PL200954B1 - Lipofilowe mikrocząsteczki zawierające lek proteinowy lub peptydowy i preparat zawierający te mikrocząsteczki - Google Patents

Lipofilowe mikrocząsteczki zawierające lek proteinowy lub peptydowy i preparat zawierający te mikrocząsteczki

Info

Publication number
PL200954B1
PL200954B1 PL342967A PL34296700A PL200954B1 PL 200954 B1 PL200954 B1 PL 200954B1 PL 342967 A PL342967 A PL 342967A PL 34296700 A PL34296700 A PL 34296700A PL 200954 B1 PL200954 B1 PL 200954B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
oil
microparticles
lipophilic
dispersion
preparation
Prior art date
Application number
PL342967A
Other languages
English (en)
Other versions
PL342967A1 (en
Inventor
Myung Jin Kim
Sun Jin Kim
Kyu Chan Kwon
Joon Kim
Original Assignee
Lg Life Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from KR1019990001232A external-priority patent/KR100329336B1/ko
Priority claimed from KR1019990059776A external-priority patent/KR100359252B1/ko
Application filed by Lg Life Sciences filed Critical Lg Life Sciences
Publication of PL342967A1 publication Critical patent/PL342967A1/xx
Publication of PL200954B1 publication Critical patent/PL200954B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/212—IFN-alpha
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/27—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A61K9/113—Multiple emulsions, e.g. oil-in-water-in-oil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1617—Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1652—Polysaccharides, e.g. alginate, cellulose derivatives; Cyclodextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1658—Proteins, e.g. albumin, gelatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/5005—Wall or coating material
    • A61K9/5015—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Przedmiotem wynalazku s a lipofilowe mikro- cz asteczki, charakteryzuj ace si e tym, ze zawie- raja kwas hialuronowy lub jego sól nieorga- niczn a, sk ladnik aktywny wybrany z grupy obejmuj acej lek proteinowy lub peptydowy, oraz substancj e lipofilow a, przy czym kwas hialuro- nowy lub jego sól nieorganiczna i sk ladnik ak- tywny s a rozpuszczone w wodzie lub wodnym roztworze buforowym, za s mikrocz asteczki s a uzyskane przez suszenie rozpryskowe roztworu zawieraj acego kwas hialuronowy lub jego sól nieorganiczn a, sk ladnik aktywny wybrany z grupy obejmuj acej lek proteinowy lub pepty- dowy, oraz substancj e lipofilow a, a sredni roz- miar mikrocz asteczek mie sci si e w zakresie od 0,1 do 200 µm. Przedmiotem wynalazku s a tak ze preparaty zawieraj ace te mikrocz asteczki. PL PL PL PL

Description

Opis wynalazku
Obecny wynalazek dotyczy mikrocząsteczek powleczonych substancją lipofilową, które zawierają lek proteinowy lub peptydowy oraz preparat o przedłużonym uwalnianiu ich dla skutecznego dostarczenia leku in vivo.
W przypadku leków proteinowych lub peptydowych problemem jest ich denaturacja spowodowana przez ciepło, rozpuszczalniki organiczne i/lub niekorzystne pH (Weigi Lu i in. PDA J Pharm. Sci. Tech, 49, 13-19 (1995)). Zwykle leki te podawane są przez injekcję, jednak z uwagi na ich aktywność in vivo trwa jedynie krótki okres czasu po podaniu, muszą być podawane powtórnie, gdy wymagane jest długotrwałe leczenie. Przykładowo w celu leczenia karłowatości u dzieci spowodowanej niedoborem przysadkowym, ludzki hormon wzrostu musi być podawany injekcyjnie codziennie lub co drugi dzień w okresie 6 miesięcy lub dłużej. Dlatego podejmuje się wysiłki dla opracowania skutecznych preparatów o przedłużonym uwalnianiu, zawierających leki proteinowe lub peptydowe.
Przykładowo prowadzono obszerne badania w celu opracowania preparatów mikrocząsteczkowych o przedłużonym uwalnianiu, wytwarzanych przez powlekanie leku proteinowego lub peptydowego syntetycznym polimerem ulegającym metabolizmowi, przykładowo polilaktyd, poliglikolid, poli(laktyd-ko-glikolid) , poli-orto-ester lub polibezwodnik, które w sposób ciągły uwalniają lek jako polimer ulegający rozkładowi w organizmie, (M.Chasin i R.Langer, ed, Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems, Marcel Dekker (1990) i Heller, J., Adv. Drug, Del. Rev., 10, 163 (1993). Chociaż ten typ preparatu ma kilka zalet, to jednak dużym problemem jest to, że lek ulega degradacji w kontakcie z rozpuszczalnikiem organicznym w procesie jego wytwarzania (Park, T.G. i in., J. Control. Rel 33, 211-223 (1995)). Zastosowanie rozpuszczalnika organicznego jest nie do uniknięcia ponieważ biodegradowalny polimer rozpuszcza się jedynie w rozpuszczalniku organicznym, takim jak np. chlorek metylenu, octan etylu, acetonitryl, chloroform lub aceton.
W celu uniknięcia takiego niepożądanego kontaktu leku z rozpuszczalnikiem organicznym, Lee i in. wytwarzają mikrocząsteczki przez powleczenie leku rozpuszczalnym w wodzie polimerem dla uzyskania podstawowej cząsteczki; dyspergowanie cząsteczki podstawowej w rozpuszczalniku organicznym, zawierającym polimer biodegradowalny, oraz suszenie uzyskanej dyspersji dla uzyskania końcowej mikrocząsteczki (Lee, H.K. i in., J. Control. Rel., 44, 283-294 (1997) i patent US 5753234). Jednakże sposób wytwarzania takiej mikrocząsteczki jest skomplikowany i nieekonomiczny.
Próbowano także opracować preparat o przedłużonym uwalnianiu, zawierający polimer naturalny, przykładowo żelatynę, kolagen, chitozan, katboksymetylocelulozę, alginian lub kwas hialuronowy. Naturalny polimer łatwo absorbuje wodę tworząc żel o wysokiej lepkości, który uwalnia powoli lek.
Przykładowo patent US 5 416 017 przedstawia preparat injekcyjny o przedłużonym uwalnianiu, zawierający erytropoietynę i 0,01-3% żelu kwasu hialuronowego, patent japoński otwarty Nr 1-287041 (1989) - preparat do injekcji o przedłużonym uwalnianiu zawierający insulinę i 1% żel kwasu hialuronowego; patent japoński otwarty Nr 2-21391990) - preparat o przedłużonym uwalnianiu zawierający kalcytoninę lub ludzki hormon wzrostu i 5% żel kwasu hialuronowego; oraz Meyer J. i in, (J. Controlled Rel, 35, 67(1995) - preparat o przedłużonym uwalnianiu zawierający czynnik stymulujący kolonię granulocytową (G-CSF) i 0,5-4% żel kwasu hialuronowego. Takie preparaty zawierające żel kwasu hialuronowego mają efekt przedłużonego uwalniania, ponieważ leki proteinowe powoli przechodzą przez matrycę żelową o wysokiej lepkości. Jednakże żel o stężeniu kwasu hialuronowego rzędu kilku procent ma wysoką lepkość, przykładowo rzędu 105-107 centypauzów, która powoduje, że jego injekcja napotyka trudności. Następnie, ponieważ lek i kwas hialuronowy rozpuszczają się w wodzie, preparat hialuronowy jest łatwo rozcieńczany przez substancję płynną po injekcji z następnym szybkim uwalnianiem leku, zwykle w ciągu dnia. Przykładowo japoński patent otwarty Nr 1-287041(1989) podaje, że gdy preparat 1% żelu kwasu hialuronowego zawierający insulinę, podawano injekcyjnie królikowi, to efekt obniżenia poziomu glukozy we krwi był przedłużony przez jedynie 24h; i Meyer J. i in (patrz wyżej) i patent US 5 416 017 ujawnia, że gdy preparat 2% żelu kwasu hialuronowego zawierający G-CSF i preparat 1,5% żelu kwasu hialuronowego zawierający interferon-α razem z proteiną surowicy były podawane zwierzęciu, poziomy tych leków proteinowych we krwi nagle spadały do poniżej 1/10 poziomów wyjściowych w ciągu 24h.
Hialuronian benzylu (HYAFF®, Fidia, S.P.A.), syntetyczny ester wytworzony przecz estryfikowanie naturalnego kwasu hialuronowego alkoholem benzylowym, nie rozpuszcza się w wodzie lecz w rozpuszczalnikach organicznych takich jak dimetylosulfotlenek (DMSO). Stały preparat mikrocząsteczkowy hialuronianu benzylu zawierający lek proteinowy wytwarzano przez ekstrakcję emulsyjno-rozpuszczalnikową
PL 200 954 B1 (Nightlinge, N.S. i in., Proceed. Intern. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater., 22nd, Paper No, 3205 (1995); i Ilum, L. i in. J, Controlled Rel., 29, 133 (1994), którą prowadzono przez rozpuszczenie hialuronianu benzylu w DMSO, dyspergowanie leku proteinowego w uzyskanym roztworze, dodanie uzyskanej dyspersji do oleju mineralnego do utworzenia emulsji i dodanie rozpuszczalnika, który może się zmieszać z DMSO, przykładowo octan etylu, do emulsji w celu wyekstrahowania DMSO dla uzyskania stałych mikrocząsteczek zawierających lek proteinowy i hialuronian benzylu. Jednakże hialuronian benzylu ma wady takie, że lek proteinowy może być łatwo denaturowany przez rozpuszczalnik organiczny stosowany w etapie preparatywnym, a także przez sam hydrofobowy hialuronian benzylu. Test uwalniania in vitro cząsteczek hialuronianu benzylu zawierających czynnik stymulujący kolonię makrofagową granulocytów (GM-CSF) wskazuje, że jedynie 25% GM-CSF było uwalniane w pierwszych dwóch dniach, a potem już więcej nie. (Nightlinger, N.S. i in., jw.) sugerując, że większość leku proteinowego została zdenaturowana.
Tymczasem przeprowadzono kilka prób w celu opracowania preparatu doustnego zawierającego lek proteinowy wykorzystując w szczególności fakt, że mikrocząsteczka zawierająca antygen, o rozmiarze cząstki 5 pm lub mniej, może być łatwo pochłonięta przez fagocyt. Oczekiwano, że lek może być skierowany w szczególne położenie w organizmie, przykładowo kępki Peyera w jelicie cienkim.
Jednakże komórkom M w kępkach Payera trudno jest absorbować lek z powodu hydrofilności i wysokiego ciężaru cząsteczkowego. Dla zwiększenia absorpcji leku przez komórki M, stosuje się środek polepszający absorpcję, taki jak mieszane sole kwasów żółciowych - micela kwasu tłuszczowego, chelator, kwas tłuszczowy, fosfolipid, akrylokarnityna, surfaktant, glicerydy średniołańcuchowe (Lee, Y.H.L.I in., Crit. Rev. Ther. Drug Carrier System, 5.69-97 (1988); Yoshioka, S. i in. J. Pharm. Sci, 71, 593-597 (1982), Scot-Moncrieff, J.C. i in. J. Pharm. Sci, 83, 1465-1469 (1994), Muranishi S, i in. Chem. Pharm. Bull, 25, 1159-1163 (1977); Fix J.A. i in. Am. J. Physiol, 251, G332,G340 (1986); Shao Z. i in. Pharm. Res 10, 143-250 (1993); Constantinides PP. i in., Proc. Int. Symp. Control, Release Bioactive Mater., 20, 184-185 (1993); i Bjork E, i in. J. Drug Targeting, 2, 501-507 (1995)). Następnie odnotowano, że gdy mikrocząsteczkę wytworzoną przez otorbienie bydlęcej albuminy surowicy w liposomie lecytyna-cholesterol, podaje się doustnie zwierzęciu, reakcja IgA w śliniance jest zwiększona (Genco, R. i in., Ann. NY. Acad. Sci. 409, 650-667 (1983)).
Dokument WO 92 14449A (D1) ujawnia kontrolowane dostarczanie mikrocząsteczki proteiny zawierającej biologicznie aktywną proteinę lub peptyd inkorporowane do utworzonej mikrocząsteczki monomerów lub dimerów kwasu tłuszczowego lub bezwodnika kwasu tłuszczowego. Mikrocząsteczka ujawniona w D1 wytwarzana jest w etapach: rozpuszczania biologicznie aktywnej proteiny w wodzie lub odpowiednim rozpuszczalniku; liofilizowania lub suszenia rozpyłowego roztworu dla uzyskania sypkiego proszku; przesiewania proszku dla uzyskania pożądanej wielkości cząsteczek; oraz inkorporowania sypkiego proszku proteiny do biodegradowalnej matrycy utworzonej z bezwodnika kwasu tłuszczowego, kwasu tłuszczowego i/lub jego soli. D1 nie informuje ani nie sugeruje użycia kwasu hialuronowego lub jego soli nieorganicznej.
Dokument WO 9512385A (D2) ujawnia kompozycję farmaceutyczną zawierającą mikrocząsteczki w cząsteczce, w której mikrocząsteczki zawierają co najmniej jeden środek farmaceutycznie aktywny, co najmniej jeden fosfolipid rozpuszczalny w wodzie lub mieszający się z wodą, co najmniej jeden fosfolipid rozpuszczalny w lipidzie lub mieszający się z lipidem, co najmniej jeden niejonowy surfaktant mający wartość HLB około 15 lub więcej, co najmniej jeden niejonowy surfaktant mający wartość HLB około 6 lub mniej, i co najmniej jeden sterol rozpuszczalny w wodzie lub mieszający się z wodą, przy czym mikrocząsteczki są zawieszone w co najmniej jednym kwasie tłuszczowym o długości łańcucha C14 lub mniej.
Jednakże jedynym skutecznym preparatem szczepionki doustnej, która jest opracowana z powodzeniem jest szczepionka polio, dla której istnieje receptor jelitowy i cząsteczka liposomu jest strukturalnie nietrwała.
Streszczenie wynalazku
Przedmiotem wynalazku są lipofilowe mikrocząsteczki, charakteryzujące się tym, że zawierają kwas hialuronowy lub jego sól nieorganiczną, składnik aktywny wybrany z grupy obejmującej lek proteinowy lub peptydowy, oraz substancję lipofilową, przy czym kwas hialuronowy lub jego sól nieorganiczna i składnik aktywny są rozpuszczone w wodzie lub wodnym roztworze buforowym, zaś mikrocząsteczki są uzyskane przez suszenie rozpryskowe roztworu zawierającego kwas hialuronowy lub jego sól nieorganiczną, składnik aktywny wybrany z grupy obejmującej lek proteinowy lub peptydowy, oraz substancję lipofilową, a średni rozmiar mikrocząsteczek mieści się w zakresie od 0,1 do 200 pm.
PL 200 954 B1
Korzystnie średni rozmiar cząsteczek mieści się w zakresie od 1 do 50 pm.
Korzystnie lek wybrany jest z grupy obejmującej ludzki hormon wzrostu, bydlęcy hormon wzrostu, świński hormon wzrostu, hormon uwalniający hormon wzrostu, peptyd uwalniający hormon wzrostu, czynnik stymulujący kolonię granulocytową, czynnik stymulujący kolonię granulocytową i makrofagową, czynnik stymulujący kolonię makrofagową, erytropoetynę, proteinę morfogeniczną kości, interferon, insulinę, atriopeptynę-III, przeciwciało monoklonalne, czynnik martwicy nowotworu, czynnik aktywowania makrofagów, interleukinę, czynnik degenerujący nowotworu, czynnik wzrostu insulinopodobny, czynnik wzrostu naskórkowy, aktywator plazminogenu tkankowego i urokinazę.
Korzystnie substancja lipofilowa wybrana jest z grupy obejmującej lipid, pochodną lipidu, kwas tłuszczowy, pochodną kwasu tłuszczowego, wosk oraz ich mieszaniny.
Korzystnie lipidem jest lecytyna, fosfatydylocholina, fosfatydylohanolamina lub fosfatydyloseryna, a pochodna lipidu jest arachidoilofosfatydynylocholina lub stearoilofosfatydylocholina.
Korzystnie kwasem tłuszczowym jest kwas mirystynowy, palmitynowy lub stearynowy, a pochodną kwasu tłuszczowego jest stearynian glicerylu, palmatynian sorbitanu, stearynian sorbitanu, monooleinian sorbitanu lub polisorbat.
Korzystnie nieorganiczną solą kwasu hialuronowego jest hialuronian sodu, hialuronian potasu, hialuronian magnezu, hialuronian amonu, hialuronian wapnia, hialuronian cynku lub hialuronian kobaltu.
Korzystnie lipofilowe mikrocząsteczki według wynalazku obejmują także rozpuszczalną w wodzie zaróbkę.
Korzystnie rozpuszczalna w wodzie zaróbka jest wybrana z grupy obejmującej węglowodan, proteinę, aminokwas, kwas tłuszczowy, sól nieorganiczną, środek powierzchniowo czynny, poli(etylenoglikol) i ich mieszaninę.
Przedmiotem wynalazku jest także preparat w postaci dyspersji, charakteryzujący się tym, że wytworzony jest przez dyspergowanie lipofilowych mikrocząsteczek jak określone w zastrz. 1 albo 8, w ośrodku lipofilowym.
Korzystnie ośrodkiem lipofilowym jest olej jadalny, olej mineralny, skwalen, skwalan, olej wątłuszczowy (tran), mono-, di-, lub trigliceryd, albo ich mieszanina.
Korzystnie olejem jadalnym jest olej kukurydziany, oliwa z oliwek, olej sojowy, olej szafranowy, olej bawełniany, olej arachidowy, olej sezamowy, olej słonecznikowy lub ich mieszanina.
Korzystnie ośrodek lipofilowy zawiera także środek dyspergujący lub konserwujący.
Preparat w postaci dyspersji według wynalazku korzystnie jest stosowany do injekcji.
Korzystnie preparat emulsyjny olej-w-wodzie według wynalazku obejmuje wodny ośrodek injekcyjny i preparat w postaci dyspersji jak określony wyżej.
Korzystnie wodnymi ośrodkiem injekcyjnym jest woda destylowana lub roztwór buforowany.
Przedmiotem wynalazku jest także preparat aerozolowy, zawierający mikrocząsteczki lipofilowe jak określone wyżej.
Opis rysunków
Powyższe cele i środki techniczne według wynalazku będą widoczne na podstawie poniższego opisu korzystnych ucieleśnień w połączeniu z towarzyszącymi rysunkami, na których:
Fig. 1 pokazuje in vitro profile uwalniania mikrocząsteczek 11, 12 i 13;
Fig. 2A i 2B odtwarzają obrazy RP HPLC roztworu ekstrakcyjnego mikrocząsteczki 12, uzyskanego w przykładzie badawczym 3 i wodnego roztworu standardowego hGH, odpowiednio; oraz
Fig. 3A i 3B ilustrują obrazy SEC roztworu ekstrakcyjnego mikrocząsteczki 12 uzyskanego w przykładzie badawczym 3 i wodnego roztworu standardowego hGH, odpowiednio.
Szczegółowy opis wynalazku
Stała lipofilowa mikrocząsteczka według wynalazku zawiera substancję lipofilową i składnik aktywny.
Składnik aktywny, który może być stosowany według wynalazku, stanowi lek proteinowy, lub lek peptydowy.
Reprezentatywnymi lekami proteinowymi lub peptydowymi są ludzki hormon wzrostu, bydlęcy hormon wzrostu, świński hormon wzrostu, hormon uwalniający hormon wzrostu, peptyd uwalniający hormon wzrostu, czynnik stymulujący kolonię granulocytów, czynnik stymulujący kolonię makrofagową granulocytów, czynnik stymulujący kolonię makrofagową, erytropoetynę, proteinę morfogeniczną kości, interferon, insulinę, atriopeptynę-III, przeciwciało monoklonane, czynnik martwicy nowotworu, czynnik aktywujący makrofagi, interleukinę, czynnik degenerujący nowotworu, czynnik wzrostu insullnopodobny,
PL 200 954 B1 czynnik wzrostu naskórkowy, aktywator plazminogenu tkankowego i urokinazę, ale nie ograniczają one leków proteinowych lub peptydowych, które mogą być stosowane według wynalazku.
Substancja lipofilowa, która może być stosowana w obecnym wynalazku, obejmuje lipid i jego pochodne, kwas tłuszczowy i jego pochodne, wojsk, oraz ich mieszaniny. Reprezentatywne lipidy obejmują lecytynę, fosfatydylocholinę, fosfatydyloetanoloaminę, fosfatydyloserynę i fosfatydylinositol. Reprezentatywne pochodne lipidu obejmują arachidoilofosfatydylocholinę i stearoilofosfatydylocholinę. Reprezentatywnymi kwasami tłuszczowymi są kwas mirystynowy, kwas palmitynowy, kwas stearynowy i ich sole. Reprezentatywne pochodne kwasów tłuszczowych obejmują steariynian glicerylu, palmitynian sorbitanu, stearynian sorbitanu, monooleinian sorbitanu i polisorbat. Reprezentatywnymi woskami są anionowy wosk emulgujący, wosk karanuba i wosk mikrokrystaliczny. Wśród nich preferowane są lipofilowe substancje o powierzchni aktywnej takie jak lecytyna, fosfatydylocholina i fosfatydyloetanoloamina.
Lipofilowa mikrocząsteczka według wynalazku może zawierać 0,001-99% wagowych, korzystnie 0,1-10% wagowych składnika aktywnego i 1-99,99% wagowych, korzystnie 5-50% wagowych substancji lipofilowej, licząc na wagę mikrocząsteczki.
Oprócz składnika aktywnego mikrocząsteczka według wynalazku zawiera kwas hialuronowy lub jego nieorganiczne sole. Przykładowe sole kwasu hialuronowego obejmują hialuronian sodowy, hialuronian potasowy, hialuronian amonowy, hialuronian wapniowy, hialuronian magnezowy, hialuronian cynkowy i hialuronian kobaltowy. Kwas hialuronowy lub jego nieorganiczne sole mogą być stosowane w ilości od 0,1-99% wagowych licząc na wagę mikrocząsteczki.
W celu stabilizowania składnika aktywnego mikrocząsteczka według wynalazku może również zawierać rozpuszczalną w wodzie zaróbkę. Rozpuszczalna w wodzie zaróbka, która może być stosowana w obecnym wynalazku, obejmuje węglowodany takie jak hydroksypropyloceluloza, karboksymetyloceluloza, karboksymetyloceluloza sodowa, chitozan, alginian, glukoza, ksyloza, galaktoza, fruktoza, maltoza, sacharoza, dekstran i siarczan chondroityny, proteinę taką jak albumina i żelatyna, aminokwas taki jak glicyna, alanina, kwas glutaminowy, arginina, lizyna i ich sól; kwas tłuszczowy taki jak kwas stearynowy, nieorganiczna sól taka jak fosforan; środek powierzchniowo czynny, taki jak Tween® (ICI), poli(etylenoglikol) oraz ich mieszaniny. Zaróbka rozpuszczalna w wodzie może być stosowana w ilości od 0,001 do 99% wagowych, korzystnie od 0,1 do 50% wagowych, licząc na wagę mikrocząsteczki.
Lipofilową mikrocząsteczkę według wynalazku można wytworzyć przez powlekanie substancją lipofilową stałej cząsteczki zawierającej składniki aktywny, zgodnie z którąkolwiek poniższych metod.
Lipofilową mikrocząsteczkę według wynalazku można wytworzyć przez rozpuszczenie składnika aktywnego w wodnym roztworze zawierającym kwas hialuronowy i inne ewentualne, składniki, takie jak rozpuszczalną w wodzie zaróbkę; suszenie rozpylające lub zamrażającej uzyskanego roztworu dla uzyskania stałych cząstek zawierających składnik aktywny, dyspergowanie stałych cząstek w rozpuszczalniku organicznym zawierającym substancję lipofilową, a następnie suszenie dyspersji do uzyskania stałego produktu lipofilowych mikrocząsteczek. Organicznym rozpuszczalnikiem, który może być stosowany w powyższym postępowaniu, może być etanol, chlorek metylenu i alkohol izopropylowy.
Alternatywnie, cząsteczkę lipofilową według wynalazku można wytworzyć przez rozpuszczenie składnika aktywnego w wodnym roztworze zawierającym kwas hialuronowy i inne ewentualne składniki takie jak rozpuszczalną w wodzie zaróbkę, dodanie substancji lipofilowej o aktywnej powierzchni takiej jak lecytyna, dla umożliwienia uwodnienia tej substancji o aktywnej powierzchni i suszenie rozpyłowe uzyskanego roztworu. W etapie suszenia rozpyłowego substancja lipofilową migruje do powierzchni kropli i powleka cząstki zawierające składnik aktywny.
Tak uzyskana mikrocząsteczka według wynalazku ma średni wymiar cząstki od 0,1 do 200 gm, korzystnie od 1 do 50 gm, zwłaszcza 1-10 gm. Mikrocząsteczka według wynalazku zawierająca składnik aktywny posiada kilka zalet: (1) składnik aktywny nie ulega denaturowaniu i zachowuje pełną aktywność; (2) uwalnia składnik aktywny w pełni w przedłużonym okresie czasu; (3) jest łatwo dyspergowana w środowisku lipofilowym takim jak olej, a tak uzyskana dyspersja ma niską lepkość i zachowuje pełną aktywność składnika aktywnego; (4) jest łatwo sprzęgana z błoną fosfolipidową w organizmie dla skutecznego przenoszenia składnika aktywnego do organizmu; (5) gdy jest podawana doustnie, może być przemieszczona do komórek M kępek Payera ulokowanych w jelicie cienkim.
Mikrocząsteczka według wynalazku może być otrzymana w postaci dyspersji, emulsji i aerozolu.
Tak więc obecny wynalazek dostarcza również preparatu dyspersyjnego otrzymanego przez dyspergowanie lipofilowych mikrocząsteczek według wynalazku w środowisku lipofilowym, które może obejmować olej jadalny, olej mineralny, skwalen, skwalan, tran dorszowy, mono-, di- lub trigliceryl
PL 200 954 B1 i ich mieszaniny. Reprezentatywnym olejem jadalnym jest olej kukurydziany, oliwa z oliwek, olej sojowy, olej słonecznikowy, olej bawełniany, olej z orzeszków ziemnych, olej sezamowy, olej szafranowy i ich mieszaniny. Środowisko Iipofilowe może także zawierać środek dyspergujący lub konserwujący. Preparat dyspersyjny może być stonowany do injekcji, lub może być podawany doustnie.
Obecny wynalazek dostarcza również preparatu emulsyjnego olej-w-wodzie, zawierającego wodne środowisko injekcyjne i preparat dyspergujący. Wodne środowisko injekcyjne obejmuje wodę destylowaną i roztwór buforowy. W preparacie emulsyjnym mikrocząsteczki lipofilowe są powleczone olejem i pozostają w fazie olejowej poprawiając tworzenie i stabilizowanie emulsji woda-w-oleju. Preparat emulsyjny można stosować do injekcji.
Obecny wynalazek zapewnia dalej aerozolowy preparat zawierający mikrocząsteczki według wynalazku. Preparat można wytworzyć zgodnie z konwencjonalną metodą stosującą konwencjonalną zaróbkę. Preparat aerozolowy może być podawany doustnie poprzez błony śluzowe nosa lub oskrzeli.
Poniższe przykłady podano dla zilustrowania wynalazku bez ograniczania go. Procentowość podana niżej dla stałego produktu w stałej mieszaninie, ciekłego w ciekłej i stałego w ciekłej, oznaczono jako wag./wag., obj./obj. i wag./obj. odpowiednio, chyba, że wskazano szczegółowo inaczej.
P r z y k ł a d 1: Wytwarzanie mikrocząsteczek lipofilowych
Lecytynę dodano do 10 mM roztworu buforowanego fosforanem (PBS) w stężeniu 2% i dokładnie hydratowano. Dodano rekombinantowy antygen powierzchniowy wirusa zapalenia wątroby B (HBsAg, LG Chemical Ltd.) do stężenia 0,5 mg/ml i uzyskany roztwór dostarczono do suszarki rozpyłowej (Buchi 191) z szybkością przepływu 55 ml/min, dla otrzymania stałych mikrocząsteczek (Mikrocząsteczka 1). W tym etapie temperatura powietrza na wlocie wynosiła 70°C a na wylocie 50°C. Rozmiar cząstek tak uzyskanych mikrocząsteczek mieścił się w zakresie 0,1-5 pm.
P r z y k ł a d 2: Wytwarzanie mikrocząsteczek lipofilowych
Rekombinantowy HBsAg rozpuszczono w 10 mM PBS do stężenia 0,5 mg/ml i dodano karboksymetylocelulozę do stężenia 3% (wag./obj.). Uzyskany roztwór wprowadzono do suszarki rozpyłowej (Buchi 191) z szybkością przepływu 0,5-5 ml/min uzyskując pierwotne cząsteczki. W tym etapie temperatura powietrza na wlocie wynosiła 70°C, a na wylocie 50°C.
Przygotowano roztwór 5% (wag./obj.) lecytyny w etanolu i zdyspergowano w nim pierwotne cząsteczki w stężeniu 5% (wag./obj.). Uzyskaną dyspersję podano do suszarki rozpyłowej (Buchi 191) przy szybkości przepływu 1 ml/min, uzyskując stałe mikrocząsteczki (Mikrocząsteczka 2). W tym temperatura powietrza na wlocie wynosiła 85°C, a na wylocie 50°C. Rozmiar cząstek w mikrocząsteczkach tak uzyskanych mieścił się w zakresie 0,1-5 pm.
P r z y k ł a d 3: Wytwarzanie lipofilowych mikrocząsteczek
Karboksymetylocelulozę rozpuszczono w 10 mM PBS do stężenia 3% (wag./obj.). Dodano lecytynę do stężenia 2% (wag./obj.) i dokładnie uwodniono. Dodano rekombinantowy HBsAg do stężenia 0,5 mg/ml. Uzyskany roztwór wprowadzono do suszarki rozpyłowej (Blachi 191) z szybkością przepływu 0,55 ml/min, uzyskując stałe mikrocząsteczki (Mikrocząsteczka 3). W tym etapie temperatura powietrza na wlocie wynosiła 70°C, a na wylocie 50°C. Rozmiar cząsteczki mikrocząsteczek tak uzyskanych mieściła się w zakresie 0,1-5 pm.
P r z y k ł a d y 4-9: Wytwarzanie lipofilowych mikrocząsteczek
Procedurę z przykładu 3 powtórzono stosując różne składniki wymienione w Tabeli I. Otrzymano różne stałe mikrocząsteczki (Mikrocząsteczki 4-9).
T a b e l a I
Nr Mikrocząsteczki Składnik aktywny Zaróbka rozpuszczalna w wodzie Substancja lipofilowa Rozmiar cząsteczki (pm)
1 2 3 4 5
1 0,5 mg/ml HBsAg - 2% (w/v) lecytyna 0,1 - 5
2 0,5 mg/ml HBsAg 3% (w/v) karboksymetyloceluloza 5% (w/v) lecytyna 0,1 - 5
3 0,5 mg/ml HBsAg 3% (w/v) karboksymetyloceluloza 2% (w/v) lecytyna 0,1 - 5
PL 200 954 B1
c.d. tabeli I
1 2 3 4 5
4 0,5 mg/ml HBsAg 3% (w/v) karboksymetyloceluloza 1% (w/v) lecytyna 0,1 - 5
5 0,5 mg/ml HBsAg 3% (w/v) karboksymetyloceluloza 0,5% (w/v) lecytyna 0,1 - 5
6 0,5 mg/ml HBsAg 3% (w/v) karboksymetyloceluloza 2% (w/v) lecytyna 0,1 - 5
7 0,5 mg/ml HBsAg 3% (w/v) żelatyna 2% (w/v) lecytyna 0,1 - 5
8 0,5 mg/ml HBpreS2Ag 3% (w/v) karboksymetyloceluloza 2% (w/v) lecytyna 0,1 - 5
9 2,16 mg/ml SEC-SER2) 3% (w/v) karboksymetyloceluloza 2% (w/v) lecytyna 0,1 - 5
1) antygen preS2 wirusa zapalenia wątroby B 2) zmutowana proteina stafylokokowej enterotoksyny C1 (LG Chemical Ltd.) stosowana w takiej ilości, że stężenie tej proteiny wynosi 6% wagowych sumy składników
P r z y k ł a d 10: Wytwarzanie lipofilowych mikrocząsteczek
Karboksymetylocelulozę rozpuszczono w 10 mM PBS do stężenia 3% (wag./obj). Uzyskany roztwór filtrowano i sterylizowano. Dodano Iecytynę do stężenia 2% (wag./obj.) i dokładnie uwodniono. Ekstrakty DNA E-coli rozpuszczono w 10 mM PBS w ilości 1 mg/ml i roztwór dodano do powyższej mieszaniny do stężenia 6% wag. licząc na całkowitą wagę mieszaniny, po czym mieszano stosując mieszalnik magnetyczny. Uzyskaną zawiesinę wprowadzono do suszarki rozpyłowej (Buchi 191) z szybkością przepływu 0,55 ml/min. otrzymując stałe mikrocząsteczki (Mikrocząsteczka 10). W tym etapie temperatura powietrza na wlocie wynosiła 70°C, a na wylocie 50°C. Rozmiar cząstki w tak uzyskanych mikrocząsteczkach mieści się w zakresie 0,2-3 pm.
P r z y k ł a d 11: Wytwarzacie lipofilowych mikrocząsteczek
Ludzki hormon wzrostu (hGH) rozpuszczono w 5 mM PBS do stężenia 2 mg/ml, a następnie dodano Tween 80 w ilości 0,01% wag. licząc na wagę PBS. Hialuronian sodowy o ciężarze cząsteczkowym 1 000 000 rozpuszczono w roztworze do stężenia 0,2% (wag./obj.) Uzyskany roztwór wprowadzono do suszarki rozpyłowej (Buchi 190) z szybkością przepływu 3 ml/min. Otrzymano pierwotne cząstki. W tym etapie temperatura powietrza wlotowego wynosi 85°C. Średni rozmiar cząstki w cząsteczkach pierwotnych tak uzyskanych wynosi 3 pm. Lecytynę rozpuszczono w etanolu do stężenia 1% (wag./obj.), a następnie zawieszono w roztworze w stężeniu 1% (wag./obj.). Uzyskaną zawiesinę podano do suszarki rozpyłowej (Buchi 190) uzyskując mikrocząsteczki (Mikrocząsteczka 11). Średni rozmiar cząstki w tak uzyskanych mikrocząsteczkach wynosił 7 pm.
P r z y k ł a d y 12-24: Wytwarzanie lipofilowych mikrocząsteczek
Procedurę z przykładu 11 powtórzono stosując różne składniki wymienione w Tabeli II uzyskując różne stałe mikrocząsteczki (Mikrocząsteczki 12-24).
PL 200 954 B1
Tabela II
Nr Mikrocząsteczki Cząsteczki podstawowe Mikrocząsteczki
Składnik aktywny Zaróbka rozpuszczalna w wodzie Hialuronian sodu <%(w/v)/MW) Temperatura powietrza wlotowego fO średni rozmiar cząsteczek <gm) Cząsteczki podstawowe (%(w/v)) Substancja lipofilowa Rozpusz- czalnik Średni rozmiar cząsteczek (pm)
11 2 mg/ml hGH 0,01 wt% Tween 80 0,2 %(w/v) /MW :1000000 85 3 1 % (w/v) lecytyna etanol 7
12 1 mg/ml hGH 0,01 wt% Tween 80 0,1 %(w/v) /MW :2000000 85 2 1 % (w/v) lecytyna etanol 5
13 0,1 mg/ml hGH 0,01 wt% Tween 80 0,09 %{w/v) /MW :2000000 85 2 1 % (w/v) lecytyna etanol 5
14 2 mg/ml bST“ 0,01 wt% Tween 80 0,2 %(w/v) /MW:2000000 85 3 2 1 % (w/v) lecytyna etanol 7
15 2 mg/mi pST1 0,01 wt% Tween 80 0,2 %(w/v) /MW:2000000 85 3 1 % (w/v) lecytyna etanol 7
16 0,4 mg/ml GMCSFc) 0,01 wt% Tween 80 0,16 %(w/v) /MW :2000000 85 3 1 % (w/v) lecytyna etanol 7
17 1,000 !U/ml EPO*' 0,01 wt% Tween 80, 0,5 mg/ml albumina surowicy krwi 0,25 %(w/v) /MW :2000000 85 3,5 1 1 % (w/v) lecytyna etanol 7
18 200,000 lU/ml interferon-a 0,01 wt% Tween 80, 0,2 mg/ml D-mannitol, 0,2 mg/ml albumina surowicy krwi 0,25 %(w/v) /MW:2000000 105 3,5 1 1 % (w/v) lecytyna etanol 7
19 200,000 tU/m! interferon-Γ 0,01 wt% Tween 80, 0,2 mg/ml glicyna, 0,2 mg/ml albumina surowicy krwi 0,25 %(w/v) /MW :2000000 105 3,5 1 1 % (w/v) lecytyna etanol 7
20 20 lU/mi insulina 0,01 wt% Tween 80 0,2 %(w/v) /MW :2000000 85 3 1 1 % (w/v) lecytyna etanol 7
21 2 mg/ml IGF 0,01 wt% Tween 80 0,2 %{w/v) /MW :2000000 85 3 1 1 % (w/v) lecytyna etanol 7
22 1 mg/ml hGC 0,01 wt% Tween 80 0,1 %(w/v) /MW:2000000 85 2 1 0,5 % (w/v) kwas stearyno-wy chlorek metylenu 6
23 1 mg/ml hGC 0,01 wt% Tween 80 0,1 %(w/v) /MW :2000000 85 2 1 0,5 % (w/v) monostearynian sorbitanu alkohol izopropy- lowy 7
24 1 mg/mi hGC 0,01 wt% Tween 80 0,1 %(w/v) /MW :2000000 85 2 1 0,5 % (w/v) monostearynian glicerolu chlorek metylenu 7
a) sornaaotropina bydlęca bi somatotropina świńska c czynnik stymulujący granulocytową kolonię makrofagową d) erytropoetyna ei czynnik-1 wzrostu insulioopodobny
P r z y k ł a d 25: Wytwarzanie preparatu dyspersyjnego mikrocząsteczek 3 w oleju bawełnianym.
Mikrocząsteczkę 3 wytworzoną w przykładzie 3 dodano do oleju bawełnianego dyspergowano z zastosowaniem mieszadła magnetycznego. Otrzymano pięć dyspersji olejowych zawierających 20, 50, 100, 200 i 500 mg/ml Mikrocząsteczki 3, odpowiednio.
P r z y k ł a d 26: Wytwarzanie dyspersyjnych preparatów Mikrocząsteczki 3 w oleju jadalnym
Powtórzono procedurę z przykładu 25 stosując olej sojowy, olej kukurydziany i olej sezamowy, odpowiednio uzyskując dyspersję oleju sojowego, oleju kukurydzianego i oleju sezamowego, z których każda zawiera 100 mg/ml Mikrocząsteczki 3.
P r z y k ł a d 27: Wytwarzanie dyspersyjnych preparatów Mikrocząsteczki 8 w oleju jadalnym
Procedurę z przykładu 25 powtórzono stosując Mikrocząsteczkę 8, uzyskując dyspersje oleju bawełnianego, oleju sojowego, oleju sezamowego, oleju kukurydzianego i oleju sezamowego, z których każda zawiera 100 mg/ml Mikrocząsteczki 8.
P r z y k ł a d 28: Wytwarzanie dyspersyjnych preparatów Mikrocząsteczki 93 w oleju jadalnym
Procedurę z przekładu 25 powtórzono stosując Mikrocząsteczkę 9 dla uzyskania dyspersji oleju bawełnianego, oleju sojowego, oleju kukurydzianego i oleju sezamowego, z których każda zawiera 100 mg/ml Mikrocząsteczki 9.
P r z y k ł a d 29: Wytwarzanie dyspersyjnych preparatów Mikrocząsteczki 10 w oleju jadalnym
Powtórzono procedurę z przykładu 25 stosując Mikrocząsteczkę 10 dla uzyskania dyspersji oleju bawełnianego, sojowego, kukurydzianego i sezamowego, z których każda zawiera 100 mg/ml Mikrocząsteczki 10.
P r z y k ł a d 30: Wytwarzanie dyspersyjnych preparatów Mikrocząsteczki 12 w oleju bawełnianym
Powtórzono procedurę z przykładu 25 stosując Mikrocząsteczkę 12 w celu otrzymania pięciu dyspersji oleju bawełnianego, z których każda zawiera 50, 100, 200, 360 i 500 m2/mg. Mikrocząsteczki 12.
PL 200 954 B1
P r z y k ł a d 31: Wytwarzanie dyspersyjnych preparatów Mikrocząsteczki 12 w oleju jadalnym Powtórzono procedurę z przykładu 25 stosując Mikrocząsteczki 12 dla uzyskania dyspersji oleju sojowego, oleju kukurydzianego i oleju sezamowego, z których każda zawiera 100 mg/ml Mikrocząsteczki 12.
P r z y k ł a d 32: Wytwarzanie dyspersyjnych preparatów Mikrocząsteczki 14
Powtórzono procedurę z przykładu 25 stosując Mikrocząsteczki 14 dla uzyskania dyspersji oleju bawełnianego, oleju sojowego, oleju kukurydzianego i oleju sezamowego, z których każda zawiera 360 mg/ml Mikrocząsteczki 14.
P r z y k ł a d 33: Wytwarzanie preparatów dyspersyjnych Mikrocząsteczki 15 w oleju jadalnym Powtórzono procedurę z przykładu 25 stosując Mikrocząsteczki 15 dla uzyskania dyspersji oleju bawełnianego, oleju sojowego, oleju kukurydzianego i oleju sezamowego, z których każda zawiera 360 mg/ml Mikrocząsteczki 15.
P r z y k ł a d 34: Wytwarzanie preparatów dyspersyjnych Mikrocząsteczki 15 w oleju jadalnym Powtórzono procedurę z przykładu 25 stosując Mikrocząsteczki 18 dla uzyskania dyspersji oleju bawełnianego, oleju sojowego, oleju kukurydzianego i oleju sezamowego, z których każda zawiera 360 mg/ml Mikrocząsteczki 18.
P r z y k ł a d 35: Wytwarzanie preparatów dyspersyjnych Mikrocząsteczki 3 w oleju jadalnym Każdą z dyspersji oleju sojowego, kukurydzianego i sezamowego uzyskanych w przykładzie 26 dodano do 4-krotnej objętości roztworu 0,9% NaCl uzyskując mieszaninę oleju i wody (1:4) zawierającego 20 mg/ml Mikrocząsteczki 3. Uzyskaną mieszaninę zmieszano do uzyskania homogenicznej białej mętnej emulsji olej-w-wodzie.
P r z y k ł a d 36: Wytwarzanie preparatów emulsyjnych Mikrocząsteczki 12
Procedurę z przykładu 35 powtórzono stosując dyspersje oleju bawełnianego otrzymane w przykładzie 30. Uzyskano pięć homogenicznych białych mętnych emulsji, które zawierają odpowiednio 5, 20, 500, 120 i 200 mg/ml Mikrocząsteczki 12, przy czym stosunki olej:woda odpowiednio wynoszą 1:9, 1:4, 1:3, 1:2 i 2:3. W tych preparatach emulsyjnych stałe mikrocząsteczki były zdyspergowane w fazie z powodu lipofilowej powierzchni mikrocząsteczek. Emulsje były trwałe w temperaturze otoczenia przez okres dwóch tygodni.
P r z y k ł a d 37: Wytwarzanie preparatów emulsyjnych Mikrocząsteczki 12
Procedurę z przykładu 35 powtórzono z zastosowaniem dyspersji oleju sojowego, oleju kukurydzianego i oleju sezamowego, otrzymanych w Przykładzie 31 otrzymując homogeniczne białe, mętne preparaty emulsyjne olej-w-wodzie.
P r z y k ł a d 38: Wytwarzanie preparatów emulsyjnych Mikrocząsteczek 22
Powtórzono procedurę z przykładu 25 stosując Mikrocząsteczki 22 i olej sojowy otrzymując dyspersję oleju sojowego zawierającą 100 mg/ml Mikrocząsteczek 22. Stosując uzyskaną dyspersję powtórzono procedurę z przykładu 35 otrzymując homogeniczny emulsyjny biały, mętny preparat emulsyjny olej-w-wodzie.
P r z y k ł a d 39: Wytwarzacie preparatu emulsyjnego Mikrocząsteczki 23
Powtórzono procedurę z przykładu 25 stosując Mikrocząsteczki 23 i olej sojowy. Otrzymano dyspersję oleju sojowego zawierający 10 mg/ml Mikrocząsteczek 23. Stosując uzyskaną dyspersję powtórzono procedurę z przykładu 35 uzyskano homogeniczny biały, mętny preparat emulsyjny olej-w-wodzie.
P r z y k ł a d 40: Wytwarzanie preparatu emulsyjnego Mikrocząsteczek 24
Powtórzono procedurę z przykładu 25 stosując Mikrocząsteczki 24 i olej sojowy. Otrzymano dyspersję oleju sojowego zawierającą 100 mg/ml Mikrocząsteczek 24. Stosując uzyskaną dyspersję powtórzono procedurę z przykładu 35. Otrzymano homogeniczny biały mętny preparat emulsyjny olej-w-wodzie.
P r z y k ł a d 41. Wytwarzanie preparatów emulsyjnych Mikrocząsteczek 14
Powtórzono procedurę z przykładu 35 stosując dyspersję oleju bawełnianego, oleju sojowego, oleju kukurydzianego i oleju sezamowego, uzyskane w przykładzie 32 i 2-krotną objętość roztworu 0,9% NaCl. Otrzymano cztery homogeniczne białe mętne preparaty emulsyjne olej-w-wodzie. Każdy z tych preparatów tak otrzymanych zawierał 120 mg/ml Mikrocząsteczek 14 w mieszaninie oleju i wody (1:2).
P r z y k ł a d 42: Wytwarzanie preparatów emulsyjnych Mikrocząsteczek 15
Powtórzono procedurę z przykładu 35 stosując dyspersje oleju bawełnianego, oleju sojowego, oleju kukurydzianego i oleju sezamowego otrzymane w przykładzie 33 i 2-krotne objętości roztworu
PL 200 954 B1
0,9% NaCl. Otrzymano cztery homogeniczne białe, mętne preparaty emulsyjne olej-w-wodzie. Każdy z nich zawierał 120 mg/ml Mikrocząsteczek 15 w mieszaninie oleju i wody (1:2).
P r z y k ł a d 43: Wytwarzanie preparatów emulsyjnych Mikrocząsteczek 18
Powtórzono procedurę z przykładu 35 stosując dyspersje oleju bawełnianego, oleju sojowego, oleju kukurydzianego i oleju sezamowego otrzymane w przykładzie 34 i 2-krotne objętości roztworu 9% NaCl. Otrzymano homogeniczne, białe mętne preparaty emulsyjne olej-w-wodzie Mikrocząsteczek 18. Każdy z nich zawierał 120 mg/ml Mikrocząsteczek 18 w mieszaninie oleju i wody (1:2).
P r z y k ł a d 44: Wytwarzanie preparatów emulsyjnych Mikrocząsteczek 3
Powtórzono procedurę z przykładu 35 z wyjątkiem tego, że zastosowano ałun w miejsce 0,9% NaCl. Otrzymano homogeniczne białe, mętne preparaty emulsyjne olej-w-wodzie.
P r z y k ł a d p o r ó w n a w c z y 1: Wytwarzanie porównawczej mikrocząsteczki 1
Powtórzono procedurę z przykładu 2 z wyjątkiem tego, że nie stosowano lecytyny. Otrzymano mikrocząsteczki porównawcze powleczone substancją nielipofilową (Mikrocząsteczka porównawcza 1).
P r z y k ł a d p o r ó w n a w c z y 2: Wytwarzanie Preparatu dyspersyjnego Mikrocząsteczki porównawczej 1
Powtórzono procedurę z przykładu 25 stosując Mikrocząsteczki porównawcze 1 i olej sojowy. Otrzymano dyspersję oleju sojowego zawierającą 100 mg/ml porównawczej mikrocząsteczki 1. (Dyspersja porównawcza 1), która zawierała zaglomerowane niehomogenicznie zdyspergowane mikrocząsteczki.
P r z y k ł a d p o r ó w n a w c z y 3: Wytwarzanie preparatu emulsyjnego porównawczych mikrocząsteczek 1
Powtórzono procedurę z przykładu 35 stosując porównawczą dyspersję 1 i solankę fizjologiczną do injekcji. Otrzymano preparat emulsyjny (Emulsja porównawcza 1), która nie jest homogeniczną emulsją ale ulega separacji z agregacją mikrocząsteczek.
P r z y k ł a d p o r ó w n a w c z y 4 : Wytwarzanie mikrocząsteczek porównawczych 2
Powtórzono procedurę z przykładu 11 stosując 1 mg/ml hGH, 0,1% (wag./obj.) hialuronianu sodu o ciężarze cząsteczkowym 2 000 000. Otrzymano porównawcze mikrocząsteczki nie mające powłoki lipofilowej (Mikrocząsteczki porównawcze 2).
P r z y k ł a d p o r ó w n a w c z y 5: Wytwarzanie preparatu dyspersyjnego porównawczych mikrocząsteczek 2
Powtórzono procedurę z przykładu 25 stosując Mikrocząsteczki porównawcze 2 i olej bawełniany. Otrzymano dyspersję oleju bawełnianego zawierającą 100 mg/ml Mikrocząsteczek porównawczych 2 (Dyspersja porównawcza 2).
P r z y k ł a d p o r ó w n a w c z y 6: Wytwarzanie preparatu emulsyjnego Mikrocząsteczek porównawczych 2
Powtórzono procedurę z przykładu 35 stosując Dyspersję porównawczą 2. Uzyskana mieszanina (emulsja porównawcza 2) nie tworzyła homogenicznej emulsji, a ulegała separacji na fazy, z mikrocząsteczkami zdyspergowanymi w obu fazach: olejowej i wodnej.
P r z y k ł a d p o r ó w n a w c z y 7: Wytwarzanie mikrocząsteczek porównawczych 3
Powtórzono procedurę z przykładu 11 stosując 2x105 lU/ml interferonu-α, 0,2 mg/ml D-manitolu, 0,2 mg/ml surowicy albuminowej i 0,25% (wag./obj.) hialuronianu sodu o ciężarze cząsteczkowym 2 000 000, przy temperaturze na wlocie pieca 105°C do uzyskania mikrocząsteczek porównawczych bez powłoki lipofilowej (Mikrocząsteczka porównawcza 3), która miała średni rozmiar cząstek ok. 3,5 mm.
P r z y k ł a d p o r ó w n a w c z y 8: Wytwarzanie preparatu dyspersji olejowej porównawczych mikrocząsteczek 3
Powtórzono procedurę z przykładu 25 stosując porównawcze mikrocząsteczki 3 i olej bawełniany. Otrzymano dyspersję zawierającą 100 mg/ml mikrocząsteczek (Porównawcza dyspersja 3).
P r z y k ł a d p o r ó w n a w c z y 9: Wytwarzanie preparatu emulsyjnego porównawczych mikrocząsteczek 3
Powtórzono procedurę z przykładu 35 stosując dyspersję porównawczą 3. Uzyskana mieszanina (Emulsja porównawcza 3) nie miała postaci homogenicznej emulsji, lecz ulegała separacji faz, z mikrocząsteczkami zdyspergowanymi w obu fazach: olejowej i wodnej.
P r z y k ł a d b a d a w c z y 1: Badanie trwałości Mikrocząsteczek 1 i 3
W celu zbadania czy antygen zawarty w mikrocząsteczkach zachowuje swą aktywność, każdą z Mikrocząsteczek 1 i 3 rozpuszczono w wodzie i rozcieńczono 1,000-100,000-krotną objętością wody i badano antygenowość stosując zestaw AUYZME (ABBOTT, USA). Wyniki przedstawiono w tabeli III.
PL 200 954 B1
T a b e l a III
Mikrocząsteczka Nr Antygenowość przed wytworzeniem (%) Antygenowość po wytworzeniu (%)
1 89,5 86,7
3 88,6 82,3
Jak można zobaczyć z tabeli III, antygenowość HBsAg zawarty w mikrocząsteczkach według wynalazku była w większości niezmieniona przed i po wytworzeniu. Stąd można wnioskować, że antygen zawarty w mikrocząsteczce według wynalazku zachowuje swą antygenowość.
P r z y k ł a d b a d a w c z y 2
Badanie uwalniania in vitro Mikrocząsteczek 11, 12 i 13. Każdą z mikrocząsteczek 11, 12 i 13 zdyspergowano w roztworze buforowym (150 mM NaCl, 10 mM fosforanu, 0,05% azydku sodu, pH 7,4) tak, że stężenie hGH wynosiło 1,0 mg/ml. Badanie uwalniania in vitro prowadzono przez mieszanie uzyskanej dyspersji w temperaturze 31 °C i we wcześniej ustalonym czasie, dyspersję wirowano przy 800 g na minutę, po czym pobrano próbkę supernatanta w ilości 1/10 objętości dyspersji i mieszano ją z równą objętością powyższego roztworu buforowego. hGH zawarty w supernatancie określano ilościowo z zastosowaniem metody Lowry HPLC.
Figura 1 pokazuje profile uwalniania tak określonych Mikrocząsteczek 11, 12 i 13. Jak można zobaczyć, gdy ciężar cząsteczkowy kwasu hialuronowego wzrasta i gdy zawartość hGH spada, to szybkość uwalniania hGH spada. Tak więc szybkość uwalniania leku proteinowego może być kontrolowana przez regulowanie ciężaru cząsteczkowego kwasu hialuronowego i zawartość leku proteinowego. Dalej wyniki badania in vitro uwalniania pokazały, że początkowe przyspieszone uwalnianie leku proteinowego nie występuje, a szybkość uwalniania jest stała, aż do uwolnienia 70% proteiny.
P r z y k ł a d b a d a w c z y 3. Badanie trwałości mikrocząsteczki 12
W celu zbadania czy hGH zawarty w Mikrocząsteczce 12 utrzymuje swą aktywność, powtórzono procedurę z przykładu badawczego 1 i określono ilość hGH uwalnianego z Mikrocząsteczki 12 w ciągu 48 h, metodą odwróconej fazy (RP) HPLC oraz metodą chromatografii SEC (size exclusion chromatography). RP HPLC stosowano w celu oszacowania rozmiaru denaturacji tlenowej i usuwającej grupę amidową proteiny; zaś SEC denaturacji proteiny przez aglomerowanie.
Figury 2A i 2B reprezentują wyniki RP HPLC dla roztworu ekstrakcyjnego Mikrocząsteczki 12 oraz wodnego roztworu hGH stosowanego podczas wytwarzania Mikrocząsteczki 12, odpowiednio.
Figury 3A i 3B przedstawiają wyniki SEC dla roztworu ekstrakcyjnego Mikrocząsteczki 12 oraz wodnego roztworu hGH stosowanego podczas wytwarzania Mikrocząsteczki 12.
Jak widać z fig. 2 i 3 ilość hGH uwalnianego z Mikrocząsteczki według wynalazku jest identyczna z wodnym roztworem wyjściowego hGH, zgodnie z wynikami RP HPLC; a wyniki SEC pokazują, że zawartość monomerycznego hGH wynosi 95% lub więcej. Wyniki powyższe sugerują, że hGH nie jest denaturowany podczas wytwarzania mikrocząsteczek według wynalazku.
P r z y k ł a d b a d a w c z y 4: Badanie uwalniania in vitro Mikrocząsteczek 14-21.
Powtórzono procedurę z przykładu badawczego 2 stosując mikrocząsteczki 14-21 i określono narastającą ilość uwalnianego leku w 10 i 72h jak również zawartość monomerycznej proteiny w próbce z 72h. Wyniki pokazano w tabeli IV.
T a b e l a IV
Nr Mikrocząsteczki Uwolniona ilość (%) w 10 godz. Uwolniona ilość (%) w 72 godz. Zawartość Monomeru (%)
14 45 92 94
15 47 87 89
16 44 89 97
17 32 76 95
18 54 92 94
19 49 88 95
20 60 95 95
21 38 93 97
PL 200 954 B1
Jak widać z tabeli IV, mikrocząsteczki według wynalazku uwalniają lek w czasie 3 dni bez znaczącej denaturacji leku proteinowego.
P r z y k ł a d b a d a w c z y 5. Badanie wstrzykiwalności 1
Dla zbadania czy cząsteczki według wynalazku są jednolicie zdyspergowane w dyspersji olejowej lub w emulsji olej-w-wodzie, przeprowadzono badania wstrzykiwalności. Jest ona określona jako siła wymagana do naciśnięcia strzykawki wypełnionej badaną próbką z szybkością 80 mm/min. Zastosowano 23 igły pomiarowe do injekcji. Stosowanymi w tych badaniach próbkami były: dyspersja wytworzona przez rozcieńczenie ałunu 20-krotną objętością PBS; olej sojowy; dyspersja oleju sojowego z przykładu 26; emulsja z przykładu 44, dyspersja porównawcza 1 i emulsja porównawcza 1. Wyniki pokazano w tabeli V.
T a b e l a V
Preparat Stężenie Mikrocząsteczek (mg/ml) Wstrzykiwalność (kgf)
Dyspersja w ałunie 0 0,1
Olej sojowy 0 0,5
Dyspersja z Przykładu 26 50 0,1
Emulsja z Przykładu 44 20 0,5
Dyspersja porównawcza 1 50 nie wstrzyknięto
Emulsja porównawcza 1 20 nie wstrzyknięto
Jak widać z tabeli V, dyspersja z przykładu 26 jest łatwo wstrzykiwana, co świadczy, że Mikrocząsteczka 3 jest dobrze zdyspergowana w oleju w porównaniu z Mikrocząsteczką porównawczą 1, nie mającą powłoki lecytynowej. Szczególnie ponieważ emulsja według wynalazku ma lepszą wstrzykiwalność, może ona być stosowana podczas wytwarzania preparatów mieszanych.
P r z y k ł a d p o r ó w n a w c z y 6: Badanie wstrzykiwalności 2
Powtórzono procedurę z przykładu badawczego 5 stosując 0,9% roztwór wodny NaCl, olej bawełniany, dyspersję oleju bawełnianego z przykładu 30, emulsję z przykładu 36, dyspersję porównawczą 2 i emulsję porównawczą 2 oraz 26 igieł pomiarowych do wstrzykiwania. Wyniki podano w tabeli VI.
T a b e l a VI
Preparat Stężenie mikrocząsteczek (mg/ml) Wstrzykiwalność (kgf)
Wodny roztwór 0,9% NaCl 0 0,1
Olej bawełniany 0 1,6
Dyspersja z Przykładu 30 100 1,7
Emulsja z Przykładu 36 120 0,8
Dyspersja porównawcza 2 100 10,5
Emulsja porównawcza 2 20 23,3
Jak widać z tabeli VI, Mikrocząsteczki 12 według wynalazku mają dobrą dyspergowalność w oleju bawełnianym, spowodowaną obecnością lipofilowej powłoki lecytyny, zaś dyspersja oleju bawełnianego według wynalazku ma wstrzykiwalność równoważną do określonej dla oleju bawełnianego. Dalej emulsja z przykładu 36 ma niższą wstrzykiwalność niż olej bawełniany, pomimo wysokiego stężenia Mikrocząsteczki 12.
Dla odróżnienia, porównawcza Mikrocząsteczka 2 ma gorszą dyspergowalność w oleju bawełnianym, spowodowaną brakiem powłoki lipofilowej, co powoduje ubogą wstrzykiwalność porównawczej dyspersji 2. Dalej, powierzchnia lipofilowa porównawczej Mikrocząsteczki 2 spowodowała rozdzielenie faz w emulsji porównawczej 2, z kolejnym ługowaniem hialuronianu sodu do fazy wodnej, dla podwyższenia lepkości warstwy wodnej. Stąd emulsja porównawcza 2 ma nawet uboższą wstrzykiwalność niż dyspersja porównawcza 2.
PL 200 954 B1
P r z y k ł a d b a d a w c z y 7: Badanie wstrzykiwalności 3
Powtórzono procedurę z przykładu otrzymując emulsje uzyskane w Przykładach 38-40 oraz olej sojowy jako próbka kontrolna.
Wstrzykiwalność oleju sojowego wynosiła 1,4 kg, zaś emulsji uzyskanych w przykładach 38-40 była w zakresie 0,3-0,5 kg, podobnie do tej dla wodnego roztworu 0,9% NaCl. Lipofilową powierzchnię mikrocząsteczek według wynalazku pokrywa się olejem sojowym, co powoduje uzyskanie homogenicznej emulsji olej-w-wodzie o wstrzykiwalności równoważnej do wstrzykiwalności wody.
P r z y k ł a d b a d a w c z y 8: Injekcja preparatu zwierzętom
Dla zbadania aktywności biologicznej preparatu według wynalazku, do injekcji dodano Mikrocząsteczki 3 do oleju sojowego. Otrzymano cztery dyspersje zawierające rekombinowany HBsAg w stężeniu 0,5; 0,125; 0,03125 i 0,0078 pg proteiny/ml.
Każdą próbkę dyspersji wprowadzono pozajelitowo 4-tygodniowym myszom rasy Balb/C (H-2d) (10 myszy) i próbkom krwi. Jako preparat porównawczy stosowano szczepionkę przeciwko wirusowi żółtaczki B (LG Chemical Ltd., Korea) zawierającą ałun jako immunologiczny adjuwant, rozcieńczono za pomocą PBS, uzyskując próbki zawierające HBsAg zawierające 0,5; 0,125, 0,3125 i 0,0078 pg proteiny/ml. Każdą próbkę dyspersji wstrzykiwano pozajelitowo 4-tygodniowym myszom Balb/C (H-2d) (10 myszy) i próbki krwi pobrano w 4 miesiące po infekcji. Przygotowano surowice uzyskane z próbek krwi i miana przeciwciała oraz tworzenia przeciwciała (%) określano stosując zestaw AUSAB EIA (Abbott, USA) i obliczono ED50 (pg) mikrocząsteczki stosując metodę statystyczną (analiza prawdopodobieństwa). Wyniki pokazano w tabeli VIII.
T a b e l a VII
Doza (mlU/ml) preparatu 0,5 0,125 0,0312 0,0078 ED50 (pg)
Mikrocząsteczka 3 106,35 38,98 13,32 4,68 0,0121
Preparat porównawczy 12,43 6,1 4,32 3,15 0,1504
Jak widać z tabeli VII mikrocząsteczki według wynalazku mają mniejszą ilość ED50 niż preparat porównawczy i wyższe miano przeciwciała niż preparat porównawczy. Stąd mikrocząsteczka według wynalazku działa jako adjuwant dla lepszego wytworzenia przeciwciała.
P r z y k ł a d b a d a w c z y 9: Podawanie doustne preparatu zwierzętom
Dla zbadania biologicznej aktywności preparatu według wynalazku w podawaniu doustnym, Mikrocząsteczkę 3 dodano do oleju sojowego dla utworzenia dyspersji o zawartości rekombinantowego HBsAg 5 pg proteiny/ml. Jako preparat porównawczy stosowano szczepionkę wirusa zapalenia wątroby B (LG Chemical Ltd, Korea) rozcieńczoną PBS tak, aby uzyskać takie samo stężenie 5 pg proteiny/ml.
Każdą próbkę dyspersji podawano doustnie czterotygodniowym samcom myszy Balb/c (H-2d) (10 myszy) i podawano jeszcze dwa razy, 2 i 4 tygodnie później. Następnie pobrano próbki krwi od myszy po 8 tygodniach. Otrzymano surowicę z próbek krwi i określono miana przeciwciała i tworzenie przeciwciał (%) stosując zestaw AUSAB EIA (Abbott, USA). Wyniki pokazano w tabeli VIII.
T a b e l a VIII
Preparat tworzenie przeciwciała (%) miano przeciwciała (mlU/ml)
Mikrocząsteczka 3 80 10,1
Preparat porównawczy 0 0
Jak widać z tabeli VIII u myszy, którym podawano mikrocząsteczki według wynalazku powstało 80% przeciwciał, podczas gdy u myszy, którym podawano preparat porównawczy przeciwciała nie wytworzyły się. Stąd mikrocząsteczki według wynalazku mają wyższą zdolność tworzenia przeciwciał in vivo nawet, gdy są one podane doustnie. Sugeruje to, że mikrocząsteczka według wynalazku może być korzystnie stosowana w preparatach do podawania doustnego.
P r z y k ł a d b a d a w c z y10: Badanie cytotoksycznego limfocytu
Dla zbadania czy mikrocząsteczka według wynalazku indukuje odpowiedź immunologiczną komórkową, Mikrocząsteczki 3 dodano do oleju sojowego uzyskując dyspersję zawierającą 10 pg proteiny/ml. Jako preparat porównawczy zastosowano szczepionkę wirusa zapalenia wątroby B (LG Chemical Ltd, Korea) rozcieńczoną PBS do tej samej zawartości 10 pg proteiny/ml.
PL 200 954 B1
Każdy preparat dyspersyjny podano podskórnie 4-tygodniowym samcom myszy Balb/C (H-2d) (10 myszy) i podawano później jeszcze dwa razy w dwumiesięcznych odstępach czasu. W dwa tygodnie po ostatnim podaniu uzyskano precytotoksyczne komórki limfocytowe (CTL) z uodpornionej myszy i hodowano dla uzyskania komórek efektorowych (E). Komórki E hodowano razem z komórkami docelowymi (T) zmieniając stosunek komórek E do komórek T, po czym określano liczbę komórek T lizowanych przez komórki E (specyficzna liza (%)) w poniższy sposób:
Specyficzna liza (%)-cpmPróbki cpmnatur'lnegouw'lnianiacpmmax uwalniania _ cpmnaturalnego uwalniania
Wyższa wartość specyficznej lizy oznacza, że odpowiedź immunologiczna komórkowa jest intensywnie indukowana. Wyniki pokazano w tabeli IX.
T a b e l a IX
E:T Preparat 20:1 5:1 1:1
Mikrocząsteczka 3 20% 8% 2%
Preparat porównawczy 2% 1% 2%
Jak widać z tabeli IX mikrocząsteczki według wynalazku wzbudzała odpowiedź immunologiczną komórkową, podczas gdy preparat porównawczy nie.
P r z y k ł a d b a d a w c z y 11. Badanie zwierząt
Dla zbadania efektu podwyższenia odporności spowodowanego przez mikrocząsteczkę według wynalazku - mikrocząsteczkę 9 dodano do oleju sojowego uzyskując dyspersję zawierającą SEC-SER 4,0 mg proteiny/ml. Jako preparat porównawczy antygen SEC-SER zmieszano z komercyjnym adjuwantem ISA według przepisu wytwórcy, po czym rozcieńczono go do takiej samej zawartości 4,0 mg proteiny/ml. Jako wzorzec zastosowano mikrocząsteczki wytworzone przez powtórzenie procedury z przykładu 9 z pominięciem antygenu, zdyspergowane w oleju sojowym.
Każdy preparat dyspersyjny wstrzyknięto domięśniowo krowom w drugim lub trzecim okresie laktacji (5 krów), które mają znaczną ilość komórek somatycznych i później wstrzykiwano jeszcze dwa razy, 2 i 4 tygodnie później. Pobrano próbki krwi od krów po 2, 6, 10 i 14 tygodniach, po czym określono miano przeciwciała. Wyniki wyrażone w czytniku ELISA pokazano w tabeli X.
T a b e l a X
Przed injekcją 2 tygodnie 6 tygodni 10 tygodni 14 tygodni
Preparat porównawczy 1 2,552 2,667 2,466 2,322
Mikrocząsteczka 9 1 4,472 5,123 5,911 4,522
Kontrola 1 1,335 1,486 2,002 2,278
Jak widać z tabeli X, preparat według wynalazku powoduje tworzenie wysokiego poziomu przeciwciał, które pozostają przez 14 tygodni po pierwszej injekcji. Stąd preparat według wynalazku może z korzyścią być stosowany jako szczepionka dla zwierząt.
P r z y k ł a d b a d a w c z y12. Badanie zwierząt
Skutek podawania preparatu według wynalazku zawierającego hGH badano stosując 7-tygodniowe samice karłowatych szczurów (waga ciała: około 100 g), które mają dziedzicznie obniżone wydzielanie hormonu wzrostu.
Wodne preparaty 'dyspersji z przykładu 36, dyspersji porównawczej 2 emulsji porównawczej 2 i Utroprin® (LG Chemical Ltd. Korea) wybrano do badania w przykładzie i każdy z nich podano grupie 10 karłowatych szczurów w dawce hGH 350 pg na szczura, po czym badano powiększenie wagi. Jako wzorzec zastosowano szczury, którym nie podano hGH. Średnie kumulatywne wzrosty wagi podano w tabeli XI.
PL 200 954 B1
T a b e l a XI
Dzień 1 2 3 4 5 6
Kontrola 0,9 2,7 3,6 4,7 6,3 7,5
Utropin® 4,7 4,2 5,3 6,4 7,1 8,5
Dyspersja porównawcza 2 5,0 5,7 7,2 8,5 10,2 11,5
Emulsja porównawcza 2 4,3 4,9 3,6 5,4 6,7 7,8
Dyspersja z Przykładu 30 5,5 6,6 7,3 8,7 11,4 12,3
Emulsja z Przykładu 36 5,3 6,8 8,1 9,2 11,3 13,0
Z tabeli XI widać, że średnia waga szczura, któremu podano Utroprin wzrosła w pierwszym dniu, lecz spadła w drugim dniu. Waga później wzrosła, podobnie jak w grupie kontrolnej. Średnia waga szczurów po podaniu dyspersji porównawczej 2 wzrastała ciągle, podczas gdy po podaniu emulsji porównawczej 2 spadała w trzecim dniu. Ponieważ mikrocząsteczki w emulsji porównawczej 2 mają powierzchnię hydrofilową, lek rozpuszcza się i dlatego skutek jest podobny jak dla wodnego preparatu Utropin. W odróżnieniu średnia waga szczurów, którym podano dyspersję z przykładu 30 i emulsje z przykładu 36 wzrastała przez 6 dni u większej liczby szczurów niż w przypadku dyspersji porównawczej 2 lub emulsji porównawczej 2. Mikrocząsteczki według wynalazku mające powłoki lecytynowe są pokryte olejem bawełnianym nawet po injekcji i powoli absorbują wodę, stąd uwalniają lek ze stałą szybkością.
P r z y k ł a d b a d a w c z y 13. Badanie zwierząt
Dyspersję z przykładu 32 i emulsję z przykładu 41 podano 7-tygodniowym samicom karłowatych szczurów (waga ciała w przybliżeniu 100 g) w dawce bST 12,5 mg na szczura, po czym wzrost ich wagi badano. Jako wzorzec stosowano szczury, którym nie podano bST. Średnie kumulatywne wzrosty wagi pokazano w tabeli XII.
T a b e l a XII
Dzień 1 2 3 4 5 6 8 10
Kontrola 1,4 2,9 4,6 6,1 6,5 7,2 8,8 10,4
Dyspersja Przykład 32 10,3 10,8 14,9 18,1 19,4 20,6 22,2 22,7
Emulsja Przykład 41 9,7 11,5 14,6 17,7 19,9 20,8 22,5 22,9
Z tabeli widać, że średni wzrost szczurów, którym podano dyspersję z przykładu 32 lub emulsję z przykładu 41 wzrastała ciągle przez 6 dni, a szybkość dziennego przyrostu była wyższa niż w grupie kontrolnej. Po 8 dniach wzrost wagi stał się nieznaczny, sugerując, że czas uwalniania leku wynosi około 8 dni w obu przypadkach.
P r z y k ł a d b a d a w c z y 14. Badanie inhibicji skutku cytofopatycznego
Emulsję przykładu 43, dyspersję porównawczą 3 oraz wodny preparat interferonu-α podawano 5-miesięcznym królikom (waga ciała 2,5 kg) w dawce interferonu-α 300 mg.
Poziom leku we krwi określano stosując test inhibitowania skutku cytopatycznego, który prowadzono traktując komórki interferonem-α, dodając wirusa i określając inhibicję patologii komórek. W tym badaniu stosowano komórki nerkowe samca cielęcia (MDBO CATCC CCF-22) i wirusa pryszczycy (ATCC VR 158). Miana interferonu-α we krwi mierzono przez 5 dni, a wyniki pokazano w tabeli XIII.
Tabela XIII
7 godz. Dzień 1 Dzień 2 Dzień 3 Dzień 4 Dzień 5
wodny preparat 1,4x103 1,2x10 ND* ND ND ND
dyspersja porównawcza 3 2,1x103 2,6χ103 9,1χ102 3,4χ102 1,7χ102 1,5χ10
emulsja Przykład 43 1,7χ103 2,2χ103 1,1χ103 4,6χ102 2,8χ102 8,7χ10
PL 200 954 B1
Jak widać z tabeli XIII miana interferonu-a dla szczurów, którym podawano dyspersję z przykładu 43 były wysokie w czasie całego okresu badania (5 dni) wskazując wyższe poziomy interferonu-α w porównaniu z grupą traktowaną dyspersją porównawczą 3 od dnia 2. Tak więc dyspersja według wynalazku ma właściwości przedłużonego uwalniania z powodu powierzchni lipofilowej mikrocząsteczek.
P r z y k ł a d b a d a n i a p o r ó w n a w c z e g o1 hGH rozpuszczono w 5mM PB5 do stężenia 2,3 mg/ml, a następnie dodano hialuronian sodu o ciężarze cząsteczkowym 2 000 000 do uzyskania stężenia 2% (wag./obj.). Uzyskano preparat żelowy kwasu hialuronowego.
Przeprowadzono badania uwalniania in vitro z zastosowaniem preparatu żelowego, powtarzając procedurę z przykładu badania 2. W wyniku 100% hGH uwalniane było w supernatancie w ciągu 1 godz. Stąd ten preparat żelowy ma czas uwalniania leku, który jest o wiele krótszy niż dla cząsteczek według wynalazku.
P r z y k ł a d b a d a n i a p o r ó w n a w c z e g o 2: Badanie zwierząt
Procedurę wytwarzania preparatu żelowego kwasu hialuronowego z Przykładu badania porównawczego 1 powtórzono z zastosowaniem 1,5 mg/ml hGH otrzymując preparat żelowy kwasu hialuronowego nie będący cieczą. Tak otrzymany preparat żelowy podawano karłowatym szczurom w dawce hGH 150 pg na szczura, po czym badano przez 6 dni średni wzrost wagi. Jako preparat porównawczy podawano szczurom wodny roztwór Utropin w takiej samej dawce jak hGH. Jako wzorzec zastosowano szczury, którym nie podawano hGH. Wyniki wyrażone jako kumulatywne wzrosty wagi, pokazano w tabeli XIV.
T a b e l a XIV
Grupa Dzień
1 2 3 4 5 6
Kontrola 1,6 2,4 4,1 4,8 6,2 8,1
Preparat żelowy 3,2 3,6 3,0 6,1 6,7 7,7
Utropin® 3,3 2,6 4,2 6,4 7,8 8,3
Jak widać z tabeli XIV średni wzrost wagi szczurów, którym podawano preparat żelowy, jest podobny do tego w grupie, której podawano Utropin. Tempo wzrostu wagi po dwóch dniach nie różniła się znacząco wśród trzech grup, co sugeruje, że uwalnianie leku z preparatu żelowego nie trwa dłużej niż 1 dzień.
P r z y k ł a d b a d a n i a p o r ó w n a w c z e g o 3.
hGH rozpuszczono w 5 mM PBS do stężenia 2 mg/ml, po czym dodano Tween 80 do stężenia 0,01%. Uzyskany roztwór dostarczono do suszarki rozpyłowej (Buchi 190) z szybkością przepływu 3 ml/min, uzyskując mikrocząsteczki. Średni wymiar cząsteczek w mikrocząsteczkach tak otrzymanych, wynosił 2,5 pm.
Hialuronian benzylu rozpuszczono w sulfotlenku dimetylu (DMSO) do stężenia 6%, po czym w roztworze tym zdyspergowano mikrocząsteczki. Uzyskaną dyspersję dodano do oleju mineralnego zawierającego Avicel A® (Atlas Chemical Ind.). Mieszaninę homogenizowano uzyskując mikroemulsję. Była ona złożona z oleju mineralnego jako fazy ciągłej i roztworu hilauronianu benzylu/DMSO jako fazy rozproszonej. Do mikroemulsji dodano octan etylu mieszając dla ekstrahowania DMSO z fazy rozproszonej . Uzyskano mikrocząsteczki hialuronianu benzylu zawierające hGH. Średni rozmiar cząsteczek w mikrocząsteczkach wynosił 5,5 pm, a zawartość hGH wynosiła 45% wagowych.
Przeprowadzono badanie uwalniania in vitro, stosując tak uzyskany preparat hialuronianu benzylu przez powtarzanie procedury z Przykładu badawczego 2. Kumulatywne ilości uwalnianego hGH pokazano w tabeli XV.
T a b ela XV
godziny 0 1 3 5 7 24 48 72 144
uwalniane ilości (%) 0 15 21 23 25 27 28 30 30
Jak widać z tabeli XV, preparat hialuronianu benzylu uwalnia jedynie niewiele hGH, po 5 godzinach, a jedynie 30% zawartego hGH uwalnia się w 144h. Tak więc większość hGH w preparacie hialuronianu benzylu jest związana z matrycą hialuronianu benzylu zdyspergowanego w oleju bawełnianym
PL 200 954 B1 i uzyskaną dyspersją podawano karłowatym szczurom w dawce hGH 300 gg na szczura. Średni wzrost wagi określano i wyniki wyrażone jako kumulatywny wzrost wagi pokazano w tabeli XVI.
T a b e l a XVI
Preparat Dzień
1 2 3 4 5 6 7
Kontrola 1,22 2,3 3,6 5,7 6,6 7,3 8,2
Preparat Hialuronianu Benzylu 3,6 2,7 5,4 6,3 7,1 8,4 8,0
Jak widać z tabeli XVI preparat hialuronianu benzylu nie wykazuje znaczącego efektu po 1 dniu. Wynalazek obecny przedstawiono w odniesieniu do powyższych szczegółowych wykonań i powinno być odnotowane, że można dokonać różnych modyfikacji i zmian, które również objęte są zakresem wynalazku jak opisano w załączonych zastrzeżeniach.

Claims (17)

1. Lipofiiowe mikrocząsteczkii tym, że zawierają kwas hialuronowy lub jego sól nieorganiczną, składnik aktywny wybrany z grupy obejmującej lek proteinowy lub peptydowy, oraz substancję lipofilową, przy czym kwas hialuronowy lub jego sól nieorganiczna i składnik aktywny są rozpuszczone w wodzie lub wodnym roztworze buforowym, zaś mikrocząsteczki są uzyskane przez suszenie rozpryskowe roztworu zawierającego kwas hialuronowy lub jego sól nieorganiczną, składnik aktywny wybrany z grupy obejmującej lek proteinowy lub peptydowy, oraz substancję lipofilową, a średni rozmiar mikrocząsteczek mieści się w zakresie od 0,1 do 200 gm.
2. Lipofilowe mikrocząsteczki według zastrz. 1, znamienne tym, że średni rozmiar cząsteczek mieści się w zakresie od 1 do 50 pm.
3. Lipofilowe mikrocząsteczki według zastrz. 1, znamienne tym, że lek wybrany jest z grupy obejmującej ludzki hormon wzrostu, bydlęcy hormon wzrostu, świński hormon wzrostu, hormon uwalniający hormon wzrostu, peptyd uwalniający hormon wzrostu, czynnik stymulujący kolonię granulocytową, czynnik stymulujący kolonię granulocytową i makrofagową, czynnik stymulujący kolonię makrofagową, erytropoetynę, proteinę morfogeniczną kości, interferon, insulinę, atriopeptynę-III, przeciwciało monoklonalne, czynnik martwicy nowotworu, czynnik aktywowania makrofagów, interleukinę, czynnik degenerujący nowotworu, czynnik wzrostu insulinopodobny, czynnik wzrostu naskórkowy, aktywator plazminogenu tkankowego i urokinazę.
4. Lipofilowe mikrocząsteczki według zastrz. 1, znamienne tym, że substancja lipofilowa wybrana jest z grupy obejmującej lipid, pochodną lipidu, kwas tłuszczowy, pochodną kwasu tłuszczowego, wosk oraz ich mieszaniny.
5. Lipofilowe mikrocząsteczki według zastrz. 4, znamienne tym, że lipidem jest lecytyna, fosfatydylocholina, fosfatydylohanolamina lub fosfatydyloseryna, a pochodna lipidu jest arachidoilofosfatydynylocholina lub stearoilofosfatydylocholina.
6. Lipofilowe mikrocząsteczki według zastrz. 4, znamienne tym, że kwasem tłuszczowym jest kwas mirystynowy, palmitynowy lub stearynowy, a pochodną kwasu tłuszczowego jest stearynian glicerylu, palmatynian sorbitanu, stearynian sorbitanu, monooleinian sorbitanu lub polisorbat.
7. Lipofilowe mikrocząsteczki według zastrz. 1, znamienne tym, że nieorganiczną solą kwasu hialuronowego jest hialuronian sodu, hialuronian potasu, hialuronian magnezu, hialuronian amonu, hialuronian wapnia, hialuronian cynku lub hialuronian kobaltu.
8. Lipofilowe mikrocząsteczki według zastrz. 1, znamienne tym, że obejmują także rozpuszczalną w wodzie zaróbkę.
9. Lipofilowe mikrocząsteczki według zastrz. 8, znamienne tym, że rozpuszczalna w wodzie zaróbka jest wybrana z grupy obejmującej węglowodan, proteinę, aminokwas, kwas tłuszczowy, sól nieorganiczną, środek powierzchniowo czynny, poli(etyleno-glikol) i ich mieszaninę.
10. Preparat w postaci dyspersji, znamienny tym, że wytworzony jest przez dyspergowanie lipofilowych mikrocząsteczek jak określone w zastrz. 1 albo 8, w ośrodku lipofilowym.
11. Preparat w postaci dyspersji według zastrz. 10, znamienny tym, że ośrodkiem lipofilowym jest olej jadalny, olej mineralny, skwalen, skwalan, olej wątłuszczowy (tran), mono-, di-, lub trigliceryd, albo ich mieszanina.
PL 200 954 Β1
12. Preparat w postaci dyspersji według zastrz. 11, znamienny tym, że olejem jadalnym jest olej kukurydziany, oliwa z oliwek, olej sojowy, olej szafranowy, olej bawełniany, olej arachidowy, olej sezamowy, olej słonecznikowy lub ich mieszanina.
13. Preparat w postaci dyspersji według zastrz. 10, znamienny tym, że ośrodek lipofilowy zawiera także środek dyspergujący lub konserwujący.
14. Preparat w postaci dyspersji według zastrz. 10 albo 13, znamienny tym, że jest stosowany do injekcji.
15. Preparat emulsyjny olej-w-wodzie, znamienny tym, że obejmuje wodny ośrodek injekcyjny i preparat w postaci dyspersji jak określony w zastrz. 10.
16. Preparat emulsyjny olej-w-wodzie według zastrz. 15, znamienny tym, że wodnym ośrodkiem injekcyjnym jest woda destylowana lub roztwór buforowany.
17. Preparat aerozolowy, znamienny tym, że zawiera mikrocząsteczki lipofilowe jak określone w którymkolwiek z zastrz. 1-9.
PL342967A 1999-01-18 2000-01-14 Lipofilowe mikrocząsteczki zawierające lek proteinowy lub peptydowy i preparat zawierający te mikrocząsteczki PL200954B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1019990001232A KR100329336B1 (ko) 1999-01-18 1999-01-18 히아루론산을 이용한 단백질 약물의 서방성 미세 입자 제형
KR1019990059776A KR100359252B1 (ko) 1999-12-21 1999-12-21 항원을 포함하는 고체상 미세입자 및 이를 포함하는 제제

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL342967A1 PL342967A1 (en) 2001-07-16
PL200954B1 true PL200954B1 (pl) 2009-02-27

Family

ID=26634599

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL342967A PL200954B1 (pl) 1999-01-18 2000-01-14 Lipofilowe mikrocząsteczki zawierające lek proteinowy lub peptydowy i preparat zawierający te mikrocząsteczki

Country Status (20)

Country Link
EP (2) EP1071407B1 (pl)
JP (1) JP3802348B2 (pl)
CN (1) CN1142772C (pl)
AR (1) AR043272A1 (pl)
AU (1) AU751200B2 (pl)
BG (1) BG65233B1 (pl)
BR (1) BR0004152A (pl)
CA (1) CA2324403C (pl)
DK (1) DK1071407T3 (pl)
ES (1) ES2505696T3 (pl)
HK (1) HK1036415A1 (pl)
HU (1) HUP0101040A3 (pl)
ID (1) ID25592A (pl)
IL (1) IL138468A0 (pl)
MY (1) MY125541A (pl)
NZ (1) NZ506975A (pl)
PL (1) PL200954B1 (pl)
TR (1) TR200002683T1 (pl)
TW (1) TWI260988B (pl)
WO (1) WO2000041682A1 (pl)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100236771B1 (ko) * 1997-04-01 2000-02-01 성재갑 히아루론산을 이용한 약물의 서방성 미세입자 제형
AU2006201100B2 (en) * 1999-09-21 2009-09-24 Jagotec Ag Surface modified particulate compositions of biologically active substances
KR100801588B1 (ko) * 1999-09-21 2008-02-05 스키에파마 캐나다 인코포레이티드 생물학적 유효 물질의 표면 변형된 미립자 조성물
US7582311B1 (en) * 1999-10-15 2009-09-01 Genentech, Inc. Injection vehicle for polymer-based formulations
WO2001093837A2 (en) * 2000-06-08 2001-12-13 Eli Lilly And Company Protein powder for pulmonary delivery
US6998393B2 (en) * 2000-06-23 2006-02-14 Biopharm Solutions, Inc. Aquespheres, their preparation and uses thereof
CN102294023A (zh) * 2001-07-26 2011-12-28 奥塔戈创新公司 抗原组合物
JP4683319B2 (ja) * 2003-02-19 2011-05-18 武田薬品工業株式会社 徐放性製剤用の分散剤
EP1595549A4 (en) * 2003-02-19 2010-09-22 Takeda Pharmaceutical DISPERSING AGENT FOR SUSTAINED RELEASE PREPARATIONS
WO2005084637A2 (en) * 2004-02-13 2005-09-15 Nod Pharmaceuticals, Inc. Particles comprising a core of calcium phosphate nanoparticles, a biomolecule and a bile acid, methods of manufacturing, therapeutic use thereof
WO2005120484A1 (ja) * 2004-06-09 2005-12-22 Kurume University グレリンの生理学的機能のレギュレーター
WO2006059846A1 (en) * 2004-12-01 2006-06-08 Lg Life Sciences, Ltd. Formulation of sec1 mutated protein and method for formulation of the same
WO2007025441A1 (en) 2005-08-29 2007-03-08 Tuo Jin Polysaccharide microparticles containing biological agents: there preparation and applications
JP2009521486A (ja) * 2005-12-23 2009-06-04 アルタス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ポリカチオン錯化タンパク質結晶を含む組成物およびこれを使用した治療法
FR2904219B1 (fr) * 2006-07-28 2010-08-13 Flamel Tech Sa Microparticules a base de copolymere amphiphile et de principe(s) actif(s) a liberation modifiee et formulations pharmaceutiques en contenant
CN101618213B (zh) * 2008-07-03 2013-01-23 武汉生物制品研究所有限责任公司 麻疹腮腺炎乙型脑炎联合减毒活疫苗及其制备方法
JP2012505197A (ja) * 2008-10-08 2012-03-01 イミューン・ソリューションズ・リミテッド 粘膜免疫を生成するための経口ワクチン
WO2014206857A1 (en) * 2013-06-28 2014-12-31 Universitat Autonoma De Barcelona Oil-in-water formulations of mycobacterium and uses thereof
CN103923881B (zh) * 2013-08-09 2016-04-06 北京科兴生物制品有限公司 甲肝病毒单克隆抗体及其应用
JP6395855B2 (ja) 2014-04-03 2018-09-26 ベーリンガー インゲルハイム フェトメディカ インコーポレイテッド ブタ流行性下痢ウイルスワクチン
GB201716419D0 (en) 2017-10-06 2017-11-22 Univ Central Lancashire Solid composition
CA3155131A1 (en) 2019-09-23 2021-04-01 Dds Research Inc. Lipid vesicle compositions with penetration enhancing agents
CN112933044A (zh) * 2020-12-17 2021-06-11 太阳雨林（厦门）生物医药有限公司 一种用于恶性肿瘤治疗的载药油制剂及制备方法和应用
CN112961221B (zh) * 2021-02-28 2022-05-17 长春祈健生物制品有限公司 一种水痘-带状疱疹病毒糖蛋白e胞外区蛋白的制备方法

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5059421A (en) * 1985-07-26 1991-10-22 The Liposome Company, Inc. Preparation of targeted liposome systems of a defined size distribution
JPH01287041A (ja) 1988-05-13 1989-11-17 Rooman Kogyo:Kk 徐放性製剤
JP2513276B2 (ja) 1988-06-10 1996-07-03 日本電気株式会社 位相同期ル―プ
US5416017A (en) 1990-05-18 1995-05-16 The Scripps Research Institute Cholera toxin gene regulated by tissue-specific promoters
DE4107153A1 (de) 1991-03-06 1992-09-10 Gregor Cevc Praeparat zur wirkstoffapplikation in kleinsttroepfchenform
DE69128455T2 (de) * 1990-11-06 1998-06-18 Inst Nacional De Engenharia E Liposomale Mittel sowie Verfahren zu deren Herstellung
AU1442592A (en) * 1991-02-20 1992-09-15 Nova Pharmaceutical Corporation Controlled release microparticulate delivery system for proteins
EP0726761B1 (en) * 1993-11-03 2001-01-10 ISOMED, Inc. Microparticular pharmaceutical compositions in micellar form
US5858398A (en) * 1994-11-03 1999-01-12 Isomed Inc. Microparticular pharmaceutical compositions
KR100201352B1 (ko) 1995-03-16 1999-06-15 성재갑 단일주사 백신 제형
KR100236771B1 (ko) * 1997-04-01 2000-02-01 성재갑 히아루론산을 이용한 약물의 서방성 미세입자 제형
DE69732308T2 (de) * 1996-09-27 2005-06-02 Jagotec Ag Arzneistoffverabreichungssystem mit hyaluronsäure
US6096291A (en) 1996-12-27 2000-08-01 Biovector Therapeutics, S.A. Mucosal administration of substances to mammals
WO2002009674A2 (en) * 2000-07-28 2002-02-07 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Methods and compositions to upregulate, redirect or limit immune responses to bioactive compounds

Also Published As

Publication number Publication date
DK1071407T3 (da) 2014-10-20
AR043272A1 (es) 2005-07-27
CN1293568A (zh) 2001-05-02
HUP0101040A3 (en) 2005-11-28
ES2505696T3 (es) 2014-10-10
MY125541A (en) 2006-08-31
CA2324403A1 (en) 2000-07-20
HUP0101040A2 (hu) 2001-08-28
EP1071407A1 (en) 2001-01-31
CN1142772C (zh) 2004-03-24
AU3080500A (en) 2000-08-01
TWI260988B (en) 2006-09-01
BG65233B1 (bg) 2007-09-28
AU751200B2 (en) 2002-08-08
PL342967A1 (en) 2001-07-16
EP2481401A1 (en) 2012-08-01
EP1071407B1 (en) 2014-07-23
HK1036415A1 (en) 2002-01-04
BR0004152A (pt) 2000-11-21
TR200002683T1 (tr) 2000-12-21
EP1071407A4 (en) 2009-05-20
CA2324403C (en) 2005-12-13
NZ506975A (en) 2004-01-30
JP3802348B2 (ja) 2006-07-26
JP2002534459A (ja) 2002-10-15
WO2000041682A1 (en) 2000-07-20
IL138468A0 (en) 2001-10-31
ID25592A (id) 2000-10-19
BG104742A (en) 2001-07-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL200954B1 (pl) Lipofilowe mikrocząsteczki zawierające lek proteinowy lub peptydowy i preparat zawierający te mikrocząsteczki
US20030064105A1 (en) Lipophilic-coated microparticle containing a protein drug and formulation comprising same
JP2963540B2 (ja) 薬剤移送用ポリマーミクロ粒子
Okada et al. Biodegradable microspheres in drug delivery
Kim et al. Microencapsulation of human growth hormone within biodegradable polyester microspheres: protein aggregation stability and incomplete release mechanism
O'Donnell et al. Preparation of microspheres by the solvent evaporation technique
RU2143889C1 (ru) Способ стабилизации полипептида, способы получения композиций полипептида и композиции
US7785625B2 (en) Lipophilic-coated microparticle containing a protein drug and formulation comprising same
AU2003217367B2 (en) Polymer-based compositions for sustained release
AU2002358831B2 (en) Prolonged release biodegradable microspheres and method for preparing same
JPH11513047A (ja) ヒアルロン酸の微細粒子中に封入された薬物の徐放性組成物
EP0737472A1 (en) Single-shot vaccine formulation
EP0724432A1 (en) Methods and compositions for microencapsulation of antigens for use as vaccines
JP2010174021A6 (ja) 徐放型生物分解性微小球およびその製造方法
EP0724431A1 (en) Methods and compositions for microencapsulation of adjuvants
KR100329336B1 (ko) 히아루론산을 이용한 단백질 약물의 서방성 미세 입자 제형
KR100210510B1 (ko) 단백질 약물의 서방성 미세 입자 제형
MXPA00008860A (en) Lipophilic microparticles containing a protein drug or antigen and formulation comprising same
ZA200403065B (en) Prolonged release biodegradable microspheres and method for preparing same.
MXPA96000938A (en) Single application vaccination formulation

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20140114