PL151679B1 - The methodof manufacture of new polypeptides containing nor-statine and nor-cyclostatine - Google Patents

The methodof manufacture of new polypeptides containing nor-statine and nor-cyclostatine

Info

Publication number
PL151679B1
PL151679B1 PL1987268521A PL26852187A PL151679B1 PL 151679 B1 PL151679 B1 PL 151679B1 PL 1987268521 A PL1987268521 A PL 1987268521A PL 26852187 A PL26852187 A PL 26852187A PL 151679 B1 PL151679 B1 PL 151679B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
formula
sta
product
mixture
ppm
Prior art date
Application number
PL1987268521A
Other languages
English (en)
Other versions
PL268521A1 (en
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed filed Critical
Publication of PL268521A1 publication Critical patent/PL268521A1/xx
Publication of PL151679B1 publication Critical patent/PL151679B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/14—Angiotensins: Related peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/16—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms
    • C07D295/20—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms by radicals derived from carbonic acid, or sulfur or nitrogen analogues thereof
    • C07D295/205—Radicals derived from carbonic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D265/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom and one oxygen atom as the only ring hetero atoms
    • C07D265/28—1,4-Oxazines; Hydrogenated 1,4-oxazines
    • C07D265/30—1,4-Oxazines; Hydrogenated 1,4-oxazines not condensed with other rings
    • C07D265/32—1,4-Oxazines; Hydrogenated 1,4-oxazines not condensed with other rings with oxygen atoms directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/14—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D295/145—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals with the ring nitrogen atoms and the carbon atoms with three bonds to hetero atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0202—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-X-X-C(=0)-, X being an optionally substituted carbon atom or a heteroatom, e.g. beta-amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0227—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the (partial) peptide sequence -Phe-His-NH-(X)2-C(=0)-, e.g. Renin-inhibitors with n = 2 - 6; for n > 6 see C07K5/06 - C07K5/10
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

RZECZPOSPOLITA OPIS PATENTOWY 151 679
POLSKA
Patent dodatkowy do patentu nr —*-Zgłoszono: 87 10 30 (P. 268521)
Int. Cl.5 C07K 5/08
Pierwszeństwo--CZYTEUIA 0 fi Ó INA
URZĄD
PATENTOWY
RP
Zgłoszenie ogłoszono: 88 09 01
Opis patentowy opublikowano: 1991 05 31
Twórca wynalazku —
Uprawniony z patentu: Pfizer Inc.,
Nowy Jork (Stany Zjednoczone Ameryki)
Sposób wytwarzania nowych polipeptydów zawierających nor-statynę i nor-cyklostatynę
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania nowych polipeptydów zawierających norstatynę i nor-cyklostatynę, użytecznych jako środki przeciwnadciśnieniowe.
Enzym proteolityczny, renina, mający ciężar cząsteczkowy około 40 000, jest wytwarzany i wydzielany do krwi przez nerki. Wiadomo, że rozczepia on in vivo angiotensynogen, glikoproteinę naturalnie występującą w plazmie. W przypadku ludzkiego angiotensynogenu, rozczepiane jest wiązanie pomiędzy resztami leucyny (10 człon) i waliny (11 człon) od strony N-terminalnej angiotensynogenu:
Asp- Arg- Val- Tyr- Ile— His- Pro- Phe- His- Leu- Val- Ile- His- Ser- Glu1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
N-terminalny dekapeptyd (angiotensyna I), utworzony w wyniku powyższego działania rozszczepiającego reniny, jest następnie rozkładany do oktapeptydu, znanego jak angiotensyna II. Angiotensyna II jest znana jako substancja o silnym działaniu zwiększającym ciśnienie krwi, które działa, jak się przyjmuje, przez wywołanie skurczu naczyń krwionośnych i uwalnia zawierający sód hormon, aldosteron, z gruczołu nadnercza. Stąd, uważa się, że układ renina-angiotensynogen jest czynnikiem sprawczym różnych postaci nadciśnienia i przewlekłej niewydolności krążeniowej.
Jednym ze sposobów zmniejszania szkodliwych działań wynikających z funkcjonowania układu renina-angiotensynogen jest podawanie substancji zdolnej do hamowania rozszczepiania angiotensynogenu przez reninę. Znanych jest wiele takich substancji, w tym przeciwciała przeciwreninowe, pepstatyna i naturalne związki fosfolipidowe. W europejskim zgłoszeniu patentowym nr 45 665 (opublikowanym 2 lutego 1982 r.) ujawniono serię hamujących reninę pochodnych polipeptydowych o wzorze X-Y-Pro-Phe-His-A-B-Z-W, w którym X oznacza atom wodoru lub grupę chroniącą grupę aminową, Y może nie występować, B oznacza resztę lipofilowego aminokwasu, Z oznacza resztę aromatycznego aminokwasu, W może oznaczać grupę hydroksylową, oraz A może, między innymi, oznaczać grupę o wzorze 4, w którym R* 1 i R2 oznaczają lipofilowy lub
151 679 aromatyczny łańcuch boczny. Jak wynika z definicji podanych w powyższym, opublikowanym zgłoszeniu patentowym, nie przewidziano aby A lub Z oznaczały statynę lub aby B mogło oznaczać h lizynę.
W europejskim zgłoszeniu patentowym nr77028A (opublikowanym 20 kwietnia 1983 r) przedstawiono nieterminalną resztę statyny lub jej pochodnej. W tej serii są również związki zawierające owych zawierającycsekwencję fenyloalanina-histydynostatyna.
W europejskim zgłoszeniu patentowym nr 132 304A przedstawiono zastosowanie polipeptydów zawierających statynę jako hamujących reninę środków przeciwnadciśnieniowych, natomiast w europejskim zgłoszeniu patentowym nr 114993A ujawniono polipeptydy zawierające cyklostatynę, użyteczne jako hamujące reninę środki przeciwnadciśnieniowe.
Nowe peptydy według wynalazku są związkami o wzorze 1 i ich dopuszczalnymi w farmacji solami, w którym to wzorze Z oznacza grupę o wzorze Ri-Y-NH, w którym Ri oznacza grupę /Ci-C4/alkoksylową, karboksy/Ci-C4/alkilową, hydroksy/C2-C4/alkilenoaminową, morfolinową, hydroksypiperydynową, 4-ketopiperydynową, piperazynową, ketal 4-ketopiperydynoetylenu, 4/Ci-C4/alkoksykarbonylopiperazynową, pirydylową, /Ci-C3/alkoksykarbonylo-/s/pirolidylową-2 lub 4-/Ci-C3/alkanoilopiperazynową, a Y oznacza grupę C = 0 lub P/OCH3/ = 0 we wzorze IH oznacza grupę fenylową, metoksyfenylową lub /Ce-Cy/cykloalkilową, R2 oznacza grupę /Ci-Cs/alkilową, /Ci-C3/alkilotio/Ci-C2/alkilową, /Ci-C3/alkoksy/Ci-C2/alkilową, imidazolilo-4-metylową lub karbamylo/Ci-C2/alkilową, X oznacza grupę cykloheksylową, W oznacza grupę CH)))OH, Z1 oznacza grupę o wzorze R-S-T, w którym R oznacza C = 0, S oznacza atom tlenu, grupę NH lub wiązanie chemiczne pomiędzy R i T, a T oznacza grupę /Ci-Cs/alkilową lub benzylową.
Korzystną grupę są związki o wzorze 1, w którym Y oznacza grupę C = 0. Szczególnie korzystne z tej grupy są związki, w których R1 oznacza grupę morfolinową, M oznacza grupę fenylową, S oznacza atom tlenu, R2 oznacza grupę n-propylową, a T oznacza grupę izopropylową, lub R2, oznacza grupę o wzorze CH3-SCH2-, a T oznacza grupę izopropylową, lub R2 oznacza grupę n-butylową, a T oznacza grupę metylową lub R2 oznacza grupę CH3SCH2-, a T oznacza grupę benzylową, lub R2 oznacza grupę metylową,a T oznacza grupę izopropylową, lub R2 oznacza grupę n-butylową, a T oznacza grupę izopropylową, lub R2 oznacza grupę CH3OCH2-, a T oznacza grupę izopropylową, lub R2 oznacza grupę CH3CH2OCH2-, a T oznacza grupę izopropylową. Również szczególnie korzystne są związki z tej grupy, w których M oznacza grupę fenylową, S oznacza atom tlenu, T oznacza grupę izopropylową, R2 oznacza grupę CH3SCH2-, a R1 oznacza grupę 4-pirydylową, piperazynową lub 4-hydroksypiperydynową. Także szczególnie korzystne są związki z tej grupy, w których R1 oznacza grupę morfolilową, M oznacza grupę fenylową, S oznacza wiązanie łączące R i T, a R2 oznacza grupę n-butylową i T oznacza grupę CH2CH/CH3/2, lub R2 oznacza grupę CH3SCH2, a T oznacza grupę CH2CH/CH3/2. Również szczególnie korzystne są związki z tej grupy, w których R1 oznacza grupę morfolinową, S oznacza atom tlenu, M oznacza grupę 4-metoksyfenylową, R2 oznacza grupę n-butylową, a T oznacza grupę metylową. Także szczególnie korzystne są związki z tej grupy, w których R1 oznacza grupę morfolinową, M oznacza grupę fenylową, R2 oznacza grupę n-butylową, S oznacza grupę NH, a T oznacza grupę metylową.
Korzystną grupą związków o wzorze 1, są takie w których M oznacza grupę fenylową, S oznacza wiązanie łączące R i T, T oznacza grupę /Ci-Cs/alkilową, a R oznacza grupę C = 0.
Jak uprzednio wspomniano, sposobem według wynalazku wytwarza się również dopuszczalne w farmacji sole biologicznie czynnych związków. Należą do nich sole nietoksyczne w podawanych dawkach. Ponieważ związki wytwarzane sposobem według wynalazku mogą posiadać grupy zasadowe, możliwe jest tworzenie addycyjnych soli kwasowych. Do dopuszczalnych w farmacji addycyjnych soli kwasowych należą np. chlorowodorek, bromowodorek, jodowodorek, siarczan, wodorosiarczan, fosforan, wodorofosforan, octan, mleczan, maleinian, mezylan, fumaran, cytrynian, wodorocytrynian, winian, wodorowinian, bursztynian, glukonian i cukrzan.
W celu uproszczenia opisu, stosowano tam, gdzie to było możliwe, ogólnie przyjęte skróty nazw poszczególnych aminokwasów i reagentów. Np., aminokwas fenyloanilinę określa się jako Phe, homoserynę jako Hse, histydynę jako His, lizynę jako Lys, norleucyjnę jako Nie. Grupę chroniącą grupę aminową, taką jak III-rz.-butoksykarbonylowa określa się skrótowo jako Boc,
151 679 benzylooksykarbonylową jako CBZ oraz N-III-rz.-butoksykarbonylową na imidazolu w histydynie jako imBoc. innymi skrótami są: CPBA dla kwasu chloronadbenzoesowego, DCC dla dwucykloheksylokarbodwuimidu, DEC dla chlorowodorku dwumetyloaminopropylo-etylokarbodwuimidu, DMF dla dwumetyloformamidu, HBT dla hydroksybenztriazolu, mezyl dla grupy o wzorze CH3SO2-, thala dla 2-tienyloalaniny, Nphala dla 1-naftyloalaniny, TBDMS dla III-rz.-butylodwumetylosililu, TEA dla trójetyloaminy, D-MeCys dla S-metylocysteiny, S-EtCys dla Setylocysteiny, O-MeTyr dla o-metylotyrozyny, O-MeHse dla O-metylohomoseryny, itd.
Modyfikowana norstatyna i norcyklostatyna, która zawiera o jeden mniej atom węgla w cząsteczce, mają odpowiednio wzór 2 i wzór 3. Skrótowo są one określano jako odpowiedni nor-Sta i nor-C-sta.
Wszystkie naturalne aminokwasy zawarte w cząsteczkach omawianych związków mają naturalnie występującą konfigurację L, o ile nie podano inaczej.
Sposób według wynalazku polega na tym, że tworzy się wiązanie amidowe, C/O/N, przez odwadnianie-sprzęganie związków o wzorze 5 i o wzorze 6, w których to wzorach odpowiednio Z, X, W i Z1 mają wyżej podane znaczenie, przy czym jeżeli K we wzorze 5 oznacza grupę o wzorze 7, w których M ma wyżej podane znaczenie, to P we wzorze 6 oznacza grupę o wzorze 8, w którym R2 ma wyżej podane znaczenie, a jeżeli K we wzorze 5 oznacza grupę o wzorze 9, w którym M i R2 mają wyżej podane znaczenie, to P we wzorze 6 oznacza wiązanie, przy czym grupy funkcyjne nie uczestniczące w tej reakcji mogą być chronione, a następnie ewentualnie selektywnie usuwa się grupy blokujące.
Związki wytwarzane sposobem według wynalazku wykazują in vivo działanie przeciwnadciśnieniowe u ssaków, w tym ludzi. Działanie to co najmniej w znacznym stopniu wynika z ich zdolności do hamowania rozszczepiania angiotensynogenu przez reninę. Chociaż nie chcemy ograniczać się do następującej teorii, to jest prawdopodobne, że mechanizm działania hamującego reninę przez związki wytwarzane sposobem według wynalazku polega na ich selektywnym wiązaniu reniny w porównaniu z angiotensynogenem. Omawiane związki wykazują selektywną, w odniesieniu do reniny, aktywność hamującą enzym. Ze względu na niskie ciężary cząsteczkowe są one dobrze rozpuszczalne w środowisku wodnym, co umożliwia podawanie doustne. Mogą one być syntetyzowane po rozsądnych z punktu widzenia handlowego kosztach. Omawiane związki są także użyteczne w leczeniu niewydolności krążeniowej.
Aktywność związków wytwarzanych sposobem według wynalazku jako inhibitorów rozszczepiania angiotensynogenu przez reninę może być oznaczana in vitro. W tabeli zestawiono wyniki świadczące o zdolności związków o wzorze 1, w których X oznacza grupę cykloheksylową, W oznacza grupę CH)))OH, a pozostałe znaczenia podane są w tabeli, do działania jako inhibitory reniny (C50 odpowiada stężeniu potrzebnemu do inhibitowania w 50% enzymu, który tworzy reninę).
Tabela Wzór 1
Numer związku IC50 Z M Ra Z1
1 2 3 4 5 ‘ 6 —
1 5,5X10* wzór 10 fenyl (CH2)aCH3 COzCHa
2 7,8 Χ1Ο”10 wzór 11 fenyl (CHzJaCHa COzCHa
3 7,0X10”* wzór 10 fenyl (CHzhCHa CONH(CH2)2CH3
4 5,8X10* wzór 10 fenyl (CH2)SCH3 COzCHa
5 5,1 X 10* wzór 10 fenyl ch2sch3 CO2CH(CHa)z
6 4,5X10* wzór 10 fenyl (CH2)zCH3 COzCH(CHa)z
7 5,1 X 10'* wzór 10 metoksyfenyl (CH2)aCH3 COzCHa
8 4,5X10* wzór 10 fenyl (CHahCHa CO-CH2CHz(CH3)z
9 2,7X10* wzór 10 fenyl CHzSCHa CO-CHzCH(CH3)z
10 2,1 X10° wzór 12 fenyl CH2SCH3 COzCH(CHa)2
11 8,3X10* (CHahCOCONH fenyl CH2SCH3 COzCH(CH3)z
12 2,0X10* wzór 10 fenyl (CH2)zCONHz COzCH(CH3)z
13 1,2X10* wzór 13 fenyl CHzSCHa COzCH(CH3)z
14 2,3X10* wzór 10 fenyl CHzOCHa COzCH(CH3)z
15 4,9X10* wzór 10 fenyl CHzSCHa COzCHzCeHa
16 1,0X10* wzór 14 fenyl CHzSCHa COzCH(CHa)z
151 679
2 3
5 6
P 5,8 X IO'10 wzór 15
18 1,8 X 10'® wzór 10
19 4,4X10'® wzór 10
20 4,6X10'® wzór 10
21 1,8X10'® wzór 16
22 6,2X10'® wzór 10
23 1,3X10'® wzór 10
24 5,5 X 10'® wzór 10
25 8,8 X IO'10 wzór 14
26 2,1X10'® (CH3O)2P(O)NH
27 5,4X10'® wzór 10
28 4,0 X 10® wzór 14
29 4,3 X 10® wzór 10
30 7,4X10'® wzór 10
31 2,4 X 10'® wzór 10
32 8,5X10'® wzór 10
33 1,8X10'® wzór 10
fenyl CH2SCH3 CO2CH(CH3)2
fenyl CH2SCH3 CO2CH(CH3)2
fenyl CH(CH3)2 CO2CH(CH3)2
cykloheksyl CH2SCH3 CO2CH(CH3)2
fenyl CH2SCH3 CO2CH(CH3)2
fenyl CH2SCH3 COCH2CH(CH3)2
fenyl (CH2)*CH3 CO2CH(CH3)2
fenyl CH2CH(CH3)2 CO2CH(CH3)2
fenyl CH2SCH3 COCH2CH(CH3)2
fenyl CH2SCH3 CO2CH(CH3)2
fenyl (CH2)2CH3 CONHCHa
fenyl CH2SCH3 CONHCHa
fenyl CH2SCH3 CONHCHa
metoksyfenyl CH2SCH3 CO2CH(CH3)2
fenyl CH2OCH3 CO2CH(CH3)2
fenyl CH2OCH3CH3 CO2CH(CH3)2
fenyl CH2CH3 CO2CH(CH3)2
Związki wytworzone sposobem według wynalazku mogą być podawane jako środki przeciwnadciśnieniowe doustnie lub pozajelitowo, przy czym korzystne jest podanie doustne ze względu na wygodę pacjenta. Na ogół, związki przcciwnadciśnicniowc podaje się zwykle doustnie w iloścj około 0,1 do 20 mg/kg ciężaru ciała dziennie lub pozajelitowo w ilości od 0,1 do około 5 mg/kg ciężaru ciała dziennie. Będą oczywiście występowały różnice w dawkowaniu w zależności od stanu pacjenta i poszczególnego podawanego związku. Z reguły leczenie rozpoczyna się od małych dawek dziennych i zwiększa, jeśli jest to potrzebne, jedynie zgodnie ze wskazówkami lekarza. Należy zauważyć, że omawiane związki mogą być podawane w kombinacji z dopuszczalnymi w farmacji nośnikami, każdą z uprzednio wskazanych dróg, i że podawać można jednokrotne lub wielokrotne dawki.
Nowe związki można podawać doustnie w postaci wielu różnych preparatów, to znaczy w kombinacji z różnymi dopuszczalnymi w farmacji, obojętnymi nośnikami w postaci tabletek, kapsułek, romboidalnych pastylek, kołaczyków, twardych cukierków, proszków, preparatów do rozpylania, wodnych zawiesin, eliksirów, syropów i podobnych. Nośnikami mogą być stałe rozcieńczalniki lub wypełniacze, jałowe wodne rozcieńczalniki i różne nietoksyczne rozpuszczalniki organiczne. Ponadto, takie doustne preparaty farmaceutyczne mogą być odpowiednio słodzone i/lub aromatyzowane za pomocą różnych środków zwykle stosowanych w tych celach. Na ogół, stężenie związków czynnych w takich preparatach doustnych wynosi od około 0,5% do około 90% wagowych w stosunku do masy całej kompozycji, a ilość jest wystarczająca dla uzyskania pożądanych dawek jednostkowych.
Dla podawania doustnego można stosować tabletki zawierające różne substancje pomocnicze, takie jak cytrynian sodowy, węglan sodowy lub fosforan wapniowy, a także różne środki rozpraszające, takie jak skrobia, korzystnie ziemniaczana lub tapiokowa, kwas alginowy i różne kompleksowe krzemiany. Mogą być też stosowane środki wiążące, takie jak poliwinylopirolidon, sacharoza, żelatyna lub guma arabska. Ponadto, można stosować środki poślizgowe, takie jak stearynian magnezu, laurylosiarczan sodowy i talk. Kompozycje podobnego typu mogą służyć do napełniania miękkich lub twardych kapsułek żelatynowych. W skład kompozycji mogą także wchodzić laktoza czyli cukier mleczny oraz wysokocząsteczkowe glikole polietylenowe. Gdy pożądane są wodne zawiesiny i/lub eliksiry do podawania doustnego, wówczas podstawowy składnik aktywny można mieszać z różnymi środkami słodzącymi lub aromatyzującymi, substancjami barwiącymi oraz, gdy jest to potrzebne, z emulagatorami, i/lub rozpuszczalnikami, takimi jak woda, etanol, glikol propylenowy, gliceryna i różne ich kombinacje.
Związki wytwarzane sposobem według wynalazku są także użyteczne w diagnostyce nadciśnienia i niewydolności krążeniowej.
Poniższe przykłady ilustrują sposób według wynalazku, przy czym przykłady LV-LIX dotyczą wytwarzania związków wyjściowych. Wysokorozdzielczą chromatografię cieczową (HPLC) wykonywano w następujących warunkach: detekcja przy 214 nm, kolumna Dupont Zorbax C-8 o rozmiarach 4,6 -X250mm, przepływ l,5mg/min. W opisie chromatografii cienkowarstwowej (TLC) stosowane są następujące skróty: układ A - octan etylu i heksan we wskazanym stosunku, żel
151 679 krzemionkowy, układ B - eter etylowy i heksan we wskazanym stosunku, żel krzemionkowy, układ C - chloroform, etanol i kwas octowy 18 :2:1, żel krzemionkowy, układ D - chloroform, etanol i kwas octowy 9:2:1.
Przykład I. Ester metylowy morfolinokarbonyloPhe-Hisnor-C-Sta (wzórl, Z = morfolinokarbonyloamino, M-fenyl, R2 = imidazol-4-ilometyl, W = CH)))OH, Z1 = CO2CH3 i X = cykloheksyl).
A. Ester benzylowy kwasu /S/-2-izocyjaniano-3-fenylo-propionowego.
Stosując postępowanie opisane przez Lombardino i wsp. w J.Med.Chem.7, 97(1964), 18,0 g chlorowodorku estru benzylowego L-fenyloalaniny w 150 ml toluenu mieszano i ogrzewano w temperaturze wrzenia w atmosferze fosgenu w ciągu 1,5 godziny, po czym mieszaninę ochłodzono i zatężono. Stałą pozostałość rekrystalizowano z 120 ml heksanu i otrzymano 16,1 g produktu w postaci bezbarwnych igieł.
Analiza elementarna dla C17H15NO3:
Obliczono C — 72,59, H— 5,37, N— 4,98.
Znaleziono: C — 72,32, H — 5,35, N — 4,92.
Temperatura topnienia 68-72°C. Skręcalność [ff]23D = 80,4° (c=l,02, CHCI3); widmo IR/CHCI3/: 2250 i 1750 cm-1.
B. Ester benzylowy morfolinokarbonyloPhe.
Produkt otrzymany w części A rozpuszczono w 5 ml chlorku metylenu i dodano w temperaturze 25°C 930//1 morfoliny. Po upływie 30 minut mieszaninę zatężono uzyskując woskowaty osad, który rekrystalizowano z gorącej mieszaniny 4:1 heksanu oraz octanu etylu. Otrzymano l,92g tytułowego związku o temperaturze topnienia 87-89°C. W widmie masowym (jonizacja chemiczna izobutanem) obserwowano podstawowy sygnał MH+369.
C. MorfolinokarbonyloPhe.
Porcję 1,85 g produktu otrzymanego w części B rozpuszczono w 30 ml bezwodnego metanolu i 5 ml kwasu octowego i wstrząsano z 0,5 g 10% palladu na węglu w ciągu 1 godziny pod ciśnieniem wodoru 363 kPa. Zawiesinę przesączono, zatężono, odparowano trzykrotnie z toluenem i wysuszono. Otrzymano 1,43 g produktu w postaci bezbarwnego piankowatego osadu.
D. Ester metylowy BocHis/imBoc/nor-C-Sta.
Z 200 mg chlorowodorku estru metylowego kwasu 3/S/-amino-2/R/-hydroksy-4-cykloheksylomasłowego otrzymano 345 mg mieszaniny około 1,5:1 tytułowego związku o Rf = 0,38 i odpowiedniej pochodnej O-BocHis/imBoc/ o Rf = 0,50 (żel krzemionkowy, octan etylu). Mieszaninę powyższą można było rozdzielić drogą preparatywnej HPLC na kolumnie Zorbax C-8 o wymiarach 15 cm X 9,7 mm, eluując mieszaniną 85 :15 acetonitrylu i wody z szybkością 6,3 ml/minutę i stosując do detekcji UV przy 254nm. Tytułowy związek miał czas retencji 4,76min., a pochodna 0-acylowano 6,48 min. W ten sposób otrzymano czyste próbki każdego związku.
E. Ester metylowy BocHisnor-C-Sta.
Porcję 895 mg mieszaniny otrzymanej w części D rozpuszczono w 20 ml metanolu i w temperaturze 25°C dodano 30 mg bezwodnego węglanu potasowego. Po upływie 1 godziny mieszaninę zatężono i wysuszono, otrzymując 604 mg żółtego piankowatego osadu, który stosowano bez oczyszczenia w następnej reakcji. HPLC: dla produktu o czasach retencji 3,15 min. i 1,98 minut, w stosunku 2,8:1. Produkt o czasie 1,98 min. był BocHisOme, co potwierdzone zostało widmem PMR mieszaniny i następnie przekształceniem w opisaną poniżej znaną pochodną.
F. Chlorowodorek estru metylowego His-nor-C-Sta.
Porcję 595 mg produktu otrzymanego w części E rozpuszczono w 3,4 n roztworze chlorowodoru w dioksanie w temperaturze 25°C i całość mieszano w ciągu 30 minut, a następnie zatężono. Pozostałość suszono pod zmniejszonym ciśnieniem i otrzymano 555 mg żółtego osadu. HPLC: czas retencji 1,54 min. w mieszaninie 5 :95 acetonitrylu i 0,1 molarnego roztworu fosforanu o pH 2,1. W widmie PMR stwierdzono obecność tytułowej pochodnej zanieczyszczonej dwuchlorowodorkiem estru metylowego histydyny.
G. Ester metylowy morfolinokarbonyloPheHisnor-C-Sta.
Powtórzono znane postępowanie, stosując produkt otrzymany w części C zamiast BocPheHis/imBoc/ i 2,2 równoważniki trójetyloaminy zamiast 1,1 równoważnika. Z 550 mg produktu otrzymanego w części F otrzymano 365 mg jasnożółtego bezpostaciowego osadu, który rozpu6
151 679 szczono w 3 ml metanolu, dodano 4 mg bezwodnego węglanu potasowego w temperaturze 25°C i po upływie 2 godzin zatężono, uzyskując 355 mg jasnożółtego piankowatego osadu. Produkt ten rozpuszczono w 4 ml chlorku metylenu i silnie mieszano w ciągu 5 minut z 20 ml 1 n kwasu solnego. Warstwy rozdzielono i wodną ekstrahowano 2 X 2 ml chlorku metylenu. Roztwór wodny traktowano 2 n roztworem wodorotlenku sodowego w celu doprowadzenia pH do 10,5, po czym ekstrahowano 4X lOOml chlorku metylenu. Ekstrakty organiczne suszono nad siarczanem sodowym i zatężono, otrzymując 225 mg tytułowego związku w postaci białawego piankowatego produktu o Rt = 0,1 w układzie D. HPLC czas retencji 2,95 minut (93% całkowitej powierzchni), małe zanieczyszczenie o czasie retencji 1,94 minuty (5% całkowitej powierzchni), mieszanina 50:50 acetonitrylu i roztworu fosforanu o pH 2,1.
Widmo PMR (częściowe), 300 MHz, CDCI3, <5, ppm: 0-7-1,4 (m, 6-8H), 1,5-1,8 (m, 4-6H), 3,4-2,8 (m, około 8H), 3,6 (m, 4H), 3,73 (s, 3H, OCH3), 4,08 i 4,54 (m, 1H), 4,30 (m, 2H), 5,2 (m, 1H), 6,82 i 7,57 (s, po 1H), 6,97 i 8,12 (d, po 1H), 7,1-7,35 (m, około 6H), protony aromatyczne/.
Przykład II. Ester metylowy morfolinokarbonyloPhe-Nle-nor-C-Sta (wzór 1, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = n-butyl, W = CH)))OH, Z1 = CO2CH3 i X = cykloheksyl).
A. Ester benzylowy norleucyny.
Stosując ogólne postępowanie podane w J.Med.Chem. 30,3575(1986), 15,0 g norleucyny (Nie) zmieszano z 200 ml alkoholu benzylowego i ochłodzono do temperatury 0°C, po czym wkroplono w ciągu 15 minut 25 ml chlorku tionylu i całość powoli ogrzano do temperatury 90°C, obserwując gwałtowne wydzielanie się SO2. Mieszaninę ogrzewano w ciągu 2 godzin w temperaturze 90°C, po czym ochłodzono do temperatury 0°C, dodano 25 ml chlorku tionylu i znów ogrzewano w temperaturze 90°C w ciągu 2 godzin, a następnie ochłodzono, rozcieńczono 1,6 litra eteru etylowego i pozostawiono w ciągu nocy w temperaturze 0°C. Krystaliczny osad odsączono, przemyto eterem etylowym i wysuszono. Otrzymano 23,1 g wilgotnego osadu, który rekrystalizowano z mieszaniny 1: 10 etanolu i eteru, stosując 23 ml etanolu. Po odsączeniu i wysuszeniu otrzymano 17,1 g produktu o Rf = 0,25 w układzie C, przy czym płytkę po naniesieniu próbki poddano przed rozwijaniem działaniu par amoniaku i wysuszono.
B. Ester benzylowy morfolinokarbonyloPheNle.
Z 2,12 g produktu otrzymanego w części A i 2,63 g produktu z przykładu IC otrzymano 3,30 g tytułowego związku w postaci bezbarwnego piankowatego osadu o Rf = 0,6 na żelu krzemionkowym w octanie etylu. HPLC: czas retencji od 3,27 minut (97% całkowitej powierzchni) do 25 minut, mieszanina 70:30 acetonitrylu i 0,1 molarnego roztworu fosforanu, pH 2,1.
C. MorfolinokarbonyloPheNle.
Porcję 3,3 g produktu otrzymanego w części B wstrząsano w 35 ml metanolu i 7 ml kwasu octowego z l,0g 10% palladu w ciągu 45 minut, po czym mieszaninę przesączono przez ziemię okrzemkową, zatężono, odparowano kilka razy z toluenem i eterem etylowym. Po wysuszeniu otrzymano 2,9 g bezbarwnego osadu o Rf = 0,2 w układzie C.
D. Ester metylowy morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta.
Z 300 mg chlorowodorku estru metylowego kwasu 3/S/-amino-2/R/-hydroksy-4-cykloheksylomasłowego i 700 mg produktu z przykładu IIC otrzymano 350 mg tytułowego związku w postaci jasnożółtego osadu o Rf = 0,33, żek krzemionkowy, octan etylu. HPLC: czas retencji 6,02 min., mieszanina 75 :25 acetonitrylu i 0,1 molarnego roztworu fosforanu o pH 2,1.
Widmo PMR (częściowe), 300 MHz, CDCI3, <5, ppm: 0,86 (t, 3H, J = 6-7Hz), nakładające się na m, 1-2H przy 0,9), 1,04-1,36 (m, około 8H), 1,46 (dd, 2H), 1,46-1,90 (m, około 10H), 3,0 (dd, 1H), 3,05-3,38 (m, około 5H), 3,58 (m, około 4H), 3,74 (s, 3H, OCH3), 4,12 (d, 1H, J = l-2Hz), 4,20 (q, 1H), 4,32-4,50 (m, 2H), 4,92 (d, 1H, J = ok.8Hz), 6,48 (d, 1H, J = 9Hz), 6,54 (d, 1H, J=10Hz), 7,12-7,35 (m, 5H, protony aromatyczne).
Przykład III. N-metyloamid morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta (wzórl, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = n-butyl, X = cykloheksyl, W = CH)))OH, Z1 = CONHCH3).
A. Ester metylowy kwasu 3/S/-azydo-2/R/-III-rz.-butylo-metylosililooksy-4-cykloheksylomasłowego.
Porcję 0,60 g estru metylowego indolo-2-karbonylo-Hisnor-C-Sta rozpuszczono w 5 ml dwumetyloformamidu i potraktowano kolejno w temperaturze 0°C 422 mg imidazolu i 523 mg III151 679 rz.butylodwumetylochlorosilanu. Mieszaninę pozostawiono w ciągu 18 godzin w temperaturze 25°C i dodano 211 mg imidazolu i 255 mg ΠΙ-rz.butylodwumetylochlorosilanu i mieszano w ciągu 1 godziny w temperaturze 25°C. Mieszaninę zatęźono, pozostałość rozpuszczono w octanie etylu, ekstrahowano 1 molarnym wodnym roztworem chlorku litowego, 1 n kwasem solnym i solanką, po czym wysuszono, przesączono i zatęźono. Otrzymano 900 mg jasnego oleju, który chromatografowano na 25 g żelu krzemionkowego, eluując 1 litrem mieszaniny 1:75 eteru i heksanu. Otrzymano 800 mg czystego produktu o Rf = 0,55 w mieszaninie 1:2 eteru i heksanu.
B. N-metyloamid kwasu 3/S/azydo-2/R/-III-rz.-butylodwumetylosililooksy-4-cykloheksylomasłowego.
725 mg produktu otrzymanego w części A rozpuszczono w metanolu, ochłodzono do temperatury 0°C, wysycono bezwodną metyloaminę i w zamkniętej kolbie mieszano w ciągu 5 godzin w temperaturze 40°C. Roztwór zatęźono, pozostałość odparowano z eterem i wysuszono. Otrzymano 642 mg bezbarwnego osadu o Rf = 0,18 w mieszaninie 1:2 eteru i heksanu.
C. N-metyloamid kwasu 3/S/-amino-2/R/-III-rz.-butylodwumetylosililoksy-4-cykloheksylomasłowego.
640 g produktu otrzymanego w części B rozpuszczono w 30 ml metanolu i 3 ml kwasu octowego i wstrząsano z 200 mg 10% palladu na węglu w ciągu 1 godziny w temperaturze 25°C, pod ciśnieniem wodoru około 340 kPa. Mieszaninę przesączono przez ziemię okrzemkową, przesącz zatęźono i pozostałość rozpuszczono w octanie etylu. Roztwór przemyto wodnym roztworem wodorowęglanu sodowego, suszono, przesączono i zatęźono. Otrzymano 550 mg bezbarwnego oleistego produktu, który stosowano w następnym etapie bez oczyszczania.
D. N-metyloamid eteru morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta/O-III-rz.-butylodwumetylosililowego/.
Z 250 mg surowego produktu otrzymanego w części C i 358 mg produktu z przykładu II C otrzymano 206 mg tytułowego związku w postaci jasnożółtego stałego produktu o Rf = 0,18 w octanie etylu oraz Rf = 0,7 w układzie D. HPLC: czas retencji 8,2 min. w mieszaninie 70:30 acetonitrylu i roztworu fosforanu o pH 2,1.
E. Ester metylowy morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta.
Porcję 200 mg produktu otrzymanego w części D mieszano w ciągu 30 minut w temperaturze 25°C w 3 n roztworu chlorowodoru w dioksanie. Mieszaninę następnie zatęźono, odparowano trzykrotnie z eterem etylowym i wysuszono. Otrzymano 155 g bladożółtego osadu o Rf = 0,48 w układzie D. HPLC: czas retencji 4,57 min. w mieszaninie 50:50 acetonitrylu i roztworu fosforanu o pH2,l.
Widmo PMR (częściowe), 300 MHz, DMSO-g6, (5, ppm: 0,82 (t, 3H, J = 6Hz, nakładający się na m 1-2H), 1,0-1,32 (m, ok. 10H), 1,4-1,9 (m), 2,54 (d, 3H, J = 6Hz, NCH3), 2,78 i 2,96 (dd, po 1H), 3,06-3,28 (m, ok. 4H), 3,42 (m, ok. 4H), 3,76 (pozorny d, 1H, J = ok. 1Hz), 4,11 (m, 2H), 4,28 (m, 1H), 6,62, 7,58 i 7,96 (d, po 1H), 7,06-7,3 (m, 5H).
Przykład IV. N-n-butyloamid morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta (wzór 1, Z= morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = n-butyl, X = cykloheksyl, W = CH)))OH, Z1=CONH /CH3/2-CH3/.
A. N-n-butyloamid kwasu 3/S/-azydo-2/R/-III-rz.-butylodwumetylosililooksy-4-cykloheksylomasłowego.
Porcję 800 g produktu z przykładu III A rozpuszczono W' 2 ml metanolu i 1 ml butyloaminy oraz mieszano w ciągu 18 godzin w temperaturze wrzenia. Następnie dodano 1 ml butyloaminy i znów mieszano w temperaturze wrzenia w ciągu 2 godzin. Mieszaninę zatęźono i pozostałość chromatografowano na 25 g żelu krzemionkowego, eluując mieszaninę 1:5 eteru etylowego i heksanu. Otrzymano 500 mg bezbarwnego produktu o konsystencji wosku o Rf = 0,1 w mieszaninie 1:5 eteru i heksanu oraz 240 mg odzyskanego wyjściowego związku.
B. N-n-butyloamid kwasu 3/S/-amino-2/R/-III-rz.-butylodwumetylosililooksy-4-cykloheksylomasłowego.
450 mg produktu z części A rozpuszczono w 30 ml metanolu i 3 ml kwasu octowego i wstrząsano z 220 mg palladu na węglu w ciągu 5 godzin. Mieszaninę przesączono przez ziemię okrzemkową, przesącz zatęźono, pozostałość odparowano w toluenie, rozpuszczono w octanie etylu, przemyto trzykrotnie wodnym roztworem wodorowęglanu sodowego, suszono nad siarczanem
151 679 magnezowym i odparowano. Otrzymano 360 mg bezbarwnego oleistego produktu, który stosowano bez oczyszczania w następnym etapie.
C. \-n-butyloamid eteru morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta-/O-III-rz.-butylodwumetylosil 'lowego/.
\ ie używając trójetyloaminy, z 355 mg produktu z części B i 300 mg produktu z przykładu IIC otrzymano 313 mg tytułowego związku w postaci bezbarwnego osadu o Rf = 0,8 w układzie D. HPLC: czas retencji 7,5 min. w mieszaninie 85:15 acetonitrylu i wody.
D. N-n-butyloamid morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta.
305 mg produktu z części C rozpuszczono w temperaturze 25°C w 3 ml 3,4 n roztworu chlorowodoru wdioksanie. Po upływie45 minut mieszaninęzatężono,pozostałość odparowano trzykrotnie z eterem etylowym i wysuszono. Otrzymano 239 mg beżowego osadu o Rf = 0,6 w układzie D. HPLC: czas retencji 10,2 min. w mieszaninie 50:50 acetonitrylu i roztworu fosforanu o pH 2,1.
Widmo PMR (częściowe), DMSO-d6,300 MHz, <5, ppm: 0,9 (tryplety, razem 6H, nakładające się na 1-2H, m), 1,0-1,85 (m, ok. 20H), 2,76 (dd, 1H), 2,9-3,5 (m), 3,74 (pozorny, d, 1H), J = ok. 1Hz), 4,14 (m, 2H), 4,27 (m, 1H), 6,60 (d, 1H), 7,05-7,3 (m, 5H), 7,58 (t, 1H), 7,98 (d, 1H).
PrzykładV. Ester izopropylowy morfolino-karbonylo-PheNvanor-C-Sta (wzórl, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = n-propyl, X = cykloheksyl, W — CH)))OH i Z1 — CO2 CH/CH3/2.
A. Chlorowodorek estru metylowego norwaliny.
Przez zawiesinę 2,0 g L-norwaliny (Chemical Dynamica) w 50 ml bezwodnego metanolu przepuszczono w ciągu 15 minut w temperaturze 0°C bezwodny chlorowodór. Otrzymany roztwór mieszano w ciągu 18 godzin w pokojowej temperaturze, po czym zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Otrzymany biały osad rekrystalizowano z mieszaniny etanolu i eteru etylowego i uzyskano 2,3 g pożądanego estru metylowego.
B. Ester metylowy N-/morfolinokarbonylo/-L-fenyloalanino-L-norwaliny.
Do roztworu 0,50 g N-/morfolinokarbonylo/-L-fenylo-alaniny i 0,26 g estru metylowego i L-norwaliny w 10 ml bezwodnego chlorku metylenu dodano 0,22 ml trójetyloaminy, 0,33 g 1hydroksybenzotriazolu i 0,38 g l-/3-dwumetyloaminopropylo/-3-etylokarbodwuimidu. Całość mieszano w pokojowej temperaturze w ciągu 16 godzin, po czym rozcieńczono 50 ml octanu etylu, przemyto 2 X 25 ml 0,1 n kwasu solnego i 2 X 25 ml 0,1 n roztworu wodorotlenku sodowego. Fazę organiczną suszono nad siarczanem magnezowym, przesączono i odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując 0,62 g surowego dwupeptydu.
C. N-/morfolinokarbonylo/-L-fenyloalanino-L-norwalina.
Do roztworu 0,62 g estru metylowego N-/morfolinokarbonylo/-L-fenyloalanino-L-norwaliny w 40 ml metanolu i 20 ml wody dodano 1,2 g węglanu potasowego. Całość mieszano w ciągu 60 godzin w temperaturze otoczenia, po czym zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem do otrzymania wodnego roztworu, który przemyto 3 X 50 ml eteru etylowego, zakwaszono 10 ml 4n kwasu solnego i ekstrahowano 3 X 25 ml chlorku metylenu. Połączone ekstrakty organiczne suszono nad siarczanem magnezowym, przesączono i zatężono, otrzymując 0,46 g surowego kwasu.
B. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPheNva-nor-C-Sta.
Do roztworu 0,13g N-/morfolinokarbonylo/-L-fenyloamino-L-norwaliny i 0,10g estru izopropylowego kwasu 2/R/-hydroksy-3/S/-amino-4-cykloheksylomasłowego w 5 ml bezwodnego chlorku metylenu dodano 0,055 ml trójetyloaminy, 0,060 g 1-hydroksybenzotriazolu i 0,075 g l-/3-dwumetyloamino/propylo/-3-etylokarbodwuimidu. Całość mieszano w temperaturze otoczenia w ciągu 16 godzin, po czym rozcieńczono 40 ml octanu etylu i przemyto 2 X 25 ml 0,1 n roztworu wodorotlenku sodowego. Fazę organiczną suszono nad siarczanem magnezowym, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość chromatografowano na żelu krzemionkowym, eluując mieszaninę 2:1 chlorku metylenu i etanolu. Otrzymano 0,17g (77%) czystego peptydu.
Widmo PMR, 300 MHz, CDC13, <5, ppm: 0,86 (m, 3H), 1,27 (d, J = 8Hz, 6H), 4,09 (m, 1H),
4,25 (m, 1H), 4,46 (m, 1H), 4,51 (m, 1H), 7,25 (m, 5H).
Przykład VI. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPhe-S-metylo-Cysnor-C-Sta (wzórl, Z= morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3SCH2-, X = cykloheksyl, W = CH))) OH i Z1 = CO2CH/CH3/2/.
151 679 9
A. Chlorowodorek estru izopropylowego kwasu 2/R/-hydroksy-3/S/-amino-4-cykloheksylomaslowego.
Przez chłodzony w łaźni lodowej roztwór 1,0 g kwasu N-III-rz.-butylooksykarbonylo-2/R/hydroksy-3/S/-amino-4-cykloheksylomasłowego w 50 ml izopropanolu przepuszczono w ciągu 20 minut bezwodny chlorowodór. Pozwolono następnie by temperatura roztworu wzrosła do pokojowej i mieszano w ciągu 16 godzin, po czym zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i suszono pod bardzo niskim ciśnieniem. Otrzymano 0,93 g pożądanego chlorowodorku estru aminy.
B. Chlorowodorek estru metylowego S-metylo-L-cysteiny.
Chłodzoną w łaźni lodowej zawiesinę 2,5 g S-metylo-L-cysteiny (Chemical Dynamica) w 25 ml bezwodnego metanolu nasyconego bezwodnym chlorowodorem do otrzymania klarownego roztworu. Pozwolono by temperatura roztworu wzrosła do temperatury otoczenia i mieszano w ciągu 20 godzin, po czym zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Otrzymano żółty osad, który rekrystalizowano z mieszaniny eteru etylowego i etanolu, uzyskując 3,0 g (87%) pożądanego chlorowodorku estru etylowego aminy.
C. Ester metylowy N-/morfolinokarbonylo/-L-fenyloalanino-S-metylo-L-cysteiny.
Do roztworu 0,96 g N-/morfolinokarbonylo/-L-fenyloalaniny i 0,55 g estru metylowego Smetylo-L-cysteiny w 50 ml bezwodnego chlorku metylenu dodano w temperaturze otoczenia 0,50 ml trójetyloaminy, 0,51 g 1-hydroksybenzotriazolu i 0,70 g chlorowodorku l-/3-dwumetyloaminopropylo/-3-etylokarbodwuimidu. Całość mieszano w ciągu 4 godzin, po czym rozcieńczono 100 ml octanu etylu i przemyto 2 X 35 ml 0,1 n kwasu solnego i 2 X 35 ml 0,1 n roztworu wodorotlenku sodowego. Fazę organiczną suszono nad siarczanem magnezowym, przesączono i odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Otrzymano 1,15 g pożądanego dwupeptydu w postaci stałego produktu.
D. N-/morfolinokarbonylo/-L-fenyloalanino-S-metylo-L-cysteina.
Do chłodzonego w łaźni lodowej roztworu 1,15 g estru metylowego N-/morfolinokarbonylo/L-fenyloalanino-S-metylo-L-cysteiny w 30 ml wody i 60 ml metanolu dodano 3,5 g węglanu potasowego. Całość mieszano w ciągu 15 minut w temperaturze 0°C i następnie w ciągu 4 godzin w temperaturze otoczenia. Mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostały wodny roztwór zakwaszono stężonym kwasem solnym i ekstrahowano 3 X 50 ml chlorku metylenu. Połączone ekstrakty organiczne suszono nad siarczanem magnezowym, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, otrzymując 1,0 g (89%) surowego kwasu.
E. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPhe-S-metylo-Cys-nor-C-Sta.
Do roztworu 0,43 g N-/morfolinokarbonylo/-L-fenyloalanino-S-metylo-L-cysteiny i 0,34 g estru izopropylowego kwasu 2/R/-hydroksy-3/S/-amino-4-cykloheksylomasłowego w 20 ml bezwodnego chlorku metylenu dodano 0,17 ml trójetyloaminy, 0,18 g hydroksybenzotriazolu i 0,23 g l-/3-dwumetyloaminopropylo/-3-etylokarbodwuimidu. Roztwór mieszano w ciągu 16 godzin w pokojowej temperaturze, po czym rozcieńczono 50 ml octanu etylu i przemyto 25 ml 0,1 n kwasu solnego i 25 ml 0,1 n roztworu wodorotlenku sodowgo. Fazę organiczną suszono nad siarczanem magnazowym, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość chromatografowano na żelu krzemionkowym, eluując mieszaninę 29:1 chlorku metylenu i etanolu. Otrzymano 0,42 g (62%) czystego peptydu 6.
Widmo PMR, 300 MHz, CDC13, δ, ppm: 1,30 (2d, 6H), 2,13 (s, 1H), 4,49 (m, 3H), 5,07 (m, IH),
7,25 (m, 5H).
Przykład VII. Keton etylowo-morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta (wzór 1, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = n-butyl, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1 = COCH2CH3).
A. 5/S/-Boc-amino-4/R/-benzylooksy-6-cykloheksylo-3-/R,S/-heksanol.
Porcję 700 g produktu z przykładu 5A opisu patentowego St.Zjedn.Am. nr 4 668 769 rozpuszczono w 5 ml eteru etylowego i w temperaturze 0°C dodano 1,45 ml 2,8 molarnego roztworu bromku etylomagnezowego w eterze etylowym. Po upływie 20 minut dodano jeszcze 650μ1 2,8 molarnego roztworu bromku etylomagnezowego i po upływie 30 minut do roztworu dodano 1 ml nasyconego roztworu chlorku amonowego. Mieszaninę rozcieńczono eterem, ekstrahowano 1 n kwasem solnym, wodorowęglanem sodowym i solanką, po czym suszono nad siarczanem magnezowym i zatężono. Otrzymano 530 mg gęstego oleistego produktu o Rf = 0,4 i 0,25 (układ A (1; 3).
151 679
B. 5/S/-Boc-amino-4/R/-benzylooksy-6-cykloheksylo-3-heksanon.
525 mg produktu z części A rozpuszczono w 5 ml eteru etylowego i w temperaturze 25°C dodano 1,0 ml roztworu kwasu chromowego (Org.Sym.5,310). Po upływie 1 godziny dodano eteru i roztwór przemyto 1 n roztworem wodorotlenku sodowego i solanką, suszono nad siarczanem sodowym, zatężono i pozostałość chromatografowano na żelu krzemionkowym, eluując mieszaninę 1: 7 eteru etylowego i heksanu. Otrzymano 250 mg bezbarwnego oleistego produktu o Rf X 0,6 w układzie A (1:3).
C. Chlorowodorek 5/S/-amino-4/R/-benzylooksy-6-cykloheksanu.
Porcję 245 g produktu z części B rozpuszczono w 3 ml 4n roztworu chlorowodorku w dioksanie, mieszano w ciągu 45 minut w temperaturze 25°C, zatężono, pozostałość odparowano z eterem etylowym i wysuszono. Otrzymano 190 mg bladożółtego piankowatego osadu o Rf = 0,58 w układzie C (płytkę z naniesioną próbą przed rozwinięciem poddano działaniu par amoniaku).
D. Eter benzylowy ketonu etylowo-morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta.
Z 95 mg produktu z części C i 142 mg produktu z przykładu II C, otrzymano 133 mg tytułowego związku w postaci bezbarwnego piankowatego osadu.
E. Keton etylowo-morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta.
120 mg produktu z części D rozpuszczono w 3 ml mieszaniny 2:1 metanolu i kwasu octowego i wstrząsano z 75 mg palladu na węglu pod ciśnieniem wodoru około 340 kPa, w ciągu 20 godzin w temperaturze 25°C. Mieszaninę przesączono przez ziemię okrzemkową, przesącz zatężono, odparowano 5 razy z toluenem i 5 razy z eterem etylowym i wysuszono. Otrzymano 100 mg jasnobeżowego osadu o Rf = 0,3 (żel krzemionkowy, octan etylu). HPLC: czas retencji 2,96 minut w mieszaninie 70: 30 acetonitrylu i buforu o pH 2,1.
Widmo PMR (częściowe), CDCI3 /300 MHz, δ, ppm: 0,88 i 1,09 (t, po 3H), 2,47 i 2,78 (dq, po 1H), 3,10 (m, 2H), 3,17i 3,64(m,po4H),4,13,4,16i4,98 (m,po 1H),4,52(m,2H), 5,17i 5,48 (d,po 1H), 7,1 -7,35 (m, protony aromatyczne).
Przykład VIII. N-metyloamid morfolinokarbonyloPhe-Hisnor-C-Sta (wzór 1, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = imidazol-4-izometyl, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1=CONHCH3).
A. Ester benzylowy dwu-BocHis.
Do roztworu 0,317 mola dwu-Bic-L-Histydyny w 800 ml bezwodnego dwumetyloformamidu dodano 43,9 g bezwodnego węglanu potasowego. Całość mieszano w łaźni lodowej i dodano 37,8 ml bromku benzylu, po czym pozwolono by temperatura doszła w ciągu nocy do 25°C. Mieszaninę przesączono ziemią okrzemkową, którą przemyto eterem etylowym, przesącz zatężono i pozostałość rozpuszczono w 700 ml octanu etylu. Roztwór octanowy przemyto 2X200 ml 1 molarnego roztworu chlorku litowego, dwukrotnie 4 molarnym roztworem chlorku litowego, 2X lOOml 1 n roztworu wodorotlenku sodowego, wodą i solanką, po czym suszono nad siarczanem magnezowym i zatężono. Stałą pozostałość mieszano silnie pod 500 ml heksanu, uzyskując krystaliczną masę, którą sproszkowano w moździerzu i przemyto na filtrze 2 X 100 ml heksanu w temperaturze 25°C,. Otrzymano 120,5 g produktu o temperaturze topnienia 99-99,5°C; o Rf = 0,35 w układzie A (1:1); skręcalność [a]25D = -6,4 (c= 1,09, CHCI3).
B. Dwuchlorowodorek estru benzylowego histydyny.
mg produktu z części A rozpuszczono w 400 ml zimnego chlorowodoru w dioksanie i otrzymaną zawiesinę mieszano w ciągu 24 godzin w temperaturze 25°C. Większość cieczy zdekantowano, pozostałość zatężono, wysuszono, przemyto trzykrotnie eterem etylowym i wysuszono. Otrzymano z ilościową wydajnością tytułową substancję w postaci bezbarwnego osadu. Skręcalność [a]25D wzrosła do +6,4 (c = 2,865, MeOH w ciągu 24 godzin) w Org.Prep,Proc. Inter., 255 (1970) podano [gt]25d = 6,54 w takich samych warunkach). Sposób opisany w niniejszych przykładach jest korzystniejszy od podanego uprzednio.
C. Ester benzylowy morfolinokarbonyloPheHis.
Z 1,37 g produktu z przykładu I C i 1,21 g produktu z części B niniejszego przykładu otrzymano 1,8 g surowego żółtego, piankowatego produktu. Materiał powyższy ucierano z eterem etylowym i wysuszono. Otrzymano 1,68 jasnożółtego piankowatego produktu, który stosowano dalej bez oczyszczania. HPLC: czas retencji 2,92 minut w mieszaninie 50:50 acetonitrylu i roztworu fosforanu o pH2,l.
151 679
D. Ester benzylowy morfolinokarbonyloPheHis/imBoc/.
Porcję 1,68 g produktu z części C rozpuszczono w 30 ml dioksanu i 15 ml wody i pH doprowadzono do 11 za pomocą 1 n roztworu wodnego wodorotlenku sodowego. Następnie dodano 850//1 dwuwęglanu dwu-III-rz.-butylu, utrzymując pH w zakresie 8-11 za pomocą roztworu wodorotlenku sodowego. Po upływie 45 minut dodano 450//1 dwuwęglanu dwu-III-rz.-butylu, utrzymując pH około 10,5. Po upływie łącznie 1,5 godziny pH doprowadzono do 5 za pomocą 1 n kwasu solnego i roztwór częściowo zatężono, po czym ekstrahowano 4X lOOml octanu etylu. Ekstrakty octanowe przemyto wodnym roztworem wodorotlenku sodowego i roztworem wodorowęglanu sodowego, suszono nad siarcznem sodowym i zatężono. Otrzymano 1,85 g oleistego, piankowatego produktu, który chromatografowano na żelu krzemionkowym, eluując w gradiencie stężenia 2%-8% w chlorku metylenu. Otrzymano 1,05 g bladożółtego piankowatego osadu o Rf = 0,13 (żel krzemionkowy, octan etylu). HPLC: czas retencji 3,10 minut w mieszaninie 70: 30 acetonitrylu i buforu/.
E. MorfolinokarbonyloPheHis.
Porcje 500 mg produktu z części D rozpuszczono w 25 ml metanolu i 2 ml kwasu octowego i wstrząsano z 250 mg 10% palladu na węglu pod ciśnieniem wodoru około 340 kPa, w ciągu 45 minut, w temperaturze 25°C. Mieszaninę przesączono przez ziemię okrzemkową, przesącz zatężono, odparowano trzykrotnie z toluenem i czterokrotnie z eterem etylowym i wysuszono. Otrzymano 423 mg bezbarwnego stałego produktu o Rf = 0,3 w układzie C.
F. N-metyloamid eteru TBDMS morfolinokarbonyloPheHis/imBoc/-nor-C-Sta.
Ze 140 mg produktu z przykładu III C i 185 mg produktu z przykładu VIII E otrzymano 223 mg tytułowego związku w postaci bezbarwnego piankowatego osadu. HPLC: czas retencji 9,95 minut, w mieszaninie 70: 30 acetonitrylu i buforu o pH 2,1.
C. N-metyloamid eter TBDMS morfolinokarbonyloPheHisnor-C-Sta.
Porcję 218 mg produktu z części F rozpuszczono w 3 ml metanolu w temperaturze 25°C i dodano 10 mg bezwodnego węglanu potasowego. Po upływie 1 godziny mieszaninę zatężono i otrzymano 193 mg bezbarwnego stałego produktu o Rf = 0,06 w układzie C.
H. Chlorowodorek N-metyloamidu morfolinokarbonyloPheHis-nor-C-Sta.
185 g produktu z części C rozpuszczono w 3 ml 4 n roztworu chlorowodorku w dioksanie i mieszano w ciągu 1 godziny w temperaturze 25°C, po czym mieszaninę zatężono i odparowano z eterem etylowym. Otrzymano 150 mg bezbarwnego osadu o Rf = 0,25 w układzie D (płytkę z naniesioną próbką przed rozwinięciem poddano działaniu par amoniaku). HPLC: czas retencji
1.83 min., w mieszaninie 1:1 acetonitrylu i roztworu fosforanu o pH2,l.
Widmo PMR (częściowe), DMSO-d6,250 MHz, <5, ppm: 2,58 (d, 3H), 3,90,4,12,4,27 i 4,58 (m, po 1H), 6,87,7,60,7,82 i 8,33 (d, po 1H), 7,13-7,34 (m, protony aromatyczne), 7,44 i 9,02 (s, po 1H).
Przykład IX. Ketonmorfolinokarbonylo-O-me-Tyr-Nlenor-Sta-etylowy(wzór 1,Z = morfolinokarbonyloamino, M = p-metoksyfenyl, R2 = n-butyl, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1 = COCH2CH3).
A. Ester benzylowy ketonu morfolinokarbonylo-O-MeTyrNlenor-C-Sta-etylowego.
Z 150 mg morfolinokarbonylo-O-MeTyrNle i 97 mg produktu z przykładu VII D otrzymano 140 mg bezbarwnego piankowatego produktu o Rf = 0,38 (żel krzemionkowy, octan etylu).
B. Keton morfolinokarbonylo-C-MeTyrNlenor-C-Sta-etylowy.
128 mg produktu z części A rozpuszczono w 3 ml metanolu i 1 ml kwasu octowego i wstrząsano ze 130 mg 10% palladu na węglu pod ciśnieniem wodoru około 340 kPa, w ciągu 18 godzin w temperaturze 25°C. Mieszaninę przesączono przez ziemię okrzemkową, zatężono i pozostałość odparowano pięć razy z toluenem i 5 razy z eterem etylowym. Po wysuszeniu otrzymano 115 mg bladożółtego stałego produktu i o Rf = 0,25 (żel krzemionkowy, octan etylu). HPLC: czas retencji 3,64 minut, w mieszaninie 70:30 acetonitrylu i roztworu fosforanu o pH 2,1.
Widmo PMR (częściowe), CDCI3, 300 MHz, <5, ppm: 0,90 i 1,11 (t, po 3H), 2,47 i 2,79 (dq, po 1H), 3,04 (m, 2H), 3,29 i 3,64 (m, po 4H), 3,80 (m, 3H), 4,13,4,16,4,25 i 4,35 (m, po 1H), 4,95,6,28 i 6,43 (d, po 1H), 6,84 i 7,12 (d, po 2H).
Przykład X. Keton morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta-metylowy (Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = n-butyl, X = cykloheksyl, W = CH)))OH, Z1 =COCH3).
A. 4/S/-soc-amino-3/H/-benzylooksy-5-cykloheksylo-2-pentanon.
151 679
Porcję 315 mg aldehydu 3/S/-III-rz.-butoksykarbonyloamino-2/R/-benzyloksy-4-cykloheksylomasłowego rozpuszczono w 4 ml eteru etylowego i w temperaturze 0°C dodano 530//1 1,9 molarnego roztworu bromku metylomagnezowego w eterze dwu-n-butylowym. Po upływie 20 minut dodano jeszcze 530//1 odczynnika Grignarda i po dalszych 10 minutach reakcję zatrzymano nasyconym roztworem chlorku amonowego i ekstrahowano eterem etylowym. Roztwór eterowy przemyto 1 n kwasem solnym, wodnym roztworem wodorowęglanu sodowego i solanką oraz suszono nad siarczanem sodowym i zatęźono. Otrzymano 580 mg żółtego oleistego produktu, który rozpuszczono w 5 ml eteru etylowego i dodano 1 ml roztworu kwasu chromowego. (Org.Syn.Coll.Vol., 5, 310). Po upływie 30 minut mieszaninę rozcieńczono eterem, przemyto 4X5ml 1 n roztworu wodorotlenku sodowego, suszono nad siarczanem magnezowym i zatęźono. Otrzymano 250 mg jasnożółtego oleistego produktu, który oczyszczano na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną eteru i heksanu. Otrzymano 125 bezbarwnego oleistego produktu o Rf = 0,24 w układzie Β (1:4).
B. Chlorowodorek 4/S/-amino-3/R/-benzylooksy-5-cykloheksylo-2-pentanonu.
Porcję 120 mg produktu z części A rozpuszczono w 3 ml 4n roztworu chlorodoworu w dioksanie i mieszano w ciągu 1,2 godziny w temperaturze 25°C. Mieszaninę zatęźono i pozostałość odparowano trzykrotnie z eterem i wysuszono. Otrzymano 100 mg bezbarwnego, piankowatego produktu o Rf = 0,22 w układzie C (płytkę z naniesioną próbką przed rozwinięciem poddano działaniu par amoniaku).
C. Eter benzylowy ketonu morfolinokarbonyloPheNle-nor-C-Sta-metylowego.
Z 95 mg produktu z części B niniejszego przykładu i 150 mg produktu z przykładu II C otrzymano 180 mg bladożółtego, piankowatego produktu o Rf = 0,30 (żel krzemionkowy, octan etylu).
D. Keton morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta-metylowy.
180 mg produktu z części C rozpuszczono w 3 ml metanolu i 1 ml kwasu octowego i wstrząsano w temperaturze 25°C, w ciągu 24 godzin ze 180 mg 10% palladu na węglu, pod ciśnieniem wodoru około 340 kPa. Mieszaninę przesączono, zatęźono, odparowano z toluenu i wysuszono. Otrzymano 160 mg bezbarwnego, piankowatego produktu, który chromatografowano na żelu krzemionkowym, eluując w gradiencie steężenia etanolu w chlorku metylenu. Otrzymano 55 mg bezbarwnego stałego produktu. HPLC: czas retencji 3,37 minut w mieszaninie 70: 30 acetonitrylu i roztworu fosforanu o pH2,l.
Widmo PMR (częściowe), CDCI3,300 MHz, ó,ppm: 0,86 (t, 3H), 2,17 (s, 3H), 3,05 i 3,09 (dd, po 1H), 3,24 i 3,59 (m, po 4H), 3,89, 4,08,4,15,4,47 i 5,55 (m, po 1H), 4,92,6,11 i 6,48 (d, po 1H), 7,13-7,35 (m, protony aromatyczne).
Przykład XI. N-metyloamid morfolinokarbonyloPhe-O-EtSer-nor-C-Sta (wzór 1, Z = morfolinokarbonyloamino, M - fenyl, R2 = C2H5OCH2, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1 = CON HCH3).
A. N-metyloamid eteru TBDMS-morfolinokarbonyloPhe-O-EtSernor-C-Sta.
Z 70 mg produktu z przykładu III C i 75 mg morfolinokarbonyloPhe-O-EtSer otrzymano 50 mg bezbarwnego stałego produktu.
B. N-metyloamid morfolinokarbonyloPhe-O-EtSernor-O-Sta.
Porcję 48 mg produktu z części A rozpuszczono w 2 ml 4n roztworu chlorowodoru w dioksanie i całość mieszano w ciągu 1 godziny w temperaturze 25°C. Mieszaninę zatęźono, pozostałość odparowano z eterem etylowym i wysuszono. Otrzymano 40 mg bezbarwnego osadu o Rf = 0,28 w układzie C. HPLC: czas retencji 3,46 minut, w mieszaninie 50:50 acetonitrylu i roztworu fosforanu o pH 2,1.
Widmo PMR (częściowe), DMSO-de, 300 MHz, <5, ppm: 1,12 (t, 2H), 2,57 (d, 3H), 2,81 i 3,03 (dd, po 1H), 3,20 (m, 4H), 3,45 (m), 3,78 i 4,13 (m, po 1H), 4,35 (m, 2H), 5,74,6,68,7,54 i 8,08 (d, po 1H), 7,12-7,35 (m, protony aromatyczne).
Przykład XII. Keton morfolinokarbonyloPheNle-nor-C-Sta-izoproplowy (wzór 1, Z = morolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = n-butyl, X — cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1 = CO CH/CH3/2).
A. 5/S/-Boc-amino-4/R/-benzylooksy-6-cykloheksylo-2-metylo-3-heksanon.
400 mg aldehydu 3/S/-III-rz.-butoksykarbonyloamino-2/R/-benzylooksy-4-cykloheksylomasłowego rozpuszczono w 3 ml eteru etylowego w temperaturze 0°C i dodano 1,17 ml 2,0
151 679 molarnego roztworu bromku izopropylomagnezowego w eterze etylowym. Po upływie 20 minut dodano jeszcze 0,6 ml odczynnika Grignarda i po 5 minutach 1 ml nasyconego roztworu wodnego wodorowęglanu sodowego, po czymprzemyto solanką, wysuszono nad siarczanem magnezowym i zatężono. Otrzymano 350 mg jasnego oleistego produktu, który rozpuszczono w 2 ml eteru etylowego i dodano 2 ml kwasu chromowego (Org.Syn.Coll.Vol.str.310). Po upływie 30 minut mieszaninę ekstrahowano eterem etylowym, ekstrakt przemyto wodnym roztworem wodorotlenku sodowego i solanką, po czym wysuszono i zatężono. Otrzymano 250 mg bladożółtego, oleistego produktu, który oczyszczono chromatograficznie na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną eteru etylowego i heksanu. Otrzymano 125 mg jasnożółtego oleistego produktu o Rf = 0,33 w układzie A (1:4).
B. Chlorowodorek 5/S/-amino-4/R/-benzylopksy-6-cykloheksylo-2-metylo-3-heksanu.
Porcję 120 mg produktu z części A rozpuszczono w 2 ml 4n roztworu chlorowodoru w dioksanie i całość mieszano w ciągu 1,2 godziny w temperaturze 25°C, po czym zatężono i pozostałość odparowano z eterem etylowym. Otrzymano 95 mg bezbarwnego osadu o Rf = 0,4, w układzie C (płytkę z naniesioną próbką przed rozwinięciem poddano działaniu par amoniaku).
C. Eter benzylowy ketonu morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta-izopropylowego.
Z 95 mg produktu z części B i 136 mg produktu z przykładu II C otrzymano 160 mg bezbarwnego, piankowatego produktu. HPLC: czas retencji 3,56 min., w mieszaninie 85:15 acetonitrylu i wody.
D. Keton morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta-izopropylowy.
155 mg produktu z części C rozpuszczono w 3 ml metanolu i 3 ml kwasu octowego i wstrząsano ze 155 mg 10% palladu na węglu, w ciągu 18 godzin w temperaturze 25°C, po czym przesączono przez ziemię okrzemkową, zatężono, pozostałość odparowano z toluenem i eterem etylowym. Po wysuszeniu otrzymano 100 mg bladożółtego stałego produktu o Rf = 0,40 (żel krzemionkowy, octan etylu).
Widmo PMR (częściowe), CDC13, 250 MHz, δ, ppm: 0,87 (t, 3H), 1,08 i 1,12 (d, po 3H), 3,09 (m, 2H), 3,62 (m, 4H), 4,15 (m, 1H), 4,32 (s, 1H), 4,99,6,38 i 6,51 (d, po 1H), 7,15-7,37 (m, protony aromatyczne).
Przykład XIII. Keton morfolinokarbonyloPheNle-nor-C-Sta-izobutylowy (wzórl, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = n-butyl, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1 = COCH2CH/CH3/2).
A. 6/S/-Boc-amino-5/R/-benzylooksy-6-cykloheksylo-2-metylo-4-heksanon.
Porcję 1,00 g aldehydu 3/S/-III-rz.-butylokarbonyloamino-2/R/-benzylooksy-4-cykloheksylomasłowego rozpuszczono w 10 ml eteru etylowego i w temperaturze 0°C dodano 1,6 ml molarnego eterowego roztworu chlorku izobutylomagnezowego. Po upływie 30 minut dodano jeszcze 3 ml odczynnika Grignarda i roztwór ogrzano do temperatury 25°C. Po upływie 1 godziny reakcję zatrzymano dodając roztwór wodny chlorku amonowego i ekstrahowano eterem etylowym. Ekstrakt eterowy przemyto solanką, suszono nad siarczanem sodowym i zatężono. Otrzymano 1,02 g jasnego oleistego produktu, który rozpuszczono w 20 ml eteru etylowego i dodano 5 ml kwasu chromowego /Org.Syn.Coli. Vol.5,310/. Całość mieszano w ciągu 1 godziny w temperaturze 0°C i następnie w ciągu 30 minut w temperaturze 25°C, po czym rozcieńczono eterem i przemyto 1 n roztworem wodorotlenku sodowego i solanki, suszono nad siarczanem magnezu i zatężono. Surowy produkt oczyszczono chromatograficznie na żelu krzemionkowym, eluując eterem i heksanem i otrzymano 440 mg bezbarwnego oleistego produktu o Rf = 0,33 w układzie Β (1:3).
B. Chlorowodorek 6/S/-amino-5/R/-benzylooksy-7-cykloheksylo-2-metylo-4-heksanonu.
Porcję 450 mg produktu z części A rozpuszczono w 3 ml 4n roztworu chlorowodorku w dioksanie i mieszano w ciągu 1,2 godziny w temperaturze 25°C, po czym zatężono, pozostałość trzykrotnie odparowano z eterem etylowym i wysuszono. Otrzymano 325 mg bezbarwnego stałego produktu o Rf = 0,29 w układzie C (płytkę z naniesioną próbką przed rozwinięciem poddano działaniu par amoniaku).
C. Ester benzylowy ketonu morfolinokarbonyloPheNle-nor-C-Sta-izobutylowego.
Ze 150 mg produktu z części B i 207 mg produktu z przykładu IIC otrzymano 280 mg bezbarwnego, piankowatego produktu.
151 679
D. Keton morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta-izobutylowy.
Roztwór 300 mg produktu z części C w 10 ml mieszaniny 1:1 metanolu i kwasu octowego wstrząsano pod ciśnieniem wodoru około 343 kPa w ciągu 18 godzin, z 300 mg 10% palladu na węglu w temperaturze 25°C. Mieszaninę przesączono przez ziemię okrzemkową, przesącz zatężono i odparowano z toluenem. Pozostałość chromatografowano na żelu krzemionkowym, eluując mieszaninę etanolu i chlorku metylenu w gradiencie stężenia etanolu. Otrzymano 180 mg bezbarwnego produktu o Rf = 0,31 (żel krzemionkowy, octan etylu). HPLC: czas retencji 4,40 minut, w mieszaninie 70: 30 acetonitrylu i roztworu fosforanu o pH 2,1.
Widmo PMR (częściowe), CDCI3,300 MHz, δ, ppm: 0,84 /t, 3H/, 0,90 i 0,92 /d, po 3H/, 2,10 /septet, 1H/, 2,38 i 2,53 /dd, po 1H/, 3,04 /m, 2H/, 3,26 i 3,58 /m, 4H/, 4,06 /s, 1H/, 4,42, 4,52 i 4,60 /m, po 1H/, 5,26, 6,57 i 7,00 /d, po IH/, 7,1-7,3 /m, protony aromatyczne/.
Przykład XIV. Keton morfolinokarbonyloPhe-S-MeCys-nor-C-Sta-izobutylowego (wzór 1, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3SCH2, X = cykloheksyl, W = CH))) OH i Z1 =COCH2CH/CH3/2).
A. Eter benzylowy ketonu morfolinokarbonyloPhe-S-MeCysnor-C-Sta-izobutylowego.
Ze 120 mg produktu z przykładu XIIIB i 129 mg Mor-Phe-SmeCys otrzymano 114 mg bezbarwnego proszku o Rf = 0,58 w układzie C.
B. Keton morfolinokarbonyloPhe-S-MeCysnor-C-Sta-izobutylowy.
Do roztworu 95 mg produktu z przykładu XIV w 1,0 ml kwasu mrówkowego dodano 100 mg czerni palladowej (Alfa Co.). Całość mieszano w ciągu nocy, po czym przesączono przez ziemię okrzemkową, zatężono i pozostałość odparowano z toluenu i wysuszono. Otrzymano 97mg brunatnego oleistego produktu, który oczyszczano chromatograficznie na żelu krzemionkowym, eluując w gradiencie stężenia etanolu w chlorku metylenu. Otrzymano 23,5 mg bezbarwnego proszku o Rf = 0,65 w układzie C. HPLC: czas retencji 3,65 minut, w mieszaninie 70: 30 acetonitrylu i roztworu fosforanu o pH2,l.
Widmo PMR (częściowe), CDC13,300 MHz, δ, ppm: 0,90 i 0,02 /d, po 3H/, 2,10 /s, 3H/, 2,14 /septet, m/, 2,38,2,56,2,65,2,92,3,00 i 3,14/dd, po 1H/, 3,14-3,37 /m/, 3,60 /m, 4H/, 3,97,4,05 i 4,65 /m, po 1H/, 4,41-4,56 /m, 2H/, 6,67 i 6,86 /d, po 1H/, 7,14-7,36 /m, protony aromatyczne/.
Przykład XV. Ester izopropylowy BocPhe-S-MeCysnor-C-Sta (wzórl, Z = III-rz./CH3/3COCONH, M = fenyl, R2 = CH3SH2, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1=CO2CH /CH3/2/. '
A. BocPhe-S-MeCys.
Do roztworu 6,26 g S-metylocysteiny w 65 ml nasyconego roztworu wodnego wodorowęglanu sodowego dodano w temperaturze 25°C 35 ml czterowodorofuranu, a następnie jednorazowo 12,0 g estru hydroksysukcynioidowego N-Boc-L-fenyloalaniny. Po upływie 30 minut roztwór przeniesiono do rozdzielacza i przemyto dwukrotnie octanem etylu. Dodano następną porcję octanu etylu i pH doprowadzono do 1,1 za pomocą kwasu 6 n kwasu solnego. Warstwę organiczną oddzielono i wodną ekstrahowano cztery razy octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto dwukrotnie 1 n kwasem solnym oraz solanką, po czym suszono nad siarczanem magnezowym i zatężono. Otrzymano 12,0g bezbarwnego, piankowatego produktu.
B. Ester izopropylowy BocPhe-SmeCysnor-C-Sta.
Do roztworu 1,0 g estru izopropylowego nor-C-Sta w 20 ml chlorku metylenu dodano kolejno:
1,57 g (1,0 równoważnik) produktu z przykładu XXXVIIIA, 945 mg (1,5 równoważnika) wodzianu hydroksybenzotriazolu i 788 mg (1,0 równoważnik) chlorowodorku l-/3-dwumetyloaminopropylo/-3-etylokarbodwuimidu /DDC/. Całość mieszano w łaźni lodowej, pozwalając by w ciągu nocy temperatura doszła do 18°C. Mieszaninę zatężono, pozostałość rozpuszczono w octanie etylu i roztwór przemyto dwukrotnie 1 n kwasem solnym, dwukrotnie 1 n roztworem wodorotlenku sodowego i jeden raz solanką. Po wysuszeniu nad siarczanem magnezowym i zatężeniu otrzymano bezbarwny stały produkt, który oczyszczano chromatograficznie na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną octanu etylu i heksanu. Otrzymano 1,85 g tytułowego związku w postaci bezbarwnego proszku o Rf = 0,60 w układzie C.
Widmo PMR (częściowe), CDCI3,300 MHz, δ, ppm: 0,94 /m/, 1,29 i 1,30 /d, po 3H/, 1,39 /s, 9H/,2,13/s, 3H/,2,64,2,98,3,03 i 3,15/dd,po lH/,4,09/d, 1H/,4,30-4,50/m, 1H/, 5,07/septet, 1H/, 6,66 /m, 1H/, 6,86 /d, 1H/, 7,16-7,36 /m, protony aromatyczne/.
151 679
Przykład XVI. Ester izopropylowy 4-Boc-piperazyno-karbonyloPhe-S-MeCysnor-C-Sta (wzórl, Z = 4-Boc-piperazyno-karbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3SCH2-, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1 = CO2CH/CH3/2).
A. Ester metylowy 4-Boc-piperazynokarbonyloPhe-S-MeCys.
Stosując sposób z przykładu XV, z 245 mg estru metylowego S-metylocysteiny i 500 mg Boc-piperazynokarnonylo-L-fenyloalaniny otrzymano 547 mg bezbarwnego piankowatego produktu, który stosowano bez dalszego oczyszczania.
B. 4-Boc-piperazynokarbonyloPhe-S-MeCys.
Do roztworu 467 mg produktu z części A w 1 ml dioksanu i 0,5 ml wody dodano w temperaturze 0°C 33 mg wodorotlenku litowego. Po upływie 2,5 godzin mieszaninę zatężono, pozostałość rozpuszczono w wodzie i otrzymany roztwór ekstrahowano eterem etylowym. Do warstwy wodnej dodano octan etylu i pH doprowadzono do 1 za pomocą ln kwasu solnego, po czym ekstrahowano czterokrotnie octanem etylu, ekstrakty przemyto wodą i wysuszono nad siarczanem magnezu. Otrzymano 417 mg bezbarwnego stałego produktu.
Przykład XVII. Ester izopropylowy piperazynokarbonyloPhe-S-MeCysnor-C-Sta (wzór 1, Z = piperazynokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3SCH2, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1 = CO2CH/CH3/2).
Roztwór 33 mg produktu z przykładu XVI rozpuszczono w 2 ml 4 n roztworu chlorowodorku w dioksanie i mieszano w ciągu 50 minut w temperaturze 25°C, po czym mieszaninę zatężono i pozostałość odparowano z eterem etylowym. Otrzymano 31 mg białawego proszku o Rf = 0,2 w układzie C (płytkę z naniesioną próbką przed rozwinięciem poddano działaniu par amoniaku). HPLC: czas retencji 2,98 minut, w mieszaninie 50:50 acetonitrylu i roztworu fosforanu o pH 2,1.
Widmo PMR (częściowe), DMSO-d6,250 MHz, <5, ppm: 1,18 i 1,20 /d, po 3H/, 2,10 /s, 3H/, 4,00 i 4,21 /s, po 1H/, 4,40 /m, 2H/, 4,85 /septet, 1H/, 5,35,6,90,7,63 i 8,22 /d, po 1H/, 7,13-7,33 /m, protony aromatyczne/.
Przykład XVIII. Ester izopropylowy 4-hydroksypiperydynokarbonyloPhe-S-MeCysnorC-Sta (wzór 1, Z = hydroksypiperydynokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3SCH2-, C = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1 = CO2CH/CH3/2/).
Roztwór 150 mg estru izopropylomorfolinokarbonyloTyr-S-MeCysnor-C-Sta i 40μΐ trójmetyloaminy w 0,8 ml chlorku metylenu o temperaturze 0°C dodano do schłodzonego do temperatury O^C roztworu 49 mg karbonylodwuimidazolu i 20 mg imidazolu w 0,3 ml chlorku metylenu. Całość mieszano w ciągu 1 godziny w temperaturze 0°C, a następnie dodano roztwór 25 mg 4hydroksypiperydyny w 0,3 ml chlorku metylenu i mieszano w ciągu 1,5 godziny w temperaturze 0°C i w ciągu 20 godzin w temperaturze 20°C. Mieszaninę rozcieńczono octanem etylu, przemyto dwukrotnie 1 n kwasem solnym i solanką, suszono nad siarczanem magnezowym, zatężono i oczyszczano chromatograficznie na żelu krzemionkowym. Otrzymano 26,1 mg bezbarwnego, piankowatego produktu o Rf = 0,22 (żel krzemionkowy, octan etylu). HPLC: czas retencji 3,10 minut, w mieszaninie 60:40 acetonitrylu i roztworu fosforanu o pH 2,1.
Widmo PMR (częściowe), CDCI3,250 MHz, <5,ppm: 1,27 i l,29/d,po 3H/,2,10/s, 3H/, 2,73 i 3,30 /dd, po IH/, 3,03 /m, 3-4H/, 3,58 /m, 2H/, 3,87 /m, IH/, 4,10 /m, IH/, 4,45 /m, 3H/, 4,82 /d, IH/, 5,08 /septet, IH/, 6,91 i 7,09 /d, po IH/, 7, 19-7,40 /m, protony aromatyczne/.
Przykład XIX. Ester metylowy morfolinokarbonylo-PheLeunor-C-Sta (wzór 1, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH2CH/CH3/2, X = cykloheksyl, W = CH)))0H i Z1 = CO2CH3).
A. Chlorowodorek estru metylowego nor-C-Sta.
Roztwór 0,15 g estru metylowego Boc-nor-C-Sta w 4 ml 4 n chlorowodoru w dioksanie mieszano w ciągu 1 godziny w pokojowej temperaturze. Mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i otrzymano 0,15 g białawego stałego produktu, który stosowano bez dalszego oczyszczania.
Widmo PMR, DMSO-d6, 300MHz, δ, ppm: 3,65 /s, 3H/, 4,17 /m, 3H/, 6,47 /d, IH, J = 4Hz/.
B. Ester metylowy morfolonokarbonyloPheLeu.
Do roztworu 0,30 g morfolinokarbonyloPhe i 0,22 g chlorowodorku LeuCMe w 5 ml bezwodnego chlorku metylenu dodano kolejno 0,12g trójmetyloaminy, 0,18 g HBT i 0,24 g DCC. Całość mieszano w ciągu 20 godzin w pokojowej temperaturze, po czym przesączono przez ziemię
151 679 okrzemkową i przemyto 2X10 ml 0,1 n roztworu wodorotlenku sodowego. Fazę organiczną suszono nad siarczanem magnezowym, przesączono i chromatografowano na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną 2:1 octanu etylu i heksanu. Otrzymano 0,43 g czystego produktu.
Widmo PMR, CDC13, 300 MHz, <5, ppm: 0,89 /d, IH, J = 7Hz/, 3,71 /s, 3H/, 4,48 /m, IH/, 4,57 /m, IH/, 6,25 /d, IH, J = 7Hz/.
C. MorfolinokarbonyloPheLeu.
Do roztworu 0,43 g morfolinokarbonyloPheLeuOMe w 10 ml metanolu dodano 0,1 g węglanu potasowego i całość mieszano w ciągu 24 godzin w temperaturze pokojowej. Mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem do objętości 10 ml i zakwaszono 1 n kwasem solnym, a następnie ekstrahowano 3 X 25 ml chlorku metylenu. Połączone ekstrakty suszono nad siarczanem magnezowym, przesączono i zatężono. Otrzymano surowy kwas, który stosowano bez dalszego oczyszczania.
Widmo PMR, CDC13,300 MHz, <5,ppm: 0,87 /2d, 6H/, 4,45 /m, IH/,4,65 /m, IH/, 5,36/d, IH, J = 7Hz/.
D. Ester metylowy morfolinokarbonyloPheLeunor-C-Sta.
Stosując opisany uprzednio sposób, 96 mg morfolinokarbonyloPheLeu skondensowano z 80 mg chlorowodorku nor-C-Sta-OMe w obecności DCC. Surowy produkt chromatografowano na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną 29:1 chlorku metylenu i etanolu. Otrzymano 68 mg czystego produktu.
' Widmo PMR, CDC13, 300 MHz, <5, ppm: 0,85 /2d, 6H/, 3,72 /s, 3H/, 4,28 /m, IH/, 4,41 /m, 2H/.
Przykład XX. Ester metylowy morfolinokarbonyloPheHetnor-C-Sta (wzór 1, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3S/CH2/2-, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1 = CO2CH3).
A. Ester metylowy morfolinokarbonyloPheHet.
Stosując sposób z przykładu XIX, 0,30 g morfolinokarbonyloPhe sprzęgnięto z 0,24 g chlorowodorku metioninoOMe w obecności DCC. Surowy produkt chromatografowano na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną 2:1 octanem etylu i heksanu. Otrzymano 0,36g czystego dwupeptydu.
Widmo PMR, CDC13, 300 MHz, δ, ppm: 2,05 /s, 3H/, 3,72 /s, 3H/, 4,57 /m, 2H/.
B. MorfolinokarbonyloPheMet.
Stosując postępowanie z przykładu XIX, 0,36 g estru metylowego morfolinokarbonyloPheMet poddano hydrolizie, otrzymując 0,3 surowego kwasu, który stosowano dalej bez oczyszczania.
Widmo PMR, CDCls, 300 MHz, <5, ppm: 2,01 /s, 3H/, 2,44 /m, IH/, 4,61 /m, IH/.
C. Ester metylowy morfolinokarbonyloPheMetnor-C-Sta.
Stosując postępowanie z przykładu XIX, 0,10g morfolinokarbonyloPheMet sprzęgnięto z 0,080 g chlorowodorku nor-C-Sta w obecności DCC (przykład LV). Surowy produkt chromatografowano na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną 29: 1 chlorku metylenu i etanolu. Otrzymano 59 mg czystego produktu i 32 mg zanieczyszczonego produktu.
Widmo PMR, CDC13, 300 MHz, <5, ppm: 1,98 /s, 3H/, 3,74 /s, 3H/, 4,38 /m, 2H/, 4,46 /m,
IH/.
Przykład XXI. Ester metylowy morfolinokarbonyloPhe-S-MeCysnor-C-Sta (wzór 1, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3SCH2, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1=CO2CH3).
A. Ester metylowy morfolinokarbonyloPhe-S-MeCys.
Stosując sposób z przykładu XIX, 0,96 g morfolinokarbonyloPhe sprzęgnięto z 0,55 g chlorowodorku S-Me-Cys-OMe stosując rozpuszczalny w wodzie DEC razem z trójetyloaminą i HBR. Mieszaninę reakcyjną rozcieńczono 100 ml octanu etylu, przemyto 3 X 35 ml 0,1 n kwasu solnego oraz 2 X 35 ml 0,1 n roztworu wodorotlenku sodowego. Fazę organiczną suszono nad siarczanem magnezowym, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Otrzymano 1,15 g surowego produktu o czystości dostatecznej dla dalszego przerobu.
Widmo PMR, CDC13, 300 MHz, <5, ppm: 2,00 /s, 3H/, 3,72 /s, 3H/, 4,58 /m, IH/, 4,65 /m,
IH/.
151 679
B. MorfolinokarbonyloPhe-S-MeCys.
Stosując sposób z przykładu XIX, z tą tylko różnicą, że mieszaninę początkowo mieszano w ciągu 15 minut w temperaturze 0°C, a następnie w pokojowej temperaturze, 115 g estru metylowego morfolinokarbonyloPhe-S-MeCys poddano hydrolizie. Otrzymano 1,0 g surowego produktu, który stosowano dalej bez oczyszczania.
Widmo PMR, CDC13, 300 MHz, <5, ppm: 2,03 /s, 3H/, 4,63 /m, 1H/, 4,77 /m, 1H/.
C. Ester metylowy morfolinokarbonyloPhe-S-Cysnor-C-Sta.
Stosując postępowanie z przykładu LV, 130 mg morfolinokarbonyloPhe-S-MeCys sprzęgnięto z 69 mg chlorowodorku nor-C-StaOMe w obecności DCC. Surowy produkt chromatografowano na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną 19:1 chlorku metylenu i etanolu. Otrzymano 58 mg czystego produktu.
Widmo PMR, CDC13, 300 MHz, δ, ppm: 2,06 /s, 3H/, 3,72 /s, 3H/, 4,40 /m, 2H/.
Przykład XXII. Ester metylowy morfolinokarbonyloPhe-S-EtCysnor-C-Sta (wzór 1, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3CH2SCH2-, X = cykloheksyl, W = CH)))0H i Z1=CO2CH3).
A. Ester metylowy morfolinokarbonyloPhe-S-EtCys.
Stosując sposób z przykładu XIX, 0,20 g morfolinokarbonyloPhe poddano reakcji sprzęgania z 0,15 g chlorowodorku S-EtCysOMe. Surowy produkt chromatografowano na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną 3:1 octanu etylu i heksanu. Otrzymano 0,20 g czystego produktu.
Widmo PMR, CDC13,300 MHz, <5, ppm: 2,16 /t, 3H, J = 7Hz/, 2,45 /q, 2H, J = 7Hz/, 3,73 /s, 3H/, 4,64 /m, 2H/.
B. MorfolinokarbonyloPhe-S-EtCys.
Stosując sposób z przykładu XIX, 0,20 g estru metylowego morfolinokarbonyloPhe-S-EtCys hydrolizowano i otrzymano 0,11 g surowego kwasu, który stosowano dalej bez oczyszczania.
Widmo PMR, CDC13, 300 MHz, <5, ppm: 2,16 /t, 3H, J = 7Hz/, 2,50 /q, 2H, J = 7Hz/, 4,64 /m, 1H/, 4,79 /m, 1H/.
C. Ester metylowy morfolinokarbonyloPhe-S-EtCysnor-C-Sta.
Stosując postępowanie z przykładu XIX, 0,11 g morfolinokarbonyloPhe-S-EtCys sprzęgano z 75 mg chlorowodorku nor-C-StaOMe w obecności DCC. Surowy produkt oczyszczano chromatograficznie na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną 29:1 chlorku metylenu i etanolu.
Widmo PMR, CDC13, 300 MHz, <5, ppm: 2,21 /t, 3H, J = 7Hz/, 2,50 /m, 2H/, 3,75 /s, 3H/, 4,40 /m, 2H/.
Przykład XXIII. Ester metylowy morfolinokarbonyloPheNva-nor-C-Sta (wzórl, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = n-propyl, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1 = CO2CH3).
A. Ester metylowy morfolinokarbonyloPheNva.
Stosując sposób z przykładu XIX, 0,20 g morfolinokarbonyloPhe sprzęgano z 0,10 g chlorowodorku NvaOMe w obecności DCC. Otrzymany surowy produkt chromatografowano na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną 4: 1 octanu etylu i heksanu. Otrzymano 0,22 g czystego produktu.
Widmo PMR, CDCls, 300 MHz, <5, ppm: 0,92 /t, 3H, J = 7Hz/, 3,65 /s, 3H/, 4,42 /m, 1H/, 4,54 /m, 1H/.
B. MorfolinokarbonyloPheNva.
Stosując sposób z przykładu XIX, 0,22 g estru metylowego morfolinokarbonyloPheNva hydrolizowano i otrzymano 0,17g surowego kwasu, który dalej stosowano bez oczyszczania.
Widmo PMR, CDCls, 300 MHz, <5, ppm: 0,89 /t, 3H, J = 7Hz/, 4,46 /m, 1H/, 4,62 /m, 1H/.
C. Ester metylowy morfolinokarbonyloPheNva-C-Sta.
Stosując sposób z przykładu XIX, 0,10 g morfolinokarbonyloPheNva sprzęgano z 0,075 g chlorowodorku nor-C-StaOMe w obecności DCC. Otrzymany surowy produkt oczyszczano chromatograficznie na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną 29:1 chlorku metylenu i etanolu. Otrzymano 0,12 g czystego produktu.
Widmo PMR, CDC13, 300 MHz, δ, ppm: 0,97 /t, 3H, J = 7Hz/, 3,72 /m, 3H/, 4,29 /m, 1H/, 4,40 /m, 1H/, 4,53 /m, 1H/.
151 679
Przykład XXIV. n-Propyloamid morfolinokarbonylo-PheNlenor-C-Sta (wzór 1, Z — morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = n-butyl, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1 = CONH /CH2/ 2CH3).
A. n-propyloamid Boc-nor-S-Sta.
Do roztworu 100 mg Noc-nor-C-Sta i 21 mg n-propyloaminy w 5 ml bezwodnego chlorku metylenu dodano 54 mg HBT i 70 mg DEC i całość mieszano w ciągu 20 godzin w pokojowej Roztwór rozcieńczono 200 ml octanu etylu i przemyto kolejno 2X20 ml wody, 2X20 ml 0,1 n solnego oraz 2X20 ml 0,1 n roztworu wodorotlenku sodowego. Fazę organiczną suszono nad siarczanem magnezowym, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Otrzymano 142 mg surowego amidu, który stosowano dalej bez oczyszczania.
Widmo PMR, CDC13, 300 MHz, <5, ppm: 0,91 /t, 3H, J = 7Hz/, 1,40 /s, 9H/, 3,85 /m, 1H/, 4,04 /d, 1H, J = 3Hz/.
B. Chlorowodorek n-propyloamidu nor-C-Sta.
139 mg n-propyloamidu Boc-nor-C-Sta w 3 ml 4 n chlorowodoru w dioksanie mieszano w 3 godzin w pokojowej temperaturze. Roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i otrzymano surowego produktu, który stosowano dalej bez oczyszczania.
Widmo PMR, DMSO-d6,300 MHz, <5, ppm: 0,85 /t, 3H, J = 7Hz/, 3,06 /m, 2H/, 4,04 /d, 1H, J = 3Hz/.
C. n-Propyloamid morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta.
135 mg morfolinokarbonyloPheNle sprzęgano z 96 mg chlorowodorku n-propyloamidu norC-Sta w obecności DEC. Surowy produkt chromatografowano na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną 9:1 chlorku metylenu i metanolu. Otrzymano 113 mg czystego produktu.
Widmo PMR, CDC13, 300 MHz, <5, ppm: 0,90 /t, 3H, J = 7Hz/, 4,08 /d, 1H, J = 7Hz/, 4,32 /m, 2H/, 4,80/m, 1H/.
Przykład XXV. Izopropyloamidmorfolinokarbonylo-PheNlenor-C-Sta(wzór 1,Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = n-butyl, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1 = CON HCH/CH3/?).
A. Izopropyloamid Boc-nor-C-Sta.
Stosując sposób z przykładu XIX, 29 mg izopropyloaminy sprzęgano z 100 mg Noc-nor-C-Sta w obecności DDC. Surowy produkt chromatografowano na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną 9:1 chlorku metylenu i metanolu. Otrzymano 75 mg czystego amidu.
Widmo PMR, CDC13,300 MHz, <5, ppm: 1,11 /d, 3H, J = 5Hz/, 1,12 /d, 3H, J = 5Hz/, 1,37 /s, 9H/, 3,82 /m, 1H/, 3,97 /m, 1H/, 4,03 /m, 1H/.
B. Chlorowodorek izopropyloamidu nor-C-Sta.
Grupę ochronną z 62 mg izopropyloamidu Boc-nor-C-Sta usuwano mieszając w ciągu 3 godzin w 2 ml 4n roztworu chlorowodoru w dioksanie. Roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i otrzymano 52 mg surowego chlorowodorku w postaci białego osadu, który stosowano dalej bez oczyszczania.
Widmo PMR, DMSO-d6,300MHz, <5, ppm: 1,10 /m, 6H/, 3,92 /m, 1H/, 3,98 /m, 1H/.
C. Izopropyloamid morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta.
Stosując sposób z przykładu XIX, 48 mg morfolinokarbonyloPheNle sprzęgano z 48 mg chlorowodorku izopropyloamidu nor-C-Sta w obecności DCC. Surowy produkt chromatografowano na żelu krzemionkowym, eluując mieszaniną 19:1 chlorku metylenu i etanolu i otrzymując 60 mg czystego związku.
Widmo PMR, CDCl3,300 MHz, <5, ppm: 1,09 /d, 6H, J = 6Hz/, 4,00 /m, 1H/, 4,03 /m, 3H/, 4,33 /m, 2H/.
Przykład XXVI. Izobutyloamid morfolinokarbonylo-PheNlenor-C-Sta (wzórl, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = n-butyl, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1 = CON HCH2/CH/CH3/2).
A. Izobutyloamid Boc-nor-C-Sta.
Stosując sposób z przykładu XIX, 49μΐ izobutyloamidu sprzęgano z 100 mg izobutyloamidu Boc-nor-C-Sta w obecności DCC. Surowy produkt oczyszczano chromatograficznie, eluując mieszaninę 9:1 chlorku metylenu i metanolu. Otrzymano 75 mg czystego produktu.
151 679 19
Widmo PMR, CDC13, 300 MHz, <5, ppm: 0,89 /d, 6H, J = 6Hz/, 1,39 /s, 9H/, 3,83 /s, 1H/, 4,04/m, 1H/.
B. Chlorowodorek izobutyloamidu nor-C-Sta.
Grupę ochronną z 173 mg izobutyloamidu Boc-nor-C-Sta usuwano tak jak w przykładzie XXV i otrzymano 170 mg surowej soli, którą stosowano bez oczyszczania.
Widmo PMR, DMSO-de, 300 MHz, <5, ppm: 0,85 /d, 6H, J = 6Hz/, 2,93 /m, 2H/, 4,03 /m,
1H/.
C. Izobutyloamid morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta.
Stosując sposób z przykładu XIX, 235 mg morfolinokarbonyloPheMle sprzęgano z 100 mg chlorowodorku izobutyloamidu nor-C-Sta w obecności DCC. Surowy produkt chromatografowano (żel krzemionkowy, mieszanina 9:1 chlorku metylenu i metanolu) i otrzymano 152 mg czystego związku.
Widmo PMR, CDC13, 300 MHz, <5, ppm: 0,87 /d, 6H, J = 6Hz/, 4,08 /d, 1H, J = 3Hz/, 4,32 /m, 2H/.
Przykład XXVII. N-metylo-N-izopropyloamid morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta (wzór 1, Z — morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = n-butyl, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1 = CON/CH/CH3/2/.
A. N-metylo-N-izopropyloamid Boc-nor-C-Sta.
Stosując sposób opisany w przykładzie XIX, 44 mg N-metylo-N-izopropyloaminy sprzęgano z 120 mg Boc-nor-C-Sta w obecności DCC. Surowy produkt chromatografowano (mieszanina 39:1 chlorku metylenu i metanolu) i otrzymano 56 mg czystego związku.
Widmo PMR, CDC13, 300 MHz, δ, ppm: 1,40 /s, 9H/, 2,89 /s, 3H/, 4,74 /m, 1H/.
B. Chlorowodorek N-metylo-N-izopropyloamidu nor-C-Sta.
Stosując sposób z przykładu XXV, usuwano grupę ochronną z 56 mg N-metylo-N-izopropyloamidu Boc-nor-C-Sta. Otrzymano 52 mg surowej soli, którą dalej stosowano bez oczyszczania.
Widmo PMR, DMSO-de, 300 MHz, <5, ppm: 3,00 /s, 3H/, 4,30 /s, 1H/.
C. N-metylo-N-izopropyloamid morfolinokarbonyloPheMlenor-C-Sta.
Stosując sposób z przykładu XIX, 73 mg morfolinokarbonyloPheNle sprzęgano z 52 mg chlorowodorku N-metylo-N-izopropyloamidu nor-C-Sta w obecności DCC. Surowy produkt oczyszczano chromatograficznie (19: 1, chlorek metylenu: metanol) i otrzymano 99 mg czystego związku.
Widmo PMR, CDCI3, 300 MHz, <5, ppm: 2,84 /s, 3H/, 4,12 /m, 1H/, 4,40 /m, 1H/, 4,53 /m,
1H/.
Przykład XXVIII. N-metylo-N-izobutyloamid morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta (wzór 1, Z — morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = n-butyl, X — cykloheksyl, W = CH)))OH, Z1 = CCN/CH3/CH2CH/CH3/2).
A. N-metylo-N-izobutyloamid Boc-nor-C-Sta.
Stosując sposób z przykładu XIX, 56 mg N-metylo-N-izobutyloaminy sprzęgano z 128 mg Boc- nor-C-Sta w obecności DCC. Surowy produkt chromatografowano (9:1 chlorek metylenu, metanol) i otrzymano 130 mg czystego związku.
Widmo PMR, CDC13, 300 MHz, <5, ppm: 1,38 /s, 9H/, 3,03 /s, 3H/, 4,28 /m, 1H/.
B. Chlorowodorek N-metylo-N-izopropyloamid nor-C-Sta.
Stosując postępowanie z przykładu XIXC, z 123 mg N-metylo-N-izobutyloamidu Boc-nor-CSta usuwano grupę ochronną i otrzymano 118 mg surowej soli, którą stosowano dalej bez oczyszczania.
Widmo PMR, DMSO-de, 300 MHz, δ. ppm: 3,67 /s, 3H/, 4,54 /m, 1H/, 4,61 /m, 1H/.
C. N-metylo-N-izobutyloamid morfolinokarbonyloPheNle-nor-C-Sta.
Stosując postępowanie z przykładu XIX, 173 mg morfolinokarbonyloPheNle sprzęgano z 118 mg chlorowodorku N-metylo-N-izobutyloamidu nor-C-Sta w obecności DCC. Surowy materiał chromatografowano (19:1 chlorek metylenu i metanol) i otrzymano 184 mg czystego produktu.
Widmo PMR, CDCI3, 300 MHz, δ, ppm: 3,04 /s, 3H/, 4,16 /s, 1H/, 4,36 /m, 1H/, 4,43 /m, 1H/, 4,57/m, 1H/.
151 679
Przykład XXIX. N-Pentyloamidmorfolinokarbonylo-PheNlenor-C-Sta(wzór 1,Z = morfolinokarbonyloamina, M = fenyl, R2 = n-butyl, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1=CONH /CH2/4OH/3).
A. n-Pentyloamid Boc-nor-C-Sta.
Stosując sposób z przykładu XXIV, 29 mg n-pentyloaminy sprzęgano z 100 mg Boc-nor-CSta w obecności DCC. Otrzymano 128 mg surowego produktu, który stosowano dalej bez oczyszczania.
Widmo PMR , CDC13,300 MHz, ó, ppm: 1,41 /m, 9H/, 3,25 An, 2H/, 3,86 An, 1H/, 4,05 An,
1H/.
B. Chlorowodorek n-pentyloamidu nor-C-Sta.
Stosując sposób w z przykładu XXIV, z 128 mg n-pentyloamidu Boc-nor-C-Sta usuwano grupę ochronną i otrzymano 108 mg surowej soli, którą stosowano dalej bez oczyszczania.
Widmo PMR, DMSO-d6, 300 MHz, δ, ppm: 3,09 An, 2H/, 4,00 /d, 1H, J = 5Hz/.
C. n-Pentyloamid morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta.
Stosując sposób w z przykładu XXI, 138 mg morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta sprzęgano z 108 mg chlorowodorku n-nentyloamidu nor-C-Sta w obecności DCC. Surowy materiał chromatografowano (19 :1, chlorek metylenu i metanol) i otrzymano 140 mg czystego produktu.
Widmo PMR, CDC13, 300 MHz, <5, ppm: 4,08 /m, 1H/, 4,32 An, 2H/, 4,74 An, 1H/.
Przykład XXX. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPheNle-nor-C-Sta (wzórl, Z — morfolinokarbonyloamino, M — fenyl, R2 — n-butyl, X = cykloheksyl, W — CH)))OH i Z1 = CO2CH/CH3/2).
A. Chlorowodorek estru izopropylowego nor-C-Sta.
Roztwór 100 mg Boc-nor-C-Sta w 2 ml bezwodnego izopropanolu wysycone bezwodnym chlorowodorem i całość mieszano w ciągu nocy w pokojowej temperaturze. Mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i otrzymano 98 mg surowej soli, którą stosowano bez oczyszczania.
Widmo PMR, DMSO-de, 300 MHz, <5, ppm: 1,20 /d, 6H, J = 6Hz/, 3,28 /m, 1H/, 4,05 /d, 1H, 5Hz/, 4,92 /m, 1H/.
B. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta.
Stosując sposób w z przykładu XIX, 142 mg morfolinokarbonyloPheNle sprzęgano z 92 mg chlorowodorku estru izopropylowego nor-C-Sta w obecności DCC. Surowy produkt chromatografowano (9:1, chlorek metylenu i etanol) i otrzymano 60 mg czystego związku.
Widmo PMR, CDC13, 300 MHz, <5, ppm: 1,24 /d, 6H, J = 7Hz/, 4,06 /szerokie pasmo, 1H/, 4,19 /m, 1H/, 4,43 An, 2H/, 5,00 An, 1H/.
Przykład XXXI. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPheOMeSernor-C-Sta (wzórl, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3OCH2-, X = cykloheksyl, W = CH)))OH, Z1 = CO2CH/CH3/2).
A. Ester metylowy morfolinokarbonyloPheOMeSer.
Stosując sposób z przykładu XXI, 0,5 mg morfolinokarbonyloPhe sprzęgano z 0,34 g DL—OMeSerOMe w obecności DEC. Otrzymano 0,37mg surowego produktu, który dalej używano bez oczyszczania.
Widmo PMR (jeden izomer), CDC13, δ, ppm: 3,24 /s, 3H/, 3,76 /s, 3H/, 4,65 An, 1H/.
B. MorfolinokarbonyloPheO-MeSer.
Stosując sposób w z przykładu XIX, 0,37 mg estru metylowego morfolinokarbonyloPheOMeSer hydrolizowano i otrzymano 0,16 g surowego kwasu, który używano dalej bez oczyszczania.
Widmo PMR (jeden izomer), CDC13, 300 MHz, <5, ppm: 3,18 /s, 3H/. 4,58 /m, 1H/, 4,73 An,
1H/.
C. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPheO-MeSernor-C-Sta.
Stosując postępowanie z przykładu XXI, 0,15 g morfolinokarbonyloPheO-MeSernor sprzęgano z 0,10 g chlorowodorku estru izopropylowego nor-C-Sta w obecności DMC. Surowy produkt chromatografowano (29:1, chlorek metylenu i etanol) i otrzymano 43 mg czystego związku i 36 mg epimeru seryny.
Widmo PMR (główny izomer), CDC13,300 MHz, δ, ppm: 3,14/s, 3H/,4,13/m,2H/,4,45/m, 2H/, 4,96 An, 2HA
151 679
Przykład XXXII. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPheOEtSernor-C-Sta (wzórl, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3CH2OCH2, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1 = CO2-CH/CH3/2).
A. Boc-O-EtSer.
Do roztworu 0,94 g Boc-Ser w 66 ml czterowodorofuranu dodano roztwór 1,47 g metoksylanu sodowego w 2,6 ml metanolu, a następnie 11,7 g jodku etylu. Po upływie 15 minut dodano jeszcze 0,49 g metoksylanu sodowego i 2 ml jodku etylu. Całość mieszano w ciągu nocy w pokojowej temperaturze, po czym dodano jeszcze metoksylanu sodowego i jodku etylowego i mieszano w ciągu dodatkowych 6 godzin. Mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, pozostałość rozpuszczono w 25 ml wody i przemyto 2 X 25 ml eteru etylowego. Fazę wodną zakwaszono stężonym kwasem solnym i ekstrahowano 4 X 25 ml octanu etylu. Połączone ekstrakty octanowe suszono nad siarczanem magnezowym, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Otrzymano 0,34 g surowego produktu, który używano dalej bez dalszego przerobu.
Widmo PMR , CDC13, 300 MHz, δ, ppm: 1,19 /t, 3H, J = 7Hz/, 1,46 /s, 9H/, 3,53 /q, 2H, J = 7Hz/, 4,43/m, 1H/.
B. Chlorowodorek estru metylowego OEtSer.
Roztwór 0,51 g Boc-OEtSer w 25 ml bezwodnego metanolu wysycono bezwodnym chlorowodorem i całość mieszano w ciągu 18 godzin w pokojowej temperaturze. Roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i stałą pozostałość rekrystalizowano z mieszaniny etanolu i eteru etylowego. Otrzymano 0,31 g czystej soli
Widmo PMR, DMSO-dc, SbOMHz, δ, ppm: 1,10 /t, 3H, J = 8Hz/, 3,48 /m, 2H/, 3,65 /m, 3H/, 4,28/m, 1H/.
C. Ester m.etyiowy morfolinokarbonyloO-EtSer.
Stosnjąć sposób w z przykładu XXI, 0,36 g morfolinokarbonyloPhe sprzęgano z 0,25 g chloroy-odorku estru metylowego O-EtSer w obecności DEC. Surowy produkt chromatografowano (19:1, chlorek metylenu i etanol) i otrzymano 0,22 g czystego związku.
Widmo PMR, CDC13,300 MHz, <5, ppm: 1,10 /t, 3H, J = 7Hz/, 3,41 /q, 2H, J = 7Hz/, 3,73 /s, 2H/, 4,62 /m, 2H/.
D. MorfolinokarbonyloPheO-EtSer.
Stosując sposób w z przykładu XIX, 0,22 g estru metylowego morfolinokarbonyloPheOEtSer hydrolizowano i otrzymano 0,15 g surowego kwasu, który używano dalej bez oczyszczania.
Widmo PMR, CDCI3, 300 MHz, δ, ppm: 1,12 /t, 3H/.
E. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPheO-EtSer-C-Sta.
Stosując postępowanie z przykładu XXI, 75 mg morfolinokarbonyloPheOEtSer sprzęgano z 54 mg chlorowodorku estru izopropylowego nor-C-Sta. Surowy produkt chromatografowano (19:1, chlorek metylenu i etanol) i otrzymano 50 mg czystego związku.
Widmo PMR, CDC13,300 MHz, <5, ppm: 1,2 /t, 3H, J = 7Hz/, 3,44 /q, 2H, J = 7Hz/, 4,30 /m, 1H/, 4,43 /m, 2H/, 5,04 /m, 1H/.
Przykład XXXIII. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPhePGlynor-C-Sta (wzórl, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3/CH2/4, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1 = CO2CH/CH3/2).
A. Ester etylowy PGly.
Roztwór lOg GlyOEt iminy benzofenonu, 8g jodopentanu i 14g nBu4NH-HSO4 w 150ml chlorku metylenu oraz 33 ml 10% roztworu wodorotlenku sodowego mieszano 16 godzin w temperaturze pokojowej. Fazę organiczną oddzielono, wysuszono nad MgSO4, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozpuszczono w mieszaninie 50 ml czterowodorofuranu i 50 ml 0,1 N roztworu kwasu solnego mieszano 24 godziny. Mieszaninę zatężono do roztworu wodnego i przemyto 3X50 ml eteru. Po zalkalizowaniu fazę wodną ekstrahowano 3 X 50 ml chlorku metylenu. Połączone warstwy organiczne wysuszono nad MgSCU, przesączono i zatężono. Pozostałość chromatografowano stosując do elucji mieszaninę octanu etylu i heksanu w stosunku 1:1. Uzyskano 0,51 g czystego produktu. Odpowiednią sól chlorowodorkową przygotowano poddając powyższą aminę działaniu suchego chlorowodoru w eterze.
Widmo PMR, 300 MHz, DMSO-d6,<5, ppm: 1,05 /t, 3H, J = 7Hz/, 1,77 /m, 2H/, 3,97 /m, 1H/, 4,20 /m, 2H/.
151 679
B. Ester etylowy morfolinokarbonyloPgeGly.
Porcję 0,40 g morfolinokarbonyloalaniny sprzęgnięto z 0,33 g chlorowodorku estru etylowego PGly wykorzystując standardową reakcję DEC podaną w przykładzie ΧΧΕ Surowy materiał chromatografowano eluując mieszaninę octanu etylu z heksanem w proporcji 1: 3. Otrzymano 0,4 g produktu będącego mieszaniną diastereoizomerów przy PGly.
Widmo PMR, 300 MHz, CDC13, <5, ppm: 4,13/m, 2H/, 4,42/m, IH/, 4,57/m, IH/.
C. MorfolinokarbonyloPhePGly.
Ester etylowy morfolinokarbonyloPhePGly zmydlono w sposób opisany w przykładzie XIX, uzyskując 0,33 g surowego kwasu, który stosowano bez dalszego oczyszczania.
Widmo PMR, 300 MHz, CDC13, δ, ppm: 4,43 /m, 2H/, 4,72 /m, IH/, 4,93 /m, IH/.
D. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPhePGlynor-C-Sta.
MorfolinokarbonyloPhePGly w ilości 0,16 g sprzęgnięto z 0,10 g chlorowodorku estru izopropylowego nor—C-Sta przy pomocy standardowej reakcji DEC (przykład XXI, surowy materiał chromatografowano eluując mieszaniną octanu etylu i heksanu w stosunku 1:1. Otrzymano 0,11 g pożądanego produktu o konfiguracji L i 0,078 g izomeru.
Widmo PMR (głównego izomeru) 300 MHz, CDC13, <5, ppm: 2,27 /d, 6H, J = 7Hz/, 4,25 /m, IH/, 4,46 /m, IH/, 4,53 /m, IH/, 5,03 /m, 2H/.
Przykład XXXIV. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPheOMeHSenor-C-Sta (wzórl, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3O/CH2/2-, X = cykloheksyl, W = CH)))OH, Z1 = CO2CH/CH3/2).
A. Boc-O-metyloseryna.
Porcję 0,51 g Boc-homoseryny zmetylowano w sposób analogiczny jak dla Boc-seryny w przykładzie XXXII. W reakcji tej otrzymano 0,45 g surowego produktu, który był przerabiany bez dalszego oczyszczania.
Widmo PMR , 300 MHz, CDC13,<5, ppm: 1,40 /s, 9H/, 3,16 /s, 3H/, 3,90 /m, 2H/.
B. Ester izopropylowy BocO-MeHSenor-C-Sta.
Boc O-metylohomoseryna w ilości 0,45 g sprzęgnięto z 0,5 g estru izopropylowego nor-C-Sta wykorzystując procedurę DEC opisaną w przykładzie XXI, z tym, że nie używano trójetyloaminy. Surowy materiał chromatografowano stosując jako mieszaninę eluującą octan etylu z heksanem w stosunku 1:1. Uzyskano 0,52 g czystego produktu.
Widmo PMR, 300 MHz, CDC13, δ, ppm: 1,21 /d, 6H, J = 7Hz/, 1,38 /s, 9H/, 3,27 /s, 3H/, 4,19 /m, IH/, 4,38 /m, IH/, 4,96 /m, IH/.
C. Ester izopropylowy O-MeHSenor-C-Sta.
Porcję 0,52 g estru O-izopropylowego BocOMeHse-nor-C-Sta odbiezpieczono w standardowych warunkach, stosując chlorowodór w dioksanie, tak jak to opisano w przykładzie XXIV. Otrzymano 0,66 g surowego produktu przerabianego bez dalszego oczyszczania.
Widmo PMR , 300 MHz, DMSO-d6,<5, ppm, 1,18 /d, 6H, J = 7Hz/, 3,24 /s, 5H/, 4,18 /m, IH/, 4,80 /m, IH/.
D. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPheO-MeHSe-nor-C-Sta.
Morfolinokarbonyloalaninę w ilości 0,19 g sprzęgnięto z 0,20 g chlorowodorku estru izopropylowego OMeHse-nor-C-Sta wykorzystując standardową procedurę DEC podaną w przykładzie XXI. Surowy materiał chromatografowano stosując do elucji mieszaninę chlorku metylenu i metanolu w stosunku 29:1. Uzyskano 0,31 g czystego produktu.
Widmo PMR ,300 MHz, CDC13,<5, ppm, 1,23 /d, 3H, J = 7Hz/, 1,25 /d, 3H, J = 7Hz/, 3,19 /s, 3H/, 4,29 /m, IH/, 4,42 /s, 2H/, 5,04 An, IH/.
Przykład XXXV. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPheAlanor-C-Sta (wzór 1, Z — morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3, X = cykloheksyl, W = CH)))0H i Z1 = CO2CH/CH3/2).
A. MorfolinokarbonyloPheAla.
Przeprowadzono reakcję 0,24 g alaniny z 0,50 g morfolinokarbonyloPheOSuc w sposób opisany w przykładzie LVIII, uzyskując 0,15 g surowego produktu przerabianego bez dalszego oczyszczania.
Widmo PMR ,300 MHz, DMSO-de, <5, ppm, /d, 3H, J = 7Hz/, 4,20 An, IH/, 4,32 An, IH/.
151 679
B. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPheAlanor-C-Sta.
Przy użyciu DEC sprzęgnięto w sposób podany w przykładzie XXXIV, 0,15 g morfolinokarbonyloPhe Ala z 0,15 g estru izopropylowego norcyklostatyny. Surowy materiał chromatografowano eluując mieszaniną chlorku metylenu i etanolu w stosunku 24:1 i otrzymano 0,18 g czystego produktu.
Widmo PMR ,300 MHz, CDCls,<5, ppm, 1,26 /d, 3H, J = 7Hz/, 4,29 /m, IH/, 4,38 /m, IH/, 4,48 /m, IH/, 4,96 /m, IH/.
Przy kład XXXVI. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPheGlunor-C-Sta (wzórl, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH2/2CONH2-, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1 = CO2CH/CH3/2).
A. MorfolinokarbonyloPheGln.
Porcję 0,30 g glutaminy poddano reakcji z 0,50 g morfolinokarbonyloPheOSuc tak jak to opisano w przykładzie LVI. Otrzymano 0,37 g surowego produktu, który stosowano bez dalszego oczyszczania.
Widmo PMR ,300 MHz, DMSO-d6, ó, ppm, 3,43 /m, 4H/, 4,15 /m, IH/, 4,31 /m, IH/.
B. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPheGlnnor-C-Sta.
Stosując DEC, metodą podaną w przykładzie XXXIV sprzęgnięto 0,37 g morfolinokarbonyloPheGln z 0,24 g estru izopropylowego norcyklostatyny. Surowy materiał chromatografowano eluując mieszaniną chlorku metylenu i etanolu w stosunku 9:1. Uzyskano 0,18g czystego produktu.
Widmo PMR ,300 MHz, DMSO-de, <5, ppm, 1,17 /d, 6H, J = 7Hz/, 3,94 /m, IH/, 4,8 /m, 2H/, 4,23 /m, IH/, 4,80 /m, IH/.
Przykład XXXVII. Ester II-rz.-butylu morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta(wzór 1, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = n-butyl, X = cykloheksyl, W = CH)))OH, Z1 = CO2/CH/CH3/CH/CH3/2).
A. Chlorowodorek estru II-rz.-butylu norcyklostatyny.
Roztwór 100 mg Boc norcyklostatyny w 5 ml II-rz-butanolu po uprzednim nasyceniu suchym chlorowodorem mieszano całą noc. Roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując 89 mg surowego produktu, który przerabiano bez dalszego oczyszczania.
Widmo PMR ,300 MHz, DMSO-de, <5, ppm, 1,17 /d, 3H, J = 7Hz/, 4,10 /m, IH/, 4,70 An,
IH/.
B. Ester II-rz-butylu morfolinokarbonyloPheNlenor-C-Sta.
Porcję 113 g morfolinokarbonyloPheNle (przykład XXIV) sprzęgnięto z 89 g chlorowodorku estru II-rz-butylu norcyklostatyny wykorzystując standardową reakcję DEC z przykładu XXI. Surowy materiał chromatografowano stosując do elucji mieszaninę chlorku metylenu i metanolu w stosunku 19:1. Uzyskano 79 mg czystego produktu będącego mieszaniną diastereoizomerów przy estrze metylowym.
Widmo PMR ,300 MHz, CDC13,<5, ppm, 1,13 /d, 3H, J = 7Hz/, 4,15 An, IH/, 4,71 An, IH/.
Przy kład XXXVIII. Ester III-rz-butylowy morfolinokarbonyloPheSMeCysnor-C-Sta (wzór 1, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3SCH2-, X = cykloheksyl, W = CH))) OH, Z1 = CO2C/CH3/3).
A. Ester III-rz-butylowy norfenylostatyny.
Z porcją 3,0 g nitrylu w 200 ml III-rz.-butynolu postępowano analogicznie jak przy otrzymywaniu w przykładzie XXXVII estru izobutylowego. Przeróbka mieszaniny poreakcyjnej dała 184 mg surowego produktu stosowanego bez dalszego oczyszczania.
Widmo PMR ,300 MHz, CDC13,<5, ppm, /s, 9H/, 3,64 An, IH/, 3,83 /d, IH, J = 3Hz/.
B. Ester III-rz.-butylowy norcyklostatyny.
Ester III-rz.-butylowy norfenylostatyny w ilości 75 mg uwodorniono jak w przykładzie XXXVII uzyskując po przerobieniu 64 mg surowego produktu.
Widmo PMR ,300 MHz, CDC13,ó, ppm, 1,32 /s, 9H/, 3,47 An, IH/, 3,18 /br, IH/.
C. Ester III-rz.-butylowy morfolinokarbonyloPheS-MeCysnor-C-Sta.
Używając DEC, analogicznie jak w przykładzie XXXIV, sprzęgnięto 97 mg morfolinokarbonyloPheS-MeCys (przykład XXI) z 60 mg estru butylowego norcyklostatyny. Surowy materiał chromatografowano, eluując mieszaniną chlorku metylenu i metanolem w stosunku 19:1 i otrzymując 50 mg czystego produktu.
151 679
Widmo PMR ,300 MHz, CDCl3,ó, ppm, 1,35 /s, 9H/, 2,13 /s, 3H/, 3,98 /m, 1H/, 4,30 /m, 1H/, 4,57 /m, 2H/.
Przy kład XXXIX. MorfolinokarbonyloPheS-MeCysnor-C-Sta N-metyloamid (wzórl, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3SCH2-, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1=CONHCH3).
A. Boc-nor-C-Sta N-metyloamid.
Wykorzystując standardową reakcję DCC opisaną w przykładzie XIX, sprzęgnięto 0,25 g Boc norcyklostatyny z 57 mg chlorowodorku metyloaminy. Surowy materiał chromatografowano stosując do elucji mieszaninę octanu etylu i heksanu w stosunku 2:1. Uzyskano 0,16 g czystego produktu.
Widmo PMR ,300 MHz, CDC13,<5, ppm, 1,41 /m, 9H/, 2,82 /d, 3H, J = 5Hz/, 3,85 /s, 1H/.
B. Nor-C-Sta N-metyloamid.
Porcję 0,16 g Boc-nor-S-StaNHMe odbezpieczono stosując chlorowodór w dioksanie jak to opisano w przykładzie XXIV. Otrzymano 0,13 g surowej soli przerabianej bez dalszego oczyszczania.
Widmo PMR ,300 MHz, DMSO-de, <5, ppm, 2,62 /s, 3H/, 3,97 /d, 1H, J = 4Hz/.
C. MorfolinokarbonyloPheS-MeCysnor-C-Sta N-metyloamid.
Postępując w sposób podany w przykładzie XXI sprzęgnięto, stosując DEC, 98 mg morfolinokarbonyloPheS-MeCys (przykład XXI) z 73 mg chlorowodorku nor-C-Sta-N-metyloamidu. Chromatografia surowego materiału przy użyciu mieszaniny chlorku metylenu i etanolu w stosunku 19:1 dała 52 mg produktu będącego mieszaniną epimerów SMeCys.
Widmo PMR ,300 MHz, CDC13,<5, ppm, 2,02 /s, 3H/, 2,79 /d, 3H, J = 3Hz/, 4,29 /m, 1H/, 4,57 /m, 2H/.
Przykład XL. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPheS-MeCysnor-Ph-Sta (wzórl, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3SCH2-, X = fenyl, W = CH)))OH i Z1 — CO2CH/CH3/2).
A. Ester izopropylowy norfenylostatyny przygotowano w analogiczny sposób jak ester izobutylowy w przykładzie LVII ze 118 mg nitrylu. Otrzymano 89 mg surowego produktu używanego bez dalszego oczyszczania.
Widmo PMR ,300 MHz, CDC13,<5, ppm, 1,26 /d, 6H, J = 7Hz, 3,30 /m, 1H/, 4,01 /d, 1H, J = 2Hz/, 5,10/m, 1H/.
B. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPheS-MeCysnor-fenylo-Sta.
Używając DEC w sposób opisany w przykładzie XXXIV sprzęgnięto 0,96 g morfolinokarbonyloPheS-MeCys (przykład XXI) z 0,55 g estru izopropylowego norfenylostatyny. Surowy materiał chromatografowano stosując do elucji mieszaninę chlorku metylenu i metanolu w stosunku 19:1. Uzyskano 0,91 g czystego produktu.
Widmo PMR , 300 MHz, CDC13,<5, ppm, 1,18 /d, 3H, J = 7Hz/, 1,21 /d, 3H, J = 7Hz/, 2,00 /s, 3H/, 4,41 /m, 2H/, 4,49 /m, 1H/, 5,00 /m, 1H/.
Przykład XLI. Ester izopropylowy morfolinokarbonylo-C-MeTyrNlenor-C-Sta (wzórl, Z = morfolinokarbonyloamino, M = parametoksyfenyl, R2 = n-butyl, X — cykloheksyl, W = CH)))OH, Z1 = CC2CH/CH3/2).
A. Ester metylowy BocO-metylotyrozyny.
Roztwór 7,3 g Boc-tyrozyny w 100 ml etanolu poddano działaniu dużego nadmiaru diazometanu w 250 ml eteru. Po upływie kolejno 24 i 48 godzin dodano następnie porcje diazometanu. Po sumarycznych 72 godzinach reakcję zastopowano kwasem octowym, zatężono, rozcieńczono 100 ml octanu etylu i przemyto 2 X 50 ml nasyconego roztworu kwaśnego węglanu sodowego. Fazę organiczną wysuszono nad MgSOą, przesączono i zatężono. Chromatografia pozostałości przy pomocy mieszaniny eluującej składającej się z heksanu i octanu etylu w stosunku 9:1, dała 6,4 g czystego produktu.
Widmo PMR , 300 MHz, CDC13,<5, ppm, 1,42 /s, 9H/, 3,69 /s, 3H/, 3,76 /m, 3H/, 4,51 /m,
1H/.
B. Chlorowodorek estru metylowego C-metylotyrozyny.
Odbezpieczono 6,4 g estru metylowego NocO-metylotyrozyny stosując chlorowodór w dioksanie w sposób opisany w przykładzie XXIV. Otrzymano 5,1 g surowego produktu używanego bez dalszego oczyszczania.
Widmo PMR , 300 MHz, DMSO-de, 6, ppm, 3,76 /s, 3H/, 3,74 /s, 3H/, 4,19 /m, 1H/.
151 679
C. Izocyjanian estru metylowego O-metylotyrozyny.
Do zawiesiny 5,1 g chlorowodorku estru metylowego O-metylotyrozyny w 150 ml toluenu wprowadzono fosgen w miarę powolnego podwyższania się temperatury aż do wrzenia. Po rozpuszczeniu całego materiału roztwór schłodzono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując 7,0 g surowego izocyjanianu.
Widmo PMR ,300 MHz, CDC13,<5, ppm, 3,85 /s, 6H/, 4,27 /m, 1H/, 6,69 /d, 2H, J = 8Hz/, 7,14/d,2H, J = 8Hz/.
D. Ester metylowy morfolinokarbonylo-O-metylotyrozyny.
Do roztworu 5,0 g izocyjanianu estru metylowego O-metylotyrozyny w 150 ml chlorku metylenu dodano w temperaturze 0°C 2,4 g morfoliny. Po 15 minutach mieszania roztwór zatężono, a pozostałość chromatografowano eluując octanem etylu. Otrzymano 3,5 g czystego produktu.
Widmo PMR ,300 MHz, CDC13,ó, ppm, 3,66 /s, 3H/, 3,72 /s, 3H/, 4,67 /m, 1H/, 4,91 /d, 1H, J = 8Hz/.
E. MorfolinokarbonyloO-metylotyrozyna.
Porcję 3,6 g estru metylowego morfolinokarbonylo-O-metylotyrozyny zmydlono w sposób podany w przykładzie XIX uzyskując 3,0 g surowego kwasu używanego bez dalszego oczyszczania.
Widmo PMR , 300 MHz, CDC13,<5, ppm, 3,78 /s, 3H/, 4,61 /m, 1H/, 6,82 /d, 2H, J = 8Hz/, 7,08/d, 2H, J = 8Hz/.
F. Ester benzylowy morfolinokarbonyloO—MeTyrNle.
Wykorzystując standardową reakcję DEC z przykładu XXI sprzęgnięto 0,50 g morfolinokarbonyloO-metylotyrozyny z 0,42 g chlorowodorku estru benzylowego norleucyny. Surowy materiał chromatografowano stosując do elucji chlorek metylenu i metanol w stosunku 19:1. Otrzymano 0,77 g czystego produktu.
Widmo PMR , 300 MHz, CDC13,<5, ppm, 3,76 /s, 3H, 4,50 /m, 2H/, 5,13.
C. MorfolinokarbonyloO-MeTyrNle.
Mieszaninę 0,77 g estru benzylowego morfolinokarbonyloO-MeTyrNle i 0,38 g 10% palladu osadzonego na węglu aktywnym w 60 ml etanolu uwodorniono 3 godziny pod ciśnieniem 343 kPa; mieszaninę przesączono przez ziemię okrzemkową i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując 0,63 g surowego kwasu.
Widmo PMR , 300 MHz, CDC13,<5, ppm, 3,72 /s, 3H/, 4,44 /m, 1H/, 4,63 /m, 1H/.
H. Ester izopropylowy morfolinokarbonylo-O-MeTyrNlenor-C-Sta.
Stosując standardową reakcję DCC opisaną w przykładzie XIX sprzęgnięto 74 mg morfolinokarbonyloO-MeTyrNle z 51 mg chlorowodorku estru izopropylowego norcyklostatyny. W wyniku chromatografii surowego materiału eluowanego mieszaniną chlorku metylenu i metanolu w stosunku 19:1 otrzymano 98 mg czystego produktu.
Widmo PMR , 300 MHz, CDC13,<5, ppm, 3,78 /s, 3H/, 4,21 /m, 1H/, 4,42 /m, 2H/, 5,03 /m,
1H/.
Przy kład XLII. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloO-MeTyrS-MeCysnor-C-Sta (wzór 1, Z = morfolinokarbonyloamino, M = p-metoksyfenyl, R2 = CH3 SCH2-, X = cykloheksyl, W = CH)))OH, Z1 = CO2CH/CH3/2).
A. Ester metylowy morfolinokarbonylo-O-MeTyrS-MeCys.
W sposób podany w przykładzie LVIII przeprowadzono reakcję sprzęgania DEC 0,25 g morfolinokarbonyloO-MeTyr przykład XXI) z 0,36 chlorowodorku estru metylowego S-MeCys. Uzyskano 0,32 g surowego produktu używanego bez dalszego oczyszczania.
Widmo PMR , 300 MHz, CDC13,<5, ppm, 2,01 /s, 3H/, 3,71 /s, 3H/, 3,74 /s, 3H/, 4,55 /m, 1H/, 4,65 /m, 1H/. .
B. MorfolinokarbonyloO-MeTyrS-MeCys.
Ester metylowy morfolinokarbonyloO-MeCys w ilości 0,32 g zmydlono postępując w analogiczny sposób jak w przykładzie XIX. W reakcji tej otrzymano 0,28 g surowego kwasu przerabianego bez dalszego oczyszczania.
Widmo PMR , 300 MHz, CDC13,<5, ppm, 2,11 /s, 3H/, 3,78 /s, 3H/, 4,69 /m, 1H/, 4,77 /m,
1H/.
C. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloO-MeTyrS-MeCys-nor-C-Sta.
151 679
Podobnie jak w przykładzie XXI wykorzystując standardową reakcję DEC sprzęgnięto 0,17 g morfolinokarbonyloO-MeCys z 0,10g chlorowodorku estru izopropylowego norcyklostatyny. Chromatografia surowego materiału przy użyciu chlorku metylenu i etanolu w stosunku 19:1 jako mieszaniny eluującej, dla 0,18 g czystego produktu.
Widmo PMR , 300 MHz, CDC13,<5, ppm, 2,08 /s, 3H/, 3,75 /s, 3H/, 4,39 /m, 3H/, 5,01 /m,
1H/.
Przykład XLIII. Ester metylowy morfolinokarbonylo-O-MeTyrNlenor-C-Sta (wzór 1, Z=morfolinokarbonyloamino, M=p-metoksyfenyl, R2=n-butyl, X=cykloheksyl, W = CH)))OH, Z1 = CO2CH3).
Analogicznie do przykładu XXI przeprowadzono standardową reakcję sprzęgania DEC 100 mg morfolinokarbonyloTyrNle (przykład XLI) z 65 mg chlorowodorku estru metylowego norcyklostatyny (przykład XIX). Surowy materiał chromatografowano eluując mieszaniną chlorku metylenu i metanolu w stosunku 19:1. Otrzymano 121 mg czystego produktu.
Widmo PMR, 300 MHZ, CDCla, δ, 3,80/s, 3H/, 3,82/s, 3H/, 4,26/m, 1H/, 4,45/m, 2H/.
Przykład XLIV. Morfolinokarbonylo-OMeTyrNlenor-C-Sta N-metyloamid (wzór 1, Z=morfolinokarbonyloamino, M=p-metoksyfenyl, R2=n-butyl, X=cykloheksyl, W = CH)))OH, Z1 = CONHCHa).
Porcję 132 mg morfolinokarbonyloO-MeTyrNle (przykład XLI) sprzęgnięto z 78 g chlorowodorku nor-C-DtaNHMe (przykład XXXIX) wykorzystując standardową reakcję DCC opisaną w przykładzie XIX. Po chromatografii surowego materiału z zastosowaniem jako eluentu mieszaniny chlorku metylenu i metanolu w stosunku 9:1 uzyskano 155 mg czystego produktu.
Widmo PMR, 300 MHz, CDC13, δ, 2,79/d, 3H, J=5 Hz/, 3,75/s, 3H/, 4,22/m, 1H/, 4,30/m,
2H/.
Przykład XLV. Ester izopropylowy morfolinokarbonylo-fosfinikoPheNlenor-C-Sta (wzór 1, Z = morfolinoP/OCH3//O/amino, M = fenyl, R2 = n-butyl, X = cykloheksyl, W = CH))) OH, Z1 = CO2CH/CH3/2).
A. Ester benzylowy morfolinometylofosfinikoPheNle.
Roztwór 0,30 g PheNleObn, 0,30 g TEA i 0,44 g chlorku kwasu morfolinometylofosfiniowego w 10 ml CH2C12 mieszano 60 godzin. Roztwór rozcieńczono 50 ml EtOAc i przemyto 25 ml 0,1N HCl i 0,lN NaOH. Fazę organiczną suszono nad MgSO4, sączono i zatęźono. Pozostałość chromatografowano (19:1 CH2C12: EtOH), otrzymując 0,18 g produktu jako mieszaninę izomerów na atomie fosforu.
Widmo PMR, CDC13,300 MHz, <5, ppm: 3,57 /d, J = 10Hz, 3H/, 4,50 /m, 1H/, 5,09 /m, 2H/.
B. MorfolinometylofosfinikoPheNle.
Powyższy materiał odblokowano otrzymując 0,10 g surowego materiału.
Widmo PMR , DMSO-de, 300 MHz, <5, ppm: 3,26 /d, J= 10Hz, 3H/, 3,96 /m, 1H/.
C. Ester izopropylowy morfolinometylofosfinikoPheNlenor-C-Sta.
Produkt z części B (0,10 g) sprzężono z 58 g HCl-nor-C-StaOizoPr stosując procedurę DEC (przykład XXI). Chromatografia (19: 1 CH2C12: EtOH) dała 29 mg czystego materiału.
Widmo PMR ,300 MHz, CDC13,<5, ppm: 3,61 /d, J = 11Hz, 3H/, 4,44 /m, 1H/, 4,43 /m, 1H/, 4,99 /m, 1H/.
Przy kład XLVI. Ester benzylowy morfolinokarbonyloPheS-MeCysnor-C-Sta (wzórl, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3SCH2-, X = cykloheksyl, W = CH)))OH, a Z1 = CO2CH2C6H5).
A. Ester benzylowy Bocnor-C-Sta.
Bocnor-C-Sta (0,10g) estryfikowano 0,1 lg alkoholu benzylowego stosując standardową reakcję DEC (przykład XXI) z 0,25 g równoważnika DMAP. Surowy materiał chromatografowano (39 : 1 CH2C12: MeOH), otrzymując 0,10 g czystego estru.
Widmo PMR , CDC13,300MHz, <5, ppm: 1,39 /s, 9H/, 4,10 /s, 1H/, 4,13 /s, 1H/, 5,14/AB,
2H/.
B. Chlorowodorek estru benzylowego nor-C-Sta.
Produkt z przykładu XXIV (0,10 g) odblokowano w sposób opisany w części A, otrzymując 96 mg surowej soli, którą używano bez dalszego oczyszczania.
Widmo PMR , DMSO-d6, 300 MHz, <5, ppm: 4,16 /m, 1H/, 5,12 /m, 2H/.
151 679
C. Ester benzylowy morfolinokarbonyloPheS-MeCysnor-C-Sta.
Produkt z części B (0,12 g) sprzężono z 84 g HCl-nor-C-StaOBn, stosując standardową reakcję DEC (przykład XXI). Surowy materiał chromatografowano (19:1 CH2CI2: MeOH), otrzymując 92mg czystego produktu.
Widmo PMR , CDC13, 300 MHz, δ, ppm:2,08 /s, 3H/, 4,40 /m, 3H/, 5,14 /AB, 2H/.
Przy kład XL VII. Ester cykloheksylometylu morfolinokarbonyloPheS-MeCysnor-C-Sta (wzór 1, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3SCH2-, X = cykloheksyl, W = CH))) OH, a Z1 =CO2CH2C6Hii).
A. Ester cykloheksylometylowy Bocnor-C-Sta.
Bocnor-C-Sta (70 mg) estryfikowano 80 mg cykloheksylometanolu w sposób opisany w przykładzie XLVI, otrzymując 40 mg czystego materiału po chromatografii (39:1 CH2CI2: MeOH).
Widmo PMR , CDCU, 300 MHz, δ, ppm: 1,35 /s, 9H/, 3,39 /d, J = 6Hz/, 4,08 /m, 1H/.
B. Chlorowodorek estru cykloheksylometylowego nor-C-Sta.
Produkt z części A (40 mg) odblokowano w sposób opisany w przykładzie XXIV, otrzymując 37 mg surowej soli.
Widmo PMR , DMSO, 300 MHz,δ, ppm: 3,53 /s, 1H/, 4,10 /m, 1H/.
C. Ester cykloheksylometylowy morfolinokarbonyloPheS-MeCys-nor-C-Sta.
MorfolinokarbonyloPheS-MeCys (42 mg) sporządzono z 34 mg produktu z części B, stosując reakcję DEC (przykład XXI). Chromatografia (19:1 CH2Cl:MeOH) dla 50 mg czystego produktu.
Widmo PMR . CDCU, 300 MHz, <5, ppm: 2,12 /s, 3H/, 4,42 /m, 3H/.
Przykład XLVIII. Ester metylowy morfolinokarbonyloPheS-MeCysnor-C-Sta (wzórl, Z — morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3SCH2-, X = cykloheksyl, W = CH)))OH, a Z1 = CO2CH3).
Prowadząc zwykły etap sprzęgania otrzymuje się ze 135 mg chlorowodorku estru metylowego S-MeCysnor-C-Sta, 88,2 mg morfolinokarbonyloPhe, 32,1 mg N-metylomorfoliny, 42,9 mg HBT i 65,4 mg DCC w 20 ml chlorku metylenu zanieczyszczony produkt. Chromatografia na żelu krzemionkowym z użyciem chloroformu metanolu (99:1, objętościowo/objętościowo) daje 103 mg czystego produktu identycznego z otrzymanym w przykładzie LVI.
Widmo PMR , CDC13, 300 MHz,<5, ppm: 2,1 /s, 3H/, 3,7 /s, 3H/, 3,0-3,4 /m, 4H/, 3,5-3,84 /m, 4H/ i 7,3 /s, 5H/.
Przykład XLIX. Ester izopropylowy /2-metoksykarbonylopirolidynylo- 1/karbonyloPheSMeCysnor-C-Sta (wzórl, Z= l-/2-metoksykarbonylopirolidynylo/karbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3SCH2-, X = cykloheksyl, W = CH)))OH, a Z1 = COCH/CH3/2).
A. Ester benzylowy /2-metoksykarbonylopirolidynylo-l/karbonyloPhe.
Roztwór 66 mg chlorku estru metylowego w 10 ml CH2CI2 i 70μ1 N,N-diizopropyloetyloaminy traktowano 112 mg izocyjanianu l-benzylokarbonylo-2-fenetylu w temperaturze 0°C i mieszaninę mieszano przez noc. Obróbka dała 153 mg związku przejściowego.
B. /2-Metoksykarbonylopirolidynylo- 1/karboksyPhe.
Produkt z części A odbenzylowano otrzymując 170 mg związku przejściowego.
C. Ester izopropylowy /2-metoksykarbonylopirolidynylo-l/ karbonyloPhe-S-MeCysnor-CSta.
Stosując zwykłą procedurę sprzęgania, ester izopropylowy morfolinokarbonyloTyrS-MeCysnor-C-Sta (174 mg), powyższy związek przejściowy (140 mg), 82 mg DCC, 55 mg HBT μΐ Nmetylomorfoliny w 10 ml CH2CI2 dało 230 mg surowego produktu. Chromatografia na żelu krzemionkowym z użyciem 1-1,5% metanolu w chloroformie dała 102 g produktu.
Widmo PMR , CDCI3, 300 MHz, δ, ppm: 1,21 /6H, m/, 2,09 /s, 3H/, 2,78-2,89 /2H, m/, 3,0-3,2 /2H, m/, 3,65 /s, 3H/ i 7,12-7,32 /m, 3H/.
Przykład L. Ester izopropylowy etylenoketalu 4-okso-piperydynokarbonyloPheS-MeCysnor-C-Sta (wzórl, Z = 4-okso-piperydynokarbonyloamino-etylenoketal, M = fenyl, R2 = CH3SCH2-, X = cykloheksyl, W = CH)))OH, a Z1 = CO2CH/CH3/2).
Zgodnie z procedurą wytwarzania i oczyszczania produktu z przykładu XVIII 150 mg produktu z przykładu LII i 32μΐ ketalu 4-piperydynoetylenowego dało 60 mg bezbarwnego proszku,
151 679
TLC Rf 0,30 w octanie etylu, HPLC 2,76 i 3,09 minut (około 2:1) w 80/20 acetonitrylu/wodzie. i i łowny składnik oddzielono przez semipreratywną chromatografię z odwróconą fazą HPL na 9,8X250 mm kolumnie Zorbax C-8 w 70/30 acetonitrylu/wodzie, przy czym 60mg mieszaniny dało 28 mg wcześniej eluowanego związku.
Widmo PMR ,1H, CDC13,250 MHz, częściowo, <5, ppm: 0,92 /m/, 1,2611,28 /d, po 3H/, 2,U9 /s 3H/, 2,72, 2,93, 3,08 i 3,29 /dd, po 1H/, 3,34 /m/, 3,92 /s, 4H/, 4,10 /br, 1H/, 4,35-4 53 /m, 3H/, 4,87 /d, 1H/, 5,06 /septet, 1H/, 6,95 i 7,11 /d, po 1H/, 7,18-7,38 /m, aromatyczny/.
Przykład LI. Ester izopropylowy 4-oksopiperydynokarbonyloPhe-S-MeCysnor-C-Sta (wzór 1, Z = 4-oksopiperydynokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3SCH2-, X = cykloheksyl, W = CH)))OH, a Z1 = CO2CH/CH3/2).
A. Ester benzylowy 4-oksopiperydynokarbonyloPhe.
Chlorowodorek 4-piperydonu (819 mg) rozpuszczono w 15 ml dichlorometanu i traktowano w temperaturze 0°C 740μ\ trójetyloaminy i l,50g produktu z przykładu IA (izocyjanianoPfeOBn). Po 1,5 godzinach mieszaninę rozpuszczono w octanie etylu, przemyto IN HCl (3 X), wodnym roztworem NaHCO3, solanką, suszono nad MgSC>4, zatężono, rozpuszczono w 10 ml ciepłej mieszaniny 2:1 octanu etylu: heksanów, ochłodzono i przesączono, usuwając 0,6 g ciała stałego, TLC Rf 0,53 w 1:1 w układzie A. Roztwory macierzyste chromatografowano na żelu krzemionkowym w mieszaninie 1:1 octan etylu/heksanu, dając 322 mg przezroczystego oleju, TLX Rf0,13w układzie A, których widmo było zgodne z tytułową strukturą.
B. OksopiperydynokarbonyloPhe.
Produkt z części A (297 mg) rozpuszczono w 15 ml 1:10 kwasu octowego/metanolu i wstrząsano w temperaturze 25°C i pod ciśnieniem wodoru 343 kPa z 150 mg 10% Pd/C przez 30 minut, odsączono, zatężono i współodparowano z dodanym toluenem, dając 227 mg bezbarwnej piany, TLC Rf 0,05 w octanie etylu.
C. Ester izopropylowy 4-oksopiperydynokarbonyloPhe-S-Me-Cysnor-C-Sta.
Stosując procedurę wytwarzania i oczyszczania produktu z przykładu XV z tym wyjątkiem, że do zobojętnienia chlorowodorku aminy stosowano trójetyloaminę, 100 mg chlorowodorku estru izopropylowego S-MeCysnor-C-Sta (produkt z przykładu IX D) i 73 mg produktu z części B dało 116 mg bezbarwnego ciała stałego, TLC Rf 0,29 w octanie etylu.
Przykład LII. Ester izopropylowy karboksybutylokarbonyloPhe-S-MeCysnor-C-Sta (wzór 1, Z = HO2C/CH2/4CONH-, M = fenyl, R2 = CH3SCH2-, X = cykloheksyl, W = CH)))OH, a Z1 = CO2CH/CH3/2).
A. Ester izopropylowy /CH3/3CO2C/CH2/4COPhe S-MeCysnor-C-Sta.
Jednoester t-butylowy kwasu heksanodikarboksylowego (0,10 g) kondensowano z 0,10 g chlorowodorku estru izopropylowego Phe S-MeCysnor-C-Sta stosując DEC w sposób opisany w przykładzie XXI. Chromatografia na krzemionce (1:19 MeOH: CH2CI2) dała 95 mg czystego produktu.
Widmo PMR , CDC13 300 MHz, <5, ppm: 1,41 /s, 9H/, 4,38 /m, 2H/, 4,62 /m, 1H/, 5,01 /m,
1H/.
B. Ester izopropylowy karboksybutylokarbonyloPhe S-MeCysnor-C-Sta.
Roztwór 90 mg powyższego estru t-butylowego w 2 ml kwasu trójfluorooctowego i 2 ml CH2CI2 mieszano 1 godzinę w temperaturze pokojowej. Po standardowej obróbce kwas-zasada, surowy materiał oczyszczono chromatograficznie (9:1 CH2CI2: MeOH) otrzymując 52 mg czystego produktu.
Widmo PMR , CDCI3 300 MHz, <5, ppm: 2,08 /s, 3H/, 4,40 /m, 2H/, 4,73 /m, 1H/, 4,97 /m,
1H/.
Przykład LIII. Ester izopropylowy morfolinokarbonyloPheValnor-C-Sta (wzór 1, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH/CH3/2, X = cykloheksyl, W = CH)))OH, a Z1 = CO2CH/CH3/2).
A. MorfolinokarbonyloPheVal.
Walinę (0,40 g) traktowano 0,60 g estru hydroksysukcynimidowym morfolinokarbonyloPhe jak opisano w przykładzie LVI. Surowy materiał (0,53 g) używano bez dalszego oczyszczania.
Widmo PMR , DMSO-d6, 300 MHz, <5, ppm: 0,92 (d, J = 7Hz, 3H/, 4,18 /m, 1H/, 4,43 /m,
1H/.
151 679
B. Ester n-propylowy morfolinokarbonyloPheValnor-C-Sta.
Powyższy produkt (0,17 g) sprzęgano z 0,10 g estru izopropylowego nor-C-Sta stosując standardową reakcję DEC. Surowy materiał chromatografowano (24:1 CH2CI2: MeOH) otrzymując 0,15 g czystego produktu.
Widmo PMR , CDCI3, 300 MHz, <5, ppm: 0,77 /d, J = 6Hz, 3H/, 0,84 /d, J = 7Hz, 3H/, 4,45 /m, IH/, 4,52 /m, IH/, 5,00 /m, IH/
Przykład LIV. Ester izopropylowy morfolinokarbonylosześciowodoroPhe-S-MeCysnorC-Sta (wzórl, Z — morfolinokarbonyloamino, M = cykloheksyl, R2 = CH3SCH2, X = cykloheksyl, W = CH)))OH i Z1 = CO2CH/CH3/2).
A. Morfolinokarbonylosześciowodoro-L-fenyloalanina.
Roztwór 4,0 g produktu z przykładu I C w 55 ml mieszaniny 10:1 metanolu i kwasu octowego wstrząsano pod ciśnieniem wodoru około 343 kPa z 1,0 g rodu na węglu, w temperaturze 25°C, w ciągu 3,5 godziny. Mieszaninę przesączono przez ziemię okrzemkową, zatężono i odparowano z eterem. Otrzymano 4,15 g bezbarwnego piankowatego produktu, który oczyszczono chromatograficznie na żelu krzemionkowym załadowanym w octanie etylu. Eluowano najpierw octanem etylu a następnie mieszaninę etanolu/chlorku i metylenu/ w gradiencie stężenia etanolu. Otrzymano 704 mg bezbarwnego produktu o Rf = 0,4.
B. Ester hydroksysukcynimidowy morfolinokarbonylosześciowodoroPhe.
Do roztworu 700 mg produktuz z części A 5 ml dwumetoksylenu dodano kolejno w temperaturze 0°C 283 mg N-hydroksysukcynimidu i 507 mg dwucykloheksylokarbodwuimidu. Mieszaninę pozostawiono w ciągu nocy pozwalając, by temperatura osiągnęła 18°C, po czym przesączono, pozostałość rozpuszczono w octanie etylu, roztwór przemyto dwukrotnie nasyconym roztworem wodnym wodorowęglanu sodowego oraz solanką, wysuszono nad siarczanem magnezowym i zatężono. Otrzymano 704 mg bezbarwnego, piankowatego produktu.
C. MorfolinokarbonylosześciowodoroPhe-S-MeCys.
Do roztworu 442 mg S-metylocysteiny w 4,6 ml nasyconego roztworu wodnego wodorowęglanu sodowego dodano 2,5 ml czterowodorofuranu i 890 mg produktu z części B. Całość mieszano w ciągu 20 minut w temperaturze 25°C, po czym mieszaninę rozcieńczono wodą, przemyto dwukrotnie octanem etylu i w obecności octanu etylu pH doprowadzono do 1,1 za pomocą 1 n kwasu solnego. Warstwę organiczną oddzielono i wodną ekstrahowano czterema porcjami octanu etylu. Połączone ekstrakty organiczne przemyto dwukrotnie 1 n kwasem solnym i solanką, suszono nad siarczanem magnezu i zatężono. Otrzymano 796 mg bezbarwnego, piankowatego produktu.
D. Ester izopropylowy morfolinokarbonylosześciowodoroPhe-S-MeCysnor-C-Sta.
Stosując sposób z przykładu XV B, z 94 mg estru izopropylowego nor-C-Sta i 170 mg produktu z przykładu XLIII C otrzymano 178 mg bezbarwnego proszku o Rf = 0,83 w układzie C. HPLC: czas retencji 4,16 minut, w mieszaninie 70: 30 acetonitrylu i roztworu fosforanu o pH 2,1.
Widmo PMR (częściowe), CDC13,250 MHz, <5, ppm: 0,95 /m, 4H/, 1,26 i 1,27 /d, po 3H/, 2,13 /s, 3H/, 2,76i 3,11 /dd,po IH/, 3,39/m,4H/, 3,70/m,4H/,4,08 /szerokiepasmo, IH/,4,28 /m, IH/, 4,41 /m, 3H/, 4,82, 5,83 i 6,93 /d, po IH/, 5,04 /septet, IH/.
Przykład LV.BocPheHisnor-C-StaNHCH3(wzór 1,Z — t-butoksykarbonyloamino,M = fenyl, R2 = imidazo-4-ilometyl, W — CH)))OH, Z1 = CONHCH3, oraz X — cykloheksyl).
A. N-metylo-/S/-3-t-Boc-amino-4-cykloheksylo-/R/-2-hydroksybutyroamid.
Do ochłodzonego do temperatury -30°C roztworu 100 mg kwasu /S/-3-t-Boc-amino-4cykloheksylo-/R/-2-hydroksymasłowego (opis patentowy St. Zjedn. Am. nr 4 599 198) w 0,9 ml czterowodorofuranu i 55 μΐ trójetyloaminy dodano 45 μΐ chloromrówczanu izobutylu. Po upływie 1,5 godziny mieszaninę oziębiono do temperatury -60°C, dodano 1,5 ml 1,6 molarnego roztworu metyloaminy w czterowodorofuranie i następnie ogrzano do temperatury 25°C. Nadmiar metyloaminy przepuszczono przez mieszaninę, którą następnie rozcieńczono 25 ml eteru etylowego, ekstrahowano dwukrotnie nasyconym roztworem wodorowęglanu sodowego, wysuszono i zatężono. Po chromatograficznym oczyszczaniu na żelu krzemionkowym, z zastosowaniem do elucji mieszaniny 2:1 octanu etylu i heksanu, otrzymano 45 mg (42%) tytułowego związku w postaci bezbarwnego osadu. Rf = 0,16, żel krzemionkowy, mieszaniny 2:1 octanu etylu i heksanu, HPLC, mieszanina 40:60 acetonitrylu i 0,1 molarnego roztworu fosforanu o pH 2,1, czas retencji 3,32 min.
151 679
B. N-metylo-/S/-3-amino-4-cykloheksylo-/R/-2-hydroksybutyroamid.
Porcję 45 mg produktu z części A rozpuszczono w 2 ml 4 n roztworu chlorowodoru w dioksanie i całość mieszano w ciągu 1,5 godziny w temperaturze 25°C. Mieszaninę zatężono i następnie kilka razy odparowano z eterem etylowym. Otrzymano 50 mg tytułowego związku w postaci bezbarwnego osadu. HPLC, czas retencji 3,05 min., mieszanina 40/60 acetonitrylu i 0,1 molarnego roztworu fosforanu o pH7,0.
C. BocPheHis/imBoc/nor-C-StaNHCH3.
Do ochłodzonego do temperatury 0°C roztworu 49 mg produktu z części B w 0,5 ml chlorku metylenu dodano 30 μΐ trójetyloaminy, 112 mg BocPheHis/imBoc/ (opis patentowy St. Zjedn. Am. nr 4 599 198), 48 mg hydroksybenzotriazolu i 46 mg dwucykloheksylokarbodwuimidu i całość mieszano w ciągu 6 godzin w temperaturze 0°C, po czym pozwolono by temperatura doszła w ciągu nocy do 25°C. Mieszaninę przesączono, osad przemyto chlorkiem metylenu, połączone przesącze zatężono i pozostałość rozpuszczono w octanie etylu. Roztwór mieszano w ciągu kilku minut, zawiesinę przesączono i przesącz przemyto dwukrotnie 1 n roztworem wodorotlenku sodowego, suszono nad siarczanem magnezu i zatężono. Po chromatografii na żelu krzemionkowym z elucją chlorkiem metylenu zawierającym stopniowo wzrastającą ilość etanolu (1%, 2%, 4%, 6% i 10%) otrzymano 57 mg tytułowego związku w postaci bezpostaciowego, bezbarwnego osadu.
D. BocPheHisnor-C-StaNHCH3.
Produkt z części C rozpuszczono w 1,2 ml mieszaniny 80:20 (objętość na objętość) kwasu octowego i wody i mieszano w ciągu 12 godziny w temperaturze 25°C. Mieszaninę zatężono, a następnie odparowano trzykrotnie z eterem etylowym i dwukrotnie z chlorkiem metylenu. Otrzymano 47 mg produktu w postaci jasnobrązowego proszku. HPLC, czas retencji 3,61 min., mieszanina 50/50 acetonitrylu i 0,1 molarnego roztworu fosforanu o pH2,l.
Widmo PMR DMSO, 300 MHz, częściowe, δ, ppm: 1,32 /s, 9H, Boc/, 2,60 /d, 3H, NCH3/, 3,90, 4,66 i 7,9 /m, po IH/, 4,18 /m, 2H/, 7,12, 7,7, 8,28 /d, po IH/, 7,32 /s, IH/, 7,2-7,4 /m, protony aromatyczne/.
Przykład LVI. Ester izopropylowy morfolinokarbonylo-PheSernor-C-Sta (wzórl, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = HOCH2-, X = cykloheksyl, W = CH)))OH, Z1 = CO2CH/CH3/2).
A. Do roztworu 25 g morfolinokarbonyloalaniny i 15,5 g N-hydroksysukcynoimidu w 800 ml chlorku metylenu dodano 19 g DEC. Po 20 godzinnym mieszaniu w temperaturze pokojowej roztwór przemyto 2 X 200 ml nasyconego roztworu kwaśnego węglanu sodowego, wysuszono nad MgSOi, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Dało to 29 surowego stałego produktu o barwie białej.
Widmo PMR, 300 MHz, CDC13, δ, ppm, 2,78 /m, 4H/, 4,81 /d, IH, J = 8Hz/, 5,90 /m, IH/.
B. MorfolinokarbonyloPheSer.
Roztwór 0,50 morfolinokarbonyloPheSuc w 5 ml czterowodorofuranu dodano do roztworu 0,30 g seryny w 10 ml nasyconego roztworu kwaśnego węglanu sodowego. Powstałą mieszaninę mieszano 15 minut, po czym rozcieńczono ją 30 ml 0,lN roztworu wodorotlenku sodowego i przemyto 3X40 ml chlorku metylenu. Fazę wodną zakwaszono stężonym kwasem solnym i ekstrahowano 6 X 75 ml octanu etylu. Połączone ekstrakty wysuszono nad MgSO4, przesączono i zatężono uzyskując 0,40 g surowego produktu, który używano bez dalszego oczyszczania.
Widmo PMR, 300 MHz, CDC13, 6, ppm, 3,66 /m, 2H/, 4,25 /m, IH/, 4,37 /m, IH/.
Przykład LVIL Ester izobutylowy morfolinokarbonyloPheSMeCysnor-C-Sta (wzórl, Z = morfolinokarbonyloamino, M = fenyl, R2 = CH3SCH2-, X = cykloheksyl, W = CH)))0H, Z1 = CH2CH/CH3/2).
A. Ester izobutylomorfolinostatyny.
Roztwór 1,0 g nitrylu kwasu N-Boc-2-/R/-hydroksy-3-/S/-aminofenylomasłowego w 40 ml alkoholu izobutylowego po nasyceniu suchym chlorowodorem mieszano 48 godzin w temperaturze pokojowej. Mieszaninę poreakcyjną zatężono, a pozostałość rozcieńczono 100 ml 0,lN roztworu kwasu solnego. Po 15 minutach mieszania roztwór przemyto 2 X 100 ml eteru. Fazę wodną po zalkalizowaniu ekstrahowano 2 X 100 ml octanu etylu. Połączone ekstrakty wysuszono nad MgSO4, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, otrzymując 0,43 g surowego produktu używanego bez dalszego oczyszczania.
Widmo PMR, 300 MHz, CDC13, <5, ppm, 0,93 /d, 3H, J = 6Hz/, 3,34/m, IH/, 3,97/m, 2H/, 4,07/d, 1H, J = 3Hz/.
151 679

Claims (3)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Sposób wytwarzania nowych polipeptydów zawierających norstatynę i nor-cyklostatynę o wzorze 1 i ich dopuszczalnych w farmacji soli, w którym to wzorze Z oznacza grupę o wzorze Ri-Y-NH, w którym Rn oznacza grupę /Ci-C4/alkoksylową, karboksy/Ci-C4/alkilową, hydroksy/C2-C4/alkilenoaminową, morfolinową, hydroksypiperydynową, 4-ketopiperydynową, piperazyno wą, ketal 4-ketopiperydynoetylenu, 4-/Ci-C4/-alkoksykarbonylopiperazynową, pirydylową, /Ci-C3/-alkoksykarbonylo-/s/-pirolidylową-2 lub 4-/Ci-C3/alkanoilopiperazynową, Y oznacza grupy o wzorach C = 0 lub P/OCH3/ = 0, we wzorze 1 M oznacza grupę fenylową, metoksyfenylową lub /C6-C7/cykloalkilową, R2 oznacza grupę /Ci -Cs/alkilową, /Ci-C3/alkilotio/Ci-C2/alkilową, /Ci-C3/alkoksy /Ci-C2/alkilową, imidazolilo-4-metylową lub karbomylo /Ci-C2/alkilową, X oznacza grupę cykloheksylową, W oznacza grupę CH)))OH, Z1 oznacza grupę o wzorze R-S-T, w którym R oznacza grupę C = 0, S oznacza atom tlenu, grupę NH lub wiązanie chemiczne pomiędzy R i T, a T oznacza grupę /Ci-Cs/alkilową lub benzylową, znamienny tym, że tworzy się wiązanie amidowe, C/O/N, przez odwadnianie-sprzęganie związków o wzorze 5 i o wzorze 6, w których to wzorach odpowiednio Z, X, W i Z1 mają wyżej podane znaczenie, przy czym jeżeli K we wzorze 5 oznacza grupę o wzorze 7, w którym M ma wyżej podane znaczenie, to P we wzorze 6 oznacza grupę o wzorze 8, w którym R2 ma wyżej podane znaczenie, a jeżeli K we wzorze 5 oznacza grupę o wzorze 9, w którym M i R2 mają wyżej podane znaczenie, to P we wzorze 6 oznacza wiązanie, przy czym grupy funkcyjne nie uczestniczące w tej reakcji mogą być chronione, a następnie ewentualnie selektywnie usuwa się grupy blokujące.
  2. 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako reagent sprzęgający stosuje się 1hydroksybenzotriazol i dwucykloheksylokarbondwuimid.
  3. 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako reagent sprzęgający stosuje się 1hydroksybenzotriazol i dwumetyloaminopropyloetylokarbondwuimid.
    NI
    Ó r2 h
    Wzór 1
    -NH co-NH
    COOH
    OH
    Wzór 3
    Wzór 2
    Wzó r A
    Wzó r 5
    Wzór 6 ,Μ Η ,Μ Η
    -CH- -CH-CON- -CHCON-CH
    Wzór 7
    O_JJ-Ć-NH
    Wzór 10
    Ο
    N-Ć-NH
    Wzór 8
    Wzór 9
    Wzór 11
    ΗΙθΙ-CNH
    COjCHj
    Wzór 12 (CH^\p O COhJ_^|-(^ NH
    Wzór 15
    O
    CH£0N NĆNH
    Zakład Wydawnictw UP RP. Nakład 100 egz.
    Cena 3000 zł
PL1987268521A 1986-10-31 1987-10-30 The methodof manufacture of new polypeptides containing nor-statine and nor-cyclostatine PL151679B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US92544986A 1986-10-31 1986-10-31
US6898287A 1987-07-01 1987-07-01

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL268521A1 PL268521A1 (en) 1988-09-01
PL151679B1 true PL151679B1 (en) 1990-09-28

Family

ID=26749566

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL1987268521A PL151679B1 (en) 1986-10-31 1987-10-30 The methodof manufacture of new polypeptides containing nor-statine and nor-cyclostatine

Country Status (22)

Country Link
EP (1) EP0266950B1 (pl)
JP (1) JPH07108901B2 (pl)
KR (1) KR910002544B1 (pl)
CN (1) CN1027271C (pl)
AR (1) AR245732A1 (pl)
AU (1) AU585180B2 (pl)
CA (1) CA1310793C (pl)
DE (1) DE3788626T2 (pl)
DK (1) DK568487A (pl)
EG (1) EG18378A (pl)
ES (1) ES2061512T3 (pl)
FI (1) FI90346C (pl)
HU (1) HU207869B (pl)
IE (1) IE61087B1 (pl)
IL (1) IL84270A0 (pl)
MY (1) MY103189A (pl)
NO (1) NO173017C (pl)
NZ (1) NZ222373A (pl)
PH (1) PH25231A (pl)
PL (1) PL151679B1 (pl)
PT (1) PT86024B (pl)
YU (1) YU46819B (pl)

Families Citing this family (51)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5214129A (en) * 1985-01-23 1993-05-25 Abbott Laboratories Peptidylaminodiols
IL81234A (en) * 1986-01-16 1992-09-06 Abbott Lab Peptidylaminodiols,process for their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
WO1988003022A1 (en) * 1986-10-31 1988-05-05 Pfizer Inc. Relatively low molecular weight polypeptides as renin inhibitors
US4977141A (en) * 1987-10-01 1990-12-11 G. D. Searle & Co. Peptidyl α-aminoacyl aminodiol carbamates as anti-hypertensive agents
US4927807A (en) * 1987-10-06 1990-05-22 Abbott Laboratories Glaucoma treatment
JPH02503440A (ja) * 1988-03-03 1990-10-18 イー・アール・スクイブ・アンド・サンズ・インコーポレイテッド １，２‐ヒドロキシホスホネートおよびその誘導体
US5217958A (en) * 1988-03-03 1993-06-08 E. R. Squibb & Sons, Inc. 1,2-hydroxy phosphonates and derivatives thereof
US5736520A (en) * 1988-10-07 1998-04-07 Merrell Pharmaceuticals Inc. Peptidase inhibitors
ZA897514B (en) * 1988-10-07 1990-06-27 Merrell Dow Pharma Novel peptidase inhibitors
EP0376040A3 (en) * 1988-12-27 1990-09-12 American Cyanamid Company N-phosphinyl di-and tripeptides as renin inhibitors
US4965372A (en) * 1989-01-19 1990-10-23 Pfizer Inc. Process and intermediates for isopropyl 3S-amino-2R-hydroxy-alkanoates
WO1990009172A1 (en) * 1989-02-16 1990-08-23 Pfizer Inc. Phosphorus containing renin inhibitors
US5468732A (en) * 1989-02-16 1995-11-21 Pfizer Inc. Phosphorus containing renin inhibitors
US5216013A (en) * 1989-12-04 1993-06-01 G. D. Searle & Co. Aralkyl-N-terminal cycloalkoxy-C terminal amino hydroxy β-amino acid derivatives
US5231111A (en) * 1989-12-04 1993-07-27 G. D. Searle & Co. Imidazolyl/imidazolylalkyl-N-terminal cycloalkoxy-C-terminal amino hydroxy β-amino acid derivatives
US5180744A (en) * 1989-12-04 1993-01-19 G. D. Searle & Co. Aralkyl-N-terminal amino hydroxy
US5212175A (en) * 1989-12-04 1993-05-18 G. D. Searle & Co. Benzothiophenyl benzothiophenylalkyl-N-terminal amino hydroxy β-amino acid derivatives
US5215996A (en) * 1989-12-04 1993-06-01 G. D. Searle & Co. Naphthyridinyl/naphthyridinylalkyl-N-terminal cycloalkoxy-C-terminal amino hydroxy β-amino acid derivatives
US5217991A (en) * 1989-12-04 1993-06-08 G. D. Searle & Co. Cycloalkyl/cycloalkylalkyl-N-terminal cycloalkoxy-C-terminal amino hydroxy β-amino acid derivatives
US5217988A (en) * 1989-12-04 1993-06-08 G. D. Searle & Co. Indolyl indolylakyl-N-terminal cycloalkoxy-C-terminal amino hydroxyβ-amino acid derivatives
US5223532A (en) * 1989-12-04 1993-06-29 G. D. Searle & Co. Chromonyl/chromonylalkyl-N-terminal cycloalkoxy-C-terminal amino hydroxy β-amino derivatives
US5223514A (en) * 1989-12-04 1993-06-29 G. D. Searle & Co. Quinolinyl/quinolinylalkyl-N-terminal cycloalkoxy-C-terminal amino hydroxy β-amino acid derivatives
US5223512A (en) * 1989-12-04 1993-06-29 G. D. Searle & Co. Quinolonyl/quinolonylalkyl-N-terminal cycloalkoxy-C-terminal amino hydroxy β-amino acid derivatives
US5180725A (en) * 1989-12-04 1993-01-19 G. D. Searle & Co. Quinoxalinyl/quinoxaliy; alkyl-N-terminal amino hydroxy
US5175170A (en) * 1989-12-04 1992-12-29 G. D. Searle & Co. β-amino acid derivatives
US5223534A (en) * 1989-12-04 1993-06-29 G. D. Searle & Co. Benzofuuranyl/benofuranylaklyl-N-terminal cycloalkoxy-C-terminal amino hydroxy β-amino acid derivatives
US5179102A (en) * 1989-12-04 1993-01-12 G. D. Searle & Co. Naphthyridinyl/naphthyridinylalkyl-n-terminal anino hydroxy β-amino acid derivatives
IE66574B1 (en) * 1989-12-04 1996-01-24 Searle & Co Heterocyclic acyl aminodiol beta-amino acid derivatives
US5147888A (en) * 1989-12-04 1992-09-15 G. D. Searle & Co. N-terminal indolyy indolylalkylaminodiol β-amino acid derivatives
US5171751A (en) * 1989-12-04 1992-12-15 G. D. Searle & Co. Benzofuran/benzofuranalkyl-N-terminal amino hydroxy
US5175181A (en) * 1989-12-04 1992-12-29 G. D. Searle & Co. Imidazolyl/imidazolylalkyl-N-terminal amino hydroxy
US5210095A (en) * 1989-12-04 1993-05-11 G. D. Searle & Co. Chromonyl/chromonylalkyl-N-terminal amino hydroxy
US5217989A (en) * 1989-12-04 1993-06-08 G. D. Searle & Co. Benothiophenyl/benzothiophenylalkyl-N-terminal cycloalkoxy-C-terminal amino hydroxy β-amino acid derivatives
TW209870B (pl) * 1990-01-18 1993-07-21 Pfizer
US5023338A (en) * 1990-03-08 1991-06-11 American Home Products Corporation Renin inhibitors
US5075451A (en) * 1990-03-08 1991-12-24 American Home Products Corporation Pyrrolimidazolones useful as renin inhibitors
US5064965A (en) * 1990-03-08 1991-11-12 American Home Products Corporation Renin inhibitors
US5095119A (en) * 1990-03-08 1992-03-10 American Home Products Corporation Renin inhibitors
US5278161A (en) * 1990-06-28 1994-01-11 Hoffmann-La Roche Inc. Amino acid derivatives useful as renin inhibitors
JPH04243835A (ja) * 1990-08-29 1992-08-31 Pfizer Inc 高眼圧症又は緑内障治療用薬剤組成物及び治療方法
US5442105A (en) * 1991-06-21 1995-08-15 Takasago International Corporation Process for producing cyclohexylbutyric acid derivative
JP2847584B2 (ja) * 1991-06-21 1999-01-20 高砂香料工業株式会社 シクロヘキシル酪酸誘導体及びその製造法
WO1993011799A1 (en) * 1991-12-18 1993-06-24 Pfizer Inc. Soybean protein or hydrolyzates in pharmaceutical compositions to protect bioactive peptides from enzymatic inactivation
US6153592A (en) * 1992-11-09 2000-11-28 Port Systems, Llc Enhancing the bioavailability of proteolytically labile therapeutic agents
US5872101A (en) * 1995-01-06 1999-02-16 Sibia Neurosciences, Inc. Methods of treating neurodegenerative disorders using protease inhibitors
US5804560A (en) * 1995-01-06 1998-09-08 Sibia Neurosciences, Inc. Peptide and peptide analog protease inhibitors
US6107329A (en) * 1995-06-06 2000-08-22 Pfizer, Inc. Substituted n-(indole-2-carbonyl)-glycinamides and derivatives as glycogen phosphorylase inhibitors
WO2000026191A1 (fr) 1998-11-04 2000-05-11 Meiji Seika Kaisha, Ltd. Derives de picolinamide et pesticides contenant ces derives comme ingredient actif
US6117870A (en) * 1998-11-12 2000-09-12 Fujirebio Kabushiki Kaisha Cyclic amide derivatives
US20020002152A1 (en) 2000-04-14 2002-01-03 Craig Richard A. Hydrazide and alkoxyamide angiogenesis inhibitors
UA108742C2 (uk) 2009-09-23 2015-06-10 Фармацевтична композиція для лікування запальних захворювань, опосередкованих mcp-1

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1254699A (en) * 1984-03-12 1989-05-23 Jasjit S. Bindra Renin inhibitors containing statine or derivatives thereof
DE3418491A1 (de) * 1984-05-18 1985-11-21 Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt Diaminosaeurederivate
EP0190891A3 (en) * 1985-01-31 1988-04-20 Kissei Pharmaceutical Co. Ltd. Novel amino acid derivatives
US4743585A (en) * 1986-11-21 1988-05-10 Warner-Lambert Company Renin inhibitors
NZ222755A (en) * 1986-12-23 1989-11-28 Warner Lambert Co Renin inhibiting acyl peptide derivatives containing two to four amino acid residues, and pharmaceutical compositions

Also Published As

Publication number Publication date
HUT45270A (en) 1988-06-28
YU198087A (en) 1989-02-28
NO874530D0 (no) 1987-10-30
FI90346B (fi) 1993-10-15
FI90346C (fi) 1994-01-25
DK568487A (da) 1988-05-01
CN1027271C (zh) 1995-01-04
KR910002544B1 (ko) 1991-04-23
CN87101499A (zh) 1988-05-11
NZ222373A (en) 1989-09-27
PL268521A1 (en) 1988-09-01
DE3788626D1 (de) 1994-02-10
AU585180B2 (en) 1989-06-08
AR245732A1 (es) 1994-02-28
FI874787A (fi) 1988-05-01
PT86024A (en) 1987-11-01
DK568487D0 (da) 1987-10-30
PT86024B (pt) 1990-07-31
AU8054187A (en) 1988-05-05
IE61087B1 (en) 1994-09-21
HU207869B (en) 1993-06-28
EP0266950A3 (en) 1990-04-11
JPH07108901B2 (ja) 1995-11-22
IE872929L (en) 1988-04-30
CA1310793C (en) 1992-11-24
NO173017B (no) 1993-07-05
MY103189A (en) 1993-05-29
DE3788626T2 (de) 1994-04-28
JPH07173134A (ja) 1995-07-11
KR880005152A (ko) 1988-06-28
PH25231A (en) 1991-03-27
IL84270A0 (en) 1988-03-31
EG18378A (en) 1993-04-30
EP0266950A2 (en) 1988-05-11
YU46819B (sh) 1994-06-10
FI874787A0 (fi) 1987-10-30
NO874530L (no) 1988-05-02
ES2061512T3 (es) 1994-12-16
EP0266950B1 (en) 1993-12-29
NO173017C (no) 1993-10-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL151679B1 (en) The methodof manufacture of new polypeptides containing nor-statine and nor-cyclostatine
FI68405C (fi) Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara kaboxialkyldipeptider
CA1254699A (en) Renin inhibitors containing statine or derivatives thereof
KR890003602B1 (ko) 옥사-및 아자호모사이클로스타틴 폴리펩티드의 제조방법
AU595578B2 (en) N-heterocyclic alcohol renin inhibitors
US4558064A (en) 2-Azasfiro[4.(3+N)]-3-carboxylic acid derivatives, a process for their preparation, agents containing these derivatives and their use
CZ325496A3 (en) Amino acid derivatives, process for preparing and pharmaceutical compositions containing thereof
FR2677361A1 (fr) Nouveaux peptides et pseudopeptides, derives de tachykinines, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
WO1986002353A1 (en) Dipeptide compounds having pharmaceutical activity and compositions containing them
PL194560B1 (pl) Związki o właściwościach uwalniania hormonu wzrostu, kompozycja farmaceutyczna zawierająca te związki oraz ich zastosowanie
US5442044A (en) Orally active renin inhibitors
AU632894B2 (en) Orally active renin inhibitors
US5114927A (en) Analog of peptidase substrates
US4658013A (en) Analgesic and/or opiate antagonist tripeptide amides and processes for preparation and compositions thereof
US4895834A (en) Renin inhibitors III
US5453488A (en) Amino-substituted heterocycles as renin inhibitors
AU592122B2 (en) Difluorocyclostatine containing polypeptides
US5219851A (en) Tetrahydroisoquinoline-type renin inhibiting peptides
US5151513A (en) N-heterocyclic alcohol derivatives
EP0207680B1 (en) Chemical compounds
Elliott et al. Novel Asp32-replacement tetrapeptide analogs as potent and selective CCK-A agonists
US4503043A (en) Substituted acyl derivatives of octahydro-1H-isoindole-1-carboxylic acids
EP0297816B1 (en) Homocyclostatine and cyclostatine containing polypeptides as antihypertensive agents
US4859654A (en) Homocyclostatine and cyclostatine containing polypeptides as antihypertensive agents
JPWO2003082819A1 (ja) Ｎ−フェニル−ｎ−（４−ピペリジニル）アミド誘導体