PL190925B1 - Szczepionka do podawania przezśluzówkowego i zastosowania podjednostek B termolabilnej enterotoksyny - Google Patents
Szczepionka do podawania przezśluzówkowego i zastosowania podjednostek B termolabilnej enterotoksynyInfo
- Publication number
- PL190925B1 PL190925B1 PL340635A PL34063598A PL190925B1 PL 190925 B1 PL190925 B1 PL 190925B1 PL 340635 A PL340635 A PL 340635A PL 34063598 A PL34063598 A PL 34063598A PL 190925 B1 PL190925 B1 PL 190925B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- immunogen
- ltb
- subunit
- vaccine
- subunits
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 41
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 35
- 230000004044 response Effects 0.000 claims abstract description 18
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims abstract description 13
- 229930186900 holotoxin Natural products 0.000 claims abstract description 13
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 claims abstract description 11
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 claims abstract description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 claims abstract description 11
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 230000016379 mucosal immune response Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 43
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 43
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 43
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 3
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 3
- 206010065764 Mucosal infection Diseases 0.000 claims description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims description 2
- 101000764294 Homo sapiens Lymphotoxin-beta Proteins 0.000 description 26
- 102100026894 Lymphotoxin-beta Human genes 0.000 description 24
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 22
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 14
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 12
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 7
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 7
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 7
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 7
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 7
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 6
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 4
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 3
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 3
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 3
- 230000001571 immunoadjuvant effect Effects 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 230000005730 ADP ribosylation Effects 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 230000007108 local immune response Effects 0.000 description 2
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 2
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 2
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 229940126577 synthetic vaccine Drugs 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241001288713 Escherichia coli MC1061 Species 0.000 description 1
- 206010073753 Fear of injection Diseases 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 206010022095 Injection Site reaction Diseases 0.000 description 1
- 101150018411 LTB gene Proteins 0.000 description 1
- 239000006391 Luria-Bertani Medium Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 241001672648 Vieira Species 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 231100000249 enterotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002242 enterotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 102000055414 human LTB Human genes 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 1
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002941 microtiter virus yield reduction assay Methods 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 210000001989 nasopharynx Anatomy 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000007785 strong electrolyte Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000007482 viral spreading Effects 0.000 description 1
- 239000000277 virosome Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/24—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
- C07K14/245—Escherichia (G)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/543—Mucosal route intranasal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55544—Bacterial toxins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
- C12N2760/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
- C12N2760/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
1. Szczepionka do podawania przezsluzówkowego, znamienna tym, ze zawiera co najmniej jeden zlozony z czasteczek immunogen i adiuwantujaca ilosc podjednostek B termolabilnej enterotok- syny (LTB) charakterystycznej dla E.coli. calkowicie wolnej od podjednostki A lub toksycznej LT holo- toksyny, w której co najmniej jeden zlozony z czasteczek immunogen nie jest kowalencyjnie zwiazany z podjednostka B. 6. Zastosowanie podjednostek B termolabilnej enterotoksyny (LTB) charakterystycznej dla E. coli, calkowicie wolnej od podjednostki A lub toksycznej LT holotoksyny do wytwarzania szczepionki obejmujacej immunogen zlozony z czasteczek i adiuwantujaca ilosc LTB odpowied- nia do wywolania ukladowej odpowiedzi immunoglobulin przeciwko temu immunogenowi u osob- nika po podaniu sluzówkowym, w której immunogen nie jest kowalencyjnie zwiazany z podjed- nostkami B. 7. Zastosowanie podjednostek B termolabilnej enterotoksyny (LTB) charakterystycznej dla E. coli, calkowicie wolnej od podjednostki A lub toksycznej LT holotoksyny do wytwarzania szcze- pionki obejmujacej immunogen zlozony z czasteczek i adiuwantujaca ilosc LTB odpowiednia do indukowania ogólnej reakcji odpornosciowej sluzówkowej przeciwko temu immunogenowi u osobnika po podaniu sluzówkowym, w której immunogen nie jest kowalencyjnie zwiazany z podjednostkami B. PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest szczepionka do podawania przezśluzówkowego i zastosowanie podjednostek B termolabilnej enterotoksyny (LTB) Escherichia coli (E. coli). Szczepionki według wynalazku są szczególnie odpowiednie do zapobiegania zakażeniom grypą u ludzi. Jednakże, wynalazek nie jest ograniczony do zastosowania w szczepionkach przeciwko grypie.
Celem szczepienia przeciwko chorobom zakaźnym, jest zapobieganie albo przynajmniej ograniczanie zakażenia u szczepionego osobnika przez pobudzenie reakcji odpornościowej przeciwko czynnikowi zakaźnemu przez wprowadzenie preparatu antygenu pochodzącego z konkretnego patogenu. W idealnej postaci, indukowana reakcja odpornościowa powinna obejmować dwie składowe, reakcję humoralną (wytwarzanie przeciwciał swoistych wobec antygenu) i reakcję komórkową (wytwarzanie swoistych limfocytów T cytotoksycznych, zdolnych do eliminacji komórek zakażonych przez patogen).
Wiele spośród procedur szczepienia obejmuje podawanie preparatu zawierającego inaktywowany albo atenuowany pełny antygen. Jednakże, w przypadku niektórych patogenów, istnieją istotne wady szczepienia całym patogenem, ponieważ takie preparaty, nawet jeżeli uważane są za silnie immunogenne, mogą wywoływać istotne niepożądane skutki uboczne. Tłumaczy to współczesny trend w kierunku zastosowania dobrze zdefiniowanych szczepionek podjednostkowych albo syntetycznych, zasadniczo pozbawionych niepożądanych skutków ubocznych pełnego czynnika zakaźnego. Jednakże, w porównaniu z całym patogenem, szczepionki podjednostkowe albo syntetyczne często nie są bardzo immunogenne, przynajmniej w nieobecności dodawanego adiuwantu.
Adiuwanty są substancjami albo materiałami podawanymi w połączeniu z antygenem, tak, że pobudzają reakcję odpornościową przeciwko temu antygenowi. Istnieje zapotrzebowanie na odpowiednie adiuwanty, które wzmocniłyby reakcję odpornościową przeciwko antygenom podjednostkowym albo antygenom syntetycznym bez powodowania niepożądanych działań ubocznych.
Preparaty szczepionki przeciwko grypie przez długi czas zawierały, i w niektórych przypadkach nadal zawierają, inaktywowany albo atenuowany pełny wirus. Taki preparat może wykazywać istotne działania uboczne, a najistotniejsze, gorączkę i reakcje w miejscu wstrzyknięcia. Obecnie, szczepienie przeprowadza się zwykle przy użyciu preparatu podjednostkowego. Taka szczepionka podjednostkowa, która powoduje mniejsze reakcje uboczne, zawiera jedynie dwa główne antygeny powierzchniowe wirusa, hemaglutyninę (HA) i neuraminidazę (NA), w mniej lub bardziej oczyszczonej postaci. W najnowszych preparatach szczepionki nie występuje adiuwant.
Szczepionkę przeciwko grypie opartą na inaktywowanym albo atenuowanym pełnym wirusie grypy, jak również szczepionkę podjednostkową podaje się zwykle przez pojedyncze wstrzyknięcie domięśniowe (i.m.). Ochrona przeciwko zakażeniu grypą, uzyskiwana przez procedurę szczepienia, jest stosunkowo niska, szczególnie u osób starszych. Stosunkowo niska skuteczność szczepienia przeciwko grypie jest spowodowana częściowo silną zmiennością antygenową wirusa. Jednakże, istnieje powód aby wierzyć, że ochronę przed zakażeniem grypą przez szczepienie można poprawić przez pobudzenie i/lub modyfikację reakcji odpornościowej przeciwko antygenowi.
W przypadku grypy, albo ogólnie w przypadkach, gdy zakaż enie nabywa się drogą oddechową , strategie poprawienia skuteczności szczepienia powinny skupiać się nie tylko na odpowiedniej reakcji IgG zależnej od limfocytów T w krążeniu, ale również na miejscowej reakcji odpornościowej (wydzielnicze IgA) w płucach i jamie nosowej, jako pierwszej linii obrony przeciwko wnikającemu wirusowi. Ponadto, komórkowa reakcja odpornościowa (limfocyty T cytotoksyczne) może być również istotna, szczególnie w ograniczaniu zakażenia. Wykazano, że podanie szczepionki przeciwko grypie przez wstrzyknięcie domięśniowe (obecna droga podania) nie wywołuje miejscowej reakcji IgA w drogach oddechowych.
Niniejszy wynalazek oparty jest na nieoczekiwanym stwierdzeniu, że obecność LTB w donosowym preparacie szczepionki nie tylko pobudza reakcję IgG w krążeniu, względem immunizacji i.m. szczepionką pozbawioną adiuwantu, ale również wywołuje miejscową reakcję IgA w drogach oddechowych.
Kompletna termolabilna enterotoksyna (LT) i blisko z nią spokrewniona toksyna cholery (CT), są zbudowane z jednej podjednostki A i pentamerycznej struktury pierścieniowej obejmującej pięć identycznych podjednostek B. Podjednostka A ma aktywność enzymatyczną, rybozylacji ADP, i zapewnia toksynie aktywność toksyczną. W nabłonku jelitowym, podjednostka A wywołuje trwałą syntezę wtórPL 190 925 B1 nego przekaźnika, cAMP, powodującą silne wydzielanie elektrolitów i równoczesne wydzielanie płynu do światła jelita.
LT i CT są silnymi immunogenami śluzówkowymi. Po miejscowym podaniu na śluzówkę, cząsteczki te wywołują nie tylko układową reakcję przeciwciał skierowanych przeciwko toksynie, ale również wytwarzanie miejscowo wydzielanych przeciwciał, co istotne, wydzielniczych IgA (S-IgA). LT i CT są również silnymi immunoadiuwantami śluzówkowymi. Oznacza to, że równoczesne ich podanie z innym niespokrewnionym immunogenem, moż e pobudzać układową i ś luzówkową reakcję przeciwciał przeciwko immunogenowi. Jednakże, toksyczność LT i CT do tej pory zasadniczo wykluczała ich zastosowanie w preparatach szczepionek dla ludzi.
Podczas prób oddzielenia toksyczności od działania LT albo CT pobudzającego odporność, detoksyfikowane mutanty toksyn, albo niemodyfikowane izolowane pentameryczne podjednostki B (odpowiednio, LTB albo CTB) badano w kierunku aktywności immunoadiuwantowej. W oczywisty sposób, ponieważ toksyczna aktywność rybozylacji ADP toksyn związana jest z podjednostką A, obecność nawet śladowych ilości niemodyfikowanej podjednostki A albo holotoksyny LT albo CT w szczepionkach ludzkich jest wysoce niepożądana.
Zastosowanie LTB jako adiuwantu dla antygenów grypy badali Tamura i wsp., (Hirabashi i in., Vaccine 8:243-248 (1990); Kikuta i in., Vaccine 8:595-599 (1990); Tamura i in., J. Immunol. 3:981-988 (1992); Tamura i in., Vaccine 12:419-426 (1994); Tamura i in., Vaccine 12:1083-1089 (1994)). W badaniach tych, opartych na zastosowaniu szczepionki z rozpuszczalną hemaglutyniną wirusa grypy (HA), ekstrahowaną i oczyszczaną z wirusa grypy przez traktowanie Tween/eterem według Davenport i in., (J. Lab. & Clin. Med. 63(1):5-13 (1964)) ustalono, że LTB, wolna od podjednostki A, jest pozbawiona śluzówkowej aktywności immunoadiuwantowej przy podaniu donosowym myszom w połą czeniu z rozpuszczalnym antygenem HA. Dalej wykazano, ż e obecność ś ladowych ilości holotoksyny, na przykład resztkowej holotoksyny zostającej w preparatach podjednostki B przywraca ekspresję aktywności adiuwantowej LTB wobec rozpuszczalnego antygenu HA. W szczególności, gdy zastosowano LTB ze źródła rekombinowanego (a więc, całkowicie wolnego od nawet najmniejszych ilości podjednostki A), należało dodać śladową ilość holotoksyny, aby LTB wykazała aktywność śluzówkową po podaniu donosowym z rozpuszczalnym antygenem HA.
Nieoczekiwanie stwierdzono, że izolowana LTB pochodzenia rekombinantowego, a więc całkowicie wolna od podjednostki A, wykazuje silną aktywność adiuwantową zależną od natury albo postaci równocześnie podawanego donosowo immunogenu.
Przykładowo, aktywność adiuwantu wobec domieszanych rozpuszczalnych małych antygenów, takich jak owalbumina albo rozpuszczalna ektodomena glikoproteiny otoczkowej ludzkiego wirusa niedoboru odporności (gp120), jest słaba i często niewykrywalna. Z drugiej strony stwierdzono, że LTB ma bardzo silną aktywność adiuwantową wobec swobodnie domieszanych wielkich agregowanych albo cząsteczkowych immunogenów. Immunogeny te obejmują antygen podjednostkowy wirusa grypy albo hemocyjaninę skałoczepa (KLH).
Tak więc, wynalazek dotyczy szczepionki zawierającej co najmniej jeden złożony z cząsteczek immunogen i adiuwantującą ilość podjednostek B termolabilnej enterotoksyny (LTB) charakterystycznej dla E. coli całkowicie wolnej od podjednostki A albo toksycznej holotoksyny LT, w której co najmniej jeden złożony z cząsteczek immunogen nie jest kowalencyjnie związany z podjednostką B.
W znaczeniu tu zastosowanym, „cząsteczkowy” oznacza dowolne połączenie antygenów wirusowych, bakteryjnych albo grzybiczych charakterystycznych dla odpowiedniego mikroorganizmu. W szczególnoś ci, określenie „immunogen cząsteczkowy” obejmuje agregaty, klastery, micelle, wirosomy, rozetki, wirusopodobne cząstki immunogenu itp.
W korzystnym wykonaniu szczepionka według niniejszego wynalazku, zawiera LTB wytworzoną techniką rekombinacji DNA.
Korzystnie szczepionka według wynalazku jako immunogeny zawiera antygeny wirusowe, bakteryjne lub grzybowe. Korzystnie szczepionka według wynalazku zawiera immunogen, który uodparnia przeciwko chorobie przenoszonej przez zakażenie śluzówkowe.
Korzystnie szczepionka według wynalazku jako antygen zawiera antygeny grypy.
Stwierdzono, że szczepionki opisane powyżej nie tylko wywołują układowe immunoglobuliny (np. IgG) przeciwko immunogenowi po podaniu śluzówkowym (np. donosowym), ale również stwierdzono, że wywołują miejscowe wydzielanie IgA. Ta ostatnia właściwość jest szczególnie cenna do immunizacji przeciwko chorobom przenoszonym przez zakażenie śluzówek wirusem (takim jak wirus
PL 190 925 B1 grypy, wirus opryszczki, wirus brodawczaków) albo bakteriami (takimi jak Chlamydia, pneumokoki) albo grzybami.
Szczególną zaletą podawania śluzówkowego jest łatwość stosowania szczepionki, która pomija ewentualny strach przed ukłuciem przy podawaniu normalnych szczepionek domięśniowych.
Mimo iż w przypadku, przykładowo, zakażenia grypą, wysokie miana surowicze IgG są istotne dla zapobiegania układowemu rozsiewowi wirusa i ochrony płuc przed zakażeniem, miejscowe przeciwciała S-IgA są kluczowe jako pierwsza linia obrony dla ochrony górnych dróg oddechowych.
Opisano, że szczepienie śluzówkowe przez, np. podawanie inaktywowanego wirusa grypy pod nieobecność adiuwantu śluzówkowego nie powiodło się (Clancy, Drugs 50:587-594 (1995); Katz i in., J. Infect. Dis. 175:352-369 (1997)), prawdopodobnie ponieważ bezpośrednie podanie antygenu na śluzówkę nie wywołuje reakcji S-IgA. Równoczesne podanie adiuwantu śluzówkowego jest koniecznym warunkiem do wywołania miejscowej reakcji odpornościowej przeciwko immunogenowi. Co istotne, stwierdzono, że przez immunizację donosową aktywuje się tzw. powszechną reakcję śluzówkową układu odpornościowego, która powoduje wydzielanie S-IgA nie tylko w miejscu zastosowania (i.n.) ale również w odległej tkance śluzówkowej (np. w tkance śluzówki pochwy).
Szczepionki według wynalazku mogą zawierać immunogeny, np. pochodzenia wirusowego albo bakteryjnego, takie jak antygeny bakteryjne, podjednostki wirusa (ewentualnie inaktywowane), podzielone wirusy (ewentualnie inaktywowane), inaktywowane wirusy albo bakterie, albo atenuowane (np. zaadaptowane) żywe wirusy w postaci cząsteczkowej.
W zakres wynalazku wchodzi też zastosowanie podjednostek termolabilnej enterotoksyny (LTB) charakterystycznej dla E. coli, całkowicie wolnej od podjednostki A lub toksycznej LT holotoksyny do wytwarzania szczepionki obejmującej immunogen złożony z cząsteczek i adiuwantującą ilość LTB odpowiednią do wywołania układowej odpowiedzi immunoglobulin przeciwko temu immunogenowi u osobnika po podaniu ś luzówkowym, w której immunogen nie jest kowalencyjnie zwią zany z podjednostkami B.
Ponadto w zakres wynalazku wchodzi zastosowanie podjednostek B termolabilnej enterotoksyny (LTB) charakterystycznej dla E. coli, całkowicie wolnej od podjednostki A lub toksycznej LT holotoksyny do wytwarzania szczepionki obejmującej immunogen złożony z cząsteczek i adiuwantującą ilość LTB odpowiednią do indukowania ogólnej reakcji odpornościowej śluzówkowej przeciwko temu immunogenowi u osobnika po podaniu śluzówkowym, w której immunogen nie jest kowalencyjnie związany z podjednostkami B. Wolna od toksycznej LTA w niniejszym kontekście oznacza całkowite pozbawienie LTA.
W szczepionce według wynalazku LTB moż na zastosować przez zwykłe zmieszanie z antygenem cząsteczkowym, a można wytworzyć kowalencyjne wiązanie pomiędzy antygenem i adiuwantem, jednakże nie jest to konieczne do osiągnięcia odpowiedniego efektu adiuwantowego.
Szczepionka, według wynalazku oprócz LTB i jednego albo wielu immunogenów, może zawierać rozpuszczalnik wodny, w szczególności bufor, jeszcze konkretniej PBS (roztwór soli buforowany fosforanem), jak również stabilizator (np. PEG albo metyloceluoza) i/lub glukozę.
Składniki szczepionki według wynalazku mogą być liofilizowane lub mogą być w postaci ciekłej szczepionki, mogą być w postaci np. w masie albo w ampułce, albo strzykawce, albo nebulizatorze.
Szczepionkę według wynalazku można podawać przez podanie podskórne, domięśniowe, dooskrzelowe, donosowe, dopochwowe albo doustne.
P r z y k ł a d 1
Wytwarzanie rekombinowanej LTB i antygenu wirusa grypy
Rekombinowana LTB
Rekombinowane geny LTB i rekombinowane cząsteczki LTB, jak wspomniano w niniejszym wynalazku, mogą pochodzić z genów kodujących cząsteczki LT-I z np. źródła świńskiego albo ludzkiego. Świński gen LT (pLT) klonowano do wektora pUC18 (Vieira i Messing, Gene 19:259-268 (1982)) stosując techniki PCR (DeHaan i in., Vaccine 14:260-266 (1996)). Wektor EWD299, oryginalnie opisany przez Dallas i in., (J. Bacteriol. 139:850-858 (1979)) zastosowano jako matrycę w reakcji PCR. Stwierdzono, że pierwotna sekwencja tego konstruktu była dokładnie zgodna z pierwotną sekwencją pLT jak złożona w bazie danych sekwencji EMBL, co potwierdzono przez sekwencjonowanie DNA. Z konstruktu pUC18-pLT, klonowano gen pLTB do wektora ekspresyjnego pROFIT, który zawierał promotor λPR indukowany temperaturą (van der Linden i in., Eur. J. Biochem. 204:197-202 (1992)).
E. coli MC1061 zastosowano jako szczep gospodarza dla konstruktów plazmidowych pROFIT. Bakterie hodowano na pożywce Luria-Bertani, zawierającej 50 μg kanamycyny na ml. Indukcję eksPL 190 925 B1 presji pLTB uzyskano przez podwyższenie temperatury hodowli MC1061 w stanie wzrostu wykładniczego, niosącej wektor pROFIT-LTB z 28 do 42°C, jak to opisano przez DeHaan i in., (wyżej).
pTLTB, wektor ekspresyjny pochodzący z pKK (Pharmacia Ltd.) kodujący ludzką LTB (tj. gen LTB pochodzący z genu LT, wyizolowanego z bakterii E. coli enterotoksycznej dla ludzi) otrzymano od Tamura i wsp. Sekwencjonowanie DNA wykazało 3 zastąpienia aminokwasowe w dojrzałej ludzkiej LTB (hLTB) w porównaniu z pLTB (Thr4 na Ser, Glu46 na Ala i Lys102 na Glu). Szczep E. coli JM101 zastosowano jako gospodarza dla pTLTB. Bakterie hodowano na pożywce LB, zawierającej 100 μg ampicyliny na ml. Indukcję ekspresji hLTB uzyskano przez dodanie IPTG do hodowli JM101 niosących pTLTB w logarytmicznej fazie wzrostu, w stężeniu końcowym 5 mM.
W celu oczyszczenia pLTB i hLTB, bakterie w stanie nadekspresji zebrano i poddano lizie przez sonikację. Następnie, zebrano resztki komórkowe przez ultrawirowanie. Surowe ekstrakty komórkowe zawierające rekombinowane pLTB lub hLTB wprowadzono na kolumnę zawierającą unieruchomioną D-galaktozę (Pierce). Po intensywnym płukaniu, rekombinowane, oczyszczone pLTB lub hLTB uzyskano przez eluowanie D-galaktozą, jak to opisano uprzednio Uesaka i in., (Microb. Path. 16:71-76 (1994)). Stwierdzono, że zarówno pLTB, jak i hLTB zachowują optymalne właściwości wiązania GM1 w ELISA z wychwytem GM1, jak opisano uprzednio (DeHaan i in., Vaccine 14:260-266 (1996)). Frakcje kolumnowe zawierające oczyszczone białko zbierano, dializowano wobec PBS i przechowywano w 4°C.
Podjednostkowy antygen grypy
Podjednostkowy antygen grypy wytworzono z wirusa B/Harbin/7/94 (B/Harbin) albo A/Johannesburg/33/94 (A/Johannesburg), hodowanych na jajach z zarodkami kurcząt, metodą opisaną przez Bachmayer i in. (opis patentowy GB 1 498 261, 18 stycznia 1978) oraz Chaloupka i in., (Eur. J. Mlcrobiol. Infect. Dis. 15:121-127 (1996)). Metoda ta obejmuje etapy traktowania wirusów inaktywowanych formaldehydem odpowiednim detergentem kationowym, rozdział uwolnionych antygenów (hemaglutyniny i neuraminidazy) z rdzenia wirusa. Sposób ten prowadzi do złożonej z cząsteczek, tj. micello-podobnej postaci antygenów po usunięciu detergentu.
Siłę preparatów podjednostkowych antygenu, wyrażoną jako (pg/ml, określono w teście dyfuzji radialnej według Wood i in., (J. Biol. Stand. 5:237-241 (1977)).
P r z y k ł a d 2
Układowa reakcja przeciwciał przeciwko szczepionce podjednostkowej przeciwko grypie
Grupy po 4 myszy immunizowano i.n. bez znieczulenia 5 μg antygenu podjednostkowego grypy, pochodzącego z wirusa B/Harbin albo A/Johannesburg, wytworzonego sposobem opisanym w przykładzie 1. Antygen podawano sam (HA) albo wraz z 2,0 μg pLTB (pLTB), w każdym przypadku w objętości 20 μΙ w dniach 0, 7 i 14. Myszy kontrolne otrzymywały tę samą objętość PBS. Myszy zabijano w 28 dniu. Reakcję surowiczych przeciwciał IgG oznaczano w bezpośrednim teście ELISA.
Na figurze 1 przedstawiono obserwowaną reakcję surowiczych przeciwciał IgG wobec HA B/Harbin (słupki wypełnione) i HA A/Johannesburg (słupki puste).
Donosowe podawanie antygenu podjednostkowego bez adiuwantu dawało słabą układową reakcję przeciwciał, podczas gdy dodanie do antygenu pLTB zwiększało reakcję przeciwciał surowiczych o ponad dwa rzędy wielkości.
Różnice pomiędzy reakcjami myszy immunizowanych B/Harbin i A/Johannesburg były nieistotne.
Wyniki te pokazują, że nietoksyczna pLTB jest silnym adiuwantem, zdolnym do indukowania silnej reakcji układowej przeciwciał wobec podawanego i.n. antygenu podjednostkowego grypy.
P r z y k ł a d 3
Porównanie układowej reakcji przeciwciał wywołanej ludzką i świńską LTB
Grupy po 4 myszy immunizowano i.n. bez znieczulenia 5 μg antygenu podjednostkowego grypy, pochodzącego z wirusa grypy B/Harbin, wytworzonego sposobem opisanym w przykładzie 1. Antygen podawano sam (NONE) albo wraz z 2,0 μg pLTB (pLTB) albo 2,0 μg hLTB (hLTB), w każdym przypadku w objętości 20 μl w dniach 0, 7 i 14. Myszy kontrolne otrzymywały tę samą objętość PBS. Myszy zabijano w 21 dniu. Reakcję surowiczych przeciwciał IgG oznaczano w bezpośrednim teście ELISA w dniu 21.
Na figurze 2 przedstawiono obserwowaną reakcję surowiczych przeciwciał IgG wobec HA B/Harbin. Donosowe podawanie antygenu podjednostkowego bez adiuwantu dawało słabą układową reakcję przeciwciał, podczas gdy dodanie do antygenu pLTB albo hLTB zwiększało reakcję przeciwciał surowiczych w podobny sposób o ponad dwa rzędy wielkości. Obserwowane różnice pomiędzy zwierzętami traktowanymi pLTB i hLTB były nieistotne.
PL 190 925 B1
P r z y k ł a d 4
Indukcja miejscowej reakcji śluzówkowej przeciwciał wobec szczepionki podjednostkowej grypy
W celu zbadania zdolnoś ci pLTB do wywołania reakcji S-IgA swoistych wobec HA grypy, popłuczyny z nosa myszy z przykładu 2 analizowano w kierunku obecności przeciwciał IgA swoistych wobec grypy. Popłuczyny z nosa uzyskano przez przepłukanie przy użyciu 0,5 ml PBS wstecznie przez nosogardziel do górnej części tchawicy, przepłukanie z powrotem i zebranie popłuczyn w okolicy nozdrzy.
Wyniki przedstawiono na figurze 3.
Dane pokazują, że rekombinowana pLTB wywołuje silną reakcję miejscowych S-IgA wobec HA. Dwa różne antygeny podjednostkowe grypy dawały podobne wyniki.
P r z y k ł a d 5
Porównanie reakcji śluzówkowej przeciwciał wywołanej ludzką i świńską LTB
W celu porównania zdolnoś ci pLTB i hLTB do nasilania nosowej reakcji przeciwciał swoistych wobec HA, pobierano popłuczyny z nosa od myszy opisanych w przykładzie 3 w sposób opisany powyżej i analizowano w kierunku obecności S-IgA swoistych wobec HA w dniu 21. Na figurze 4 przedstawiono, że zarówno pLTB, jak i hLTB indukowały szybką reakcję nosowych przeciwciał swoistych wobec HA. Ponadto, reakcje uzyskane przy użyciu pLTB i hLTB były porównywalne pod względem wielkości, co wskazuje, że obie cząsteczki miały podobne właściwości adiuwantowe.
P r z y k ł a d 6
Indukcja reakcji śluzówkowej przeciwciał dróg rozrodczych wobec podjednostkowej szczepionki grypy podanej i.n.
W celu zbadania zdolnoś ci rekombinowanej pLTB do wywołania reakcji S-IgA swoistych wobec HA na śluzówkach innych niż miejsce podania, badano indukcję S-IgA swoistych wobec HA na śluzówkach dróg rozrodczych po immunizacji i.n. myszy z przykładu 2. Przeprowadzono płukanie dróg moczo-płciowych przez 10-krotne przepłukanie pochwy przy użyciu 100 μΐ PBS stosując końcówkę pipety. Popłuczyny śluzówkowe przechowywano w 4°C do momentu oznaczenia w nich mian IgA przez ELISA.
Wyniki przedstawiono na figurze 5.
Wyniki pokazują, że pLTB okazała się skuteczną w wywoływaniu reakcji s-IgA w odległych śluzówkach. Myszy reagowały na antygen B/Harbin i A/Johannesburg równie dobrze.
P r z y k ł a d 7
Kinetyka reakcji IgG
Cztery grupy po 8 myszy BALB/c (6-8 tygodni) traktowano w następujący sposób:
Kontrola: traktowana PBS bez antygenu, 20 μΐ bez znieczulenia w dniu 0, 7 i 14.
pLTB: 5 μg HA i 2,0 μg rekombinowanej pLTB w 20 μΐ stosowano i.n. bez znieczulenia w dniu 0, 7 i 14.
HA s. c.: 5 μg HA w 100 μΐ stosowano s. c. bez znieczulenia w dniu 0.
Konw.: myszy ozdrowiałe, tzn. zakażone 108 jednostek zakaźnych wirusa PR8 w 20 μl podanych i.n. bez znieczulenia w dniu 0.
Od czterech myszy z każdej grupy pobrano próbki krwi z żył ogonowych w dniu 6, 13 i 20. Ponadto, w dniu 28 wszystkie myszy zabito i skrwawiono. W każdej próbce oznaczano surowice IgG przez ELISA.
Wyniki przedstawiono na figurze 6.
Słupki (od lewej do prawej) dla każdego schematu szczepienia pokazują miano IgG w dniach 6, 13, 20 i 28. Wyniki te wskazują, że po szczepieniu i.n. przy użyciu HA/pLTB, indukcja IgG ma przynajmniej te samą wielkość co po szczepieniu s.c. samą HA albo jak u ozdrowiałych myszy.
P r z y k ł a d 8
Przeciwciała śluzówkowe nosa i płuc
Te same myszy co badane w przykładzie 7 poddano płukaniu śluzówki jamy nosowej i dróg moczo-płciowych po zabiciu w dniu 28, jak to opisano wyżej.
Wyniki podsumowano na figurze 8.
Kreskowane słupki pokazują dane z płukania jamy nosowej, zaś puste słupki dane dotyczące płukania pochwy.
Wyniki pokazują, że miano przeciwciał pierwszej linii obrony (S-IgA) po szczepieniu i.n. przy użyciu HA/pLTB ma przynajmniej tę samą wielkość co miano S-IgA u ozdrowiałych myszy, podczas gdy szczepienie (klasyczne) s.c. samą HA nie dawało wykrywalnego miana śluzówkowych IgA.
PL 190 925 B1
P r z y k ł a d 9
Ochrona szczepionych myszy przed prowokacją
Cztery myszy na grupę jak w przykładzie 7, zakażono w dniu 28 przy użyciu 5x106 jednostek zakaźnych wirusa PR8 i.n. w 20 μΐ bez znieczulenia.
Trzy dni po prowokacji ilość wirusa oznaczono w nosie i płucach.
Miareczkowanie wirusa w homogenatach nosa i płuc przeprowadzono na komórkach MDCK, które hodowano na EPISERF (Life Technologies, Paisly, Szkocja) w płytkach do mikromiareczkowania przez dwuetapowe rozcieńczanie, a następnie przez określenie punktu końcowego przy użyciu hemaglutynacji erytrocytami świnki morskiej.
Wyniki podsumowano na figurze 7.
Kreskowane słupki pokazują miana wirusa w nosie, zaś puste słupki w płucach. Miana wirusa w płucach dla myszy ozdrowiałych i po szczepieniu przy użyciu pLTB były nieistotne. Stąd dane pokazują, że przez zastosowanie pLTB jako adiuwantu śluzówkowego ochrona przed zakażeniem grypą jest całkowita.
Claims (7)
1. Szczepionka do podawania przezśluzówkowego, znamienna tym, że zawiera co najmniej jeden złożony z cząsteczek immunogen i adiuwantującą ilość podjednostek B termolabilnej enterotoksyny (LTB) charakterystycznej dla E.coli. całkowicie wolnej od podjednostki A lub toksycznej LT holotoksyny, w której co najmniej jeden złożony z cząsteczek immunogen nie jest kowalencyjnie związany z podjednostką B.
2. Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że LTB jest wytworzona metodami rekombinacji DNA.
3. Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że jako immunogen zawiera antygeny wirusowe, bakteryjne lub grzybowe.
4. Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że zawiera immunogen, który uodparnia przeciwko chorobie przenoszonej przez zakażenie śluzówkowe.
5. Szczepionka według zastrz. 4, znamienna tym, że jako antygen zawiera antygeny grypy.
6. Zastosowanie podjednostek B termolabilnej enterotoksyny (LTB) charakterystycznej dla E. coli, całkowicie wolnej od podjednostki A lub toksycznej LT holotoksyny do wytwarzania szczepionki obejmującej immunogen złożony z cząsteczek i adiuwantującą ilość LTB odpowiednią do wywołania układowej odpowiedzi immunoglobulin przeciwko temu immunogenowi u osobnika po podaniu śluzówkowym, w której immunogen nie jest kowalencyjnie związany z podjednostkami B.
7. Zastosowanie podjednostek B termolabilnej enterotoksyny (LTB) charakterystycznej dla E. coli, całkowicie wolnej od podjednostki A lub toksycznej LT holotoksyny do wytwarzania szczepionki obejmującej immunogen złożony z cząsteczek i adiuwantującą ilość LTB odpowiednią do indukowania ogólnej reakcji odpornościowej śluzówkowej przeciwko temu immunogenowi u osobnika po podaniu śluzówkowym, w której immunogen nie jest kowalencyjnie związany z podjednostkami B.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP97203671A EP0919243A1 (en) | 1997-11-25 | 1997-11-25 | Vaccine containing B subunits of heat-labile enterotoxin (LTB) of Escherichia coli as an adjuvant |
| PCT/EP1998/007553 WO1999026654A1 (en) | 1997-11-25 | 1998-11-24 | Vaccines with an ltb adjuvant |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL340635A1 PL340635A1 (en) | 2001-02-12 |
| PL190925B1 true PL190925B1 (pl) | 2006-02-28 |
Family
ID=8228966
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL340635A PL190925B1 (pl) | 1997-11-25 | 1998-11-24 | Szczepionka do podawania przezśluzówkowego i zastosowania podjednostek B termolabilnej enterotoksyny |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6793928B1 (pl) |
| EP (2) | EP0919243A1 (pl) |
| JP (1) | JP4235359B2 (pl) |
| KR (1) | KR100575019B1 (pl) |
| CN (1) | CN1227032C (pl) |
| AT (1) | ATE238809T1 (pl) |
| AU (1) | AU747061C (pl) |
| BR (1) | BR9815413A (pl) |
| CA (1) | CA2311492C (pl) |
| CZ (1) | CZ299770B6 (pl) |
| DE (1) | DE69814177T2 (pl) |
| DK (1) | DK1071456T3 (pl) |
| ES (1) | ES2198089T3 (pl) |
| HK (1) | HK1031102A1 (pl) |
| HU (1) | HU226214B1 (pl) |
| IL (2) | IL135905A0 (pl) |
| NO (1) | NO324690B1 (pl) |
| NZ (1) | NZ504396A (pl) |
| PL (1) | PL190925B1 (pl) |
| PT (1) | PT1071456E (pl) |
| RU (1) | RU2211050C2 (pl) |
| SK (1) | SK284572B6 (pl) |
| TR (1) | TR200001485T2 (pl) |
| UA (1) | UA72199C2 (pl) |
| WO (1) | WO1999026654A1 (pl) |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9326174D0 (en) * | 1993-12-22 | 1994-02-23 | Biocine Sclavo | Mucosal adjuvant |
| US7914791B1 (en) | 1998-05-08 | 2011-03-29 | Trident Pharmaceuticals, Inc. | Vaccine |
| AU2003261492B2 (en) * | 1998-05-08 | 2006-09-07 | Trident Pharmaceuticals, Inc. | Vaccine |
| EP1075274A2 (en) * | 1998-05-08 | 2001-02-14 | University Of Bristol | Immunomodulators for vaccines |
| JP4889175B2 (ja) * | 1999-10-18 | 2012-03-07 | ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド | 感染性因子に対する免疫応答を刺激するための組成物および方法 |
| IL158140A0 (en) * | 2003-09-25 | 2004-03-28 | Hadasit Med Res Service | Multiepitope polypeptides for cancer immunotherapy |
| US20060002960A1 (en) * | 2003-12-09 | 2006-01-05 | Paul Zoeteweij | GM1 binding deficient exotoxins for use as immunoadjuvants |
| CN101257919B (zh) | 2005-08-05 | 2012-08-29 | 国立大学法人德岛大学 | 可以由选择性产生IgA抗体向产生IgA和IgG两种抗体转换的抗原药物载体和使用该载体的经鼻·粘膜疫苗 |
| TWI397419B (zh) * | 2006-03-22 | 2013-06-01 | Abbott Biologicals Bv | 病毒顆粒的鼻內或吸入給藥 |
| US8080645B2 (en) | 2007-10-01 | 2011-12-20 | Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc | Biological specimen collection/transport compositions and methods |
| US8652782B2 (en) | 2006-09-12 | 2014-02-18 | Longhorn Vaccines & Diagnostics, Llc | Compositions and methods for detecting, identifying and quantitating mycobacterial-specific nucleic acids |
| US8097419B2 (en) | 2006-09-12 | 2012-01-17 | Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc | Compositions and method for rapid, real-time detection of influenza A virus (H1N1) swine 2009 |
| US9481912B2 (en) | 2006-09-12 | 2016-11-01 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Compositions and methods for detecting and identifying nucleic acid sequences in biological samples |
| ES2376010T3 (es) | 2006-10-12 | 2012-03-08 | Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.R.L. | Prote�?na de fusión de transcriptasa inversa de la telomerasa, nucleótidos que la codifican y usos de la misma. |
| US9683256B2 (en) | 2007-10-01 | 2017-06-20 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Biological specimen collection and transport system |
| US11041215B2 (en) | 2007-08-24 | 2021-06-22 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | PCR ready compositions and methods for detecting and identifying nucleic acid sequences |
| US10004799B2 (en) | 2007-08-27 | 2018-06-26 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Composite antigenic sequences and vaccines |
| RU2468034C2 (ru) | 2007-08-27 | 2012-11-27 | ЛОНГХОРН ВЭКСИНС ЭНД ДИАГНОСТИКС ЭлЭлСи | Иммуногенные композиции и способы |
| US11041216B2 (en) | 2007-10-01 | 2021-06-22 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Compositions and methods for detecting and quantifying nucleic acid sequences in blood samples |
| CA2861667C (en) | 2007-10-01 | 2017-06-13 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Biological specimen collection and transport system and methods of use |
| CA3207612A1 (en) | 2012-01-26 | 2013-08-01 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Composite antigenic sequences and vaccines |
| KR101887040B1 (ko) * | 2012-06-20 | 2018-08-09 | 고쿠리츠다이가쿠호징 도쿄다이가쿠 | 점막 면역 부활화제 및 hpv 감염증 치료용 경구 의약 조성물 |
| WO2015089707A1 (zh) | 2013-12-16 | 2015-06-25 | 财团法人农业科技研究所 | 生产不耐热肠毒素b亚单位的质粒、方法及其套组 |
| WO2016183292A1 (en) | 2015-05-14 | 2016-11-17 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Rapid methods for the extraction of nucleic acids from biological samples |
| EP3704233A4 (en) * | 2017-11-01 | 2021-08-04 | Merck Sharp & Dohme Corp. | STABLE FORMULATIONS OF THE CYTOMEGALOVIRUS |
| WO2019139891A1 (en) | 2018-01-09 | 2019-07-18 | Synthetic Biologics, Inc. | Alkaline phosphatase agents for treatment of neurodevelopmental disorders |
| WO2019183208A1 (en) | 2018-03-20 | 2019-09-26 | Synthetic Biologics, Inc. | Intestinal alkaline phosphatase formulations |
| US11654184B2 (en) | 2018-03-20 | 2023-05-23 | Theriva Biologics, Inc. | Alkaline phosphatase agents for treatment of radiation disorders |
| TWI811673B (zh) * | 2020-05-08 | 2023-08-11 | 昱厚生技股份有限公司 | 使用免疫調節劑及包含其之疫苗組合物預防或治療冠狀病毒感染之方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH589453A5 (pl) | 1974-01-14 | 1977-07-15 | Sandoz Ag | |
| JP2849632B2 (ja) * | 1988-04-08 | 1999-01-20 | 社団法人北里研究所 | ワクチン製剤 |
| AU4754490A (en) * | 1988-12-07 | 1990-06-26 | University Of Leicester | Heat-labile toxin b subunit fusion proteins |
| US5241053A (en) * | 1990-09-05 | 1993-08-31 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Fused proteins comprising glycoprotein gD of HSV-1 and LTB |
-
1997
- 1997-11-25 EP EP97203671A patent/EP0919243A1/en not_active Withdrawn
-
1998
- 1998-11-24 CZ CZ20001895A patent/CZ299770B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-11-24 HU HU0100058A patent/HU226214B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1998-11-24 AT AT98963503T patent/ATE238809T1/de active
- 1998-11-24 ES ES98963503T patent/ES2198089T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-11-24 IL IL13590598A patent/IL135905A0/xx active IP Right Grant
- 1998-11-24 PT PT98963503T patent/PT1071456E/pt unknown
- 1998-11-24 RU RU2000116260/14A patent/RU2211050C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-11-24 TR TR2000/01485T patent/TR200001485T2/xx unknown
- 1998-11-24 EP EP98963503A patent/EP1071456B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-11-24 AU AU18750/99A patent/AU747061C/en not_active Ceased
- 1998-11-24 KR KR1020007005665A patent/KR100575019B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-11-24 DK DK98963503T patent/DK1071456T3/da active
- 1998-11-24 DE DE69814177T patent/DE69814177T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-11-24 UA UA2000063620A patent/UA72199C2/uk unknown
- 1998-11-24 WO PCT/EP1998/007553 patent/WO1999026654A1/en active IP Right Grant
- 1998-11-24 CA CA2311492A patent/CA2311492C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-11-24 CN CNB988115492A patent/CN1227032C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-11-24 JP JP2000521855A patent/JP4235359B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-11-24 NZ NZ504396A patent/NZ504396A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-11-24 SK SK776-2000A patent/SK284572B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-11-24 PL PL340635A patent/PL190925B1/pl unknown
- 1998-11-24 BR BR9815413-3A patent/BR9815413A/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-11-24 US US09/555,139 patent/US6793928B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-05-01 IL IL135905A patent/IL135905A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-05-22 NO NO20002613A patent/NO324690B1/no not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-03-07 HK HK01101650A patent/HK1031102A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6793928B1 (en) | Vaccines with an LTB adjuvant | |
| US8182821B2 (en) | Flu vaccine admixture of mannan and flu antigen | |
| EP1117435A1 (en) | Mutant cholera holotoxin as an adjuvant | |
| US20100255033A1 (en) | Non-toxic double mutant forms of pertussis toxin as adjuvants | |
| de Haan et al. | Mutational analysis of the role of ADP‐ribosylation activity and GM1‐binding activity in the adjuvant properties of the Escherichia coli heat‐labile enterotoxin towards intranasally administered keyhole limpet hemocyanin | |
| US8110197B2 (en) | Mutated E. coli heat-labile enterotoxin | |
| JP5913406B2 (ja) | 変異型大腸菌易熱性エンテロトキシン | |
| US8088394B2 (en) | Mutated E. coli heat-labile enterotoxin | |
| WO2008037033A1 (en) | Flu vaccine admixture of mannan and flu antigen | |
| MXPA00005127A (en) | Vaccines with an ltb adjuvant | |
| WO1994006468A1 (en) | Recombinant influenza virus vaccine compositions | |
| PT721782E (pt) | Vacina contra a gripe contendo toxina da tosse convulsa |