PL194218B1 - Sposób wytwarzania środka farmaceutycznego - Google Patents

Sposób wytwarzania środka farmaceutycznego

Info

Publication number
PL194218B1
PL194218B1 PL335203A PL33520399A PL194218B1 PL 194218 B1 PL194218 B1 PL 194218B1 PL 335203 A PL335203 A PL 335203A PL 33520399 A PL33520399 A PL 33520399A PL 194218 B1 PL194218 B1 PL 194218B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
polypeptide
complex
preparation
solution
mmol
Prior art date
Application number
PL335203A
Other languages
English (en)
Other versions
PL335203A1 (en
Inventor
Apollon Papadimitriou
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of PL335203A1 publication Critical patent/PL335203A1/xx
Publication of PL194218B1 publication Critical patent/PL194218B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/541—Organic ions forming an ion pair complex with the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
    • A61K47/544—Phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/554—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being a steroid plant sterol, glycyrrhetic acid, enoxolone or bile acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6903—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being semi-solid, e.g. an ointment, a gel, a hydrogel or a solidifying gel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A61K9/0024—Solid, semi-solid or solidifying implants, which are implanted or injected in body tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

1. Sposób wytwarzania srodka farmaceutycznego do miejscowego podawania ludziom, w po- staci przejrzystego roztworu wodnego, znamienny tym, ze jako sk ladnik podstawowy stosuje si e kompleks utworzony w wyniku oddzia lywania jonowego pomi edzy farmaceutycznie skutecznym poli- peptydem wybranym z grupy obejmuj acej bia lko hedgehog, bia lko morfogenetyczne ko sci, czynniki wzrostowe, erytropoetyn e, trombopoetyn e, G-CSF, interleukiny i interferony oraz zwi azkiem amfifilo- wym wybranym z grupy obejmuj acej anionowy, dwubiegunowy lub kationowy hydrofobowy srodek powierzchniowo czynny, kwas t luszczowy, alkilosulfonian, fosfatydyloseryn e i fosfatydan, przy czym ten zwi azek amfifilowy jest obecny w srodku farmaceutycznym w st ezeniu nie zwi ekszaj acym roz- puszczalno sci tego polipeptydu w wodzie, srodek farmaceutyczny ma odczyn o warto sci pH ró zni acej si e o co najmniej pó l jednostki pH od warto sci pK polipeptydu i zwi azku amfifilowego, oraz budowa cz asteczkowa polipeptydu zostaje zachowana w jego naturalnym aktywnym stanie, tak ze aktywnosc polipeptydu nie ulega zmniejszeniu. PL PL PL

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania środka farmaceutycznego do stosowania miejscowego.
Zastosowanie związków amfifilowych jako układów dostarczania leku jest dobrze znane (patrz np. opisy patentowe Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5650393, 5688761, 5665328, 5124081 i 5109038). Znane jest również wytwarzanie kompleksów w postaci miceli z substancji powierzchniowo czynnych i substancji farmaceutycznych, np. w celu zwiększenia przezskórnego lub przezbłonowego przenikania substancji czynnej (Tomlinson i Davis, J. Colloid. Interf., Sci. 74 (1980) 349). Wiadomo także, że substancje farmaceutyczne zwykle wykazują lepsze właściwości przenikania przez błony biologiczne w postaci niezjonizowanej niż w stanie zjonizowanym (Cools i Jansen, J. Pharm. Pharmacol. 35 (1983) 689-691). Wiadomo ponadto, że peptydy występujące w postaci wielokrotnie zjonizowanej przy fizjologicznych wartościach pH nie są również optymalne pod względem transportu do miejsca działania (dostarczania leku), gdyż naładowane cząsteczki, a zwłaszcza polipeptydy, wykazują niską rozpuszczalność w lipidach (Hirai i inni, Int. J. Pharm. 7 (1991) 317-325). Z publikacji Okada i inni, J. Pharm. Sci. 72 (1993) 75-78 wiadomo, że korzystne jest wiązanie lipofilowego przeciwjonu z jonową częścią substancji czynnej i polepszanie w ten sposób wzajemnego oddziaływania z błoną biologiczną w celu ułatwienia transportu białek przez błony jelitowe. Przykładowo Hazzenga i Berner w J. Controlled Release 16 (1991) 77-88 opisują ulepszony sposób przezskórnego transportu dwubiegunowych substancji czynnych.
Inne sposoby polepszania wzajemnego oddziaływania substancji z błonami biologicznymi opisali np. Lee i inni, Critical Rev. Therp. Drug Carrier Systems 8 (1991) 91-192, Morimoto i inni, Arch. Int. Pharmacodyn. 302 (1989) 18-26 oraz Aungst, Int. J. Pharm. 33 (1986) 225-234. Jednakże w tych wszystkich przypadkach celem było zwiększenie hydrofobowości substancji czynnej dla ułatwienia jej przenikania przez błony biologiczne, takie jak skóra, oraz dostarczenia tej substancji do komórki. W tym celu stosuje się środki powierzchniowo czynne w stężeniu wyż szym od krytycznego stężenia micelarnego (CMC, Womack i inni, Biochim. Biophys. Acta 733 (1983) 210). Wadą takich sposobów jest to, że wysokie stężenie stosowanych środków powierzchniowo czynnych wywiera bardzo silny wpływ na błonę komórkową i może ją uszkodzić.
W publikacji WO 85/04328 opisano kompozycję IL-2 odpowiednią do roztwarzania w farmaceutycznie dopuszczalnej zaróbce do podawania pozajelitowego, w postaci mieszaniny zrekombinowanej IL-2 wytwarzanej przez drobnoustroje, farmaceutycznie dopuszczalnego nośnika rozpuszczalnego w wodzie oraz środka powierzchniowo czynnego dla zapewnienia rozpuszczalności IL-2 w wodzie.
W publikacji WO 96/36352 ujawniono ciekły preparat substancji białkowej zawierający co najmniej dwa związki zwiększające absorpcję, w tym związki amfifilowe.
Z publikacji WO 94/08599 wiadomo, że można otrzymać jednorodny roztwór substancji czynnej w celu wytworzenia substancji czynnej zwią zanej z noś nikiem, przez dodanie odpowiedniej iloś ci anionowego detergentu dla wytrącenia osadu, oddzielenie osadu i ponowne rozpuszczenie go w rozpuszczalniku organicznym. Ten jednorodny roztwór, zawierający kompleks anionowego detergentu z substancją czynną, można nastę pnie stosować do osadzania lub dyspergowania substancji czynnej w stał ej matrycy. Ponadto w WO 94/08599 wspomniano, ż e mo ż na wytworzyć kompleks biał ka z anionowym detergentem, oraz że substancję czynną można z niego uwolnić w celu osiągnięcia kontrolowanego uwalniania białka.
Wiadomo, że aktywność białek można zwiększyć przez kowalencyjne sprzęganie ze związkami hydrofobowymi, takimi jak kwasy tłuszczowe lub steroidy. Jednakże takie sposoby są skomplikowane i prowadz ą do otrzymania niejednorodnych produktów w wyniku chemicznej reakcji sprzę gania (patrz np. Ekrami H.M. i inni, FEBS Letters 371 (1995) 283-286, Pepinski, R.B. i inni, J. Biol. Chem. 273 (1998) 14037-14045).
Istniała potrzeba opracowania sposobu wytwarzania środka farmaceutycznego zawierającego skuteczny polipeptyd, o zwiększonej aktywności polipeptydu. Nieoczekiwanie stwierdzono, że taki środek farmaceutyczny można otrzymać dzięki zastosowaniu kompleksu białka z odpowiednim związkiem amfifilowym.
Wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania środka farmaceutycznego do miejscowego podawania ludziom, w postaci przejrzystego roztworu wodnego, charakteryzującego się tym, że jako składnik podstawowy stosuje się kompleks utworzony w wyniku oddziaływania jonowego pomiędzy farmaceutycznie skutecznym polipeptydem wybranym z grupy obejmującej białko hedgehog, białko morfogenePL 194 218 B1 tyczne kości, czynniki wzrostowe, erytropoetynę, trombopoetynę, G-CSF, interleukiny i interferony oraz związkiem amfifilowym wybranym z grupy obejmującej anionowy, dwubiegunowy lub kationowy hydrofobowy środek powierzchniowo czynny, kwas tłuszczowy, alkilosulfonian, fosfatydyloserynę i fosfatydan, przy czym ten zwi ą zek amfifilowy jest obecny w ś rodku farmaceutycznym w stężeniu nie zwiększającym rozpuszczalności tego polipeptydu w wodzie, środek farmaceutyczny ma odczyn o wartości pH różniącej się o co najmniej pół jednostki pH od wartości pK polipeptydu i związku amfifilowego, oraz budowa cząsteczkowa polipeptydu zostaje zachowana w jego naturalnym aktywnym stanie, tak że aktywność polipeptydu nie ulega zmniejszeniu.
Korzystnie kompleks unieruchamia się na biokompatybilnym nośniku.
Polipeptyd i związek amfifilowy są rozpuszczalne przy stężeniach, w jakich są one stosowane w wodnych, korzystnie buforowanych roztworach i dopiero po połączeniu obu tych substancji powstaje kompleks w wyniku wzajemnych oddziaływań jonowych, co hydrofobizuje polipeptyd i tym samym pogarsza jego rozpuszczalność lub przynajmniej nie zwiększa jego rozpuszczalności w wodzie. Nieoczekiwanie okazało się, że w ten sposób można znacząco zwiększyć aktywność polipeptydów.
Ilość i stosunek związku amfifilowego i polipeptydu dobiera się tak, aby wodny środek zawierający kompleks jonowy stanowił przejrzysty roztwór. Gdy na skutek utworzenia się kompleksu polipeptydu ze związkiem amfifilowym powstanie zmętnienie, roztwór sączy się w celu otrzymania roztworu pozbawionego zmętnienia, jeżeli ten środek, będzie stosowany bezpośrednio jako roztwór do podawania pacjentowi. Zmętnienia nie trzeba usuwać, jeżeli ten środek będzie podawany pacjentowi w postaci unieruchomionej na noś niku.
Farmaceutycznie skutecznym polipeptydem jest polipeptyd, który może występować w postaci jonowej oraz jest rozpoznawany i wiązany przez powierzchniowy receptor komórki (receptor pozakomórkowy) w celu przejawienia swojej aktywności biologicznej. Do takich polipeptydów należą czynniki wzrostowe (np. NGF, TGF-β, FGF, GDF, insulinopodobne czynniki wzrostowe), erytropoetyna, trombopoetyna, G-CSF, interferony, takie jak interferon a2b, interleukiny, takie jak interleukina 2 lub interleukina 12, białka morfogenetyczne kości, takie jak BMP-2, lub białka hedgehog, takie jak białka hedgehog sonic, indian lub desert. Szczególnie korzystne są białka hedgehog. Korzystnie stosuje się polipeptydy, których aktywność (działanie terapeutyczne i/lub aktywność białka in vitro) jest zwiększona, korzystnie 10-krotnie lub bardziej w kompleksie polipeptydu ze związkiem amfifilowym w porównaniu z postacią nieskompleksowaną. Postać jonowa polipeptydu może powstać gdy znajdzie się on w środowisku, którego wartość pH różni się o co najmniej 0,5 jednostki pH od wartości pK polipeptydu.
Związek amfifilowy stosowany do tworzenia kompleksu stanowi anionowy, dwubiegunowy lub kationowy hydrofobowy środek powierzchniowo czynny, kwas tłuszczowy, alkilosulfonian lub lipid. Korzystnymi anionowymi środkami powierzchniowo czynnymi są detergenty anionowe, takie jak steroidowe tenzydy, np. deoksycholany, cholany, taurocholany, taurodeoksycholany, dehydrocholany (przydatne w przypadku kationowych polipeptydów). Korzystnymi dwubiegunowymi środkami powierzchniowo czynnymi są CHAPS (3[(3-cholamidopropylo)dimetyloamonio]-1-propanosulfonian) i Zwittergent® (N-dodecylo-N,N-dimetylo-3-amonio-1-propanosulfonian). Korzystnym detergentem kationowym jest bromek cetylotrimetyloamoniowy lub chlorek dodecyloamoniowy (przydatny w przypadku polipeptydów anionowych). Korzystnymi kwasami tłuszczowymi są takie kwasy tłuszczowe, takie jak kwas palmitynowy (przydatny w przypadku polipeptydów kationowych). Korzystne są alkilosiarczy i alkilosulfoniany, takie jak decylosulfonian (przydatny w przypadku polipeptydów kationowych). Korzystnymi lipidami są takie lipidy jak fosfatydyloseryna (przydatna w przypadku polipeptydów anionowych) i fosfatydan (przydatny w przypadku polipeptydów kationowych).
Związek amfifilowy dodaje się do kompozycji w warunkach, w których hydrofobizuje on polipeptyd i tym samym zmniejsza rozpuszczalność polipeptydu w wodzie lub przynajmniej nie zwiększa jej. Istotne znaczenie ma to, że zgodnie z wynalazkiem w tym procesie powstaje rozpuszczalny w wodzie kompleks jonowy polipeptydu ze związkiem amfifilowym. Stosunek polipeptydu do związku amfifilowego w kompleksie zależy od wartości pH, od wartości pK dwu substancji i od stosunku stężeń. Zazwyczaj dobiera się taką wartość pH, która różni się o co najmniej 0,5 jednostki pH od wartości pK polipeptydu i substancji pomocniczej. Im więcej dodaje się związku amfifilowego, tym więcej związku amfifilowego wiąże się z polipeptydem i tym bardziej hydrofobowy staje się kompleks. Może to doprowadzić do wytrącenia się kompleksu i tym samym do obecności mieszaniny rozpuszczalnego i nierozpuszczalnego kompleksu, która nie będzie już całkowicie rozpuszczalna w wodzie. Jednakże dodanie niejonowego detergentu, takiego jak poloksamer, np. Tween®, może co najmniej częściowo przywrócić rozpuszczalność kompleksu w wodzie, albo też, w razie potrzeby, kompozycję można przesączyć.
PL 194 218 B1
W takim przypadku niejonowy detergent może być również obecny w stężeniu prowadzącym do powstania miceli. Należy podkreślić, że typ i stężenie związku amfifilowego dobiera się tak, zwłaszcza w przypadku takich białek jak polipeptyd, aby struktura cząsteczkowa polipeptydu została zachowana w jego naturalnie aktywnej postaci, a zatem aby nie zmniejszy ł a się aktywność polipeptydu. Zazwyczaj wystarcza użycie w tym celu 10-krotnego nadmiaru związku amfifilowego. Korzystnie w przypadku ilości białka wynoszącej 5 μg/ml dodaje się 0,001 - 0,05% (wag./obj.) związku amfifilowego.
Gdy stosuje się np. środek powierzchniowo czynny powodujący denaturację, taki jak dodecylosiarczan sodu (SDS), to związek ten można stosować jedynie w niskim stężeniu. Wiadomo, że SDS w wysokim stężeniu denaturuje białka, co zwiększa rozpuszczalność w wodzie takich białek, ale w zdenaturowanej, nieaktywnej postaci. Takie związki amfifilowe jak SDS, oprócz tworzenia pożądanych kompleksów z polipeptydem, mogą również tworzyć micele przy wyższym stężeniu, co z kolei powoduje zwiększenie rozpuszczalności polipeptydu. To, czy związek amfifilowy powoduje niepożądaną denaturację polipeptydu, można łatwo ustalić metodami znanymi fachowcom. Takie metody to np. oznaczanie aktywności lub fizykochemiczne metody sprawdzania struktury, takie jak IR, CD i spektroskopia fluorescencyjna.
Rozpuszczalny w wodzie środek farmaceutyczny to środek zasadniczo nie zawierający nierozpuszczalnych cząstek zawierających farmaceutycznie skuteczny polipeptyd. W szczególności wodny środek farmaceutyczny wytwarzany sposobem według wynalazku stanowi środek nie wykazujący widocznego zmętnienia. Taki rozpuszczalny środek można otrzymać, gdy powstały kompleks jonowy jest całkowicie rozpuszczalny w wodzie przy stosowanych stężeniach polipeptydu i środka powierzchniowo czynnego, albo gdy nierozpuszczalny kompleks usunie się drogą filtracji. Wodny środek wytwarzany sposobem według wynalazku nie zawiera dodatkowych rozpuszczalników organicznych. Jednakże przy wytwarzaniu takich środków może okazać się konieczne rozpuszczenie związków amfifilowych, takich jak kwasy tłuszczowe, w niewielkiej ilości rozpuszczalnika organicznego (w ilości do 5%, korzystnie do 1% objętości środka).
Wodny środek farmaceutyczny otrzymuje się, gdy farmaceutycznie skuteczny polipeptyd i związek amfifilowy, który pogarsza rozpuszczalność farmaceutycznie skutecznego polipeptydu w wodzie lub przynajmniej nie zwiększa jej, łączy się w takim stosunku stężeń i przy takiej wartości pH, że powstaje kompleks jonowy polipeptydu z substancją pomocniczą, w wyniku wzajemnego oddziaływania jonowego.
Środek farmaceutyczny wytwarzany sposobem według wynalazku stosuje się do układowego lub miejscowego podawania do organizmu ludzi lub ssaków.
W korzystnej postaci środek farmaceutyczny zawiera białko hedgehog jako farmaceutycznie skuteczny polipeptyd. Wiadomo, że aktywność białek hedgehog można zwiększyć przez kowalencyjną modyfikację hydrofobową (europejskie zgłoszenie patentowe nr 99108032.6).
Zgodnie z wynalazkiem nieoczekiwanie stwierdzono, że aktywność białek hedgehog można w znacznym stopniu zwiększyć przez wytworzenie kompleksu jonowego białka hedgehog ze związkiem amfifilowym. W korzystnej postaci osiąga się 10-krotny lub wyższy wzrost aktywności białka hedgehog (w porównaniu ze zrekombinowanym białkiem hedgehog wytworzonym w E. coli).
Tak więc korzystny środek farmaceutyczny zawiera kompleks białka hedgehog ze związkiem amfifilowym powstały w wyniku wzajemnych oddziaływań jonowych, przy czym ten związek jest obecny w stężeniu, które pogarsza rozpuszczalność tego białka hedgehog lub przynajmniej nie zwiększa jego rozpuszczalności.
Białka hedgehog (hh) stanowią rodzinę wydzielonych białek sygnałowych odpowiedzialnych za tworzenie licznych struktur podczas embriogenezy (J.C. Smith, Cell 76 (1994) 193-196, N. Perrimon, Cell 80 (1995) 517-520, C, Chiang i inni, Nature 83 (1996) 407, M.J. Bitgood i inni, Curr. Biol. 6 (1996) 296, A. Vortkamp i inni, Science 273 (1996) 613, C.J. Lai i inni, Development 121 (1995) 2349). Podczas biosyntezy uzyskuje się N-końcową domenę o 20 kD i C-końcową domenę o 25 kD, po rozszczepieniu sekwencji sygnałowej i rozszczepieniu autokatalitycznym. W naturalnej postaci N-końcowa domena jest zmodyfikowana cholesterolem i palmitoilem (J.A. Porter i inni, Science 274 (1996) 255-259 oraz Pepinski i inni, J. Biol. Chem. 273 (1998) 14037-14045). W wyższych formach życia rodzina hh składa się z co najmniej trzech składników, a mianowicie sonic, indian i desert hh (Shh, Ihh, Dhh; M. Fietz i inni, Development (Suppl.) (1994) 43-51). Różnice w aktywności białek hedgehog wytworzonych rekombinacyjnie zaobserwowano po wytworzeniu w prokariotach i eukarictach (M. Hynes i inni, Neuron 15 (1995) 35-44 oraz T. Nakamura i inni, Biochem. Biophys. Res. Comm, 237 (1997) 465-469).
PL 194 218 B1
Szczególnie korzystnie stosuje się białka sonic, indian lub desert hh (Fietz M. i inni, Development (Suppl.) (1994) 43-51). Korzystnie stosuje się białko hh o sekwencji opisanej w banku danych EMBL pod nr L38518. Białka z rodziny hedgehog wykazują znaczącą homologię w sekwencji aminokwasów i z tego względu korzystna jest także ekspresja tych kwasów nukleinowych, które kodują białka hedgehog wykazujące homologię w 80% lub wyższą do wyżej wspomnianej sekwencji białka hedgehog sonic. Korzystnie stosuje się białka hedgehog opisane np. w publikacji zgłoszenia międzynarodowego nr WO 99/28454 i w europejskim zgłoszeniu patentowym nr 99108032.6.
Białko będące prekursorem ludzkiego białka hedgehog sonic zawiera sekwencję aminokwasów 1-462, opisaną w banku danych EMBL pod nr L38518. Aminokwasy 1-23 reprezentują peptyd sygnałowy, aminokwasy 24-197 reprezentują dojrzałą domenę sygnałową, aminokwasy 32-197 reprezentują domenę sygnałową skróconą o 8 aminokwasów, a aminokwasy 198-462 reprezentują autoprzetworzoną C-końcową domenę po rozszczepieniu autoproteolitycznym.
Działanie farmaceutyczne białka hedgehog to korzystnie działanie neurologiczne na komórki nerwowe, korzystnie osteogeneza i/lub osteoindukcja, a szczególnie korzystnie chondrogeneza i/lub chondroindukcja, jak to opisali Kinto i inni, FEBS Letters, 404 (1997) 319-323 w odniesieniu do działania pobudzającego kości, Miao i inni w J. Neurosci. 17 (1997) 5891-5899 w odniesieniu do działania na komórki nerwowe oraz Stott i inni, w J. Cell Sci. 110 (1997) 2691-2701 w odniesieniu do działania pobudzającego komórki chrząstek.
Roztwory białek hedgehog w wysokim stężeniu są niezbędne do wytworzenia matryc nośnikowych, które są pokryte kompleksami białek lub w których są osadzone kompleksy białek w taki sposób, aby osiągnąć skuteczność farmaceutyczną odpowiednią do podawania miejscowego. Okazało się, że nośniki, które można stosować w celach farmaceutycznych, powinny korzystnie zawierać białko hedgehog w stężeniu 0,1 - 10 mg/ml nośnika lub powyżej. Białka hedgehog są z natury słabo rozpuszczalne. Jednakże nieoczekiwanie okazało się, że rozpuszczalność białek hedgehog zdecydowanie zwiększa się, oraz trwałość białek hh zwiększa się przy niskim stężeniu (< 1 mg/ml lub poniżej) w roztworach zawierających argininę lub jony argininiowe. Z tego względu korzystnie jest dodać argininę lub jony argininiowe do wodnego roztworu i do kompleksu związanego z nośnikiem.
Aktywność białka hedgehog należy tu rozumieć jako aktywność fosfatazy alkalicznej (pobudzanie ekspresji fosfatazy alkalicznej), którą polipeptyd może wywołać w komórkach ssaczych (aktywność w teś cie fosfatazy alkalicznej). W tym teście linię mysich komórek fibroblastów hoduje się w pożywce zawierającej płodową surowicę cielęcą. Następnie dodaje się próbkę po przesączeniu w warunkach jałowych, komórki poddaje się lizie po około 5 dniach i oznacza się fosfatazę alkaliczną w lizacie komórek drogą rozszczepiania chromogenicznego substratu (pNP, p-nitrofenolu) (J. Asahina, Exp. Cell. Res. 222 (1996) 38-47 i T. Nakamura (1997)).
Środek farmaceutyczny wytwarzany sposobem według wynalazku zawiera farmakologicznie skuteczną dawkę białka hh i może być podawany układowo lub korzystnie miejscowo. Korzystnie stosuje się takie białka w połączeniu z innymi białkami z grupy białek hedgehog lub czynnikami wzrostowymi kości, takimi jak białka morfogenetyczne kości (BMP) (Wozney i inni, Cell. Mol. Biol. of Bone, Bone Morphogenetic Proteins and their Gene Expression (1993) Academic Press Inc., 131-167), z hormonami przytarczyc (Karablis i inni, Genes and Development 8 (1994) 277-289), z insulinopodobnymi czynnikami wzrostowymi (IGF-I lub II) lub z grupą transformujących czynników wzrostowych (TGF-β, GDF). Takie inne białka mogą, ale nie muszą być obecne w postaci kompleksów.
Rozpuszczalny w wodzie środek farmaceutyczny zawierający białko hedgehog otrzymuje się w wyniku połączenia tego białka hedgehog ze związkiem amfifilowym w warunkach, w których powstaje kompleks jonowy białka hedgehog ze związkiem amfifilowym.
Tak więc kompleks białka hedgehog stosuje się do wytwarzania środka farmaceutycznego, przy czym ten kompleks stosuje się jako podstawowy składnik tego środka ewentualnie w połączeniu z odpowiednimi dodatkowymi farmaceutycznymi substancjami pomocniczymi, korzystnie w buforowanym roztworze wodnym. Korzystnie kompleks białka hedgehog jest w postaci mieszaniny formy rozpuszczonej i wytrąconej lub tylko w postaci wytrąconej, co umożliwia przedłużone uwalnianie białka hedgehog lub podawanie miejscowe do miejsca działania in vivo. Uwalnianie białka w miejscu działania z takiej mieszaniny jest wolniejsze niż z całkowicie rozpuszczonego preparatu farmaceutycznego.
Ponadto przy wytwarzaniu środka farmaceutycznego korzystne jest dodawanie substancji pomocniczych, takich jak chlorek sodu, cukry (mannitol, sacharoza, laktoza, glukoza, trehaloza, korzystnie 20 - 100 mg/ml) lub aminokwasy, takie jak glicyna lub arginina, metionina, cysteina, a także przeciw6
PL 194 218 B1 utleniacze, takie jak EDTA, cytrynian, tiogliceryna, acetylocysteina, glikol polietylenowy (1 - 10% wag.), środki przeciwzapalne, środki przeciwbólowe o działaniu miejscowym, antybiotyki i/lub stabilizatory.
Korzystny jest środek farmaceutyczny zawierający białko hedgehog i suraminę i taki środek może być korzystnie stosowany.
Środek farmaceutyczny może zawierać dodatkowe farmaceutyczne substancje pomocnicze i jest korzystnie liofilizowany.
Korzystnie środek farmaceutyczny zawiera białko hedgehog w stężeniu 0,1 - 10 mg/ml, korzystnie 0,1-5 mg/ml.
W korzystnej postaci środek farmaceutyczny dodatkowo zawiera farmaceutycznie dopuszczalny bufor, który jest biokompatybilny, korzystnie o pH 4 - 10, a zwłaszcza o pH 6 - 8. Stężenie buforu wynosi korzystnie 10 - 500 mmoli/l, korzystniej 10 - 100 mmoli/l. Korzystnie jest dobrać stężenie soli tak, aby pomimo wysokiej siły jonowej nie zakłócało ono tworzenia kompleksu.
W innej postaci środek farmaceutyczny zawiera kompleks osadzony w noś niku, który jest biokompatybilny i może być np. użyty jako implant. Nośnikiem jest korzystnie polimer, który nie denaturuje białka hedgehog, gdy jest ono osadzone w nośniku, a jego średnia masa cząsteczkowa wynosi co najmniej 10000 Da.
Do takich polimerów należą np. kwas hialuronowy, kolagen, alginian lub polimery organiczne, takie jak PLGA (kopolimer kwasu polimlekowego i glikolowego), lub ich pochodne. Gdy kompleks jest osadzony w nośniku, nie ma potrzeby, aby kompleks był całkowicie rozpuszczalny w roztworze, tak jak to jest przydatne w przypadku wodnego środka farmaceutycznego opisanego powyżej. Gdy kompleks związany z nośnikiem podaje się miejscowo do organizmu, korzystnie jako kompleks polipeptydu hedgehog do kości lub chrząstki, polipeptyd będzie powoli uwalniać się z kompleksu w postaci rozpuszczalnej, zapewniając tym samym pożądane działanie biologiczne.
Środek farmaceutyczny, w postaci unieruchomionej (związanej odwracalnie) na biokompatybilnym nośniku, można stosować do podawania miejscowego do organizmu człowieka lub zwierząt. Do takich biokompatybilnych nośników należą np. kwas hialuronowy, kolagen, alginian lub polimery organiczne, takie jak PLGA, lub ich pochodne.
Kompleks polipeptydu ze związkiem amfifilowym, korzystnie umieszcza się na biokompatybilnym nośniku, tak że nośnik może uwalniać kompleks miejscowo in vivo w postaci aktywnej. Takie preparaty są szczególnie przydatne do naprawy defektów kości i chrząstek, lecz można je także stosować do naprawy uszkodzeń nerwów lub do podawania układowego.
Środek farmaceutyczny korzystnie zawiera polimer zasadniczo działający jako substancja nadająca konsystencję, korzystnie wykazujący również przyczepność do komórek. Taką substancją jest np. kolagen.
Środek farmaceutyczny wytwarzany sposobem według wynalazku stosuje się do zmniejszania układowych skutków ubocznych poza żądanym miejscem działania przy podawaniu miejscowym. Podawanie miejscowe farmaceutycznie skutecznego polipeptydu, który nie jest całkowicie unieruchomiony lub nie wykazuje wyjątkowo krótkiego miejscowego okresu półtrwania, może doprowadzić do rozprzestrzenienia się polipeptydu lub co najmniej jego części poza żądane miejsce działania, co prowadzi do niepożądanego działania układowego. Takie niepożądane skutki układowe można znacznie zmniejszyć lub nawet wyeliminować dzięki opisanemu środkowi farmaceutycznemu. Taki sposób jest odpowiedni w przypadku polipeptydów, które mają 10-krotnie lub bardziej zwiększoną aktywność w kompleksie jonowym w porównaniu z postacią nieskompleksowaną, gdy kompleks wykazuje niższą rozpuszczalność w buforowanym roztworze wodnym niż nieskompleksowany polipeptyd. Takie polipeptydy stanowią korzystnie białka hedgehog, cytokiny i czynniki wzrostowe, takie jak NGF.
Środek farmaceutyczny, zawierający kompleks jonowy polipeptydu i związku amfifilowego, korzystnie stosuje się miejscowo w takiej ilości, aby polipeptyd w tym kompleksie wykazywał aktywność odpowiadającą jego terapeutycznej dawce (dawce skutecznej) in vivo. Ilość kompleksu trzeba dobrać tak, że gdy kompleks ulega dysocjacji, co następuje np. wówczas gdy zostanie 10-20-krotnie rozcieńczony w warunkach fizjologicznych, np. we krwi, to aktywność polipeptydu odpowiada wówczas jedynie co najwyżej 20% dawki terapeutycznej. Zatem przy takim miejscowym podawaniu kompleksu farmaceutycznie skuteczny polipeptyd wykazuje pełne działanie terapeutyczne, takie jak miejscowy wzrost kości w żądanym miejscu działania, gdy polipeptyd jest czynnikiem wzrostowym kości, albo takie jak działanie cytostatyczne lub wywołujące apoptozę, gdy polipeptyd jest czynnikiem niszczącym nowotwór. Gdy kompleks dyfunduje z miejsca działania, ulega rozcieńczeniu w warunkach fizjologicznych panujących poza miejscem działania, co prowadzi do jego dysocjacji. Powoduje to zmniejszenie
PL 194 218 B1 stężenia skompleksowanego polipeptydu i wzrost stężenia nieskompleksowanego polipeptydu. Ponieważ aktywność nieskompleksowanego polipeptydu jest znacznie niższa niż aktywność skompleksowanego polipeptydu, jego działanie terapeutyczne również zmniejsza się poza miejscem działania.
W przypadku stosowania ś rodka farmaceutycznego do miejscowego podawania ludziom, kompleks podaje się w takiej ilości, że skompleksowany polipeptyd wykazuje aktywność odpowiadającą jego terapeutycznej dawce, podczas gdy taka sama ilość polipeptydu w postaci nieskompleksowanej wykazywałaby aktywność odpowiadającą co najwyżej 20% dawki terapeutycznej.
Publikacje dotyczące przedmiotu wynalazku podano na końcu opisu, a poniżej opisano figury rysunku.
Figura 1 przedstawia zależność indukowania fosfatazy alkalicznej w teście komórkowym przez shh, od wzrastającego stężenia deoksycholanu (Dch).
Figura 2 przedstawia zależność tworzenia się agregatów od stężenia deoksycholanu.
Wynalazek ilustrują poniższe przykłady.
P r z y k ł a d 1
Analiza aktywności różnych preparatów hedgehog w teście komórkowym:
Indukowanie fosfatazy alkalicznej
5000 mysich komórek mezenchymalnych o zdolności wielokierunkowego różnicowania się
C3H10T1/2 (ATCC CCL-226) wysiano do każdej studzienki 96-studzienkowej płytki do mikromianowania. Komórki znajdowały się w pożywce DMEM z 2 mM glutaminą, 100 IU penicyliny/ml, 100 μg streptomycyny/ml i 10% płodowej surowicy cielęcej. Następnego dnia pożywkę zastąpiono pożywką zawierającą ludzkie shh (0, 5 lub 50 μg/ml) w różnych preparatach (0, 0,00016, 0,00052, 0,0013, 0,0019 lub 0,01% deoksycholanu sodu) albo różne preparaty białka hedgehog dodano bezpośrednio. Test przerywano po 5 dniach. W tym celu supernatanty dekantowano i komórki jednokrotnie przemywano PBS. Komórki poddawano lizie w 50 μl 0,1% Triton® X-100 i zamrażano w -20°C. Po rozmrożeniu podwielokrotne porcje po 25 μl zastosowano do oznaczania białka i oznaczania aktywności fosfatazy alkalicznej.
Oznaczanie białka zgodnie z instrukcjami producenta, Pierce.
μl redestylowanej H2O dodaje się do mieszaniny, po czym dodaje się 100 μl odczynnika BCA do oznaczania białka (Pierce Micro BCA, No. 23225). Absorbancję mierzy się przy 550 nm po 60 minutach.
Oznaczanie aktywności fosfatazy alkalicznej zgodnie z instrukcjami producenta, Sigma.
Do mieszaniny dodaje się 100 μl buforu reakcyjnego (Sigma 221). Kapsułkę substratu (Sigma 104-40) rozpuszcza się w 10 ml H2O, po czym porcję 100 μl dodaje się za pomocą pipety do badanej mieszaniny. Absorbancję mierzy się przy 405 nm. Podczas reakcji fosfataza alkaliczna przekształca fosforan p-nitrofenylu w p-nitrofenol (pNP). Zmierzone wartości absorbancji przelicza się na nmole pNP na podstawie krzywych wzorcowych.
Aktywność różnych preparatów hedgehog w nmolach pNP/min/mg białka przedstawiono w postaci wykresu na fig. 1. Wykazuje on, że przy tych samym stężeniu białka aktywność zbadanych preparatów hedgehog znacznie zwiększa się ze wzrostem stężenia deoksycholanu.
P r z y k ł a d 2
Miareczkowanie hydrofobowej pary jonowej hshh (dimeru)
Zrekombinowane ludzkie białko hedgehog sonic (dimer, 0,8 mg/ml w 50 mM Tris-Cl, pH 7,4 lub w 0,1% Tween 80, 50 mM Tris-Cl, pH 7,4) zmieszano z deoksycholanem sodu we wzrastającym stężeniu. Mierzono absorbancję przy 360 nm jako wskaźnik zmętnienia (powstawania nierozpuszczalnych w wodzie agregatów złożonych z jonowych kompleksów białko-detergent). Z fig.2 wyraźnie wynika, że przemiana w nierozpuszczalne w wodzie agregaty zachodzi przy stężeniu deoksycholanu sodu powyżej około 0,04%. Powstawaniu nierozpuszczalnych w wodzie agregatów można w znacznym stopniu zapobiec w obecności 0,1% Tween 80. Podanych wartości absorbancji nie skorygowano z uwzględnieniem rozcieńczenia.
P r z y k ł a d 3
Analiza preparatów NGF w teście bioaktywności:
Test rozwoju neuronów zwoju korzenia grzbietowego
Bioaktywność NGF oznaczano na podstawie analizy morfometrycznej rozwoju neuronów zwoju korzenia grzbietowego (DRG) in vitro. Pokrótce, lędźwiowe DRG wycięto embrionalnym kurczętom E7-E8, uwolniono od otaczającej tkanki łącznej i rozdrobniono przez przeciskanie przez polerowaną ogniowo pipetę Pasteura, po trawieniu 0,1% trypsyną przez 20 minut w 37°C. Zanieczyszczające ko8
PL 194 218 B1 mórki, takie jak fibroblasty, usunięto przez wstępne wysianie całego preparatu komórkowego na płytki z tworzywa sztucznego do hodowli komórek na 2 godziny. W tych warunkach neurony nie przyklejaj ą się do podłoża, podczas gdy fibroblasty i inne komórki nieneuronalne przywierają do tworzywa sztucznego do hodowli komórek. „Czyste” neurony zebrano przez oddzielenie supernatantu i wysiano na płytkach z tworzywa sztucznego, pokrytych poli-ornityną/lamininą (48 studzienek) w ilości 10000 komórek/studzienkę, w pożywce HAM F14 zawierającej 5% FBS. Krzywą reakcji na dawkę dla NGF wyznaczono przez miareczkowanie w zakresie od około 1 pg/ml do 15 ng/ml. Aktywność neurotroficzną określano ilościowo przez zliczanie żywych zróżnicowanych neuronów, które rozwinęły neuryty o ś rednicy dwukrotnie większej niż ciało komórki nerwowej po inkubowaniu przez 48 godzin z różnymi preparatami NGF. Wyniki przedstawiono na wykresie jako średnią liczbę podwójnych oznaczeń zróżnicowanych neuronów w funkcji stężenia badanego preparatu NGF, po czym obliczano aktywność pobudzającą NGF odpowiadającą połowie wartości maksymalnej (EC50) dla różnych preparatów (poniższa tabela).
T a b e l a
Aktywność pobudzająca NGF odpowiadająca połowie wartości maksymalnej (EC50)
Preparat EC50 (pg/ml)
NGF (bez dodatku) 75
NGF (0,006% deoksycholanu sodu) 17
NGF (0,02% deoksycholanu sodu) 10
Wyniki te wyraźnie wskazują, że aktywność właściwa NGF jest zwiększona w przypadku preparatów zawierających dodatek amfifilowy (w tym przypadku deoksycholan sodu).
P r z y k ł a d 4
Środki farmaceutyczne zawierające deoksycholan W celu wytworzenia ś rodka farmaceutycznego 100 ml wodnego roztworu 5 mg/ml lub 1 mg/ml
Hshh (ludzkiego białka hedgehog sonic) w buforze Tris, 50 mmoli/l, pH 7,4, poddano dializie względem roztworu do wytwarzania preparatu bez deoksycholanu przez 24 godziny w 4°C. Po dializie, w trakcie mieszania dodano deoksycholanu sodu z uż yciem roztworu podstawowego i otrzymano wodny środek farmaceutyczny zawierający 1 mg/ml lub 5 mg/ml Hshh, rozpuszczonego w roztworze do wytwarzania preparatu. Roztwór przesączono w warunkach jałowych i przechowywano w 4°C. Porcje 0,05-2 ml roztworu stosuje się do wstrzykiwania ludziom lub zwierzętom.
4.1. Preparat jonowo hydrofobizowanego białka hedgehog w wodnym roztworze soli buforowanym fosforanem (niskie stężenie deoksycholanu sodu)
Roztwór do wytwarzania preparatu NaCl 150 mmoli/l
Fosforan sodu, bufor 10 mmoli/l
Deoksycholan sodu 0,05% (wag./obj.) pH 7,4
4.2. Preparat jonowo hydrofobizowanego białka hedgehog w wodnym roztworze soli buforowanym fosforanem (wysokie stężenie deoksycholanu sodu)
Roztwór do wytwarzania preparatu NaCl 150 mmoli/l
Fosforan sodu, bufor 10 mmoli/l
Deoksycholan sodu 0,1% (wag./obj.) pH 7,4
4.3. Preparat jonowo hydrofobizowanego białka hedgehog w buforze fosforanowym o małej sile jonowej (niskie stężenie deoksycholanu sodu).
Roztwór do wytwarzania preparatu NaCl 30 mmoli/l
Fosforan potasu, bufor 20 mmoli/l
Deoksycholan sodu 0,05% (wag./obj.) pH 6,5
PL 194 218 B1
4.4. Preparat jonowo hydrofobizowanego białka hedgehog w buforze fosforanowym o małej sile jonowej (duże stężenie deoksycholanu sodu)
Roztwór do wytwarzania preparatu
NaCl 30 mmoli/l
Fosforan potasu, bufor 20 mmoli/l
Deoksycholan sodu 0,1% (wag./obj.) pH 6,5
P r z y k ł a d 5
Środki farmaceutyczne zawierające jonowo hydrofobizowane białko hedgehog w roztworze soli buforowanym fosforanem z lipidami, kwasami tłuszczowymi lub steroidami
W celu wytworzenia środka farmaceutycznego 100 ml wodnego roztworu 1 mg/ml lub 2 mg/ml Hshh w buforze Tris, 50 mmoli/l, pH 7,4, poddano dializie względem roztworu do wytwarzania preparatu bez lipidu, kwasu tłuszczowego lub cholanu przez 24 godziny w 4°C. Po dializie, w trakcie mieszania dodano 0,01 g fosfatydanu, 0,01 g fosfatydyloseryny, 0,01 g palmitynianu, 0,05 g cholanu, 0,05 g taurodeoksycholanu lub 0,05 g taurocholanu z użyciem roztworów podstawowych i otrzymano wodny środek farmaceutyczny zawierający 1 mg/ml lub 2 mg/ml Hshh, rozpuszczonego w roztworze do wytwarzania preparatu. Roztwór przesączono w warunkach jałowych i przechowywano w 4°C. Porcje 0,05-2 ml roztworu stosuje się do wstrzykiwania ludziom lub zwierzętom.
Roztwór do wytwarzania preparatu
NaCl
Fosforan sodu, bufor
Fosfatydan pH
Roztwór do wytwarzania preparatu
NaCl
Fosforan sodu, bufor
Fosfatydyloseryna pH
Roztwór do wytwarzania preparatu
NaCl
Fosforan potasu, bufor Palmitynian sodu pH
Roztwór do wytwarzania preparatu
NaCl
Fosforan sodu, bufor
Cholan sodu pH
Roztwór do wytwarzania preparatu
NaCl
Fosforan sodu, bufor
Taurodeoksycholan sodu pH
Roztwór do wytwarzania preparatu
150 mmoli/l 10 mmoli/l 0,01% (wag./obj.)
7,4
100 mmoli/l 10 mmoli/l 0,01% (wag./obj.)
7,4
150 mmoli/l 20 mmoli/l 0,01% (wag./obj.)
7,4
150 mmoli/l 10 mmoli/l 0,05% (wag./obj.)
7,4
100 mmoli/l 10 mmoli/l 0,05% (wag./obj.)
7,4
NaCl 150 mM
Fosforan potasu, bufor 20 mM
Taurocholan sodu 0,05% (wag./obj.) pH 7,4
P r z y k ł a d 6
Środki farmaceutyczne zawierające jonowo hydrofobizowane białko morfogenetyczne kości (BMP-2) w buforach argininowych
W celu wytworzenia środka farmaceutycznego 100 ml wodnego roztworu 0,4 mg/ml BMP-2 poddano dializie wobec 500 mmoli/l argininy w buforze z fosforanu potasu, 10 mmoli/l, pH 6,0, przez 24 godziny w 4°C. Po dializie, w trakcie mieszania dodano 0,01 g (palmitynianu) lub 0,05 g (deoksycholanu lub taurodeoksycholanu) z użyciem roztworu podstawowego i otrzymano wodny środek farmaceutyczny zawierający 0,4 mg/ml BMP, rozpuszczonego w roztworze do wytwarzania preparatu.
PL 194 218 B1
Roztwór przesączono w warunkach jałowych i przechowywano w 4°C. Porcje 0,05-2 ml roztworu stosuje się do wstrzykiwania ludziom lub zwierzętom.
Roztwór do wytwarzania preparatu:
Arginina 500 mmoli/l
Fosforan potasu, bufor 10 mmoli/l
Deoksycholan sodu 0,05% (wag./obj.)
pH 6,0
Roztwór do wytwarzania preparatu
Arginina 500 mmoli/l
Fosforan potasu, bufor 10 mmoli/l
Palmitynian sodu 0,01% (wag./obj.)
pH 6,0
Roztwór do wytwarzania preparatu
Arginina 500 mmoli/l
Fosforan potasu, bufor 10 mmoli/l
Taurodeoksycholan sodu 0,05% (wag./obj.)
pH 6,0
P r z y k ł a d 7
Środki farmaceutyczne zawierające jonowo hydrofobizowaną interleukinę 2 w roztworze soli buforowanym fosforanem
W celu wytworzenia środka farmaceutycznego 100 ml wodnego roztworu 1 lub 2 milionów IU interleukiny 2 w buforze Tris, 50 mmoli/l, pH 7,4, poddano dializie względem roztworu do wytwarzania preparatu bez związku amfifilowego przez 24 godziny w 4°C. Po dializie, w trakcie mieszania dodano 0,05 g deoksycholanu, 0,01 g fosfatydyloseryny lub 0,01 g palmitynianu sodu z użyciem roztworu podstawowego i otrzymano wodny środek farmaceutyczny zawierający 1 lub 2 miliony IU interleukiny 2, rozpuszczonej w roztworze do wytwarzania preparatu. Roztwór przesączono w warunkach jałowych i przechowywano w 4°C. Porcje 0,05-2 ml roztworu stosuje się do wstrzykiwania ludziom lub zwierzętom.
Roztwór do wytwarzania preparatu
NaCl 150 mmoli/l
Fosforan sodu, bufor 10 mmoli/l
Deoksycholan 0,05% (wag./obj.)
pH 7,4
Roztwór do wytwarzania preparatu
NaCl 150 mmoli/l
Fosforan sodu, bufor 10 mmoli/l
Fosfatydyloseryna 0,01% (wag./obj.)
pH 7,4
Roztwór do wytwarzania preparatu
NaCl 150 mmoli/l
Fosforan potasu, bufor 20 mmoli/l
Palmitynian sodu 0,01% (wag./obj.)
pH 7,4
P r z y k ł a d 8
Środki farmaceutyczne zawierające jonowo hydrofobizowany interferon α w roztworze soli buforowanym fosforanem.
W celu wytworzenia środka farmaceutycznego 100 ml wodnego roztworu 4 lub 40 milionów IU interferonu a2b w buforze Tris, 50 mmoli/l, pH 7,4, poddano dializie względem roztworu do wytwarzania preparatu bez substancji amfifilowej przez 24 godziny w 4°C. Po dializie dodano 0,05 g deoksycholanu, 0,01 g fosfatydyloseryny lub 0,05 g taurodeoksycholanu z użyciem roztworu podstawowego i otrzymano wodny środek farmaceutyczny zawierający 4 lub 40 milionów IU interferonu a2b, rozpuszczonego w roztworze do wytwarzania preparatu. Roztwór przesączono w warunkach jałowych i przechowywano w 4°C. Porcje 0,05-2 ml roztworu stosuje się do wstrzykiwania ludziom lub zwierzętom.
Roztwór do wytwarzania preparatu
NaCl 150 mmoli/l
Fosforan sodu, bufor 10 mmoli/l
PL 194 218 B1
Deoksycholan pH
Roztwór do wytwarzania preparatu NaCl
Fosforan sodu, bufor
Fosfatydyloseryna pH
Roztwór do wytwarzania preparatu
0,05% (wag./obj.) 7,4
100 mmoli/l mmoli/l
0,01% (wag./obj.) 7,4
NaCl 150 mmoli/l
Fosforan potasu, bufor 20 mmoli/l
Taurodeoksycholan sodu 0,05% (wag./obj.) pH 7,4
P r z y k ł a d 9
Środki farmaceutyczne zawierające jonowo hydrofobizowany ludzki NGF w buforach octanowych
W celu wytworzenia ś rodka farmaceutycznego do 100 ml wodnego roztworu 1 lub 2 mg/ml ludzkiego NGF w buforze z octanu sodu, 100 mmoli/l, pH 6,0, w trakcie mieszania dodano 0,05 g deoksycholanu, 0,01 g fosfatydanu lub 0,05 g taurodeoksycholanu z użyciem roztworów podstawowych i otrzymano wodne środki farmaceutyczne. Roztwory przesączono w warunkach jałowych i przechowywano w 4°C. Porcje 0,05-2 ml roztworu stosuje się do wstrzykiwania ludziom lub zwierzętom.
Środki farmaceutyczne mg/ml 100 mmoli/l 0,05% (wag./obj.) 6,0 mg/ml
100 mmoli/l 0,01% (wag./obj.) 6,0 mg/ml 100 mmoli/l 0,05% (wag./obj.) 6,0
Ludzki NGF Octan sodu, bufor Deoksycholan
PH
Ludzki NGF Octan sodu, bufor Fosfatydan pH
Ludzki NGF Octan sodu, bufor Taurodeoksycholan sodu pH
P r z y k ł a d 10
Wytwarzanie żelu alginianowego zawierającego białka hedgehog Porcję roztworu preparatu z przykładu 4.1 zmieszano z 1% (wag./obj.) podstawowego wodnego roztworu alginianu sodu (Pronova Biopolimer, Norwegia) w taki sposób, że powstała galaretowata mieszanina białka alginianowego. Żel ten stosuje się bezpośrednio jako matrycę do iniekcji, w ilości 0,05-2 ml.
P r z y k ł a d 11
Wytwarzanie mieszaniny kolagenowej zawierającej BMP-2
100 μΐ roztworu preparatu z przykładu 6 wkroplono na gąbki kolagenowe (Helistat, Integra Life Science, USA) o wielkości 10 x 10 x 3 mm. Obciążone nośniki następnie zamrożono (-70°C) i zliofilizowano. Gąbkę stosuje się miejscowo w celu doprowadzenia do zrośnięcia pękniętej kości.
Literatura
Asahina, J. Exp. Cell. Res. 222 (1996) 38-47
Aungst, Int. J. Pharm. 33 (1986) 225-234
Bitgood, M.J. i inni, Curr. Biol. 6 (1996) 296
Chiang, C. i inni, Nature 83 (1996) 407
Cools i Jansen, J. Pharm. Pharmacol. 35 (1983) 689-691 Ekrami, J.M. i inni FEBS Letters 371 (1995) 283-286 Europejskie zgłoszenie patentowe nr 99108032.6 Fietz, M. i inni, Development (Suppl) (1994) 43-51 Hazzenga i Berner, J. Controlled Release 16 (1991) 77-88
PL 194 218 B1
Hirai i inni, Int. J. Pharm. 7 (1991) 317-325
Hynes, M. i inni, Neuron 15 (1995) 35-44
Karablis i inni, Genes and Development 8 (1994) 277-289
Kinto i inni, FEBS Letters, 404 (1997) 319-323
Lai, C.J. i inni, Development 121 (1995) 2349
Lee i inni, Critical Rev. Therap. Drug Carrier Systems 8 (1991) 91-192
Miao i inni, J. Neurosci. 17 (1997) 5891-5899
Morimoto i inni, Arch.Int. Pharmacodyn. 302 (1989) 18-26
Nakamura, T. i inni, Biochem. Biophys. Res. Comm. 237 (1997) 465-469
Okada i inni, J.Pharm.Sci. 72 (1993) 75-78
Pepinski, R.B. i inni, J. Biol. Chem. 273 (1989) 14037-14045
Perrimon, N., Cell 80 (1995) 517-520
Porter, J.A. i inni, Science 274 (1996) 255-259
Smith, J.C., Cell 76 (1994) 193-196
Stott i inni, J. Cell Sci. 110 (1997) 2691-2701
Tomlinson i Davis, J. Colloid. Interf., Sci. 74 (1980) 349
Opis patentowy US 5650393
Opis patentowy US 5109038
Opis patentowy US 5124081
Opis patentowy US 5665328
Opis patentowy US 5688761
Vortkamp, A. i inni, Science 273 (1996) 613
Publikacja WO 99/28454
Womack i inni, Biochim. Biophys. Acta 733 (1983) 210
Wozney i inni, Cell. Mol. Biol. of Bone, Bone Morphogenetic Proteins and their Gene Expression, (1993) Academic Press Inc. 131-167

Claims (2)

1. Sposób wytwarzania środka farmaceutycznego do miejscowego podawania ludziom, w postaci przejrzystego roztworu wodnego, znamienny tym, że jako składnik podstawowy stosuje się kompleks utworzony w wyniku oddziaływania jonowego pomiędzy farmaceutycznie skutecznym polipeptydem wybranym z grupy obejmującej białko hedgehog, białko morfogenetyczne kości, czynniki wzrostowe, erytropoetynę, trombopoetynę, G-CSF, interleukiny i interferony oraz związkiem amfifilowym wybranym z grupy obejmującej anionowy, dwubiegunowy lub kationowy hydrofobowy środek powierzchniowo czynny, kwas tłuszczowy, alkilosulfonian, fosfatydyloserynę i fosfatydan, przy czym ten związek amfifilowy jest obecny w środku farmaceutycznym w stężeniu nie zwiększającym rozpuszczalności tego polipeptydu w wodzie, środek farmaceutyczny ma odczyn o wartości pH różniącej się o co najmniej pół jednostki pH od wartości pK polipeptydu i związku amfifilowego, oraz budowa cząsteczkowa polipeptydu zostaje zachowana w jego naturalnym aktywnym stanie, tak że aktywność polipeptydu nie ulega zmniejszeniu.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że kompleks unieruchamia się na biokompatybilnym nośniku.
PL335203A 1998-09-01 1999-09-01 Sposób wytwarzania środka farmaceutycznego PL194218B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP98116494 1998-09-01

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL335203A1 PL335203A1 (en) 2000-03-13
PL194218B1 true PL194218B1 (pl) 2007-05-31

Family

ID=8232558

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL335203A PL194218B1 (pl) 1998-09-01 1999-09-01 Sposób wytwarzania środka farmaceutycznego

Country Status (30)

Country Link
US (3) US6867182B2 (pl)
EP (1) EP1002547B1 (pl)
JP (1) JP3664373B2 (pl)
KR (1) KR100403075B1 (pl)
CN (1) CN1325118C (pl)
AR (1) AR023044A1 (pl)
AT (1) ATE318616T1 (pl)
AU (1) AU755930B2 (pl)
BR (1) BR9903984B1 (pl)
CA (1) CA2281049C (pl)
CO (1) CO5271726A1 (pl)
DE (1) DE69930033T2 (pl)
ES (1) ES2258830T3 (pl)
GC (1) GC0000107A (pl)
HR (1) HRP990272B1 (pl)
HU (1) HUP9902952A1 (pl)
ID (1) ID22964A (pl)
IL (1) IL131626A0 (pl)
MA (1) MA26682A1 (pl)
MY (1) MY127935A (pl)
NO (1) NO994214L (pl)
NZ (1) NZ337527A (pl)
PE (1) PE20001027A1 (pl)
PL (1) PL194218B1 (pl)
RU (1) RU2180855C2 (pl)
SG (1) SG85670A1 (pl)
TR (1) TR199902103A2 (pl)
TW (1) TW570805B (pl)
YU (1) YU42399A (pl)
ZA (1) ZA995601B (pl)

Families Citing this family (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060193825A1 (en) * 2003-04-29 2006-08-31 Praecis Phamaceuticals, Inc. Pharmaceutical formulations for sustained drug delivery
US20050112087A1 (en) * 2003-04-29 2005-05-26 Musso Gary F. Pharmaceutical formulations for sustained drug delivery
EP1641486B1 (en) * 2003-06-10 2012-04-18 LG Life Sciences Ltd. Stable, aqueous solution of human erythropoietin, not containing serum albumin
DK1758590T3 (da) * 2004-05-19 2011-11-21 Los Angeles Biomed Res Inst Anvendelse af et detergent til ikke-kirurgisk fjernelse af fedt
US7754230B2 (en) * 2004-05-19 2010-07-13 The Regents Of The University Of California Methods and related compositions for reduction of fat
US20060127468A1 (en) 2004-05-19 2006-06-15 Kolodney Michael S Methods and related compositions for reduction of fat and skin tightening
US20090214625A1 (en) * 2005-07-15 2009-08-27 Mizuo Nakayama Drug delivery patch
JP2007037868A (ja) * 2005-08-05 2007-02-15 Transcutaneous Technologies Inc 経皮投与装置及びその制御方法
US20070042041A1 (en) * 2005-08-17 2007-02-22 Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Drug-surfactant complexes for sustained release
BRPI0616166A2 (pt) * 2005-09-16 2011-06-07 Tti Ellebeau Inc dispositivo de iontoforese do tipo de cateter
US20070093787A1 (en) * 2005-09-30 2007-04-26 Transcutaneous Technologies Inc. Iontophoresis device to deliver multiple active agents to biological interfaces
WO2007079116A1 (en) * 2005-12-28 2007-07-12 Tti Ellebeau, Inc. Electroosmotic pump apparatus and method to deliver active agents to biological interfaces
WO2007079193A2 (en) * 2005-12-30 2007-07-12 Tti Ellebeau, Inc. Iontophoretic systems, devices, and methods of delivery of active agents to biological interface
US20080004564A1 (en) * 2006-03-30 2008-01-03 Transcutaneous Technologies Inc. Controlled release membrane and methods of use
WO2008005458A2 (en) * 2006-07-05 2008-01-10 Tti Ellebeau, Inc. Delivery device having self-assembling dendritic polymers and method of use thereof
EP2049149B1 (en) 2006-07-31 2015-04-15 Novo Nordisk A/S Pegylated extended insulins
JP5864834B2 (ja) 2006-09-22 2016-02-17 ノボ・ノルデイスク・エー／エス プロテアーゼ耐性のインスリンアナログ
US20080193514A1 (en) * 2006-11-02 2008-08-14 Transcu Ltd. Compostions and methods for iontophoresis delivery of active ingredients through hair follicles
FR2908414B1 (fr) 2006-11-13 2012-01-20 Centre Nat Rech Scient Immobilisation de proteines membranaires sur un support par l'intermediaire d'une molecule amphiphile
JPWO2008087803A1 (ja) * 2007-01-16 2010-05-06 国立大学法人北海道大学 抗酸化成分を封入したイオントフォレーシス用リポソーム製剤
US9387176B2 (en) 2007-04-30 2016-07-12 Novo Nordisk A/S Method for drying a protein composition, a dried protein composition and a pharmaceutical composition comprising the dried protein
US20100190706A1 (en) * 2007-06-01 2010-07-29 Novo Nordisk A/S Stable Non-Aqueous Pharmaceutical Compositions
JP2010187707A (ja) * 2007-06-12 2010-09-02 Hokkaido Univ インスリンを封入したイオントフォレーシス用リポソーム製剤
JP5762001B2 (ja) 2008-03-14 2015-08-12 ノボ・ノルデイスク・エー／エス プロテアーゼ安定化インスリンアナログ
PT2254906T (pt) 2008-03-18 2017-01-03 Novo Nordisk As Análogos de insulina acilados, estabilizados contra proteases
BRPI0918060A2 (pt) * 2008-09-10 2015-12-01 Transcu Ltd aparelho e método de distribuição de líquidos viscosos a base de hpc em substratos porosos, por exemplo, processo contínuo a base de tecido.
WO2012134540A2 (en) * 2010-10-22 2012-10-04 Vanderbilt University Injectable synthetic pur composite
US8101593B2 (en) 2009-03-03 2012-01-24 Kythera Biopharmaceuticals, Inc. Formulations of deoxycholic acid and salts thereof
SG10201408505SA (en) * 2009-12-22 2015-02-27 Celldex Therapeutics Inc Vaccine compositions
US20120237492A1 (en) 2011-02-18 2012-09-20 Kythera Biopharmaceuticals, Inc. Treatment of submental fat
US8653058B2 (en) 2011-04-05 2014-02-18 Kythera Biopharmaceuticals, Inc. Compositions comprising deoxycholic acid and salts thereof suitable for use in treating fat deposits
BR112014023068B1 (pt) 2012-03-23 2022-03-03 Amicrobe, Inc Composição aquosa para prevenir, inibir ou tratar infecção e respectivo uso
CA2870313A1 (en) 2012-04-11 2013-10-17 Novo Nordisk A/S Insulin formulations
AU2014333979B2 (en) 2013-10-07 2018-02-15 Novo Nordisk A/S Novel derivative of an insulin analogue
KR101945498B1 (ko) * 2015-11-04 2019-02-08 포항공과대학교 산학협력단 양이온성 분자 수송체 및 단백질을 포함하는 피부 투과용 조성물
CN110087674B (zh) 2016-12-16 2023-01-03 诺和诺德股份有限公司 含胰岛素的药物组合物
SG11201909016TA (en) 2017-04-06 2019-10-30 Amicrobe Inc Compositions and uses of locally-applied antimicrobial synthetic cationic polypeptide(s) with enhanced performance and safety
US11198831B2 (en) 2019-01-31 2021-12-14 Kvi Llc Lubricant for a device
CA3133652A1 (en) * 2019-04-01 2020-10-08 Genentech, Inc. Compositions and methods for stabilizing protein-containing formulations

Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0211835B1 (en) 1984-03-28 1990-01-03 Cetus Corporation Pharmaceutical compositions of microbially produced interleukin-2
US4604377A (en) * 1984-03-28 1986-08-05 Cetus Corporation Pharmaceutical compositions of microbially produced interleukin-2
EP0179583A1 (en) * 1984-10-04 1986-04-30 Merck & Co. Inc. A system for enhancing the water dissolution rate and solubility of poorly soluble drugs
LU85971A1 (fr) * 1985-06-25 1987-01-13 Oreal Nouveaux composes lipidiques amphiphiles, leur procede de preparation et leurs applications,notamnent en cosmetique et en dermopharmacie
JPS62207226A (ja) 1986-03-07 1987-09-11 Sumitomo Pharmaceut Co Ltd 経鼻投与用製剤
FR2615194B1 (fr) * 1987-05-11 1991-06-14 Rhone Poulenc Chimie Particules de polymere comportant, implantees a leur surface des molecules amphiphiles portant des groupes ionogenes ou reactifs, leur procede de preparation et leur application en biologie
ATE145337T1 (de) * 1988-05-02 1996-12-15 Phanos Tech Inc Verbindungen, zusammensetzungen und verfahren zum binden von bio-affektions-substanzen an oberflächenmembranen von bioteilchen
US5688761A (en) * 1991-04-19 1997-11-18 Lds Technologies, Inc. Convertible microemulsion formulations
FR2694559B1 (fr) * 1992-08-06 1994-10-28 Atta Nouveaux dérivés amphiphiles d'aminoacides ou de peptides, leur procédé de préparation et leur utilisation dans des préparations à usage biomédical.
WO1994008599A1 (en) * 1992-10-14 1994-04-28 The Regents Of The University Of Colorado Ion-pairing of drugs for improved efficacy and delivery
JP3290745B2 (ja) 1993-03-31 2002-06-10 藤平 正道 単分子膜のパターン形成方法
IS1796B (is) * 1993-06-24 2001-12-31 Ab Astra Fjölpeptíð lyfjablanda til innöndunar sem einnig inniheldur eykjaefnasamband
US5789543A (en) * 1993-12-30 1998-08-04 President And Fellows Of Harvard College Vertebrate embryonic pattern-inducing proteins and uses related thereto
CA2179029C (en) * 1993-12-30 2009-02-24 Philip W. Ingham Vertebrate embryonic pattern-inducing hedgehog-like proteins
US20030186357A1 (en) * 1993-12-30 2003-10-02 Philip W. Ingham Vertebrate embryonic pattern-inducing proteins, and uses related thereto
FR2714621B1 (fr) 1994-01-06 1996-02-23 Centre Nat Rech Scient Procédé de préparation de liposomes sans utilisation de solvant organique.
GB9417524D0 (en) 1994-08-31 1994-10-19 Cortecs Ltd Pharmaceutical compositions
US5653987A (en) * 1995-05-16 1997-08-05 Modi; Pankaj Liquid formulations for proteinic pharmaceuticals
US5853741A (en) * 1996-06-28 1998-12-29 Chesebrough-Pond's Usa Co., Division Of Conopco, Inc. Vitamin C delivery system
CA2267106A1 (en) * 1996-10-07 1998-07-16 The Johns Hopkins University School Of Medicine Novel hedgehog-derived polypeptides
HUP9904615A3 (en) 1996-10-15 2000-07-28 Seikagaku Kogyo Co Ltd Polypeptide transition metal salts and method of enhancing anti-hiv activity of polypeptide
WO1998020298A1 (en) * 1996-11-08 1998-05-14 Northern Magnetics, Inc. Sensing and controlling the location of elements of a linear motor
US5759811A (en) * 1996-11-13 1998-06-02 The Regents Of The University Of California Mutant human hedgehog gene
JPH10194987A (ja) * 1997-01-14 1998-07-28 Youtai Iwamoto 骨・軟骨形成用組成物
JPH114695A (ja) * 1997-04-25 1999-01-12 Hayashibara Biochem Lab Inc ヘッジホッグ蛋白質
US6639051B2 (en) * 1997-10-20 2003-10-28 Curis, Inc. Regulation of epithelial tissue by hedgehog-like polypeptides, and formulations and uses related thereto
PT917879E (pt) 1997-11-22 2002-12-31 Roche Diagnostics Gmbh Processo melhorado para estabilizacao de proteinas
EP0919618A1 (de) 1997-11-28 1999-06-02 Boehringer Mannheim Gmbh Aktive Hedgehog-Protein-Mutante, Verfahren zur Herstellung und Verwendung
AU757497B2 (en) 1997-12-03 2003-02-20 Biogen, Inc. Hydrophobically-modified protein compositions and methods
JP3648051B2 (ja) * 1998-02-02 2005-05-18 富士通株式会社 関連情報検索装置及びプログラム記録媒体
CA2260423C (en) 1998-02-04 2006-06-20 Kurt Lang Pharmaceutical composition of hedgehog proteins and use thereof
EP0947201B1 (en) * 1998-02-04 2006-06-28 Curis, Inc. Pharmaceutical composition of hedgehog proteins and use thereof
EP0953576B1 (en) 1998-04-30 2005-11-02 Curis, Inc. Active hedgehog protein conjugate, process for its production and use
US20050021440A1 (en) * 2003-04-04 2005-01-27 Scott Dresden Integrated dynamic pricing and procurement support for e-commerce advertising channels
WO2005029362A1 (en) * 2003-09-22 2005-03-31 Eurekster, Inc. Enhanced search engine
US20050114319A1 (en) * 2003-11-21 2005-05-26 Microsoft Corporation System and method for checking a content site for efficacy
US10515374B2 (en) * 2005-03-10 2019-12-24 Adobe Inc. Keyword generation method and apparatus

Also Published As

Publication number Publication date
AU755930B2 (en) 2003-01-02
GC0000107A (en) 2005-06-29
HRP990272A2 (en) 2000-06-30
BR9903984B1 (pt) 2011-04-19
MY127935A (en) 2007-01-31
US8519098B2 (en) 2013-08-27
CN1325118C (zh) 2007-07-11
EP1002547B1 (en) 2006-03-01
YU42399A (sh) 2001-05-28
JP3664373B2 (ja) 2005-06-22
JP2000086532A (ja) 2000-03-28
ATE318616T1 (de) 2006-03-15
MA26682A1 (fr) 2004-12-20
HUP9902952A1 (hu) 2000-06-28
ZA995601B (en) 2000-09-27
ES2258830T3 (es) 2006-09-01
KR20000022777A (ko) 2000-04-25
CN1250669A (zh) 2000-04-19
PL335203A1 (en) 2000-03-13
NO994214L (no) 2000-03-02
CA2281049A1 (en) 2000-03-01
DE69930033D1 (de) 2006-04-27
HU9902952D0 (en) 1999-10-28
TW570805B (en) 2004-01-11
PE20001027A1 (es) 2000-10-13
US20080064854A1 (en) 2008-03-13
SG85670A1 (en) 2002-01-15
NO994214D0 (no) 1999-08-31
NZ337527A (en) 2000-12-22
BR9903984A (pt) 2001-03-13
TR199902103A2 (xx) 2000-04-21
US20050123610A1 (en) 2005-06-09
DE69930033T2 (de) 2006-10-12
AU4486699A (en) 2000-03-16
US6867182B2 (en) 2005-03-15
IL131626A0 (en) 2001-01-28
EP1002547A1 (en) 2000-05-24
HRP990272B1 (en) 2006-11-30
CO5271726A1 (es) 2003-04-30
US20020028766A1 (en) 2002-03-07
ID22964A (id) 1999-12-23
KR100403075B1 (ko) 2003-10-30
AR023044A1 (es) 2002-09-04
RU2180855C2 (ru) 2002-03-27
CA2281049C (en) 2010-11-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8519098B2 (en) Composition of a polypeptide and an amphiphilic compound in an ionic complex and the use thereof
US6207718B1 (en) Pharmaceutical compositions containing hedgehog protein
JP2005514438A (ja) 薬剤の可溶化、安定化、及び運搬のためのオリゴマー及びポリマーの使用
US20060128621A1 (en) Pharmaceutical composition of hydrophobically modified hedgehog proteins and their use
KR100311565B1 (ko) 헤지호그 단백질의 약학 조성물 및 그의 용도
MXPA99008037A (en) Pharmaceutical composition soluble in water in an ionic complex and the use of the mi
CZ308799A3 (cs) Ve vodě rozpustný farmaceutický preparát v iontovém komplexu a jeho použití
KR20000017144A (ko) 헤지호그 단백질의 약제학적 조성물 및 이의 용도
HRP990036A2 (en) Pharmaceutical composition of hedgehog proteins and the use thereof

Legal Events

Date Code Title Description
RECP Rectifications of patent specification