***} toto* m f*^ Twórca wynalazku: George Joseph Cullinan Uprawniony z patentu: Lilly Industries Limited, Londyn (Wielka Brytania) Sposób wytwarzania nowych pochodnych alkaloidów indolo-dihydro-indolowych Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania nowych pochodnych alkaloidów indolo-dihydro- indolowych o wzorze R-0-CO-X-CO-Z, w którym R oznacza grupe o wzorze 1, w którym R2 ozna¬ cza grupe metylowa, Rs oznacza grupe hydroksy¬ lowa, R4 oznacza grupe etylowa, R5 oznacza atom wodoru, R1 oznacza grupe COO(C1_3)-alkilowa lub CONH2, X oznacza lancuch Cj^alkilenowy, a Z oznacza grupe aminowa lub OC1_3-alkilowa oraz ich soli.Zwiazki te sa uzyteczne jako srodki przeciw- nowotworowe we wszczepianych nowotworach u myszy, a takze wykazuja wlasnosci przeciw- mitozowe.Alkaloidy otrzymywane z Vinca rosea repre¬ zentuja jeden z najbardziej obiecujacych obsza¬ rów chemii dla otrzymywania leków zapobiegaja¬ cych wzrostowi doswiadczalnych zlosliwych nowo¬ tworów u ssaków. Poczatkowo stwierdzono, ze tylkoj niektóre z alkaloidów, otrzymywane z lisci roslin za pomoca ekstrakcji i dajace sie oczyszczac chromatograficznie, sa aktywne. Do takich aktyw¬ nych przeciwnowotworowo alkaloidów otrzymywa¬ nych bezposrednio z lisci rosliny Vinca naleza: VLB (winblastyna, winkaleukoblastyna), winkry- styna (leurokrystyna), leurozyna (winleurozyna), leurozydyna (winrozydyna), leuroformina (formylo- leurozyna) oraz dezoksy-VLB „A" i „B" (4'-dezo- ksy-VLB i 4'-dezoksyleurozydyna). 10 15 25 Dotychczas modyfikacje alkaloidów indolo-di- hydroindolowych otrzymywanych z Vinca rosea prowadzono tylko na trzech pozycjach czasteczki, a mianowicie C-3, C-4' i C-4. Jedna z ostatnich i bardziej udanych modyfikacji podstawowej struktury indolo-dihydroindolowej jest otrzymanie pochodnych karboksyamidowych w pozycji C-3, wiekszosc których stanowia aktywne czynniki przeciwnowotworowe, jak to przedstawiono w opi¬ sie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4166 810 i opisano przez Conrada i wsp. w J. Med. Chem., 22, 391 (1979). Windezyna, czyli 3-korboksyamid 4-dezacetylo-VLB, jest obecnie stosowana w wielu krajach europejskich jako sro¬ dek przeciwnowotworowy. Wiadomo, ze jest sku¬ teczna w leczeniu niektórych oporowych na win- krystyne bialaczek a takze wielu pospolitych nowotworów, w tym nowotworów komórek zarod¬ ników. W reakcji pochodnej 3-hydroksylowej i 3-estrowej z izocyjanianem otrzymano odpowied¬ nie pochodne oksazolidynodionowe, z których jedna, mianowicie pochodna N-chloroetylowa (winzolidy- na), przechodzi obecnie badania kliniczne. Po¬ chodne oksazolidynodionowe opisali Miller i Gu¬ towski w opisie patentowym Stanów Zjednoczo¬ nych Ameryki nr RE 30 560.Druga modyfikowana pozycja czasteczki jest pozycja C-4'. Wiekszosc tych modyfikacji prze¬ prowadzono poprzez 3',4'-enhydro-pochodna, która mozna otrzymywac sprzegajac windoline z kata- 142 818142 818 rantyna w zmodyfikowanej reakcji Polanovskiego [Potier i wsp., J.C.S. Chem. Comm, 670(1975)] lub odwadniajac VLB lub leurozydyne (Gutowski i Miller, opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 029 663). W reakcji odwadniania otrzymuje sie oprócz J-3',4'-enhydro-pochodnej dwa izomery z egzo-podwójnymi wiazaniami.Funkcjonalizowanie któregos z tych podwójnych wiazan i otrzymywanie epoksydów, dioli i pochod¬ nych zwiazków jest podstawa chemicznych mody¬ fikacji w pozycji C-4'.Trzecia, z powodzeniem modyfikowana pozycja w czasteczce indolo-dihydroindolu jest pozycja C-4.Przede wszystkim, w wyniku hydrolizy grupy apetoksylawej, -abeoi^ej we wszystkich wymienio¬ nych ?alkaloldadhCVlnca, otrzymuje sie aktywne przeciwnowotworowa pochodne 4-dezacetylowe. (^indezyna, karbok;syamid w pozycji C-3, jest po¬ chodna4-^dezacetyjj^a). Hargrove (opisy patentowe Stanów - Zjeinoezon^ch Ameryki nr 3 387 001 i 3 392173) otrzymal nowe pochodne 4-acylowe 4-dezacetylo-VLB, 4-dezacetylowinkrystyny itd.Wsród tych nowych pochodnych znajdowala sie 4-chloroacetylo-VLB, która mozna bylo poddawac reakcji z aminami, np. z dwumetyloamina. Otrzy¬ mano silny lek przeciwnowotworowy, winglicy- nian czyli N,N-dwumetylo-4-glicynylo-VLB. W in¬ nej modyfikacji, Write i Neuss (opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4122 082) utle¬ nili grupe 4-hydroksylowa w 4-dezacetylo-VLB do 4-ketozwiazku, a Thompson (opis patentowy Sta¬ nów Zjednoczonych Ameryki nr 4195 022 (zredu¬ kowal ten keton do 4-epihydroksy-(4-a-hydroksy)- -pochodnej, zwiazku, który takze wykazuje aktyw¬ nosc przeciwnowotworowa.Mostkowane dimery indylo-dihydroindolowe, to znaczy takie same lub rózne reszty alkaloidów poleczone mostkiem w pozycji 3-karboksylowej przez dwuamid, zostaly opisane przez Conrada i Gerzona w opisie patentowym Stanów Zjedno¬ czonych Ameryki nr 4199 504. Z drugiej strony, dimeryczne indolo-dihydroindolowe alkaloidy Vinca nie sa mostkowane poprzez inne pozycje czastecz¬ ki i nie tworza tetramerów.VLB i winkrystyne sprzegano z proteinami i otrzymywano materialy uzyteczne w badaniach radioimmunologicznych. Stosowanymi pochodnymi byl 3-karboksyazyd i 4-dezacetylo-VLB (azydek kwasu dezaeetylowinblastynowego) i odpowiedni zwiazek winkrystynowy. Przyklady tej reakcji zo¬ staly opisane w J. Med. Chem., 22, 391 (1979) przez Conrada i wsp., w europejskim opisie patentowym nr 41935 i w opisie patentowym Stanów Zjedno- nonych Ameryki nr 4 203 898.Sposobem wedlug wynalazku zwiazki o wzorze R-0-CO-X-CO-Z, w którym R oznacza dimeryczna grupe indolodihydroindolowa, korzystnie wywo¬ dzaca sie z przeciwnowotworowego dimerycznego alkaloidu 4-acetoksy- lub 4-hydroksyindolo-di- hydroindolowego przedstawiona wzorem 1, a X i Z maja wyzej podane znaczenie, wytwarza sie akty¬ wujac zwiazek o zworze ROCO-X-COOH, w któ¬ rym R i X maja wyzej podane znaczenie, pod¬ dajac go reakcji z bezwodnikiem octowym, N- -hydroksysukcynimidem lub N-metylomorfolina i chloromrówczanem izobutylu i poddajac otrzy¬ many zaktywowany zwiazek reakcji z amoniakiem lub C1_3alkanolem, ewntualnie w rozpuszczalniku obojetnym, w temperaturze od 0°C do tempera- * tury otoczenia, po czym ewentualnie otrzymany produkt przeksztalca sie w sól.Wyjsciowe alkaloidy pochodnych 4-dezacetylo- wych ROH, przedstawione wzorem 6 zostaly opi¬ sane w nastepujacych zródlach: leurozyna w opisie 10 patentowym Stanów Zjednocoznych Ameryki nr 3 370 047; VLB w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 3 097 137; leurozydyna (winrozydyna) leurokrystyna (winkrystyna) w opi¬ sie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki 15 nr 3 205 220; demetylo-VLB w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 3 354 163; win- dezyna i inne 3-karoboksyamidy w opisie paten¬ towy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 203 898; kwas winblastynowy i kwas winkrystynowy 20 w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ame¬ ryki nr 4 012 390; 4'-epiwinkrystyna w opisie pa¬ tentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 143 041; leuroformina i formyloleurozyna w opi¬ sie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki 25 nr 4279 816; oraz dezoksy-VLB „A" i „B" w Tetra- hedron Letters, 783,(1958).Gdy w zwiazku o wzorze R-0-CO-X-CO-Z pod¬ stawnik Z oznacza grupe aktywujaca (acylujaca), grupe karboksylowa, to moze to byc dowolna 30 z wielu dobrze znanych grup stosowanych w chemii a zwlaszcza w chemii peptydów. Takie grupy sa dobrze znane i omówione np. w pracy „Peptide Synthesis", M. Bodanszky, Y.S. Klausner i M. A. Ondetti, wydanie drugie, 1976, John Wiley 05 and Sons, strony 85—136. Do takich grup Z na¬ leza miedzy innymi grupa azydowa (-N3), atom chlorowca, np. bromu a zwlaszcza chloru, grupa acylooksylowa o wzorze R7CO.O, w którym R7 oznacza rodnik alifatyczny lub aromatyczny, taki 40 np. jak grupa C1_3-alkilowa, grupa alkoksylowa, korzystnie C1_3-alkoksylowa lub arylooksylowa; dalej do grup Z nalezy grupa metanosulfonylo- oksylowa, tozylooksylowa lub benzenosulfonylo- oksylowa, grupa imidazolilowa lub reszta pochod- 45 nej N-acylohydroksylaminowej, np. Z moze ozna¬ czac grupe sukcynimidooksylowa, ftalimidooksy- lowa lub benzotriazolilooksylowa.Do specyficznych przykladowych takich grup aktywujacych lub chroniacych grupe karboksylowa 50 naleza atom bromu, atom chloru, grupa imidazo¬ lilowa, grupa sukcynimidooksylowa o wzorze 2, grupa ftalimidooksylowa o wzorze 3, grupy benzo¬ triazolilooksylowa o wzorze 4, grupa metanosulfo- nylooksylowa, tozylooksylowa, benzenosulfonylo- 55 oksylowa lub podobne grupy acylujace (Z1).Przykladowymi grupami X sa grupy takie jak metylenowa, etylenowa, propylenowa, butylenowa, 1,2-dwumetyloetylenowa, 1,2,3,4-czterowodorobutyle- nowa i podobne. 60 Zwiazki wytworzone sposobem wedlug wyna¬ lazku przeksztalca sie w farmakologicznie dopusz¬ czalne addycyjne sole kwasowe z nietoksycznymi kwasami nieorganicznymi, takimi jak chlorowodór, kwas azotowy, kwas fosforowy, kwas siarkowy, *5 bromowodór, jodowoclór, kwas fosforowy i po-142 818 dobne, a takze z nietoksycznymi kwasami orga¬ nicznymi, takimi jak alifatyczne kwasy jedno- i dwukarboksylowe, kwasy fenyloalkanokarboksy- lowe, kwasy hydroksyalkanokarboksylowe i hydro- ksyalkanodwukarboksylowe, kwasy aromatyczne, 5 alifatyczne i aromatyczne kwasy sulfonowe itp.Do takich dopuszczalnych w farmacji soli naleza siarczan, pirosiarczan, wodorosiarczan, siarczyn, wodorosiarczyn, azotan, fosforan, wodorofosforan, dwuwodorofosforan, metafosforan, pirofósforan, io chlorek, bromek, jodek, octan, propionian, kapry- nian, kaprylan, akrylan, mrówczan, izomaslan, kapronian, enantan, propiolan, szczawian, malo- nian, bursztynian, suberynian, sebacynian, fuma- ran, maleinian, migdalan, butyno-l,4-dwukarboksy- 15 lan, heksyno-l,6-dwukaroksylan, bezoesan, chloro- benzoesan metylobenzoesan, ftalan, tereftalan, benzenosulfonian, toluenosulfonian, chlorobenzeno- sulfonian, ksylenosulfonian, fenylooctan, fenylo- propionian, fenylomaslan, cytrynian, mleczan, 20 (3-hydroksymaslan, glikolan, jablczan, naftaleno-1- -sulfonian, naftaleno-2-sulfonian, mezylan i po¬ dobne.Synteze zwiazków wytwarzanych sposobem wed¬ lug wynalazku mozna prowadzic wieloetapowo. 25 W pierwszym etapie 4-dezacetyloindolo-dihydroin- dol o wzorze ROH, otrzymany sposobem podanym przez Hargrove'a w opisie patentowym Stanów ZjednoczonychAmeryki nr 3 392173, poddaje sie acylowaniu bezwodnikiem kwasu karboksylowego 30 o wzorze 5, w którym X ma znaczenie podane uprzednio. Otrzymuje sie zwiazek o wzorze -R-O- -CO-X-CO-OH, w którym R i X maja znaczenie podane uprzednio.Gdy indolo-dihydroindol ma sie poddawac reak- w cji z bezwodnikiem bursztynowym lub podobnym w celu otrzymania zwiazku o wzorze R-0-CO-X- -CO-Z, w którym R1 oznacza grupe o wzorze COR6, w którym R6 oznacza grupe chroniaca grupe karboksylowa, wtedy grupa estrowa w pozycji 3 jak *° tez grupa estrowa w pozycji 4 musza byc najpierw zhydrolizowane w celu otrzymania np. z VLB kwasu 4-dezacetylowinblastynowego, (opis paten¬ towy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 012 390).^V nastepnym etapie, trzeba ochronic grupe 3- ^ -karboksylowa omówiona powyzej grupa ochronna.Taka pochodna z ochroniona w pozycji 3 grupa karboksylowa i wolna grupa karboksylowa w po¬ zycji 4 poddaje sie nastepnie, jak to opisano uprzednio, reakcji z bezwodnikiem. Otrzymany ^ zwiazek mozna juz dalej przerabiac chemicznie i otrzymywac zwiazki o wzorze R-0-CO-X-CO-Z, stosujac przy tym w reakcji srodowisko obojetne lub zasadowe i zapobiegajac w ten sposób odszcze- pianiu ochronnej grupy karboksylowej w pozycji 3.Zwiazki o wzorze R-0-CO-X-CO-Z, w którym Z oznacza grupe NH2, otrzymuje sie w rekacji aktywowanego 4-pólkwasu dimeru alkaloidu Vinca (grupa R) o wzorze R-0-CO-X-CO-Z, w którym Z oznacza korzystnie atom chloru, z amoniakiem. 60 Mieszany bezwodnik otrzymuje sie z pólkwasu, poddajac go rekacji najpierw z N-metylomorfo- lina a nastepnie z chloromrówczanem alkilu.W reakcji mieszanego bezwodnika z alkoholowym roztworem amoniaku lub hydrazyny otrzymuje si^ 65 6 55 pozadany pólamid. Ponadto, tzw. aktywowane po¬ chodne mozna poddawac reakcji z nizszym alko¬ holem i otrzymywac monoestry o wzorze R-O-CO- -X-CO-0-C1_3-alkil.Zwiazki wytworzone sposobem wedlug wynalaz¬ ku o wzorze R-0-CO-X-CO-Z1, w którym Z1 ozna¬ cza grupe acylujaca, generalnie uzyteczne sa nie tylko do wytwarzania takich zwiazków, w których zarówno R jak i Z zawieraja reszty alkaloidu indolo-dihydroindolowego, jak to podano uprzed¬ nio, ale takze sa wykorzystywane do sprzegania z immunoglobulina, taka jak poliklonalne i mono- klonalne przeciwciala, i do otrzymywania w ten sposób odpowiednich polaczen do badan radio- immunologicznych lub o wlasnosciach przeciwno- wotworowych.Takie polaczenia wytwarza sie poddajac poli¬ klonalne lub monoklonalne przeciwcialo reakcji ze zwiazkiem o wzorze R-0-CO-X-CO-Z1, prowadzo¬ nej w typowych warunkach, np. w srodowisku wodnym, w temperaturze 5—25°C, np. w pokojo¬ wej i przy pH 7,5—9,5, korzystnie 8,0—9,0. W wy¬ niku reakcji nastepuje przylaczenie za pomoca wiazania kowalentnego jednej lub kilku reszt alkaloidu do wolnych grup aminowych czasteczki immunoglobuliny, np. do grup aminowych w resz¬ tach lizynowych. Ilosc przylaczonych reszt zalezy od stezenia reagentów i czasu trwania rekacji, ale zwykle wynosi przecietnie 3—14 lub 20.Przykladowo, reakcje prowadzi sie wkraplajac powoli roztwór zwiazku o wzorze R-0-CO-X- -CO-Z1 w odpowiednim rozpuszczalniku, takim jak dioksan, do buforowanego roztworu immunoglo¬ buliny w np. 0,34 molarnym buforze boranowym o pH 8,6. Polaczenie wyodrebnia sie za pomoca filtracji na zelu i przechowuje w nasyconym roz¬ tworze siarczanu amonowego. Mozna je latwo za¬ wrócic do roztworu droga dializy wobec roztworu buforowego, np. buforu fosforanowego z chlorkiem sodowym o pH 7,4. Alternatywnie, mozna je prze¬ chowywac w chlodni w temperaturze 4°C lub za¬ mrozone w temperaturze np. —20°C.Zwiazki otrzymane sposobem wedlug wynalazku, w których Z oznacza grupe o wzorze NH2 lub 0-C1_3-alkil sa uzyteczne jako zwiazki przeciw- nowotworowe aktywne wobec wszczepianych no¬ wotworów myszy.Dla udowodnienia uzytecznosci zwiazków o wzo¬ rze R-0-CO-X-CO-Z, w którym Z oznacza grupy o wzorach NH2 lub 0-C1_3-alkilo, jako inhibito¬ rów mitozowych, badano za pomoca standardowe¬ go postepowania ich zdolnosc do hamowania metafazy. W tablicy 1 przedstawiono wyniki tych badan, poddajac w kolumnie pierwszej nazwe zwiazku a w kolumnie drugiej stezenie tego zwiazku w srodowisku w mcg/ml, powodujace hamowanie metafazy.Ponizej zilustrowano sposób wedlug wynalazku.Dla uproszczenia nazewnictwa, zwiazki o wzorze R-0-CO-CH2-CH2-COOH okreslono jako 4-pólbur- sztyniany VLB, pomijajac okreslenie 4-dezacetylo, jako wspólne dla wszystkich grup R.Przyklad I. Otrzymywanie 4-pólbursztynia- nu metylo-VLB.142 818 Tablica 1 Nazwa zwiazku Amid 4-sukcynoilo-VLB Siarczan 4-pólbursztynianu estru metylowego VLB Siarczan 4-pólglutaranu VLB Stezenie w- mcg/ml powodujace hamowanie metafazy 0,2 0,02 0,2 Do roztworu 200 mg 4-pólbursztynianu VLB w 10 ml bezwodnika octowego dodano 5 ml kwasu octowego lodowatego i 200 ml metanolu zawiera¬ jacego 5 kropli pirydyny. Roztwór chlodzono w ciagu 30 minut a nastepnie pozostawiono w po¬ kojowej temperaturze w ciagu 16 godzin. Po od¬ parowaniu skladników lotnych otrzymano oleisty produkt, który rozpuszczono w wodzie i zalkalizo- wano 14 n wodnym roztworem wodorotlenku amoniowego. Zasadowy roztwór wodny ekstraho¬ wano chlorkiem metylenu. Ekstrakt organiczny przemyto woda, wysuszono i odparowano rozpusz¬ czalnik, otrzymujac 4-bursztynian estru metylowe¬ go VLB (4)-(3-metoksykarbonylo/propionylo-VLB).Ulepszona metode otrzymywania monoestru me¬ tylowego przedstawiono ponizej. 1020 mg 4-pólbursztynianu VLB aktywowanego N-hydroksysukcynimidem, rozpuszczono w 25 ml metanolu. Mieszanine pozostawiono pod azotem i chroniac od swiatla w ciagu 18 godzin, po czym lotne skladniki odparowano pod zmniejszonym cisnieniem. Pozostalosc chromatografowano na zelu krzemionkowym, stosujac wysokocisnieniowa chro¬ matografie cieczowa i eluujac w gradiencie octa¬ nu etylu i mieszaninie 7:1 octanu etylu i meta¬ nolu. Frakcje zawierajace zgodnie z chromato¬ grafia cienkowarstwowa pozadany produkt pola¬ czono odparowano lotne skladniki pod zmniejszo¬ nym cisnieniem i otrzymano 310 mg 4-pólburszty¬ nianu estru metylowego VLB w postaci brunatne¬ go bezpostaciowego osadu. Siarczan tego zwiazku otrzymano w zwykly sposób stosujac 2% roztwór kwasu siarkowego w etanolu.W podobny sposób otrzymano inne nastepujace estry metylowe. Ester metylowy 4-pólbursztynianu vindezyny: Rf (zel krzemionkowy, 1:1 octan etylu i metanol) — 0,5; Widmo IR: 1735 i 1699 cm-1.Widmo masowe: 867(M+), 836 (M-31), 808 (M-59).Widmo PMR (CDC13): 9,94, 8,05, 7,52, 7,14, 6,98, 6,58, 6,12, 5,87, 5,53, 5,30, 5,79, 3,69, 3,62, 3,47, 2,74, 0,90 i 0,81 ppm. Siarczan estru metylowego 4-pól¬ bursztynianu 4'-epidezoksy-VLB; Widmo masowe: 866(M+), 864, 880, 894, 908, 339 (reszta M-windo- liny i 139. Widmo IR: 1743 cm.-*. Widmo PMR (CDC13): 8,03, 7,55, 7,16, 6,60, 6,10, 5,89, 5,46, 5,39, 3,82, 3,72, 3,64, 2,76 ppm.Przyklad II. Otrzymywanie amidu 4-sukcy- noilo-VLB. Do roztworu 1 g 4-pólbursztynianu VLB w kolo 25 ml chlorku metylenu dodano pod azotem podczas chlodzenia w lazni lodowej 200 mg 5 N-metylomorfoliny a nastepnie 200 mg chloro- mrówczanu izobutylu. Calosc mieszano w ciagu 15 minut, po czym odparowano do sucha. Pozo¬ staly brunatny gumowaty produkt rozpuszczono w metanolowym roztworze amoniaku i pozosta- 10 wiono pod azotem i w pokojowej temperaturze w ciagu 48 godzin. Po odparowaniu lotnych sklad¬ ników otrzymano amid 4-pólbursztynianu VLB, nazywany tu dla wygody amidem 4-sukcynoilo- -VLB, o nastepujacej charakterystyce fizycznej. 15 Widmo IR: 1738 i 1685 cm"1. Widmo masowe: 867 (M+), 355, 154. PMR (CDC13): 9,86, 8,04, 7,53, 7,12, 6,63, 6,10, 5,85, 5,48, 5,32, 3,81, 3,80, 3,73, 3,62, 2,72, 0,90 i 0,82 ppm. Rf(zel krzemionkowy: 1:1 octan etylu i metanol) — 0,38. Rf siarczanu (zel 20 krzemionkowy, 1:1 octan etylu i metanol) — 0,33.Przyklad III. Otrzymywanie 4-adypinianu estru metylowego VLB. Do roztworu 1,4 g 4-deza- cetylo-VLB w 50 ml chlorku metylenu dodano 3 g kwasu adypinowego i nastepnie 3 g dwucyklo- 18 heksylokarbodwuimidu. Mieszanine reakcyjna chroniona od wilgoci pozostawiono w pokojowej temperaturze na przeciag 24 godzin. Mieszanine przesaczono, osad przemyto chlorkiem metylenu i przesacz odparowano. Pozostalosc oczyszczono 86 chromatograficznie na zelu krzemionkowym, sto¬ sujac do elucji mieszanine 1:1 octanu etylu i me¬ tanolu. Glównym produktem z chromatografii byl 4-adypinian estru metylowego VLB, wyraznie od¬ dzielony od nieprzereagowanego dwucykloheksylo- 81 karbodwuimidu i metanolu. Wydajnosc wynosila 220 mg. Widmo PMR: 3,63 (CH30-, nowy ester metylowy). Widmo masowe: 910 (+), 924 (M + 14), 879, 852, 355, 154. 40 90 Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania nowych pochodnych alka¬ loidów indolo-dihydroindolowych, o wzorze R-O- -CO-X-CO-Z, w którym R oznacza grupe o wzo¬ rze 1, w którym R2 oznacza grupe metylowa, R3 oznacza grupe hydroksylowa, R* oznacza grupe etylowa, R5 oznacza atom wodoru, R* oznacza grupe COO(C1_3)alkilowa lub CONH2, X oznacza lancuch C^alkilenowy a Z oznacza grupe ami¬ nowa lub OCj^alkilowa, oraz ich soli, znamienny tym, ze aktywuje sie zwiazek o wzorze ROCO-X- -COOH, w którym R i X maja wyzej podane zna¬ czenie, poddajac go reakcji z bezwodnikiem octo¬ wym, N-hydroksysukcynimidem lub N-metylomor- folina i chloromrówczanem izobutylu, i otrzymany zaktywowany zwiazek poddaje sie reakcji z amo- nakiem lub C1_3alkanolem, ewentualnie w obo¬ jetnym rozpuszczalniku, w temperaturze od 0°C do temperatury otoczenia i ewentualnie otrzymany zwiazek przeksztalca sie w sól.142 818 1* b1 1(3 3^-p5 lio—^ fi \l7/lo\,1,/\ %/ C142 818 Zakl. Graf. Radom — 129/88 80 egz. A4 Cena 220 zl PL PL