PL177002B1 - Preparat insuliny ludzkiej i sposób wytwarzania preparatu insuliny ludzkiej - Google Patents
Preparat insuliny ludzkiej i sposób wytwarzania preparatu insuliny ludzkiejInfo
- Publication number
- PL177002B1 PL177002B1 PL94304600A PL30460094A PL177002B1 PL 177002 B1 PL177002 B1 PL 177002B1 PL 94304600 A PL94304600 A PL 94304600A PL 30460094 A PL30460094 A PL 30460094A PL 177002 B1 PL177002 B1 PL 177002B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- insulin
- zinc
- ultralente
- human
- formulation
- Prior art date
Links
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 title claims abstract description 39
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 title claims abstract description 34
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 53
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 227
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims abstract description 114
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 114
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims abstract description 112
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims abstract description 107
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims abstract description 93
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 92
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims abstract description 54
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 17
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 18
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 claims description 10
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 claims description 9
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000004246 zinc acetate Substances 0.000 claims description 7
- ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N acetic acid;zinc Chemical compound [Zn].CC(O)=O.CC(O)=O ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 claims description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- VNDYJBBGRKZCSX-UHFFFAOYSA-L zinc bromide Chemical compound Br[Zn]Br VNDYJBBGRKZCSX-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- BHHYHSUAOQUXJK-UHFFFAOYSA-L zinc fluoride Chemical compound F[Zn]F BHHYHSUAOQUXJK-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- UAYWVJHJZHQCIE-UHFFFAOYSA-L zinc iodide Chemical compound I[Zn]I UAYWVJHJZHQCIE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 2
- 229940102001 zinc bromide Drugs 0.000 claims description 2
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 claims description 2
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 62
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract description 61
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 5
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 abstract description 3
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 abstract description 3
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 abstract description 3
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 29
- LEMUFSYUPGXXCM-JNEQYSBXSA-N caninsulin Chemical compound [Zn].C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC3N=CN=C3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1C=NC=N1 LEMUFSYUPGXXCM-JNEQYSBXSA-N 0.000 description 28
- 108010061168 Ultralente Insulin Proteins 0.000 description 20
- 230000009471 action Effects 0.000 description 16
- 108010071377 human long-acting insulin Proteins 0.000 description 14
- 102000007559 human long-acting insulin Human genes 0.000 description 14
- 229940050841 human ultralente insulin Drugs 0.000 description 14
- 101001011741 Bos taurus Insulin Proteins 0.000 description 13
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 13
- IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N bovine insulin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 IXIBAKNTJSCKJM-BUBXBXGNSA-N 0.000 description 13
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 11
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 11
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 9
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 5
- 108010090613 Human Regular Insulin Proteins 0.000 description 4
- 102000013266 Human Regular Insulin Human genes 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 4
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 4
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 4
- 229940103471 humulin Drugs 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010005991 Pork Regular Insulin Proteins 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000007922 dissolution test Methods 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 description 3
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 3
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 2
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 2
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 238000011555 rabbit model Methods 0.000 description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 description 1
- 101000981881 Brevibacillus parabrevis ATP-dependent glycine adenylase Proteins 0.000 description 1
- 101000981889 Brevibacillus parabrevis Linear gramicidin-PCP reductase Proteins 0.000 description 1
- 101100373496 Enterobacteria phage T4 y06J gene Proteins 0.000 description 1
- 108010028690 Fish Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000017011 Glycated Hemoglobin A Human genes 0.000 description 1
- 108010014663 Glycated Hemoglobin A Proteins 0.000 description 1
- 206010060378 Hyperinsulinaemia Diseases 0.000 description 1
- 108010077977 Lente Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000016261 Long-Acting Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108010092217 Long-Acting Insulin Proteins 0.000 description 1
- 229940100066 Long-acting insulin Drugs 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000283977 Oryctolagus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000001479 atomic absorption spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000004110 gluconeogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000004116 glycogenolysis Effects 0.000 description 1
- 102000035122 glycosylated proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005608 glycosylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 1
- 230000003451 hyperinsulinaemic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008980 hyperinsulinism Diseases 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- FYFFGSSZFBZTAH-UHFFFAOYSA-N methylaminomethanetriol Chemical compound CNC(O)(O)O FYFFGSSZFBZTAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229940127285 new chemical entity Drugs 0.000 description 1
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000007180 physiological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000000291 postprandial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000011775 sodium fluoride Substances 0.000 description 1
- 235000013024 sodium fluoride Nutrition 0.000 description 1
- PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M sodium fluoride Inorganic materials [F-].[Na+] PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012134 supernatant fraction Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- UEUXEKPTXMALOB-UHFFFAOYSA-J tetrasodium;2-[2-[bis(carboxylatomethyl)amino]ethyl-(carboxylatomethyl)amino]acetate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC([O-])=O)CC([O-])=O UEUXEKPTXMALOB-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- UGZADUVQMDAIAO-UHFFFAOYSA-L zinc hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Zn+2] UGZADUVQMDAIAO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940007718 zinc hydroxide Drugs 0.000 description 1
- 229910021511 zinc hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- LRXTYHSAJDENHV-UHFFFAOYSA-H zinc phosphate Chemical class [Zn+2].[Zn+2].[Zn+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O LRXTYHSAJDENHV-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000004572 zinc-binding Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/28—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Obesity (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
1. Preparat insuliny ludzkiej zawierajacy insuline ze skoordynowanym cynkiem w buforze octanowym, znamienny tym, ze zawiera zawiesine krysztalów insuliny ludzkiej ze skoordynowanym cynkiem w buforze octanowym przy calkowitym stezeniu cynku od 0,5 miligrama do 20 miligramów na 100 jednostek insuliny. 6. Sposób wytwarzania preparatu insuliny ludzkiej zawierajacego insuline ze skoordy- nowanym cynkiem w buforze octanowym, znamienny tym, ze krysztaly insuliny ze skoordy- nowanym cynkiem w buforze octanowym laczy sie z cynkiem, przy czym stosuje sie cynk w calkowitym stezeniu wynoszacym od okolo 0,5 do okolo 20 miligramów na 100 jednostek insuliny. PL PL PL PL PL PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazkujest preparat insuliny ludzkiej i sposób wytwarzaniapreparatu insuliny ludzkiej. W szczególności wynalazek dotyczy preparatu zawierającego cząsteczkę insuliny ludzkiej, który po podaniu lepiej naśladuje podstawowe poziomy insuliny występujące normalnie w organizmie człowieka.
Głównym celem terapeutycznym w leczeniu cukrzycy jest uzyskanie fizjologicznej regulacji poziomu glukozy we krwi. Do tego celu stosuje się wiele różnych produktów i preparatów handlowych. Przy szybkich zmianach stężenia glukozy we krwi, które występują w porach posiłków, najbardziej odpowiednie są szybko działające produkty insulinowe, takie jak Humulin Regular lub tak zwane monomeryczne analogi insuliny.
Innym ważnym źródłem obciążenia glukozą jest podstawowe wydzielanie glukozy na niskim poziomie przez wątrobę. Wydzielanie to następuje głównie w wyniku poposiłkowych procesów metabolicznych, takich jak glukoneogeneza i glikogenoliza. U chorych na cukrzycę to podstawowe wydzielanie insuliny może zwiększać się znacząco w ciągu nocy, czego skutkiem mogą być przedłużające się okresy hiperglikemii, zwłaszcza podczas wczesnych godzin porannych, co jest określane jako zjawisko poranka. Wykazano, że te okresy hiperglikemii są w znacznym stopniu odpowiedzialne za wysokie poziomy glikozylowanych białek, mierzonych klinicznie jako glikozylowana hemoglobina. Nagromadzanie się tych pochodnych produktów białkowych leży u podłoża długotrwałych komplikacji towarzyszących cukrzycy, takich jak neuropatia, nefropatia i retynopatia.
Idealnym preparatem insuliny do regulacji skutków tego podstawowego wydzielania insuliny byłby taki preparat, który zapewniałby powolną, ustaloną infuzję insuliny do krwi, odpowiadającą niskiemu poziomowi wydzielania glukozy przez wątrobę. Pod względem takiego idealnego czasu działania najlepszym dostępnym w handlu preparatem odpowiadającym temu opisowi jest insulina bydlęca Ultralente. Preparat ten po wstrzyknięciu raz dziennie daje niskie, ustalone uwalnianie insuliny do krwi bez jakichkolwiek zauważalnych pików stężenia insuliny.
177 002
Główny problem z bydlęcą insuliną Ultralente wynika jednakże z faktu, że sekwencja aminokwasów insuliny bydlęcej różni się od sekwencji aminokwasów insuliny ludzkiej. Organizm ludzki może rozpoznawać insulinę bydlęcą jako białko obce. Skutkiem przewlekłego wstrzykiwania chorym na cukrzycę tej substancji immunogennej może być wytworzenie się przeciwciał przeciwinsulinowych. Może to doprowadzić do zmian czasu działania i siły działania insuliny oraz innych problemów ze strony zaktywowanego układu immunologicznego pacjenta. Z tych powodów insulina bydlęca Ultralente nie jest idealnym pozajelitowym preparatem insuliny.
Różnice gatunkowe między insulinami Ultralente
Pojawienie się technologii rekombinacji DNA i nowych technik enzymatycznych przekształcania insuliny świńskiej w insulinę ludzką spowodowały wzrost podaży insuliny ludzkiej, która stała się dostępna od początku lat 80-tych. Logicznym krokiem na drodze przezwyciężenia wymienionych powyżej problemów związanych z bydlęcą insuliną Ultralente było otrzymanie kryształów insuliny ludzkiej Ultralente i na ich bazie handlowego preparatu pozajelitowego. Formy, kształty i wielkości kryształów oraz metody otrzymywania kompozycji i ich receptury dla ludzkich i bydlęcych preparatów Ultralente są zasadniczo jednakowe.
Jednakże kilka lat doświadczeń klinicznych doprowadziło do ostatecznego stwierdzenia, że produkty te nie są identyczne. Doniesienia kliniczne wskazywały, że ludzka insulina Ultralente charakteryzuje się szybszym działaniem niż preparat Ultralente insuliny bydlęcej, natomiast świńska insulina Ultralente ma czas działania pośredni między tymi dwoma gatunkami. W praktyce klinicznej może to doprowadzić do zalecania przez wielu lekarzy i diabetologów dwukrotnego wstrzykiwania ludzkiej insuliny Ultralente. Ponadto po 12 godzinach od podania podskórnego obserwuje się znaczący pik absorpcji insuliny do krwi. Zjawisko to nie tylko zmniejsza zdolność produktu do przeciwdziałania ustalonemu podstawowemu wydzielaniu glukozy z wątroby, ale również powoduje hiperinsulinemię, która sama może doprowadzić do komplikacji makronaczyniowych.
Powód różnicy czasu działania między ludzkim i bydlęcym preparatem Ultralente nie jest w pełni zrozumiały. Obecność przeciwciał przeciwko insulinie bydlęcej nie jest pierwotną przyczyną tej różnicy. Niektóre badania wykazały, że insulina z ludzkiego preparatu Ultralente jest szybciej absorbowana z miejsca wstrzyknięcia niż bydlęca insulina Ultralente. Dalszy wgląd w tę kwestię dały próby rozpuszczania opisane w niniejszym opisie patentowym. Te testy rozpuszczania, oparte na modyfikacjach testów uprzednio opisanych, wykazały, że rozpuszczenie kryształów wołowej insuliny Ultralente po rozcieńczeniu po prostu trwa znacznie dłużej niż rozpuszczenie porównywalnych kryształów ludzkiej insuliny Ultralente. Prawdopodobnie różnice w sekwencjach aminokwasów między insuliną bydlęcą i ludzką generują niewielkie różnice w upakowaniu heksamerów insuliny w kryształach, co powoduje wystąpienie różnic ich szybkości rozpuszczania. To opóźnienie rozpuszczania kryształów insuliny bydlęcej po wstrzyknięciu do tkanki podskórnej prowadzi prawdopodobnie do jej bardziej wydłużonej absorpcji i czasu działania biologicznego.
Jednym ze sposobów badania przedłużenia czasu działania jest synteza analogów insuliny ludzkiej. W szczególności dokonano takich modyfikacji jak GlyA1)Arg(B27)Thr-NH2(B30)-insulina ludzka (Jorgensen i współpr., British Medical Journal, 299,415-419 (1989)) i modyfikacje w pozycji Glu(B·3) (Hansen, Biophysical Chemistry, 39, 107-110 (1991)). Jednakże w każdym z tych przypadków wprowadzenie nowej sekwencji aminokwasów nadaje cząsteczce charakter obcej dla organizmu ludzkiego i w związku z tym potencjalnie tak samo immunogennej lub nawet bardziej immunogennej niż insulina bydlęca. Wynika z tego wyraźnie, że stosowanie naturalnej cząsteczki insuliny ludzkiej jest lepsze niż wprowadzanie nowej cząsteczki insuliny. Nigdzie nie opisano preparatów ludzkiej insuliny Ultralente wzbogaconych w cynk ani też nie podano jakichkolwiek środków służących do wytworzenia takich preparatów w celu przedłużenia czasu działania korzystnego immunologicznie preparatu ludzkiej insuliny Ultralente do czasu działania równego lub lepszego niż czas działania biologicznego korzystnego farmakologicznie preparatu bydlęcej insuliny Ultralente.
Cynk a . insulina
Od wielu lat wiadomo jest, że insulina może być z powodzeniem ko-krystalizowana z atomami cynku, w wyniku czego otrzymuje się trwałe kryształy o dłuższym czasie działania niż amorficzna, niekrystalizowana insulina. Jako środek kompleksujący insulinę w celu przedłużenia jej czasu działania stosowano również rybie białko protaminę, ale heterogeniczność tego
177 002 białka i jego potencjalna immunogenność sprawia, że jest ono mniej atrakcyjne dla leku przewlekle podawanego podskórnie.
Na początku lat 50-tych opracowano nowy preparat krystalicznej insuliny bydlęcej, który zawierał tylko insulinę i cynk w buforze octanowym przy pH obojętnym (Hallas-Moller i współpr., Science 116, 394-398 (1952)). Ta insulina Lente nie zawierała jonów fosforanowych, które silnie oddziaływują z jonami cynku, tworząc nierozpuszczalne pochodne fosforanu cynku. Preparaty zawierające insulinę krystaliczną ze skoordynowanym cynkiem w buforze octanowym zostały nazwane Ultralente. Kryształy otrzymane w ten sposób będą określane w tym opisie jako kryształy insuliny Ultralente.
Chociaż do utworzenia prawidłowych kryształów Ultralente wymagane jest skompleksowanie każdego heksameru insuliny tylko 2 atomami cynku, to w każdym preparacie Ultralente występuje określony nadmiar molowy cynku. Stwierdzono, że nadmiar ten jest odpowiedni przy podawaniu bydlęcego Ultralente przy jednej iniekcji dziennie działającej cały dzień (Schlichtkrull, w Insulin Crystals, Ejnar MunksgaardPublishers, Copehnhagen (1958)). W tej samej pracy (strona 92) podano: Wydaje się, że czas trwania działania jest nieco krótszy jeśli insulinę świńską w preparacie Ultralente zastąpi się insuliną bydlęcą. Stąd w celu zapewnienia ustalonych czasów podawania zawiesin terapeutycznych niezbędne jest trzymanie się ściśle jednego i tego samego gatunku lub znalezienie ustalonej proporcji między insulinami z różnych gatunków. Podobnie opisano, że świńska insulina Ultralente jest szybciej absorbowana przez cukrzyków niż bydlęca insulina Ultralente (Brange, w Galenics of Insulin, str. 28, Springer-Verlag, Berlin (1987)). Jednakże nawet jeśli zaobserwowano te różnice gatunkowe i chociaż insulina świńska jest bliższa strukturalnie insulinie ludzkiej i w związku z tym mniej immunogenna niż insulina wołowa, to nie zaproponowano żadnych ewentualnych zmian receptury, mających na celu przedłużenie czasu działania świńskiej insuliny Ultralente tak, aby był on równoważny lub dłuższy od czasu działania bydlęcej insuliny Ultralente. Wcześniejszy raport (Hallas-Moller, Diabetes 5,7-12 (1956)) sugerował w rzeczywistości, że poziomy cynku powyżej 0,2 mg na 100 jednostek insuliny nie spowodują dalszego przedłużenia czasu działania preparatów insuliny Lente (lub Ultralente) jakiegokolwiek z gatunków.
Podano, że w nierozpuszczalnych kryształach bydlęcej insuliny Ultralente związanych jest około 0,09 mg cynku na 100 jednostek insuliny (14 atomów cynku na heksamer insuliny), natomiast stosunkowo niskie jest stężenie cynku, równe około 0,05 mg na ml, który pozostaje niezwiązany w supernatancie. Oba te poziomy zostały zaprojektowane tak, aby pozostawały stałe nawet przy zwiększaniu dawki insuliny w preparacie od 40 j/ml do 100 j/ml (Brange, w Galenics of Insulin, str. 37, Springer-Verlag, Berlin (1987)).
W opisie patentowym USA nr 5070186 opisano, że preparaty insuliny zawierające wysokie stężenie (0,02-0,5M) innego dwuwartościowego kationu metalu charakteryzują się szybszym działaniem. Jednakże nieoczekiwanie odkryto, że dodanie stałego chlorku cynku lub stężonego roztworu chlorku lub octanu cynku bezpośrednio do preparatu ludzkiej insuliny Ultralente do końcowego stężenia cynku równego około 0,5 do 20 mg na 100 jednostek insuliny opóźnia rozpuszczanie kryształów i może przedłużyć czas jego działania biologicznego tak, aby preparat działał równie wolno lub wolniej od bydlęcej insuliny Ultralente. Odkryto również, że modyfikacji tej towarzyszy spadek pH od pH około 7,4 do pH 6,2. Odkryto następnie, że w wyniku tej modyfikacji większość dodanego cynku pozostaje w supematancie, niezwiązana z nierozpuszczalnymi kryształami insuliny. Nie ma to istotnego wpływu na zmianę kształtu lub wyglądu kryształów ani na trwałość chemiczną insuliny w preparacie po pewnym okresie przechowywanira
W poniższym opisie i zastrzeżeniach zastosowano poniższe określenia i skróty. Całkowite stężenie cynku w preparacie - całe stężenie cynku w preparacie, niezależnie od tego czy cynk ten jest skompleksowany z insuliną czy jest w postaci rozpuszczalnej.
Insulina Ultralente - prepaaaty zzwierającc kryształy innuliny, wytworzonn zggdnie z opisem zawartym w artykule Hallas-Mnllpr i współpr., Science -116, 394-398 (1952). Kryształy wytwoegnnp w ten sposób będą określone jako kryształy insuliny Ultralente.
- standart oatynednootkp nyindzynmΌdowa antywnośrt msuhny .
- cynk.
J
Zn
177 002
Wszystkie skróty aminokwasów stosowane w tym opisie są zaakceptowane przez Urząd Patentów i Znaków Towarowych USA.
Według wynalazku preparat insuliny ludzkiej, zawierający insulinę ze skoordynowanym cynkiem w buforze octanowym (insulinę Ultralente) charakteryzuje się tym, że zawiera zawiesinę kryształów insuliny ludzkiej ze skoordynowanym cynkiem przy całkowitym stężeniu cynku od około 0,5 miligrama do około 20 miligramów na 100 jednostek insuliny. Preparat może zawierać środki konserwujące lub środki izotonizujące i może również zawierać bufor, który nie oddziałowuje silnie z cynkiem.
Powyżej pięćdziesięciu procent łącznej ilości cynku pozostaje we frakcji rozpuszczalnej i nie kompleksuje insuliny. Ten preparat insuliny ma pH generalnie w zakresie od około 6,0 do około 7,4. Ponadto preparat insuliny według wynalazku nie zawiera innych białek, takich jak protamina. Ten modyfikowany cynkiem preparat wykazuje charakterystykę preparatu insuliny o bardzo długim działaniu.
Sposób wytwarzania preparatu insuliny ludzkiej zawierającego insulinę ze skoordynowanym cynkiem w buforze octanowym według wynalazku polega na tym, że do uprzednio wytworzonych kryształów ludzkiej insuliny ze skoordynowanym cynkiem w buforze octanowym dodaje się cynk, lub dodatkowy cynk dodaje się po etapie krystalizacji w procesie wytwarzania insuliny ze skoordynowanym cynkiem w buforze octanowym. Cynk dodaje się w postaci stałej lub w postaci roztworu.
Alternatywnie, zawiesinę kryształów Ultralente dodaje się do stałych soli cynku lub ich roztworów.
W preparacie według wynalazku można stosować różne sole cynku. Reprezentatywnymi przykładami soli cynku są octan cynku, bromek cynku, chlorek cynku, fluorek cynku, jodek cynku i siarczan cynku. Dla specjalisty będzie oczywiste, że do wytwarzania zmodyfikowanego cynkiem preparatu insuliny Ultralente według wynalazku można użyć wiele innych soli cynku. Korzystnie do wytworzenia zmodyfikowanego cynkiem preparatu insuliny Ultralente według wynalazku stosuje się octan cynku lub chlorek cynku, ponieważ sole te nie wprowadzają nowych chemicznie jonów do dostępnych w handlu preparatów Ultralente.
Celem opisanego tu wynalazku jest zatem znaczne zwiększenie stężenia cynku w supernatancie preparatu ludzkiej insuliny Ultralente bez istotnego modyfikowania samych kryształów Ultralente. Nieoczekiwanie stwierdzono, że taki wzbogacony w cynk preparat Ultralente może opóźniać szybkość rozpuszczania nierozpuszczalnych kryształów insuliny i przedłużać czas działania biologicznego w porównaniu z niemodyfikowanymi preparatami Ultralente.
Uniknięcie dramatycznej modyfikacji kryształu Ultralente może być ważne z kilku powodów. Po pierwsze preparaty Ultralente stosowane są do przewlekłego podawania chorym na cukrzycę od 40 lat, a ludzka insulina Ultralente od 10 lat. Stąd nowy modyfikowany cynkiem preparat, może skorzystać z udowodnionego w przeszłości bezpieczeństwa. Po drugie znaczny wzrost poziomu cynku przy kompleksowaniu kryształów insuliny może prowadzić do agregacji kryształów. W dłuższym okresie czasu może to prowadzić do tworzenia się zbryleń, co sprawia że preparat jest bezużyteczny. Badanie modyfikowanego cynkiem preparatu insuliny ludzkiej Ultralente według wynalazku wykazuje, że nie zawiera on istotnie zmodyfikowanych ani lub zbrylonych kryształów insuliny. Wreszcie modyfikacja kryształu insuliny może prowadzić do zmiany struktury samej insuliny, co mogłoby zmienić jej właściwości biologiczne lub nawet jej immunogenność.
Ważny może być również jednoczesny spadek pH, występujący w preparacie według wynalazku. Wiadomo jest, że zwiększanie poziomu rozpuszczonych jonów cynku zwiększa stopień rozszczepienia chemicznego insuliny między resztami A8 (treonina) i A9 (seryna), nawet wtedy gdy insulina jest obecna w postaci nierozpuszczalnych kryształów (Brange i współpr., Pharmaceutical Research 9, 715-726 (1992)). Niewielkie obniżenie pH preparatu insuliny poniżej pH 7 minimalizuje reakcję rozszczepienia i w związku z tym trwałość długoterminowa jest ulepszona. Możliwe jest również, że ten spadek pH może być częściowo odpowiedzialny za minimalne interakcje nadmiaru cynku z kryształem insuliny, ponieważ wiadomo jest, że interakcje cynku z białkami są zredukowane przy bardziej kwasowych pH (Schlichtkrull, w Insulin Crystals, Ęjnar Munksgaard Publishers, Kopenhaga, 91958)).
177 002
Nowy preparat insuliny ludzkiej Ultralente według wynalazku ma kilka dodatkowych zalet. Preparat ten może być wytwarzany długo po wytworzeniu oryginalnego preparatu ludzkiej insuliny Ultralente. W ten sposób można nawet dodawać różne ilości cynku w aptece lub w klinice, dopasowując preparat do żądanego czasu działania i potrzeb danego pacjenta. Ponadto preparat ten nie wymaga dodawania żadnych nowych zarobek, środków kompleksujących, chemikaliów ani rozpuszczalników, dzięki czemu unika się zastrzeżeń dotyczących nieznanej toksyczności przy przewlekłym podawaniu przez wiele lat nowej jednostki chemicznej. Wreszcie zakres pH roztworu końcowego, pH 6,0 do 7,4, jest dostatecznie bliski pH tkanki podskórnej (pH 7,4), tak że nie powinno występować żadne podrażnienie.
Preparat zawierający kryształy ludzkiej insuliny Ultralente według wynalazku nadaje się do leczenia cukrzycy na drodze iniekcji podskórnych, dających powolną absorpcję insuliny, tak że nie ma potrzeby podawania więcej niż jednej iniekcji dziennie. Preparat może zawierać również środek konserwujący, taki jak metyloparaben, środek nadający izotoniczność, takijak chlorek sodu oraz cynk w ilości łącznej około 0,5 do 20 mg na 100 jednostek insuliny, a pH preparatu wynosi około 6,0 do 7,4. Specjalista w tej dziedzinie uzna, że dostępnych jest wiele innych środków konserwujących i środków nadających izotoniczność do stosowania w preparacie według wynalazku. W korzystnej postaci łączne stężenie cynku wynosi około 0,5 do 7 mg na l00 jednostek insuliny, a pH około 6,2 do 7,2. W korzystnej postaci preparat ma dla wszystkich stężeń cynku takie pH, jakie powstaje gdy do uprzednio otrzymanego roztworu ludzkiej Ultralente doda się odpowiednią ilość stałego chlorku cynku, stałego octanu cynku lub stężonego wodnego roztworu wodnego tych reagentów, to jest gdy nie dokonuje się dalszych regulacji pH.
W celu porównania stężeń cynku i insuliny występujących w literaturze i innych dokumentach patentowych, a tabeli 1 zestawiono równoważniki insuliny i cynku w połączeniu, natomiast w tabeli 2 przedstawiono równoważniki cynku w roztworze.
Tabela 1
Połączenie cynk/insulina
| mval Zn/g insuliny | %Zn w bezwodnych kryształach insuliny | μΜ Zn/μΜ insuliny | μΜ Zn/μΜ heksameru insuliny | mg Zn/100 jednostek insuliny | gg (gamma) Zn/jednostkę insuliny |
| 0,12 | 0,38 | 0,33 | 2 | 0,013 | 0,13 |
| 0,31 | 1 | 0,90 | 5,4 | 0,035 | 0,35 |
| 0,89 | 2,75 | 2,51 | 15,1 | 0,1 | 1 |
| 2,66 | 8 | 7,75 | 46,5 | 0,3 | 3 |
| 4,43 | 12,7 | 12,8 | 77 | 0,5 | 5 |
| 66 | 68,5 | 192,5 | 1155 | 7,5 | 75 |
| 177 | 85,3 | 514,2 | 3086 | 20 | 200 |
Tabela 2 Cynk w roztworze
| mval Zn/l | % Zn | mg Zn/ml | nM Zn/l |
| 0,306 | 0,001 | 0,01 | 0,153 |
| 0,612 | 0,002 | 0,02 | 0,306 |
| 1,53 | 0,005 | 0,05 | 0,765 |
| 3,06 | 0,01 | 0,1 | 1,53 |
| 6,12 | 0,02 | 0,2 | 3,06 |
| 15,3 | 0,05 | 0,5 | 7,65 |
| 30,6 | 0,1 | 1 | 15,3 |
| 61,2 | 0,2 | 2 | 30,6 |
| 153 | 0,5 | 5 | 76,5 |
| 306 | 1 | 10 | 153 |
| 612 | 2 | 20 | 306 |
177 002
Poniższe przykłady przedstawiono w celu zilustrowania wynalazku. Nie należy ich rozumieć jako ograniczenia wynalazku.
Przykład I. Wytwarzanie preparatów insuliny ludzkiej Ultralente modyfikowanych cynkiem
Użyto preparatów Humulin Ultralente (Lilly, Indianapolis, IN) i zawiesiny insulina-cynk o przedłużonym działaniu Ultralente (bydlęcej) USP (Novo Nordisk, Bagsvaerd, Dania), oba w dawce 100 jednostek insuliny na ml (J100). Preparaty te, zawierające łączne stężenie cynku równe około 0,15 mg/ml stosowano albo bezpośrednio albo rozcieńczone do dawki insuliny równej J40 za pomocą jałowego rozcieńczalnika do insuliny Ultralente (Lilly), który zawiera 0,05 mg/ml cynku. Do odważonych próbek stałego chlorku cynku (EM Science, Cherry Hill, NJ) dodano bezpośrednio roztwory insulin Ultralente o stężeniu J100 lub J40. Alternatywnie, do preparatów J100 Humulin Ultralente dodano różne ilości stężonych roztworów chlorku cynku lub octanu cynku o nieuregulowanym pH (100 mg/ml w wodzie) (J. T. Baker, Phillipsburg, NJ, stężenie w wodzie 200 mg/ml). Łączne poziomy cynku obliczano z połączenia obliczonych poziomów cynku w insulinie, rozcieńczalniku i reagentach, albo oznaczano eksperymentalnie za pomocą atomowej spektroskopii absorpcyjnej.
Przykład Π. pH modyfikowanych cynkiem preparatów ludzkiej insuliny Ultralente pH wszystkich preparatów farmaceutycznych Ultralente wynosi około 7,4. Przygotowano preparaty Ultralente modyfikowane cynkiem w sposób opisany w przykładzie I i oznaczono ich pH. Dane przedstawiono poniżej w tabeli 3.
Tabela 3
| Próbka | Dawka insuliny (J/ml) | Sposób dodawania Zn | Użyty reagent Zn | Łącznea końcowe mg Zn/ml w preparacie | mg Zn/100 J insuliny | pH końcowe |
| 1 | 40 | brak | brak | 0,09 | 0,23 | 7,38 |
| 2 | 40 | stały | chlorek | 0,25 | 0,63 | 7,30 |
| 3 | 40 | stały | chlorek | 0,59 | 1,48 | 7,03 |
| 4 | 40 | stały | chlorek | 1,09 | 2,73 | 6,80 |
| 5 | 40 | stały | chlorek | 2,40 | 6,00 | 6,75 |
| 6 | 40 | stały | chlorek | 7,31 | 18,28 | 6,34 |
| 7 | 100 | brak | brak | 0,15 | 0,15 | 7,37 |
| 8 | 100 | stały | chlorek | 2,60 | 2,60 | 6,84 |
| 9 | 100 | stały | chlorek | 7,40 | 7,40 | 6,41 |
| 10 | 100 | stały | chlorek | 12,20 | 12,20 | 6,21 |
| 11 | 97 | wodny | chlorek | 1 ,59 | 1,64 | 6,80 |
| 12 | 94 | wodny | chlorek | 2,92 | 3,11 | 6,73 |
| 13 | 93 | wodny | chlorek | 3,81 | 4,10 | 6,63 |
| 14 | 91 | wodny | chlorek | 4,55 | 5,00 | 6,59 |
| 15 | 83 | wodny | chlorek | 8,18 | 9,86 | 6,41 |
| 16 | 91 | wodny | octan | 5,60 | 6,15 | 6,75 |
| 17 | 83 | wodny | octan | 10,09 | 12,16 | 6,51 |
a Obliczone
Wyraźnie widoczny jest niewielki spadek pH tych preparatów w miarę dodawania reagenta cynkowego. Próbki przygotowane z octanem cynku wykazują mniejszy spadek pH w porównaniu z próbkami otrzymanymi z chlorkiem cynku. W opisanych tu dalszych przykładach, z wyjątkiem przykładu IIIB, nie przeprowadzano dodatkowej regulacji pH roztworów otrzymanych w ten sposób.
Stwierdzono również, że w celu niewielkiego podwyższenia pH do preparatów wzmocnionych cynkiem po dodaniu reagentów cynkowych można dodać małe ilości roztworów wodorotlenku sodu. Ustawienie pH preparatu blisko 7,4 przez dodanie dużych ilości wodorot8
177 002 lenku sodu powoduje jednakże natychmiastowe tworzenie się zbitych precypitatów, prawdopodobnie wodorotlenku cynku, które sprawiają, że preparat nie nadaje się do dalszego stosowania. Z drugiej strony dodanie po przygotowaniu wzmocnionych cynkiem preparatów Ultralente roztworów kwasów, takich jak kwas chlorowodorowy lub kwas octowy, w celu obniżenia pH nie powoduje problemów z precypitacją, ale analiza HPLC supernalantów wykazuje, że niewielki, dodatkowy procent kryształów Ultralente ulega rozpuszczeniu podczas tego procesu zakwaszania. Zakwaszenie za pomocą rozcieńczonego kwasu octowego działa najlepiej jeśli chodzi o minimalizację lub eliminację solubilizacji insuliny, takjak w przykładzie IIIB. Zatem w związku z tym, że można z powodzeniem przeprowadzić niewielkie regulacje pH wzmocnionych cynkiem preparatów Ultralente, wynalazek ten jest ograniczony tylko do takiego pH, które uzyskuje się po dodaniu specyficznego reagenta cynkowego.
Przykład III. Poziomy cynku w modyfikowanych cynkiem preparatach ludzkiej insuliny Ultralente
A. Przygotowano trzy wzmocnionc cynkiem preparaty msulinyUltraUnte en sposób opisany dla próbki 8 w przykładzie U. Po jednym ml każdej z trzech zawiesin, o oszacowanym łącznym poziomie cynku 0,7 do 2,5 mg na 100 jednostek insuliny oraz niezmieniony preparat insuliny Humulin Ultralente wirowano ręcznie przez 30 minut w 25°C, po czym przechowywano w 5°C przez 20 godzin. Każdą z zawiesin przepuszczono następnie przez filtr 0,2 mikrona Aerndibc® (Gelman Sciences, Ann Arbor, MI). Filtrat rozcieńczono 9' ml 0,1N HCl. Nierozpuszczalne kryształy pozostałe na filtrze ponownie rozpuszczono przez wolne przepuszczanie przez każdy filtr 10 ml 0,1N HCl. Poziomy cynku w tych roztworach oznaczono za pomocą absorpcji atomowej i przeliczono na poziomy cynku w supernatancie oryginalnych preparatów lub kryształach insuliny. Dane z tych eksperymentów przedstawiono w tabeli 4.
Tabela 4
| Próbka | Ilość cynku związanego mg/ml | Ilość cynku wolnego mg/ml | Procent cynku łącznie w super-natancie |
| 1 | 0,12 | 0,07 | 36,8% |
| 2 | 0,19 | 0,63 | 76,8% |
| 3 | 0,18 | 1,30 | 87,8% |
| 4 | 0,20 | 2,60 | 92,9% |
Eksperyment ten wykazał, że większość ekstra dodanego cynku pozostaje w super-natancie i nie jest ani skompletowana ani związana kowalencyjnie z kryształami insuliny.
B. Przy gotrwaoo 20 ml p^amru raraieraiccegα ącoło 2,5 mg/ml myiimu wskusćbonisany dla próbki 8 w przykładzie II. Połowę tej zawiesiny (pH 6,81) pozostawiono bez regulowania pH, natomiast pH drugiej połowy ustawiono na 6,15 przez dodanie małej objętości kwasu octowego. Zawiesiny przechowywano w 5°C. Po różnych czasach oznaczano poziomy cynku w supernatantach i nierozpuszczalnych kryształach takjak opisano powyżej. Wyniki tych eksperymentów przedstawiono poniżej w tabeli 5.
Tabela 5
| Liczba dni w 5°C | Ilość cynku związanego w mg/ml | Ilość cynku wolnego w mg/ml | Procent cynku łącznego w bururnataneiu | |
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 0 | 0,27 | 2,18 | 89,0% | |
| 2 | 0,26 | 2,75 | 91,4% | |
| próbka | 4 | 0,37 | 2,14 | 85,3% |
| o pH 6,81 | 7 | 0,39 | 2,50 | 86,5% |
| 10 | 0,42 | 2,25 | 84,3% | |
| 15 | 0,36 | 2,75 | 88,4% | |
| 21 | 0,36 | 2,75 | 88,4% | |
| 28 | 0,35 | 3,25 | 90,3% |
177 002 cd. tabeli 5
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 0 | 0,29 | 2,14 | 88,1% | |
| 2 | 0,28 | 2,18 | 88,6% | |
| próbka | 4 | 0,25 | 2,12 | 89,4% |
| o pH 6,15 | 7 | 0,40 | 2,50 | 86,2% |
| 10 | 0,30 | 3,00 | 90,9% | |
| 15 | 0,33 | 2,50 | 88,3% | |
| 21 | 0,35 | 2,50 | 87,7% | |
| 28 | 0,33 | 2,75 | 89,3% |
Eksperyment ten wykazał, że regulacja pH rozcieńczonym kwasem octowym nie zmienia dystrybucji cynku między supernatantem a nierozpuszczalnymi kryształami insuliny. Wykazał on również, że dystrybucja cynku nie zmienia się w sposób istotny podczas przechowywania. W obu preparatach większość cynku pozostała we frakcji supernatanta.
Przykład IV. Trwałość modyfikowanych cynkiem preparatów ludzkiej insuliny Ultralente
A. Kilka wzmocnionych cynkiem preparatów ludzkiej insuliny Ultralente przy gotow anych w sposób opisany w przykładzie II badano mikroskopowo przy powiększeniu 43X. Wszystkie zawiesiny wykazywały typową, romboidalną postać kryształów Ultralente, występującą w preparatach niemodyfikowanych. Wielkość, kształt i integralność kryształów w zawiesinach modyfikowanych cynkiem były w zasadzie nieodróżnialne od zawiesiny niemodyfikowanej. W preparatach tych nie wykryto obecności znacznych ilości nierozpuszczalnych, niekrystalicznych cząstek obcych.
Preparaty wykazywały również takie samo zachowanie przy wirowaniu jak niemodyfikowane preparaty Ultralente. Po wirowaniu zawiesiny krystaliczne również wykazywały taką samą charakterystykę osiadania jak niemodyfikowany preparat Ultralente, zarówno pod względem czasu potrzebnego do całkowitego osiągnięcia kryształów, jak i pod względem przybliżonej objętości upakowania kryształów.
B. Przygotowano wzmocniony cynkiem preparat ludzkiej insuliny Ultralente, zawierający około 7,5 mg/ml cynku (podobnie jak próbka 9 z przykładu II). Jako kontrolę użyto niezmodyfikowaną insulinę Ultralente (próbka 7 z przykładu II). Obie próbki przechowywano w 5°C przez około 1 rok. Po tym czasie kryształy insuliny ponownie rozpuszczono w rozcieńczonym kwasie chlorowodorowym i oceniano ich czystość za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC) w układzie z odwróconymi fazami. Użyto kolumnę Zorbax C-8 4,6 x 250 mm w temperaturze 40°C, zawierającą cząstki o wielkości porów 150 angstremów. Insulinę eluowano przy prędkości przepływu 0,7 ml/min w gradiencie acetonitrylu o zawartości 0,225M siarczanu amonu przy pH około 2.
Po 1 roku czystość niemodyfikowanej insuliny Ultralente wynosiła 96,4%. Stwierdzono obecność kilku niezidentyfikowanych pików w ilości po około 0,2% każdy i pik A21-dezamidoinsuliny w ilości około 1%. W preparacie Ultralente zawierającym 7,5 mg/ml cynku po 1 roku czystość insuliny wynosiła 96,8% i występowało w nim kilka niezidentyfikowanych pików w ilości w zakresie 0,1-0,2% oraz pik A21-dezamidoinsuliny w ilości około 1%. Stwierdzono obecność nowego nieznanego piku, eluującego przed insuliną, w ilości 0,3%, który nie był obecny w próbce niemodyfikowanej insuliny Ultralente.
Eksperymenty te wykazały, że w preparatach zmodyfikowanych cynkiem trwałość kryształów Ultralente pod względem ich wielkości i kształtu jest utrzymana. Wysokie poziomy cynku w preparacie Ultralente nie powodują zmiany czystości chemicznej cząsteczki insuliny po 1 roku przechowywania w 5°C.
177 002
Przykład V. Badanie rozpuszczania preparatu złożonego
Test ten jest modyfikacją testu opisanego przez Grahama i Pomeroy w J. Pharm. Pharmacol. 36, 427-430 (1983). W teście tym wykorzystuje się szybkość rozpuszczania kryształu insuliny po znacznym rozcieńczeniu buforem niewiążącym cynku jako sposób przewidywania szybkości rozpuszczania preparatu krystalicznego po podskórnym wstrzyknięciu zwierzęciu. Jest to możliwe, ponieważ w przypadku zawiesin insuliny etapem limitującym generowanie odpowiedzi biologicznej jest głównie szybkość rozpuszczania nierozpuszczalnej insuliny po wstrzyknięciu. Zatem można przewidzieć, że preparat insuliny, który rozpuszcza się w tym teście wolniej niż ludzka insulina Ultralente będzie prawdopodobnie działać wolniej w modelach biologicznych.
W sposób podobny jak dla próbki 8 w przykładzie II przygotowano trzy wzmocnione cynkiem preparaty Ultralente, zawierające 0,35, 0,7 i 2,5 mg/ml cynku. Porcje po 0,5 ml tych zawiesin i porcje po 0,5 ml niezmienionej insuliny ludzkiej J100 oraz preparatu bydlęcej insuliny Ultralente dodawano do 50 ml buforu 0,1M Tris (trihydroksymetyloaminometan, Mallinckrodt, Paris, KY) o pH 7,5, mieszanego w 25°C w szklanej zlewce o pojemności 80 ml. Po 3 i 8 godzinach pobierano próbki mieszanych zawiesin i przepuszczano je poprzez filtr Acrodisc® 0,2 mikrona.
Ilość insuliny w przesączu oznaczano za pomocą HPLC z odwróconymi fazami. Maksymalną zawartość insuliny oznaczano w niepizesączonej zakwaszonej próbce. Na początku testu rozpuszczania nie było praktycznie rozpuszczonej insuliny. Wyniki tych eksperymentów przedstawiono w tabeli 6.
Tabela 6
| Gatunek Ultralente | Oznaczony poziom cynku mg/ml | Maksymalny procent insuliny rozpuszczalnej (3 godziny) | Maksymalny procent insuliny rozpuszczalnej (8 godzin) |
| Ludzka | 0,15 | 16,3% | 44,7% |
| Ludzka | 0,35 | 4,5% | 10,7% |
| Ludzka | 0,70 | 2,4% | 6,3% |
| Ludzka | 2,50 | 1,1% | 3,2% |
| Bydlęca | 0,15 | 3,2% | 6,2% |
Eksperyment ten wykazał, że niezmieniony preparat ludzkiej insuliny Ultralente rozpuszcza się znacznie szybciej niż niezmieniona wołowa insulina Ultralente. Wykazuje on również, że dodanie cynku do ludzkiej Ultralente do poziomu około 0,7 mg na 1 θ0 jednostek insuliny sprawia, że kryształy insuliny rozpuszczają się z tą samą mniej więcej szybkością co niezmieniona bydlęca insulina Ultralente. Dodanie do ludzkiej Ultralente cynku do stężenia około 2,5 mg na 100 jednostek insuliny obdarzają szybkością rozpuszczania mniejszą niż niezmieniona bydlęca insulina Ultralente.
Przykład VI. Badanie rozpuszczania przy przepływie ciągłym
Test poniższy jest modyfikacją testu przepływowego opisanego przez Brange w Galenics of Insulin, strona 46, Springer-Verlag, 36,427-430 (1987) oraz Grahama i Pomeroy w J. Pharm. Pharmacol. 36, 427-430 (1983). Próbki po 2 ml niezmienionych insulin ludzkiej i bydlęcej Ultralente oraz próbkę ludzkiej insuliny Ultralente zawierającej około 0,7 mg cynku na 100 jednostek insuliny (jak opisano w przykładzie V) rozcieńczono 48 ml buforu Tris o pH 7,5. Każdą z zawiesin 50-mililitrowych w całości przepuszczono przez filtr Acrodisc* 0,2 mikrona. Każdy z filtrów umieszczono następnie in-line na rurce eluenta układu FPLC (Pharmacia, Piscataway, NJ). Przez każdy z filtrów pompowano świeży bufor 0,1M Tris o pH 7,5 z prędkością przepływu 2 ml na minutę. Absorbancję eluatu za filtrem monitorowano w sposób ciągły spektroskopowo przez ponad dwie godziny, mierząc insulinę przy długości fali 214 nm. Różne części eluatów badano również za pomocą HPLC z odwróconymi fazami w celu potwierdzenia obecności insuliny ludzkiej lub wołowej.
177 002
Insulina krystaliczna z preparatu bydlęcej insuliny Ultralente w świeżym buforze tris rozpuszczała się bardzo wolno. Elucję insuliny bydlęcej potwierdzano przez analizę HPLC części eluatu. Insulina w niemodyfikowanych kryształach ludzkiej insuliny Ultralente rozpuszczała się szybciej, wykazując szczyt rozpuszczania po około 35 minutach i utrzymując stosunkowo wysoką szybkość rozpuszczania przez cały eksperyment. Preparat ludzkiej insuliny Ultralente zawierający 0,7 mg/ml cynku zachowywał się bardzo podobnie do niezmienionej próbki ludzkiej insuliny Ultralente ale niepodobnie do insuliny bydlęcej. To sugeruje, że we wczesnym etapie filtracji z preparatu tego usunięty został cały niezwiązany cynk, a kryształy pozostałe zachowywały się dokładnie tak jak niezmienione kryształy ludzkiej insuliny Ultralente. Dane te pokazują również bardzo wyraźnie różnicę w szybkościach rozpuszczania właściwych dla kryształów insuliny ludzkiej i bydlęcej. Wyniki tych eksperymentów przedstawiono w tabeli 7.
Tabela 7 Absorbancja względna
| Czas (minuty) | Bydlęca Ultralente | Ludzka Ultralente | Ludzka Ultralente 0,7 mg/ml Zn |
| 0 | 0 | 0 | 0 |
| 2,5 | 12,5 | 3,5 | 12,5 |
| 5 | 9,0 | 8,0 | 11,5 |
| 10 | 8,0 | 23,0 | 19,0 |
| 15 | 7,8 | 38,0 | 31,7 |
| 20 | 7,9 | 52,0 | 45,0 |
| 25 | 8,0 | 59,0 | 60,0 |
| 30 | 7,4 | 63,0 | 72,0 |
| 35 | 8,1 | 64,0 | 79,5 |
| 40 | 8,0 | 61,0 | 79,0 |
| 45 | 8,3 | 57,5 | 73,0 |
| 50 | 7,8 | 52,0 | 68,0 |
| 55 | 8,2 | 45,5 | 60,0 |
| 60 | 8,5 | 40,0 | 52,2 |
| 65 | 8,5 | 36,0 | 45,5 |
| 70 | 8,8 | 31,5 | 39,5 |
| 75 | 9,0 | 29,5 | 36,3 |
| 80 | 9,7 | 26,0 | 25,0 |
| 90 | 9,6 | 23,0 | 22,1 |
| 100 | 10,4 | 20,2 | 22,1 |
| 110 | 11,0 | 18,5 | 24,3 |
| 120 | 11,2 | 16,6 | 24,0 |
| 130 | 12,0 | 15,1 | 21,6 |
Przykład VII. Badania preparatów Ultralente na królikach
Bydlęcą insulinę Ultralente (J40) i ludzką insulinę Ultralente (J40) przygotowane jak pokazano dla próbek 1-6 z przykładu II testowano na normalnym modelu króliczym. W eksperymencie użyto białych królików New Zealand, w większości samic o wadze 2,7-4 kg w wieku 0,5-4 lat, karmionych na 16 godzin przed podaniem próbki. Zawiesiny insuliny wstrzykiwano 10 królikom podskórnie w tył szyi w dawce 0,2 jednostki na kilogram. Po różnych czasach z bocznej żyły usznej pobierano próbki po 100 pl krwi, mieszano je z 900 μΐ antykoagulanta (EDTA - fluorek sodu) i analizowano na zawartość glukozy. Wartości zawartości glukozy standaryzowano w celu uwzględnienia początkowego procentu glukozy przed wstrzyknięciem próbki. Wyniki tych eksperymentów przedstawiono w tabeli 8.
177 002
Tabela 8
| Próbka | Rodzaj Ultralente | Obliczony poziom cynku mg/ml | % początkowego anzinmu glukozy | |||
| Godziny po iniekcji | ||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | |||
| 1 | Ludzka | 0,09 | 60,6 | 65,2 | 89,0 | 90,4 |
| 2 | Ludzka | 0,25 | 56,7 | 67,8 | 91,4 | 91,4 |
| 3 | Ludzka | 0,59 | 60,4 | 58,9 | 78,1 | 85,5 |
| 4 | Ludzka | 1,07 | 81,8 | 78,6 | 95,2 | 95,6 |
| 5 | Ludzka | 2,40 | 92,8 | 80,9 | 80,3 | 88,6 |
| 6 | Ludzka | 7,31 | 96,0 | 84,1 | 80,9 | 85,9 |
| 7 | Bydlęca | 0,15 | 60,1 | 68,7 | 96,7 | 95,7 |
Czas działania w modelu króliczym jest znacznie krótszy niż u człowieka. Ta kompresja czasu działania prowadzi do tego, że w modelu tym nie można wykazać istotnej różnicy między preparatem niezmienionej insuliny ludzkiej a bydlęcej insuliny Ultralente (próbka 1 w porównaniu z 7). Mimo tego ograniczenia eksperyment ten pokazuje, że działanie biologiczne ludzkiej insuliny Ultealpnte po dodaniu do preparatu wystarczającej ilości cynku jest bardzo zmienione. Jak pokazują wyniki dla próbek 4-6, początek silnej odpowiedzi biologicznej jest opóźniony o ponad godzinę, dając wartość najniższą między godziną 2 a 4. Maksymalny spadek poziomu glukozy we krwi jest również zmniejszony, od około 40% w próbkach 1-3 (punkt najniższy po 1 godzinie) do tylko około 20% spadku dla próbek 4-6 (punkt najniższy po 2-4 godzinach). Stąd preparaty o wystarczającej zawartości cynku pnzianajc wyraźnie przedłużony czas działania, znacznie wolniejszy niż niezmienione preparaty ludzkiej lub bydlęcej insuliny Ultralente.
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 70 egz.
Cena 4,00 zł.
Claims (7)
- Zastrzeżenia patentowe1. Preparat insuliny ludzkiej zawierający insulinę ze skoordynowanym cynkiem w buforze octanowym, znamienny tym, że zawiera zawiesinę kryształów insuliny ludzkiej ze skoordynowanym cynkiem w buforze octanowym przy całkowitym stężeniu cynku od 0,5 miligrama do 20 miligramów na 100 jednostek insuliny.
- 2. Preparat insuliny według zastrz. 1, znamienny tym, że dodatkowo zawiera środki konserwujące.
- 3. Preparat insuliny według zastrz. 2, znamienny tym, że dodatkowo zawiera środek izotonizujący.
- 4. Preparat insuliny według zastrz. 3, znamienny tym, że dodatkowo zawiera farmaceutycznie dopuszczalny bufor nie oddziaływujący silnie z cynkiem.
- 5. Preparat insuliny według zastrz. 4, znamienny tym, że zawiera cynk o całkowitym stężeniu wynoszącym od około 0,5 miligrama do około 7 miligramów na 100 jednostek.
- 6. Sposób wytwarzania preparatu insuliny ludzkiej zawierającego insulinę ze skoordynowanym cynkiem w buforze octanowym, znamienny tym, że kryształy insuliny ze skoordynowanym cynkiem w buforze octanowym łączy się z cynkiem, przy czym stosuje się cynk w całkowitym stężeniu wynoszącym od około 0,5 do około 20 miligramów na 1 OOjednostek insuliny.
- 7. Sposób według zastrz. 6, znamienny tym, że stosuje się cynk w postaci octanu cynku, bromku cynku, chlorku cynku, fluorku cynku, jodku cynku lub siarczanu cynku.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/106,106 US5534488A (en) | 1993-08-13 | 1993-08-13 | Insulin formulation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL304600A1 PL304600A1 (en) | 1995-02-20 |
| PL177002B1 true PL177002B1 (pl) | 1999-09-30 |
Family
ID=22309529
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL94304600A PL177002B1 (pl) | 1993-08-13 | 1994-08-09 | Preparat insuliny ludzkiej i sposób wytwarzania preparatu insuliny ludzkiej |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5534488A (pl) |
| EP (1) | EP0646379B1 (pl) |
| JP (1) | JPH07149660A (pl) |
| KR (1) | KR950005324A (pl) |
| CN (1) | CN1109364A (pl) |
| AT (1) | ATE207761T1 (pl) |
| AU (1) | AU674975B2 (pl) |
| BR (1) | BR9403204A (pl) |
| CA (1) | CA2129763A1 (pl) |
| CO (1) | CO4230235A1 (pl) |
| CZ (1) | CZ193794A3 (pl) |
| DE (1) | DE69428860T2 (pl) |
| DK (1) | DK0646379T3 (pl) |
| ES (1) | ES2164691T3 (pl) |
| HU (1) | HUT67853A (pl) |
| IL (1) | IL110581A0 (pl) |
| NO (1) | NO942959L (pl) |
| NZ (1) | NZ264197A (pl) |
| PE (1) | PE14495A1 (pl) |
| PH (1) | PH30757A (pl) |
| PL (1) | PL177002B1 (pl) |
| PT (1) | PT646379E (pl) |
| RU (1) | RU2135205C1 (pl) |
| TW (1) | TW326394B (pl) |
| UA (1) | UA27874C2 (pl) |
| YU (1) | YU50494A (pl) |
| ZA (1) | ZA945939B (pl) |
Families Citing this family (48)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5578238A (en) * | 1992-10-30 | 1996-11-26 | Lord Corporation | Magnetorheological materials utilizing surface-modified particles |
| YU18596A (sh) * | 1995-03-31 | 1998-07-10 | Eli Lilly And Company | Analogne formulacije monomernog insulina |
| US6531448B1 (en) * | 1997-12-23 | 2003-03-11 | Eli Lilly And Company | Insoluble compositions for controlling blood glucose |
| EP1396272A1 (en) * | 1997-12-23 | 2004-03-10 | Eli Lilly & Company | Insoluble Insulin Compositions for Controlling Blood Glucose |
| US6956021B1 (en) * | 1998-08-25 | 2005-10-18 | Advanced Inhalation Research, Inc. | Stable spray-dried protein formulations |
| AU5454200A (en) * | 1999-06-29 | 2001-01-31 | Eli Lilly And Company | Protamine-free insoluble acylated insulin compositions |
| US7678364B2 (en) | 1999-08-25 | 2010-03-16 | Alkermes, Inc. | Particles for inhalation having sustained release properties |
| JP2003528149A (ja) * | 2000-03-24 | 2003-09-24 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 軟骨性疾患の治療のためのインスリンの使用 |
| JP4303959B2 (ja) | 2000-10-06 | 2009-07-29 | ジ アドバイザー − ディフェンス リサーチ アンド ディベラップメント オーガナイゼイション | 磁気感受性流体組成物およびその調製方法 |
| EP1344229B1 (en) * | 2000-11-29 | 2008-03-05 | The Adviser Defence Research & Development Organisation, Ministry of Defence, Government of India | A magnetorheological fluid composition and a process for preparation thereof |
| NZ548358A (en) * | 2001-02-09 | 2008-04-30 | Genentech Inc | Method of identifying agonists of insulin-like growth factor-1 |
| DE10114178A1 (de) | 2001-03-23 | 2002-10-10 | Aventis Pharma Gmbh | Zinkfreie und zinkarme Insulinzubereitungen mit verbesserter Stabilität |
| EP1469827B1 (en) | 2002-01-09 | 2017-12-27 | Emisphere Technologies, Inc. | Polymorphs of sodium 4- (4-chloro-2-hydroxybenzoyl)amino butanoate |
| DE10227232A1 (de) * | 2002-06-18 | 2004-01-15 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Saure Insulinzubereitungen mit verbesserter Stabilität |
| RU2251426C1 (ru) * | 2003-09-18 | 2005-05-10 | Цыганков Владимир Владимирович | Способ получения инсулина из природного источника и инсулин |
| WO2005072803A1 (en) * | 2004-01-16 | 2005-08-11 | Biodel, Inc. | Sublingual drug delivery device |
| US20080085298A1 (en) * | 2004-03-12 | 2008-04-10 | Biodel, Inc. | Rapid Mucosal Gel or Film Insulin Compositions |
| US20080248999A1 (en) * | 2007-04-04 | 2008-10-09 | Biodel Inc. | Amylin formulations |
| US20080090753A1 (en) | 2004-03-12 | 2008-04-17 | Biodel, Inc. | Rapid Acting Injectable Insulin Compositions |
| US20080096800A1 (en) * | 2004-03-12 | 2008-04-24 | Biodel, Inc. | Rapid mucosal gel or film insulin compositions |
| EP2106790B1 (en) * | 2004-03-12 | 2012-10-24 | Biodel, Inc. | Rapid acting drug delivery compositions |
| SG153039A1 (en) | 2004-05-06 | 2009-06-29 | Emisphere Tech Inc | Crystalline polymorphic forms of monosodium n-[8- (2hydroxybenzoyl)amino]caprylate |
| WO2005117854A2 (en) * | 2004-05-14 | 2005-12-15 | Emisphere Technologies, Inc. | Aryl ketone compounds and compositions for delivering active agents |
| MX2007000883A (es) | 2004-07-19 | 2007-04-02 | Biocon Ltd | Conjugados de insulina-oligomero, formulaciones y usos de los mismos. |
| AU2005271526B2 (en) * | 2004-08-03 | 2011-12-08 | Emisphere Technologies, Inc. | Antidiabetic oral insulin-biguanide combination |
| JP2008509933A (ja) * | 2004-08-13 | 2008-04-03 | エミスフェアー・テクノロジーズ・インク | 送達剤のマイクロ粒子またはナノ粒子を含む医薬製剤 |
| RU2288000C1 (ru) * | 2005-04-27 | 2006-11-27 | Институт нефтехимического синтеза им. А.В. Топчиева РАН (ИНХС РАН) | Раствор инсулина для перорального введения |
| US8084420B2 (en) * | 2005-09-29 | 2011-12-27 | Biodel Inc. | Rapid acting and long acting insulin combination formulations |
| US7713929B2 (en) * | 2006-04-12 | 2010-05-11 | Biodel Inc. | Rapid acting and long acting insulin combination formulations |
| CA2649109A1 (en) * | 2006-04-12 | 2007-10-25 | Biodel, Inc. | Rapid acting and long acting insulin combination formulations |
| ES2579229T3 (es) | 2007-03-13 | 2016-08-08 | Jds Therapeutics, Llc | Procedimientos y composiciones para la liberación sostenida de cromo |
| WO2009002867A2 (en) | 2007-06-26 | 2008-12-31 | Nutrition 21, Inc. | Multiple unit dosage form having a therapeutic agents in combination with a nutritional supplement |
| BRPI0818004B8 (pt) | 2007-10-16 | 2021-05-25 | Biocon Ltd | composição farmacêutica sólida administrável por via oral e o processo da mesma. |
| WO2009089181A1 (en) * | 2008-01-04 | 2009-07-16 | Blodel, Inc. | Insulin formulations for insulin release as a function of tissue glucose levels |
| EP3228320B1 (de) | 2008-10-17 | 2019-12-18 | Sanofi-Aventis Deutschland GmbH | Kombination von einem insulin und einem glp-1-agonisten |
| US9060927B2 (en) * | 2009-03-03 | 2015-06-23 | Biodel Inc. | Insulin formulations for rapid uptake |
| EP3202394A1 (de) | 2009-07-06 | 2017-08-09 | Sanofi-Aventis Deutschland GmbH | Wässrige insulinzubereitungen enthaltend methionin |
| PE20121316A1 (es) | 2009-11-13 | 2012-10-05 | Sanofi Aventis Deutschland | Composicion farmaceutica que comprende un agonista de glp-1 y metionina |
| PT2554183T (pt) | 2009-11-13 | 2018-07-09 | Sanofi Aventis Deutschland | Composição farmacêutica que compreende um agonista de glp-1, uma insulina e metionina |
| US20130085101A1 (en) * | 2010-02-22 | 2013-04-04 | Case Western Reserve University | Long-acting insulin analogue preparations in soluble and crystalline forms |
| US20140148384A1 (en) | 2010-08-30 | 2014-05-29 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Use of ave0010 for the manufacture of a medicament for the treatment of diabetes mellitus type 2 |
| AU2012223282B2 (en) | 2011-03-01 | 2017-02-02 | Nutrition 21, Llc | Compositions of insulin and chromium for the treatment and prevention of diabetes, hypoglycemia and related disorders |
| US9821032B2 (en) | 2011-05-13 | 2017-11-21 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical combination for improving glycemic control as add-on therapy to basal insulin |
| TWI559929B (en) | 2011-09-01 | 2016-12-01 | Sanofi Aventis Deutschland | Pharmaceutical composition for use in the treatment of a neurodegenerative disease |
| TWI758239B (zh) | 2014-12-12 | 2022-03-21 | 德商賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 甘精胰島素/利司那肽固定比率配製劑 |
| TWI748945B (zh) | 2015-03-13 | 2021-12-11 | 德商賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患治療 |
| TW201705975A (zh) | 2015-03-18 | 2017-02-16 | 賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患之治療 |
| AU2017217466A1 (en) | 2016-02-11 | 2018-08-23 | Nutrition 21, Llc | Chromium containing compositions for improving health and fitness |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2626228A (en) * | 1945-05-17 | 1953-01-20 | Novo Terapeutisk Labor As | Method of producing crystalline insulin |
| US2882202A (en) * | 1950-04-05 | 1959-04-14 | Novo Terapeutisk Labor As | Insulin crystal preparations and methods of producing them |
| US2882203A (en) * | 1951-06-26 | 1959-04-14 | Novo Terapeutisk Labor As | Injectable insulin preparation with protracted effect |
| US2849370A (en) * | 1953-06-04 | 1958-08-26 | Novo Terapeutisk Labortorium A | Injectable insulin preparations with protracted effect and process of producing same |
| US3102077A (en) * | 1953-08-19 | 1963-08-27 | Christensen Henry Marinus | Preparation of insulin containing 2.75 to 8 percent zinc content |
| US2819999A (en) * | 1953-11-13 | 1958-01-14 | Novo Terapeutisk Labor As | Process for crystallization of insulin using freeze dried insulin as seeding material |
| US2799622A (en) * | 1953-11-14 | 1957-07-16 | Novo Terapeutisk Labor As | Process of producing insulin crystals of substantially uniform size and compositions thereof |
| US3060093A (en) * | 1957-07-18 | 1962-10-23 | Nordisk Insulinlab | Slowly acting insulin preparation in crystalline form and method of preparation |
| DE2933946A1 (de) * | 1979-08-22 | 1981-03-12 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Insulinkristallsuspension und verfahren zu ihrer herstellung. |
| DE3101382A1 (de) * | 1981-01-17 | 1982-09-02 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | "verfahren zur herstellung von humanisulin oder dessen derivaten aus schweineinsulin oder dessen derivaten" |
| FI78616C (fi) * | 1982-02-05 | 1989-09-11 | Novo Industri As | Foerfarande foer framstaellning av en foer infusionsaendamaol avsedd stabiliserad insulinloesning, som har en foerhoejd zinkhalt. |
| SU1131507A1 (ru) * | 1982-05-28 | 1984-12-30 | Черновицкий Ордена Трудового Красного Знамени Государственный Университет | Способ получени инсулина |
| DE3511269A1 (de) * | 1985-04-12 | 1986-10-09 | Veb Berlin-Chemie, Ddr 1199 Berlin | Verfahren zur reinigung von insulin |
| PH23446A (en) * | 1986-10-20 | 1989-08-07 | Novo Industri As | Peptide preparations |
| DE3827533A1 (de) * | 1988-08-13 | 1990-02-15 | Hoechst Ag | Pharmazeutische zubereitung zur behandlung des diabetes mellitus |
-
1993
- 1993-08-13 US US08/106,106 patent/US5534488A/en not_active Expired - Fee Related
-
1994
- 1994-08-04 HU HU9402287A patent/HUT67853A/hu unknown
- 1994-08-08 IL IL11058194A patent/IL110581A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1994-08-08 NZ NZ264197A patent/NZ264197A/en unknown
- 1994-08-08 BR BR9403204A patent/BR9403204A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-08-08 ZA ZA945939A patent/ZA945939B/xx unknown
- 1994-08-08 PE PE1994248043A patent/PE14495A1/es not_active Application Discontinuation
- 1994-08-09 PT PT94305883T patent/PT646379E/pt unknown
- 1994-08-09 AT AT94305883T patent/ATE207761T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-08-09 UA UA94085696A patent/UA27874C2/uk unknown
- 1994-08-09 DE DE69428860T patent/DE69428860T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1994-08-09 CO CO94035010A patent/CO4230235A1/es unknown
- 1994-08-09 EP EP94305883A patent/EP0646379B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-08-09 ES ES94305883T patent/ES2164691T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-08-09 PH PH48764A patent/PH30757A/en unknown
- 1994-08-09 TW TW083107259A patent/TW326394B/zh active
- 1994-08-09 RU RU94028671A patent/RU2135205C1/ru active
- 1994-08-09 NO NO942959A patent/NO942959L/no not_active Application Discontinuation
- 1994-08-09 CA CA002129763A patent/CA2129763A1/en not_active Abandoned
- 1994-08-09 DK DK94305883T patent/DK0646379T3/da active
- 1994-08-09 PL PL94304600A patent/PL177002B1/pl unknown
- 1994-08-09 KR KR1019940019550A patent/KR950005324A/ko not_active Abandoned
- 1994-08-10 JP JP6188204A patent/JPH07149660A/ja not_active Withdrawn
- 1994-08-10 CZ CZ941937A patent/CZ193794A3/cs unknown
- 1994-08-10 CN CN94109082A patent/CN1109364A/zh active Pending
- 1994-08-10 YU YU50494A patent/YU50494A/sh unknown
- 1994-08-12 AU AU70247/94A patent/AU674975B2/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR950005324A (ko) | 1995-03-20 |
| NO942959D0 (no) | 1994-08-09 |
| HU9402287D0 (en) | 1994-09-28 |
| HUT67853A (en) | 1995-05-29 |
| DE69428860D1 (de) | 2001-12-06 |
| DE69428860T2 (de) | 2002-05-02 |
| EP0646379B1 (en) | 2001-10-31 |
| CO4230235A1 (es) | 1995-10-19 |
| UA27874C2 (uk) | 2000-10-16 |
| NO942959L (no) | 1995-02-14 |
| RU2135205C1 (ru) | 1999-08-27 |
| PH30757A (en) | 1997-10-17 |
| DK0646379T3 (da) | 2001-12-03 |
| YU50494A (sh) | 1997-01-08 |
| US5534488A (en) | 1996-07-09 |
| TW326394B (en) | 1998-02-11 |
| JPH07149660A (ja) | 1995-06-13 |
| CN1109364A (zh) | 1995-10-04 |
| CZ193794A3 (en) | 1995-03-15 |
| ATE207761T1 (de) | 2001-11-15 |
| ZA945939B (en) | 1996-02-08 |
| AU7024794A (en) | 1995-02-23 |
| BR9403204A (pt) | 1995-04-18 |
| PE14495A1 (es) | 1995-06-02 |
| EP0646379A1 (en) | 1995-04-05 |
| ES2164691T3 (es) | 2002-03-01 |
| IL110581A0 (en) | 1994-11-11 |
| PL304600A1 (en) | 1995-02-20 |
| CA2129763A1 (en) | 1995-02-14 |
| NZ264197A (en) | 1997-01-29 |
| PT646379E (pt) | 2002-03-28 |
| AU674975B2 (en) | 1997-01-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL177002B1 (pl) | Preparat insuliny ludzkiej i sposób wytwarzania preparatu insuliny ludzkiej | |
| CA2151564C (en) | Monomeric insulin analog formulations | |
| AU720300B2 (en) | Monomeric insulin analog formulations | |
| US5840680A (en) | ASPB28 insulin crystals | |
| US7179788B2 (en) | Biphasic mixtures of GLP-1 and insulin | |
| EP0705275B1 (en) | Asp-b28 insulin crystals | |
| US5948751A (en) | X14-mannitol | |
| RU2154494C2 (ru) | Комплекс аналога инсулина и протамина, способ получения, фармацевтическая композиция и способ лечения диабета | |
| AU711428B2 (en) | Monomeric insulin analog formulations | |
| AU738101B2 (en) | Monomeric insulin analog formulations | |
| GB2327424A (en) | Insulin analog protamine complexes | |
| HK1014005A (en) | Monomeric insulin analog formulations | |
| AU2002330064A1 (en) | Biphasic mixtures of GLP-1 and insulin |