PL195064B1 - Sposób otrzymywania 7a-hydroksy-17a-metylo-testosteronu - Google Patents

Abstract

Sposób wytwarzania 7a-hydroksy-17a- -metylo-testosteronu, o wzorze 2, na drodze transformacji mikrobiologicznej, znamienny tym, że hydroksylację substratu, którym jest 17a- -metylo-testosteron, o wzorze 1, prowadzi się przy pomocy kultury szczepu z gatunku Mucor circinelloides.

Description

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania 7a-hydroksy-17a-metylo-testosteronu, o wzorze 2.

Steroidowe 7a-hydroksypochodne z podstawnikiem alkilowym w pozycji 17α mogą być substratami dla diuretyków (K.E. Smith, F. Ahmed, T. Antonion, Biochemical Society Transactions, 1993, vol. 21, ss. 1077-1080).

Związek 7α-hydroksy-17α-metylo-testosteron jest znanym metabolitem 17α-metylo-testosteronu. który występuje między innymi u pstrąga tęczowego Oncorhynchus mykiss (J.P. Cravedi, G. Delous, L. Debrauwer, D. Prome, Drug Metabolism and Disposition, 1993, vol. 21, Nr 2, ss. 377-385).

Nie są znane sposoby izolacji tej pochodnej z organizmów ssaków. Są natomiast znane sposoby hydroksylacji testosteronu w pozycji C-7 u ryb i innych gatunków zwierząt, w tym również ssaków (H. Inano, K. Mori, B. Tamaoki, J.A. Gustafsson, Gen. Comp. Endocrinal., 1976, vol. 30, 258-266; J. Maenpa, T. Syngelma, P. Honkakoski, M.A. Lang, O. Pelkonen, Biochem. Pharmacol., 1991, vol. 42, ss. 1229-1235).

Wynalazek dotyczy sposobu otrzymywania 7a-hydroksy-17a-metylo-testosteronu, o wzorze 2, przy użyciu systemu enzymatycznego mikroorganizmu.

Istota wynalazku polega na tym, że hydroksylację substratu, którym jest 17a-metylo-testosteron, o wzorze 1, prowadzi się przy pomocy kultury szczepu grzyba z gatunku Mucor circinelloides.

Korzystne jest, gdy hydroksylację prowadzi się wodną kulturą szczepu, przy ciągłym mieszaniu reagentów, w temperaturze 291-297 K.

Postępując zgodnie z wynalazkiem, w wyniku działania układu enzymatycznego zawartego w komórkach grzyba strzępkowego Mucor circinelloides, następuje hydroksylacja substratu w pozycji 7α.

Uzyskany w ten sposób produkt wydziela się z wodnej kultury mikroorganizmu, znanym sposobem przez ekstrakcję chloroformem.

Zasadniczą zaletą wynalazku jest otrzymywanie 7a-hydroksy-17a-metylo-testosteronu, jako drugiego głównego produktu reakcji, z wydajnością 40%.

Wynalazek jest bliżej objaśniony w przykładzie wykonania.

P r z y k ł a d. Do kolby Erlenmajera o pojemności 250 cm³, w której znajduje się 100 cm³ sterylnej pożywki zawierającej 3,0 g glukozy i 1,0 g aminobaku wprowadza się Mucor circinelloides. Po trzech dniach wzrostu dodaje się 20 mg 7a-hydroksy-17a-metylo-testosteronu, o wzorze 1, rozpuszczonego w 1 cm3 acetonu. Transformację prowadzi się przy ciągłym wstrząsaniu przez 24 godziny w temperaturze 293 K.

Następnie uzyskany roztwór transformacyjny ekstrahuje się trzykrotnie chloroformem, osusza bezwodnym siarczanem magnezu i odparowuje rozpuszczalnik. Otrzymuje się 28 mg surowego produktu, który oczyszcza się chromatograficznie używając jako eluentu mieszaniny chlorku metylenuacetonu w stosunku 8:2. Na tej drodze otrzymuje się 8 mg 7a-hydroksy-17a-metylo-testosteronu (wydajność 40%).

Uzyskany produkt charakteryzuje się następującymi danymi spektralnymi:

¹H NMR (CDCla) δ (ppm): 1,20 s (3H, H-19); 0,90 s (3H, H-18); 1,23 s (3H, H-17a); 3,96 s (1H, Η-7β); 5,79 s (1H, H-4).

PL 195 064 B1

Claims (3)

1. Zastrzeżenia patentowe

   1. Sposób wytwarzania 7a-hydroksy-17a-metylo-testosteronu, o wzorze 2, na drodze transformacji mikrobiologicznej, znamienny tym, że hydroksylację substratu, którym jest 17a-mytylo-testosteron, o wzorze 1, prowadzi się przy pomocy kultury szczepu z gatunku Mucor circinelloides.
2. 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że hydroksylację prowadzi się wodną kulturą szczepu przy ciągłym mieszaniu.
3. 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że hydroksylację prowadzi się w temperaturze 291-297 K.