PL166864B1 - Srodek przedwgrzybiczy PL PL PL PL PL PL PL PL - Google Patents
Srodek przedwgrzybiczy PL PL PL PL PL PL PL PLInfo
- Publication number
- PL166864B1 PL166864B1 PL90287369A PL28736990A PL166864B1 PL 166864 B1 PL166864 B1 PL 166864B1 PL 90287369 A PL90287369 A PL 90287369A PL 28736990 A PL28736990 A PL 28736990A PL 166864 B1 PL166864 B1 PL 166864B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- soil
- active substance
- fungicide
- ncib
- sample
- Prior art date
Links
- 238000012216 screening Methods 0.000 title description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 15
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 title description 5
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title description 3
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 title 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 21
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 14
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims abstract description 13
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 claims abstract description 10
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract 10
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 claims description 11
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 abstract description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 44
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 43
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 41
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 24
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 24
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 23
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 21
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 21
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 20
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 20
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 20
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 18
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 16
- ZQEIXNIJLIKNTD-UHFFFAOYSA-N methyl N-(2,6-dimethylphenyl)-N-(methoxyacetyl)alaninate Chemical compound COCC(=O)N(C(C)C(=O)OC)C1=C(C)C=CC=C1C ZQEIXNIJLIKNTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 15
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 description 14
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 description 14
- 239000005807 Metalaxyl Substances 0.000 description 13
- 241000233639 Pythium Species 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 241000918584 Pythium ultimum Species 0.000 description 11
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 11
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 10
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 10
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 9
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 9
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 9
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 9
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 9
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 9
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 8
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 8
- 230000009471 action Effects 0.000 description 8
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 239000001965 potato dextrose agar Substances 0.000 description 7
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 7
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 6
- 241000223194 Fusarium culmorum Species 0.000 description 6
- 241000233624 Phytophthora megasperma Species 0.000 description 6
- 241000219843 Pisum Species 0.000 description 6
- 241000813090 Rhizoctonia solani Species 0.000 description 6
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 6
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 6
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 6
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- UYPYRKYUKCHHIB-UHFFFAOYSA-N trimethylamine N-oxide Chemical compound C[N+](C)(C)[O-] UYPYRKYUKCHHIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 6
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 5
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 5
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 5
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 5
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 5
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 5
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 4
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 4
- LDVVMCZRFWMZSG-OLQVQODUSA-N (3ar,7as)-2-(trichloromethylsulfanyl)-3a,4,7,7a-tetrahydroisoindole-1,3-dione Chemical compound C1C=CC[C@H]2C(=O)N(SC(Cl)(Cl)Cl)C(=O)[C@H]21 LDVVMCZRFWMZSG-OLQVQODUSA-N 0.000 description 3
- 239000005745 Captan Substances 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000233732 Fusarium verticillioides Species 0.000 description 3
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 3
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 3
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 3
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 3
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 3
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 3
- 238000011957 budget and coverage analysis Methods 0.000 description 3
- 229940117949 captan Drugs 0.000 description 3
- 239000002361 compost Substances 0.000 description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000003415 peat Substances 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010017711 Gangrene Diseases 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001503951 Phoma Species 0.000 description 2
- 241000975369 Phoma betae Species 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- RIOXQFHNBCKOKP-UHFFFAOYSA-N benomyl Chemical compound C1=CC=C2N(C(=O)NCCCC)C(NC(=O)OC)=NC2=C1 RIOXQFHNBCKOKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MITFXPHMIHQXPI-UHFFFAOYSA-N benzoxaprofen Natural products N=1C2=CC(C(C(O)=O)C)=CC=C2OC=1C1=CC=C(Cl)C=C1 MITFXPHMIHQXPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- KGVPNLBXJKTABS-UHFFFAOYSA-N hymexazol Chemical compound CC1=CC(O)=NO1 KGVPNLBXJKTABS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- KUAZQDVKQLNFPE-UHFFFAOYSA-N thiram Chemical compound CN(C)C(=S)SSC(=S)N(C)C KUAZQDVKQLNFPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004563 wettable powder Substances 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YGSGRBIITZZCMW-UHFFFAOYSA-N 2-(trichloromethyl)-3a,4,5,7a-tetrahydroisoindole-1,3-dione Chemical compound C1CC=CC2C(=O)N(C(Cl)(Cl)Cl)C(=O)C21 YGSGRBIITZZCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 1
- 241001444083 Aphanomyces Species 0.000 description 1
- 241000172143 Aphanomyces cochlioides Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 1
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 239000005814 Pencycuron Substances 0.000 description 1
- 241000287531 Psittacidae Species 0.000 description 1
- 241001361634 Rhizoctonia Species 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N acetic acid phenyl ester Natural products CC(=O)OC1=CC=CC=C1 IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-L adipate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCCCC([O-])=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 239000007799 cork Substances 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 230000032798 delamination Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003801 milling Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- OGYFATSSENRIKG-UHFFFAOYSA-N pencycuron Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1CN(C(=O)NC=1C=CC=CC=1)C1CCCC1 OGYFATSSENRIKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940049953 phenylacetate Drugs 0.000 description 1
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000000003 plant pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003334 potential effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000007226 seed germination Effects 0.000 description 1
- 230000035040 seed growth Effects 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 235000010378 sodium ascorbate Nutrition 0.000 description 1
- 229960005055 sodium ascorbate Drugs 0.000 description 1
- PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M sodium ascorbate Substances [Na+].OC[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M 0.000 description 1
- PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M sodium-L-ascorbate Chemical compound [Na+].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M 0.000 description 1
- 244000000000 soil microbiome Species 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
- A01N63/27—Pseudomonas
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/38—Pseudomonas
- C12R2001/39—Pseudomonas fluorescens
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/874—Pseudomonas
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/874—Pseudomonas
- Y10S435/876—Pseudomonas fluorescens
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/929—Fusarium
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/939—Rhizopus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
1. Srodek przeciwgrzybiczy, zawierajacy substancje czynna i znane substancje pomocnicze, znamienny tym, ze jako substancje czynna zawiera drobnoustrój Pseudomonas fluorescens, zdeponowany 1 wrzesnia 1989 zgodnie z Traktatem Budapesztenskim w National Collection of Industrial and Marine Bacteria Limited, Aberdeen, Zjednoczone Królestwo, pod numerem przyjecia 40 186. P L 166864 B 1 PL PL PL PL PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest środek przeciwgrzybiczy, hamujący atakowanie roślin przez grzyby.
W celu poszukiwania drobnoustrojów o interesujących właściwościach, powszechnie stosuje się w mikrobiologii skriningowania wielkiej ilości, zwykle wielu tysięcy izolatów z gleby pod względem aktywności, interesującej z punktu widzenia zamierzonego celu. Jednym z takich celów jest izolowanie biologicznych czynników kontrolujących, określonych dalej skrótem BCAs, które są aktywne w stosunku do wybranych patogenów roślin. Tego rodzaju BCAs mogą stanowić alternatywne środki do zwalczania patogenów lub dodatki do środków chemicznych.
W normalnej praktyce pobiera się próbki gleby z tych obszarów pól, gdzie wydaje się, że występowania danego patogenu jest przytłumione; może to bowiem wskazywać, że drobnoustroje w samej glebie mogą hamować patogenność. Następnie, w laboratorium, izoluje się drobnoustroje z poszczególnych próbek, przez spłukiwanie ich z korzeni i hodowanie na agarze w jednej lub dwóch temperaturach typowych dla optymalnych temperatur wzrostu drobnoustrojów, zazwyczaj w temperaturze 25-30°C. Następnie izolaty poddaje się skriningowaniu, najpierw przeciw różnym patogenom na agarze, na szeregu płytkach Petriego, stosując metodę podwójnej hodowli. Jest to skriningowanie wstępne. Następnie bada się dokładniej obiecujące izolaty ze wstępnego skriningowania stosując szereg wtórnych badań skriningowych z zastosowaniem gleby.
Jak wykazuje doświadczenie, tradycyjne skriningowanie wstępne nie jest ani właściwe ani wystarczająco selektywne w stosunku do izolatów, które ostatecznie przechodzą przez następne testy skriningowe i doświadczenia polowe. Przez tradycyjne wstępne skriningowanie przechodzi duża ilość izolatów (zwykle około 20%), które wydają się obiecujące; jednak większość z nich zostaje odrzucona w następnych testach. Ponadto, wiemy obecnie, że skriningowanie wstępne, poza tym, że przepuszcza izolaty, które następnie, jak się okazuje, nie mają użytecznej aktywności, odrzuca pewne izolaty, które jak obecnie wiadomo, są zdolne do przejścia przez następne testy skriningowe. W efekcie, tradycyjne testy przepuszczają izolaty, które mają niską aktywność, a nie przepuszczają izolatów, które są dobrymi inhibitorami patogeniczności.
Istnieje więc oczywiście potrzeba opracowania nowego sposobu skriningowania izolatów z gleby, tak aby wyodrębnić dużą ilość potencjalnie dobrych izolatów i odrzucić jak najwięcej substancji o małej aktywności.
166 864
Sposób skriningowania potencjalnych środków przeciwgrzybiczych polega na tym, że bada się efekty hamujące potencjalnych środków przeciwgrzybiczych za pomocą dwóch testów, to jest za pomocą pierwszego testu na hamowanie rozwoju patogenu w wyjałowionej glebie, zakażonej grzybami Pythium spp oraz za pomocą drugiego testu, znów na hamowanie rozwoju zakażenia w rosnącej roślinie, należącej do gatunku podatnego na zakażenia, wynikające z kompleksu zakażenia powodującego gnicie skutkiem nadmiernej wilgoci, w obecności powyższego kompleksu, identyfikuje się środki wykazujące potencjalny efekt hamujący w obu testach w porównaniu do prób kontrolnych i poddaje się je dalszemu badaniu.
Jak wskazano powyżej, tradycyjny sposób izolowania drobnoustrojów nie jest sam w sobie selektywny. Wstępnie skriningujący sposób izolowania drobnoustrojów z próbek gleby, polega na umieszczeniu w pojemniku, dającym się szczelnie zamknąć, warstwy wilgotnego, wyjałowionego piasku, umieszczeniu na niej próbki wilgotnej gleby i wysianiu na próbce gleby nasienia rośliny podatnej na dane zakażenie, szczelnym zamknięciu pojemnika, umieszczeniu pojemnika w warunkach środowiskowych prowadzących do rozwoju zakażenia, umożliwieniu wykiełkowania nasienia i przejście jego korzeni z warstwy gleby do warstwy piasku, przecięciu rurki wzdłuż przez obie warstwy, wyjęciu korzeni z warstwy piasku i wyizolowaniu drobnoustroju z wyjętych korzeni.
Środki, tak chemiczne jak i mikrobiologiczne, które przejdą dwa testy według wynalazku, można następnie poddawać dalszemu skriningowaniu na hamowanie zakażeń grzybiczych, stosując jeden lub więcej niż jeden dodatkowy test wybrany z następującej grupy:
a/ zakażenie buraka cukrowego przez Aphanomyces cochlioides w temperaturze 12-15°C; b/ zakażenie grochu przez Pythium ultimum w temperaturze 12-15°C; c/ zakażenie grochu przez Pythium ultimum w temperaturze 24-27°C; d/ zakażenie grochu przez Rhizoctonia solani w temperaturze 24-27°C; e/ zakażenie pszenicy przez Fusarium culmorum w temperaturze 18-21°C; f/ zakażenie soi przez Phytophthora megasperma w temperaturze 20-24°C; g/ zakażenie plasterka ziemniaka przez Fusarium moniliforme w temperaturze 20-24°C; h/ zakażenie plasterka ziemniaka przez Fusarium Sambusinum w temperaturze 20-24°C oraz i/ zakażenie buraka cukrowego przez Phoma spp w temperaturze 15-19°C.
Tak więc, można izolować potencjalne BCAs sposobem, który jest przeznaczony tylko do wyodrębniania organizmów korzeniowo-aktywnych, przepuszczonych przez dwa wstępne testy skriningujące, które identyfikują organizmy o wysokiej potencjalnej aktywności i następnie skriningowanych w szeregu rygorystycznych testów, które identyfikują środki, które okazują się później bardzo silne przy testowaniu ich w szeregu różnych warunkach polowych. Stanowi to znaczy postęp w stosunku do tradycyjnych sposobów, które jak już wspomniano, mają tendencję do odrzucania organizmów, które przechodzą przez wyżej opisane testy i do przepuszczania bardzo wielkiej liczby organizmów, które w wyżej opisanych testach okazują się albo w dużym stopniu nieaktywne albo mniej aktywne niż próby kontrolne.
Przedmiotem wynalazku jest środek przeciwgrzybiczy, wykazujący takie samo lub lepsze hamowanie zakażeń grzybiczych niż porównywalny środek chemiczny, na co wskazują wyżej wymienione testy skriningowe.
Sposobem wyżej opisanym wyizolowano i oceniono cztery drobnoustroje, które uznano za szczególnie aktywne względem różnych zakażeń grzybiczych, na ogół związanych z nadmiarem wilgoci.
W związku z tym przedmiotem wynalazku są środki przeciwgrzybicze, zawierające drobnoustroje gatunku Pseudomonas fluorescens, których hodowle zdeponowano 1 września 1989 r. zgodnie z Traktatem Budapeszteńskim w National Collection od Industrial and Marine Bacteria Limited, w Aberdeen, Zjednoczone Królestwo, pod numerami przyjęcia 40 186, 40 187, 40 183 i 40 190.
Przedmiotem wynalazku jest rolniczy środek przeciwgrzybiczy, zawierający jako substancję czynną jeden z wymienionych drobnoustrojów w połączeniu ze znanymi substancjami pomocniczymi dopuszczalnymi w praktyce rolniczej.
Jako przykłady typów środków rolniczych można wymienić środki do zaprawiania nasion, ciekłe środki do zraszania korzeni lub gleby oraz środki granulowane i proszkowe. Podstawowe materiały do ich wytwarzania są dobrze znane.
166 864
Sposób hamowania zakażeń grzybiczych roślin polega na stosowaniu na roślinę, na jej nasiona lub na środowisku wzrostu rośliny skutecznej dawki środka przeciwgrzybiczego według wynalazku.
Sposób ochrony roślin uprawnych przed zakażeniem grzybiczym polega na stosowaniu na rośliny, ich korzenie lub nasiona, lub na glebę otaczającą rośliny skutecznej dawki jednego lub więcej niż jednego z wymienionych szczepów Pseudomonas fluorescens.
Szczep NCIB 40 187 wyizolowano z korzeni pszenicy, pobranych z roślin, hodowanych na polu na farmie zwanej Bandbury 2, Draycott Farm, Chiseldon, Swindon, Wiltshire, Zjednoczone Królestwo.
Szczepy NCIB 40186 i 40188 wyizolowano z gleby pobranej z pola znanego pod nazwą Stockoy Field w Jodoigne w Belgii.
Szczep NCIN 40190 wyizolowano z korzeni sadzonek pszenicy z pola Lower Garston, Rushall Farm, Newbury, Zjednoczone Królestwo.
Poniżej opisano sposób izolowania, charakteryzowania i skriningowania izolatów bakteryjnych pod względem aktywności przeciw szeregowi grzybów zakażających rośliny uprawne. Bardzo wiele drobnoustrojów wyizolowano, zidentyfikowano i poddano skriningowi w sposób opisany poniżej, wyizolowano cztery szczepy według wynalazku ze względu na ich wyjątkową skuteczność, wykazaną w testach skaningowych.
Przykład I. Izolowanie mikroorganizmów.
Próbki otrzymywano z rurkowaniem dializowanym na głębokości 35 cm przy szerokości 5,5 cm z poszerzaniem wykonanym w odległości 5 do 7 cm od jednego końca. Miałki piasek przemywano, suszono i wsypywano do probówki na głębokość 12 cm i nawilżano 20 ml wody destylowanej. Probówki z piaskiem dla podtrzymania umieszczano wewnątrz szklanych probówek (średnica 7 cm, głębokość 30 cm). Następnie probówki na dnie zatykano kauczukowym korkiem pokrytym folią aluminiową i u góry korkiem z waty bawełnianej, po czym pakowano w folię aluminiową. Całość utrzymywano dwukrotnie w autoklawie w temperaturze 121°C w czasie 60 minut.
Próbkę gleby zbierano z powierzchni sita i utrzymywano przy wilgotności 40% w temperaturze 4°C aż do użycia, to jest w ciągu dwóch dni zbierania. Następnie próbkę gleby przesiewano przez sita 4 mm i dodawano do probówek na głębokość 3 cm od powierzchni piasku. Nasiona (grochu, pszenicy, buraków cukrowych, słonecznika, kukurydzy lub soi) sadzono i pokrywano glebą na całkowitą głębokość 6 cm. Probówki umieszczano prosto w drucianym koszu, który następnie zamykano w plastikowym pojemniku z otworami dla umożliwienia wymiany powietrza i minimalnych strat odparowywania. Następnie kosze umieszczano w komorze wzrostowej i inkubowano w czasie czterech tygodni w temperaturach 10-24°C, przy wilgotności względnej 70%, w cyklu 16 godzin dnia/8 godzin nocy.
Po upływie czterech tygodni inkubowania plastikowe rurkowanie do dializowania otwierano wysterylizowanym skalpelem. Korzenie każdej rośliny oczyszczano z gleby i piasku,' i roślinę umieszczano na białej plastikowej tacy. Koronę i końcowe regiony roślin odcinano i myto oddzielnie w sterylnej wodzie.
Obcięte fragmenty umieszczano w sterylnych kolbach Erlenmeyera, zawierających 20 ml dejonizowanej wody i warstwę szklanych kulek. Następnie kolby wytrząsano w orbitalnym inkubatorze przy 120 obrotach/min w ciągu 30 minut. Stosując czysty roztwór korzeni i popłuczyny z korzeni, i koron z kolb, przygotowano roztwory w rozcieńczeniu 1:9 w sterylnym roztworze Ringera do rozcieńczenia 10. Następnie pod wielokrotnością 100 μ\ z każdego roztworu powlekano powierzchnię trzech mediów agarowych o następującym składzie:
Agar 1/10 soja tryptonowa
Brzeczka soi tryptonowej 3,0 g
Agar bakteriologiczny 17,5g
Woda dejonizowana 1000 ml (Środowisko utrzymywano w autoklawie w 121°C w ciągu 15 minut)
166 864
Agar z ekstraktu z korzeni
Świeże korzenie pszenicy 10 g
Agar nr 3 17,5 g
Woda dejonizowana 1000 ml (Świeże korzenie zważono i zmieszano z niewielką ilością dejonizowanej wody w mieszarce do żywności. Gęstą zawiesinę umieszczono wewnątrz torby o czterech warstwach muślinu o małym mesh. Torbę zawieszono w pozostałej ilości dejonizowanej wody w 2-litrowej zlewce i inkubowano w 20°C w ciągu 4 dni. Następnie muślinową torbę usunięto i do wyciągu z korzeni dodano agar. Środowisko utrzymywano w autoklawie w 121°C w ciągu 15 minut).
Agar z wyciągu z gleby
Próbka gleby 10 o
Agar nr 3 17,5 g
Dejonizowana woda 1000mi (Glebę zważono i umieszczono w dejonizowanej wodzie w 2-litrowej zlewce. Zawiesinę gleby przykryto i inkubowano w 22°C w ciąąu 4 dni, po czym odwodniono przez pocz,^(^ir^^ warstwę muślinu o małym mesh. Następnie dodano agar i środowisko utrzymywano w autoklawie w 121°C w ciągu 15 minut).
Dla każdego rozcieńczenia sporządzono trzy powtórzenia. Płytki agarowe inkubowano w 12°C w ciągu do pięciu dni, po których ilość kolonii na każdej płytce została obliczona i zarejestrowana. Tam gdzie to możliwe z każdej rośliny, wybranego miejsca i połączenia agaru wybrano płytkę zawierającą pięćdziesiąt lub mniejszą ilość kolonii. Gdy to nie było możliwe, na płytce narysowano siatkę z pięćdziesięciu przecięć i pobrano kolonie, które znajdowały się na lub w pobliżu każdego przecięcia. W ten sposób selekcja kolonii była całkowicie wyrywkowa.
Poszczególne kolonie wypikowano z płytek, stosując sterylną pętlę i poddano przeszczepianiu na płytkach Petriego o średnicy 5 cm, zawierających 1/10 agar z soi tryptonowej (1/10 TSA). Następnie płytki inkubowano w 12°C w ciągu 5 dni i sprawdzano izolaty pod względem czystości. Gdy hodowla była mieszana, izolat wcierano na pochyłość 1/10 TSA w celu uzyskania pojedynczej kolonii. Wybierano jedną kolonię i przeszczepiano na 1/10 TSA. Kolekcję hodowli przechowywano w 4°C.
Przykład II. Określenie cech charakterystycznych mikroorganizmu. Charakterystyki morfologiczne mikroorganizmu są następujące:
Morfologia komórki: pałeczki gram-ujemne,
Morfologia kolonii:
NCIB 40186: Odbielone, okrągłe, regularne, pełne, mało wypukłe, gładkie, błyszczące, półprzezroczyste, średnica 1,5-2 mm.
NCIB 40187: Odbielone, okrągłe, regularne, pełne, podniesione, gładkie, błyszczące, półprzezroczyste, średnica 1 mm.
NCIB 40188: Odbielone, okrągłe, regularne, pełne, mało wypukłe, gładkie, błyszczące, półprzezroczyste, średnica 1,5-2 mm.
NCIB 40190: Odbielone, okrągłe, regularne, pełne, płaskie, gładkie, błyszczące, półprzezroczyste, średnica 1 mm.
Temperatura wzrostu. Wszystkie szczepy 37°C +ve, 41°C -ve, 45°C -ve.
Fluorescencja - Wszystkie szczepy + ve,
Kataliza - Wszystkie szczepy + ve,
Oksydaza - Wszystkie szczepy + ve,
Fermentujące w glukozie OF - Wszystkie szczepy -ve.
166 864
Szybki test (API)
| NCIB 40186 | 40187 | 40188 | 40190 | |
| Redukcja azotanów | - | - | - | - |
| Wytwarzania indolu | - | - | - | - |
| Kwas z glukozy | - | - | - | - |
| Dehydrolaza argininy | + | + | + | + |
| Ureaza | - | - | - | - |
| Hydroliza aeskuliny | - | - | - | - |
| Hydroliza żelatyny | + | + | + | + |
| β-Galaktozydaza | - | - | - | - |
| Asymilacja glukozy | + | + | + | + |
| Asymilacja arabinozy | + | + | + | + |
| Asymilacja mannozy | + | + | + | + |
| Asymilacja mannitolu | + | + | + | + |
| Asymilacja N-acetyloglukozaminy | + | + | - | + |
| Asymilacja maltozy | - | - | - | + |
| Asymilacja glukonianu | + | + | + | + |
| Asymilacja kapronianu | + | + | + | + |
| Asymilacja adypinianu | - | - | - | + |
| Asymilacja jabłczanu | + | + | + | + |
| Asymilacja cytrynianu | + | + | + | + |
| Asymilacja fenylooctanu | - | - | - | + |
| Cytochromooksydaza | + | + | + | + |
Przykład III. Skrining wstępny.
Skrin płytki Petriego z glebą.
Płytki Petriego (5 cm) napełniano 10 ml agaru dekstrozy ziemniaczanej (PDA). Skosy agarowe siedmiodniowej kultury Pythium ultimum rosnące w temperaturze 20°C umieszczono centralnie na PDA. Płytki inkubowano 5 dni w temperaturze 20°C, przy czym P. ultimum wytwarzał kolonie na płytkach.
Piasek gliniasty Minster Mendip utrzymywano w autoklawie w temperaturze 120°C w czasie 60 min. Następnie dodawano kiełki pszenicy (1% wag/wag) i dokładnie mieszano. W celu pokrycia Pythium w każdej płytce umieszczano około 8 g gleby. Badane bakterie rosły na płytkach 1/10 TSB lub 1/0 TSA w czasie 48 h w temperaturze 12°C. Na każdą płytkę stosowano 2 ml kultury, przy czym płytki stosowano w dwóch powtórzeniach.
Obróbka: samo 1/10 TSB metalaksyl (100 ppm).
Badany organizm. 1/10 TSB dodano do gleby na PDA nie inokulowanej Pythium.
Płytki inkubowano w czasie 4 dni w 10°C. Aktywność obliczano w skali od zera do 3, na podstawie całkowitego zahamowania wzrostu grzybów w glebie.
Skrin ziemniaczany Fusarium.
Sterylny krążek filtracyjny (9 cm średnicy) nawilżano dokładnie wodą i umieszczano na podstawce sterylnej płytki Petriego.
Do każdej obróbki stosowano dwie płytki.
W celu wytworzenia kondidiów kultury Fusarium (Fusarium sambusinum, Fusarium culmorum i Fusarium moniliforme) wzrastały na agarze dekstrozy ziemniaczanej w czasie 14 dni w temperaturze 20°C w świetle. Następnie kondidia zawieszano w sterylnej solance i doprowadzano do transmitancji 20% na spektrofotometrze przy 420 nm.
Jedną połowę posiewu bakterii rosnącą na pożywce agarowej (Oxoid) w czasie 24 h w 20°C zawieszano w 2,5 ml sterylnej solanki. W próbie kontrolnej stosowano kaptan (N-trójchlorometyloczterohydroftaloimid) w ilości 2,0 g/l, a także samą solankę.
Zawiesinę Fusarium (50 μΐ) umieszczono w sterylnej mikrocentrofugowej probówce, przy czym stosowano jedną probówkę dla każdej próbki.
166 864
Jeden plasterek ziemniaka o grubości poniżej 10 mm, którego cztery ścianki obkrojono korkoborem o średnicy 10 mm umieszczono w każdej płytce Petriego. Powierzchnię plasterka ziemniaka sterylizowano etanolem i suszono sterylnym papierem filtracyjnym. Plasterki używano w czasie 30 minut od ścinania (lub 60 minut jeżeli były utrzymywane w temperaturze 4°C).
Próbkę 50 μΐ zawiesiny sporów Fusarium (106 kondidia/ml) umieszczono na trzech z czterech ścianek plasterka ziemniaka. Próbkę zawiesiny bakteryjnej (50 μΐ, około 108 komórek w 1 ml) mieszano z zawiesiną Fusarium na jednej z trzech ścianek, na drugiej stosowano benomyl w ilości 100 ppm, a trzecią ściankę użyto jako nieinkulowaną kontrolę.
Płytki Petriego zamykano wieczkami i inkubowano 3 dni w temperaturze 20°C.
Poziom zakażenia tkanek oceniano skalą ocen od 0 do 3.
Skriningowanie wobec Phoma betae.
Kawałki buraka cukrowego o wymiarach 2,5 X 2,5 X 1,5 mm wydzielono z wewnętrznej części korzenia i nawilżono około 13 ml sterylnej wody w plastikowym pojemniku.
Na powierzchnię naniesiono próbkę kultury Phoma beta z lub bez próbki mikroorganizmu przeciwgrzybowego i kawałki te inkubowano w czasie 3 tygodni. Pod koniec okresu inkubowania próbki buraka kładziono na korzeń.
Skrin burak cukrowy/gleba.
Glebę pochodzenia naturalnego, która wiadomo było, że powoduje (zgorzel) gnicie skutkiem nadmiaru wilgoci, doprowadzono do wilgotności 45%. Oczyszczone nasiona buraka cukrowego oraz nasiona pokryte badaną bakterią sadzono do gleby. Następnie próbki inkubowano w czasie 10 dni z 12-godzinnym cyklem naświetlania na dzień w temperaturze 15°C. Działanie przyciwgrzybowe bakterii oceniano na podstawie liczby wschodów, które pojawiały się w porównaniu z chemiczną kontrolną metodą Tachigaren/TMTD.
Przykład IV. Skrining drugi.
Do badania efektywności dwóch skrinów wyselekcjonowanych mikroorganizmów użyto: Pythium ultimum i Rhizoctonia solani.
Kultury P. ultimum i R. solani hodowano na płytkach PDA w czasie 7 dni w temperaturze 20°C.
Mieszaninę 200 g srebrzystego piasku, 5 g mąki kukurydzianej, 4 g kiełków pszenicy Beemax i 40 ml wody przetrzymywano w autoklawie w temperaturze 120°C w czasie 20 minut, po czym umieszczano w kolbie i inkulowano 1/4 płytki z Pythium. W przypadku Thizoctonia stosowano te same substraty lecz bez użycia mąki kukurydzianej.
Kolbę inkubowano w temperaturze 20°C w czasie 7 dni.
Serie rozcieńczeń. Zawartość każdej kolby z Pythium ultimum mieszano z miałkim piaskiem do uzyskania końcowego ciężaru wagowego 300 g. Jedna kolba z Pythium w 8 litrach gliniastego piasku Mendip Minster = 2 Normalności (2N).
Całość rozcieńczano czystym gliniastym piaskiem Mendip do uzyskania dalszych żądanych rozcieńczeń. Izolaty były zwyczajnie skrinowane przeciw Pythium przy N/8 i N/32 w temperaturze 12-15°C.
3/4 kolby inokulum Rhizoctonia solani w 6 litrach gliniastego piasku Mendip Minster = Normalne rozcieńczenie.
Do skrinowania użyto stężenia o N/4 i N/16.
Próbę prowadzono w 7,62 cm doniczkach. Doniczki napełniano do 3/4 zakażoną ziemią. Do każdej doniczki sadzono po 5 ziaren grochu i pokrywano czystą glebę. W celu namoczenia do każdej doniczki dodawano 35 ml wody lub zawiesiny bakteryjnej. W każdej obróbce stosowano doniczki w pięciu powtórzeniach. W skrinach BTC bakterie wzrastały w czasie 48 h w 20°C w 1/10 TSB. Do doniczek dodawano całość zawiesiny (35 ml). Kontrolę stanowiły zwykle 1/10 TSB i chemiczne. Do namoczenia dodawano Pencycuron w stężeniach 10, 100 i 200 ppm w przypadku skrinów Rhizoctonia i metalaksyl w stężeniu 100 ppm w przypadku skrinów Pythium.
Rośliny wzrastały w teście dla R. solani w czasie 7-10 dni w temperaturze 20-25°C, a dla Pytnium w temperaturze 12-15°C w czasie 14 dni. Wschodzenie siewek kontrolowano co tydzień. Rośliny codziennie nawadniano. Szczególną uwagę poświęcono zapewnieniu tego, by gleba utrzymywała wilgotność podczas testów, która w obydwu chorobach inicjowała gnicie skutkiem nadmiaru wilgoci (zgorzel).
166 864
PrzykładV. Badania skriningowe wobec Phytophthora megasperma.
Próbkę o średnicy 5 mm pobraną z hodowli płytkowej P. megasperma hodowano na płytce o średnicy 9 cm na podłożu V-8 w ciągu 13 dni w 25°C. Podłoże V-8 ma następujący skład:
Sok V-8 Campbell 180 ml
CaCOe 2,1 g
Woda destylowana 720 ml
Agar Difico 11,5g (składniki, poza agarem, zmieszano i ogrzewano przez 30 minut, przesączano, pH doprowadzono do 7,2, dodano agar i poddano podłoże sterylizacji w 120°C w ciągu 20 minut).
Nawilżone nasiona prosa (50 g + 20 ml wody destylowanej) sterylizowano dwukrotnie w 110°C przez 45 minut. 1/4 hodowli płytkowej P. megasperma umieszczono na powierzchni prosa i inkubowano w ciemności w ciągu 28 dni w 25°C.
22,5 g prosa zakażokego P. megasperma dokładnie vnimieszano za mieszainiku z 1477,14» jałowej ziemi i 112,5 g wody. Ziemia stanowiła mieszaninę 1:1:1 obj./obj. piasku („silver sand“), ziemi z pola o pH 7 i torfu, którą sterylizowano w 100°C w ciągu 1 godziny.
Do słoi Leonarda odważono 500 g mieszanki zakażonego prosa i ziemi, następnie przykryto je plastikowymi pokrywkami, aż dolny zbiornik wody słoi Leonarda wypełnił się 100 ml wody destylowanej.
W mieszance arasa/ziemia zrobiono 4 dołki, do każdego wysiano soję i przysypano otaczającą mieszanką.
Kultury badanego organizmu przygotowano prowadząc hodowlę na płytkach z podłożem agarowym w 28°C przez godziny i w 250 ml kolbach NB (150ml/NB) przez 24 godziny w 28°C. 75 ml próbkę hodowli wirowano przy 8000 obrotów na minutę w ciągu 5 minut w 20°C. Odrzucano superzatezt, dodano jeszcze 75 ml próbki, ponownie odwirowano i znów odrzucono suanrnatazt. Placek pozostały w probówkach wirówki kilkakrotnie przemyto 5 ml roztworu solanki (9,2 g/l). W końcu placek zdyspergowano tworząc zawiesinę w 150 ml solanki.
Do każdego ze słoi Leonarda wstrzyknięto 30 ml zawiesiny solankowej za pomocą 60 ml strzykawki.
Dla aarówzezie ze środkami chemicznymi do kontrolnych słoi Leonarda wstrzyknięto 30 ml próbki roztworu 285,5 g 35% metalaksylu (nazwa handlowa APRON) w 500 ml wody destylowanej.
Przeprowadzono także próby kontrolne stosując próbki zinzkkażozej mieszaniny prosa i ziemi.
Następnie wywołano wzrost nasion w komorze wzrostowej w 20±2°C przy oświetleniu 1517000 lux. Ocenę oparto na stopniu rozwoju w procentach w porówkniu z próbą kontrolną, w której stosowano środki chemiczne.
Przykład VI. Badania skaningowe pod względem aktywności wobec Fusarium culmorum.
Hodowlę Fusarium culmorum w PDA prowadzono przez 10 dni w 20°C aż do wytworzenia się kazidiów. IConidia zebrano i doprowadzono do stężeń w zakresie od 104 do 10e konidiów na ml. Do 100 g nasion pszenicy w butelce dodano 5 ml z tej kolonii, po czym wirowano przez noc w 10°C.
Próbkę zakażonych nasion przed wysianiem moczono w mieszaninie badanych bakterii i piasku przez 60 minut, aby uzyskać otoczkę około 10e komórek na ziarno. Drugą próbkę potraktowano 100 ppm benomylu jako kontrolnego środka chemicznego.
100 nasion wysiano do kompostu opartego na torfie na głębokość 2 cm, na tacy do sadzonek. Na początku próby kompost nawodniono, utrzymywano w 20°C przez 2 tygodnie i ponownie nawodniono 5-ego dnia po wysianiu. Po tym początkowym nawodnieniu w celu wywołania kiełkowania nasion, kompost pozostawiono do wyschnięcia, aby wywołać rozwój zakażenia.
Sadzonki oceniano pod względem rozwoju i stopnia rozwoju zakażenia. Objawy zakażenia określano według skali od zera (brak objawów) do 4 (poważne zakażenie).
Wyniki. Za pomocą opisanych powyżej testów poddano skaningowi około 7000 izolatów bakterii glebowych. Poniżej w tabeli 1 zestawiono wyniki tych testów. W kolumnach podano cyfry według skali od zera (brak działania arzeciwgrzybowega) do 3 (brak widocznych objawów zakażenia). W tabeli zamieszczono także przykład porównawczy z typowym, nieskutecznym szczepem bakteryjnym, oznaczonym jako 53/87.
166 864 Tabela 1
| Skrining wstępny NCIB | 40186 | 40187 | 40188 | 40190 | 53/87 |
| Fusarium culmorum | 1 | 2 | 0 | 2 | 1 |
| Fusarium moniliforme | 1 | 1 | 0 | 1 | 1 |
| Fusarium sambusinum | 0 | 1 | 0 | 0 | 1 |
| Pythium ultimum | 2 | 3 | 2 | 2 | 0 |
| Aphanomyces | 3 | 1 | 0 | 2 | 0 |
| Phoma betae | 2 | 0 | 3 | 1 | 0 |
| Burak cukrowy/ziemia | 3 | 2 | 2 | 3 | 0 |
| Skrining wtórny NCIB | 40186 | 40187 | 40188 | 40190 | 53/87 |
| Rhizoctonia solani | 0 | 3 | 3 | 0 | 0 |
| Pythium ultimum 15°C | 3 | 3 | 3 | 0 | 0 |
| Pythium ultimum 2,4°C | 3 | 2 | 2 | 2 | 0 |
| Fusarium culmorum | 2 | 2 | 2 | 2 | 0 |
| P. megasperma | 2 | 1 | 1 | 1 | 0 |
Próby polowe w 1989 r.
Do prób polowych jako biologiczne środki do zwalczania „gnicia na skutek nadmiernej wilgoci grochu i buraków cukrowych wybrano najbardziej obiecujące szczepy we wstępnych i wtórnych badaniach skriningowych.
Na figurze 1 przedstawiono wyniki otrzymane dla szczepu NCIB 40186 przy zwalczaniu „gnicia grochu w próbie przeprowadzonej w W. Brytanii. Uzyskano stopień zwalczenia wynoszący 80% zwalczenia za pomocą obróbki chemicznej metalaksylu (APRON). W próbie tej szczep NCIB 40187 był w znacznej części nieskuteczny.
Na figurze 2 i 3 przedstawiono wyniki prób polowych na buraku cukrowym z użyciem szczepów NCIB 40186 i 40190, przeprowadzone w Belgii. Wybrano sześć miejsc na polu. W trzech miejscach (1, 3 i 6) wysiano buraki cukrowe w marcu, a w pozostałych trzech w maju. Na fig. 2 przedstawiono wyniki pierwszej oceny, którą przeprowadzono w 3 tygodniu po wysianiu, a na fig. 3 wyniki uzyskane po 6-8 tygodniach po wysianiu.
Reasumując, z uzyskanych wyników widać, że „gnicie na skutek nadmiaru wilgoci grochu wywołane przez Pythium ultimum zmniejsza się przy zastosowaniu szczepu NCIB 40186 na poziomie porównywalnym z uzyskanym w wyniku działania chemicznego metalaksylem. Wyniki uzyskane dla buraka cukrowego wskazują na lepszy rozwój sadzonek we wszystkich sześciu miejscach przy użyciu szczepów NCIB 40186 i 40190 w porównaniu z próbami kontrolnymi nietraktowanymi. W trzech miejscach rozwój sadzonek w obecności szczepów był porównywalny do uzyskanego z użyciem metalaksylu.
Próby polowe w 1990 r.
W 1990 r. przeprowadzono próby polowe z mikroorganizmami NCIB 40186 i 40190 na zdolność hamowania przez nie Pythium spp. Próby przeprowadzono w USA, Belgii i Francji, a wyniki przedstawiono poniżej. W próbach w Europie stosowano mikroorganizmy na namoczonych nasionach, które następnie suszono w piasku, a w próbach w USA jako formulacja żywica/torf. Prowadzono też próby w innych częściach światła, gdzie „gnicie na skutek nadmiaru wilgoci ma charakter endemiczny, np. w uprawach warzyw w Malazji. Chociaż nie jesteśmy w stanie przedstawić wyników prób przeprowadzonych na świecie, ponieważ nie są jeszcze zakończone, a nie mogą być przyspieszone ze względu na sezonowe ograniczenia, to uzyskane początkowe wyniki są korzystne i przynajmniej te konkretne mikroorganizmy wykazują duży potencjałjako handlowe biologiczne środki kontroli. Dalsze badania innych wymienionych mikroorganizmów są prowadzone w laboratorium i w komorze wzrostu zgodnie z normalną praktyką badań na skuteczność i bezpieczeństwo dla człowieka i środowiska. Wyniki przekazywane na bieżąco potwierdzają właściwości znalezione wcześniej, o których w niniejszym opisie wspomniano.
166 864
Szczepy NCIB 40186 i 40190 badano na aktywność wobec „gnicia buraka cukrowego w próbach na dziewięciu poletkach w Belgii i we Francji. Podczas wysiewania wczesną wiosną było ciepło i sucho, co spowodowało pewne problemy w rozwoju „gnicia na skutek nadmiaru wilgoci buraka cukrowego.
Na każdym z badanych poletek wysiano 200 nasion. Do tej pory uzyskano wyniki z 9 prób.
Próby w Belgii i Francji w 1990 r.
Badana uprawa: burak cukrowy.
Zwalczanie chemiczne : tachigaren/TMTD.
| Nr próby | Liczba nasion, które wykiełkowały z 200 | ||||
| Próba kontrolna nietraktowana | Działanie chemiczne NCIB 40186 | NCIB 40190 | |||
| 1 | 93 | 125 | 130* | 114 | |
| 2 | 118 | 141* | 124 | 127 | |
| 3 | 118 | 157x | 146* | 138* | |
| 4 | 107 | 139* | 131* | 122* | |
| 5 | 120 | 150* | 128 | 130 | |
| 6 | 84 | 116* | 111* | 114* | |
| 7 | 135 | 153* | 143 | 138 | |
| 8 | 119 | 148* | 141 | 135 | |
| 9 | 134 | 155* | 144 | 144 |
x = LSD przy 5% prawdopodobieństwie.
Próby we Francji, 1990 r.
Badana uprawa: groch.
Zwalczanie chemiczne: jak przedstawiono poniżej.
Liczba roślin dotyczy średniej liczby roślin, które wykiełkowały na pasku o długości 5 m po 22 dniach po obróbce.
W kolumnie 2 w tabelach podano liczbę roślin, które wykiełkowały z 200 nasion po 22 dniach po wysianiu.
Litery po liczbach mają znaczenie statystyczne. Nie ma żadnej znacznej różnicy przy 5% poziomie prawdopodobieństwa pomiędzy pozycjami ze wspólnymi literami.
Działania kontrolne.
Testy przeprowadzono w glebie z pola, bez dodatku patogenów.
| Działanie | Liczba wykiełkowanych roślin |
| Nasiona nietraktowane | 172,58 AC |
| NCIB 40186-107 komórek na ziarno | 184,75 A |
| APRON - 30 g subst. czyn./100kg nasion | 171,50 AC |
| RIDOMIL 2E metalaksyl moczenie bruzdowe | 181,00 A |
| Czyste nasiona 100 komórek/ziarno | 176,00 AC |
Działania testowe.
Dodano patogen (Pythium) w ilości 200 g/m rzędu.
166 864
| Działanie | Liczba wykiełkowanych roślin |
| Nasiona nietraktowane | 111,25I |
| NCIB 40186-107 komórek na ziarno | 144,75 DG |
| APRON - 30 g subst. czyn./100 kg nasion | 157,25 BCDF |
| RIDOMIL 2E metalaksyl moczenie bruzdowe | 164,25 AD |
| Czyste nasiona 100 komórek/ziarno | 119,88 HI |
| Próby w Kalifornii (USA), 1990. | |
| Badana uprawa: groch. |
Badany patogen : Pythium 30 g/m rzędu.
Działanie % wykiełkowanych
| Nie dodano patogenu, nie traktowano | 93,13 AB |
| Patogen + NCIB 40186-107 komórek/ziarno | 75,31 BCD |
| Patogen + czyste nasiona-100 komórek/ziarno | 51,56 EF |
| Patogen + APRON-30 g subst. czyn./100 kg | 92,81 AB |
| Próby w Mississipi (USA), 1990. | |
| Badana uprawa : kukurydza. | |
| Badany patogen : Fusarium (i) 10g/m rzędu; (ii) 30 g/m rzędu. | |
| Kiełkowanie określono w % po 15 dniach po wysianiu. | |
| Działanie | % wykiełkowanych |
| Nie dodano patogenu, nie traktowano | 65,833 C |
| Nie dodano patogenu, | |
| NCIB 40186 107 komórek/ziarno | 67,917 C |
| Nie dodano patogenu, | |
| KAPTAN jako zaprawa nasienna | 69,853 BC |
| Patogen (i), bez obróbki | 51,250 D |
| Patogen (i) + | |
| NCIB 40186 107 komórek/ziarno | 80,000 AB |
| Patogen (ii), bez obróbki | 69,375 BC |
| Patogen (ii) + | |
| NCIB 40186 107 komórek/ziarno | 82,708 A |
| Patogen (ii) + | |
| KAPTAN jako zaprawa nasienna | 63,958 C |
Przykład VII. Zmieszano mieszaninę maltodekstryny i askorbinianu z kulturą komórek Pseudomonas fluorescens szczepu NCIB 40186. Mieszaninę wysuszono pod próżnią w cienkich warstwach, otrzymując ciało stałe o zawartości wilgoci mniejszej niż 5% wagowych. Po zmieleniu, kompozycja zawierała bardzo stężony (w przybliżeniu od 1do 2 X 1011 komórek na gram) proszek zawiesinowy, z początkową żywotnością około 20%.
Kompozycję przetestowano pod względem jej efektywności w zwalczaniu choroby grochu kiełkującego z ilastej gleby Minster zainfekowanej oosporą Pythium. Chemiczną próbę kontrolną z metalaksylem uwzględniono w celach porównawczych. Uzyskano następujące rezultaty:
166 864
| Działanie | Ilość kiełkujących nasion groszku z 25 posianych |
| Niezainfekowana próba kontrolna | 22 |
| Nietraktowana próba kontrolna | 8 |
| Świeże komórki | 23 |
| Proszek zawiesinowy | 19 |
| Metalaksyl | 24 |
Przykład VIII. Hodowano Pseudomonas fluorescens szczepu 40186 przez noc w 50ml kolbie do inokulacji i 30 ml tej hodowli posiano do 50 litrowej kadzi fermentacyjnej i kontynuowano fermentację do czasu, gdy hodowla weszła w fazę stacjonarną trzynaście godzin później. Komórki zebrano przez odwirowanie by odzyskać ciała stałe (nazywane dalej „thicks“): uzyskano w ten sposób 458 gramów produktu.
Do każdej porcji dodano niżej wymienione dodatki i mieszaninę dodatku i produktu liofilizowano przez wkroplenie ze strzykawki do ciekłego azotu. Za pomocą tej procedury otrzymywano pastylki zwane dalej „prills“. Określano żywotność komórek w każdej mieszance. Żywotność hodowli w różnych stadiach jej produkcji i kompozycji podsumowano w tabeli.
| Stadium | Żywotność | |
| Kolba wytrząsarki | 2,18 X 10® cfu/ml | |
| Kolba do posiewu | 1,18X10W cfu/ml | |
| Kadź fermentacyjna | 1,63 Χ 10^ cfu/ml | |
| „Thicks“ | 2,63 X 1011 cfu/g | |
| Proszek liofilizowany | Kompozycja 1 | 8,07 Χ101 cfu/g |
| Kompozycja 2 | 9,35 X 10w cfu/g | |
| Proszek liofilizowany | Próba kontrolna | 5,41 X 107 cfu/g |
| po 14 dniach przechowywania | Kompozycja 1 | 9,5 X 10® cfu/g |
| Kompozycja 2 | 2,1 X 1010 cfu/g | |
| Próba kontrolna | 1,02 Χ107 cfu/g |
(cfu - jednostka kolinizująca)
Kompozycje 1 i 2 zawierały askorbinian sodu, glicynę i sacharozę. W kompozycji 1 stosunek wagowy wynosił 5:10:25, a w kompozycji 2 stosunek wynosił 12:12:25.
W testach kompozycji przeprowadzonych na grochu posianym w ilastej glebie Minster zainfekowanej oosporą Pythium uzyskano następujące rezultaty.
| Działanie | Ilość kiełkujących nasion groszku z 25 posianych |
| Nietraktowana próba kontrolna | 9 |
| Kompozycja 1 | 19 |
| Kompozycja 2 | 19 |
| Metalaksyl | 23 |
Przykład IX. Szczep 40186 P. fluorescens przygotowano pod postacią 48 godzinnej hodowli w bulionie sojowym tryptone (TBS), który następnie odwirowano w celu utworzenia pastylki, po czym przygotowano kompozycje. Stosowano różne kompozycje, jak następuje:
166 864
Numer Składniki kompozycji (mg/fiolkę)
Sarkozyna 85 mg, PVP (M. Cz. 40000) 100 mg
Sarkozyna 85 mg, (M. Cz. 360000) 100 mg
Prolina 85 mg, PVP (M. Cz. 40000) 100 mg
Prolina 85 mg, PVP (M. Cz. 360000) 100 mg
GABA 85 mg, PVP (M. Cz. 40000) 100 mg
GABA 85 mg, PVP (M. Cz. 360000) 100 mg
TMAO 42,5 mg, Mocznik 42,5 mg, PVP (M. Cz. 40000) 100 mg
TMAO 42,5 mg, Mocznik 42,5 mg, PVP (M. Cz. 360000) 100 mg
Mocznik 10 mg, PVP (M. Cz. 40000) 100 mg
Mocznik 10 mg, PVP (M. Cz. 360000) 100 mg
Maltodekstryna 3500 mg, Askorbinian 40 mg
Glukoza 200 mg
Sarkozyna 85 mg, PPG (M. Cz. 3000) 100 mg
GABA = kwas gamma-aminomasłowy TMAO = tlenek trimetyloamoniowy PVP = pirolidon poliwinylowy PPG = glikol polipropylenowy
W celu liofilizacji zawieszono powtórnie 12 g pastylki w 120 ml 0,05 M roztworu bezwodnego siarczanu magnezu jako krioprotektora. Dodawano składniki kompozycji do fiolek liofilizacyjnych w ilościach wymienionych powyżej i mieszano z 2 ml zawiesiny bakteryjnej. Dla każdej kompozycji istniały cztery identyczne fiolki, z których dwie natychmiast umieszczano w liofilizatorze w temperaturze -30°C. Pozostałe dwie dozowano po kropli ze strzykawki do ciekłego azotu, a następnie umieszczano w liofilizatorze.
W liofilizatorze utrzymywano temperaturę -30°C przez 2 dni, po czym 0°C przez 3 dni, po czym podnoszono do 20°C na 2 godziny przed wyjęciem aby uniknąć kondensacji we fiolkach. Po wysuszeniu próbki zawieszano powtórnie w 10 ml sterylnej dejonizowanej wody przez wytrząsanie w wytrząsarce kołowej, ustawionej na 230 obrotów na minutę, przez 30 minut. Zawiesiny używano następnie w seriach o rozcieńczeniu 1:10 i posiewano na szalkach na pożywce agarowej soi tryptone, które inkubowano w 28°C przez 24 godziny zanim oznaczano liczebność kolonii. Badano wpływ kompozycji i liofilizacji na żywotność bakterii, a wyniki zebrano w tabeli.
| Numer mieszanki | Początkowa ilość komórek/próbkę | Masa suchej próbki | Jednostka kolonizująca/g | Ilość komórek/próbkę po wysuszeniu | % przeżycia |
| 1 | 5Χ1011 | 0,2 | 2,1 X10 | 4,27 X 1010 | 8,5 |
| 2 | 5X10 | 0,2 | 2,3 X10 | 4,65 Χ 10w | 9,3 |
| 3 | 5Χ10 | 0,2 | 8,5X 10 | 1,75 X10w | 3,5 |
| 4 | 5Χ10 | 0,2 | 1,3X10 | 2,74 X 10w | 5,5 |
| 5 | 5Χ10 | 0,2 | 1,6X 10 | 3,23 Χ ΙΟ” | 6,5 |
| 6 | 5Χ10” | 0,2 | 1,4X I011 | 2,94 X10w | 5,9 |
| 7 | 5Χ10 | 0,2 | 2,8 X w! | 5,82X1011 | 116,5 |
| 8 | 5Χ10” | 0,2 | 5,1 X 10w | 1,05 X 10w | 2,1 |
| 9 | 5Χ10 | 0,2 | 7,3 X10w | 1,·49 X10w | 3,0 |
| 10 | 5Χ1011 | 0,2 | 8,4X1010 | 1,73 X10w | 3,5 |
| 11 | 5Χ1011 | 0,4 | 3,5 X1°1° | 1,40X1010 | 5,6 |
| 12 | 5Χ1θ | 0,4 | 1,4X1012 | 5,75X1011 | 115,1 |
| 13 | 5X1011 | 0,2 | 8,1 X1010 | 1,67 X 1010 | 3,3 |
Przykład X. Kompozycje z przykładu IX powtórzono celem wykorzystania pod postacią form suszonych pod próżnią. Stosowano następujące składniki.
166 864
Numer Składniki kompozycji (mg/flolkę)
Sarkozyna 430 mg, PVP (M. Cz. 40000) 500 mg
Sarkozyna 430 mg, PVP (M. Cz. 360000) 500 mg
Prolina 430 mg, PVP (M. Cz. 40000) 500 mg
Prolina 430 mg, PVP (M. Cz. 360000) 500 mg
GABA 430 mg, PVP (M. Cz. 40000) 500 mg
GABA 430 mg, PVP (M. Cz. 360000) 500 mg
TMAO 210 mg, Mocznik 42,5 mg, PVP (M. Cz. 40000) 500 mg
TMAO 210 mg, Mocznik 42,5 mg, PVP (M. Cz. 360000) 500 mg
Mocznik 50 mg, PVP (M. Cz. 40000) 500 mg
Mocznik 50 mg, PVP (m. Cz. 360000) 500 mg
Maltodekstryna 1750 mg, Askorbinian 200 mg
Glukoza 500 mg
Sarkozyna 430 mg, PPG (M. Cz. 3000) 500 mg
GABA = kwas gamma-aminomasłowy TMAO = tlenek trimetyloamoniowy PVP = pirolidon poliwinylowy PPG = glikol polipropylenowy
W procesie suszenia pod próżnią do składników dodawana jest minimalna ilość cieczy. Dlatego ilości stosowanych dodatków są pięć razy większe niż w procesie liofilizacji (patrz przykład) i były zmieszane z 1 ml wody. Następnie dodawano pastylkę w ilości 1 g na próbkę. Nie dodawano siarczanu magnezu, jako że powodował rozwarstwienie kompozycji uniemożliwające skuteczne wymieszanie. Próbki suszono w suszarce próżniowej przez 36 godzin. Po wysuszeniu próbki zawieszano powtórnie w 10 ml sterylnej dejonizowanej wody przez wytrząsanie przez 30 minut w wytrząsarce kołowej ustawionej na 230 obrotów na minutę. Stosowano serie zawiesin rozcieńczonych w stosunku 1:10 i posianych na szalkach na pożywce afarowej soi tryptone, które inkubowano w 28°C przez 24 godziny zanim oznaczano liczebność kolonii. Badano wpływ kompozycji i liofilizacji na żywotność bakterii, a wyniki zebrano w tabeli.
| Numer mieszanki | Początkowa ilość komórek/próbkę | Masa suchej próbki | Jednostka kolonizująca/g | Ilość komórek/próbkę po wysuszeniu | % przeżycia |
| 1 | 2,5 X 1012 | 1,0 | 1,0X101’ | 1,05X 10” | 4,2 |
| 2 | 2,5 X10’2 | 1,0 | 9,7 X10w | 9,98 ΧΙΟ”0 | 4,0 |
| 3 | 2,5 Χ1012 | 1,0 | 2,3 X 10” | 2,33X10” | 9,3 |
| 4 | 2,5 X 10” | 1,0 | 2,6X10 | 2,64X10” | ”0,6 |
| 5 | 2,5 X 11)12 | 1,0 | 19XM),1 | 1,93X10” | 7,7 |
| 6 | 2,5 X 1012 | 1,0 | 1,6X 10” | 1,65X10” | 6,6 |
| 7 | 2,5 X10” | 1,0 | 8,2 X10w | 8,41 X 10” | 3,4 |
| 8 | 2,5 X 10” | 1,0 | 2,8X10” | 2,86X10” | 11,4 |
| 9 | 2,5 X 10” | 0,7 | 9,0 X 10” | 5,85X10” | 23,4 |
| 10 | 2,5 X10” | 0,7 | 2,1X10” | 1,38X10” | 5,5 |
| 11 | 2,5 X10” | 0,4 | 1,2X10” | 4,78X10” | 19,1 |
| 12 | 2,5 X 10” | 1,0 | 3,2X10” | 3,31X10” | 13,2 |
| 13 | 2,5 X 10” | 1,0 | 8,4 X 10” | 8,62 X 10”° | 3,4 |
Kompozycje nr 9 (mocznik/PVP) przetestowano na grochu posianym w glebę w dwu próbach polowych. Dla porównania włączono wyniki testów z metalaksylem oraz ze świeżymi komórkami nie w formie kompozycji.
166 §64
| Działanie | Ilość kiełkujących nasion groszku z 25 posianych | |
| Próba 1 | Próba 2 | |
| Nietraktowana próba kontrolna | 8 | 1 |
| Świeże komórki | 20 | 18 |
| Kompozycja nr 9 | 22 | 15 |
| Metalaksyl | 17 | 16 |
200
180
160
140
120
100
FIG.2 Próby połowę stan siewek (50% liczebności) i Bi apron
- S 40186
EZ2 4 0190
El kontrola
2 3 poletko o
V) o
c
-Q
R
O
ω
200
180
160
140
120
100
FIG 3 . . Próby połowę
H apron M 40186 E3 4oi90 E3 kontrola
3 4 5 6 poletko
FIG .1
Próby z pythium ilość siewek w rzędzie
HapronS wi86 □ 40187 □ kontrola
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 90 egz.
Cena 1,00 zł.
Claims (4)
- Zastrzeżenia patentowe1. Środek przeciwgrzybiczy, zawierający substancję czynną i znane substancje pomocnicze, znamienny tym, że jako substancję czynną zawiera drobnoustrój Pseudomonas fluorescens, zdeponowany 1 września 1989 zgodnie z Traktatem Budapeszteńskim w National Collection of Industrial and Marine Bacteria Limited, Aberdeen, Zjednoczone Królestwo, pod numerem przyjęcia 40186.
- 2. Środek przeciwgrzybiczy, zawierający substancję czynną i znane substancje pomocnicze, znamienny tym, że jako substancję czynną zawiera drobnoustrój Pseudomonas fluorescens, zdeponowany 1 września 1989 zgodnie z Traktatem Budapeszteńskim w National Collection of Industrial and Marine Bacteria Limited, Aberdeen, Zjednoczone Królestwo, pod numerem przyjęcia 40 187.
- 3. Środek przeciwgrzybiczy, zawierający substancję czynną i znane substancje pomocnicze, znamienny tym, że jako substancję czynną zawiera drobnoustrój Pseudomonas fluorescens, zdeponowany 1 września 1989 zgodnie z Traktatem Budapeszteńskim w National Collection of Industrial and Marine Bacteria Limited, Aberdeen, Zjednoczone Królestwo, pod numerem przyjęcia 40 188.
- 4. Środek przeciwgrzybiczy, zawierający substancję czynną i znane substancje pomocnicze, znamienny tym, że jako substancję czynną zawiera drobnoustrój Pseudomonas fluorescens, zdeponowany 1 września 1989 zgodnie z Traktatem Budapeszteńskim w National Collection of Industrial and Marine Bacteria Limited, Aberdeen, Zjednoczone Królestwo, pod numerem przyjęcia 40 190.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB898923407A GB8923407D0 (en) | 1989-10-17 | 1989-10-17 | Antifungal microorganism |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL166864B1 true PL166864B1 (pl) | 1995-06-30 |
Family
ID=10664731
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL90287369A PL166864B1 (pl) | 1989-10-17 | 1990-10-17 | Srodek przedwgrzybiczy PL PL PL PL PL PL PL PL |
| PL90302121A PL166131B1 (pl) | 1989-10-17 | 1990-10-17 | Sposób skriningowania potencjalnych srodków przeciwgrzybiczychPierwszenstwo: PL PL PL PL PL PL PL PL |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL90302121A PL166131B1 (pl) | 1989-10-17 | 1990-10-17 | Sposób skriningowania potencjalnych srodków przeciwgrzybiczychPierwszenstwo: PL PL PL PL PL PL PL PL |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5260302A (pl) |
| EP (1) | EP0496791B1 (pl) |
| JP (1) | JPH05501407A (pl) |
| AT (1) | ATE147580T1 (pl) |
| AU (1) | AU652132B2 (pl) |
| BG (1) | BG61671B1 (pl) |
| CZ (2) | CZ284829B6 (pl) |
| DE (1) | DE69029739T2 (pl) |
| DK (1) | DK0496791T3 (pl) |
| ES (1) | ES2095879T3 (pl) |
| FI (1) | FI102615B1 (pl) |
| GB (1) | GB8923407D0 (pl) |
| GR (1) | GR3022295T3 (pl) |
| HU (1) | HU214457B (pl) |
| MY (1) | MY107283A (pl) |
| NO (1) | NO302955B1 (pl) |
| NZ (1) | NZ235711A (pl) |
| PL (2) | PL166864B1 (pl) |
| RU (1) | RU2108038C1 (pl) |
| SK (1) | SK503590A3 (pl) |
| WO (1) | WO1991005475A1 (pl) |
| YU (1) | YU195990A (pl) |
| ZA (1) | ZA908268B (pl) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5639949A (en) * | 1990-08-20 | 1997-06-17 | Ciba-Geigy Corporation | Genes for the synthesis of antipathogenic substances |
| EP0472494A3 (en) * | 1990-08-20 | 1992-10-21 | Ciba Geigy Ag | Anti-pathogenic biocontrol agents, genes encoding antibiotics synthesis and the use of said antibiotics |
| US5662898A (en) * | 1990-08-20 | 1997-09-02 | Ciba-Geigy Corporation | Genes for the synthesis of antipathogenic substances |
| US5670350A (en) * | 1990-08-20 | 1997-09-23 | Novartis Finance Corporation | Genomic DNA encoding a pseudomonas global transcriptional activation element and its use in activating gene expression |
| KR0145740B1 (ko) * | 1991-05-23 | 1998-08-01 | 채영복 | 고정화 미생물 농약과 그의 제조방법 |
| US5348742A (en) * | 1991-05-24 | 1994-09-20 | Ciba-Geigy Corporation | Anti-pathogenic bacterial strains of Pseudomonas fluorescens |
| IT1248095B (it) * | 1991-06-20 | 1995-01-05 | Ministero Dell Uni E Della | Ceppi batterici di pseudomonas (ncimb 40403, ncimb 40376, ncimb 40375,ncimb 40377, ncimb 40402, ncimb 40379) in grado di controllare le infezioni fungine. |
| FI92790C (fi) * | 1991-11-19 | 1995-01-10 | Kemira Oy | Mikrobintorjuntamenetelmä |
| IT1254507B (it) * | 1992-03-06 | 1995-09-25 | Composizione per la confettatura di semi, semi confettati con tale composizione e relativo procedimento di confettatura | |
| GB9207352D0 (en) * | 1992-04-03 | 1992-05-13 | Ici Plc | Method to control fungal disease |
| US5614188A (en) * | 1993-10-06 | 1997-03-25 | Murakashi Lime Industry Co., Ltd. | Anti-fusarium composition containing strains of bacillus Sp., a chitin-containing material, and a powdery material |
| FI95598C (fi) * | 1994-01-31 | 1996-02-26 | Kemira Agro Oy | Mikro-organismi kasvitautien biologiseen torjuntaan |
| US6117670A (en) * | 1994-06-08 | 2000-09-12 | Novartis Finance Corporation | Pyrrolnitrin biosynthesis genes and uses thereof |
| IN186436B (pl) * | 1996-09-03 | 2001-09-01 | Council Scient Ind Res | |
| DE59805847D1 (de) * | 1998-12-24 | 2002-11-07 | Berg Gabriele | Rhizobakterienisolate zur Anwendung gegen phytopatogene Bodenpilze und Verfahren zur Anwendung der Rhizobakterienisolate |
| DE50014659D1 (de) * | 2000-01-04 | 2007-10-25 | Friedrich Felsenstein | Verfahren zur erkennung und charakterisierung von wirkstoffen gegen pflanzen-pathogene |
| WO2011154959A1 (en) * | 2010-06-09 | 2011-12-15 | Patel, Babubhai C. | Advance method of preparation of bacterial formulation using pseudomonas fluorescens for controlling various diseases of crop plant |
| RU2618873C2 (ru) * | 2010-10-25 | 2017-05-11 | Синтетик Дженомикс, Инк. | Способ высокоэффективного отбора микробных антагонистов против патогенов |
| JP6416865B2 (ja) * | 2013-03-14 | 2018-10-31 | ジョージア・ステイト・ユニバーシティ・リサーチ・ファウンデーション・インコーポレイテッドＧｅｏｒｇｉａ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ， Ｉｎｃ． | 真菌増殖の阻害または低減 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4456684A (en) * | 1982-09-08 | 1984-06-26 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Method for screening bacteria and application thereof for field control of diseases caused by Gaeumannomyces graminis |
| US4588584A (en) * | 1983-06-01 | 1986-05-13 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Medium for the isolation of Pseudomonas cepacia biotype from soil and the isolated biotype |
| US4647533A (en) * | 1984-09-14 | 1987-03-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Method for screening bacteria and application thereof for field control of Pythium spp. on small grain crops |
| US4798723A (en) * | 1986-07-28 | 1989-01-17 | Lubrizol Genetics, Inc. | Agricultural products from Pseudomonas cepacia strains and methods of preparation |
| US4996049A (en) * | 1988-12-19 | 1991-02-26 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Biological control of corn seed rot and seedling blight |
-
1989
- 1989-10-17 GB GB898923407A patent/GB8923407D0/en active Pending
-
1990
- 1990-10-16 WO PCT/GB1990/001598 patent/WO1991005475A1/en active IP Right Grant
- 1990-10-16 EP EP90915786A patent/EP0496791B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-10-16 JP JP2514815A patent/JPH05501407A/ja active Pending
- 1990-10-16 ZA ZA908268A patent/ZA908268B/xx unknown
- 1990-10-16 ES ES90915786T patent/ES2095879T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-10-16 NZ NZ235711A patent/NZ235711A/en unknown
- 1990-10-16 AT AT90915786T patent/ATE147580T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-10-16 AU AU66141/90A patent/AU652132B2/en not_active Ceased
- 1990-10-16 HU HU9201282A patent/HU214457B/hu not_active IP Right Cessation
- 1990-10-16 DK DK90915786.9T patent/DK0496791T3/da active
- 1990-10-16 MY MYPI90001811A patent/MY107283A/en unknown
- 1990-10-16 RU SU5011724A patent/RU2108038C1/ru active
- 1990-10-16 DE DE69029739T patent/DE69029739T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-10-17 SK SK5035-90A patent/SK503590A3/sk unknown
- 1990-10-17 PL PL90287369A patent/PL166864B1/pl unknown
- 1990-10-17 US US07/597,665 patent/US5260302A/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-10-17 PL PL90302121A patent/PL166131B1/pl unknown
- 1990-10-17 YU YU195990A patent/YU195990A/sh unknown
- 1990-10-17 CZ CZ941524A patent/CZ284829B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1990-10-17 CZ CS905035A patent/CZ284515B6/cs not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-04-15 NO NO921519A patent/NO302955B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-04-16 FI FI921722A patent/FI102615B1/fi active
- 1992-04-17 BG BG96249A patent/BG61671B1/bg unknown
-
1997
- 1997-01-16 GR GR960403583T patent/GR3022295T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL166864B1 (pl) | Srodek przedwgrzybiczy PL PL PL PL PL PL PL PL | |
| KR100840802B1 (ko) | 바실루스속 세균을 이용한 식물 병해의 방제 방법 및방제제 | |
| RU2127521C1 (ru) | Штамм актиномицета streptomyces lydicus для защиты растений от грибковой инфекции, композиция для защиты растений от грибковой инфекции (варианты), способ снижения чувствительности растения к грибковой инфекции (варианты) | |
| US5968503A (en) | Use of streptomyces bacteria to control plant pathogens and degrade turf thatch | |
| EP2255660B1 (en) | Biocontrol agent against soil-borne diseases | |
| CN100566574C (zh) | 用芽孢杆菌属细菌防治植物病害的方法和防治剂 | |
| EP0817567A1 (en) | Use of streptomyces bacteria to control plant pathogens and degrade turf thatch | |
| HU220582B1 (hu) | Készítmény és eljárás növénybetegségek elleni védelemhez | |
| RU2154381C2 (ru) | Штамм гриба nectria pityrodes montagne, используемый в качестве биофунгицида (варианты), биофунгицид, способ его получения (варианты), способ подавления грибковой инфекции у растений, метод скрининга фунгицидных микроорганизмов | |
| CN117448192A (zh) | 一株贝莱斯芽孢杆菌xu183及其应用 | |
| FI101631B (fi) | Cliocladium catenulatum -sienikannat kasvitautien biologiseen torjunta an | |
| Schofield et al. | THE INVOLVEMENT OF FUSARIUM SPP AND TOXINS IN THE ASPARAGUS REPLANT PROBLEM. | |
| EP0662934A1 (fr) | Microgranules utilisables en combinaison avec des inoculums bacteriens, leur obtention et leur application en agriculture | |
| CN118077691A (zh) | 一种高效土壤熏蒸剂及其在防治蔬菜土传病害中的应用 | |
| CA2066309A1 (en) | Antifungal microorganism | |
| North | Circle Pacific Asparagus Ltd. Dept of Plant Science Morley Road Massey University | |
| WO1993022922A1 (en) | Biological control of take-all | |
| MXPA96002967A (es) | Microorganismos para el control biologico de lasenfermedades de las plantas |