Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia organicznego kompleksu platyny, stanowiacego clis-izocytryniano-/l yz-idwuiaminocyklohiek'Siano/-pla- tyne (II). Zwiazek ten ma zastosowanie teraipeuty- czne w leczeniu nowotworów zlosliwych. Hamuja¬ ce dzialanie na podzial komóirelk oraz dzialanie przeciwnowotworowe koordynacyjnych zwiaizików kompleksowych, platyny, w szczególnosci cis-dwu- cMorodwuaminoplatyny (II) czyli PDD, o wzorze 3, zótSitailo odkryte' pietnascie lat temu. Od tego czasu podjeto szereg badian nad ta nowa klasa zwiaz¬ ków, spodziewajac sie rozwiazac nastepujace pro¬ blemy, a mianowicie: 1) znalezc posród nich zwiazek na-jlbandiziiej aktyw¬ ny, 2) ograniczyc ich ujawnione wady i uboczne dzia¬ lania, w szczególnosci mala rozpuszczalnosc w 'wodzie i szkodliwe dzialanie na watrobe, i sluch, 3) wyjasnic mechan,izim ich dzialania.W najnowszych badaniach proponowano dokona¬ nie róznych zmian struktury czasteczkowej tych zwiazków. Tak na przyklad proponowano w 19"7Q r. zastapic oba atomy chloru w PDD Ugandami dwu- kleszczowymi, takimi jak ugrupowania szczawia- nowe i 1-maionianowe. W 1974 r. sugerowano za¬ stapienie obu czasteczek NH3 w PDD-l,2-dwuami- nocykloheksainem (DAC), jak w cis-dwuchloro-/l,2,- -dwuaminocyklQheksano/-platynie (II) oznaczanej skrótowo jako PHD. Otrzymany zwiazek komple¬ ksowy mial te zalete, ze nie wykazywal odpor- 15 20 25 30 2 nosci cechujacej PDD u zwierzat. Znane sa tez dwa inne zwiazki kompleksowe platyny, a miano¬ wicie cis-siarczanoH,1!,2-dwuaminocykloheksano/- ^platyna (II) w postaci jednowodzianu zwana PHS i cis-maloniano-/l,2-dwuaminocykloheksano/-pLaty- na (II), zwana PHM.. Jednakze badania te nie byly kontynuowane w tym kierunku z uwagi na mala rozpuszczalnosc tych zwiazków w wodzie i/lub ich toksycznosci, w szczególnosci szkodliwe dzialanie na nerki. Ba¬ dania prowadzone przez autorów niniejszego wy¬ nalazku kierowaly sie w kierunku zwiazków za¬ wierajacych trzecia grupe karboksylowa w celu zwiekszenia rozpuszczalnosci ich zwiazków kom¬ pleksowych w wodzie. Ligandy te to cytrynian sodowy i trans-akonitynian sodowy. Autorzy ci dokonali syntezy róznych zwiazków komplekso¬ wych, pochodnych cis^dwuamino-platyny (II) lub cis-/l-dwuaminocykloheksano/-platyny (II), w szczególnosci cis-cytrynianodwuaminoHplatyny (II), zwanej PAC, cis-cytryniano-il^dwuaminocyklohe- ksano/jplatyny (II), zwanej PHCf i cis-Zt-akonity- niano/-/ly2-dwuaminocykiohekisapJoi/^platyny (II), zwanej PHTA. Mozna bylo zauwazyc, ze cytr.ynia- nowe zwiazki kompleksowe odznaczaly sie lepsza rozpuszczalnoscia w wodzie niz PDD, jednakze zwiazków tych nie mozna bylo uznac za zadowa¬ lajace odnosnie ich toksycznosci i wlasnosci tera¬ peutycznych, w przeciwienstwie do nizej opisanych zwiazków wedlug wynalazku. 128 5393 128 S39 4 Autorzy niniejszego wynalazku dokonali rów¬ niez syntezy zwiazków kompleksowych z udzialem ligandu izocytrynianówego, to jest cis-izocytrynia- no-dwuaminojplatyny (II), zwanej PAIC i cis-izo- cytryiniano-^l^- (II), Yjpuf^na,FFiTfnf ^ff^nfrh wedlug wynalazku do¬ tyczy ¦wytwarzania cis-izocytryniano-/l,2-dwuami- nocykloheksanoZ-platyny, zwanej dalej PHIC.Stwierdzono nieoczekiwanie, ze powyzszy zwiazek FHHC odznacza sie mala toksycznoscia i dobrym dzialaniem przeciwnowotworowym. tSposob wedlug wynalazku polega na tym, ze na zwiazek o wzorze 1, w którym atom platyny jest juz czesciowo zchelatowany 1,2-dwuaminocyklohe- ksamem (jego izomerem trans^d, trans-1 lub trans- -dl), i w którym X stanowi anion wartosciowy, taki jak Ol" lub N(V~ dziala sie izocytrynianem tr-ójsodowym (jego izomerem d, 1 lub dl), w wyni¬ ku czego otrzymuje sie zadany zwiazek komplekso¬ wy. Dokladna budowa kompleksu organicznego platyny, mianowicie cis^izocytryniano-/l,2Kiwuami- nocykloheksano/-platyny (II), wytwarzanego sposo¬ bem wedlug wynalazku nie zostala zdefiniowana dotychczas z calkowita pewnoscia. Sposród szeregu hipotez najprawdopodobniejisze wydaja sie naste¬ pujace struktury: — struktura zawierajaca wiazanie jednokleszczo- we, bez chelatowania, pomiedzy grupa karboksylo¬ wa nr 1 w izocytrynianie trójsodowym, przedsta¬ wionym wzorem 2, a platyna; drugi ligand stanor wi grupe hydroksylowa. Strukture te przedstawia wzór 7, 1— struktura zawierajaca wiazanie dwukleszczo- we, z chelatowaniem, przy czym miejsca wiazan znajduja sie pomiedzy, z jednej strony, grupa kar¬ boksylowa nr 1 i grupa hydroksylowa nr 2 izo- cytrynianu trójsodowego o wzorze 2 oraz, z dru¬ giej strony, platyna.Jednakze istnieje duze prawdopodobienstwo, ze wytwarzaja sie równiez wiazania kompleksowe po¬ miedzy platyna i innymi pozycjami izocytrynianu trójsodowego o wzorze 2, który dziala jako ligand labilny. Dlatego tez zwiazek kompleksowy wytwa¬ rzany sposobem wedlug wynalazku stanowi naj¬ prawdopodobniej mieszanine wielu struktur i dla¬ tego w obecnym stanie wiedzy niemozliwe jest scislejsze zdefiniowanie jego budowy.W zakres wynalazku wchodzi jednakze sposób wytwarzania wszelkich mozliwych kompleksów oraz ich mieszanin we wszelkich proporcjach, któ¬ re to kompleksy wytwarzaja sie podczas reakcji stanowiacej sposób wedlug wynalazku.Sposób wedlug wynalazku polega na tym, ze czesciowo schelatowany l,2hdwuaminocykloheksa- neni zwiazek platyny o ogólnym wzorze 1, w któ¬ rym X oznacza anion taki jak Cl- lub NOs- pod¬ daje sie reakcji z izocytrynianem trójsodowym o wzorze 2. W wyniku reakcji otrzymuje sie zadany kompleks Plnc. Korzystnie, stosuje sie jako zwia¬ zek 1 cis-dwuchloro-/l,2-^wuaminocykloheksano/- -platyne i reakcje prowadzi sie w roztworze wod¬ nym. Alternatywny sposób wedlug wynalazku po¬ lega na tym, ze cis^dwuchloro-/l,2Hdwuaminocyklo- heksanoZ-lplatyne (II) poddaje sie najpierw reakcji w srodowisku wodnym z azotanem srebra, przy czym otrzymuje sie dwuazotan odpowiedniego zwiazku platyny w postaci dwuwodzianu, po czym . otrzymany zwiazek poddaje sie reakcji z izocytry¬ nianem trójsodowym o wzorze 2, przy czym otrzy¬ muje sie zadany kompleks platyny, który nastep- nie wyodrebnia sie ze srodowiska reakcyjnego.Alternatywny sposób wedlug wynalazku, w któ¬ rym otrzymuje sie PHIC w postaci stalej, przebie¬ ga wedlug nastepujacego schematu: I etap: cisHPt/DAC/Clz+aAgNOa.-* cis^[PtmAC/yiHiO/2]/N03/a+2AgCl II etap: cis^Pt/DAC/ZHiO/zl/NOa/^+izocytryinian trójsodowy 2IHtfO^IPimC-i3lHiO+(NaiNO^+IH!N03 Podane nizej wyniki badan farmakologicznych i toksykologicznych ujawniaja wlasciwosci zwiaz¬ ku kompleksowego PHIC. Badania te, prowadzone porównawczo w odniesieniu do wyzej opisanych zwiazków znanych, pozwalaja stwierdzic, ze zwia¬ zek PHIC daje nastepujace korzysci: 1) rozpuszczalnosc w wodzie niemal nieograni¬ czona, co najmniej wielokroc Wieksza od rozpusz¬ czalnosci innych podobnych zwiazków komplekso¬ wych platyny; 2) bardzo slabe toksyczne dzialanie na myszy i pawiany; 3) silne dzialanie przeciwnowotworowe w odnie¬ sieniu do leukemii L 1(2110 i sarkomy liflOi Badania porównawcze prowadzono stosujac zwiazki oznaczone podanymi wyzej symbolami skrótowymi.Badania farmaceutyczne. Dzialanie przeciwnowo¬ tworowe zwiazku otrzymanego sposobem wedlug wynalazku PHIC wykrywano w trakcie badan po¬ równawczych metodami klasycznymi na dwóch ty¬ pach nowotworów eksperymentalnych u myszy, leukemii L li210 i sarkomie 190. Warunki w jakich przeprowadzano kazde doswiadczenie i otrzymane w nich wyniki podano nizej.I. Leukemia L laiO: puchlinowa i stala. — myszy DBA/2, samiczki (hodowane w Centre Nationale des Recherches Scientifiauea, Orleans), wagi 20 do 212 g, — 10 myszy na dawke. a) szczepienie komórek nowotworowych zastrzy¬ kiem i.p.*, leczenie zastrzykami ijp. *. W komórek zaszczepiano zastrzykiem i.p. w dniu oznaczonym symbolem JD i leczono zastrzykiem jednorazowym i.p. dokonanym po 24 godzinach (dzien Ji). b) Szczepienie komórek nowotworowych zastrzy¬ kiem i.p., leczenie zastrzykami i.v. *. 10P komórek nowotworowych zaszczepiono zastrzykiem i.p. w dniu Jo i leczono jednorazowym Lv. zastrzykiem w zyle ogonowa po 24 godzinach (dzien Ji). c) Szczepienie komórek nowotworowych zastrzy¬ kiem s.c, leczenie zastrzykiem ijp. 108 komórek nowotworowych zaszczepiono pod skóre z tylu glowy zwierzecia w dniu J0 i leczono jednorazo¬ wym zastrzykiem ijp. dokonywanym w dniu Ji lub J4.II. Sarkoma 100: puchlinowa. — myszy Swiss, samiczki (Evic-Ceba, Bordeaux, Francja) wagi 20 do 212 g, — 10 myszy na dawke, 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60128 539 — 166 komórek szczepionych przez zastrzyk i.p. w dniu J0. — leczenie jednorazowym zastrzykiem i.p., doko¬ nanym po 24 godzinach (dzien Ji).Zwiazki porównawcze, PDD, PAC, PAIC, PHC i PHTA, jak tez zwiazek otrzymany sposobem we¬ dlug wynalazku PHIC rozpuszczano w 9%o roztwo¬ rze NaCl. Zwiazki porównawcze PHD i PHM dys¬ pergowano w roztworze srodka powierzchniowo czynnego Klucel (hydroksypropyloceluloza) o ste¬ zeniu 4%o („Klucel" jest marka handlowa firmy „Hercules" Inc., Deleware, USA). Zwiazek PHS rozpuszczano w wodzie, gdyz w 4%o roztworze NaCl przeksztalca sie on niemal natychmiast w pochod¬ na chlorowa, najprawdopodobniej w jedmochloro- wa, a pózniej i dwuchlorowa PHD w postaci zól¬ tego, nierozpuszczalnego osadu. Powyzsze roztwory przygotowywano bezposrednio przed uzyciem. Prze¬ dluzenie zycia zwierzat leczonych (wskaznik ILS= Increase Life Span = przedluzenie zycia zwierzat wyrazone w °/o) w porównaniu z dlugoscia zycia zwierzat kontrolnych oibliczano z nastepujacego wzoru: ILS= XilO0 dlugosc zycia zwierzat leczonych dlugosc zycia zwierzat kontrolnych dlugosc ^ycia zwierzat kontrolnych Doswiadczenia przerywano po 30 dniach po za¬ szczepieniu nowotworu w przypadku leukemii L li21'0i i po 60 dniach w przypadku sarkomy 180.Zwierzeta, które przezyly powyzsze terminy wla¬ czano równiez do obliczenia wskaznika ILS.Zwiazki PAC, PAIC i PHTA wykazywaly wartosc wskaznika ILS rzedu 1710/© przy dawce 1'00 mg/kg. 74% przy dawce 7& mg/kg i 13i°/o przy dawce 5i00 mg/kg w przypadku nowotworu L 12U0 (105 komó¬ rek zaszczepionych i.p. w dniu J0. Leczenie jedno¬ razowym zastrzykiem w dniu Ji). Z powodu braku aktywnosci zwiazków PAC i PHTA i slabej aktyw¬ nosci zwiazku PAJC w przypadku L 1210 w po¬ równaniu ze zwiazkiem PHIC, zwiazków tych nie badano bardziej szczególowo. Waznym jest na¬ tomiast stwierdzenie, ze: a) PHIC wykazuje lepsza aktywnosc przeciw- nowotworowa w przypadku L 1210 i S 180, szcze¬ pionych i.p. i leczonych i.p. (tablica 1 i 2). ib) PHIC wykazuje aktywnosc w przypadku L 12110, szczepionej i.p. i leczonej i.v. (tabela 3. c) wskaznik terapeutyczny PHIC, wyrazajacy sie stosunkiem IT=DLw(DME)DL5a=,wskaznik 50M-o- wej smiertelnosci, DME=skuteczna dawka mini¬ malna, to jest odpowiadajaca 2l5l°/o wartosci wskaz¬ nika ILS w przypadku obu badanych doswiadczal¬ nych nowotworów) jest 5,5 raza wiekszy niz PDD w przypadku leukemii L 1210 i 4,0 razy wiekszy niz PDD w przypadku sarkomy 180. 30 35 40 45 50 55 60 Tabela 1 Porównanie aktywnosci przeciwnowotworowej PDD i PHIC w przypadku leukemii L 1210 i sarkomy 180 10 15 Dawka mg/kg Zwiazek porównaw¬ czy PDD Zwiazek otrzymany sposobem wedlug wynalazku perc 2 A 6 8 5 10 26 50 100* L ILS V« 28 512 75 106 16 40 59 70 129 1210* Hlosc zwierzat pozosta¬ lych przy zyciu po 30 dniach 0 0 0 0 0 0 0 0 210 S 180* HLS f/» 41 — 65 — 20 46 112 171 Mosc zwierzat pozosta¬ lych przy zyciu po 60 dniach —_ 0 — 0 -? 0 0 20 40 a Szczepiona i.p. (105 komórek) w dniu J0 i leczo¬ na i.p. w dniu Ji, 10 myszy na dawke, srednia dlugosc zycia zwierzat kontrolnych: PDD= =i9,3±0,8 dni, PHIC=6y6±0,4 dni. b Szczepiona i.p. (106 komórek) w dniu J0 i leczona i.p. w dniu Ji, 10 myszy na dawke; # srednia dlugosc zycia zwierzat kontrolnych: PDI= 17,1 ±2,0 dni, PHlK3=:18,7i:H1,3 dni. c Jedna myszka zdechla z powodu zatrucia, wy¬ laczono ja przy obliczaniu wskaznika ILS.Tabela 2 Porównanie aktywnosci przeciwnowotworowej niektórych pochodnych Pti(DAC) w przypalu leukemii L 12|10 i sarkomy 180. ?i.p. skórnie. dootrzewnowe*, Lv. = dozylnie, s.c. «= pod- Zwiazek porów¬ nawczy PHD PHM Dawka mg/kg 1 <2 4 5 10 ,20 40 50 L ILS m 45 49 65 ^_ — — — 103 1210 Ilosc Ewierzat pozosta¬ lych przy zyciu po 30 dniach 0 0 0 __ — — — 10 IJEjS <°/«) 100 128 1217 25 36 44 60 96 Tlosc zwierzat pozosta¬ lych Boy zyciu po 60 dniach •/o 0 20 10 0 0 0 0 0128 539 8 c.d. tabeli 2 PHS 0,5 1 2 4 5 112 40 PHC 10 20 50 100 120 4 10 25 47 112 20 124 101 •0 0 0 0 10 0 20 30 W* o — * Z udzialem tylko 5 myszy.Szczepiono Lp. (10? komórek w przypadku L 1210 i 10fl komórek w przypadku S 180) w dniu J0 i le¬ czono i.p. w dniu Ji, 10 myszy na dawke.Aktywnosc przeciwnowotworowa PHIC w przypad¬ ku leukemii L 1210.Szczepienie s.c, leczenie i.p.Szczepienie Lp., leczenie Lv.Szczepienie podskórne (106 komórek) Leczenie Lp. w dniu Ji Dawka 62,5 mg/kg ILS (%) Leczenie Lp. w dniuJ4 26 Dawka 62,5mg/kg 17 Dawka 125 mg/kg 50 Srednia dlugosc zycia zwierzat kontrolnych—8,6+ 0y5 (Jnia Szczepienie dootrzewniowe (105 komórek) Leczenie Lv. w dniuJi ILS (%) Dawka 50mg/kg 25 Dawka 125 mg/kg 41 Srednia dlugosc zycia zwierzat kontrolnych=8,&± '0,7 dnia 10 15 20 [Badania toksycznosci. Prowadzono badania po¬ równawcze w celu okreslenia toksycznosci in vitro i in vivo zwiazku wedlug wynalazku PHIC. Wyni¬ ki tych ibadian zreferowano ponizej.A — komórki L 11210 w 'kulturze in vitro. Dziala¬ nie toksyczne badanych zwiazków na komórki L WO w kulturze im vi«fcro okreslano ustafljaijiac daw¬ ke iinfoibitujaca (DI50), wyrazona stezeniem zwiazku platyny powoduijacyffn zniriieószenie szyibkoscl wzro¬ stu komórek o 50%, po poddawaniu .ich przez diluzszy okres czasu dziallamiiu badanego srodka.Czas dzialania zwiazku wynosi zazwyczaij od 2|4 do 48 godzin. W przypadku dawki D1I50 wszystkie ko¬ mórki pozostaja przy zyciu (za wyjatkiem stoso¬ wania blekitu trypamowego). Czesc doswiadczalna tych prac zostala niedawno opublikowana w arty¬ kule: P. Lecointe, I. P. Macauiet i I.L. Butour, Btochem. Biophys. Res. Gottnimun., 90, 209^-12113 (19719). Wyniki tych badan podano w tabeli 4.Tabela 4 Dzialanie toksyczne róznych zwiazków komplekso¬ wych pQaityny na komórki L 1010 w kulturze ki viltro.Zwiazek kompleksowy platyny Zwiazki porównawcze: PDD PHD PHS PHM Zwiazek wedlug wynalazku PHIC DI50 (mol) 2,33 0,13 0,19 0,30 0,42 30 35 B — Dzialanie toksyczne na myszy. 1. Toksycz¬ nosc zwiazków apHikowanycih ip., i.v. i p.o. -(do¬ ustnie).Dzialanie toksyczne, ostre, Tabela 5 róznych zwiazków kompleksowych platyny na myszy.Zwiazki HDD tPAC PAIC IPHD SPHC JPtHIC PHTA DLo* mg/kg H26 175 (160 1153 DL10** 500 Tabela 6 Dzialanie toksyczne PHIC przy. aplikacji i.p. i.v. i p.a na myszy i szczury.Zwierzeta Sposób aplikacji DL10 mg/kg DLso mg/kg DL90 mg/kg Myszy i.p.Lv. p.o. i.p. i.v. p.o. 153 348 01 111 236 (220^254)*. 421 (411^3,1)* powyzej 1O0O 143 173 (156—192)* powyzej 1000 365 489 276 244 Szczury * Przedzial ufnosci dla P=0,05, DLia= dawka powodujaca smierc 10% zwierzat.DL*—dawka powodujaca smierc 50% zwierzat.DL»= dawka powodujaca smierc 90% zwierzat.DL telnosci.DLio=dawka powodujaca smierc 10% zwierzat. ** przy aplikacji doustnej (p.o.).128 539 9 10 Badania toksycznosci ostrej, po jednorazowym zastrzyku, prowadzono na mylszach rasy Swiss, plci zenskiej, o wadze 21^23 g oraz na szczurach.Na kazda wielko-sc dawki zwiazku badanego przy- i padalo 10 zwierzat: Wyniki badan przedstawiono 5 w tabeliS. J Wyniki badan toksycznosci przy aplikacji PHTC! i.p., i.v. i p.o. (przy kazdym sposobie aplikacji bra¬ no po 10 zwierzat dla kazdej wielkosci dawki) przedstawiono w tabeli 6. Spadek ciezaru ciala 10 zwierzat w dniu J4 leczonych i.p. wynosil przy DLio okolo 3,5 g, zas przy DtLso okolo 4,3 g.Tabe Wielkosc dawek aplikowanych w badaniach Zwiazek PDD PAC JPIHO Dawka 8 100 4 mg/kg Rozpuszczalnik roztwór wodny roztwór NaCl 9 %o Wielkosc Zwiazek Dawka mg/kg dawek Tabela 7 aplikowanych w badaniach toksycznosci nerkowej i watrobowej PDD PAC PHD JFHM EPlHiS |PHC 8 100 4 50 5 120 PHIC 160 Rozpuszczalnik roztwór wodny NaCl 9 %o roztwór wodny Klucel H^O 4%o IH*) roztwór wodny NaCl 2. Toksyczne dzialanie na nerki i watrobe. Szkod- ^ liwe dzialanie PDD na nerki jest dobrze znane.Byloby natomiast interesujace porównanie oddzia¬ lywania na nerki i watrobe, w których to na¬ rzadach platyna najwiecej akumuluje sie zwiazku otrzymanego sposobem wedlug wynalazku PHIC i innych, podanych wyzej, zwiazków komplekso¬ wych platyny.Badania prowadzono na myszach, samiczkach, ra¬ sy Swiss (Evic-Ceba, Bordeaux, Francja), wagi 20 do 22 g. Myszy leczone przez aplikacje badanego zwiazku i.p. w dniu J0 i nastepnie usmiercano je w dniach Ji, J4 i Jio. Dla kazdego zwiazku brano po 9 myiszy. Wielkosc ajflikowanych danych poda¬ no w tabeli 7.Nalezy zauwazyc, ze powyzsze dawki odpowiada¬ ja nietoksycznym dawkom maksymalnym dla my¬ szy zdrowych, to jest bliskim lub równym DL0.Badania tkanek nerkowych i watrobowych doko¬ nywano na narzadach utrwalonych w plynie „Bu- bosca^Brasil" i zainkludowanych w parafinie.Skrawki grubosci 5 mikronów zabarwiano bar¬ wnikiem eozynowym. Ogólnie biorac, zauwazalne zmiany umiejscowione sa w obrebie kory oraz ka¬ nalików * przyleglych i dalszych. Dotycza one: a) zmiany w jadrach komórek: — wyrazna anizokarioza — zmiany w chromatynie, badz rozmyte, badz sku¬ pione w polaczeniu z hyperchromatyzmem i/lub pyknoza — blona jadrowa nieregularna i czasami naruszo¬ na.Ib) zmiany w cytoplazmie: — anizocytoza polaczona ze zmiana obrzezy szczot¬ kowych przyleglych kanalików i inkluzja cial eozy- noflilowych w cytoplazmie.Niektóre rzadkie obserwacje sugeruja wystepo¬ wanie izolowanych zmian nerkotycznych komórek w kanalikach przyleglych i dalszych. U jednego zwierzecia zaobserwowano pojawienie sie wrzodu w dniu Jio w przypadku aplikacji PHM. Zaobser^ wowano rozszerzenie kanalików i wystepowanie waleczków szklistych w zespole komórek miazszo- ' wych o rzadko spotykanym wygladzie pseudope- cherzykowym. Zmiany te, o ile wystepuja, docho¬ dza do punktu kulminacyjnego w dniu J4 i stabili¬ zuja sie w dniu Jio, z odchyleniami u tej samej serii zwierzat, co sugeruje, ze zaleza one od róznic wrazliwosci. Powyzsze zmiany obserwowano w przypadku aplikacji: a) PDD — S mg/kg, PAC — 100 mg/kg i PHM — 50 mg/kg. b) PHD — 4 mg/kg: zmiany naczyniowe bez wy¬ stepowania waleczków szklistych. c) PHS — 5 mg/kg: rozszerzenie naczyn i znie¬ ksztalcenie przyleglych kanalików.PHC w dawce 120 mg/kg i PlHIC w dawce 150 mg/kg nie powoduja w tego typu preparatach znaczniejszych zmian. Pobrane okazyjnie próbki miazszu sledziony i nadnerczy nie dawaly podstaw do stwierdzenia zmian. Z badan tych wynika, ze zwiazek otrzymany sposobem wedlug wynalazku PHIC wydaje sie nie powodowac zadnych zmian nerkowych i to w dawce 20-krotnie wiekszej ni£ PDD. Badania porównawcze penetracji w glab ko¬ mórek in vivo, przeprowadzono na myszach przy aplikacji zwiazku f wedlug wynalazku PHIC oraz PDD. Wyniki tych badan przedstawiaja sie naste¬ pujaco.(Myszy szczepu DBAi/2 otrzymywaly 108 komórek w dniu Jo i byly poddawane leczeniu w drnu Ja przez aplikacje zwiazku platyny w dawce zblizo¬ nej do DL0 dla myszy zdrowych. Po uplywie 2 go¬ dzin po zaaplikowaniu leku w dniu J3 zwierzeta usmiercano i pobierano z ich otrzewnej okolo 2frX. 10* komórek, które przemywano wielokrotnie w celu usuniecia platyny pozakomórkowej jaK tez miedzykomórkowej, to jest nie zwiazanej fiowa- lentnie z órganellami komórkowymi. Zawartosc platyny w plynie z przeplukan oznaczano metoda absorpcji atomowej. Platyne zawarta wewit^lrz komórek i zwiazana z DNA oznaczano po ekstraWjt fenolem. W przypadku PDD w dawce 9 mg/fcg fne przenika w glab komórek wiecej niz 0AVo platyny zaaplikowanej zwierzeciu, co odpowiada ilosci lGi$&; 10-ie g platyny na 1 komórke leukcmiczna. :? ¦:¦;.¦ W tych warunkach przypada jeden atom zwft-* zanej platyny na 3OO0O nukleotydów, to jest l*fr calej ilosci platyny w komórce jest skomtpiekBo- ) 10 abel iach 4 30 35 40 50 35128 539 11 wany z DNA. W przypadku PHIC, w dawce 150 mgi/kg w glab komórki przenika 0,15°/o tej ilosci, co odpowiada 700X1 O*-16 g platyny przypadajacej na 3i5i(M) nukleotydów. Podobnie jak w przypadku PDD l°/o tej ilosci jest skompleksowany z DNA. 5 Zelbrane wyniki podano w tabeli & Tabela 8 Porównanie penetracji PDD i PHIC w glab komó¬ rek L 12)10 wszczepionych zwierzetom i oznaczenie 10 udzialu ilosciowego w DNA Ulosc platyny Zwia- [Dawka zaabsorbo- zek img|/kg wanej na 1 platyny komórke 1X110-" g Hosc atomów platyny zwiaza-, nych przez nu- kleotyd na DNA POD PUMC 150 aso .700 11/30000 1/3SO0 C Dzialanie toksyczne na pawiany. Na. koniec przeprowadzono wstepne badania dzialania toksy¬ cznego PHIC na pawiany w celu okreslenia na¬ stepujacych parametrów: a) dzialanie toksyczne na nerki b) dzialanie toksyczne na krew c) dzialanie toksyczne na zoladek i jelita d) dzialanie toksyczne na watrobe e) dzialanie toksyczne na narzad sluchu, oraz ustalenia mafcsymalnej dawki tolerowanej, to jest nie powodujacej smierci zwierzat.W celu ustalenia maksymalnej dawki tolerowa¬ nej przeprowadzono dwa doswiadczenia na pawia¬ nach nr 1 i nr 2, aplikujac im odpowiednio dawke 100 i 150 mg/kg, przy czym oba zwierzeta nie byly uprz%dnio nawadniane. W celu zweryfikowania korzystnego efektu nawadniania pawianowi nr 3 zaaplikowano dawke 200 mg/kg z nawodnieniem.Program óbu doswiadczen przedstawiono w poniz¬ szej tabeli 9.Tabela 9 (Pa- fwian Iwr Ciezar ciala kg /Dawka mg/kg mosc zabiegów * 4,4 1* 7,5 U'00 150 200 lacznie 6: 1 w dniu Jo 1 w dniu J37 1 w dniu Jm Iw dniu Jm 1 w dniu J105 1 w dniu Ji33 1 w dniu Jo 1 w dniu Jo Zwiazek otrzymany sposobem wedlug wynalazku PHIC rozpuszczono w 9%o roztworze NaCl do ste¬ zenia 100 mg/l, po czym przesaczono przez filtr Milliipore o srednicy por 0,2(2 mikrona. Roztwór ten wstrzykiwano do zyly udowej w ciagu 5- do 10 minut. Pawian nr 3, któremu zaaplikowano PHIC w dawce 200 mgl/kg otrzymal dodatkowo do¬ zylnie- 700 ml roztworu fizjologicznego.Toksyczne dzialanie na zoladek i jelita bylo 15 20 30 35 40 50 60 12 \ pierwszym objawem manifestujacym sie na ogól po uplywie 1 do 2 godzin po zastrzyku badanego zwiazku. We wszystkich przypadkach wymioty byly malo obfite i trwaly od 4 do 5 godzin. Próbki krwi pobierano w regularnych odstepach, a wy¬ niki jej badania zestawiono w tablicach %), 10 i 11.Dzien oznaczony symbolem Jo byl dniem aplikacji zwiazku, przy czym przed zastrzykiem pobrano próbki krwi. Tak wiec -wyniki jej analizy w dniu Jo maja znaczenie kontrolne. Ji oznacza dzien pierwszy po zastrzyku, Jb drugi itd.Pawian nr 2 (150 mg/kg) zdechl w dniu Ja, naj¬ prawdopodobniej na skutek toksycznego dzialania zwiazku na nerki (zawartosc kreatyniny 1552 mo¬ li/l) przy braku nawodnienia. Nalezy zwrócic uwa¬ ge, ze pawian ten nie przyjmowal pokarmu i napo¬ ju w ciagu 11 dni. Takie dzialanie toksyczne na nerki jest zgodne z dotychczasowym stanem wie¬ dzy o dzialaniu-tego typu kompleksowych zwiaz¬ ków platyny w przypadku braku nawodnienia..|Z doswiadczen tych wynika, ze PHIC w dawce 100 mg/kg, przy braku nawodnienia, nie przejawia toksycznosci nerkowej, zas przy nawodnieniu nie zaobserwowano objawów dzialania toksycznego na¬ wet przy dawce 200 mg/kg.Badanie dzialania toksycznego PHIC na narzad sluchu przeprowadzono na pawianie nr 3 (200 mg/ /kg) w dniu J31. Badanie to obejmowalo: a) mierzenie potencjalów wzbudzonych slucho¬ wo, gdy ucho bylo poddane okreslonej liczbie (16O0) pobudzen o natezeniu 90, 90, 70, 60, 50, 40, 30, 20 i 10 decybeli. Zarejestrowane wyniki pomia¬ rów pozwalaly okreslic czas utajenia przewodzenia od ucha do mózgu; b) przeprowadzenie tego samego rodzaju badania metoda echokochleografii. Metoda ta jest o wiele czulsza niz poprzednia, gdyz przeprowadza sie ja tylko przy udziale narzadu Cortiego (cochlea). Sto¬ sowane czestotliwosci wynosily 8000, 4000, 2000 i 1000 Hz przy natezeniu 90, 70, 50, 30s 20 i 10 de¬ cybeli. Pomiarów dokonywano poslugujac sie apa¬ ratem RACIA MEDELEC EMPLED MK4 1'026. Nie stwierdzono zadnych objawów dzialania toksycz¬ nego na narzad sluchu, które moznaby wykryc przy dawce PHIC 200 mg/kg.Wlasnosci PHIC w porównaniu z odpowiednimi wlasnosciami PDD przedstawiaja sie nastepujaco: PHIC PD£) 1. Rozpuszczalnosc w wodzie 2. Wlasnosci przeciwnowo- tworowe a) wskaznik terapeutyczny L 1210 SlflO. . b) zwierzeta pozostale przy zyciu w przypadku leu¬ kemii L 1210 i Sarkomy S 100 3. Dzialanie toksyczne na nerki przy dawce DLo dla myszy nieograni¬ czona jtlGO0 flóg/l) 136,3 121,5 Itak *iie 2 m/gl/ml «,5 5,2 tnie tak128 539 13 14 Tabela 10 Wyniki analiz krwi pawiana nr 1 (dawka PHIC = 1O0 mg/kg) iJo wynik kontroi- ^l ^2 ^6 ^16 ^x ^37 *^M "^41 ^tt my Poziom protrombiny (100%) Fibrynogen I (2^4 g/l) Proakceleryna V (100%) 100 3,20 75 , — 80 2,25 ¦ — 65 2,40 100 95 1,95 — 8,5 1,52 — 85 1,46 — 85 1,85 — 1O0 2,72 ~- 95 2,70 Prokonwertyna VII 4- czynnik Stuarta X (100%) — — — 70 Protrombina II (100%) * Kreatynina (5Q—IW limoliA) Granulocyty (4000^7000) Plytki (100'000^230 000) Ciezar ciala kg . 117 255i0 B04OOO 8,4 - l_ — ^— aro 95 91 i 2480 •526 000 7,7 105 4560 414000 18,4 138 3969 414 000 ._ 99 2989 802 000 8,35 85 4824 299 000 h- 102 4212 371 000 ^- ^_ 136 / 3696 T08 000, 7,6 J0 = pierwszy zastrzyk, J37 = drugi zastrzyk Liczby w nawiasach oznaczaja wartosci normalne u czlowieka.Tabela lOa Wyniki analiz krwi pawiana nr 1 (dawka PHIC = 100 mg/kg) Poziom protrombiny (100%) Fibrynogen I (2^4 g/l) Proakceleryna V (100%) Prokonwertyna VII + czynnik Stuarta X (100%) Protrombina II (100%) Kreatynina (5i3—il30 jjimoliA) Granulocyty (4O0K—7000) Plytki (100 000—2B'0 000) Ciezar ciala kg J57 90 2,67 _ »_ 96 2498 329 000 ._ J58 \^- , ¦ ^_ _, 8,415 J(B 50 1,86 ,_ , 136 31726 #78 000 r_ ^76 95 1,715 121 1071 375 000 ¦__ J79 95 2,10 138 2541 382 000 J84 7,93 *JS5 85 2,08 100 90 , 97 3509 540 000 t— J90 , ^_ 96 1917 686 000 — 1J100 915 2,50 __ _ 110 3230 340 000 — Jgj = trzeci zastrzyk, JM = czwarty zastrzyk Liczby w nawiasach oznaczaja wartosci normalne u czlowieka.128 539 15 16 Tabela 10 b Wyniki analiz krwi pawiana nr 1 (dawka PIHIC = 100 mg/kg) Poziom protrombiny (ilO0J°/o) Fibrynogen I (2-4 g/l) Proakceleryna V ClOP/t) Prokonwertyna VII + czynnik Stuarta X ClO0V§) Protrombina II (100%) Kreatynina (53—^130 umoliA) Granulocyty (4000—7000) Plytki (100 000—280000) Ciezar ciala kg Jl05 95 2,25 60 2030 206 OOO 8,59 Jioe 75 2,20 120 10 120 23(1 000 — Jin 48 2,20 1'00 39 TO 102 1121 345 000 — JlJ2 100 2,10 r— * 1232 348'000 — Jl29 100 2,15 — — 90 5406 608 000 — Jiaa — — —. '— — _ 7,65 Jim —- — 126 7245 560 000 — ' Jl40 100 2,50 114 4794 441000 — J103 ™ P^ty zastrzyk, J133 = szósty zastrzyk Liczby w nawiasach oznaczaja wartosci normalne u czlowieka.•) BUN = 4,5 milimoli/1 (wartosci normalne w granicach 3—7 mlllmoll/1).Tabela 11 Wyniki analiz krwi pawiana nr 2 (dawka PHIC = 150 mg/kg) Poziom protrombiny (100Vo) Fibrynogen I (2—i g/l) Proakceleryna V (100%) Prokonwertyna VII + czynnik Stuarta X (100*/©) Protrombina II (lOP/o) Kreatynina (53-430 ^moli/l) Granulocyty (4000—7000) Plytki (100 000-560 000) Ciezar ciala kg Joo wynik kontrolny 95 1,86 __ __ 125 3072 507 000 — Jo wynik kontrolny 90 ' 1,46 _, 130 6865 293 000 Ji 60 1,46 70 62 42 96 9672 261 000 _ J4 85 2,82 — __ 245 1986 212 000 - —.Jn 55 4,20 100 55 55 1552 555 174 OOO 5,5 J0 — pierwszy zastrzyk.Uczby w nawiasach oznaczaja wartosci normalne spotykane u czlowieka.128 539 17 Tabela 12 Wyniki analiz krwi pawiana nr 3 (dawka PHIC 18 200 mg/kg) Jo wynik kon¬ trolny Jia Jw Jl8 J* Jao J40 Poziom protrombiny (1O0M) 915 10 30 85 90 100 1O0 95 95 Fibrynogen II (2-4 gA) 2,07 2,70 3,00 4,80 3,85 2,60 2,00 2,25 1,50 Proakceleryna V (lOOP/t) 100 100 — — Prokonwertyna VII + czynnik Stuarta X (MKWt) 25 — — Protrombina II (lOOM) Kreatynina (53—*180 Limoli/1) Granujocyty <4O Plytki (100000-^260 000) Ciezar ciala kg _ 62 3800 241 000 7,5 30 140 4586 70 000 6,25 25 350 5236 208 000 — 646 7905 241000 5,31 * 265 3550 114 000 —. ¦ __ 118 722 312 000 97 4872 306 000 5,6 ^_ 104 10 752 457 000 6,9 94 4731 299 000 6,33 Jp — pierwszy zastrzyk.Liczby w nawiasach oznaczaja wartosci normalne spotykane u czlowieka.Zwiazek otrzymamy sposobem wedlug wynalazku PHIC jest wiec lepszym srodkiem przeciwnowo- tworowym niz zwiazek POD, pod wzgledem roz¬ puszczalnosci, toksycznosci i aktywnosci przeciw- nowotworowej (patrz tabele 10 a, b, 11 i 12).Symbol „Joo" w tabeli 11 odpowiada analizom konkretnym przeprowadzonym kilka dni przed do¬ swiadczeniem, zas symbol „J0" odpowiada anali¬ zom kontrolnym wykonanym kilka minut przed doswiadczeniem. Wartosci otrzymane dla „J00" i „Jo" powinny byc podobne i daja poglad na zmien¬ nosc tych danych u zdrowego pawiana.Zwiazek otrzymany sposobem wedlug wynalazku PHIC wykazuje ponadto dzialanie bakteriobójcze i moze byc stosowany jako srodek dezynfekujacy.Jako srodek przeciwnowotworowy zwiazek PHIC moze byc aplikowany doustnie, domiesniowo lub dozylnie. Mozna go tez aplikowac w postaci kapsu¬ lek, proszków, pastylek lub roztworów do zastrzy¬ ków zawierajacych nosniki i srodki pomocnicze dopuszczalne do stosowania w farmacji. Srednia dawka dzienna moze wahac sie od 1 do 4O0 mg/kg ciezaru ciala. Powyzsze przyklady ilustruja blizej wynalazek nie ograniczajac jego zakresu.Przyklad I. Wytwarzanie zwiazku PHIC.I etap. Wytwarzanie dwuwodzianu, 5 9 cisHPt/DAC/Clo dysperguje sie w 260 ml dwu¬ krotnie destylowanej wody i dodaje 4,3 g stalego AgNO. Prowadzi sie reakcje przy zaslonietym swietle w ciagu 4 godzin w temperaturze 50—5i5°C, przy czym wytraca sie bialy osad AgCl. Miesza¬ nine ochladza sie nastepnie do temperatury 0-^C 35 40 45 w ciagu kilku godzin, po czym saczy sie na bibule filtracyjnej Whatmana {„Whatman" jest znakiem handlowym firmy Whatman Inc., New Jersey, USA). Osad przemywa sie 50^-75 ml wody a bez^ barwny przesacz (300—350 ml) przesacza przez filtr „Millipore" o srednicy por 0,45 ^m („Millipore" jest znakiem handlowym firmy Millipore, Massa- chussetts, USA).Wytwarzanie PHTC. Do polaczonych powyzszjrch przesaczów dodaje sie 3,86 g dwuwodnego izocy^ trynianu sodowego, podgrzewa mieszanine do tem¬ peratury 60-^a9°C w ciagu 20 godzin przy zaslo¬ nietym swietle. Zólty roztwór, który w razie po¬ trzeby mozna przesaczyc przez bibule Whatmana, zateza sie na wyparce obrotowej,'przy tempefatu-- rze lazni 50°C, do objetosci 25<—30 ml.Roztwór zwiazku kompleksowego przesacza sie przez filtr Millipore (0,45 mikrona) i dodaje pipeta, ciagle mieszajac, do 1O0O ml zimnej mieszaniny etanolu z acetonem w stosunku 1:1. Mieszanine pozostawia sie w temperaturze 4^ w ciagu 2 go¬ dzin, po czym odsacza sie wytracony osad na fil¬ trze ze szkla spiekanego, przemywa 1O0 ml aceto¬ nu a nastepnie 100 ml eteru.Otrzymany, bialawy zwiazek kompleksowy suszy- sie pod obnizonym cisnieniem i wazy. Z 5 g cis- ^Pt/DAC/Cli otrzymuje sie okolo 6,5 g PHIC, co odpowiada wydajnosci 86^/0. Tak otrzymany zwia¬ zek PHIC, w postaci bialawego proszku, czernieje przy ogrzaniu do temperatury 245^ i ulega* calko¬ witemu rozkladowi w temperaturze 2B4°C. Wyniki analizy elementarnej i oznaczania platyny na pod-128 539 19 stawie absorpcji atomowej metoda spektrofotome¬ tryczna sa nastepujace: PHIC, ciezar czasteczkowy 594,10 20 H N Pt Cl Na obliczono: 24,26 4,10 4,72 32,84 — 7,16 znaleziono: 24,10 3,96 4,76 31,10 — 6,99 Powyzsze wyniki analityczne sa w zgodzie ze wzorem zwiazku kompleksowego PHIC'21HaO, w którym rdzen Pt-/DAQ/ nie jest polaczony dwoma wiazaniami z jonem izocytrynianowym, lecz jest polaczony jednym wiazaniem z grupa karboksylo¬ wa, zapewne w pozycji 1, zas drugie wiazanie sta¬ nowi polaczenie Pt-OH. Budowe te przedstawia wzór 7.Zwiazek ten jest prawie calkowicie rozpuszczal¬ ny w wodzie (powyzej 1500 mg/ml). W roztworze chlorku sodowego o stezeniu 9%o rozpuszczalnosc ta wynosi 700 mg/ml. W tym srodowisku zwiazek kompleksowy przeksztalca sie w ciagu 24 godzin dajac zólty osad odpowiadajacy pochodnej chloro¬ wej. PHIC mozna zidentyfikowac na podstawie jego chromatogramów i analizy widmowej w ultrafiole¬ cie w podczerwieni oraz magnetycznego rezonansu jadrowego (NMR) izotopu15*C, co przedstawiono na zalaczonych wykresach i w ponizszych tabelach.Wykres na fig. 1 przedstawia chromatogramy cie¬ czowe pod wysokim cisnieniem, zwiazku PHIC, otrzymane w warunkach podanych w ponizszej tabeli. 10 15 25 30 Oznaczenia A,B,C,D odnosza sie do poszczególnych chro¬ matogramów PHIC, otrzymanych w warunkach przed¬ stawionych w tabeli, ilustrowanych na fig. 1.Na wykresie na figurze 2 przedstawiono wyniki analizy PHIC w ultrafiolecie, zarejestrowane przy uzyciu spektrofotometru CARY 14, przy stezeniu 3 mg/100 ml HzO. Wspólczynnik absorpcji molo¬ wej = 94O0 mol-1 cm-1. Na wykresie na figurze 3 przedstawiono wyniki analizy PHIC w podczerwie¬ ni zarejestrowane przy uzyciu spektrofotometru PiERKIN BLMER 5'77. Zwiazek staly rozciencza sie do stezenia ltyo w bromku potasowym, który potem 55 sprasowuje sie w postaci pastylki. Dwa piki wzor¬ cowe odpowiadaja liczbom falowym vi=2850,7 cm-1 i v2=906,7 cm-1.Na wykresie figury 4 przedstawiono widmo mag¬ netycznego rezonansu jadrowego i*C PHIC, otrzy¬ mane w nastepujacych warunkach. Widmo magne¬ tycznego rezonansu jadrowego 18C z odszczepie- niem protonów, otrzymano przy uzyciu spektromet¬ ru BRUKER WH 90, pracujacego przy 212,612 MHz w sposób pulsacyjny z przeksztalceniem Fouriera.Liczba sygnalów swobodnej precesji zakumulowa¬ nych w zakresie 6 KHz przy zastosowaniu 8 Kbi- tów pamieci wynosila dla PHIC 17000. Stosowano impuls w poblizu 90° w ciagu 12 fis przy okresie repetycji 3 s.(Przesuniecia, dhemicizne flOi wyrazano W pipm w odniesieniu do TMS. PHIC rozpuszczano w D^O do stezenia 1,1 g/mi. Roztwór saczono na filtrze Mil- lipore (0,45 mikrona) przed rejestracja widma. Ja¬ ko wzorzec zewnetrzny stosowano CdD* Przesunie¬ cia chemiczne podano w ponizszej tabeli 13.Tabela 13 Przesuniecia chemiczne 18C (ppm/TMS) w PHIC: £Nr piku 3 Ci Przynaleznosc ligand Ci Od- Stezenie nos- Rozpuszczal¬ nik nik • A 0,5 mg/ml HzO B* 0,5 mg/ml C^HgOH/HaO, 4:6 C* 0,5, mg/ml 1'% kwas octowy D* 0,5 mg/ml* ,1% kwas octowy Obje¬ tosc wtry- snie- 25 15 50 50 * kolumna Ci8, rewersyjna, Eluent Czu¬ losc Wyplyw Cisnienie ml/min MPa 0,2 H*0 1,5 10,5 0,04 C2H5OH/HA 4:6 2 2,1 10,01 1% kwas octowy 4 2,1 0,01 11% kwas octowy 2 2,1 radialna 35 40 45 50 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 iPHIC 184,2 183,9 183,8 182,9 182,7 182£ 182,3 iea,2 182,0 jai,9 75,9 75,2 64,8 64,0 51,1 50,6 50,3 4)8,9 39,6 39,1 38,4 36,4 34,3 34,1 33,4 32,8 26,3 ISO< ISO DAC** ISO ISO DAC DAC C-1,2,3 C-4 C-1,1' C-5 C-6 C^2,2' C-3,3' 85 * ISO=izocytrynian trójsodowy o wzorze 5 ** DAC=dwuaminocykloheksan o wzorze 6.Przyklad II. 5 g cis-CPt/DAC/Cy o wzorze 4 zawiera sie w 900 ml wody podwójnie destylo¬ wanej i dodaje sie 3,86 g izocytrynianu trójsodo- wego 2iH20. Mieszanine ogrzewa sie do 01^-65<°C w ciagu 24 godzin, chroniac przed swiatlem. Ótrzy-128 539 21 22 muje sie w ten sposób wodny roztwór zadanego kompleksu PHIC.Zastrzezenia patentowe L Sposób wytwarzania organicznego kompleksu platyny stanowiacego cis-izocytryniano-/l,2-dwua- minocylkilohefcsano/Hplaityne (II), znamienny tym, ze czesciowo schelatowany 1,2-dwuaminocyklohek- sanem zwiazek platyny o ogólnym wzorze 1, w którym X oznacza anion taki jak Cl~ lub N03~ poddaje sie reakcji z izocytrynianem trójsodowym, o wzorze 2, przy czym otrzymuje sie zadany orga¬ niczny kompleks platyny. 2. Sipasób wedlug zaistrz. 1. znamienny tym, ze 10 15 poddaje sie reakcji cis-dwuchloro-/l,2Kiwuainiiio- -cykloheksano/jplatyne (II) z izocytrynianem trój- sodowym o wzorze 2 w roztworze wodnym. 3. Sposób wytwarzania organicznego kompleksu platyny stanowiacego cis-izocytryniano/l,2i-dwuami- no-cykloheksano/iplatyne (II), znamienny tym, ze cis^dwuchloro-/l,2i-dwaiamino-cyklohekisano/iplaty- ne (II) poddaje sie najpierw reakcji w srodowi¬ sku wodnym z azotanem srebra, przy czym otrzy¬ muje sie dwuazotan odpowiedniego zwiazku pla¬ tyny, po czym zwiazek ten poddaje sie reakcji z izocytrynianem trójsodowym, o wzorze 2, przy czym otrzymuje sie zadany organiczny kompleks platyny, który wyodrebnia sie nastepnie ze sro¬ dowiska reakcyjnego.Cc NH; NH2^ X Pt <*/— NH NH^ Pt -CL WZGR 1 O ® ONa C H-C-OH 0 © CH2 I C NaO /©^O WZÓR 2 H3N Cl Pt, sONa (D H3N^ :i WZÓR 3 WZÓR 4 H l HO-C-C • I o^O" Na+ H-C-C x0"Na+ '6 3/° H2C -C . VNa+ WZÓR 5 2 H2c3// 2N:h-nh2 "2K CH-NH2 3Vh/v 2' WZÓR 6128 539 O O OHC ? A 'Ffg.1 ^_ NH2^ ^^nh/ "oh 0-C-C-C-CH2- C I I H H ONa WZÓR 7 0=%'°-° NH- I *0- C - H I HC ^ O NaO CH2 WZÓR 8 'ONa 3 J*. ng.2 9C0 250 VW u/ (nm) Fig. 4 JL FHIC G(6 i&*t^Mh$M*m \ \*o\ SO- 40< 20- Fig.S. 4000 3500 3000 2500 2000 /SOO ' /SOO /400 1200 lOOO 800 SOO 400 200 Drukarnia Narodowa, Zaklad Nr 6, 33/87 Cena 130 zl PL PL PL PL PL PL