Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia nowych pochodnych alkaloidów indolo-dihy¬ droindolowych o wzorze ogólnym R—O—CO— —X—CO—Z, w którym R oznacza grupe o wzorze 1, w którym R* oznacza atom wodoru, gmipe me¬ tylowa lub formylowa, gdy R4 i R5 wystepuja od¬ dzielnie to R5 oznacza atom wodoru a jeden z R* i R4 oznacza grupe etylowa zas drugi atom wo¬ doru lub grupe hydroksylowa gdy, R4 i R5 wziete razem tworza z przyleglymi atomami wegla piers¬ cien oksiranowy, to R* oznacza grupe etylowa, R1 oznacza grupe karboksylowa, —COOC/Ci-s/alfci- lowa, lub grupe CO—R6, w której R6 oznacza grupe aminowa lub NH—tCi-tl alkilowa, X oznacza prostolancuchowa grupe aUMlenowe o 1—4 ato¬ mach wegla, rozgaleziona grupe ailkilenowa o 2—8 atomach wegla, grupe JCt-J alkenylenowa, /Ct-4/ cykloalkilenowa, fenylenowa, hydroksypodstawiona grupe /Ci-4( alkilenowa luib wiazanie bezposred¬ nie, zas Z oznacza grupe hydroksylowa ewentu¬ alnie w postaci soli.Zwiazki te sa uzyteczne jako srodki przeciw- nowotworowe we wszczepionych nowotworach u myszy a takze wykazuja wlasciwosci przeciw- miitozowe.Alkaloidy otrzymywane z Vinca rosea repre¬ zentuja jeden z najbardziej obiecujacych obsza¬ rów chemii dla otrzymywania leków zapobiegaja¬ cych rozwojowi doswiadczalnych zlosliwych nowo¬ tworów u ssaków. Poczatkowo stwierdzono, ze 10 15 20 25 aktywne sa tylko niektóre z alkaloidów, otrzy¬ mywane z lisci roslin za pomoca ekstrakcji i oczyszczane chromatograficznie. Do takich aktyw¬ nych przeciwnowotworowo alkaloidów otrzymywa¬ nych bezposrednio z lisci rosliny Vinca naleza: VLB (winblastyna, winkaleukoblastyna), winkry- styna (leurokrystyna), leurozyna (winleurozyna), leurozydyna (winrozydyna), leurofiormiina (tformy- loleurozyna), oraz dezoksy-VLB „A" i ,3" (4'-de- zoksy-VLB i 4'-dezoksyleuirozydyna).Prace nad chemicznymi modyfikacjami alkalo¬ idów Vinca posuwaly sie powoli naprzód. Dotych¬ czasowe modyfikacje alkaloidów indolodihydroin- . dolowych otrzymywanych z Vinca rosea prowa¬ dzono tylko na trzech pozycjach czasteczki, a mia¬ nowicie, C-3, C-4' i C-4. Jedna z ostatnich i bardziej udanych modyfikacji podstawowej struktury dndo- lo-dihydroindolowej jest otrzymanie pochodnych karboksyamidowych w pozycji C-3, wiekszosc których sitanowia aktywne czymniki przeciwnowo- tworowe [opis patentowy St. ZjediL Am. nr 4166 810 oraz Conrad i wsp. w J. Med. Chem. 22,391 (1079)].Wandezyna, czyli 3-karboksyamid 4-dezacetyfLo- -VLB, jest obecnie sprzedawana w wielu krajach europejskich jako srodek przeciwnowotworowy.Wiadomo, ze jest skuteczna w leczeniu niektó¬ rych opornych na winkrystyne bialaczek a takze wielu pospolitych nowotworów, w tym komórek zarodnikowych nowotworów. W reakcji pochod¬ nej 3-hydroksylowej i 3-estrowej z izocyjania- 142 754142 754 3 nem otrzymano odpowiednie pochodne oksazoli- dynodionowe, z których jedna, mianowicie po¬ chodna Nnchloroetylowa (winzolidyna), .przechodzi obecnie badania kliniczne. Pochodne oksazolidyno- ^ionowe zostaly opisane przez Millera i Gutow¬ skiego w opisie patentowym St. Zjedn. Am. nr RE 30 560. iDruga modyfikowana pozycja czasteczki jest po¬ zycja C-4'. Wiekszosc tych modyfikacji przepro¬ wadzano poprzez 3', 4'-anhydro-pochodna, która mozna otrzymywac sprzegajac windoline z kata- rantyna w zmodyfikowanej reakcji Polonovskiego [Potter i wsp. J.C.S. Chem. Camim., 670 (1975)] lub odwadniajac VLB lub leurozydyne (Gutowski i Miller, opis patentowy St. Zjedn. Am. nr 4 03& 663).W reakcji odwadniania otrzymuje sie, oprócz A-3', 4'-anhydropochodnej, dwa izomery z egzo- -podwójnymi wiazaniami. Punkcjonalizowanie któ¬ regos z tych podwójnych wiazan i otrzymywanie epoksydów, dioli i podobnych zwiazków jest pod¬ stawa chemicznych modyfikacji w pozycji C-4'.Trzecia z pwodzeniem modyfikowana pozycja w czasteczce indolodihydroindolu jest pozycia C-4.Przede wszystkim, w wyniku hydrolizy grupy acetoksylowej, obecnej we wszystkich wymienio¬ nych alkaloidach Vinca, otrzymuje sie aktywne przeciwnowotworowe pochodne 4-dezacetylowe (windezyna, karboksyamid w pozycji C-3 jest po¬ chodna 4^dezacetylowa). Hargrove w oposach pa¬ tentowych St. Zjedn. Am. nr 3 387 001 i 3 392173 podal, ze otrzymal nowe pochodne 4-acylowe 4^dezacetylo-VLB, 4-d«zacetylowinkrystyny itd.Wsród tych nowyeh pochodnych znajdowala sie 4 Teateji z uwe&rm* np. g dwumetyloainma. Otrzy¬ mano aclny lek przeeiwwowotworowy, wimglicynian cayli N,N-4wwxwtylo-4^Jicynylo-VLE. W innej modyfikacja WoHo i Nwa* w opisie patentowym St. Zjedn. Am. ar 4132 082 podali, ze utfcniU gru¬ pe, e^fcydrotoytawa w 4-deracetyU*-VLB do 4nketo- arwiaLfcu, a Thompson w opisie patentowym St.Zjedn. Am. nr 4195 022 podal, ze zredukowal ten keton do 4^e|»hydirctey*/4a^y zwiazku,. który takze wykazuje aktywnosc prze- ciwnowotwojowa.Mostkowane dimery indelOHdihydromdolowe, to znaczy takie same lute rójfoe resaty alkaloidów polaczone mostkiem w pozycji 3Hkarfaoksylowej przez dwuamid, zostaly opasane przez Conrada i Canzona w optóe patentowym SL Zjedn. Am. nr 4 IM 504. Z drugiej strony, dtaerryczne indolo- -dahydroindolowe aJkakridy Vinca nie sa mostko¬ wane poprzez inne pozycje czasteczki i nie tworza tetremerów.VLB i wimkiryctyine sprzegano z proteinami otrzymujac produkty uzyteczne w badaniach ra- diofrntnunoilogieznych. Jako pochodne stosowano 3-kaflfiboksyazyd 4^dezacetyk)-VX,B (azydek kwasu dezacetylowinblastynowego) i odpowiedni zwiazek wAnkrystynowy. Przykladowe reakcje zostaly opi¬ sane'w J. Med. Chem., 22, 391 (1979) przez Con¬ rada i wsp., w europejskim opisie patentowym nr 41935, w opisie patentowym St. Zjedn. Am. nr 4 203 898.Sposobem wedlug wynalazku zwiazki o wzorze 4 R—O—CÓ—X—CO—Z, w którym R ©zmacza «V meryczna grupe indolo-dihydroinidolowa, korayotftse wywodzaca sie z przeciwnowotworowego dimerycz- nego alkaloidu 4-acetoksy- lob 4-hydroksymdolo- 5 -dihydroindolowego, przedstawiona wzorem 1, a X i Z maja znaczenie podane powyzej, wytwarza sie przez reakcje zwiazku o wzorze ROH l« zwiazkiem o wzorze 2, w obojetnym rozpuszczatóBBu orga¬ nicznym. Reakcje zazwyczaj prowadzi sie w tem- io peraturze 0—50°C.Wyjsciowe alkaloidy pochodnych 4-dezacetylo- wych ROH przedstawione wzorem 3 zostaly opi¬ sane w nastepujacych zródlach: leurozyna w opi¬ sie patentowym St. Zjedn. Am. nr 3 379 947; VLB 15 w opisie patentowym St. Zjedn. Am. nr 3 097137; leurozydyna (winrozydyna) i ieuTofcryslyma fwin- krystyna) w opisie patentowym St. Zjedn. Am. nr 3 205 220; demetylo-VLB w opisie patentowym St. Zjedn. Am. nr 3 354163; windezyna i inne 20 3-karboksyamady w opisie patentowym St. Zjedn.Am. nr 4 203898; kwas wiblastynowy i kwas win- krystynowy w opisie patentowym St. Zjedn. Am. nr 4 012 390; 4'<*tpiwinkrystynft w opisie patento¬ wym St. Zjedn. Am. nr 4143 041; leuroformina 25 i formyloleurozyna w opisie patentowym St. Zjedn.Am. nr 4 279 816; oraz dezctoy-VLB „A" i „B" w Tetrahedron Letters. 783 (1958).Synteze zwiazków wytwarzanych sposobem we¬ dlug wynalazku mozna prowadzic wieloetapowo. 30 W pierwszym etapie, 4^dezacetylodndolo-dihydro- indol o wzorze ROH, otrzymany sposobem poda¬ nym przez Hargrove'a w opisie patentowym St.Zjedn. Am. nr 3 392173, poddaje sie acylowaniu bezwodnikiem kwasu kanboksylowego o wzorze 2 35 w którym przykladowymi grupami X sa grupy takie jak metylenowa, etylenowa, propylenowa, butylenowa, winylowa, propenylenowa, butenyle- nowa, butynylenowa, etynylenowa, hyidroksyetyle- nowa, l^ndwuhydroksyetylenowa, l^^drwutnetylo- 40 etylenowa,, l,2,3,4-czterowodorobutylenowa,3,4-dwu- metylobutylenowa, 1,4-cykloheksylenowa, 1,4-tfeny- lenowa, 1,2-fenylenowa i podobne.Korzystnie X ozn&coa grupe aMlenowa o 1—4 atomach wegla, grupe aJkenylenowa o 2—4 ato- 45 mach wegla, grupe alkinylenowa o 2—4 atomach wegla, grupe cykloailkitenowa o 3—6 atomach we¬ gla lub fenylenowa a w szczególnosci grupe a&i- lenowa o 1—4 atomach wegla. Otrzymuje sie zwiazek o wzorze R—O—CO—X-—CO—Zx w któ- 50 rym Z oznacaa grupe hydroksylowa.Gdy indo^ndaJiydroindol bedzie poddany reak¬ cji z bezwodnikiem bursztynowym lub podobnym w celu otrzymania zwiazku o wzorze R^-O—CO— —X—CO—Z, w którym R* oanacza grupe karbo- 55 ksylowa lub grupa o wasorze COR8* w którym R8 oznacza grupe chroniaca firupe torboksylow* wte¬ dy grupa estrowa w pozycji 3 jak tez grupa estro¬ wa w pozycji 4 musza bye, najpierw xhydroli2x wane w celu otrzymania np. z VLB kwasu 4-de- 60 zacetylowinolaetynowego, patoe opa» patentowy St Zjedn. Am. ar 4 912 390. W naalepnyro «rtapfe trae- ba chronic grupe 3Hkarboksylowa omówiona powy¬ zej grupa ochronna. Taka pochodna z ochroniona w pozycji 3 grupa karboksylowa i wolna grupa 65 karboksylowa w pozycji 4 poddaje flde nastepnie,142 754 5 jak to opisano uprzednio, reakcji z bezwodnikiem.Otrzymany zwiazek mozna juz dalej przerabiac chemicznie i otrzymywac zwiazki o wzorze R—O—CO—X—OO— cji srodowisko obojetne lub zasadowe i zapobiega¬ jac w ten sposób odszczepianiu ochronnej grupy karboksylowej w pozycji 3. Po przylaczeniu ewen¬ tualnie chronionej grupy koncowej Z do odpo¬ wiedniego miejsca, mozna odezczepiac grupy ochronne i otrzymywac zwiazek o wzorze R—O— —CO-^X—CO—Z, w którym Rl oznacza grupe kar¬ boksylowa.Jesli X w zwiazku, który chce sie otrzymac oznacza grupe hydroksy-, dwuhydroksy- lub czte- rohyoroksyalkilenowa o 1—4 atomach wegla, to znaczy lancuch pochodzacy z kwasu jablkowego, winowego lub cukrowego, podczas reakcji koniecz¬ ne jest chronienie grupy hydroksylowej lub gru¬ py hydroksylowych za pomoca grupy ochronnej, takiej jak piranylowa. Mozna tez stosowac grupe trójalkilosililowa, taka jak trójmetylosililowa.W przypadku wAcynabnego zwiazku dwuhydroksy- lowego, takiego jak kwas winowy, mozne stoso¬ wac acetal, to znaczy pochodna izopropyHdenowa, lub cykloheksyUdenowa.Zwiazki wytworzone sposobem wedlug wynalaz¬ ku przeksztalca sie w kationowe sole grupy kar¬ boksylowej w pozycji 3, gdy R* oznacza grupe COOH, takie np. jak sól sodowa, potasowa, czte- rometyloaminiowa i podobne. Sa to dopuszczalne w farmacji addycyjne sole kwasowe z nietoksycz¬ nymi kwasami nieorganicznymi, takimi jak chlo¬ rowodór, kwas azotowy, kwas fosforowy, kwas siar¬ kowy, bromowodór, jodowodór, kwas fosforawy i podobne, a takze z ndetoksycznymd kwasami organicznymi, takimi jak alifatyczne kwasy jedno- i dwu karboksylowe, kwasy fenyloalkanokarboksy- lowe, kwasy hydroksyelkaffKjkaTboksylowe i hydro- ksyalkanodwukarboksylowe, kwasy aromatyczne, alifatyczne i aromatyczne kwasy sulfonowe itp.Do takich dopuszczalnych w (farmacji soli na¬ leza siarczan, pirosdairczan, wodorosiarczan, siar¬ czyn, wodorosiarcryn, azotan, fosforan, wodorofos- taran, dwuwodorolosforan, metafosfbran, pirofos- taran, chlorek, bromek, jodek, octan, propionian, fcaprynian, k&prylan, akrylan, mrówczan, izoma- slan, kapronian, enantan, propóolan, szczawian, ma- lonian, bursztynian, suiberynian, sebacynian, fuma- ran, maleinian, migdalan, butyno-l,4-dwukarboksy- lan, heksyno-1, ft^wukarboksykin, benzoesan, chlo- robenzoesan, metylobenzoesan, ftalan, tereftalan, benzenosulftonian, totoenosulfondan, cWorobenzeno- sulfonian, ksylenosulfondan, fenylooctan, fenykpro- pfonian, fenylomailan, cytrynian, mleczan, p-hy- droksymailan, glikolan, jaiblczan, naftaleno-1-sul- fonian, naftaleno-2-sulfondan, mezyian i podobne.Zwlazkd wytworzone sposobem wedlug wynalaz¬ ku mozna przeksztalcic do zwiazków o wzorze R—O—CO-—X—OO—Z1, w którym Z1 oznacza atom chloru lub bromu, grupe tozylooksylowa, benzeno- suifonylooksylowa, metanosulfonylooksylcwa, azy- dowa Job inna grupe acylujaca. Zwiazki te uzy- tecsne sa nie tylko do wytwarzania takich zwiaz¬ ków, w których zarówno R jak Z zawieraja reszty alkaloidu indolordihydroindolowego, ale takze mo- 6 ga byc wykorzystane do sprzegania z immuno- globulina, taka jak poMklonalne i monoklonataie przeciwciala, i do otrzymywania w ten sposób od¬ powiednich polaczen do badan raddoimmunologicz^ 8 nych lub o wlasciwosciach przeciwnowotworowych« Takie polaczenia wytwarza sie poddajac poliklo- nalne lub monoklonalne przeciwcialo reakcji ze zwiazkiem o wzorze R—O—CO—X—CO—Z1, pro¬ wadzonej w typowych warunkach, np. w srodowi- 10 sku wodnym, w temperaturze 5—25°C. W wyniku reakcji nastepuje przylaczenie za pomoca wiazania kowalencyjnego jednej lub kilku reszt alkaloidu do wolnych grup aminowych czasteczki immuno- globuliny, np. do grup aminowych w resztach li- 15 zynowych. Ilosc przylaczonych reszt zalezy od ste¬ zenia reagentów i czasu trwania reakcji, ale zwy¬ kle wynosi przecietnie od 3 do 14 liub 20.Przykladowo, reakcje prowadzi sie wkraplajac powoli roztwór zwiazku o wzorze R—O—CO—X^- —CO—Z1 w odpowiednim rozpuszczalniku, takim jak dioksan, do buforowego roztworu immunoglo- buliny w np. 0,34 molarnym buforze boranowym o pH 8,6. Produfcz wyodrebnia sie za pomoca fil- u tracjd na zelu i przechowuje w nasyconym roztwo¬ rze siarczanu amonowego. Mozna go latwo zawró¬ cic do roztworu droga dializy wobec roztworu bu¬ forowego, np. buforu fosforanowego z chlorkiem sodowym o pH 7,4, Alternatywnie, mozna go prze- M chowywac w chlodni w temperaturze 4°C lub za¬ mrozony w temperaturze np. —HPC.Zwiazki otrzymana sposobem wedlug wynalazku sa uzyteczne jako zwiazki przeciwnowotworowe aktywne wobec wszczepianych nowotworów myszy. 35 Dla udowodnienia uzytecznosci zwiazków otrzy¬ manych sposobem wedlug wynalazku, jako inhibi¬ torów matozowych, badano za pomoca standafrdo~ wego postepowania ich zdolnosc do hamowania metacazy. W tablicy 1 przedstawiono wyniki ba- 40 dan, podajac w kolumnie pierwszej nazwe zwiaz¬ ku a w kolumnie drugiej stezenie (togo zwiazku w srodowisku w mcgAml, powodujac hamowanie metafazy. 45 Tablica 1 Nazwa zwiazku Siarczan 4-pólbursztynianu [ estru metylowego VLB Siarczan 4-pólbursztynJanhi 1 metylowindezyny Siarczan 4-pólbursztynianu windczyny Stezenie w mcg/ml 1 powodujac hamowanie mttafazy 0,02 0,2 02 Niektóre z powyzszych zwiazków wykazuja "tak¬ ze aktywnosc wobec wszczepianych nowotworów u myszy. Informacje na ten temat sestawiono w tsbUcy a, podajac w koluimde pierwszej na¬ zwe zwiazku, w kolumnie drugiej rodsaj nowo¬ tworu, w kolumnie trzeciej wiejkoic dawki oraz w kolumnie czwartej Va hamowania nowotworu.P1534J oznacza bialaczke o 6C3H1D miesak lim- fatyczny.142 754 7 Tablica 2 Nazwa zwiazku 4-pólbursztynian windezyny 1 Siarczan 4-pól- bursztynianu VLB 1 Siarczan 4-pól- bursztynianu winkrystyny Nowo¬ twór 6C3HED P1534J 6C3HED P1534J 6C3HED Daw¬ ka 12 25 50 18 36 72 18 36 72 1 20 40 60 80 20 40 60 | 80 °/o hamowania 48 98 100 57 toksyczny toksyczny | 100 100 toksyczny | 63 83 94 96 100 100 100 1 100 | Ponizej zilustrowano wytwarzanie typowych zwiazków o wzorze R—O—CO—X—OO—Z. Dla uproszczenia nazewnictwa, zwiazki o wzorze R—O—CO—CH2—CHjj—COOH okresla sie jako 4-pólbursztyniany VLB, pomijajac okreslenie 4-de- zacetylo, jako wspólne dla wszystkich grup R.Przyklad. Otrzymywanie 4-pólbursztynianuVLB Do roztworu 2 g 4Hdezacetylo-VLB w pirydynie dodano 2 g bezwodnika bursztynowego. Calosc mieszano w pokojowej temperaturze w ciagu 5 godzin. Reakcje mozna prowadzic w tempera¬ turze 0°C—50°C. Skladniki lotne odparowano pod zmniejszonym cisnieniem a pozostalosc rozpusz¬ czono w chlorku metylenu. Roztwór przemyto 5°/o Toztworemwodnym wodoroweglanu sodowego i na¬ stepnie woda, po czym wysuszono i odparowano pod zmniejszonym cisnieniem.Otrzymano 4Hpólbursztynian VLB o podanej po¬ nizej charakterystyce.Widmo IR: 1737, 1615, 1460 i 1434 cm"1. Widmo PMR (ODClj): 8,05, 7,54, 7,14, 6,58, 6,11, 5,83, 5,46, 5,28, 3,80, 3,78, 3,69, 3,62, 2,71, 0,92 i 0,79 ppm.W celu otrzymania siarczanu rozpuszczono pól- bursztynian VLB w bezwodnym etanolu, dodano 2*/t roztworu kwasu siarkowego w etanolu do pH 3,95 i odparowano lotne skladniki.Otrzymano siarczan o nastepujacej charaktery¬ styce.Widmo UV IR (KBr): 3400 (szerokie pasmo) i 1740 cm-1. Mia¬ reczkowanie w 66% dwumetylofarmamidzie: pKa = 4,80, 6,10, 7,80.Powyzsze postepowanie stosowano do otrzymy¬ wania nastepujacych dodatkowych zwiazków.Z 1,95 g 4^dezacetylowimkrystyny otrzymano 700 mg 4-pólboirsztynianu winkrystyny o nastepu¬ jacej charakterystyce.Widmo IR: 1740 i 1684 cm-1. Widmo PMR 5,89, 5,39, 5,21, 4,69, 4,51, 3,86, 3,74 i 3,67 ppm.Siarczan otrzymano z wydajnoscia 330 mg, do¬ dajac 2°/o roztwór kwasu siarkowego w etanolu do etanolowego roztworu 400 mg wolnej zasady.Rf (zel ksrzemionkowy, metanol) — 0,16. 8 Z 300 mg windezyny (0—3-kariboksyaimidu 4- -dezacetylo-VLB) otrzymano 290 mg 4-pólburszty¬ nianu windezyny o nastepujacej charakterystyce.Widmo IR: 3450, 1733, 1693 cm"1. Widmo PMR 5 (CDCls): 8,07, 7,52, 7,10, 6,54, 6,08, 5,92, 5,49, 5,27, 3,70, 3,59, 3,46, 2,83, 0,91 i 0,78 ppm.Z 200 mg wolnej zasady otrzymano w sposób podany powyzej 160 mg siarczanu w postaci bia¬ lego bezpostaciowego proszku o Rf (zel krzemion- 1( kowy, metanol) — 0,56.Z 1080 mg 4-dezacetylo-4'-epidezoksy-VLB otrzy¬ mano 540 mg 4-pólbursztynianu 4'-epidezoksy-VLB.Rf (zel krzemionkowy, 1 :1 octan etylu i meta¬ nol) — 0,08. 15 Z kwasu 4-idezacetylowiniblastynowego otrzyma¬ no 4-pólbursztynian kwasu winblastynowego o na¬ stepujacej charakterystyce: Rf (zel krzemionkowy, metanol) — 0,23.Widmo PMR (CDC18): 8,05, 7,52, 7,11, 6,57, 6,06, 20 5,71, 5,26, 5,14, 3,75, 3,60, 2,82, 0,90 i 0,76 ppm.Powtarzajac powyzsze postepowanie, w reakcji 4-dezacetylo-VLB z bezwodnikiem maleinowym otrzymano 4-pólmaleanian VLB o nastepujacej charakterystyce: 25 Widmo IR: 1730 i 1590 cm"*. Widmo PMR (CDC1,): 8,61, 8,04, 7,50, 7,12, 6,59, 6,48, 5,78 (J = 12 Hz), 6,09, 5,7, 5,51, 5,3, 3,79, 2,70 ppm.Powtarzajac powyzsze postepowanie, z 3 g zwiaz¬ ku wyjsciowego otrzymano 700 mg 4^pólglutaranu 30 VLB o nastepujace charakterystyce: Widmo IR: 3450 i 1736 cm"1. Widmo PMR (CDC18): 8,07, 7,53, 7,13, 6,53, 6,13, 5,83, 5,45, 5,24, 3,80, 3,68, 3,63, 2,69, 0,91, 0,81 ppm. Rf (zel krze¬ mionkowy, 1 :1 octan etylu i metanol) siarczanu 35 (wydajnosc 50%) = 0,25. Rf (zel krzemionkowy, 1:1 octan etylu i metanol) 0,08.W kazdej z powyzszych acylacji dimeru 4-de- zacetylo-indolo-dihydroindolowego alkaloidu Vinca ewentualnie przypadkowe acylowamie grupy 3-OH 40 mozna likwidowac poprzez traktowanie wilgotnym zelem krzemionkowym, zgodnie ze sposiobem po¬ danym przez Hargroye^ w" opisie patentowym St. Zjedn. Am. nr 3 392173. Alternatywnie, otrzy¬ mane zwiazki mozna pozbawic ewentualnej po- 45 chodnej 3-acylowej lub innych produktów ubocz¬ nych reakcji za pomoca chromatografii, korzyst¬ nie na zelu krzemionkowym z zastosowaniem do elucji mieszaniny octanu etylu i metanolu. 50 Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania nowych pochodnych alka¬ loidów indolo-dihydroindolowych o wzorze R—O—CO—X—CO—Z, w którym R oznacza gru- 55 pe o wzorze 1, w którym R* oznacza atom wo¬ doru, grupe metylowa lub formylowa, gdy R4 i R5 wystepuja oddzielnie to R5 oznacza atom wodoru i jeden z R3 i R4 oznacza grupe etylowa a drugi atom wodoru lub grupe hydroksylowa, gdy R4 60 i R5 wziete razem tworza z przyleglymi atomami wegla pierscien oksiranowy, R8 oznacza grupe etylowa, R1 oznacza grupe karboksylowa, COOC/C1-3/ alkilowa lub grupe CO—R8, w której R6 oznacza grupe aminowa lub NH-fCi-t/ alkilowa, 11 X oznacza prositolancuchowa grupe aHrilenowa142 754 9 o 2—8 atomach wegla, grupe /C2-4/ alkenylenowa, ICt-J cykloalkilenowa, fenylenowa, hydroksypod- stawiona grupe JCi-J alkilenowa lub wiazanie bez¬ posrednie zas Z oznacza grupe hydroksylowa, ewentualnie w postaci soli, znamienny tym, ze 10 zwiazek o wzorze ROH, w którym R ma podane znaczenie, poddaje sie reakcji ze zwiazkiem o wzorze Z, w którym X ima podane znaczenie,, w rozpuszczalniku organicznym w temperaturze 0—50°C.Wzor 1 PL PL