NO811973L - Ikke-glycosylert interferon. - Google Patents
Ikke-glycosylert interferon.Info
- Publication number
- NO811973L NO811973L NO811973A NO811973A NO811973L NO 811973 L NO811973 L NO 811973L NO 811973 A NO811973 A NO 811973A NO 811973 A NO811973 A NO 811973A NO 811973 L NO811973 L NO 811973L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- interferon
- gene
- activator
- glycosylated human
- plg
- Prior art date
Links
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 title claims abstract description 45
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 title claims abstract description 36
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 title claims description 32
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 20
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 claims description 7
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 claims description 6
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 6
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 claims description 4
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 claims description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 claims description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 claims description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 claims description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims 2
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 abstract description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 27
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 20
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 4
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 3
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 2
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 2
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 2
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 2
- 108010052418 (N-(2-((4-((2-((4-(9-acridinylamino)phenyl)amino)-2-oxoethyl)amino)-4-oxobutyl)amino)-1-(1H-imidazol-4-ylmethyl)-1-oxoethyl)-6-(((-2-aminoethyl)amino)methyl)-2-pyridinecarboxamidato) iron(1+) Proteins 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 101150111781 PGL1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N teicoplanin aglycone Chemical compound N([C@H](C(N[C@@H](C1=CC(O)=CC(O)=C1C=1C(O)=CC=C2C=1)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)OC=1C=C3C=C(C=1O)OC1=CC=C(C=C1Cl)C[C@H](C(=O)N1)NC([C@H](N)C=4C=C(O5)C(O)=CC=4)=O)C(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3NC(=O)[C@@H]1C1=CC5=CC(O)=C1 DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/64—General methods for preparing the vector, for introducing it into the cell or for selecting the vector-containing host
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/56—IFN-alpha
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/565—IFN-beta
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
- C12N15/72—Expression systems using regulatory sequences derived from the lac-operon
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/61—Fusion polypeptide containing an enzyme fusion for detection (lacZ, luciferase)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor
- C07K2319/75—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor containing a fusion for activation of a cell surface receptor, e.g. thrombopoeitin, NPY and other peptide hormones
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Polyesters Or Polycarbonates (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse gjelder antivirus-midler,
spesielt interferon, og gener som koder for slike midler.
Menneske-interferon er kjent for å være et kraftig antivirus middel og har utvilsomt andre terapeutiske anvendelser også. Den eneste form for interferon som for tiden ér til-gjengelig det naturlig forekommende glycosylerte interferon fremstilt fra ekstrakter av menneskecelle-kulturer, er det svært•lite av og det er dyrt, og anvendelsen av det har derfor vært meget begrenset..
Det er oppdaget at former av menneske-interferon kan fremstilles, og at på tross av det faktum at de, til forskjell fra naturlig forekommende interferon (IF), ikke er glycosylert men i steden forekommer i form av aglyconer, ikke desto mindre kan oppvise antivirus-aktivitet og kan anvendes terapeutisk. Det ble funnet at ekstrakter fra E. coli som inneholdt en av de ikke-glycosylerte interferoner ifølge oppfinnelsen, ikke-glycosylerte menneskefibroblast-interferon, effektivt inhi-berte den cytopatiske effekt på dyrkede menneskefibroblast-celler (FS7) som normalt ble fremstilt av vesiculøst stomatit-virus.
De ikke-glycosylerte IFer eller aglyconer ifølge oppfinnelsen kan administreres til pasienter alene eller fordeles eller oppløses i en hvilken som helst farmasøytisk gbdtagbar, ikke-toksisk bærer som var egnet for den ønskede administrasjonsmåten, som kan være oral eller parenteral, dvs. ved injeksjon som er intravenøs, intramuskulær, intraperitoneal, eller en annen konvensjonell måte. Mengden av aglycon som er effektivt varierer innenfor et vidt område, avhengig av administrasjonsmåten og det ønskede resultat, og kan lett bestemmes i et gitt tilfelle ved hjelp av enkle sorterings-fremgangsmåter.
I tegningene viser figurene 1-4 diagrammatiske tegninger av sammensmeltede gener som brukes i forskjellige trinn av en metode for fremstilling av et av interferonene ifølge oppfinnelsen, ikke-glycosylert menneskefibroblast-interferon.
De sammensmeltede genene i figurene 3 og 4 som er i stand til å kode for dette interferon, utgjør også en del av oppfinnelsen.
Figurene 5-9 viser diagrammatiske tegninger av sammensmeltede gener som anvendes for å fremstille et annet interferon ifølge oppfinnelsen, ikke-glycosylert menneskeleucosyt- interferon. Det sammensmeltede gen i figur 9 som er istand til å kode for dette interferon, er også en del av foreliggende oppfinnelse.
Følgende spesielle eksempler skal mere fullstendig illustrere foreliggende oppfinnelses natur" uten å opptre som en begrensning på dets område. Begge beskriver ikke-glycosylerte interferoner som kan fremstilles ifølge en metode som er beskrevet i den sam-tidige US-søknad'med' tittelen "Optimal polypeptid produksjon", innlevert 17. mars 1980 med serie nr. 131 152. Den nevnte søk-nad, som herved innføres som referanse, beskriver en metode for å tilveiebringe et sammensmeltet gen med en aktivator beliggende på en optimal avstand fra omdannelses-startstedet. Metoden omfatter i ett aspekt, idet .den tilveiebringer et sammensmeltet gen med et område av et gen som koder for et ønsket polypeptid som er smeltet til et område av et gen som koder for et påvisbart polypeptid, å innføre en bærbar aktivator i varierende avstander foran omdannelses-startstedet, omdanne mikroorganismer med de sammensmeltede genene, velge de som gir den. største mengde: av påvisbart polypeptid, og rekonstituere genet for det ønskede polypeptid.
Eksempler 1 og 2
Det ble brukt to variasjoner av den ovenfor beskrevne metode for å uttrykke, i E. coli stamme.K-12, det menneskefibroblast-interf eron genet som isoleres og beskrives i Taniguchi et al.
(1979) Proe. Jap. Acad. Sei. 55, 464-469 and Taniguchi et al.
(1980) Gene 10, 11-15. Begge variasjoner anvendte £^galaktosidase som det påvisbare polypeptid. Ifølge en variasjon ble syntese av ikke-glycosylert IF påbegynt ved omdannelses-startstedet (ATG) ved begynnelsen av den modne IF-molekylen. Ifølge den andre variasjonen ble .syntesen startet ved at ATG ved begynnelsen av leder-sekvensen, som var tjueen aminosyrer lang, av pre-interferon. Denne andre variasjon fremstilte det samme modne, aktive, ikke-glycosylerte IF som den første fordi E. coli tydeligvis avspaltes fra ledér-sekvensen etter syntesen.
Flere av trinnene i de to variasjonene var identiske, og
de to skal derfor beskrives sammen, og forskjellene påpekes hvor det er nødvendig.
Det første trinnet var å konstruere det nye plasmidet,
pLG 1, som er vist i figur 1, ved å binde sammen følgende
fire DNA fragmenter:
1. ~55 0 base-par Hind II - Bglll fragment fra
TpIF 319-13 (Taniguchi, supra).
2.~5 000 base-paret"Bam-Pst fragment fra pLG
300 (Guarente et al. Serial No. 131 152, supra).
3. M550 base-paret Pst-PvuII bærbar aktivator fragment fra pGLl.Ol; dette fragment har et ora-dannelses-startsted og en Shine-Dalgarno sekvens,
AGGA.
4. 10 base-paret Hind III forbindelses-fragment.
E. coli ble omdannet med bindeblandingen og utvalgt for • vekst på ampicillin. Et plasmid med strukturen til pLG 1 ble isolert fra en omdannet klon. Deretter ble en 10 base-par Bam-forbinder innført ved Rl-stillingen i pLG 1 ved å avdele ved RI, utfylling av de sammenbindende ender med deoksynukleotider ved bruk av DNA-polymerase (Backman et al.
(1976) Proe. Nat. Acad. Sei., USA 73, 4174-4178) og gjen-forbinde i nærvær av Bam-forbindere. Dette ga plasmid pLG 45. E. coli ble atter omdannet og utvalgt for vekst på ampi-cillen, og plasmid pLG 56 vist i figur 2, ble så konstruert ved å binde sammen følgende DNA-fragmenter: 1. ^1050 base-paret . Pst-Pst-fragment fra de valgte pLG. 45-plasmider med lac-aktivatoren og 51-enden av IF-genet. 2. 75 base-paret Pst-HinF-fragment med en inter-
stitiell del av IF-genet fra TpIF 319-13 og med en utfylt HinF-ende. 3. ^v5Kb Bam-Pst-fragmentet fra pLG 300 med deri store delen av lacZ-genet og med en utfylt Bam-ende.
E. coli ble igjen omdannet og utvalgt for vekst påampi-cillen.
To plasmider, pLG 104 og pLG 117, ble så oppnådd fra
de utvalgte pLG 56-plasmider. Plasmid pLG 104 hadde lac-aktivatoren nær ATG ved begynnelsen av pre-interferon leder-sekvensen, og pLG 117 hadde lac-aktivatoren nær ATG ved begynnelsen av modent IF. Plasmidene dirigerte syntesen av hybrid-proteiner med, respektive, et amino-avsluttet .pre-. IF-fragment sammensmeltet med et karboksy-avsluttet 3-galaktosidase-fragment, og et amino-avsluttet modent IF-
fragment sammensmeltet med et karboksy-avsluttet 3~galaktosidase-fragment.
De to plasmider ble oppnådd som følger. Først ble pLG 56 avdelt foran ATG i pre-IF-genområdet (pLG 104) og tilsattBal 31 eksonuklease. Plasmidene blé så avdelt med Bam for å fjerne det forkortede aktivator-fragmentet og gjenforbundet i nærvær av et overskudd av Bam-PvuII aktivator-bærende fragment fra pGL 101 B.
E. coli ble omdannet med plasmidene og utvalgt for vekst
på ampicillin og for fremstilling av en markert farveforandring på indikator-agar som forandrer farve i en grad som er proporsjonal med 3-galaktosidase-mengden. De kloner som har aktivatoren optimalt plassert var de som ga de største mengder av 3-galaktosidase. En høy-produksjons klon hadde et plasmid med lac-aktivatoren plassert slik. at det var syv base-par mellom Shine-Dalgarno-sekvensen og ATG i pre-interferon leder-sekvensen (pLG 104) og et annet hadde et plasmid med lac-aktivatoren plassert.slik at det var syv base-par mellom Shine-Dalgarno-sekvensen og ATG i det modne IF-genet (pLG 117). Generelt oppnås optimal utpresning når det er ca. to til fjorten base-par mellom Shine Dalgerno-sekvensen.og ATG.
For å konstruere plasmid 104 R, ble 3700 base-paret Pst-Pst-område fra TpIF 319 som har 3'-enden av IF-genet forbundet til ^1050 base-paret Pst-Pst's-område av pLG 104 som har lac-aktivatoren nær ATG ved begynnelsen av pre-IF. Plasmid 117 R ble konstruert ved å.forbinde det samme 3700 base-parets region av TpIF til^990 base-paret Pst-Pst's område av pLG 117 som har lac-aktivatoren nær ATG ved begynnelsen av modent IF.
Plasmid 104 R omfattet således et smeltet gen som inkluderer lac-aktivatoren (en hvilket som helst bærbar aktivator med en Shine-Dalgarno-sekvens ville være tilstrekkelig), syv base-par, et omdannelses-startsted, og det rekonstituerte gen som koder for ikke-glycosylert human fibroblast pre-interferon. Plasmid 117 R hadde samme struktur bortsett fra at det inkluderte det rekonstituerte genet for modent interferon istedenfor det for pre-interf eron..
Begge plasmider, 104 R : ATCC 31902, og 117 R : ATCC 31903, produserte aktivt, ikke-glycosylert menneske-fibroblast-interf eron-med samme aminosyre-rekkefølge som naturlig forekommende, glycosylert menneske-fibroblast-interferon:
Grunnmetoden i eksempel 1 kan anvendes for å utvikle i E. coli stamme K-12, det menneske-leucosyt pre-interferon-gen som er isolert og beskrevet i Mantei et al. (198/) Gene 10, 1-10.
(Bakterier omdannes ved passende tider som beskrevet i eksempel 1, og velges for vekst på ampicillin; disse trinn unnlates i den følgende beskrivelse.)
Det første trinnet er å bruke utfyllende DNA-kloning, som omfatter G-C-avslutning, å innføre human-leucosyt pre-IF-genet, som er diagrammatisk illustrert i figur 5, i et passende plasmid som for eksempel pBR 322. Deretter fjernes den amino-avsluttede del av pre'-IF-genet ved å dele med HinF 1, og endene inrifylles ved bruk av DNA-polymerase (Backman et al. supra). Deretter festet Hind III forbindere. En del av dette område avdeles så ved bruk av Hind III og MbOl..Denne del
klones så i eh pBR 322 ryggrad for å gi det plasmid.som er
vist i figur 6. Dette plasmid deles så' med MbOl og RI og endene av det resulterende DNA-fragment utfylles med DNA-polymerase (Backman et al., supra). Fragmentet klones så inn i pLG 300 (Guarente et al. Seriai No. 131 152, supra) som er delt med Barn og hadde endene utfylt for å gi det plasmidet som er vist i figur 7, med lacZ-gen-området i stand til å.
kode for et.påvistbart fragment av 3-galaktosidase.
Plasmidet i figur 7 åpnes så med Hin 3 og endene, fordeles med eksonuklease for å tilveiebringe et sted nær ATG i pre-IF-genet som det bærbare aktivator-fragmentet fra pGL 101, Pst-PvuII, kan innføres i. Etter denne innføring velges bakterier som i eksempel 1 for maksimal (3-galaktosidase-produksjon. Plasmidet av en høy-produserende klon, vist diagrammatisk
i figur 8, har to til fjorten basepar mellom Shine-Dalgarno-sekvensen og ATG. Fra et slikt plasmid rekonstitueres genet for menneske-leucosyt pre-interferon ved å dele med PvuII og binde karboksy-avsluttede ende av pre-IF-genet med den av-kuttede enden av den aminoavsluttede enden. Det resulterende plasmidet, vist diagrammatisk i figur 9, omfatter således lac-aktivatoren, to til fjorten base-par, et omdannelses-startsted, og det rekonstituerte genet som koder for ikke-glycosylert menneske-leucosyt pre-interferon. Dette pre-interf eron kan så behandles med bakterier på samme måte som menneske-fibroblast pre-interferon, for å gi ikke-glycosylert menneske-leucosyt interferon med den samme aminosyre-rekke-følge som naturlig forekommende, glycosylert menneske-leucosyt interferon:
Claims (7)
1. Ikke-glycosylert menneske-fibroblast-interferon.
2. Interferonet ifølge krav 1,karakterisertved at det har i hovedsak følgende aminosyre-rekkefølge:
3. Terapeutisk preparat bestående i hovedsak av en farma-søytisk godtagbar, ikke-toksisk bærer og en effektiv mengde av et protein som krevet i krav 1.
4. Et sammensmeltet gen bestående av en bærbar, aktivator, to til fjorten base-par, et omdannelses-startsted, og et gen som koder for modent, ikke-glycosylert menneske-fibroblast-interf eron .
5. Et sammensmeltet gen omfattende en bærbar aktivator, to til fjorten base-par, et omdannelses-startsted, og. et gen som koder for ikke-glycosylert menneske-fibroblast pre-interf eron.
6. Ikke-glycosylert menneske-leucosyt-interferon.
7. Interferonet ifølge krav 6,karakterisertv e d at det har i hovedsak følgende aminosyre-rekkefølge: 8.- Et sammensmeltet gen,karakterisert vedat det omfatter en bærbar aktivator, to til fjorten base-par, et omdannelses-startsted, og et gen som koder for ikke-glycosylert menneske-leucosyt pre-interferon.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US15872180A | 1980-06-12 | 1980-06-12 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO811973L true NO811973L (no) | 1981-12-14 |
Family
ID=22569403
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO811973A NO811973L (no) | 1980-06-12 | 1981-06-11 | Ikke-glycosylert interferon. |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0042246B1 (no) |
| JP (1) | JPS5777654A (no) |
| KR (1) | KR830006421A (no) |
| AT (1) | ATE25985T1 (no) |
| AU (1) | AU544218B2 (no) |
| DE (1) | DE3176011D1 (no) |
| DK (1) | DK254681A (no) |
| ES (2) | ES8300476A1 (no) |
| IL (1) | IL63063A0 (no) |
| NO (1) | NO811973L (no) |
Families Citing this family (33)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK33181A (da) * | 1980-02-06 | 1981-08-07 | Searle & Co | Fremgangsmaade til fremstilling af et interferonlignende protein |
| ES8302096A1 (es) | 1980-04-03 | 1982-12-16 | Biogen Nv | Un metodo de producir un polipeptido que muestra una actividad immunologica obiologica de interferon de fibroblasto hu- mano. |
| CH651308A5 (de) * | 1980-07-01 | 1985-09-13 | Hoffmann La Roche | Interferone und deren herstellung. |
| NZ198445A (en) * | 1980-09-25 | 1984-05-31 | Genentech Inc | Production of human fibroblast interferon by recombinant dna technology |
| ZA816621B (en) * | 1980-09-25 | 1982-09-29 | Genentech Inc | Microbial production of human fibroblast interferon |
| IL63327A (en) * | 1981-07-16 | 1985-11-29 | Yeda Res & Dev | Production of interferon beta1 and alpha-phage recombinants for its production in host bacteria |
| IL66263A (en) * | 1981-08-10 | 1985-12-31 | Genex Corp | Expression vectors for introducing a gene into a procaryotic organism |
| GB2108510B (en) * | 1981-10-03 | 1984-12-12 | Ciba Geigy Ag | Dnas, recombinant dnas, hosts containing them, polypeptides and processes for the production thereof |
| US4973479A (en) * | 1982-01-15 | 1990-11-27 | Cetus Corporation | Interferon-α61 |
| US4975276A (en) * | 1982-01-15 | 1990-12-04 | Cetus Corporation | Interferon-alpha 54 |
| WO1983002460A1 (en) * | 1982-01-15 | 1983-07-21 | Cetus Corp | Interferon-alpha 74 |
| US5098703A (en) * | 1982-01-15 | 1992-03-24 | Cetus Corporation | Interferon-alpha 76 |
| US5827694A (en) * | 1982-03-08 | 1998-10-27 | Genentech, Inc. | DNA encoding non-human animal interferons, vectors and hosts therefor, and recombinant production of IFN polypeptides |
| IE54592B1 (en) * | 1982-03-08 | 1989-12-06 | Genentech Inc | Anumal interferons, processes involved in their production, compositions containing them, dna sequences coding therefor and espression vehicles containing such sequences and cells transformed thereby |
| US6432677B1 (en) | 1982-03-08 | 2002-08-13 | Genentech, Inc. | Non-human animal interferons |
| US5643566A (en) * | 1982-09-23 | 1997-07-01 | Cetus Corporation | Formulation processes for lipophilic proteins |
| US4992271A (en) * | 1982-09-23 | 1991-02-12 | Cetus Corporation | Formulation for lipophilic IL-2 proteins |
| US5702699A (en) * | 1982-09-23 | 1997-12-30 | Cetus Corporation | Process for the recovery of lipophilic proteins |
| US4737462A (en) * | 1982-10-19 | 1988-04-12 | Cetus Corporation | Structural genes, plasmids and transformed cells for producing cysteine depleted muteins of interferon-β |
| US4588585A (en) * | 1982-10-19 | 1986-05-13 | Cetus Corporation | Human recombinant cysteine depleted interferon-β muteins |
| US5831023A (en) * | 1982-11-01 | 1998-11-03 | Genentech, Inc. | Recombinant animal interferon polypeptides |
| DE3247922A1 (de) * | 1982-12-24 | 1984-06-28 | Boehringer Ingelheim International GmbH, 6507 Ingelheim | Dna-sequenzen, deren herstellung, diese sequenzen enthaltende plasmide und deren verwendung zur synthese eukaryotischer genprodukte in prokaryoten |
| JPS59172496A (ja) * | 1983-03-18 | 1984-09-29 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | モノクロ−ナル抗体 |
| US4518584A (en) * | 1983-04-15 | 1985-05-21 | Cetus Corporation | Human recombinant interleukin-2 muteins |
| NZ208309A (en) * | 1983-06-01 | 1988-04-29 | Hoffmann La Roche | Recombinant leukocyte, fibroblast, or immune interferons (rifn-#a#, b or #g#) with one cys residue replaced |
| GB8412564D0 (en) * | 1984-05-17 | 1984-06-20 | Searle & Co | Structure and properties |
| SU1364343A1 (ru) * | 1984-07-13 | 1988-01-07 | Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Способ получени человеческого лейкоцитарного интерферона альфа-2 |
| FI90990C (fi) * | 1984-12-18 | 1994-04-25 | Boehringer Ingelheim Int | Rekombinantti-DNA-molekyyli, transformoitu isäntäorganismi ja menetelmä interferonin valmistamiseksi |
| US5258298A (en) * | 1986-01-31 | 1993-11-02 | Genetics Institute, Inc. | Deletion and glycosylation mutant of human tissue plasminogen activator |
| WO1987004722A1 (en) * | 1986-01-31 | 1987-08-13 | Genetics Institute, Inc. | Novel thrombolytic proteins |
| US5837518A (en) * | 1986-01-31 | 1998-11-17 | Genetics Institute, Inc. | Thrombolytic proteins |
| FR2598430B1 (fr) * | 1986-05-06 | 1990-02-02 | Roussel Uclaf | Nouveaux vecteurs d'expression, leur procede d'obtention et leur application pour exprimer une proteine quelconque dans escherichia coli |
| US4839283A (en) * | 1986-12-30 | 1989-06-13 | Zymogenetics, Inc. | Method of expressing alpha-1-antitrypsin in yeast |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL58765A (en) * | 1979-11-21 | 1986-09-30 | Yeda Res & Dev | Process for the production of essentially pure messenger rna of human fibroblast interferon and process for the production of interferon beta |
| US4530901A (en) * | 1980-01-08 | 1985-07-23 | Biogen N.V. | Recombinant DNA molecules and their use in producing human interferon-like polypeptides |
| IE54096B1 (en) * | 1980-01-08 | 1989-06-21 | Biogen Nv | Dn sequences, recombinant dna molecules and processes for producing human interferon - like polypeptides |
| GB2068970B (en) * | 1980-02-06 | 1983-06-22 | Searle & Co | Recombinant dna technique for the preparation of a protein resembling human interferon |
| DE3005897A1 (de) * | 1980-02-16 | 1981-09-03 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Genprodukt eines hoeheren organismus aus einem dieses gen enhtaltenden mikroorganismus |
| DE3005843A1 (de) * | 1980-02-16 | 1981-09-10 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Genprodukt eines hoeheren organismus aus einem dieses gen enthaltenden mikroorganismus |
| ES8302096A1 (es) * | 1980-04-03 | 1982-12-16 | Biogen Nv | Un metodo de producir un polipeptido que muestra una actividad immunologica obiologica de interferon de fibroblasto hu- mano. |
| CH651308A5 (de) * | 1980-07-01 | 1985-09-13 | Hoffmann La Roche | Interferone und deren herstellung. |
| NZ198445A (en) * | 1980-09-25 | 1984-05-31 | Genentech Inc | Production of human fibroblast interferon by recombinant dna technology |
-
1981
- 1981-06-09 AT AT81302548T patent/ATE25985T1/de not_active IP Right Cessation
- 1981-06-09 EP EP81302548A patent/EP0042246B1/en not_active Expired
- 1981-06-09 DE DE8181302548T patent/DE3176011D1/de not_active Expired
- 1981-06-10 IL IL63063A patent/IL63063A0/xx unknown
- 1981-06-11 NO NO811973A patent/NO811973L/no unknown
- 1981-06-11 ES ES502970A patent/ES8300476A1/es not_active Expired
- 1981-06-11 DK DK254681A patent/DK254681A/da not_active Application Discontinuation
- 1981-06-12 KR KR1019810002120A patent/KR830006421A/ko unknown
- 1981-06-12 JP JP56089725A patent/JPS5777654A/ja active Pending
- 1981-06-12 AU AU71694/81A patent/AU544218B2/en not_active Withdrawn - After Issue
-
1982
- 1982-05-28 ES ES512619A patent/ES512619A0/es active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK254681A (da) | 1981-12-13 |
| ES8303919A1 (es) | 1983-02-16 |
| ES502970A0 (es) | 1982-11-01 |
| EP0042246B1 (en) | 1987-03-18 |
| KR830006421A (ko) | 1983-09-24 |
| EP0042246A3 (en) | 1982-10-13 |
| ES8300476A1 (es) | 1982-11-01 |
| DE3176011D1 (en) | 1987-04-23 |
| IL63063A0 (en) | 1981-09-13 |
| ES512619A0 (es) | 1983-02-16 |
| AU544218B2 (en) | 1985-05-23 |
| AU7169481A (en) | 1981-12-17 |
| EP0042246A2 (en) | 1981-12-23 |
| ATE25985T1 (de) | 1987-04-15 |
| JPS5777654A (en) | 1982-05-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO811973L (no) | Ikke-glycosylert interferon. | |
| AU601675B2 (en) | Purification, production and use of tumor necrosis factors | |
| EP0077670B1 (en) | Human immune interferon | |
| Gray et al. | Expression of human immune interferon cDNA in E. coli and monkey cells | |
| EP0319049B1 (en) | Growth hormone analogs, pharmaceutical and veterinary compositions containing said analogs and methods for production thereof | |
| US5460811A (en) | Mature human fibroblast interferon | |
| EP0275300B1 (en) | Recombinant vaccine | |
| ES2118756T5 (es) | Estimuladores de hematopoyesis de multiples dominios. | |
| DK173279B1 (da) | Rekombinant IL-6, fremgangsmåde til dets fremstilling og vektor til brug ved denne fremstilling samt dets anvendelse | |
| US4892743A (en) | Novel hybrid interferon species | |
| JP2852515B2 (ja) | ベクターウイルスおよびベクターウイルスを含む薬用組成物 | |
| US5582824A (en) | Recombinant DES-CYS-TYR-CYS human immune interferon | |
| EP0238655A1 (en) | Human granulocyte-macrophage colony stimulating factor-like polypeptides and processes for producing them in high yields in microbial cells | |
| WO1989006695A1 (en) | Cleaved dimers of mullerian inhibiting substance-like polypeptides | |
| WO1999040198A3 (en) | Identification, production and use of staphylokinase derivatives with reduced immunogenicity and/or reduced clearance | |
| US5637495A (en) | Plasmids for production of human growth hormone or polypeptide analog thereof, hosts containing the plasmids, products manufactured thereby, and related methods | |
| US5827694A (en) | DNA encoding non-human animal interferons, vectors and hosts therefor, and recombinant production of IFN polypeptides | |
| EP0146903A2 (en) | Production of a vector encoding a novel hybrid interferon species | |
| US5198361A (en) | Plasmids for production of met-asp-gln bovine growth hormone, hosts containing the plasmids, products manufactured thereby and related methods | |
| JPS6314698A (ja) | 原生動物寄生虫に対するワクチン | |
| EP0318765A1 (en) | A modified gamma interferon dna sequences encoding it and process for producing it | |
| JPS61501430A (ja) | 修飾ガンマ・インタ−フェロン、そのｉｆｎをコ−ドするｄｎａ配列およびそのｉｆｎの生産方法 | |
| JPH08188597A (ja) | 変異型ヒト腫瘍壊死因子 | |
| PH26492A (en) | Recombinant human immune interferon |