NO851278L - Fremgangsmaate for fremstilling av acyltripeptider og mellomprodukter for anvendelse ved fremgangsmaaten - Google Patents

Fremgangsmaate for fremstilling av acyltripeptider og mellomprodukter for anvendelse ved fremgangsmaaten

Info

Publication number
NO851278L
NO851278L NO851278A NO851278A NO851278L NO 851278 L NO851278 L NO 851278L NO 851278 A NO851278 A NO 851278A NO 851278 A NO851278 A NO 851278A NO 851278 L NO851278 L NO 851278L
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
solution
mmol
acid
formula
benzyl
Prior art date
Application number
NO851278A
Other languages
English (en)
Inventor
Jeffrey Lee Ives
Frank Christian Sciavolino
Original Assignee
Pfizer
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pfizer filed Critical Pfizer
Publication of NO851278L publication Critical patent/NO851278L/no

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K5/00Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08Tripeptides
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/34Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/36Oxygen or sulfur atoms
    • C07D207/402,5-Pyrrolidine-diones
    • C07D207/4042,5-Pyrrolidine-diones with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms, e.g. succinimide
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04Antibacterial agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02Immunomodulators
    • A61P37/04Immunostimulants
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07DHETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D313/00Heterocyclic compounds containing rings of more than six members having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D313/16Eight-membered rings
    • C07D313/18Eight-membered rings not condensed with other rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

Denne oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fremstill-
ing av nye acyltripeptider som er nyttige som immunostimulerende og antibakterielle midler; og mellomprodukter for deres fremstilling .
Det forholdsvis nye felt immunofarmakologi, og særlig det segment av dette som angår immunoforsterkning, utvikles stadig med høy hastighet. En rekke naturlig forekommende forbindelser er undersøkt, innbefattet tetrapeptidet tuftsin, kjent kjemisk som N 2 -[1-(N 2-L-treonyl-L-lysyl)-L-prolyl]-L-arginin. Stor opp-merksomhet har vært rettet mot syntetiske peptidoglykanderiva-ter, særlig de som er kjent som muramyl-dipeptider. Med hensyn til oppsummeringer vedrørende det store område av forbindelser som er undersøkt som immunoforsterkende midler, og særlig som immunostimulerende midler, skal det henvises til Dukar et al., Annu. Rep. Med. Chem., 14, 146-167 (1979), Lederer, J. Med.
Chem., 23, 819-825 (1980) og til J. Kralovec, Drugs of the Future, 8, 615-638 (1983).
Immunostimulerende peptider er blitt beskrevet i en rekke patenter:
L-alanyl-a-glutarsyre-N-acyl-dipeptider i tysk patent
3 024 355, publisert 15. januar 1981;
tetra- og penta-peptider inneholdende D-alany1-L-glutamyl-deler eller L-alanyl-D-glutamyl-deler i henholdsvis britisk patent 2 053 231, publisert 4. februar 1981 og tysk patent 3 024 281, publisert 8. januar 1981; og
N-acyl-L-alany1-a-D-glutamyl-tripeptid-derivater hvor den C-terminale aminosyre er lysin eller diaminopimelinsyre, i
tysk patent 3 024 369, publisert 15. januar 1981; og
laktyl-tetrapeptider sammensatt av N-laktylalany1, glutamyl, diaminopimelyl og karboksymetylamino-komponenter i EP 11283, publisert 28. mai 1980.
Andre immunostimulerende polypeptider har formelen (A)
hvor R 1 er hydrogen eller acyl; R 2er bl.a. hydrogen, lavere
3 4
alkyl, hydroksymetyl, benzyl; R og R er hver hydrogen,
7 8 7
karboksy, -CONR R hvor R er hydrogen, lavere alkyl eventuelt substituert med hydroksy; og R er mono- eller dikarboksy-lavere alkyl; R"<*>er hydrogen eller karboksy, med det forbehold at når en av R 4 og R 5 er hydrogen, er den annen- karboksy eller
"7 flC\
-CONR R ; R er hydrogen, m er 1 til 3, og n er 0 til 2, og derivater derav hvor karboksy- og aminogruppene er beskyttet, er beskrevet i US-patenter 4 311 640 og 4 322 341; EP-ansøkninger 25 482; 50 856; 51 812; 53 388; 55 846 og 57 419.
Ingen av de tidligere beskrevne polypeptider har en basisk aminosyre i den stilling som opptas av den variable R 4 i ovennevnte formel.
Kitaura et al., J. Med. Chem., 25, 335-337 (1982) rappor-terer N 2-(y-D-glutamyl)-meso-2(L),21(D)-diaminopimelinsyre som den minimale struktur som er i stand til å fremkalle en biolog-isk reaksjon som er karakteristisk for formelen (A) når n er 1; R4 1 er CH CH(0H)-C0-; R2 e6r CH ; hver av R3 og R5 er -C00H;
R er -C0NHCH2C00H; og R er H. Nevnte forbindelse med formel
(A) er kjent som FK-156.
Nye acyltripeptider med formel (I)
og farmasøytisk godtagbare salter derav er effektive immunostimulerende eller immunoforsterkende midler, og antibakterielle midler. I den ovenstående formel er:R° alkyl med fra 1 til 6 karbonatomer og x er et helt tall fra 1 til 4.
Oppfinnelsen omfatter også visse forbindelser som er egnet som mellomprodukter for fremstilling av forbindelsene med formel (I). Mellomproduktene har formlene (II) og (III).
hvor R° er C, ,alkyl;; 2 4 hver av Y±, Y og Y er en karboksy-beskyttende gruppe; Y 3er en karboksy-beskyttende gruppe eller
hvor x er et helt tall fra 1 til 4; og
Y 5 er en aminobeskyttende gruppe.
Konfigurasjonen av aminosyredelene som sammen danner forbindelsene med formel I, er viktig når det gjelder farmakolog-isk aktivitet hos forbindelsene. Den beste aktivitet iakttas hos forbindelser med formel I med den stereokjemi som er angitt i nevnte formel. Stereokjemien, i forhold til den som den na-turlige aminosyre har, er betegnet som D- eller L-. Stereokjemien for
delen kan være enten D- eller L-, idet begge epimerer medfører at forbindelsene med formel I som har den angitte stereokjemi på de andre punkter, blir aktiv.
Acyltripeptidene med formel (I) fremstilles ved en hvilken som helst av en rekke metoder som er kjent for fagfolk.Metodikken omfatter dannelsen av peptid-bindinger mellom aminosyrer som på grunn av sine amino- og karboksygrupper,
og ofte tilstedeværelsen av andre reaktive grupper, nødvendig-gjør beskyttelse av nevnte grupper og/eller aktivering av slike grupper, særlig karboksygruppen, for å oppnå en bestemt reaksjon eller for å optimalisere en slik reaksjon.
Det totale reaksjonsforløp som det er tale om, er vist nedenfor.
Z = Cbz = benzyloksykarbonyl
BSA = bis-trimetylsilylacetamid
CMEC l-cykloheksyl-3-(2-morfolinoetyl)karbodiimid-meto-p-toluen-sulfonat
HOSuc = N-hydroksysuksinimid
NMM = N-metylmorfolin
R = (C1_6)alkyl
DCC = dicykloheksylkarbodiimid
Som det fremgår av det ovenstående reaksjonsforløp fremstilles tripeptidet med formel (I) ved å knytte sammen den acyl-erte glutaminsyre med diaminopimelinsyre-lysin-(eller basisk aminosyre) dipeptid-delen. Dipeptiddelen fremstilles på sin side ved å knytte sammen diaminopimelinsyre med lysin på samme måte. Den rekkefølge som de enkelte aminosyrer bindes sammen i for å fremstille tripeptidet, er uvesentlig.
I de her angitte eksempler er visse beskyttende og aktiverende grupper spesielt illustrert. En fagmann vil imidlertid forstå at andre beskyttende eller aktiverende grupper kunne ha vært anvendt. Valget av en spesiell beskyttelsesgruppe er avhengig i stor utstrekning av hvor vidt det nødvendige reagens er tilgjengelig, dens virkning på oppløseligheten av den "beskyttede" forbindelse, den letthet hvormed den fjernes og tilstedeværelsen av andre grupper som kan påvirkes av dens bruk; dvs. dens selektivitet, eller dens fjernelse.
Det vil for eksempel være nødvendig, eller i det minsteønskelig, ved mange reaksjoner å beskytte aminogruppene og/eller karboksygruppene. Synteseveien som velges for tripeptid-syntesen kan kreve fjernelse av den ene eller denannen eller begge nevnte beskyttelsesgrupper for å tillate videre reaksjon med den regenererte amino- eller karboksygruppe; dvs. de anvendte beskyttelsesgrupper er reversible og kan i de fleste tilfeller fjernes uavhengig av hverandre. Valg av beskyttelsesgrupper for en gitt aminogruppe er dessuten avhengig av den rolle som nevnte aminogruppe har i det totale reaksjonsskjerna. Amino-beskyttende grupper med varierende grader av labilitet, dvs. enkel fjernelse, vil bli anvendt. Det samme gjelder for kar-boksybeskyttende grupper. Slike grupper er kjente innen teknikken, og det skal henvises til oversikter av Bodansky et al., "Peptide Synthesis", 2. utg., John Wiley & Sons, N.Y.
(1976); Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis",
John Wiley&Sons, N.Y. (1981); McOmie, "Protective Groups
in Organic Chemistry", Plenum Press, N.Y. (1973); og Sheppard i "Comprehensive Organic Chemistry, The Synthesis and Reactions of Organic Compounds", Pergaman Press, N.Y. (1979), utgitt av E. Haslam, del 23.6, sider 321-339.
Konvensjonelle amino- og karboksy-beskyttende grupper er kjent for fagfolk. Representative amino-beskyttende grupper, som imidlertid ikke skal oppfattes som noen begrensning, er de følgende: benzyloksykarbonyl; substituert eller usubstituert aralkyl så som benzyl, trityl, benzhydryl og 4-nitrobenzyl; benzyliden; aryltio så som fenoltio, nitrofenyltio og triklor-fenyltio; fosforylderivater så som dimetylfosforyl og 0,0-di-benzylfosforyl; trialkylsilylderivater så som trimetylsilyl; og andre slik som beskrevet i US-patent 4 322 341 og som det her skal henvises til. Den foretrukne aminobeskyttende gruppe er benzyloksykarbonyl. Fremgangsmåter for substituering av nevnte gruppe på en gitt aminogruppe er velkjent. Generelt omfatter de acylering av den passende aminoforbindelse med benzyloksy-karbonylklorid (benzylklorformiat) i et reaksjonsinert oppløs-ningsmiddel, f.eks. vann, metylenklorid, tetrahydrofuran, i nærvær av en base (syreakseptor), for eksempel natrium- eller kaliumhydroksyd når vann er oppløsningsmiddel; og når et organisk oppløsningsmiddel anvendes, i nærvær av et tertiært amin så som C^_4trialkylaminer og pyridin. Når et vandig oppløsningsmid-delsystem anvendes, holdes reaksjonsblandingens pH på ca. pH 8-9, og fortrinnsvis ved pH 9. Alternativt, når reaktanten, dvs. forbindelsen med en aminogruppe som skal beskyttes, inneholder basiske grupper, kan den tjene som syreakseptor.
R-CO-acylgruppen innføres i glutaminsyre-reaktanten (forbindelse 9 i ovenstående reaksjonsskjerna) ved standard acyle-ringsmetoder så som ved omsetning av nevnte glutaminsyre med det passende syreklorid eller bromid i et reaksjonsinert opp-løsningsmiddel. Foretrukne betingelser er vandige systemer, f.eks. vandig aceton, og en pH på 9,0, idet pH holdes ved 8,5 til 9,0 ved tilsetning av en egnet base så som natrium- eller kaliumhydroksyd. Ikke-vandige oppløsningsmidler kan også anvendes. I slike tilfeller anvendes imidlertid en organisk base, fortrinnsvis et tertiært amin så som trietylamin, N-metylmorfolin eller pyridin, som base.
Acyleringen kan selvsagt foretas ved hjelp av det passende syreanhydrid (enkelt eller blandet) i henhold til standard metoder. Når et anhydrid anvendes for dette acyleringstrinn, foretrekkes blandete anhydrider, særlig de som er avledet fra en lavmolekylær karboksylsyre, og særlig de blandede karboksylsyre-karbonsyre-anhydrider.
Representative karboksy-beskyttende grupper er forskjellige estere så som silylestere, innbefattet trialkylsilylestere, trihalogensilylestere og halogenalkylsilylestere; visse hydrokarbylestere så som C-^_^alkyl-, særlig t-butyl-grupper; benzyl-og substituerte benzylestere, benzhydryl og trityl; fenacyl og ftalimidometylestere; visse substituerte hydrokarbylestere så som klormetyl-, 2,2,2-trikloretyl-, cyanometyl-estere; tetra-hydropyranyl; metoksymetyl; metyltiometyl; beskyttet karbazoyl så som -CONH-NHR 5 hvor R 5 er en aminobeskyttende gruppe som angitt ovenfor, særlig benzyloksykarbonyl; og andre slik som beskrevet i US-patent 4 322 341 som det her henvises til. Den foretrukne karboksy-beskyttende gruppe er -CONH-NHR<5>hvor R<5>
er benzyloksykarbonyl, og denne foretrukne gruppe betegnes som benzyloksykarbazid. En meget foretrukket karboksy-beskyttende gruppe er benzylgruppen.
De beskyttede amino- og karboksygrupper omdannes til de ubeskyttede amino- og karboksygrupper ved metoder som er vel-kjente for fagfolk. Benzyloksykarbonylgruppen og benzylgruppen, de foretrukne beskyttelsesgrupper for amino- og karboksy- (som en del av den beskyttende karbazoylgruppe) grupper fjernes ved katalytisk hydrogenering over palladium, særlig palladium-på-kull.
Selektiv fjernelse av én benzyloksykarbonylkarbazidbeskyt-tende gruppe fra meso-diaminopimelinsyre-dibenzyloksykarbonyl-karbazid (produktet fra eksempel 3 nedenfor) oppnås hensiktsmessig ved hjelp av leucin-aminopeptidase (LAP). Omsetningen foretas i et vandig oppløsningsmiddel , særlig en blanding av vann og et vannblandbart oppløsningsmiddel (så som en C-^_^alkanol, tetrahydrofuran, dioksan) ved en alkalisk pH, idet pH-området 8-10 foretrekkes, spesielt en verdi på 8,5.
Aktivering av karboksygrupper som et middel til å frem-skynde den gitte reaksjon, er en metodikk som er velkjent for fagfolk. Særlig nyttig i det her beskrevne reaksjonsforløp er anvendelse av anhydrider, spesielt cykliske anhydrider; og aktiverte estere så som de som er avledet fra N-hydroksyftalimid og N-hydroksysuceinimid, som begge anvendes ved peptidsynteser.
I det her beskrevne reaksjonsforløp inneholder mellomproduktene med formlene (2) og (6) a-substituerte glycindeler og omdannes hensiktsmessig til 2,5-oksazolidindion-derivater (N-karboksyanhydrider) med henholdsvis formel (3) og (7). Nevnte anhydrider letter de påfølgende reaksjoner som forbindelsene med formlene (3) og (7) underkastes. De fremstilles ved at aminosyre-forløperne med formlene (2) og (6) omsettes med et reagens så som PCI,- eller SOC^.
De aktiverte N-hydroksysuccinimid-estere [f.eks. formel (10)] fremskynder de påfølgende reaksjoner ved nevnte aktiverte estergruppe. En fagmann vil være klar over at andre aktiverende grupper kan anvendes. En gruppe som er av særlig interesse, er N-hydroksyftalimidogruppen, som anvendes på samme måte som N-hydroksysuccinimidogruppen. I begge tilfeller anvendes et dehydratiserende koblingsmiddel for å danne den aktiverte ester. Representative slike koblingsmidler er l-cykloheksyl-3-(2-morfolinoetyl)karbodiimid-meto-p-toluensulfonat, dicykloheksy1-karbodiimid, N,N'-karbonyldiimidazol, N-(3-dimetylaminopropy1)-N<1->etylkarbodiimid-hydroklorid, etoksyacetylen, difenylketen
og N-etyl-5-fenylisoksazolin-3<1->sulfonat. Reaksjonsbetingelsene for anvendelse av slike koblingsmidler er utførlig beskrevet i litteraturen. Generelt omfatter de anvendelse av et reaksjonsinert oppløsningsmiddel og temperaturer varierende fra omgivel-sestemperatur til 100°C. De ovennevnte karbodiimidreagenser foretrekkes eftersom de tillater anvendelse av omgivelsestempe-ratur ved reaksjonen og medfører tilfredsstillende utbytter av de ønskede estere.
Produktene fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse er nyttige som midler for pattedyr, innbefattet mennesker, for klinisk og terapeutisk behandling av sykdommer som forårsakes av forskjellige patogene mikroorganismer, særlig gram-negative bakterier. De er også nyttige som immunostimulerende midler i pattedyr, innbefattet mennesker, med en øket risiko for infeksjon på grunn av eksisterende eller klinisk fremkalt immu-nosuppresjon.
Ved forsøksprosedyren som anvender C^H/HeN hanmus fra Charles River Breeding Laboratory, er beskrevet nedenfor. Mu-sene ble akklimatisert i 5 dager før de ble anvendt og ble derefter behandlet enten subkutant (SC) eller oralt (PO) med forskjellige fortynninger (10, 1 og 0,1 mg/kg) av prøveforbindelsen eller placebo (pyrogenfritt saltvann) under anvendelse av et volum på 0,2 ml. Behandlingsoppskriften var avhengig av den anvendte infeksjonsorganisme: -24 og 0 timer før angrep medKlebsiella pneumoniae; og -6, -5, -4 og -1 dag før angrep av Escherichia coli eller Pseudomonas aeruginosa. Infeksjonen ble fremkalt intramuskulært (IM) i hoften når det gjelder K. pneumoniae eller intraperitonealt (IP) når det gjelder E. coli og P. aeruginosa. Et volum på 0,2 ml ble anvendt for injeksjonen. Dødelighet ble nedtegnet efter 7 dager for K. pneumoniae og efter 3 dager for de to andre mikroorganismer.
Kulturfremstilling:
K. pneumoniae: Kulturen fra frossent blodforråd ble for å oppnå renhet strøket ut på hjerne-hjerte-infusjonsagar (BHI). Tre kolonier ble plugget fra 18-timer-platekulturen og anbragt i 9 ml BHI næringsvæske. Næringskulturen ble dyrket i 2 timer ved 37°C på en rotasjonsryster, hvorefter 0,2 ml ble strøket ut på overflaten av flere BHI agar-skråkulturer. Efter 18 timers inkubering ved 37°C ble skråkulturene vasket med BHI næringsvæske, kulturtettheten ble regulert under anvendelse av en "spectronic 20" og den passende fortynning ble foretatt for å oppnå et LDlOO infeksjonsnivå hos mus (ca. 250 CFU/dyr). (CFU
= kolonidannende enheter).
E. coli eller P. aeruginosa: Kulturen ble strøket ut for
å oppnå renhet på overflaten av en BHI agarplate fra frossent blodforråd. Efter inkubering natten over ble flere kolonier anbragt i 100 ml "Difco" næringsagar som befant seg i en 250
ml Erlenmeyer-kolbe. Efter 18 timers inkubering ved 30°C på
en New Brunswick rotasjonsryster, ble en 1:10 fortynning foretatt i 90 ml frisk næringsvæske. Kulturen ble inkubert ved 30°C (rotasjonsryster, 200 opm) i 3 timer, tettheten ble regulert til 78 % under anvendelse av en "spectronic 20", og den
passende fortynning ble gjort i PBHI næringsvæske for å oppnå en LD90 ved intraperitoneal injeksjon i mus.
Ved anvendelse som antibakterielle eller immunostimulerende midler i mennesker, administreres forbindelsene fremstilt i-følge oppfinnelsen hensiktsmessig via oral, subkutan, intramus-kulær, intravenøs eller intraperitoneal vei, vanligvis i form av et preparat. Slike preparater omfatter et farmasøytisk bære-middel valgt på grunnlag av den ønskede administreringsvei og standard farmasøytisk praksis. For eksempel kan de administreres i form av tabletter, piller, pulvere eller granuler inneholdende slike hjelpestoffer som stivelse, melkesukker, visse typer leire osv. De kan administreres i kapsler, i blandinger med visse eller ekvivalente hjelpestoffer. De kan også administreres i form av orale suspensjoner, oppløsninger, emulsjon-er, siruper og eliksirer som kan inneholde smaksstoffer og far-vemidler. For oral administrering av de terapeutiske midler fremstilt ifølge oppfinnelsen er tabletter eller kapsler inneholdende fra ca. 50 til ca. 500 mg egnet for de fleste anvendel-ser .
Legen vil bestemme den dose som er mest egnet for hver enkelt pasient, og den vil variere med alder, vekt og reaksjonen hos den spesielle pasient og administreringsveien. Imidlertid vil generelt begynnelsesdosen for voksne være ca. 2 til 100 mg pr. kg pr. dag i en enkelt eller flere doser. Det foretrukne orale doseområde er fra ca. 10 til ca. 300 mg/kg/dag. Den foretrukne parenterale dose er fra ca. 0,1 til ca. 100 mg/kg/dag;
og det spesielt foretrukne område er fra ca. 0,1 til ca. 20 mg/ kg/dag.
EKSEMPEL 1
N, N'- dibenzyloksykarbonyl- meso- diaminopimelinsyre
Til en oppløsning av 209,4 g (1,1 mol) meso-diaminopimelinsyre i 2200 ml vann, gjort basisk til pH 9,0 med 2N natriumhydroksyd og avkjølt på isbad til 10°C, ble satt 450,5 g (2,64 mol) benzylklorformiat over en periode på 30 minutter. Under tilsetningen ble pH opprettholdt på 9,0 med 2N natriumhydroksyd. Efter 2,5 timer ble oppløsningen ekstrahert 3 ganger med 1 liter etylacetat. Den vandige oppløsning ble surgjort med 10 % saltsyre til pH 1,5 og ekstrahert 2 ganger med etylacetat.
Ekstraktene ble samlet, tørket over magnesiumsulfat, filtrert
og konsentrert, og den resulterende olje ble krystallisert fra 920 ml kloroform ved romtemperatur for å gi 170 g (34 %) av tittelproduktet: smp. 129-133°C; IR (KBr) 2700, 1720, 1600 cm"<1>; NMR (D6-DMS0) 6 7,1-7,4 (m, 10H), 5,2 (s, 4H), 4,0-4,2 (m, 2H), 1,2-1,6 (m, 6H); [a]D= 0,0 (C = 1,2, MeOH).
EKSEMPEL 2
Meso- diaminopimelinsyre- di- N- karboksyanhydrid
En suspensjon av 62,0 g (140 mmol) N,N-dibenzyloksykarbonyl-meso-diaminopimelinsyre i 1240 ml tørr metylenklorid ble avkjølt under nitrogenatmosfære til 10°C og behandlet i en eneste porsjon med 62,0 g (300 mmol) fosforpentaklorid. Den resulterende gule oppløsning ble lagret i 1 time ved 10°C og fikk oppvarmes til romtemperatur i 20 timer. Den resulterende suspensjon ble filtrert, produktet ble vasket suksessivt med tørr metylenklorid og tørket under høyvakuum for å gi 2 9,9 g (91 %) av di-N-karboksyanhydridet; smp. 280°C; IR (KBr) 3250, 1840, 1760 cm"<1>; NMR (Dg - DMSO)64,2-4,4 (m, 2H), 1,2-2,0 (m, 6H).
EKSEMPEL 3
Meso-diaminopimelinsyre-dibenzyloksykarbonyl-karbazid-diacetat
En omrørt oppløsning av 1,4 g (8,5 mmol) benzylkarbazat
i 4 ml iseddiksyre ble avkjølt til 10°C, og den resulterende oppslemning ble behandlet med 1,0 g (4,1 mmol) meso-diaminopimelinsyre-di-N-karboksyanhydrid. Reaksjonsblandingen fikk oppvarmes langsomt til romtemperatur i 2 timer, og den resulterende olje ble utgnidd med eter for å gi 2,37 g (95 %) av tittelproduktet: smp. 158-161°C; IR(Nujol) 2850, 1700 cm"<1>;
NMR (CD30D) 6 7,30 (s, 10H), 5,10 (s, 4H), 3,30 (m, 2H),
1,5-1,8 (m, 6H).
EKSEMPEL 4
Meso-diaminopimelinsyre-(D)-mono-benzyloksykarbonylkarbazid
En oppløsning av 26,2 g (43 mmol) meso-diaminopimelinsyre-dibenzyloksykarbonylkarbazid-diacetat i 325 ml metanol og 750
ml vann ble behandlet med 2N natriumhydroksyd til pH 8,5. Den resulterende oppløsning ble behandlet med 2200 enheter leucin-aminopeptidase (Sigma Hog Kidney, Type III suspensjon, Sigma
Chemical Company, St. Louis, MO, USA) og omrørt ved romtemperatur i 5 dager, idet pH ble holdt ved 8,5 med 2N natriumhydroksyd. Metanolen ble fjernet under vakuum, og den resulterende vandige oppløsning ble vasket 2 ganger med 200 ml etylacetat. Den vandige oppløsning ble tilført til en HP-21 harpikskolonne.
(HP 21 er en fornettet styren-divinylbenzen-kopolymer i perle-form med en makroretikulær struktur. Den er tilgjengelig fra V. G. F. Corporation, 420 Lexington Avenue, New York, NY). Kolonnen ble vasket med 2 liter vann, og derefter ble produktet eluert med 50 % metanol i vann. Elueringsmidlet ble konsentrert for å gi produktet som ble utgnidd med eter, filtrert og tørket for å gi 14,1 g (95 %) av tittelproduktet; smp. 204-210°C (dekomp.); IR (Nujol) 2200-3600, 1720, 1660, 1580 cm"<1>; NMR (CD30D) 6 7,45 (s, 5H), 5,20 (s, 2H), 3,50 (m, 2H), 1,4-2,1
(m, 6H); [a]<D>= -16,8 (C = 1,0, AcOH).
EKSEMPEL 5
N,N<1->dibenzyloksykarbonyl-meso-diaminopimelinsyre-mono- benzyloksykarbonylkarbazid
En suspensjon av 11,8 g (35 mmol) meso-diaminopimelinsyre-(D)-mono-benzyloksykarbonylkarbazid i 270 ml tørr metylenklorid ble behandlet med 56,8 ml (280 mmol) bis-trimetylsilylacetamid og omrørt ved romtemperatur under nitrogenatmosfære i 18 timer. Reaksjonsoppløsningen ble avkjølt til -15°C og behandlet i 5 minutter med 15,0 g (88 mmol) benzylklorformiat. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 1 time ved -15°C og oppvarmet ved romtemperatur i 18 timer. Oppløsningen ble surgjort med fortynnet saltsyre, omrørt i 1 time og derefter filtrert for å gi 13,6 g (64 %) av tittelproduktet: smp. 141-145°C; IR (KBr) 3300, 1740, 1715, 1695, 1660 cm"<1>; NMR (CD30D) 6 7,30 (s, 15H), 5,10 (s, 6H), 4,10 (m, 2H), 1,40-2,00 (m, 6H); [a]<D>= +18,2
(C = o,6, MeOH).
EKSEMPEL 6
Benzyloksykarbony1-meso-diaminopimelinsyre-mono-benzyloksykarbonylkarbazid
Til en ufortynnet oppløsning av 130 ml tionylklorid ble satt 13,0 g (21 mmol) av tittelforbindelsen fra eksempel 5. Oppløsningen ble omrørt i 2 timer ved romtemperaturm konsent rert og tørket under høyvakuum i 1 time. Det resulterende produkt ble oppløst i 130 ml eddiksyre, behandlet med 6 5 ml IN saltsyre og omrørt ved romtemperatur i 18 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert, og den resulterende oppslemning ble oppløst i 100 ml vann og nøytralisert med en oppløsning av mettet natriumbikarbonat. Suspensjonen ble omrørt i 1 time, filtrert, vasket med vann og tørket for å gi 9,7 g (93 %) av tittelproduktet: smp. 20l-205°C (dekomp.); IR (KBr) 3300,
b 1715, 1690, 1600 cm"1; NMR (D,-DMS0) 6 7,2-7,4 (bs, 10H),
5,25 (s, 2H), 5,20 (s, 2H), 4,40 (m, 2H), 1,6-2,5 (m, 6H);
[a]<D>= +35,1 (C = 0,4, MeOH).
EKSEMPEL 7
N- heptanoyl- D- glutaminsyre
En oppløsning av 75,0 g (510 mmol) D-glutaminsyre i
1 liter vandig aceton (50:50) ble regulert til pH 9,0 med 2N natriumhydroksyd. Den resulterende oppløsning ble avkjølt til 10°C og behandlet i 45 minutter med 114,2 g (770 mmol) hepta-noylklorid, idet pH ble holdt på 9,0 med 2N natriumhydroksyd. Reaksjonsblandingen fikk oppvarmes til romtemperatur i 3 timer. Aceton ble fjernet under vakuum, og den resulterende, vandige oppløsning ble surgjort med fortynnet saltsyre og ekstrahert 3 ganger med 700 ml porsjoner etylacetat. Ekstraktene ble samlet, tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert. Den resulterende olje ble utgnidd med heksan for å gi 109,8 ) g (83 %) av det ønskede produkt: smp. 92-96°C; IR (Nujol) 3300, 2700-3250, 1720, 1625 cm"<1>; NMR (Dg-DMSO) 6 4,20 (m, 1H),
2,28 (t, 2H), 2,20 (t, 2H); 1,85-2,05 (m, 1H), 1,65-1,85
(m, 1H), 1,40-1,60 (m, 2H), 1,15-1,30 (m, 6H), 0,75 (t, 3H); [a] = +9,6 (C = 1,0, MeOH).
EKSEMPEL 8
N- heptanoyl- D- glutaminsyre- a- benzylester
Encppløsning av 108,8 g (420 mmol) N-heptanoyl-D-glutaminsyre og 50,6 g (500 mmol) trietylamin i 135 ml dimetylformamid ble behandlet med 85,7 g (500 mmol) benzylbromid og omrørt under nitrogenatmosfære i 60 timer. Reaksjonsblandingen ble hellet i 1 liter etylacetat og vasket suksessivt med to 500 ml porsjoner hver av fortynnet saltsyre og vann. Etylacetatfasen ble derefter vasket med 500 ml IN natriumhydroksyd. Det basiske vandige lag ble surgjort med fortynnet syre og ekstrahert med fire 500 ml porsjoner etylacetat. De samlede etylacetat-ekstrakter ble behandlet med overskudd av dicykloheksylamin og omrørt i 18 timer. Suspensjonen ble filtrert, oppslemmet i frisk etylacetat (400 ml) i 2 timer, filtrert på ny og tørket under vakuum for å gi 4 9,1 g dicykloheksylaminsalt. Det resulterende salt (14,0 g) ble omrørt i fortynnet saltsyre, filtrert og vasket med etylacetat. Det vandige filtrat ble ekstrahert 2 ganger med etylacetat, og de organiske lag ble samlet, tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert. Den resulterende olje ble utgnidd med heksan for å gi 7,9 g (86 % fra salt) av tittelesteren; smp. 76-79°C; IR (Nujol) 3300, 2700-3100, 1730, 1700, 1645 cm"<1>; NMR (CDCl3) 6 7,35 (s, 5H), 5,20 (s, 2H), 4,70 (m, 1H), 1,85-2,50 (m, 6H), 1,55-1,70 (m, 2H), 1,10-1,40 (m, 6H), 0,75 (t, 3H); [a] = 27,6 (C = 0,6, MeOH).
EKSEMPEL 9
N-heptanoyl-D-glutaminsyre-a-benzyl-y-(N-hydroksysuccinimid) diester
En oppløsning av 7,68 g (22 mmol) N-heptanoyl-D-glutaminsyre-a-benzylester og 6,1 g (51 mmol) N-hydroksysuccinimid i 220 ml etylacetat ble behandlet med 22,9 g (51 mmol) 1-cyklo-heksyl-3-(2-morfolinoetyl)karbodiimid-meso-p-toluen-sulfonat. Oppløsningen ble omrørt i 2 dager ved romtemperatur og derefter hellet i 150 ml vann. Lagene ble separert, og etylacetatdelen ble vasket én gang med vann, én gang med saltoppløsning, tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert. Utgnidning med eter gav 8,0 g (82 %) av tittel-diesteren; smp. 85-89°C; IR (Nujol) 3350, 2800-3000, 1810, 1790, 1745, 1650 cm"<1>; NMR (CDClg) 6 7,30 (s, 5H), 5,20 (s, 2H), 2,8 (bs, 4H), 2,0-2,7
(m, 6H), 1,50-1,70 (m, 2H), 1,10-1,4 (m, 6H), 0,80 (t,3H).
EKSEMPEL 10
N-heptanoyl-y-D-glutamyl-(a-benzylester)-benzyloksykarbonyl- (D)-meso-diaminopimelinsyre-(D)-benzyloksykarbonyl- karbazid
En oppløsning av 4,22 g (9 mmol) av tittelforbindelsen fra eksempel 6 og 0,9 g (9 mmol) N-metylmorfolin i 200 ml 20 % vandig tetrahydrofuran ble behandlet med 4,0 g (9 mmol) N-heptanoyl-D-glutaminsyre-a-benzyl-y-(N-hydroksysuccinimid)-diester (produktet fra eksempel 9). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 2 dager ved romtemperatur, konsentrert og behandlet med 60 ml IN saltsyre og 200 ml etylacetat. De organiske lag ble samlet, vasket én gang med IN HC1, én gang med saltoppløsning, tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert. Krystallisering fra etylacetat gav 4,94 g (69 %) av tittelproduktet: smp. 139-141°C; IR (Nujol) 3300-2550, 1680, 1640 cm"<1>; NMR (D6-DMS0) 6 7,30 (bs, 15H), 5,12 (s, 2H), 5,08 (s, 2H), 5,00 (S, 2H), 4,25 (m, 1H), 4,15 (m, 1H), 4,00 (m, 1H), 2,25 (t, 2H), 2,10 (t, 2H), 1,20-2,00 (m, 16H),0,80 (t, 3H); [a]D= +22,4
( C = 0,3, MeOH).
EKSEMPEL 11
N-heptanoy1-y-D-glutamyl-(a-benzylester)-benzyloksykarbonyl- (D)-meso-diaminopimelinsyre-(D)-(benzyloksykarbazid)-L-(N-hydroksysuccinimid)-ester.
En oppløsning av 3,70 g (4,6 mmol) av tittelforbindelsen fra eksempel 10 og 0,64 g (5,52 mmol) N-hydroksysuccinimid i 150 ml 50 % vandig dioksan ble avkjølt til 10°C og behandlet med en eneste porsjon 1,35 g (5,06 mmol) N,N<1->dicykloheksy1-karbodiimid. Oppløsningen ble omrørt i 2 timer ved 10°C, 18 timer ved romtemperatur, avkjølt igjen og filtrert. Filtratet ble inndampet, oppløst på ny i etylacetat, filtrert og konsentrert. Det resulterende faste stoff fra filtratet ble utgnidd med eter for å gi 3,50 g (85 %) av tittelesteren: smp. 107-110°C; IR (KBr) 3600, 3100, 3000, 2950, 1810, 1740, 1710, 1645 cm"<1>; NMR (D 6-DMSO) 6 7,35 (bs, 15H) , 5,12 (s, 2H) , 5,10 (s, 2H), 5,00 (s, 2H), 4,50 (m, 1H), 4,30 (m, 1H), 4,10 (m, 1H), 3,40 (bs, 4H), 1,20-2,40 (m, 20H), 0,85 (t, 3H).
EKSEMPEL 12
N-heptanoyl-y-D-glutamyl-(a-benzylester)-benzyloksykarbonyl- (D)-meso-diaminopimelinsyre-(D)-(benzyloksykarbonylkarbazid)-(L)-NS-(a-benzyloksykarbonyl)-L-
lysin.
En suspensjon av 0,75 g (2,7 mmol) a-benzyloksykarbonyl- L-lysin i 30 ml tørr metylenklorid ble behandlet med 2,2 g (10,7 mmol) bis-trimetylsilylacetamid og omrørt i 18 timer ved romtemperatur. Denne oppløsning ble satt til en 5°C omrørt oppløsning av esteren fra eksempel 11 i 100 ml metylenklorid og 50 ml tetrahydrofuran. Den resulterende oppløsning ble om-rørt i 1 time ved 5°C og fikk oppvarmes langsomt til romtemperatur. Oppløsningen ble konsentrert, behandlet med 300 ml 0,7M HCl-oppløsning og ekstrahert 3 ganger med etylacetat.
De samlede etylacetatlag ble vasket suksessivt med vann og salt-oppløsning, tørket over magnesiumsulfat, filtrert og inndampet. Residuet ble oppløst i eti minimal mengde varm etylacetat, avkjølt og filtrert for å gi 2,06 g (80 %) av tittelproduktet: smp. 154-157°C; IR (KBr) 3600-3100, 3000, 2900, 1740, 1690, 1640 cm"<1>; NMR (D b-DMSO) 6 7,30 (bs, 20H), 5,14 (s, 2H), 5,09 (s, 2H), 5,02 (s, 2H), 4,98 (s, 2H), 4,30 (m, 1H), 4,15 (m, 1H), 3,95 (m, 2H), 3,00 (m, 2H), 2,20 (t, 3H), 2,15 (t, 3H), 1,10-2,10 (m, 22H), 0,85 (t, 3H).
EKSEMPEL 13
N-heptanoy1-y-D-glutamy1-L-meso-diamino-pimelinsyre-Ne-L-lysin
En oppløsning av 1,0 g (0,94 mmol) av det beskyttede tri-peptidprodukt fra eksempel 12 og 250 mg 10 % palladium-på-kull-kåtalysator i 100 ml 20 % vandig eddiksyre ble hydrogenert ved 3,52 kg/cm 2 hydrogengasstrykk i 24 timer. Oppløsningen ble avgasset, filtrert og filtratet ble konsentrert. Residuet ble oppløst i 80 ml 0,1N svovelsyre, avkjølt til 5°C og behandlet med 0,44 g (2,06 mmol) natrium-metaperjodat. Den brune oppløs-ning ble omrørt i 1 time ved 5°C, behandlet dråpevis med en mettet natriumbisulfittoppløsning inntil klarhet og ble påført på en HP-21-harpikskolonne. Kolonnen ble derefter vasket med vann, og den ønskede forbindelse ble derefter eluert med 50 % vandig metanol. Avdampning av elueringsmidlet gav 0,4 6 g (88 %) av tittel-acyltripeptidet: smp. 220°C (dekomp.); IR
(KBr) 3650-2700, 1710, 1650, 1600 cm"<1>; NMR (D20) 6 4,38 (m, 1H) , 4,22 (m, 1H) , 4,10 (m, 2H) , 3,25 (m, 2H) , 2,45, (t, 2H) , 2,35 (t, 2H), 1,2-2,25 (m, 22H), 0,85 (t, 3H). [a]D= -18,8
(C - 0,5, H20).
EKSEMPEL 14
N-heptanoyl-y-D-glutamy1-(a-benzylester)-benzyloksykarbonyl- (D)-meso-diaminopimelinsyre-(D)-(benzyloksykarbazid)-(L)-Ne-(Na<->acetyl)-L-lysin-metylester
En oppløsning av 0,895 g (3,75 mmol) Na<->acetyl-L-lysin-metylesterhydroklorid, 2,0 g (2,50 mmol) av det beskyttede dipeptidprodukt fra eksempel 10 og 0,38 g (3,75 mmol) N-metylmorfolin i 200 ml tetrahydrofuran ble avkjølt til 0°C og behandlet med 0,51 g (3,75 mmol) 1-hydroksybenzotriazol. Den resulterende oppløsning ble omrørt i 10 minutter og behandlet med 2,12 g (5,0 mmol) l-cykloheksyl-3-(2-morfolinoetyl)karbo-diimid-meto-p-toluensulfonat. Oppløsningen ble oppvarmet til romtemperatur og omrørt i 72 timer. Reaksjonsblandingen ble derefter konsentrert, residuet ble oppløst i 200 ml etylacetat, og oppløsningen ble vasket med 200 ml 2,5 % vandig saltsyre. Den resulterende suspensjon ble filtrert uten separering av
de organiske og vandige faser for å gi et hvitt, fast stoff som efter omkrystallisering fra varm tetrahydrofuran og dietyleter gav 1,64 g (66 %) av tittelproduktet: smp. 174-176°C; IR (KBr) 3600-3100, 3000, 2950, 1740, 1690, 1660, 1640 cm<1->; NMR (Dg-DMSO) 6 7,35 (bs, 15H), 5,13 (s, 2H), 5,09 (s, 2H), 5,00 (s, 2H), 4,30 (m, 1H), 4,18 (m, 2H), 4,00 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,05 (m, 2H), 2,22 (t, 2H), 2,15 (t, 2H), 1,10-2,10 (m, 22H), 1,85 (s, 3H), 0,85 (t, 3H).
EKSEMPEL 15
N-heptanoyl-y-D-glutamyl-L-meso-diaminopimelinsyre-Ne- (Na-acetyl-L-lysin-metylester)
En oppløsning av 1,0 g (1,01 mmol) av det beskyttede tri-, peptidprodukt fra eksempel 14 og 250 mg 10 % palladium-på-kull i 5o ml 20 % vandig eddiksyre ble hydrogenert under 3,52 kg/cm^ hydrogentrykk i 1 time. Oppløsningen ble avgasset, filtrert og konsentrert. Residuet ble oppløst i 50 ml vann og 1 ml tetrahydrofuran, og pH ble regulert til 2,0 med svovelsyre. Oppløsningen ble avkjølt til 5°C og behandlet med 475 mg (2,22 mmol) natrium-metaperjodat, omrørt i 1 time og derefter klargjort med dråpevis tilsetning av en mettet oppløs-ning av natriumbisulfitt. Oppløsningen ble påført på en kolonne av HP-21 harpiks, vasket med vann, og produktet ble eluert med 1 liter 30 % vandig metanol. Oppløsningen ble konsentrert, og det resulterende faste stoff ble utgnidd med eter for å gi 434 mg (70 %) av detønskede produkt: smp. 140°C (dek.);
IR (KBr) 3600-3100, 2950, 2850, 1740, 1640, 1620; NMR (D20) 6 4,35 (m, 2H), 4,20 (m, 1H), 3,80 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), (m, 2H), 2,45 (t, 2H), 2,30 (t, 2H), 1,20-2,25 (m, 22H), 2,05 (s, 3H), 0,85 (t, 3H); [a]J 5 = -22,2 (C = 0,5, H2).
EKSEMPEL 16
N-heptanoy1-y-D-glutamyl-(a-benzylester)-benzyloksykarbonyl- (D)-meso-diaminopimelinsyre-(D)-benzyloksykarbonyl) -L-Ne-(Na-acetyl)-L-lysin
En oppløsning av 0,50 (2,67 mmol) Na<->acetyl-L-lysin og 2,45 g (12,0 mmol) bis(trimetylsilyl)-acetamid i 50 ml tørr metylenklorid ble omrørt ved romtemperatur i 18 timer. Den ble derefter ved hjelp av en injeksjonssprøyte satt til en -15°C oppløsning av isobutyl-blandet-anhydrid av produktet fra eksempel 10, fremstilt ved tilsetning av 0,29 g (2,24 mmol) iso-buty1-klorformiat til en -15°C oppløsning av 1,78 g (2,2 mmol) av produktet fra eksempel 11 og 0,24 g (2,2 mmol) N-metylmorfolin i 100 ml vannfri tetrahydrofuran. Den resulterende reak-sjonsblanding ble omrørt i 1 time ved -15°C og 3 timer ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble konsentrert, oppløst i 200 ml etylacetat og vasket med 200 ml 2,5 % vandig saltsyre. Etyl-acetatlaget ble fraskilt og konsentrert for å gi et hvitt, fast stoff som ble utgnidd med eter for å gi 1,37 g (63 %) produkt; smp. 170-175°C; IR (KBr) 3600-2850, 1740, 1680, 1750, 1600 cm"<1>; NMR (Dg-DMSO) 6 7,35 (bs, 15H) , 5,12 (s, 2h), 5,08 (s, 2H) ,
5,02 (s, 2H), 4,30 (m, 1H), 4,15 (m, 2H), 4,0 (m, 1H), 3,05 (m, 2H), 2,25 (m, 2H), 2,15 (t, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,15-1,85 (m, 22H), 0,85 (t, 3H).
EKSEMPEL 17
N-heptanoyl-Y-D-glutamyl-L-meso-diaminopimelinsyre-Ne<->
(Na<->acetyl)-L-lysin
En oppløsning av 1,2 g (1,23 mmol) av produktet fra eksempel 16 i 50 ml 20 % vandig eddiksyre ble behandlet med 330 mg 10 % palladium-på-kull-katalysator og hydrogenert med 3,52 kg/cm<2>hydrogentrykk i 1 time. Oppløsningen ble avgasset, filtrert og konsentrert. Den resulterende olje ble oppløst i 50 ml vann, avkjølt til 5°C og surgjort med svovelsyre til pH 1,5-2,0. Den resulterende oppløsning ble derefter behandlet med 0,58 g (2,7 mmol) natrium-metaperjodat, omrørt i 1 time,
og derefter behandlet med en mettet oppløsning av natriumbisulfitt inntil den var klar. Den ble påført på en HP-21 harpikskolonne og kolonnen ble vasket med 250 ml vann. Eluering med 250 ml 50 % vandig metanol gav ved konsentrering 0,55 g (74 %) av det ønskede produkt; smp. 220°C (dek.); IR (KBr) 3600-2900, 2850, 1720, 1640, 1540 cm"<1>; NMR (D20) & 4,30 (bm, 3H), 3,80
(t, 1H), 3,25 (m, 2H), 2,45 (t, 2H), 2,35 (t, 2H), 1,2-2,3
(m, 22H) , 2,05 (s, 3H) , 0,85 (t, 3H) ; [et] = -17,6 (C = 0,5, H20) .
EKSEMPEL 18
N-heptanoyl-y-D-glutamyl-(a-benzylester)-L-meso-diaminopimelinsyre- [ (D)-benzyloksykarbonyl-(D)-benzyloksykarbonylkarbazid]-N^-a-benzyloksykarbony1-L-ornitin En suspensjon av 0,5 9 g (2,2 mmol) a-benzyloksykarbonyl-L-ornitin i 80 ml tørr metylenklorid ble behandlet med 1,81 g (8,9 mmol) bis-(trimetylsilyl)acetamid og omrørt i 3 timer ved romtemperatur. Den resulterende oppløsning ble satt til en opp-løsning av esterproduktet fra eksempel 11 i 70 ml tørr tetra-hydrof uran og omrørt ved romtemperatur i 3 dager. Den resulterende oppløsning ble konsentrert og den gjenværende olje ble behandlet med 500 ml 0,7N vandig saltsyre og 350 ml etylacetat. To-faseoppløsningen ble omrørt i 1,5 timer, separert, og det organiske lag ble konsentrert og utgnidd med eter for å gi 1,95 g (84 %) av tittelproduktet: smp. 167-171°C; IR (KBr) 3600-3100, 2950, 1740, 1695, 1640; NMR (D^-DMSO) 6 7,40 (m, 20H), 5,12 (s, 2H), 5,10 (s, 2H), 5,05 (s, 2H), 5,00 (s, 2H), 4,30 (m, 1H), 4,18 (m, 1H), 4,00 (m, 2H), 3,10 (m, 2H), 2,25 (t, 2H), 2,15 (t, 2H), 1,05-2,10 (m, 20H), 0,85 (t, 3H).
EKSEMPEL 19
N-heptanoyl-y-D-glutamyl-L-meso-diaminopimelinsyre-Nd-L-ornitin
En oppløsning av 1,40 g (1,33 mmol) av produktet fra eksempel 18 og 400 mg 10 % palladium-på-kull i 150 ml 20 % vandig eddiksyre ble hydrogenert ved 3,16 kg/cm 2 hydrogentrykk i 45 minutter. Oppløsningen ble avgasset, filtrert og konsentrert, og den resulterende olje ble oppløst i 50 ml vann og surgjort til pH = 2,0 med konsentrert svovelsyre. Den resulterende opp-løsning ble avkjølt til 5°C og behandlet i én porsjon med 0,57 g (2,66 mmol) natrium-metaperjodat. Den resulterende brune oppløsning ble omrørt i 1,5 timer, behandlet med en mettet oppløsning av natriumbisulfitt inntil den var klar, og ble derefter påført på en kolonne av HP-21 harpiks. Kolonnen ble vasket med 7 50 ml vann og det ønskede produkt ble eluert med 400 ml 50 % vandig metanol. Fraksjonene inneholdende produktet ble konsentrert for å gi 0,52 g (71 %) av det ønskede produkt: smp. 230°C (dek.); IR (KBr) 3600-3100, 2950, 1640, 1590; NMR (Dg-DMSO) 6 4,30 (m, 2H), 3,95 (m, 2H), 3,15 (m, 2H), 2,30
(t, 2H), 2,22 (t, 2H), 1,2-2,20 (m, 20H), 0,95 (t, 3H).

Claims (10)

1. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse med formelen:
hvorR ° er alkyl med fra 1 til 6 karbonatomer, og x er et helt tall fra 1 til 4, karakterisert ved katalytisk hydrogenering over palladium-på-kull av en forbindelse med formelen
hvor Bz er benzyl; Z er benzyloksykarbonyl; og x er et helt tall fra 1 til 4; og eventuelt fremstilling av et farmasøytisk godtagbart salt av produktet.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at den katalytiske hydrogenering utføres i vandig eddiksyre som opplø sningsmiddel.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at R° er heksyl og x er 3 eller 4.
4. Anvendelse av en forbindelse med formel (I) som er angitt i krav 1, eller et farmasøytisk godtagbart salt derav som et immunostimulerende eller antibakterielt middel.
5. Ny forbindelse, karakterisert ved formelen
hvor R° er alkyl med fra 1 til 6 karbonatomer; og hver av 1 2 Y og Y er en karboksy-beskyttende gruppe.
6. Forbindelse ifølge krav 5, karakteri- 1 2 sert ved at Y er benzyl og Y er -O-succinimido.
7. Forbindelse ifølge krav 6, karakterisert ved at R° er n-heksyl.
8. Ny forbindelse, karakterisert ved formel III
o 14 hvor R er alkyl med fra 1 til 6 karbonatomer; hver av Y og Y er en karboksy-beskyttende gruppe; Y er en amino-beskyttende gruppe; og Y <3> er en karboksy-beskyttende gruppe eller
hvor x er et helt tall fra 1 til 4.
9. Forbindelse ifølge krav 8, karakteri- 13 4 sert ved at Y er benzyl; Y er -O-succinimido; Y er benzyloksykarbonylkarbazid; ogY<5> er benzyloksykarbonyl.
10. Forbindelse ifølge krav 9, karakterisert ved at R° er n-heksyl.
NO851278A 1984-03-30 1985-03-29 Fremgangsmaate for fremstilling av acyltripeptider og mellomprodukter for anvendelse ved fremgangsmaaten NO851278L (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/595,169 US4565653A (en) 1984-03-30 1984-03-30 Acyltripeptide immunostimulants

Publications (1)

Publication Number Publication Date
NO851278L true NO851278L (no) 1985-10-01

Family

ID=24382038

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO851278A NO851278L (no) 1984-03-30 1985-03-29 Fremgangsmaate for fremstilling av acyltripeptider og mellomprodukter for anvendelse ved fremgangsmaaten

Country Status (20)

Country Link
US (1) US4565653A (no)
EP (1) EP0157572A3 (no)
JP (1) JPS60224699A (no)
KR (1) KR870000372B1 (no)
AU (2) AU552919B2 (no)
CA (1) CA1270098A (no)
DD (1) DD239406A5 (no)
DK (1) DK142485A (no)
EG (1) EG17928A (no)
ES (1) ES8605821A1 (no)
FI (1) FI851271L (no)
GR (1) GR850783B (no)
HU (1) HU198086B (no)
IL (1) IL74758A (no)
NO (1) NO851278L (no)
NZ (1) NZ211634A (no)
PH (1) PH21303A (no)
PL (1) PL252659A1 (no)
PT (1) PT80181B (no)
ZA (1) ZA852335B (no)

Families Citing this family (59)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1295784C (en) * 1985-11-25 1992-02-11 James Patrick Rizzi Peptide immunostimulants
JPH0718039B2 (ja) * 1986-03-26 1995-03-01 株式会社豊田自動織機製作所 粉末付加亜鉛めっき鋼板の製造方法
WO1988001612A1 (en) * 1986-08-27 1988-03-10 Pfizer Inc. Processes and intermediates for n-(s-3-alkyl-heptanoyl)-d-gamma-glutamyl-glycyl-d-alanine
WO1988001613A1 (en) * 1986-08-27 1988-03-10 Pfizer Inc. Crystalline n-(s-3-methylheptanoyl)-d-gamma-glutamyl-glycyl-d-alanine, and processes and intermediates therefor
DE3700173A1 (de) * 1987-01-05 1988-07-14 Hoechst Ag Verfahren zur herstellung von lipophilen aminosaeurederivaten sowie lipophile aminosaeurederivate
DE3820528A1 (de) * 1988-06-16 1989-12-21 Bayer Ag Mittel zur insekten- und milbenabwehr
US5134225A (en) * 1989-02-21 1992-07-28 Pfizer Inc. Processes and intermediates for N-(S-3-alkyl-heptanoyl)-D-gamma-glutamyl-D-alanine
US5136020A (en) * 1989-02-21 1992-08-04 Pfizer Inc. Crystalline n-(s-3-methylheptanoyl)-D-gamma-glutamyl-glycyl-D-alanine, and processes and intermediates therefor
US5245079A (en) * 1989-02-21 1993-09-14 Pfizer Inc. Processes and intermediates for N-(S-3-alkyl-heptanoyl)-D-gamma-glutamyl-glycyl-D-alanine
US5248820A (en) * 1989-02-21 1993-09-28 Pfizer Inc. Crystalline N-(S-3-methylheptanoyl)-D-gamma-glutamyl-glycyl-D-alanine, and processes and intermediates therefor
US5185464A (en) * 1989-02-21 1993-02-09 Pfizer Inc. Crystalline N-(S-3-methylheptanoyl)-D-gamma-glutamyl-glycyl-D-alanine, and processes and intermediates therefor
DE69326321T2 (de) 1992-10-15 2000-01-13 Kanegafuchi Kagaku Kogyo K.K., Osaka Neues aminosäurederivat
US5798387A (en) * 1992-10-15 1998-08-25 Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai Amino acid derivatives
US5545553A (en) * 1994-09-26 1996-08-13 The Rockefeller University Glycosyltransferases for biosynthesis of oligosaccharides, and genes encoding them
US7173003B2 (en) * 2001-10-10 2007-02-06 Neose Technologies, Inc. Granulocyte colony stimulating factor: remodeling and glycoconjugation of G-CSF
US7157277B2 (en) * 2001-11-28 2007-01-02 Neose Technologies, Inc. Factor VIII remodeling and glycoconjugation of Factor VIII
US7214660B2 (en) 2001-10-10 2007-05-08 Neose Technologies, Inc. Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin
US7795210B2 (en) * 2001-10-10 2010-09-14 Novo Nordisk A/S Protein remodeling methods and proteins/peptides produced by the methods
US8008252B2 (en) * 2001-10-10 2011-08-30 Novo Nordisk A/S Factor VII: remodeling and glycoconjugation of Factor VII
US7399613B2 (en) * 2001-10-10 2008-07-15 Neose Technologies, Inc. Sialic acid nucleotide sugars
AU2004236174B2 (en) * 2001-10-10 2011-06-02 Novo Nordisk A/S Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods
US7696163B2 (en) 2001-10-10 2010-04-13 Novo Nordisk A/S Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin
MXPA04012496A (es) * 2002-06-21 2005-09-12 Novo Nordisk Healthcare Ag Glicoformos del factor vii pegilados.
US7803777B2 (en) * 2003-03-14 2010-09-28 Biogenerix Ag Branched water-soluble polymers and their conjugates
EP1613261A4 (en) * 2003-04-09 2011-01-26 Novo Nordisk As INTRA-CELLULAR FORMATION OF PEPTIDE CONJUGATES
US8791070B2 (en) 2003-04-09 2014-07-29 Novo Nordisk A/S Glycopegylated factor IX
CA2524936A1 (en) 2003-05-09 2004-12-02 Neose Technologies, Inc. Compositions and methods for the preparation of human growth hormone glycosylation mutants
US9005625B2 (en) 2003-07-25 2015-04-14 Novo Nordisk A/S Antibody toxin conjugates
US20080305992A1 (en) * 2003-11-24 2008-12-11 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated erythropoietin
US8633157B2 (en) * 2003-11-24 2014-01-21 Novo Nordisk A/S Glycopegylated erythropoietin
US7405198B2 (en) * 2003-11-24 2008-07-29 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated erythropoietin
KR101237884B1 (ko) * 2003-12-03 2013-02-27 바이오제너릭스 에이지 글리코 peg화 과립구 콜로니 자극인자
US7956032B2 (en) * 2003-12-03 2011-06-07 Novo Nordisk A/S Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor
US20080318850A1 (en) * 2003-12-03 2008-12-25 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated Factor Ix
US20060040856A1 (en) * 2003-12-03 2006-02-23 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated factor IX
ES2560657T3 (es) * 2004-01-08 2016-02-22 Ratiopharm Gmbh Glicosilación con unión en O de péptidos G-CSF
US20080300173A1 (en) 2004-07-13 2008-12-04 Defrees Shawn Branched Peg Remodeling and Glycosylation of Glucagon-Like Peptides-1 [Glp-1]
EP1799249A2 (en) * 2004-09-10 2007-06-27 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated interferon alpha
DK2586456T3 (en) 2004-10-29 2016-03-21 Ratiopharm Gmbh Conversion and glycopegylation of fibroblast growth factor (FGF)
WO2006074279A1 (en) * 2005-01-06 2006-07-13 Neose Technologies, Inc. Glycoconjugation using saccharyl fragments
EP1858543B1 (en) * 2005-01-10 2013-11-27 BioGeneriX AG Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor
US20060246544A1 (en) * 2005-03-30 2006-11-02 Neose Technologies,Inc. Manufacturing process for the production of peptides grown in insect cell lines
EP2386571B1 (en) * 2005-04-08 2016-06-01 ratiopharm GmbH Compositions and methods for the preparation of protease resistant human growth hormone glycosylation mutants
EP1888098A2 (en) * 2005-05-25 2008-02-20 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated erythropoietin formulations
US20080255026A1 (en) * 2005-05-25 2008-10-16 Glycopegylated Factor 1X Glycopegylated Factor Ix
CN102719508A (zh) * 2005-08-19 2012-10-10 诺和诺德公司 糖基聚乙二醇化的因子vii和因子viia
US20070105755A1 (en) * 2005-10-26 2007-05-10 Neose Technologies, Inc. One pot desialylation and glycopegylation of therapeutic peptides
US20090048440A1 (en) 2005-11-03 2009-02-19 Neose Technologies, Inc. Nucleotide Sugar Purification Using Membranes
EP2049144B8 (en) * 2006-07-21 2015-02-18 ratiopharm GmbH Glycosylation of peptides via o-linked glycosylation sequences
US20100075375A1 (en) * 2006-10-03 2010-03-25 Novo Nordisk A/S Methods for the purification of polypeptide conjugates
LT2068907T (lt) * 2006-10-04 2018-01-10 Novo Nordisk A/S Glicerolio sujungti pegilinti sacharidai ir glikopeptidai
WO2008073620A2 (en) * 2006-11-02 2008-06-19 Neose Technologies, Inc. Manufacturing process for the production of polypeptides expressed in insect cell-lines
CN101796063B (zh) * 2007-04-03 2017-03-22 拉蒂奥法姆有限责任公司 使用糖聚乙二醇化g‑csf的治疗方法
US20090053167A1 (en) * 2007-05-14 2009-02-26 Neose Technologies, Inc. C-, S- and N-glycosylation of peptides
EP2162535A4 (en) * 2007-06-04 2011-02-23 Novo Nordisk As O-linked glycosylation using N-acetylglucosamine transferases
ES2551123T3 (es) * 2007-06-12 2015-11-16 Ratiopharm Gmbh Proceso mejorado para la producción de azúcares de nucleótido
US8207112B2 (en) * 2007-08-29 2012-06-26 Biogenerix Ag Liquid formulation of G-CSF conjugate
CA2711503A1 (en) * 2008-01-08 2009-07-16 Biogenerix Ag Glycoconjugation of polypeptides using oligosaccharyltransferases
MX2010009154A (es) 2008-02-27 2010-09-09 Novo Nordisk As Moleculas conjugadas del factor viii.

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4322341A (en) * 1980-05-13 1982-03-30 Fujisawa Pharmaceutical Co Peptide, process for preparation thereof and use thereof
DK156252C (da) * 1979-07-31 1989-12-18 Fujisawa Pharmaceutical Co Analogifremgangsmaade til fremstilling af di-, tri- eller tetrapeptidderivater eller salte deraf
EP0027260B1 (en) * 1979-10-11 1985-03-13 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Peptides, processes for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
GR81332B (no) * 1980-12-01 1984-12-11 Fujisawa Pharmaceutical Co
US4493794A (en) * 1980-12-31 1985-01-15 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Peptide, process for preparation thereof and use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
EP0157572A2 (en) 1985-10-09
HUT37443A (en) 1985-12-28
HU198086B (en) 1989-07-28
FI851271L (fi) 1985-10-01
ZA852335B (en) 1986-11-26
DK142485D0 (da) 1985-03-29
NZ211634A (en) 1988-10-28
ES8605821A1 (es) 1986-04-01
PT80181B (en) 1987-03-20
EG17928A (en) 1991-08-30
KR870000372B1 (ko) 1987-03-06
PH21303A (en) 1987-09-28
ES541620A0 (es) 1986-04-01
JPS60224699A (ja) 1985-11-09
AU4052385A (en) 1985-10-03
IL74758A0 (en) 1985-06-30
GR850783B (no) 1985-11-25
EP0157572A3 (en) 1987-01-07
FI851271A0 (fi) 1985-03-29
US4565653A (en) 1986-01-21
PL252659A1 (en) 1985-11-19
AU5647686A (en) 1986-09-04
PT80181A (en) 1985-04-01
IL74758A (en) 1988-06-30
DD239406A5 (de) 1986-09-24
AU566460B2 (en) 1987-10-22
AU552919B2 (en) 1986-06-26
DK142485A (da) 1985-10-01
CA1270098A (en) 1990-06-05
KR850006939A (ko) 1985-10-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO851278L (no) Fremgangsmaate for fremstilling av acyltripeptider og mellomprodukter for anvendelse ved fremgangsmaaten
KR850000303B1 (ko) 옥타히드로-1h-인돌-2-카복실산 치환 아실유도체의 제법
CA1322076C (en) Phosphorus containing peptides
EP0236872A2 (de) Hydroxylaminderivate, deren Herstellung und Verwendung für Heilmittel
EP0253190B1 (en) Partially retro-inverted tuftsin analogues, method for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them
NZ270828A (en) Lipopeptide a1437 derivative and pharmaceutical compositions thereof
US5128346A (en) Derivatives of D-glutamic acid and D-aspartic acid
US4322436A (en) Novel substituted phenylacetic acid amide compounds
US4619915A (en) Peptide-substituted heterocyclic immunostimulants
US4420490A (en) Substituted phenylacetic acid amide compounds
US4250192A (en) Novel substituted phenylacetic acid amide compounds
JPH0647599B2 (ja) ヘプタノイル―Glu―Asp―Ala―アミノ酸系免疫賦活薬
PT100148B (pt) Processo para a preparacao de novos derivados dipeptidicos, contendo um anel piridinas
EP0001174B1 (en) A peptide and the salts thereof, processes for their preparation and compositions containing them
US2723973A (en) Homocysteinyl-glycinylheterotripeptides
US4767743A (en) Peptide immunostimulants
EP0227306B1 (en) Peptide immunostimulants
KR900004648B1 (ko) 펩타이드 유도체의 제조방법
EP0050856B1 (en) New peptide, process for its preparation and pharmaceutical composition containing it
EP0001335B1 (en) A peptide, processes for its preparation and compositions containing the same
JPH082916B2 (ja) ペプチド誘導体類及びそれらの製造方法