CZ284515B6 - Způsob vyhledávání potenciálních fungicidních prostředků - Google Patents
Způsob vyhledávání potenciálních fungicidních prostředků Download PDFInfo
- Publication number
- CZ284515B6 CZ284515B6 CS905035A CS503590A CZ284515B6 CZ 284515 B6 CZ284515 B6 CZ 284515B6 CS 905035 A CS905035 A CS 905035A CS 503590 A CS503590 A CS 503590A CZ 284515 B6 CZ284515 B6 CZ 284515B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- infection
- soil
- temperature
- test
- seed
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 title claims abstract description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 70
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims abstract description 52
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims abstract description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 19
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 18
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 18
- 241000233639 Pythium Species 0.000 claims abstract description 13
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000011161 development Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims abstract description 7
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 28
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 19
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 19
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 claims description 16
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 claims description 16
- 239000004576 sand Substances 0.000 claims description 16
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 claims description 13
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 claims description 13
- 241000918584 Pythium ultimum Species 0.000 claims description 13
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 claims description 9
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 9
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 8
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 8
- 238000009331 sowing Methods 0.000 claims description 8
- 241000223194 Fusarium culmorum Species 0.000 claims description 7
- 241000233624 Phytophthora megasperma Species 0.000 claims description 7
- 241000813090 Rhizoctonia solani Species 0.000 claims description 7
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims description 7
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 7
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 6
- 241000233732 Fusarium verticillioides Species 0.000 claims description 4
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 4
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 claims description 3
- 241001503951 Phoma Species 0.000 claims description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 3
- 241000172143 Aphanomyces cochlioides Species 0.000 claims description 2
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 claims description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 2
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 claims 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims 1
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 claims 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 claims 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract description 5
- 238000011835 investigation Methods 0.000 abstract description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 25
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 25
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 18
- ZQEIXNIJLIKNTD-UHFFFAOYSA-N methyl N-(2,6-dimethylphenyl)-N-(methoxyacetyl)alaninate Chemical compound COCC(=O)N(C(C)C(=O)OC)C1=C(C)C=CC=C1C ZQEIXNIJLIKNTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 10
- 239000005807 Metalaxyl Substances 0.000 description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 7
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 7
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 5
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 5
- 239000001965 potato dextrose agar Substances 0.000 description 5
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 4
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 4
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 4
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 4
- 239000002361 compost Substances 0.000 description 4
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 3
- 239000003415 peat Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- LDVVMCZRFWMZSG-OLQVQODUSA-N (3ar,7as)-2-(trichloromethylsulfanyl)-3a,4,7,7a-tetrahydroisoindole-1,3-dione Chemical compound C1C=CC[C@H]2C(=O)N(SC(Cl)(Cl)Cl)C(=O)[C@H]21 LDVVMCZRFWMZSG-OLQVQODUSA-N 0.000 description 2
- 239000005745 Captan Substances 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000975369 Phoma betae Species 0.000 description 2
- 241001361634 Rhizoctonia Species 0.000 description 2
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- RIOXQFHNBCKOKP-UHFFFAOYSA-N benomyl Chemical compound C1=CC=C2N(C(=O)NCCCC)C(NC(=O)OC)=NC2=C1 RIOXQFHNBCKOKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MITFXPHMIHQXPI-UHFFFAOYSA-N benzoxaprofen Natural products N=1C2=CC(C(C(O)=O)C)=CC=C2OC=1C1=CC=C(Cl)C=C1 MITFXPHMIHQXPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 2
- 229940117949 captan Drugs 0.000 description 2
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- KGVPNLBXJKTABS-UHFFFAOYSA-N hymexazol Chemical compound CC1=CC(O)=NO1 KGVPNLBXJKTABS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000013101 initial test Methods 0.000 description 2
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 2
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 2
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- KUAZQDVKQLNFPE-UHFFFAOYSA-N thiram Chemical compound CN(C)C(=S)SSC(=S)N(C)C KUAZQDVKQLNFPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 1
- 241001444083 Aphanomyces Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 235000021537 Beetroot Nutrition 0.000 description 1
- WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N Cichoriin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)c1c(O)cc2c(OC(=O)C=C2)c1 WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 241000219146 Gossypium Species 0.000 description 1
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 1
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 239000005814 Pencycuron Substances 0.000 description 1
- 241000233622 Phytophthora infestans Species 0.000 description 1
- 208000026062 Tissue disease Diseases 0.000 description 1
- IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N acetic acid phenyl ester Natural products CC(=O)OC1=CC=CC=C1 IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-L adipate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCCCC([O-])=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N benzopyrrole Natural products C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000007799 cork Substances 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-M decanoate Chemical compound CCCCCCCCCC([O-])=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 229940093496 esculin Drugs 0.000 description 1
- XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N esculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 1
- AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N esculin Natural products OC1OC(COc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O)C(O)C(O)C1O AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- OGYFATSSENRIKG-UHFFFAOYSA-N pencycuron Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1CN(C(=O)NC=1C=CC=CC=1)C1CCCC1 OGYFATSSENRIKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940049953 phenylacetate Drugs 0.000 description 1
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000000003 plant pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003334 potential effect Effects 0.000 description 1
- 238000004382 potting Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000002810 primary assay Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
- A01N63/27—Pseudomonas
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/38—Pseudomonas
- C12R2001/39—Pseudomonas fluorescens
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/874—Pseudomonas
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/874—Pseudomonas
- Y10S435/876—Pseudomonas fluorescens
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/929—Fusarium
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/939—Rhizopus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Způsob vyhledávání potenciálních fungicidních prostředků, spočívá v tom, že se testuje inhibiční účinek potenciálního fungicidního prostředku ve dvou testech, přičemž první test je na inhibici vývinu pathogenu ve sterilisované půdě infikované myceliem Pythium spp. a druhý test je dále na inhibici vývinu choroby v rostoucí rostlině náchylné k onemocnění vyvolanému přítomností komplexu způsobujícího vadnutí klíčících rostlin. Prostředky, které mají potenciální inhibiční účinek v obou testech ve srovnání s kontrolou identifikují se a podrobí dalšímu zkoumání.
ŕ
Description
Vynález se týká způsobu vyhledávání potenciálních fungicidních prostředků provedením dvou testů.
Dosavadní stav techniky
V mikrobiologické praxi je obvyklé vyhledávat mikroorganismy mající zajímavé vlastnosti zkoumáním velkého počtu, obvykle mnoha tisíc, organismů z půdy na jejich účinek významný pro zamýšlené použití. Jedním takovým použitím je isolace biologicky účinných prostředků, které jsou účinné proti vybraným druhům rostlinných pathogenů. Tyto biologicky účinné prostředky lze používat jako alternativní nebo doplňující prostředky k chemickým prostředkům pro hubení pathogenů.
V běžné praxi se odebírají vzorky půdy z míst, kde se požadovaný pathogen zdá být potlačen, což může znamenat, že sám tento mikroorganismus může v půdě inhibovat pathogenicitu. Z jednotlivých vzorků se potom v laboratoři isolují tyto mikroorganismy vymýváním z kořenů a nechají se růst na agaru při jedné nebo dvou teplotách optimálních pro mikrobiologický růst, obvykle od 25 do 30 °C. Tyto organismy se potom testují nejprve proti různým pathogenům na agaru v sérii Petriho misek za použití metody dvojí kultury. Toto je primární zkoušení. Nadějné organismy z tohoto primárního zkoušení se potom podrobí důkladnějšímu zkoumání v sérii sekundárního zkoušení za použití půdy.
Podle zkušeností autorů tohoto vynálezu organismy, které nakonec projdou dalšími testy a polními pokusy, nevykazují při prvním zkoušení ani příslušnou ani dostatečnou selektivitu. Obvyklé primární zkoušení propustí velký počet organismů (obvykle okolo 20 %), které se zdají být nadějnými, ale většina z nich je potom v následujících testech zavržena. Kromě tohoto je nyní autorům tohoto vynálezu známo, že při primárním zkoušení projdou kromě organismů, které se následně ukáží jako nepoužitelné, také určité organismy, které jsou zcela schopné projít dalšími následnými testy. Výsledkem toho je, že tradiční testy propouštějí organismy, které jsou slabými inhibitory pathogenicity a nepropouštějí organismy, které jsou dobrými inhibitory pathogenicity.
Je tedy třeba najít nový způsob vyhledávání organismů z půdy, aby byl nalezen velký počet potenciálně dobrých organismů a aby byly vyloučeny pokud možno nejvíce látky se špatným účinkem.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je tedy způsob vyhledávání potenciálních fungicidních prostředků, který spočívá podle vynálezu vtom, že se testuje inhibiční účinek potenciálního fungicidního prostředku ve dvou testech, přičemž první test je na inhibici vývinu pathogenů ve sterilisované půdě infikované myceliem Pythium spp. a druhý test je dále na inhibici vývinu choroby v rostoucí rostlině náchylné k onemocnění vyvolanému přítomností komplexu způsobujícího vadnutí klíčících rostlin, načež se prostředky mající potenciální inhibiční účinek v obou testech ve srovnání s kontrolou identifikují a podrobí se dalšímu zkoumání.
Předložený vynález je použitelný zvláště, i když ne výlučně, pro testování mikroorganismů ze vzorků půdy na jejich možný biologický účinek, ale není žádný zvláštní důvod ktomu, aby
-1 CZ 284515 B6 tentýž postup podle vynálezu nemohl být použit pro chemické prostředky, aniž by byl jakkoliv upravován.
Jak již bylo uvedeno výše, tradiční způsob isolace mikroorganismů není sám o sobě selektivní: předložený vynález proto také poskytuje způsob předběžného testování mikroorganismů isolovaných ze vzorků půdy, který spočívá vtom, že se do uzavíratelné nádoby umístí vrstva vlhkého sterilního písku a na ni se umístí vlhký vzorek půdy a do vzorku půdy se zaseje semeno rostliny náchylné k určitému onemocnění, nádoba se uzavře a umístí se do takového prostředí, které způsobuje vývin choroby, semeno se nechá vyklíčit a kořeny se nechají prorůst z vrstvy půdy do vrstvy písku, vyřízne se tunel podélně oběma vrstvami, vyberou se kořeny pouze z vrstvy písku a z těchto kořenů se isolují mikroorganismy.
Prostředky chemické nebo mikrobiologické, které prošly dvěma výše popsanými testy podle vynálezu, mohou být potom dále zkoumány na inhibiční účinek proti plísňové infekci v jednom nebo ve více než jednom testu, které zahrnují:
a) infekci cukrové řepy organismem Aphanomyces cochlioides při teplotě od 12 do 15 °C,
b) infekci hrachu organismem Pythium ultimum při teplotě od 12 do 15 °C,
c) infekci hrachu organismem Pythium ultimum při teplotě od 24 do 27 °C,
d) infekci hrachu organismem Rhizoctonia solani při teplotě od 24 do 27 °C,
e) infekci pšenice organismem Fusarium culmorum při teplotě od 18 do 21 °C,
f) infekci sojového bobu organismem Phytophthora megasperma při teplotě od 20 do 24 °C,
g) infekci řezu bramboru organismem Fusarium moniliforme při teplotě od 20 do 24 °C,
h) infekci řezu bramboru organismem Fusarium sambusinum při teplotě od 20 do 24 °C a
i) infekci cukrové řepy organismem Phoma spp. při teplotě od 15 do 19 °C.
Takto lze při využití všech složek vynálezu isolovat potenciální biologicky účinné prostředky způsobem, který je určen jen pro získávání aktivních organismů z kořenů, jejich zkoušením ve dvou počátečních testech, kterými se identifikují organismy s vysokou potenciální aktivitou a ty se potom podrobí sériím přísných testů, kterými se identifikují prostředky, u kterých se pak při testování za nejrůznějších polních podmínek dokáže jejich vysoká účinnost. Toto představuje oproti známým způsobům, jak jsou výše uvedeny, značný pokrok, neboť známými způsoby by byly odmítnuty organismy, které prošly testy podle vynálezu a naopak jimi prošla řada organismů, které se testy podle vynálezu ukázaly jako většinou neúčinné nebo méně účinné než kontrola.
Způsobem podle vynálezu byly isolovány čtyři mikroorganismy, které se ukázaly být obzvláště účinné proti různým plísňovým onemocněním, obvykle doprovázeným vadnutím.,
Pro případ zkoušení účinnosti podle vynálezu byla použita tradiční metoda in vitro, kterou bylo testováno asi 7 000 organismů, a bylo zjištěno, že touto metodou prošlo asi 20 % organismů, zatímco způsobem podle vynálezu prošlo pouze 4 až 5 % organismů. Důležité je, že soubor organismů, které prošly každým z minimálně dvou testů podle vynálezu, je velmi stejnoměrný, zatímco tradičním agarovým testem prošel zcela různorodý soubor organismů. Některé z organismů, které by třeba byly odmítnuty tradiční vyhledávací metodou, vykázaly v následujících vyhledávacích testech a v polních pokusech vysokou účinnost. Toto je základní výhoda předloženého vynálezu: počátečním vyhledáváním se sníží celkový počet organismů, které vyžadují další testování a velká část těch, které byly vybrány pro další testování, vykázala potom požadovaný účinek při polních testech. Předpokládá se, že důvod tohoto je následující. Parametry testování, například teplota a nutriční složení, jsou u tradiční metody optimalisovány, aby se podpořil růst mikroorganismu v agaru. Tato potrava je velmi rozdílná od skutečné potravy v drsném životním prostředí za podmínek, ve kterých se má mikroorganismus připravovat. Proto mnohé z mikroorganismů, které přežijí tyto počáteční testy, jsou obvykle slabé a jsou schopné pouze přežití v uzavřeném prostředí agarové kultury a následně selžou, protože přísnější druhé a další testy
-2CZ 284515 B6 jsou mnohem více přibližné skutečnému polnímu prostředí. Na druhé straně v souboru organismů existují, a zkušenosti autorů tohoto vynálezu to potvrzují, kmeny mikroorganismů, které dávají přednost polním podmínkám, například nízkým teplotám nebo potravě méně bohaté nebo různého složení. Tyto mikroorganismy nerostou dobře v agarovém testu a normálně by byly odmítnuty. Bylo tak zjištěno, že dvojí testování, které je podstatou tohoto vynálezu, zaručuje testovací podmínky bližší polním podmínkám a poskytuje tak realističtější náznak schopnosti mikroorganismu prospívat v prostředí, ve kterém by měl být používán.
Nyní následuje popis isolace, charakteristiky a testování bakteriálních organismů na účinek proti některým plísním, které infikují sklizňové plodiny. Byl isolován velmi velký počet mikroorganismů, identifikován a testován výše uvedeným způsobem.
Isolace mikroorganismů
Připraví se trubice z dialysační trubice dlouhá 35 cm a široká 5,5 cm s uzávěrem 5 až 7 cm od jednoho konce. Jemný písek se promyje, vysuší a nasype se do trubice do hloubky 12 cm a zvlhčí se 20 ml destilované vody. Trubice s pískem se pro podepření uloží dovnitř skleněných zkumavek (7 cm v průměru a 30 cm dlouhých). Trubice se potom uzavřou u dna gumovou zátkou pokrytou hliníkovou fólií a navrchu zátkou z vaty a potom se zabalí do hliníkové fólie. Celá sestava se autoklávuje dvakrát při 121 °C po dobu 60 minut.
Vzorek půdy se odebere z určené strany půdy a dva dny po odebrání se udržuje při 4 °C na 40 % vlhkosti. Vzorek půdy se přesije sítem 4 mm a přidá se do trubice na povrch písku do hloubky 3 cm. Zasadí se semeno (hrách, pšenice, cukrová řepa, slunečnice, kukuřice nebo sója) a přikryje se půdou na celkovou hloubku 6 cm. Trubice se potom postaví kolmo do drátěného koše, který se pak umístí do plastikového kontejneru s otvory, které umožňují výměnu vzduchu, přičemž tento kontejner minimalisuje ztráty z odpařování. Koše se potom umístí do růstové skříně a inkubují se čtyři týdny při teplotách 10 °C až 24 °C a 70% vlhkosti s cyklem 16 hodin den / 8 hodin noc.
Po čtyřtýdenní inkubaci se plastické dialysační trubice rozříznou předem sterilisovaným skalpelem. Z půdy a písku se vytrhávají kořeny každé rostliny a rostlina se umístí na bílou plastickou misku. Vrcholové části rostliny se rozřežou a promyjí odděleně ve sterilní vodě.
Rozřezané části se umístí do sterilních Erlenmeyerových baněk obsahujících 20 ml deionisované vody a vrstvu skleněných kuliček. Baňky se potom třepou v orbitálním inkubátoru při 120 otáčkách za minutu po dobu 30 minut. Za použití neředěného roztoku z kořenů a promývacích roztoků z kořenů a vrcholků rostlin z baněk se připraví zředění 1 :9 ve sterilním Ringerově roztoku na zředění 10“3. Alikvotní část 100 μΐ z každého roztoku se potom rozprostře na povrchy tří agarových médií, majících následující složení:
1/10 trypton sojový agar trypton sojový bujón 3,0 g bakteriologický agar 17,5 g deionisovaná voda 1000 ml (prostředí se autoklávuje 15 minut při 121 °C) agar s kořenovým extraktem čerstvé pšeničné kořínky agar č. 3 deionisovaná voda
10g
17,5 g
1000 ml
-3 CZ 284515 B6 (čerstvé kořínky se naváží a smísí s malým množstvím deionisované vody v mixéru. Hustá suspenze se potom umístí do váčku ze čtyř vrstev hustého mušelínu a ten se potom suspenduje ve zbývající deionisované vodě ve dvoulitrové kádince a inkubuje se 4 dny při 20 °C. Mušelínový váček se potom odstraní a ke kořenovému extraktu se přidá agar. Prostředí se potom autoklávuje 15 minut při 121 °C).
Agar s extraktem z půdy vzorek půdy 10 g agar č. 3 17,5 g deionisovaná voda 1000 ml (Půda se naváží a umístí se do deionisované vody ve dvoulitrové kádince. Suspenze půdy se přikryje a inkubuje se 4 dny při 20 °C, načež se odsaje přes čtyřnásobnou vrstvu hustého mušelínu. Potom se přidá agar a prostředí se autoklávuje 15 minut při 121 °C).
Pro každé ředění jsou tři opakování. Agarové misky se inkubují při 12 °C až do 5 dnů, načež se spočte počet kolonií na každé misce a zapíše se. Kde to je možné, vybere se miska, která obsahuje padesát nebo méně kolonií. Kde to není možné, udělá se na misce mřížka z padesáti průsečíků a vyberou se kolonie, které jsou na každém průsečíku nebo nejblíže k němu. Takto je selekce kolonií zcela náhodná.
Jednotlivé kolonie se stáhnou z misky použitím sterilního očka a kultivují se na Petriho miskách o průměru 5 cm obsahujících 1/10 trypton sojový agar (110 TSA). Misky se potom inkubují 5 dnů při 12 °C. Organismy se potom zkontrolují na čistotu. Kde byla smíšená kultura, organismus se naočkuje na šikmý 1/10 trypton sojový agar, aby se získaly jednotlivé kolonie. Jedna kolonie se vybere a pěstuje se ve vedlejší kultuře na 1/10 trypton sojovém agaru. Sbírka kultur se skladuje při 4 °C.
Charakteristika mikroorganismů
Morfologie
Morfologické charakteristiky mikroorganismů jsou následující:
Morfologie buněk: gram-negativní tyčinkové bakterie
Morfologie kolonie:
NCIB 40 186: špinavě bílé, kulové, pravidelné, neporušené, mírně konvexní, hladké, lesklé, poloprůhledné, průměr 1,5 až 2 mm.
NCIB 40 187 : špinavě bílé, kulové, pravidelné, neporušené, vypouklé, hladké, lesklé, poloprůhledné, průměr 1 mm.
NCIB 40 188 : špinavě bílé, kulové, pravidelné, neporušené, mírně konvexní, hladké, lesklé, poloprůhledné, průměr 1,5 až 2 mm.
NCIB 40 190 : špinavě bílé, kulové, pravidelné, neporušené, ploché, hladké, lesklé, poloprůhledné, průměr 1 mm.
Teplota růstu:
všechny kmeny 37 °C +ve °C -ve
45°C -ve
Fluorescence Katalasa Oxidasa Fermentace v glukose OF všechny kmeny +ve všechny kmeny +ve všechny kmeny +ve všechny kmeny -ve
-4CZ 284515 B6
Rychlý test (API)
| NCIB | 40186 | 40187 | 40188 | 40190 |
| redukce nitrátů | - | - | - | - |
| produkce indolu | - | - | - | - |
| kyselina z glukosy | - | - | - | - |
| arginin dehydrolasa | + | + | + | + |
| ureasa | - | - | - | - |
| hydrolysa eskulinu | - | - | - | - |
| hydrolysa želatiny | + | + | + | + |
| β-galaktosidasa | - | - | - | - |
| asimilace glukosy | + | + | + | + |
| asimilace arabinosy | + | + | + | + |
| asimilace manosy | + | + | + | + |
| asimilace mannitu | + | + | + | + |
| asimilace N-acetyl- | ||||
| glukosaminu | + | + | - | + |
| asimilace maltosy | - | - | - | + |
| asimilace glukonátu | + | + | + | + |
| asimilace kaprinátu | + | + | + | + |
| asimilace adipátu | - | - | - | + |
| asimilace malátu | + | + | + | + |
| asimilace citrátu | + | + | + | + |
| asimilace fenylacetátu | - | - | - | + |
| cytochromoxidasa | + | + | + | + |
Primární zkoušení
Půdní test na Petriho miskách
Petriho misky (5 cm) se naplní 10 ml agaru s bramborovou dextrosou (PDA). Na tento agar se do středu umístí agarová zátka (5 mm) ze 7 dní staré kultury Pythium ultimum rostoucí při 20 °C. Misky se inkubují 5 dnů při 20 °C, během nichž se na misce vytvoří kolonie P. ultimum.
Minster Mendip půda se autoklávuje 60 minut při 120 °C. Do této půdy se dají pšeničné klíčky (1 % hmotn./hmotn.) a dobře se promíchá. Přibližně 8 g půdy se umístí do každé Petriho misky a překryje sejí vzrostlé Pythium.
Testované bakterie rostou na 1/10 TSB nebo na 1/10 TSA deskách 48 hodin při 12 °C.
Na každou Petriho misku se aplikují 2 ml kultury: připraví se duplikátní desky.
| Zkoušení: | 1/10 TSB samotný metalaxyl (100 ppm) testovaný organismus 1/10 TSB přidaný k půdě na agaru s bramborovou dextrosou nenaočkované organismem Pythium Desky se inkubují 4 dny při 10 °C. Účinek vyjádřený ve stupnici od 0 do 3 se stanoví na základě úplné ínhibice |
růstu plísně v půdě.
-5CZ 284515 B6
Test na plíseň bramborovou
Sterilní kotouč z filtračního papíru (průměr 9 cm) se důkladně zvlhčí vodou a umístí se na dno sterilní Petriho misky. Pro každý pokus se připraví dvě misky.
Kultury Fusarium (Fusarium sambusinum, Fusarium culmorum a Fusarium moniliforme) se nechají růst na agaru s bramborovou dextrosou 14 dnů při 20 °C na světle, čímž se vyprodukují konidie. Konidie se potom suspendují ve sterilním solném roztoku (0,85%) a upraví se na 20% transmitanci na spektrofotometru při 420 nm.
Polovina očka bakterie rostoucí na výživném agaru (Oxoid) 24 hodin při 20 °C se suspenduje v 2,5 ml sterilního solného roztoku. Jako kontrola se připraví captan v koncentraci 2,0 g/1. Jako kontrola se také použije samotný solný roztok.
Suspenze kultury Fusarium (50 μΐ) se umístí do sterilní zkumavky mikrocentrifugy, jedna zkumavka pro každý pokus.
Do každé Petriho misky se umístí jeden plátek bramboru tenčí než 10 mm, do kterého se korkovrtem o průměru 10 mm vyříznou 4 otvory. Povrch bramborového plátku se sterilisuje ethanolem a vysuší se sterilním filtračním papírem. Plátky se užívají v průběhu 30 minut od řezání (nebo 60 minut, jestliže jsou uchovávány při 4 °C).
Do tří ze čtyř otvorů v bramborovém plátku se umístí 50 μΐ vzorek suspenze spor Fusarium (106 konidií na 1 ml). V jednom ze třech otvorů se smísí vzorek bakteriální suspenze (50 μΐ, přibližně 108 buněk na 1 ml) se suspensí Fusarium, do dalšího se přidá benomyl v množství 100 ppm a třetí otvor slouží jako nenaočkovaná kontrola.
Petriho misky se uzavřou víčky a inkubují se 3 dny při 20 °C.
Stupeň onemocnění tkáně se vyhodnotí stupnicí od 0 do 3.
Testování na Phoma betae
Z vnitřku bulvy cukrové řepy se vyříznou kousky o velikosti 2,5 x 2,5 x 1,5 mm a zvlhčí se asi 13 ml sterilní vody v plastikové nádobě.
Povrch kousků cukrové řepy se zahrne vzorkem kultury Phoma betae se vzorkem předpokládaného fungicidního mikroorganismu nebo bez něho a kousky řepy se inkubují 3 týdny.
Ke konci inkubační periody se vzorky řepy vyhodnotí na přítomnost hniloby.
Půdní testování s cukrovou řepou
Přírodní půda, která je známá tím, že způsobuje vadnutí cukrové řepy, se zvlhčí na vlhkost 45 %. Do půdy se zašijí semena neošetřené cukrové řepy a semena potažená testovanými bakteriemi. Vzorky se potom inkubují 10 dnů při 15 °C za 12hodinového denního osvětlování. Fungicidní účinnost bakterií se vyhodnotí na basi počtu vzešlých semenáčků ve srovnání s chemickým ošetřením tachigarenem (TMTD).
Druhé testování
Pro testování účinnosti vybraných mikroorganismů se použijí dva organismy: Pythium ultimum a Rhizoctonia solani.
-6CZ 284515 B6
Kultury P. ultimum a R. solani se pěstují na agarových deskách s bramborovou dextrosou po dobu 7 dnů pří 20 °C.
Směs 200 g stříbřitého písku, 5 g kukuřičné mouky, 4 g pšeničných klíčků Beemax a 40 ml vody se autoklávuje 20 minut při 120 °C, potom se umístí do baňky a inokuluje se čtvrtinou desky Pythium. Pro Rhizoctonia se použije tentýž substrát, ale bez kukuřičné mouky.
Baňky se inkubují 7 dnů při 20 °C.
Zřeďovací série
Obsahy každé baňky s Pythium ultimum se smísí s jemným pískem na konečnou hmotnost 300 g.
Jedna baňka Pythium v 8 litrech hlinitopísčité půdy Mendip Minster = 2 normální (2 N).
Tuto půdu lze ředit čistou hlinitopísčitou půdou Mendip na další požadovaná zředění. Organismy se obvykle testují na Pythium při zředění N/8 a N/32 při 12 až 15 °C.
3/4 baňky inokula Rhizoctonia solani v 6 litrech hlinitopísčité půdy Mendip Minster = normální. Pro testování se používají kor.centrace N/4 a N/16.
Pokus se provádí v květináčích o průměru 7,62 cm, přičemž květináče se naplní ze tří čtvrtin infikovanou půdou. Do každého květináče se zaseje 5 hrachů a překryjí se čistou půdou. Přidá se 35 ml vody nebo bakteriální suspenze jako zálivka pro každý květináč. Pro každé ošetření se připraví pět dvojic květináčů. Při testech biologicky účinných prostředků rostou bakterie 48 hodin při 20 °C v 1/10 TSB. Ke květináčům se přidá celá suspenze (35 ml). Jako kontroly slouží obvykle 1/10 TSB a chemický prostředek. U testů na Rhizoctonia se jako zálivka přidá Pencycuron v koncentracích 10, 100 nebo 200 ppm a na Pythium se jako zálivka použije metalaxyl v koncentraci 100 ppm.
Rostliny se nechají růst u testu na R. solani 7 až 14 dnů při 20 až 25 °C a na Pythium 14 dnů při 12 až 15 °C. Vzcházení rostlinek se monitoruje týdně. Rostliny se denně zalévají vodou. Zvláštní péče byla věnována tomu, aby byla půda během testů udržována vlhká, protože obě choroby mají sklon způsobovat uvadání rostlin.
Testování na Phytophthora megasperma
Kotouček z kultury P. megasperma o průměru 5 mm se umístí na misku o průměru 9 cm na médium V-8 na dobu 13 dnů při 25 °C. Médium V-8 má následující složení:
V-8 Campbellova šťáva 180 ml
CaCO3 2,7 g destilovaná voda 720 ml
Difco agar 13,5 g (Složky kromě agaru se smísí a prohřívají se 30 minut parou, přefiltrují se, pH se upraví na 7,2, přidá se agar a médium se sterilisuje 20 minut při 120 °C).
Vlhké proso (50 g + 20 ml destilované vody) se sterilisuje dvakrát 45 minut při 110 °C. Čtvrtina desky P. megasperma se položí dnem vzhůru na povrch prosa a inkubuje se ve tmě 28 dnů při 25 °C.
Proso infikované P. megasperma (o hmotnosti 22,5 g) se pečlivě v mixéru promísí se sterilisovanou půdou (1 477,5 g) a vodou (112,5 g). Jako půda se použije směs 1:1:1 Obj./obj. stříbřitého písku, polní půdy o pH 7 a rašeliny, která byla sterilisována 1 hodinu při 100 °C.
Do Leonardových nádob se naváží 500 g infikovaného prosa a půdní směsi a nádoby se potom přikryjí plastickými uzávěry až do zpracovávání. Dno vodní nádržky Leonardových nádob se naplní 100 ml destilované vody.
Na povrchu prosa a směsi půdy se utvoří čtyři jamky pro rostliny a do každé se zasadí sojový bob (c.v. Azzurra) a překryje se okolní směsí.
Kultury testovaného organismu se připraví na deskách s živným agarem kultivovaných 24 hodin při 28 °C a v 250 ml NB baňkách (150 ml NB) kultivovaných 24 hodin při 28 °C. Vzorek 75 ml kultury se centrifuguje 5 minut při 8 000 otáčkách za minutu při 20 °C. Supematant se vyhodí, přidá se další 75 ml vzorek, centrifuguje se a supematant se opět vyhodí. Usazenina zbylá ve zkumavce v centrifuze se opakovaně promývá 5 ml dávkami solného roztoku (9,2 g/1). Nakonec se usazenina disperguje do suspenze ve 150 ml solného roztoku.
Do každé Leonardovy nádoby se 60 ml stříkačkou injikuje 30 ml solné suspenze.
Pro srovnání s chemickými prostředky se do Leonardových nádob jako kontrola injikují 30 ml vzorky roztoku 285,5 g metalaxylu 35 % (obchodní značka APRON) v 500 ml destilované vody.
Také se nasadí neinfikované kontroly za použití vzorků neinfikované směsi prosa a půdy.
Semena se potom nechají růst ve skleníku při 20 ± 2 °C za osvětlování 15 000 až 17 000 lux. Vyhodnocování se vyjadřuje v procentech vzcházení ve srovnání s chemickým ošetřením.
Test na Fusarium culmorum
Kultura Fusarium culmorum se pěstuje na agaru s bramborovou dextrosou 10 dnů při 20 °C, až se vytvoří konidie. Konidie se seberou a spočítají na rozmezí koncentrací od 104 do 108 konidií na 1 ml. Ke 100 g pšeničných semen v nádobě se přidá 5 ml konidií a nádoba se potom nechá přes noc rotovat při 10 °C.
Vzorek infikovaných semen se před setím umístí do směsi testovaných bakterií a stříbřitého písku na 60 minut, čímž dojde k povlečení asi 106 buněk na semeno. Druhý vzorek se ošetří benomylem (100 ppm) jako chemickou kontrolou.
Jedno sto semen se zasadí do rašelinového kompostu v sázecí misce do hloubky 2 cm. Kompost se zalije vodou na začátku pokusu, nechá se 2 týdny při 20 °C a zalije se opět pátý den po zasetí. Po tomto počátečním zalití kompostu za účelem vzklíčení semen se kompost nechá uschnout, aby se podpořil vývin choroby.
Sleduje se vzcházení semenáčků a vývin choroby. Příznaky choroby se hodnotí ve stupnici od nuly (žádné příznaky) do 4 (vážné onemocnění).
Výsledky
Asi 7 000 bakteriálních půdních organismů se podrobí testování popsanému výše. Tabulka 1 níže sumarizuje výsledky těchto testů. Číslice ve sloupcích jsou ve stupnici od nuly (žádný fungicidní účinek) do 3 (žádné zjistitelné příznaky choroby). V tabulce je také zahrnut srovnávací příklad typického neúčinného bakteriálního kmene označeného 53/87.
-8CZ 284515 B6
Tabulka 1
| primární testy NCIB | 40186 | 40187 | 40188 | 40190 | 53/87 |
| Fusarium culmorum | 1 | 2 | 0 | 2 | 1 |
| Fusarium moniliforme | 1 | 1 | 0 | 1 | 1 |
| Fusarium sambusinum | 0 | 1 | 0 | 0 | 1 |
| Pythium ultimum | 2 | 3 | 2 | 2 | 0 |
| Aphanomyces | 3 | 1 | 0 | 2 | 0 |
| Phoma betae | 2 | 0 | 3 | 1 | 0 |
| cukrová řepa/půda | 3 | 2 | 2 | 3 | 0 |
| sekundární testv NCIB | 40186 | 40187 | 40188 | 40190 | 53/87 |
| Rhizoctonia solani | 0 | 3 | 3 | 0 | 0 |
| Pythium ultimum 15 °C | 3 | 3 | 3 | 0 | 0 |
| Pythium ultimum 24 °C | 3 | 2 | 2 | 2 | 0 |
| Fusarium culmorum | 2 | 2 | 2 | 2 | 0 |
| P. megasperma | 2 | 1 | 1 | 1 | 0 |
Výsledky polních pokusů 1989
Kmeny, které byly nejslibnější v primárních a sekundárních testech byly vybrány pro polní pokusy jako biologické prostředky proti chorobě padání klíčících rostlin (vadnutí) u hrachu a cukrové řepy.
Obr. 1 znázorňuje výsledky získané s kmenem NCIB 40 186 proti vadnutí hrachu. Tyto pokusy byly prováděny ve Velké Británii. Tímto kmenem bylo dosaženo ochrany okolo 80 % z ochrany dosažené chemickým ošetřením metalaxylem (obchodní značka APRON). Kmen NCIB 40 187 byl v tomto pokusu z velké části neúčinný.
Obr. 2 a 3 znázorňují výsledky polních pokusů na cukrové řepě za použití kmenů NCIB 40 186 a 40 190. Tyto pokusy byly prováděny v Belgii. Bylo vybráno 6 míst na poli. Tři místa (1, 3 a 6) byla oseta cukrovou řepou v březnu a zbylá tři místa byla oseta v květnu. Obr. 2 uvádí výsledky při prvním vyhodnocování, které bylo prováděno 3 týdny po vysetí a obr. 3 uvádí výsledky po 6 až 8 týdnech po vysetí.
Sumárně tyto výsledky ukazují, že vadnutí hrachu způsobené Pythium ultimum se aplikací kmene NCIB 40 186 sníží na hladinu srovnatelnou s hladinou dosaženou chemickým ošetřením metalaxylem. Výsledky u cukrové řepy ukazují na zlepšené vzcházení semenáčků při aplikaci kmenů NCIB 40 186 a 40 190 ve srovnání sneošetřenou kontrolou na všech 6 místech. Vzcházení semenáčků na třech místech v přítomnosti uvedených kmenů je srovnatelné se vzcházením dosaženým při použití metalaxylu.
Výsledky polních pokusů 1990
Během polních pokusů v roce 1990 byly mikroorganismy NCIB 40 186 a 40 190 zkoušeny na jejich možnou inhibici Pythium spp. Pokusy byly prováděny ve Spojených státech amerických, v Belgii a ve Francii a výsledky jsou uvedeny níže. Pro účely pokusů byly mikroorganismy aplikovány jako postřiky semen s následujícím vysušením v písku při pokusech v Evropě a jako gumovito-rašelinové přípravky ve Spojených státech amerických. Další pokusy probíhají v ostatních částech světa, kde choroby vadnutí jsou endemické, například u zeleninových plodin v Malajsii. I když ještě nemůžeme dodat výsledky pokusů z celého světa, prostě proto, že pokusy nejsou ještě kompletní a nelze je samozřejmě z důvodů sezónních omezení zemědělských
-9CZ 284515 B6 postupů urychlit, lze přesto již nyní říci, že tyto zvláštní mikroorganismy vykazují přinejmenším velkou schopnost být komerčními biologickými prostředky k ochraně rostlin. Další testování ostatních výše uvedených mikroorganismů pokračuje v laboratoři a ve skleníku v souladu s normální praxí pro zjišťování účinnosti a bezpečnosti jak pro lidi, tak pro životní prostředí. Výsledky, které jsou v současné době k dispozici potvrzují to, co bylo nalezeno dříve a co je již výše popsáno.
Kmeny NCIB 40 186 a 40 190 byly testovány proti vadnutí cukrové řepy při pokusech na 9 políčkách v Belgii a ve Francii. Během setí v časném jaru bylo počasí velmi teplé a suché, což způsobilo určité problémy s vývinem choroby vadnutí cukrové řepy. V každém testovaném políčku bylo vyseto celkově 200 semen. Výsledky z těchto 9 pokusů jsou následující.
Belgické a francouzské pokusy 1990 testovaná plodina: cukrová řepa chemická kontrola: tachigaren/TMTD/
| pokus č. | oočet semen vzešlých ze 200 semen zasetých | |||
| neošetřená kontrola | chemické ošetření | NCIB 40186 | NCIB 40190 | |
| 1 | 93 | 125 | 130x | 114 |
| 2 | 118 | 141x | 124 | 127 |
| 3 | 118 | 157x | 146x | 138x |
| 4 | 107 | 139x | 131x | 122x |
| 5 | 120 | 150x | 128 | 130 |
| 6 | 84 | 116x | 11 lx | 114x |
| 7 | 135 | 153x | 143 | 138 |
| 8 | 119 | 148x | 141 | 135 |
| 9 | 134 | 155x | 144 | 144 |
x = LSD při 5% pravděpodobnosti
Francouzské pokusy 1990 testované plodina: hrách chemická kontrola: jak je uvedeno níže
Počet rostlin znamená střední počet rostlin, které vzešly na pruhu 5 m dlouhém 22 dnů po ošetření.
Sloupec 2 v tabulkách uvádí počet rostlin, které vzešly z 200 semen za 22 dnů po vysetí. Písmena za čísly znamenají statistickou významnost. Obecně při 5% hladině pravděpodobnosti není žádný signifikantní rozdíl mezi hodnotami označenými stejnými písmeny.
- 10CZ 284515 B6
Kontrolní ošetření
Testy byly prováděny v normální polní půdě bez jakýchkoliv přidaných pathogenů.
ošetření počet vzešlých
| neošetřené semeno NCIB 40186- 107 buněk na semeno APRON - 30 g úč. látky/100 kg semen RIDOMIL 2E metalaxyl - zálivka do řádku blank semeno 100 buněk/semeno | 172,58 AC 184,75 A 171,50 AC 181,00 A 176.00 AC |
Testy
Pathogen (Pythium) se přidá v množství 200 g na metr řádku
| ošetření | počet vzešlých |
| neošetřené semeno NCIB 40186- 107 buněk na semeno APRON - 30 g úč. látky/100 kg semen RIDOMIL 2E metalaxyl - zálivka do řádku blank semeno 100 buněk/semeno | 111,251 144,75 DG 157.25 BCDF 164.25 AD 119,88 HI |
Kalifornské (USA) pokusy 1990 testovaná plodina: hrách testovaný pathogen: Pythium v dávce 30 g na metr řádku
| ošetření | % vzešlých |
| žádný přidaný pathogen, žádné ošetření pathogen + NCIB 40186-107 buněk/semeno pathogen + blank semeno - 100 buněk/semeno pathogen + APRON 30g úč. látky/100 kg | 93,13 AB 75,31 BCD 51,56 EF 92,81 AB |
Mississippský pokus (USA) 1990 testovaná plodina: kukuřice testovaný pathogen: Fusarium i) 10 g na metr řádku ii) 30 g na metr řádku
Vzcházení se počítá v % po 15 dnech po vysetí
| ošetření | % vzešlých |
| žádný přidaný pathogen, žádné ošetření žádný přidaný pathogen, NCIB 40 186 107 buněk/semeno žádný přidaný pathogen, CΑΡΤΑΝ jako ošetření semene pathogen i), žádné ošetření pathogen i) + | 65,833 C 67,917 C 69,583 BC 51,250 D |
- 11 CZ 284515 B6
NCIB 40186 107 buněk/semeno pathogen ii), žádné ošetření
80,000 AB
69,375 BC pathogen ii) +
NCIB 40186 107 buněk/semeno pathogen i i) +
82,708 A
CAPTAN jako ošetření semene
Claims (6)
1. Způsob vyhledávání potenciálního fungicidního prostředku, vyznačující se tím, že zahrnuje stanovení inhibičního účinku tohoto prostředku na houbové napadení ve dvou testech, přičemž v prvním testu se připraví mycelium pathogena, kterým je Pythium spp, ve vrstvě kultivačního média, na kultivační vrstvu se umístí vrstva sterilní půdy, do vrstvy půdy se přidá vzorek potenciálního fungicidního prostředku, testovací jednotka se inkubuje a stanoví se inhibiční vliv fungicidního prostředku na růst pathogena, a ve druhém testu se inokuluje vzorek půdy pathogenní houbou, do této houbou infikované půdy se vyseje semeno rostliny citlivé na napadení touto houbou, na půdu se aplikuje vzorek potenciálního fungicidního prostředku, semeno se nechá vyklíčit a nechá se z něj vyrůst rostlina, a stanoví se inhibiční vliv fungicidního prostředku srovnáním zdravotního stavu rostliny s neinfikovanou kontrolou.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že rostlinou náchylnou k infekci komplexem způsobujícím vadnutí klíčících rostlin je cukrová řepa.
3. Způsob podle nároků 1 nebo 2, vyznačující se tím, že potenciálním fungicidním prostředkem je mikroorganismus.
4. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že mikroorganismem je mikroorganismus žijící na kořenech.
5. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že se mikroorganismus žijící na kořenech isoluje ze vzorku půdy tak, že se do uzavíratelné nádoby umístí vrstva vlhkého sterilního písku a na ni se umístí vlhký vzorek půdy a do vzorku půdy se zaseje semeno rostliny náchylné k určitému onemocnění, nádoba se uzavře a umístí se do takového prostředí, které způsobuje vývin choroby, semeno se nechá vyklíčit a kořeny se nechají prorůst z vrstvy půdy do vrstvy písku, vyřízne se tunel podélně oběma vrstvami, vyberou se kořeny pouze z vrstvy písku a z těchto kořenů se isolují mikroorganismy.
6. Způsob podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že se prostředek, který vykazuje inhibici choroby v obou uvedených testech podrobí dalšímu testování na inhibici plísňové infekce v jednom nebo ve více než jednom testu, které zahrnují:
a) infekci cukrové řepy organismem Aphanomyces cochlioides při teplotě od 12 do 15 °C,
b) infekci hrachu organismem Pythium ultimum při teplotě od 12 do 15 °C,
c) infekci hrachu organismem Pythium ultimum při teplotě od 24 do 27 °C,
d) infekci hrachu organismem Rhizoctonia solani při teplotě od 24 do 27 °C,
-12CZ 284515 B6
e) infekci pšenice organismem Fusarium culmorum při teplotě od 18 do 21 °C,
f) infekci sojového bobu organismem Phytophthora megasperma při teplotě od 20 do 24 °C,
g) infekci řezu bramboru organismem Fusarium moniliforme při teplotě od 20 do 24 °C,
h) infekci řezu bramboru organismem Fusarium sambusinum při teplotě od 20 do 24 °C a
5 i) infekci cukrové řepy organismem Phoma spp. při teplotě od 15 do 19 °C.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB898923407A GB8923407D0 (en) | 1989-10-17 | 1989-10-17 | Antifungal microorganism |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ503590A3 CZ503590A3 (cs) | 1998-10-14 |
| CZ284515B6 true CZ284515B6 (cs) | 1998-12-16 |
Family
ID=10664731
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ941524A CZ284829B6 (cs) | 1989-10-17 | 1990-10-17 | Fungicidní prostředek |
| CS905035A CZ284515B6 (cs) | 1989-10-17 | 1990-10-17 | Způsob vyhledávání potenciálních fungicidních prostředků |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ941524A CZ284829B6 (cs) | 1989-10-17 | 1990-10-17 | Fungicidní prostředek |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5260302A (cs) |
| EP (1) | EP0496791B1 (cs) |
| JP (1) | JPH05501407A (cs) |
| AT (1) | ATE147580T1 (cs) |
| AU (1) | AU652132B2 (cs) |
| BG (1) | BG61671B1 (cs) |
| CZ (2) | CZ284829B6 (cs) |
| DE (1) | DE69029739T2 (cs) |
| DK (1) | DK0496791T3 (cs) |
| ES (1) | ES2095879T3 (cs) |
| FI (1) | FI102615B (cs) |
| GB (1) | GB8923407D0 (cs) |
| GR (1) | GR3022295T3 (cs) |
| HU (1) | HU214457B (cs) |
| MY (1) | MY107283A (cs) |
| NO (1) | NO302955B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ235711A (cs) |
| PL (2) | PL166864B1 (cs) |
| RU (1) | RU2108038C1 (cs) |
| SK (1) | SK279149B6 (cs) |
| WO (1) | WO1991005475A1 (cs) |
| YU (1) | YU195990A (cs) |
| ZA (1) | ZA908268B (cs) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5670350A (en) * | 1990-08-20 | 1997-09-23 | Novartis Finance Corporation | Genomic DNA encoding a pseudomonas global transcriptional activation element and its use in activating gene expression |
| EP0472494A3 (en) * | 1990-08-20 | 1992-10-21 | Ciba Geigy Ag | Anti-pathogenic biocontrol agents, genes encoding antibiotics synthesis and the use of said antibiotics |
| US5639949A (en) * | 1990-08-20 | 1997-06-17 | Ciba-Geigy Corporation | Genes for the synthesis of antipathogenic substances |
| US5662898A (en) * | 1990-08-20 | 1997-09-02 | Ciba-Geigy Corporation | Genes for the synthesis of antipathogenic substances |
| KR0145740B1 (ko) * | 1991-05-23 | 1998-08-01 | 채영복 | 고정화 미생물 농약과 그의 제조방법 |
| US5348742A (en) * | 1991-05-24 | 1994-09-20 | Ciba-Geigy Corporation | Anti-pathogenic bacterial strains of Pseudomonas fluorescens |
| IT1248095B (it) * | 1991-06-20 | 1995-01-05 | Ministero Dell Uni E Della | Ceppi batterici di pseudomonas (ncimb 40403, ncimb 40376, ncimb 40375,ncimb 40377, ncimb 40402, ncimb 40379) in grado di controllare le infezioni fungine. |
| FI92790C (fi) * | 1991-11-19 | 1995-01-10 | Kemira Oy | Mikrobintorjuntamenetelmä |
| IT1254507B (it) * | 1992-03-06 | 1995-09-25 | Composizione per la confettatura di semi, semi confettati con tale composizione e relativo procedimento di confettatura | |
| GB9207352D0 (en) * | 1992-04-03 | 1992-05-13 | Ici Plc | Method to control fungal disease |
| US5614188A (en) * | 1993-10-06 | 1997-03-25 | Murakashi Lime Industry Co., Ltd. | Anti-fusarium composition containing strains of bacillus Sp., a chitin-containing material, and a powdery material |
| FI95598C (fi) * | 1994-01-31 | 1996-02-26 | Kemira Agro Oy | Mikro-organismi kasvitautien biologiseen torjuntaan |
| US6117670A (en) * | 1994-06-08 | 2000-09-12 | Novartis Finance Corporation | Pyrrolnitrin biosynthesis genes and uses thereof |
| IN186436B (cs) * | 1996-09-03 | 2001-09-01 | Council Scient Ind Res | |
| DE59805847D1 (de) * | 1998-12-24 | 2002-11-07 | Berg Gabriele | Rhizobakterienisolate zur Anwendung gegen phytopatogene Bodenpilze und Verfahren zur Anwendung der Rhizobakterienisolate |
| DE50014659D1 (de) * | 2000-01-04 | 2007-10-25 | Friedrich Felsenstein | Verfahren zur erkennung und charakterisierung von wirkstoffen gegen pflanzen-pathogene |
| WO2011154959A1 (en) * | 2010-06-09 | 2011-12-15 | Patel, Babubhai C. | Advance method of preparation of bacterial formulation using pseudomonas fluorescens for controlling various diseases of crop plant |
| RU2618873C2 (ru) * | 2010-10-25 | 2017-05-11 | Синтетик Дженомикс, Инк. | Способ высокоэффективного отбора микробных антагонистов против патогенов |
| MX361278B (es) * | 2013-03-14 | 2018-12-03 | Univ Georgia State Res Found | Inhibición o reducción del crecimiento de hongos. |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4456684A (en) * | 1982-09-08 | 1984-06-26 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Method for screening bacteria and application thereof for field control of diseases caused by Gaeumannomyces graminis |
| US4588584A (en) * | 1983-06-01 | 1986-05-13 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Medium for the isolation of Pseudomonas cepacia biotype from soil and the isolated biotype |
| US4647533A (en) * | 1984-09-14 | 1987-03-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Method for screening bacteria and application thereof for field control of Pythium spp. on small grain crops |
| US4798723A (en) * | 1986-07-28 | 1989-01-17 | Lubrizol Genetics, Inc. | Agricultural products from Pseudomonas cepacia strains and methods of preparation |
| US4996049A (en) * | 1988-12-19 | 1991-02-26 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Biological control of corn seed rot and seedling blight |
-
1989
- 1989-10-17 GB GB898923407A patent/GB8923407D0/en active Pending
-
1990
- 1990-10-16 DK DK90915786.9T patent/DK0496791T3/da active
- 1990-10-16 ES ES90915786T patent/ES2095879T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-10-16 ZA ZA908268A patent/ZA908268B/xx unknown
- 1990-10-16 MY MYPI90001811A patent/MY107283A/en unknown
- 1990-10-16 DE DE69029739T patent/DE69029739T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-10-16 JP JP2514815A patent/JPH05501407A/ja active Pending
- 1990-10-16 HU HU9201282A patent/HU214457B/hu not_active IP Right Cessation
- 1990-10-16 NZ NZ235711A patent/NZ235711A/en unknown
- 1990-10-16 AU AU66141/90A patent/AU652132B2/en not_active Ceased
- 1990-10-16 WO PCT/GB1990/001598 patent/WO1991005475A1/en active IP Right Grant
- 1990-10-16 RU SU5011724A patent/RU2108038C1/ru active
- 1990-10-16 AT AT90915786T patent/ATE147580T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-10-16 EP EP90915786A patent/EP0496791B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-10-17 PL PL90287369A patent/PL166864B1/pl unknown
- 1990-10-17 YU YU195990A patent/YU195990A/sh unknown
- 1990-10-17 SK SK5035-90A patent/SK279149B6/sk unknown
- 1990-10-17 CZ CZ941524A patent/CZ284829B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1990-10-17 US US07/597,665 patent/US5260302A/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-10-17 PL PL90302121A patent/PL166131B1/pl unknown
- 1990-10-17 CZ CS905035A patent/CZ284515B6/cs not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-04-15 NO NO921519A patent/NO302955B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-04-16 FI FI921722A patent/FI102615B/fi active
- 1992-04-17 BG BG96249A patent/BG61671B1/bg unknown
-
1997
- 1997-01-16 GR GR960403583T patent/GR3022295T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ284515B6 (cs) | Způsob vyhledávání potenciálních fungicidních prostředků | |
| JPH09500268A (ja) | 植物病原体を制御するためのＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓＷＹＥＣ１０８の使用 | |
| BG61345B1 (bg) | Изолати от триходерма,фунгицидни състави,съдържащи тези изолати,и използването им срещу в.сinеrеа и s.sсlеrотiоruм | |
| EA029469B1 (ru) | Нематоцидная композиция, содержащая bacillus subtilis и bacillus licheniformis | |
| CN105368720B (zh) | 棉花内生真菌cef-082及其在棉花黄萎病防治中的应用 | |
| FI95598B (fi) | Mikro-organismi kasvitautien biologiseen torjuntaan | |
| CN110317735A (zh) | 生防寡雄腐霉菌及应用 | |
| Booth et al. | Fusarium diseases of cereals: XI. Growth and saprophytic activity of Fusarium nivale in soil | |
| Smith | The influence of antagonistic fungi on Thielaviopsis basicola (Berk. et Br.) Ferraris | |
| Duvenhage et al. | Suppressive soils and biological control of Phytophthora root rot | |
| JPH10506288A (ja) | 植物の病気の生物学的防除のための真菌 Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ ｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ | |
| Gindi et al. | Efficacy of streptomyces spp. And bacillus spp. For their antagonistic potential against dry root rot (rhizoctonia bataticola) of chickpea | |
| Uppala | Potentiality of endophytic micro organisms in the management of leaf blight disease of Amaranth | |
| RAMESH | COMPARATIVE PERFORMANCE OF FUNGICIDES WITH BIOAGENTS FOR MANAGEMENT OF ANTHRACNOSE DISEASE OF MANGO’ | |
| Samjik | EVALUATION OF BIOCONSORTIA AGAINST FUSARIUM WILT OF TOMATO (Lycopersicon esculentum L.) | |
| Choi et al. | Suppression of bipolaris stem rot on cactus by heat-inactivated conidial suspension of Bipolaris cactivora | |
| GINDI et al. | EFFICACY OF STREPTOMYCES SPP. AND BACILLUS SPP. FOR THEIR ANTAGONISTIC | |
| CA2066309A1 (en) | Antifungal microorganism | |
| John | Etiology and control of blight and fruit rot of brinjal | |
| Aparna | Characterization of rhizosphere and endophytic microflora from organically grown amaranth for management of leaf spot diseases | |
| Stewart | Selected studies on strains of Botrytis cinerea: a dissertation presented in fulfilment of the requirements for the Master of Science at Massey University | |
| Chet et al. | Biological control of plant diseases using microorganisms grown on agricultural forestry wastes | |
| Charudattan et al. | C1W CI | |
| CN105766492A (zh) | 一种利用印度梨形孢和聚六亚甲基双胍盐酸盐联合防治烟草青枯病的方法 | |
| KR20000066896A (ko) | 접합균류인 자이고린쿠스 모엘레리 ｐｆ-425 균주와 이를 이용한식물 생장 촉진제 및 병 발생 억제제로의 이용방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20001017 |