfinową jako grupą wiążącą cynk [patrz np. WO-A-9209563 (Glycomed), EP-A-497192 Hoffmann-La Roche), WO-A-9005719 (British Technology), EP-A-489577 (Celltech), EP-A-320118 (Beechem), US-A-4595700 (Searle), WO 97/20824 Agouron Pharmaceuticals), WO 96/15096 (Bayer Corporation)].
Niektóre z tych związków wykazują wysoką aktywność jako inhibitory metaloproteinaz macierzy, ale ich dostępność po podawaniu doustnym jest bardzo niska. Takie związki często wykazują ponadto szeroki zakres hamowania metaloproteinaz, co może być związane z niepożądanymi skutkami ubocznymi i toksycznością.
Pochodne pirymidyno-2,4,6-trionu opisano w EP 0869947 ogólnie jako inhibitory metaloproteinaz macierzy. Jednakże istnieje wciąż bardzo duże zapotrzebowanie na nowe związki o niskiej toksyczności, bez skutków ubocznych i o wyraźnym działaniu hamującym wobec metaloproteinaz, zwłaszcza jako środki do długotrwałego leczenia wzrostu nowotworu i przerzutów.
Nieoczekiwanie stwierdzono, że nowe pochodne 5,5-podstawionego pirymidyno-2,4,6-trionu jako inhibitory metaloproteinazy macierzy wykazują polepszone działanie w porównaniu ze związkami ujawnionymi w EP0869947, a ponadto wykazują dobrą dostępność przy podawaniu doustnym.
Wynalazek dotyczy zatem nowych pochodnych pirymidyno-2,4,6-trionu o ogólnym wzorze I
PL 202 680 B1 w którym
R1 oznacza fenoksyl, w którym fenyl może być podstawiony jednym lub większą liczbą podstawników wybranych z grupy obejmującej atom chlorowca, hydroksyl, C1-C6-alkoksyl, C1-C6-alkil, grupę cyjanową i grupę nitrową, a
R2 oznacza pirymidynyl, pirazynyl, ewentualnie w postaci N-tlenków, albo fenyl podstawiony -SO2NR3R4, gdzie R3 i R4 są takie same lub różne i oznaczają atom wodoru; C1-C6 alkil o łańcuchu prostym lub rozgałęzionym, który może być podstawiony jedną lub większą liczbą grup OH, N(CH3)2, albo może zawierać atom tlenu jako człon łańcucha, albo oznaczają COR5, gdzie R5 oznacza C1-C6-alkil, który może być podstawiony grupą NH2.
Korzystne są związki o wzorze I, w którym R1 oznacza fenoksyl podstawiony jednym lub większą liczbą podstawników z grupy obejmującej atom chloru, atom bromu, metyl i t-butyl.
Korzystne są również związki o wzorze I, w którym R3 znaczą atom wodoru, a R4 oznacza -CH2CH2OH; -CH2CH2N(CH3)2; -CH2CH(OH)-CH2OH; -CH-(CH2OH)2; -CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2OH; lub -C-(CH2OH)3.
Szczególnie korzystne są związki o wzorze I, wybrane z grupy obejmującej:
5-(4-(4-chlorofenoksy)fenylo)-5-(4-pirymidyn-2-ylopiperazyno)pirymidyno-2,4,6-trion,
5-[4-(4-chlorofenoksy)fenylo]-5-(2,3,5,6-tetrahydro[1,2']bipirazynyl-4-ilo)pirymidyno-2,4,6-trion,
5-[4-(3,4-dichlorofenoksy)fenylo]-5-(4-pirymidyn-2-ylopiperazyn-1-ylo)pirymidyno-2,4,6-trion,
5-[4-(3,4-dichlorofenoksy)fenylo]-5-(2,3,5,6-tetrahydro[1,2']bipirazynyl-4-ilo)pirymidyno-2,4,6-trion,
5-[4-(4-bromofenoksy)fenylo]-5-(4-pirymidyn-2-ylopiperazyn-1-ylo)pirymidyno-2,4,6-trion,
4-(4-5-[4-(4-chlorofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)-N-(2-hydroksyetylo)benzenosulfonoamid,
4-(4-5-[4-(4-bromofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)benzenosulfonoamid,
4-(4-5-[4-(4-bromofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)-N-(2-dimetyloaminoetylo)benzenosulfonoamid,
4-(4-5-[4-(4-chlorofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)benzenosulfonoamid,
4-(4-5-[4-(4-chlorofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)-N,N-bis-(2-hydroksyetylo)benzenosulfonoamid,
N-(2,3-dihydroksypropylo)-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5-ylo]piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamid,
N-(2-hydroksy-1-hydroksymetyloetylo)-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5-ylo]piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamid,
N-2-[2-(2-hydroksyetoksy)etoksy]etylo-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5-ylo]piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamid,
N-(2-hydroksy-1,1-bis-hydroksymetyloetylo)-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5-ylo]piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamid,
4-(4-5-[4-(4-chlorofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)-N-(2-hydroksy-1,1-bishydroksymetyloetylo)benzenosulfonoamid,
N-(2-okso-[1,3]dioksolan-4-ylometylo)-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5-ylo]piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamid.
Wynalazek dotyczy również środka farmaceutycznego zawierającego substancję czynną w połączeniu z farmaceutycznie dopuszczalnymi zaróbkami i rozcieńczalnikami, przy czym cechą tego środka jest to, że jako substancję czynną zawiera związek zdefiniowany powyżej.
Wynalazek dotyczy ponadto zastosowania związków zdefiniowanych powyżej do wytwarzania leku o działaniu przeciwnowotworowym i/lub przeciwprzerzutowym.
Określenie C1-C6-alkil oznacza korzystnie metyl, etyl, propyl, izopropyl lub t-butyl.
Atom chlorowca oznacza atom fluoru, chloru, bromu, jodu, korzystnie atom chloru lub bromu.
Gdy związki o ogólnym wzorze I zawierają jeden lub większą liczbę asymetrycznych atomów węgla, to wówczas mogą występować jako związki optycznie czynne.
PL 202 680 B1
Związki o ogólnym wzorze I można syntetyzować znanymi sposobami, korzystnie sposobem polegającym na tym, że związki ogólnym wzorze II
w którym R1 ma wyż ej podane znaczenie, a T oznacza grupę odszczepiając ą się , taką jak Hal lub OSO2R3, przy czym Hal oznacza atom chloru, bromu lub jodu, a R3 oznacza aryl lub metyl, poddaje się reakcji ze związkiem o ogólnym wzorze III
w którym R2 ma wyżej podane znaczenie, po czym otrzymane związki o wzorze (I) ewentualnie przeprowadza w farmaceutycznie dopuszczalne sole.
Związki o ogólnym wzorze II można syntetyzować sposobami analogicznymi do znanych z literatury. Tak np. pirymidyno-2,4,6-triony bromowane w pozycji 5 można syntetyzować w reakcji odpowiedniego estru dialkilowego kwasu bromomalonowego z mocznikiem (np. Acta Chim. Acad. Sci. Hung. 107 (2), 139 (1981)). Odpowiednie bromowane lub chlorowane związki o ogólnym wzorze II można otrzymać w reakcji pirymidyno-2,4,6-trionów podstawionych w pozycji 5 R1-fenylem z bromem (analogicznie do J. Prakt. Chemie 136, 329 (1933) lub J. Chem. Soc. 1931, 1870) lub z chlorkiem sulfurylu (J. Chem. Soc. 1938, 1622), albo z N-bromosukcynoimidem lub z podobnymi środkami bromującymi. Procedury takie opisano również w EP0869947.
Aminy o ogólnym wzorze III są dostępne w handlu lub zwykle znane z literatury albo wytwarza się je w sposób analogiczny do sposobów opisanych w części doświadczalnej.
Pirymidyno-2,4,6-triony o wzorze II, w którym T oznacza atom wodoru, można wytwarzać zgodnie ze znanymi sposobami w reakcji estru kwasu malonowego z mocznikiem (patrz np. J. Med. Chem. 10, 1078 (1967) lub Helvetica Chim. Acta 34, 459 (1959), Pharmacie 38 (1), 65 (1983)) lub EP0869947. Reakcje zwykle prowadzi się w alkoholach, takich jak metanol, etanol lub butanol, w obecności odpowiedniego alkoholanu sodu, w temperaturze 40 - 100°C.
Estry kwasu malonowego, niezbędne do wytwarzania pirymidyno-2,4,6-trionów, są znane z literatury lub można je wytwarzać sposobami znanymi w literaturze. Korzystny sposób wytwarzania kwasów malonowych, gdzie R1 ma wyżej podane znaczenie, przedstawiono na poniższym schemacie:
Przykłady tych reakcji można znaleźć w Houben-Weyl, tom E5/2, J. Org. Chem. 46, 2999 (1981) i Arch. Pharm. 323, 579 (1990).
Związki o ogólnym wzorze I mogą zawierać jedno lub większą liczbę centrów chiralności, a zatem mogą występować w postaci racemicznej lub optycznie czynnej. Racematy można rozdzielać znanymi sposobami na enancjomery. Korzystnie diastereomeryczne sole, które można rozdzielić drogą
PL 202 680 B1 krystalizacji, wytwarza się z mieszanin racemicznych drogą reakcji z optycznie czynnym kwasem, takim jak np. kwas D- lub L-winowy, kwas migdałowy, kwas jabłkowy, kwas mlekowy lub kwas kamforosulfonowy, albo z optycznie czynną aminą, taką jak np. D- lub L-a-fenyloetyloamina, efedryna, chinidyna lub cynchonidyna.
Sole metali alkalicznych, sole metali ziem alkalicznych, takich jak sole Ca lub Mg, sole amonowe i amoniowe, octany lub chlorowodorki, są głównie stosowane jako farmaceutycznie dopuszczalne sole, które wytwarza się zwykłym sposobem np. przez potraktowanie związków zasadami nieorganicznymi lub organicznymi albo kwasami nieorganicznymi, np. wodorotlenkiem sodu, wodorotlenkiem potasu, wodą amoniakalną, C1-C4-alkiloaminami, takimi jak np. trietyloamina, albo kwasem chlorowodorowym. Sole zwykle oczyszcza się drogą powtórnego strącania wody/acetonu.
Nowe związki o wzorze I i ich sole można podawać dojelitowo lub pozajelitowo w postaci ciekłej lub stałej. W tym aspekcie bierze się pod uwagę wszystkie zwykłe postacie do podawania, takie jak np. tabletki, kapsułki, powlekane tabletki, syropy, roztwory, zawiesiny, itp. Wodę, która zawiera środki pomocnicze, takie jak stabilizatory, solubilizatory i bufory, które zazwyczaj stosuje się w roztworach do iniekcji, korzystnie stosuje się jako nośnik w preparatach do iniekcji.
Takimi środkami pomocniczymi są np. bufor winianowy lub cytrynianowy, etanol, środki kompleksujące (takie jak kwas etylenodiaminotetraoctowy i jego nietoksyczne sole), polimery o wysokiej masie cząsteczkowej (takie jak ciekły poli(tlenek etylenu)) do regulowania lepkości. Ciekłe substancje nośnikowe w przypadku roztworów do iniekcji muszą być jałowe i korzystnie są dozowane do ampułek. Stałymi substancjami nośnikowymi są np. skrobia, laktoza, mannitol, metyloceluloza, talk, wysoce rozproszone kwasy krzemowe, kwasy tłuszczowe o wysokiej masie cząsteczkowej (takie jak kwas stearynowy), żelatyny, agar, fosforan wapnia, stearynian magnezu, tłuszcze zwierzęce i roślinne, stałe polimery o wysokiej masie cząsteczkowej (takie jak glikole polietylenowe); odpowiednie preparaty do podawania doustnego mogą ewentualnie zawierać środki smakowo-zapachowe i słodzące.
Dawka zależy od wielu czynników, takich jak sposób podawania, rodzaj, wiek i/lub indywidualny stan chorego. Dzienne dawki do podawania wynoszą około 10-1000 mg/człowieka, korzystnie 100-500 mg/człowieka, i mogą być przyjmowane pojedynczo lub jako dawki podzielone.
Związki według wynalazku można stosować w postaci proleków, które ulegają przemianie in vivo w farmakologicznie czynny związek. Najbardziej znanymi prolekami są estry kwasów karboksylowych.
P r z y k ł a d 1
5-(4-(4-Chlorofenoksy)fenylo)-5-(4-pirymidyn-2-ylopiperazyno)pirymidyno-2,4,6-trion
A) 1-(4-(4-Chlorofenoksy)fenyloetanon
4-Fluoroacetofenon (24,4 g) rozpuszczono w dimetyloformamidzie (180 ml), dodano 4-chlorofenolu (22,8 g) i węglanu potasu (29,5 g). Mieszaninę ogrzewano w trakcie mieszania przez 7 godzin w temperaturze wrzenia w warunkach powrotu skroplin. Po ochłodzeniu mieszaninę rozcieńczono wodą i wyekstrahowano chlorkiem metylenu. Fazę organiczną przemyto wodą, wysuszono i odparowano, w wyniku czego otrzymano 38 g krystalicznej substancji stałej. T.t. 66-68°C.
B) 2-(4-(4-Chlorofenoksy)fenylo)morfolin-4-yloetanotion
Porcję 12,4 g produktu otrzymanego powyższym sposobem zmieszano z siarką (4 g) i morfoliną (8,8 ml). Mieszaninę ogrzano w 150°C przez 2 godziny, ochłodzono w łaźni z lodem i potraktowano etanolem (20 ml) przez 30 minut. Odsączone kryształy zebrano i poddano rekrystalizacji z etanolu, w wyniku czego otrzymano 13 g związku tytułowego. T.t. 104-105°C.
C) Kwas (4-(4-chlorofenoksy)fenylo)octowy
Porcję 10,4 g związku wytworzonego w etapie B ogrzano razem z 50% kwasem siarkowym (200 ml) w 130°C przez 8 godzin. Po ochłodzeniu do temperatury pokojowej, mieszaninę reakcyjną rozcieńczono wodą (300 ml) i wyekstrahowano octanem etylu. Fazę organiczną przemyto wodą, a następnie wyekstrahowano 2N roztworem węglanu sodu. Fazę wodną zakwaszono rozcieńczonym kwasem chlorowodorowym, dodano octanu etylu, fazę organiczną oddzielono, wysuszono i odparowano, w wyniku czego otrzymano 5,1 g brązowawej pozostałości. T.t. 98-100°C.
D) Ester metylowy kwasu (4-(4-chlorofenoksy)fenylo)octowego
Porcję 5,1 g produktu z etapu C rozpuszczono w metanolu (50 ml). Roztwór ochłodzono do -10°C i potraktowano chlorkiem tionylu (3 ml), a następnie ogrzewano w temperaturze wrzenia w warunkach powrotu skroplin przez 1 godzinę. Mieszaninę reakcyjną odparowano i pozostałość rozpuszczono w eterze. Fazę eterową przemyto wodą, wysuszono i odparowano, w wyniku czego otrzymano 5,1 g czerwonawo-brązowego oleju.
PL 202 680 B1
E) Ester dimetylowy kwasu 2-(4-(4-chlorofenoksy)fenylo)malonowego
Zawiesinę wodorku sodu (350 mg) w węglanie dimetylu (10 ml) potraktowano w temperaturze pokojowej produktem otrzymanym w etapie D. Mieszaninę ogrzewano w 90°C w ciągu 1 godziny, ochłodzono, wlano do wody z lodem i wyekstrahowano chlorkiem metylenu. Ekstrakt wysuszono i odparowano, w wyniku czego otrzymano 5,7 związku tytułowego w postaci oleju.
F) 5-(4-(4-Chlorofenoksy)fenylo)pirymidyno-2,4,6-trion
Sód (800 mg) rozpuszczono w etanolu (80 ml). Do tego roztworu dodano mocznika (1,65 g) i roztworu związku otrzymanego powyżej w etanolu (5,5 g). Mieszaninę ogrzewano przez 3 godziny w temperaturze wrzenia w warunkach powrotu skroplin, ochłodzono do temperatury pokojowej, potraktowano wodą z lodem (100 ml) i zakwaszono rozcieńczonym kwasem chlorowodorowym. Osad zebrano, przemyto wodą i wysuszono, w wyniku czego otrzymano 5 g związku tytułowego. T.t. 257-258°C.
G) 5-Bromo-5-(4-(4-chlorofenoksy)fenylo)pirymidyno-2,4,6-trion
Zawiesinę związku otrzymanego w etapie F (6,3 g), N-bromosukcynoimidu (4,1 g) i nadtlenku dibenzoilu (100 mg) w tetrachlorku węgla (120 ml) mieszano przez 3 godziny w temperaturze pokojowej. Mieszaninę odparowano, pozostałość wyekstrahowano octanem etylu. Fazę organiczną wysuszono i odparowano, w wyniku czego otrzymano 7,5 g związku tytułowego w postaci lepkiego oleju.
H) 5-(4-(4-Chlorofenoksy)fenylo)-5-(4-pirymidyn-2-ylopiperazyno)pirymidyno-2,4,6-trion
Roztwór związku z etapu G (410 mg) w metanolu (5 ml) potraktowano N-(pirymidyn-2-ylo)piperazyną (330 mg). Mieszaninę mieszano przez 24 godziny. Pozostałość otrzymaną po odparowaniu mieszaniny reakcyjnej poddano chromatografii na żelu krzemionkowym z użyciem 5% chlorku metylenu/metanolu jako eluentem. W wyniku połączenia właściwych frakcji otrzymano 410 mg związku tytułowego w postaci amorficznej substancji stałej, którą zidentyfikowano metodą spektroskopii masowej: m/e 492.
P r z y k ł a d 2
5-[4-(4-Chlorofenoksy)fenylo]-5-(2,3,5,6-tetrahydro[1,2']bipirazynyl-4-ilo)pirymidyno-2,4,6-trion Związek tytułowy wytworzono sposobem analogicznym do opisanego w przykładzie 1, etap H, z uż yciem 330 mg 1-(pirazyn-2-ylo)piperazyny zamiast N-(pirymidyn-2-ylo)piperazyny, i otrzymano 460 mg związku tytułowego w postaci amorficznego produktu zidentyfikowanego metodą spektrometrii masowej: m/e 492.
P r z y k ł a d 3
Następujące związki wytworzono z zastosowaniem procedur opisanych w przykładzie 1, zastępując
4-chlorofenol odpowiednimi fenolami. Końcowe produkty zidentyfikowanego metodą spektrometrii masowej.
Nr Nazwa chemiczna m/e
1 5-[4-(3,4-Dichlorofenoksy)fenylo]-5-(4-pirymidyn-2-ylopiperazyn-1-ylo)pirymidyno-2,4,6-trion 526
2 5-[4-(3,4-Dichlorofenoksy)fenylo]-5-(2,3,5,6-tetrahydro[1,2']bipirazynyl-4-ilo)pirymidyno-2,4,6-trion 526
3 5-[4-(2,4-Dichlorofenoksy)fenylo]-5-(4-pirymidyn-2-ylopiperazyn-1-ylo)pirymidyno-2,4,6-trion 526
4 5-[4-(2,4-Dichlorofenoksy)fenylo]-5-(2,3,5,6-tetrahydro[1,2']bipirazynyl-4-ilo)pirymidyno-2,4,6-trion 526
5 5-[4-(2-Chlorofenoksy)fenylo]-5-(4-pirymidyn-2-ylopiperazyn-1-ylo)pirymidyno-2,4,6-trion 492
6 5-[4-(2-Chlorofenoksy)fenylo]-5-(2,3,5,6-tetrahydro[1,2']bipirazynyl-4-ilo)pirymidyno-2,4,6-trion 492
7 5-[4-(Fenoksy)fenylo]-5-(4-pirymidyn-2-ylopiperazyn-1-ylo)pirymidyno-2,4,6-trion 458
8 5-[4-(Fenoksy)fenylo]-5-(2,3,5,6-tetrahydro[1,2']bipirazynyl-4-ilo)pirymidyno-2,4,6-trion 458
9 5-[4-(4-Metylofenoksy)fenylo]-5-(4-pirymidyn-2-ylopiperazyn-1-ylo)pirymidyno-2,4,6-trion 472
10 5-[4-(4-Metylofenoksy)fenylo]-5-(2,3,5,6-tetrahydro[1,2']bipirazynyl-4-ilo)pirymidyno-2,4,6-trion 472
11 5-[4-(4-tert-Butylofenoksy)fenylo]-5-(4-pirymidyn-2-ylopiperazyn-1-ylo)pirymidyno-2,4,6-trion 514
12 5-[4-(4-tert-Butylofenoksy)fenylo]-5-(2,3,5,6-tetrahydro[1,2']bipirazynyl-4-ilo)pirymidyno-2,4,6-trion 514
13 5-[4-(3,4-Dimetylofenoksy)fenylo]-5-(4-pirymidyn-2-ylopiperazyn-1-ylo)pirymidyno-2,4,6-trion 486
14 5-[4-(3,4-Dimetylofenoksy)fenylo]-5-(2,3,5,6-tetrahydro[1,2']bipirazynyl-4-ilo)pirymidyno-2,4,6-trion 486
15 5-[4-(4-Bromofenoksy)fenylo]-5-(4-pirymidyn-2-ylopiperazyn-1-ylo)pirymidyno-2,4,6-trion 537
16 5-[4-(4-Bromofenoksy)fenylo]-5-(2,3,5,6-tetrahydro[1,2']bipirazynyl-4-ilo)pirymidyno-2,4,6-trion 537
PL 202 680 B1
P r z y k ł a d 4
4-(4-5-[4-(4-Chlorofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)-N-(2-hydroksyetylo)benzenosulfonoamid
A) N-(2-Hydroksyetylo)-4-piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamid
Chlorek 4-fluorobenzenosulfonylu rozpuszczono w dichlorometanie (20 ml) i potraktowano roztworem etanoloaminy (1,2 ml) w dichlorometanie (10 ml). Mieszaninę mieszano przez 1 godzinę, po czym wyekstrahowano dwukrotnie wodą (50 ml). Fazę wodną nasycono chlorkiem sodu i wyekstrahowano dwukrotnie octanem etylu. Połączone fazy organiczne wysuszono nad siarczanem magnezu i odparowano. Porcję 1,4 g otrzymanego 4-fluoro-N-hydroksyetylobenzenosulfonoamidu rozpuszczono w wodzie (15 ml) i potraktowano piperazyną (2,6 g). Mieszaninę ogrzewano w temperaturze wrzenia w warunkach powrotu skroplin przez 6 godzin i utrzymywano w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Osad zebrano, przemyto małą ilością wody i wysuszono, w wyniku czego otrzymano 1,6 g związku tytułowego, zidentyfikowanego metodą spektrometrii masowej APCI [M+H] = 286.
B) 4-(4-5-[4-(4-Chlorofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)-N-(2-hydroksyetylo)benzenosulfonoamid
Roztwór związku z przykładu 1, procedura G, (230 mg) w metanolu (5 ml) potraktowano N-(2-hydroksyetylo)-4-piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamidem (330 mg) (patrz powyżej). Mieszaninę mieszano przez 24 godziny. Pozostałość otrzymaną po odparowaniu mieszaniny reakcyjnej poddano chromatografii na żelu krzemionkowym z chlorkiem metylenu/metanolem (15%) jako eluentem. W wyniku połączenia właściwych frakcji otrzymano 186 mg związku tytułowego w postaci amorficznej substancji stałej, którą zidentyfikowano metodą spektroskopii masowej: APCI [M+1] = 614.
P r z y k ł a d 5
Następujące związki wytworzono z zastosowaniem procedur opisanych w przykładzie 1, zastępując w razie potrzeby 4-chlorofenol odpowiednimi fenolami. Pochodne piperazyny wytworzono zgodnie ze sposobem opisanym w przykładzie 4, procedura A, zastępując etanoloaminę odpowiednią aminą. Produkty końcowe zidentyfikowanego metodą spektrometrii masowej.
Nr Nazwa Wyniki MS APCI [M+H]
1 2 3
1 4-4-[2,4,6-Triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5-ylo]-piperazyn-1-ylobenzeno- sulfonoamid 536
2 4-4-[5-(4-Butoksyfenylo)-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylo]-piperazyn-1-ylobenzeno- sulfonoamid 516
3 4-[4-(5-Bifenyl-4-ilo-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylo)-piperazyn-1-ylo]benzeno- sulfonoamid 520
4 N-(2-Hydroksyetylo)-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5-ylo]- piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamid 580
5 N,N-Bis-(2-hydroksyetylo)-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5- -ylo]piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamid 624
6 4-(4-5-[4-(4-Bromofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1- -ylobenzenosulfonoamid 615
7 4-(4-5-[4-(4-Bromofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)- -N-(2-dimetyloaminoetylo)benzenosulfonoamid 686
8 N-(2-Dimetyloaminoetylo)-4-[4-(5-oktylo-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylo)piperazyn- -1-ylo]benzenosulfonoamid 551
9 4-(4-5-[4-(4-Chlorofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)- benzenosulfonoamid 570
10 4-(4-5-[4-(4-Chlorofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)- -N,N-bis-(2-hydroksyetylo)benzenosulfonoamid 658
PL 202 680 B1
c.d. tabeli
1 2 3
11 N-(2,3-Dihydroksypropylo)-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5- -ylo)piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamid 610
12 N-(2-Hydroksy-1-hydroksymetyloetylo)-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydro- pirymidyn-5-ylo]piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamid 610
13 N-2-[2-(2-Hydroksyetoksy)etoksy]etylo-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydro- pirymidyn-5-ylo]piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamid 668
14 4-(4-5-[4-(4-Chlorofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)- -N-(2,3-dihydroksypropylo)benzenosulfonoamid 644
15 4-(4-5-[4-(4-Chlorofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)- -N-(2-hydroksy-1-hydroksymetyloetylo)benzenosulfonoamid 644
16 4-(4-5-[4-(4-Chlorofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)- -N-[2-(2-hydroksyetoksy)etylo]benzenosulfonoamid 658
17 4-(4-5-[4-(4-Chlorofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)- -N-2-[2-(2-hydroksyetoksy)-etoksy]etylobenzenosulfonoamid 702
18 N-(2-Hydroksy-1,1-bishydroksymetyloetylo)-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksa- hydropirymidyn-5-ylo]piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamid 640
19 4-(4-5-[4-(4-Chlorofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)- -N-(2-hydroksy-1,1-bishydroksymetyloetylo)benzenosulfonoamid 674
P r z y k ł a d 6
N-(2-Okso-[1,3]dioksolan-4-ylometylo)-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5-ylo]piperazyn-1-yobenzenosulfonoamid
Produkt z przykładu 5, nr 11 (120 mg) rozpuszczono w mieszaninie dichlorometanu (5 ml) i tetrahydrofuranu (5 ml). Roztwór potraktowano N,N'-karbonylodiimidazolem (65 mg) i mieszano przez 4 godziny w temperaturze pokojowej. Rozpuszczalnik odparowano, a pozostałość poddano chromatografii na żelu krzemionkowym z użyciem dichlorometanu/metanolu (9:1) jako roztworu do elucji. W wyniku odparowania frakcji zawierających produkt otrzymano 60 mg związku tytułowego. Widmo masowe: APCI [M+H] = 636, [M-H] = 634.
P r z y k ł a d 7
N-(4-Aminobutyrylo)-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5-ylo]piperazyn-1-ylobenzenosulfonomid
A) 4-(4-Benzylopiperazyn-1-ylo)benzenosulfonoamid
Chlorek 4-fluorobenzenosulfonylu (25 g) rozpuszczono w dichlorometanie (250 ml) i potraktowano w 0°C wodnym roztworem amoniaku (25%, 50 ml). Mieszaninę mieszano przez 2 godziny, z chłodzeniem i przez noc w temperaturze pokojowej. Mieszaninę reakcyjną zakwaszono i rozpuszczalnik organiczny odparowano. Pozostałość wyekstrahowano octanem etylu i otrzymano 20 g 4-fluorobenzenosulfonoamidu, który rozpuszczono w wodzie (300 ml), potraktowano 1-benzylopiperazyną (102 g), po czym mieszaninę ogrzewano w temperaturze wrzenia w warunkach powrotu skroplin przez 24 godziny. Mieszaninę reakcyjną przesączono i otrzymano 26 g związku tytułowego, (widmo masowe APCI [M+H] = 332).
B) Ester t-butylowy kwasu 4-[4-(piperazyn-1-ylo)benzenosulfonyloamino]-4-oksobutylokarbaminowego
Kwas 4-(N-t-butoksykarbonylo)aminomasłowy (3,05 g) rozpuszczono w tetrahydrofuranie (30 ml) i potraktowano N,N'-karbonylodiimidazolem (2,5 g). Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 15 minut, ogrzewano w temperaturze wrzenia w warunkach powrotu skroplin przez 15 minut i mieszano przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej. Dodano produktu z etapu A (3,3 g) i mieszaninę mieszano przez noc. Rozpuszczalnik odparowano, a pozostałość zmieszano z dichlorometanem i wodą. Fazę organiczną oddzielono, wysuszono i rozpuszczalnik odparowano. Pozostałość poddano chromatografii na żelu krzemionkowym z użyciem dichlorometanu/metanolu (9:1) jako rozpuszczalnika do elucji. Produkt poddano uwodornianiu katalitycznemu w metanolu, z użyciem Pd na węglu i otrzymano 2,5 g związku tytułowego (widmo masowe APCI [M-H] = 425).
PL 202 680 B1
C) N-(4-Aminobutyrylo)-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5-ylo]piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamid
Produkt otrzymany w procedurze B poddano analogicznej reakcji jak w przykładzie 1, procedura H, z 5-bromo-5-(4-fenoksy)fenylopirymidyno-2,4,6-trionem. Ostatni związek wytworzono analogicznie do procedury opisanej w przykładzie 1 zastępując p-chlorofenol fenolem. W celu usunięcia grupy zabezpieczającej BOC produkt (290 mg) rozpuszczono w 4N roztworze HCl w dioksanie. Po 1 godzinie w temperaturze pokojowej roztwór zdekantowano, a pozostałość roztarto z eterem, w wyniku czego otrzymano 180 mg związku tytułowego (widmo masowe APCI [M+H] = 621).
P r z y k ł a d 8
Następujące związki wytworzono z zastosowaniem procedur opisanych w przykładzie 7, zastępując kwas 4-(N-t-utoksykarbonylo)aminomasłowy odpowiednim aminokwasem zabezpieczonym N-t-butoksykarbonylem. Produkty końcowe zidentyfikowanego metodą spektrometrii masowej.
Nr Nazwa Wyniki MS APCI [M+H]
1 N-Aminoacetylo-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5-ylo]pipera- zyn-1-ylobenzenosulfonoamid 593
2 N-(5-Aminopentanoilo)-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5-ylo]- piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamid 635
3 N-(5-Aminopentanoilo)-4-(4-5-[4-(4-chlorofenoksy)fenylo)-2,4,6-trioksoheksahydropirymi- dyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)benzenosulfonoamid 669
4 N-(4-Aminobutyrylo)-4-(4-5-[4-(4-chlorofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn- -5-ylopiperazyn-1-ylo)benzenosulfonoamid 655
P r z y k ł a d 9
Ester 4-metoksyfenylowy kwasu 2-okso-2-(4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5-ylo]piperazyn-1-ylobenzenosulonyloamino)etylo]karbaminowego
Produkt z przykładu 5 nr 1 (140 mg) rozpuszczono w dichlorometanie (10 ml), zmieszano z trietyloaminą (0,14 ml) i potraktowano chloromrówczanem 4-metoksyfenylu. Mieszaninę mieszano przez 90 minut w temperaturze pokojowej i odparowano. Pozostałość poddano chromatografii na żelu krzemionkowym z użyciem dichlorometanu/metanolu (9:1) jako eluenta. W wyniku połączenia właściwych frakcji otrzymano 90 mg związku tytułowego. (Widmo masowe APCI [M+H] = 743).
P r z y k ł a d 10
W celu oznaczenia hamowania MMP, np. HNC (MMP-8), domenę katalityczną (wyodrębnianie i oczyszczanie, patrz np. Schnierer S., Kleine T., Gote T., Hillemann A., Knauper V., Tschesche H., Biochem. Biophys. Res. Commun. (1993) 191, 319-326) inkubowano z inhibitorami w różnych stężeniach. Następnie zmierzono szybkość reakcji początkowej w przemianie standardowego substratu, w sposób analogiczny do Grams F. i in., FEBS 335 (1993) 76-80).
Wyniki obliczono poprzez wykreślenie krzywej zależności odwrotności szybkości reakcji w funkcji stężenia inhibitora. Stałą hamowania (Ki) otrzymano jako ujemną część odciętej, metodą graficzną według Dixona M., Biochem. J. (1953) 55, 170-202.
Syntetycznym substratem kolagenazy jest heptapeptyd, tory jest sprzęgnięty na końcu C, z DNP (dinitrofenolem). Ta grupa DNP tłumi na skutek zawady przestrzennej fluorescencję sąsiadującego tryptofanu w heptapeptydzie. Po odszczepieniu tripeptydu, który zawiera grupę DNP, fluorescencja tryptofanu wzrasta. W związku z tym proteolityczne rozszczepienie substratu można zmierzyć jako wartość fluorescencji.
a) Sposób pierwszy
Test prowadzono w 25°C w świeżo przygotowanym 50 mM buforze Tris (pH 8,0) potraktowanym ditiozonem w celu usunięcia śladowych ilości metali ciężkich. Dodano 4 mM CaCl2 i bufor nasycono argonem. Roztwory podstawowe adamalizyny II przygotowano przez odwirowanie białka z zawiesiny siarczanu amonu, następnie rozpuszczenie w buforze testowym. Roztwory podstawowe kolagenazy rozcieńczono buforem testowym. Stężenia enzymu oznaczono na podstawie pomiarów UV (ε280 = 2,8 104 M-1 cm-1, ε288: 2,2 104 M-1 cm-1) i roztwory podstawowe przechowywano w chłodnym miejscu. Roztwór ten rozcieńczono 1:100 w celu otrzymania końcowego stężenia testowego 16 nM.
PL 202 680 B1
Substrat fluorogeniczny DNP-Pro-Leu-Gly-Leu-Trp-Ala-D-Arg-NH2 o Km 52 μΜ stosowano w stężeniu 21,4 μΜ; dla oznaczenia K stosowano tężenie 12,8 μM. Fluorescencję substratu mierzono odpowiednio przy długości fali wzbudzenia i emisji λ = 320 i 420 nm, pektrofluorymetrem (Perkin Elmer, Model 650-40) wyposażonym termostatowany pojemnik na komórki. Hydrolizę substratu monitorowano przez 10 minut bezpośrednio po dodaniu enzymu. Wszystkie reakcje prowadzono co najmniej trzykrotnie. Wartości Ki inhibitorów obliczono z punktu przecięcia prostych linii otrzymanych na wykresach zależności v0/vi w funkcji [stężenia inhibitora], natomiast wartości IC50 obliczono z wykresów v0/vi w funkcji [stężenie inhibitora] drogą nieliniowej regresji z elastycznym ważeniem.
b) Sposób drugi
Bufor testowy:
mM Tris/HCl pH 7,6 (Tris = Tris(hydroksymetylo)aminometan)
100 mM NaCl/10 mM CaCl2/5% MeOH (w razie potrzeby)
Enzym: 8 nM domena katalityczna (Met80-GLy242) ludzkiej kolagenzy obojętnochłonnej (MMP-8)
Substrat: 10 μM DNP-Pro-Leu-Gly-Leu-Trp-Ala-D-Arg-NH2
Całkowita objętość testowa: 1 ml
Przygotowano roztwór enzymu i inhibitora w buforze testowym (25°C). Reakcję rozpoczęto przez dodanie substratu o roztworu. Rozszczepienie fluorogenicznego substratu śledzono metodą spektroskopii fluorescencyjnej odpowiednio przy długości fali wzbudzenia i emisji 280 i 350 nm. Wartość IC50 obliczono jako stężenie inhibitora, niezbędne do zmniejszenia szybkości reakcji o połowę w porównaniu z reakcją bez inhibitora.
W tabeli 1 podano wyznaczone wartości IC50 w porównaniu ze związkami z przykładu 26 i korzystnym związkiem nr 118 wymienionym w zgłoszeniu patentowym EP0869947.
T a b e l a 1
Wartości IC50 inhibitora MMP (patrz wyżej MMP-8 domena katalityczna)
Związek odniesienia z EP0869947 IC50 [nM]
korzystny, nr 118 60
Przykład 26 15
Związki według wynalazku IC50 [nM]
Przykład 1 10
Przykład 2 4
Przykład 3 - nr 1 4
Przykład 3 - nr 2 2
Przykład 3 - nr 15 4
Przykład 3 - nr 15 4
Przykład 4 10
Przykład 5 - nr 6 2,8
Przykład 5 - nr 7 13
Przykład 5 - nr 9 12
Przykład 5 - nr 10 9
Przykład 5 - nr 11 4,5
Przykład 5 - nr 12 5,5
Przykład 5 - nr 13 6
Przykład 5 - nr 18 13
Przykład 5 - nr 19 9
Przykład 6 9
PL 202 680 B1

Claims (6)

1. Pochodne pirymidyno-2,4,6-trionu o ogólnym wzorze w którym
R1 oznacza fenoksyl, w którym fenyl może być podstawiony jednym lub większą liczbą podstawników wybranych z grupy obejmującej atom chlorowca, hydroksyl, C1-C6-alkoksyl, C1-C6-alkil, grupę cyjanową i grupę nitrową, a
R2 oznacza pirymidynyl, pirazynyl, ewentualnie w postaci N-tlenków, albo fenyl podstawiony -SO2NR3R4, gdzie R3 i R4 są takie same lub różne i oznaczają atom wodoru; C1-C6-alkil o łańcuchu prostym lub rozgałęzionym, który może być podstawiony jedną lub większą liczbą grup OH, N(CH3)2, albo może zawierać atom tlenu jako człon łańcucha, albo oznaczają COR5, gdzie R5 oznacza C1-C6-alkil, który może być podstawiony grupą NH2.
2. Związki o wzorze I według zastrz. 1, w których R1 oznacza fenoksyl podstawiony jednym lub większą liczbą podstawników z grupy obejmującej atom chloru, atom bromu, metyl i t-butyl.
3. Związki o wzorze I według zastrz. 1, w których R3 oznacza atom wodoru, a R4 oznacza -CH2CH2OH; -CH2CH2N(CH3)2; -CH2CH(OH)-CH2OH; -CH-(CH2OH)2; -CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2OH;
lub -C-(CH2OH)3.
4. Związki o wzorze I według zastrz. 1, wybrane z grupy obejmującej:
5-(4-(4-chlorofenoksy)fenylo)-5-(4-pirymidyn-2-ylopiperazyno)pirymidyno-2,4,6-trion,
5-[4-(4-chlorofenoksy)fenylo]-5-(2,3,5,6-tetrahydro[1,2']bipirazynyl-4-ilo)pirymidyno-2,4,6-trion,
5-[4-(3,4-dichlorofenoksy)fenylo]-5-(4-pirymidyn-2-ylopiperazyn-1-ylo)pirymidyno-2,4,6-trion,
5-[4-(3,4-dichlorofenoksy)fenylo]-5-(2,3,5,6-tetrahydro[1,2']bipirazynyl-4-ilo)pirymidyno-2,4,6-trion,
5-[4-(4-bromofenoksy)fenylo]-5-(4-pirymidyn-2-ylopiperazyn-1-ylo)pirymidyno-2,4,6-trion,
4-(4-5-[4-(4-chlorofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)-N-(2-hydroksyetylo)benzenosulfonoamid,
4-(4-5-[4-(4-bromofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)benzenosulfonoamid,
4-(4-5-[4-(4-bromofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)-N-(2-dimetyloaminoetylo)benzenosulfonoamid,
4-(4-5-[4-(4-chlorofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)benzenosulfonoamid,
4-(4-5-[4-(4-chlorofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)-N,N-bis-(2-hydroksyetylo)benzenosulfonoamid,
N-(2,3-dihydroksypropylo)-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5-ylo]piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamid,
N-(2-hydroksy-1-hydroksymetyloetylo)-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5-ylo]piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamid,
N-2-[2-(2-hydroksyetoksy)etoksy]etylo-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5-ylo]piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamid,
N-(2-hydroksy-1,1-bis-hydroksymetyloetylo)-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5-ylo]piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamid,
4-(4-5-[4-(4-chlorofenoksy)fenylo]-2,4,6-trioksoheksahydropirymidyn-5-ylopiperazyn-1-ylo)-N-(2-hydroksy-1,1-bishydroksymetyloetylo)benzenosulfonoamid,
N-(2-okso-[1,3]dioksolan-4-ylometylo)-4-4-[2,4,6-triokso-5-(4-fenoksyfenylo)heksahydropirymidyn-5-ylo]piperazyn-1-ylobenzenosulfonoamid.
PL 202 680 B1
5. Środek farmaceutyczny zawierający substancję czynną w połączeniu z farmaceutycznie dopuszczalnymi zaróbkami i rozcieńczalnikami, znamienny tym, że jako substancję czynną zawiera związek zdefiniowany w zastrz. 1-4.
6. Zastosowanie związków zdefiniowanych w zastrz. 1-4 do wytwarzania leku o działaniu przeciwnowotworowym i/lub przeciwprzerzutowym.
PL357385A 1999-10-01 2000-09-29 Nowe pochodne pirymidyno-2,4,6-trionu, środek farmaceutyczny i zastosowanie tych pochodnych PL202680B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP99119506 1999-10-01
PCT/EP2000/009535 WO2001025217A1 (en) 1999-10-01 2000-09-29 New pyrimidine-2,4,6-trione derivatives, processes for their production and pharmaceutical agents containing these compounds

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL357385A1 PL357385A1 (pl) 2004-07-26
PL202680B1 true PL202680B1 (pl) 2009-07-31

Family

ID=8239103

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL357385A PL202680B1 (pl) 1999-10-01 2000-09-29 Nowe pochodne pirymidyno-2,4,6-trionu, środek farmaceutyczny i zastosowanie tych pochodnych

Country Status (29)

Country Link
US (1) US6498252B1 (pl)
EP (1) EP1226128B1 (pl)
JP (1) JP3848160B2 (pl)
KR (1) KR100459975B1 (pl)
CN (1) CN1157382C (pl)
AR (1) AR033651A1 (pl)
AT (1) ATE289595T1 (pl)
AU (1) AU768309B2 (pl)
BR (1) BR0014678A (pl)
CA (1) CA2385863C (pl)
CO (1) CO5210860A1 (pl)
CZ (1) CZ20021535A3 (pl)
DE (1) DE60018301T2 (pl)
ES (1) ES2235955T3 (pl)
HK (1) HK1050198A1 (pl)
HU (1) HUP0202832A3 (pl)
IL (1) IL148573A0 (pl)
MA (1) MA26823A1 (pl)
MX (1) MXPA02003192A (pl)
NO (1) NO20021380D0 (pl)
NZ (1) NZ517635A (pl)
PE (1) PE20010659A1 (pl)
PL (1) PL202680B1 (pl)
RU (1) RU2248971C2 (pl)
TR (1) TR200200858T2 (pl)
UY (1) UY26362A1 (pl)
WO (1) WO2001025217A1 (pl)
YU (1) YU22102A (pl)
ZA (1) ZA200201754B (pl)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6716845B2 (en) * 2001-03-30 2004-04-06 Hoffmann-La Roche Inc. Barbituric acid derivatives
WO2003053940A1 (en) 2001-12-20 2003-07-03 Bristol-Myers Squibb Company Barbituric acid derivatives as inhibitors of tnf-$g(a) converting enzyme (tace) and/or matrix metalloproteinases
WO2004084903A1 (en) * 2003-03-27 2004-10-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Use of a trioxopyrimidine for the treatment and prevention of ocular pathologic angiogenesis
WO2004084902A1 (en) * 2003-03-28 2004-10-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Use of a trioxopyrimidine for the treatment of chronic wounds
JP4787240B2 (ja) * 2004-04-01 2011-10-05 ユニベルシテ・ド・リエージュ ピリミジン−２，４，６−トリオンのシクロデキストリン包接複合体
JP4584981B2 (ja) * 2004-04-01 2010-11-24 ユニベルシテ・ド・リエージュ 気管支炎症疾患の処置および予防のためのトリオキソピリミジンの使用
EP1632489A1 (en) * 2004-08-24 2006-03-08 University of Liege 5-(1,1'-Biphenyl)-4-yl-5-(4-(4-aminoacylphenyl)-piperazin)-1-yl-pyrimidine-2,4,6-trione derivatives, as inhibitors of zinc metallondopeptidases, their preparation and use.
RU2449994C1 (ru) * 2011-03-10 2012-05-10 Светлана Алексеевна Мещерякова 6-(4-бензилпиперазино)-1,3-диметилурацила дигидрохлорид, проявляющий биологическую активность
RU2598607C1 (ru) * 2015-07-16 2016-09-27 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Астраханский государственный университет" (Астраханский государственный университет) Способ получения 5-гетарилметиленпиримидин-2,4,6-трионов

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1246743B (de) * 1965-01-12 1967-08-10 Dresden Arzneimittel Verfahren zur Herstellung von 5-Phenyl-5-piperidinobarbitursaeuren
US4595700A (en) 1984-12-21 1986-06-17 G. D. Searle & Co. Thiol based collagenase inhibitors
GB8726714D0 (en) 1987-11-14 1987-12-16 Beecham Group Plc Compounds
GB8827305D0 (en) 1988-11-23 1988-12-29 British Bio Technology Compounds
US5239078A (en) 1990-11-21 1993-08-24 Glycomed Incorporated Matrix metalloprotease inhibitors
CA2073513A1 (en) 1990-12-03 1992-06-04 John Robert Porter Peptidyl derivatives
CA2058797A1 (en) 1991-02-01 1992-08-02 Michael John Broadhurst Amino acid derivatives
US5789434A (en) 1994-11-15 1998-08-04 Bayer Corporation Derivatives of substituted 4-biarylbutyric acid as matrix metalloprotease inhibitors
TR199800990T2 (xx) 1995-12-08 1998-07-21 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Metaloproteinaz inhibit�rleri, bunlar� i�eren farmas�tik bile�imler, bunlar�n farmas�tik kullan�mlar� ve bunlar�n �retiminde kullan�labilecek y�ntemler ve ara �r�nler.
DE19548624A1 (de) 1995-12-23 1997-06-26 Boehringer Mannheim Gmbh Neue Barbitursäure-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung und diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel
US6350786B1 (en) * 1998-09-22 2002-02-26 Hoffmann-La Roche Inc. Stable complexes of poorly soluble compounds in ionic polymers

Also Published As

Publication number Publication date
WO2001025217A1 (en) 2001-04-12
AU7784900A (en) 2001-05-10
HUP0202832A2 (hu) 2003-02-28
IL148573A0 (en) 2002-09-12
NZ517635A (en) 2003-11-28
CN1374954A (zh) 2002-10-16
DE60018301T2 (de) 2006-04-06
NO20021380L (no) 2002-03-20
ES2235955T3 (es) 2005-07-16
BR0014678A (pt) 2002-07-23
PE20010659A1 (es) 2001-06-20
KR100459975B1 (ko) 2004-12-03
DE60018301D1 (de) 2005-03-31
AR033651A1 (es) 2004-01-07
MA26823A1 (fr) 2004-12-20
YU22102A (sh) 2004-11-25
EP1226128A1 (en) 2002-07-31
HUP0202832A3 (en) 2003-03-28
PL357385A1 (pl) 2004-07-26
HK1050198A1 (en) 2003-06-13
JP3848160B2 (ja) 2006-11-22
UY26362A1 (es) 2001-04-30
CZ20021535A3 (cs) 2002-11-13
KR20020039356A (ko) 2002-05-25
TR200200858T2 (tr) 2002-07-22
ATE289595T1 (de) 2005-03-15
CO5210860A1 (es) 2002-10-30
US6498252B1 (en) 2002-12-24
CN1157382C (zh) 2004-07-14
ZA200201754B (en) 2003-06-02
EP1226128B1 (en) 2005-02-23
JP2003511376A (ja) 2003-03-25
AU768309B2 (en) 2003-12-04
NO20021380D0 (no) 2002-03-20
CA2385863A1 (en) 2001-04-12
RU2248971C2 (ru) 2005-03-27
CA2385863C (en) 2009-04-14
MXPA02003192A (es) 2002-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5753653A (en) Metalloproteinase inhibitors, pharmaceutical compositions containing them and their pharmaceutical uses
JP2002504916A (ja) 抗転移及び抗腫瘍活性を有するバルビツール酸誘導体
CZ196898A3 (cs) Nové deriváty kyseliny barbiturové, způsob jejich přípravy a farmaceutické prostředky, které je obsahují
PL202680B1 (pl) Nowe pochodne pirymidyno-2,4,6-trionu, środek farmaceutyczny i zastosowanie tych pochodnych
FR2613717A1 (fr) Derives d'acides pyrimidinecarboxyliques, a action therapeutique
KR20060120648A (ko) 기질 금속단백분해효소 억제제
US7223751B2 (en) Sulfonamide derivatives, intermediate thereof, its preparation methods, and pharmaceutical composition comprising the same
US6716845B2 (en) Barbituric acid derivatives
US6500948B1 (en) Metalloproteinase inhibitors-compositions, uses preparation and intermediates thereof
AU2002302470A1 (en) Pyrimidine-2,4,6-trione derivatives, processes for their production and pharmaceutical agents containing them
EP1632489A1 (en) 5-(1,1'-Biphenyl)-4-yl-5-(4-(4-aminoacylphenyl)-piperazin)-1-yl-pyrimidine-2,4,6-trione derivatives, as inhibitors of zinc metallondopeptidases, their preparation and use.

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20090929