NO801443L - Fremgangsmaate til fremstilling av influensavaskine i flytende celle-kultur - Google Patents
Fremgangsmaate til fremstilling av influensavaskine i flytende celle-kulturInfo
- Publication number
- NO801443L NO801443L NO801443A NO801443A NO801443L NO 801443 L NO801443 L NO 801443L NO 801443 A NO801443 A NO 801443A NO 801443 A NO801443 A NO 801443A NO 801443 L NO801443 L NO 801443L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- virus
- cell culture
- influenza
- cells
- trypsin
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 59
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 title claims description 37
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 33
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims description 28
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 102
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 66
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 56
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 41
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 35
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 35
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 34
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 claims description 28
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 28
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 claims description 26
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 22
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 20
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 17
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 17
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 14
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 12
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 12
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 11
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 10
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 claims description 8
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 7
- 239000002356 single layer Substances 0.000 claims description 6
- 241000282465 Canis Species 0.000 claims description 5
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 claims description 5
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims description 5
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 claims description 4
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 claims description 4
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 claims description 4
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims description 4
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 claims description 4
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 claims description 4
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 claims description 4
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims description 4
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims description 4
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 claims description 4
- 244000144977 poultry Species 0.000 claims description 4
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 claims description 3
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 claims description 3
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 claims description 3
- -1 alum Chemical compound 0.000 claims description 3
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 claims description 3
- 229940037003 alum Drugs 0.000 claims description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 229940124873 Influenza virus vaccine Drugs 0.000 claims 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 claims 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 claims 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 10
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 10
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 9
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 6
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 5
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 5
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 5
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 5
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 5
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 3
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N framycetin Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O2)N)O[C@@H]1CO PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N 0.000 description 3
- 239000012499 inoculation medium Substances 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 229940049018 mycostatin Drugs 0.000 description 3
- 229940053050 neomycin sulfate Drugs 0.000 description 3
- VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N nystatin A1 Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/CC/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical class OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 108010093965 Polymyxin B Proteins 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000012832 cell culture technique Methods 0.000 description 2
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 2
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229920000024 polymyxin B Polymers 0.000 description 2
- 229960005266 polymyxin b Drugs 0.000 description 2
- 238000012808 pre-inoculation Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N Acrylic acid Chemical compound OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000000655 Distemper Diseases 0.000 description 1
- 239000012594 Earle’s Balanced Salt Solution Substances 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 1
- 241001676573 Minium Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108010040201 Polymyxins Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 206010051497 Rhinotracheitis Diseases 0.000 description 1
- 241000606651 Rickettsiales Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000019365 chlortetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000001524 infective effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000011177 media preparation Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012090 tissue culture technique Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/543—Mucosal route intranasal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
- C12N2760/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
Denne oppfinnelse vedrorer generelt et nytt influensavirus-formeringsmedium og spesielt anvendelse av dett mediet for influensavaksineproduksjon.
Influensavaksiner er blitt anvendt fra begynnel-
sen av 1940-årene.fori human vaksinasjon og siden slutten av 1960-årene for hestvaksinasjon. Samtlige influensavaksiner som nå anvendes fremstilles ved dyrking av vak-sinevirusstammer i embryonerte honseegg.. De erholdte virusstammer.blir deretter anvendt for fremstilling av levende virusvaksiner; eller videre bearbeidet for fremstilling av dod virusvaksine.
Det er generelt kjent av virologister at influensaviruser vokser i én meget begrenset utstrekning i cellekulturer. Veksten betegnet som'ett-trinns vekst syklus"; dvs. bare de opprinnelig infiserte celler frem-bringer viruser. Dette fenomen beskrives, f.eks., av Davis et al, Microbiology, Harper and Row Publishers,
kapittel 44, side 1138 - 39 (1968). Da viruser. fra de opprinnelig infiserte; celler ikke er egnet for å infisere suksessive antall av celler i den samme cellekulturen,
blir det oppnådde utbytte for lavt for å være egnet for. produksjon av virusvaksiner. Således har væskecellekul-
turer ikke blitt anvendt for kommersiell produksjon av influensavirusvaksiner.
Embryonerte:honseegg blir anvendt for å produsere viruser med titer tilstrekkelig hoy for anvendelse ved produksjon av vaksiner. !Beklageligvis, honseembryd-dyrkede viruser krever generelt konsentrasjon, og, ved humanvak-siner, krever også en'form av rensning for å redusere toksiske reaksjoner forårsaket av ubnskéde eggproteiner. Anvendelse av egg for produksjon av vaksine er tidskrevende, arbeidsintensiv, krever relativ hb'y materialkostnader, og utbyttet fra ett egg er vanligvis bare tilstrekkelig for å produsere vaksine for omtrent 1 - 1,5 doser. Således kreves for produksjon av millioner av doser inokulering og hostning av millioner av embryonerte egg.
I den senere tid har det blitt konstatert at et
vidt spektrum av influensa A-viruser omfattende human, hest-, gris- og fjærfestammer vokser produktivt i en etablert
linje av kaninnyreceller under et overlegningsmedium inne-? holdende trypsin og danner godt definerte plaketter uten hensyn til deres tidligere passasjehistorie. Se artikkelen av K. Tobita et. al, "Plaque Assay and Primary Isolation of Influenz A Viruses'in an Established Line of Canihe Kidney Cells (MDCK) in the presence of Trypsin", Med. Microbiol. Immunol.. 162, 9 - 14 (1975). Se også artikkelen av Hans-Dieter Klenk et al, "Activation of Influenza A Viruses by Trypsin Treatment", Virology 68, 426 - 439 (.1975) . Det skal konstateres at i de ovenfor anforte rapporter ble effektene av trypsin observert på influensavirusformering i semi-fast kulturer i plakettformasjonsprdver og isola-sjonsteknikker, ingen av hvilke vedrorer væskecellekul-
turer eller storskala'eller kommersiell formering av influensaviruser for vaksineproduksjon. Betegnelsen væskecellekultur som anvendt her, beskriver in vitro vekst av celler og formering av virus i et kjemisk definert væskemedium..
Helt overraskende har vi nå funnet at proteolytisk enzymer også kan;bli anvendt i væskecellekulturer for å gjore lettere infeksjon av suksessiv antall av.celler i den samme cellekulturen. Ved således å overvinne begrensningene ved "ett-trinns vekst syklus" ved tidligere væske-cellekulturteknikk, er det mulig å bevirke et influensa-virusutbytte som er i I området fra omtrent 1.000 - 10.000
fold storre enn ikke-proteasebehandlede kulturer. Dette muliggjor anvendelsen;av væskecellekultur-teknikk for kommersiell produksjon av influensavaksine, hvorved det unn-
gås ulempene forbundet med anvendelse av embronerte honseegg. Detaljer vedrbrende vårt kulturmedium, virusformeringsteknikk og vaksineproduksjon og anvendte metoder om-fattes av oppfinnelsen.
Vårt influensavirus-formeringsmedium omfatter en cellekultur egnet for infisering med en influensavirus, en influensavirus, og.et protein-hydrolyserende enzym, mengden av enzymet er tilstrekkelig for å overvinne ett-trinns vekst syklus av viruset. Virusformeringsteknikk omfatter trinnene ved inokulering eller infisering av en væskeinfluensa-virus-cellekultur med.1 influensavirusene, inkubering av inokulatet i nærvær av et protein-hydrolyserende enzym under betingelser tilstrekkelig for å sikkerstille maksimum virusvekst (eller maksimum cytopatisk effekt), og hostning av viruset. Infisering av cellene med viruset kan skje
for eller etter cellemonosjiktdannelsen eller, alternativt, ved enkel infisering av en væskecellesuspensjon. Frem-gangsmåten ved vår vaksineproduksjon omfatter de folgende trinn ved avdodning av hostet virus eller svekking ved ytterligere cellekulturpassasje for vaksineanvendelse. Spesielt foretrukne utforelser omfatter anvendelsen av protease-trypsinet i forbindelse med en hundnyrecellelinje for formering av hvilke som helst typer av forskjellige influensaviruser.
Fig. 1 - 5 viser en grafisk illustrering av bk-ningen i titer oppnådd når den angitte virusstammen blir inkubert i en væskecellekultur i nærvær av forskjellige'mengder av en typisk protease, trypsin. Resultatene er angitt som geometrisk gjennomsnittlig titer.
Influensaviruset og vaksineproduksjonsteknikk i henhold til denne oppfinnelse viser anvendelsen av influen-savaksineviruser. Som anvendt her omfatter betegnelsen influensavirus hvilket som helst virus som forårsaker en feberlignende syksomstilstand hos dyr (inkludert mennesket) kjennetegnet ved åndedrettssymptomer, inflammasjons av slimmembraner og oftejsystemisk engasjement. Mediet og fremgangsmåtene i henhold til oppfinnelsen er spesielt egnet for produksjon av forskjellige influensaviruser, omfattende human, hest, gris og fjærfestammer. Eksempler for produksjon av typisk type A og B influensaviruser blir beskrevet nedenfor.
Vaksinepreparatene som ble beskrevet i denne oppfinnelse, omfatter hvilket som helst preparat av dode, levende, svekkede eller fullt levende ondartede influensaviruser som kan administreres for å gi eller kunstig oke immuniteten for hvilken som helst influensasykdom. I en foretrukket utforelse omfatter vaksinen en vandig suspensjon av viruspartikler ferdig for anvendelse.
Cellekulturene som er ansett å være egnet for utforelse av prinsippene ved denne oppfinnelse, omfatter hvilken som helst animalsk cellelinje eller cellestamme egnet for å bli infisert av, og hvilket tillater repetering av, én eller flere gitte influensavirusstammer. Skjont et antall av slike celler er kjente og betraktet å være an-vendelige for teknikken som beskrevet her, har vi oppnådd spesielle gode resultat med en etablert cellelinje kjent som Cutter Laboratories Dog Kidney (CLDK) -cellelinje:. CLDK-cellelinjen er blitt godkjent av U.S. Department of Agriculture for anvendelse ved produksjon av veterinærvaksiner og er lignende Madin Darby Dog Kidney Cell Line (ATCC No. CCL 34) og hundnyrecellelinjen som beskrevet i U.S. patent nr. 3.616.203. En kortfattet historisk beretning og beskrivelse av den "specific masser cell stock" anvendt for cellelinjen ifolge eksemplene folges, skjont det skal forstås at tek-nikkene som beskrevet'heri, er tenkt å være anvendelig ved hvilket som helst influensavirus som er mottakelig fo cellekulturer .
Cutter Laboratoires Hund nyre ( CLDK) cellelinje historie
Utgangslinjen for CLDK ble iverksatt og etablert
ved Cutter Laboratories, Inc., Berkeley, California, fra nyren av en tilsynelatende normal harehund erholdt fra University of California ved Davis. Linjen ble opprettholdt på 0,5% laktalbuminhydrolysat og 0, 2% gjærekstrakt i Earle! balanserte saltoppldsning pluss 5% kalv, lam eller hesteser-um og antibiotika, kultivert ifolge metoder av J.S. Younger (Proe. of Éxp. Biol., og Med., v 85, 202).
En frossen ampulle fra den 142. passasje av denne" cellelinje ble deretter inplantert i. en 75 cm 2 (250 ml) falcon-flaske, i vevekulturmedium bestående av Earle's balanserte saltopplosning "Minimum Essential Medium" (MEM) og 10%
foster kveg serum<*>. Cellene ble subkultivert på samme måte ;og i samme medium for fremstilling av frossen "Master céll stock" ved 148. passasje. ;En ampulle av "Master cell stock" ble smeltet, plantert og subkultivert i serie 20 ganger for å oppnå flaskekulturer fra den 168. passasje. Disse celler ble deretter frosset. j' ;Beskrivelse av "Mater'cell stock" ( MCS) ;Antall subkulturerer i serie fra originalvev: 148 Frysemedium: Minimum.1 nbdvendig medium (Eadle) i Earle's BSS med redusert bikarbonater (1,65 gm/l) 80%; fosterkvegserum 10%; dimetylsulfoksyd 10%. Levedyktighet: Omtrentlig 75% (farveutelukkelse). Kulturmedium: Minimum no dvendig medium (Eagle) i Earle'S'-BSS med redusert bikarbonater (1,65 gm/l) 90%; fosterkvegserum 2 - 10%; antibiotika penicillin og streptomycin 100 U. eller Y/ml.. ;Vekstkarakteristi kk av smeltede celler; Et podestoff av '—15 • ■ • ... 3 x 10 levedyktige céller/ml kultivert i det ovenfor angitte kulturmediumet ved 37°C i et lukket system', gir omtrent 6-8 fold i 5 dager. ;Morfologi; Epitel-lignende. ;Karyologi; Kromosomfrekvensfordeling 100 celler: ;2N = 72. ;
Ingen markorkromosomer. ;Sterilitettest: Fri for mykoplasma, bakterier og fungi. Art:. Bekreftet som hund ved immunofluorensctest. Virusmottakelighet: i Mott akelig for influensaviruser, rabisvirus, infektiosikvegrhinotracheitis,' infektios hund-heptatitis, valpesykevirus og mulig andre viruser. ;Proteinhydrolyserende enzymer (proteolytisk enzym eller protease) som er ansett for å være anvendelig for anvendelse ved denne oppfinnelse, omfatter godkjente pro-teaser slik som trypsin, chymotrypsin, pepsin, pankreatin,, papain, pronase, karboksypeptidase og lignende, med trypsin som en spesielt foretrukket enzym. De(n) eksakte meka nisme(r) ved hvilken en protease slik som trypsin forbker inflUensavirusinfisering er ikke fullstendig kjent. En mulig mekanisme har blitt foreslått i den ovenfor angitte artikkel av Klenk et al. ;Som beskrevet nedenfor, mengden av aktiv protease som er nbdvendig for å oke suksessiv infisering skulle være i det minste tilstrekkelig for å overveie begrensningene ved "ett-trinns vekstsyklus", men i tilfelle av sammenflytende monolagkulturer, ikke/være så hby at den forårsaker avskalning av sammenflytende celler fra overflaten ;av vevkultiveringskaret (dvs. indre overflate av en rulleflaske). I tilfelle av det spesifikke enzym som anvendt i de nedenfor angitte eksempler, foretrekker vi at mengden ;av enzymet skulle være i'området fra omtrent 4 - 25 mikro- . gram pr. ml (yug/ml) 'av væskevevkulturmedium, foretrukket omtrent 10^ug/ml. , ;Virusformeringsmetoder ;Influensavirusformeringsmetoden i henhold til oppfinnelsen omfatter tre generelle trekk ved infisering av en del av cellene av en væskecellekultur med influensaviruset, inkubering av cellene i nærvær av et proteolytisk enzym under betingelser tilstrekkelig for å sikkerstille maksimum cytopatisk (CP.) effekt og hbstning av virusene fra kulturen. Vaksinefremstilling omfatter etterfølgende trinn ved modifisering av hostet virus ved en teknikk for å erholde levende, ondartet, svekket, eller dbdt (inaktivt) vaksinepreparat. Vaksinet kan være tilgjengelig i torr form for å blandes med et fortynningsmiddel, eller i en væske, ferdig for bruk. Egnede hjelpemidler kan være inn-befattet, som beskrevet nedenfor, for å oke immunogeniteten. ;Proteasen kan tilsettes en vandig cellesuspensjon-kultur eller eller etter dannelsen av en sammenflytende monolagkultur. Eksempler for noen av de forskjellige for-meringsmetoder beskrives nedenfor. ;Metode A. -. infeksjon av pre- dannede monolag ;1. Celler blir dyrket for å sammenf lyte i kulturbe^-holdere slik som rulleflasker, Povitskyflasker eller Roux- ;flasker ved anvendelse av cellekulturvekstmedia som tidligere kjent. 2. For infeksjon, vekstmediet fjernes fra cellemo.no-lagene. 3. Den virksomme influensavirusseden blir fortynnet i vekstmediet inneholdende ytterligere vitaminer, ikke-vesentlige aminosyrer, L-glutamin, dekstrose og antibiotika med pH-verdien innstillet til 6,6-6,8. 4. En kvantitet av fortynningsmidle't inneholdende virus blir tilsatt til cellemonolaget i kvantiteter varierende fra 10% - 100% av det tilslutt hostede volum. 5. De infiserte monolag inkuberes ved 34 - 37°C under 1-72 timer. 6. Protease, alene eller i kombinasjon med virus-formeringsmedia, tilsettes ved en konsentrasjon som vil stimulere multippel syklusvekst uten produksjon av.dode celler. For trypsin er den optimale konsentrasjon mellom omtrent 8 og 15^ug/ml. ;7. Virusvekstbeholderne blir på nytt inkubert ved ;34 - 37°C inntil maksimum cytopatisk effekt observeres...Ved dette punkt blir virusvæskene hostet. 8. Hostningen omfatter kraftig rystning av beholderne for å fjerne celler og overfore væsker og celler til en steril beholder for videre bearbeiding. ;Metode B - Infeksjon av væskecellesuspensjon for monblag-dannelse 1. Celler fjernes fra vekstbeholdere ved anvendelse konvensjonell fremgangsmåter. 2. Celler blir; konsentrert ved sentrifugering, deretter resuspendert i en kvantitet av frisk vekstmedium inneholdende ytterligere vitaminer, ikke-vesentlige aminosyrer, L-glutamin, dekstrose og antibiotika. 3. Influensavirus tilsettes deretter til denne kon-sentrerte cellesuspensjon. 4. Cellevirussuspensjonen blir inkubert (25°C - 37°C) i en steril, lukket beholder (slik som en skru-kappe Erlen-meyer-flaske) mens den blandes på en magnetisk omrbrer eller roterende rysteanordning under en tid av 10 minutter til.'. 4 timer.. ;5. Aliquote deler av cellevirussuspensjon plasser- ;es i vekstbeholdere (rulleflasker, Roux-flasker, Povitskyflasker) med fullt volum av media inneholdende ingredienser som angitt i B-2,ipluss 5% fosterkalvserum. ;6. Vekstbeholdere inkuberes ved 34 - 37°C inntil sammenflytende monolag dannes (omtrent 2-4 dager). 7. Etter at monolag er dannet, tilsettes protease ved en konsentrasjon som vil stimulere multippel syklusvekst uten dannelse av avdode celler. For trypsin er den optimale konsentrasjon mellom 10 og 25 yug/tal.. 8. Vekstbeholdere inkuberes ved 34 - 37°C inntil maksimum cytopatisk effekt observeres. Virus hostes deretter. 9. Hbstning omfatter kraftig.rystning av beholdere for å fjerne celler og overfore celler og væsker til en steril beholder for videre bearbeigning. ;Metode C - Infeksjon av væskékultursuspensjon ;1. Celler tilpasset for kultursuspensjon blir latt vokse til et optimaltjantall i vekstmedium i suspensjon-vekstbehp.ldere. 2. Celler sentrifugeres og resuspenderes i en kvantitet frisk medium inneholdende ytterligere vitaminer, ikke-viktige aminosyrer, L-glutamin,dekstrose og antibiotika. 3. Influensavirus tilsettes deretter og kulturen inkuberes ved 34 - 37?C fra 10 minutter til flere timer. 4. Fosterkalvserum kan tilsettes, og kultursuspen-sjonen inkuberes videre ved 3^ - 37°C i 1 - 72 timer. 5. Protease tilsettes ved en konsentrasjon som vil tillate multippel syklusvekst uten å frembringe en ufor-delaktig effekt på cellene. For trypsin er den optimale konsentrasjon mellom 4 og 25 yug/ml. 6. Inkubasjon ved 34 - 37°C fortsettes inntil maksimum cytopatisk effekt iakttas ved hostningstiden for væskene.. 7. Hostning omfatter overforing av væsker til en steril beholder for videre bearbeiding. ;Spesifikk eksempler for anvendelse av vår teknikk og media for formering av utvalgte stammer av influensaviruser folger. Når intet annet er angitt, anvender vi konvensjonell vevkulturteknikk kjent for. fagmannen. Da både celle og mediumpreparatteknikken er godt kjent, blir den ikke beskrevet her i detalj. ;i •■ ' ;Eksempel 1 ;A2 equine influensavirus, betegnet Miami-stamme, ble opprinnelig isolert fra en hest ved University of Miami. Denne virusen ble erholdt fra University of Pennsylvania Medical School hvor seks passasjer ble gjort i kyllingfosteret. Den*syvende passasje ble gjort ved og erholdt fra Lederle Laboratories. Stammen undergikk videre kyllingfosterpåssasje og ble anvendt ved passasjene 11-16.
Den foreliggende foretrukne fremgangsmåte ved vevskulturformering av A2-stammen omfatter infeksjon av et ungt, sammenflytende monolay av CLDK-celler. Celler blir planert i rulleflasker, ved anvendelse av"Hahk's Minimum Essential Medium".(MEMH) inneholdende folgende ingredienser:
Fosterkvegserum, 5 - 10%
Ikke-vesentlige aminosyrer, 10 ml/Z (Gibco) L-glutamin,i 10 ml/& (Gibco)
Neomycinsulfat, 30.000 mcg/Z-
Polymyxin Bj 30.000 enheter/^
Mycostatin, 25.000 enheter/^
Cellene blir vanligvis sammenflytende etter 72 timer ved hvilken tid mediet blir avhellet og cellene infisert. Ihokuleringsmediet inneholder A2-virus fortynnet til en "Egg Infective■Dose^0" (EID^q) titer av omtrent 10^'°/ ml i MEMH supplert med folgende ingredienser:
50% dekstrose, 2,6 ml/Z
MEM vitaminer, 30 ml/(Gibco)
Ikke-vesentlige aminosyrer, 10 ml/^ (Gibco) L-glutamin, 10 ml/ C (Gibco)
Neomycinsulfat, 30.000 mcg/-£
Polymyxin B;, 30.000 enheter/^
Mycostatin, 25.000 enheter//^
Inokuleringsmedium ekvivalent til 14 % av slutt-volumet tilsettes til hver rulleflaske og beholderne inkuberes ved 34 - 35°C i, 72 timer. Ved denne tid blir gjen-værende medium (86%) inneholdende 12^ug/ml steril trypsin (Sigma, 1:250) opplosning (0,1 g/100 ml), tilsatt til hver rulleflaske. Beholderne blir igjen inkubert ved 34 - 35°C inntil maksimum cytopatisk effekt iakttas (48 - 72 timer) ved hvilken tid væskene blir hostet. Hostning omfatter kraftig rystning av hver rulleflaske for å' fjerne medføl-gende celler og overforing av celler og virusfluida til en steril batch-beholder for videre bearbeiding.
Hostet EID^q titer av A2-influensavirus dyrket ved anvendelse av denne teknikk blir vist 1 tabell 1. Se også fig. 1. En sammenligning blir gjort med A2-virus dyrket ved den samme metode men uten tilsetning av trypsin.
Innarbeiding av trypsin i vekstmediet gir en geo-netrisk gjennomsnittlig okning av 3,2 logs eller 1711 ganger .så mange viruspartikler/ml under produksjonen av Miami-strammen.
Eksempel 2
En prove av: ondartet type Al Equine influensa
virus ble erholdt fra; University of Pennsylvania Medical School. Stammen, betegnet Pennsylvania (Al), hadde blitt isolert fra en hest og har passert i kyllingfosteret seks ganger. Stammen har undergått ytterligere kyllingfoster-passasje og er blitt anvendt for vevkulturproduksjon ved passasjer 12 - 17.
Den foretrukne metode for vevkulturformering
av Al-stammen omfatter infeksjon av en suspensjon av CLDK-celler for monolagdannel.se. CLDK-celler ved en konsentrasjon av omtrent 10?'^/ml, Pennsylvania-virusstamme ved en EID50-titer av 10<3>'°/ml - 10<5>,<0>/ml, og "Hank's Minium Essential Medium" (MEMH) supplert med ingrediensene an-
fbrt nedenfor, inkuberes ved 25°C under blanding på en magnetisk roreanordning i en lukket, steril Erlenmeyer-flaske. pH-verdien blir opprettholdt ved 6,7 - 6,8 med IN HC1 under den 2 - 3-timers inkuberingsperiode.
Supplert MEMH
50% dekstrose, 2,6 ml/£
MEM vitaminer, 30 ml/Z (Gibco)
Ikke-vesentlige aminosyrer, 10 ml/^ (Gibco)
L-glutamin, 10 ml/-^ (Gibco)
Neomycinsulfat, 30.000 meg/£
Polymyxin B, 30.000 enheter/£
Mycostatin, 25.000 enheter/^
Etter"denne suspensjonsinkubering, ble 10 ml aliquote deler av viruscellesuspensjonen tilsatt til rulleflasker inneholdende 1 liter MEMH supplert som angitt ovenfor og inneholdende 5% fosterkalvserum. Rulleflaskene blir inkubert ved 34 - 35°C inntil monolaget blir sammenflytende (omtrent 48 72 timer) etter hvilken tid 20 ml av en steril 1 mg/ml trypsinopplosning (Sigma 1:250) blir tilsatt til hver rulleflaske. Rulleflaskene blir igjen inkubert ved 34 - 35°C inntil maksimum cytopatisk effekt iakttas (3-5 dager). Virusvæskene blir hostet ved kraftig rystning av hver rulleflaske for å fjerne celler som vedhefter, og overforing av celler og fluida til en steril beholder for videre bearbeiding. Hostet EID^Q-titer av Al-influensaviruset dyrket ved anvendelse av denne teknikk blir vist i tabell 2. Se også fig. 2. En sammenligning ble gjort med Al-virus dyrket ved den samme metode hvor trypsin utelukkes.
i
Innarbeidning av trypsin i vektstmediet gir en geometrisk gjennomsnittlig okning på 2,3 logs eller 187 ganger så mange viruspartikler/ml under produksjon av Pennsylvania- stammen.
Eksempel 5
En stamme av human influensavirus betegnet B/Hong'Kong/5/72 (BX-l) ble mottatt fra The Center for Disease Control i Atlanta, Georgia. Denne ble passert én gang i embronert honseegg og frosset ved -70°C som arbeidende sed-virus.
Den foretrukne metode for vevskulturformering av B/Hong Kong/5/72-stammen omfatter infisering av et ungt samménflytende monolag av CLDK-celler lignende til den i eksempel 1. Celler blir dyrket som beskrevet i eksempel 1. Vékstmedium fjernes fra celler og kastes. Celler blir deretter infisert med virus fortynnet i inokuleringsmediet som angitt i eksempel1 1 til en EID,-n-titer på omtrent
3 5-5 0/
lGr'^ ^' /ml. Podestoffet består av et volum ekvivalent til 33, 3% av avsluttende hostet volum. Beholdere blir in- . kubert ved 34 - 35°C i 40 - 48 timer etter hvilken gjen-værende medium (66,7%) inneholdende 12^ug/ml trypsinopplosning (0,1 g/100 ml) blir tilsatt til hver beholder. Inkubering ved 34 - 35°C blir fortsatt inntil maksimum cytopatisk effekt iakttas (48 - 72 timer) ved hvilken tid virusfluida blir hostet. Hostningen omfatter kraftig rystning av hver beholder for å fjerne celler og overforing av celler og fluida til en steril beholder for videre bearbeiding.
Hostet EID^Q-titer av B/Hong Kong/5/72 influensavirus dyrket i henhold til denne teknikk blir vist i tabell 3. Se også fig. 3> En sammenligning blir gjort med denne stammen dyrket med samme metode, men uten tilsetning av. trypsin.
Innarbeidning av trypsin i vekstmediet gir en geometrisk gjennomsnittlig okning på 3,1 logs eller .1412 gang-^ er så mange viruspartikler under produksjonen av B/Hong Kong-stammen.
Eksempel 4
En stamme av human influensavirus betegnet A/Texas/. 1/77 ble mottatt fra The Center for Disease Control i Atlanta, Georgia. Denne ble passert én gang i embryonerte honseegg-og frosset til -70°C som arbeidende frbvirus.
Den foretrukne metode for vevkulturformering av A/Texas/l/77-stammen er. den som beskrevet fullstendig i eksempel 3•
Hostet EID^Q-titer av A/Texas/1/77 human influensavirus dyrket ved anvendelse av denne teknikk er vist i tabell 4. Se også fig. 4. En sammenligning er gjort med denne stammen dyrket ved samme metode, men uten tilsetning av trypsin.
Innarbeidning av trypsin i vekstmediet gir en geometrisk gjennomsnittlig okning av 4,1 logs eller 12.590 ganger så mange viruspartikler/ml under produksjon av A/ Texas-stammen.
Eksempel 5
En stamme av human influensavirus betegnet A/USSR/ 90/77 ble mottatt fra The Center for disease.Control i
Atlanta, Georgia. Denne ble passert én gang i embryonerte honseegg og frisst til -70°C som arbeidende frbvirus.
Den foretrukne metode for yevkulturformering av A/USSR/90/77-stammen er den som beskrevet fullstendig i eksempel 3•
Hostet EID50-titer av A/USSR/90/77-humaninfluensa-virus dyrket ved anvendelse av denne teknikk blir vist i tabell 5• En sammenligning er gjort med denne stammen dyrket etter den samme metode, men uten tilsetning av trypsin.
Innarbeidning av trypsin i vekstmediet gir en geometrisk gjennomsnittlig okning av 2,4 logs eller 251 ganger så mange viruspartikler/ml under produksjon av A/USSR-stammen..
Vaksinefremstilling Eksempel 6 - virussvekkelse
Svekkelse av virusen fra hostede fluida fra eksempel 1 blir utfort kjemisk eller ved standard passasjer i serie omfattende terminalfortynningpassasjeteknikk hvori et tilstrekkelig antall passasjer i en mottagelig cellekultur anvendes inntil viruset er gjort ikke-patogenisk uten tap av immunitet. Et vaksin fremstilt på denne måte vil stimulere en immunrespons hos dyr mottakelig for syk-som uten frembringelse av kliniske symptomer av merkbar grad normalt forårsaket av ondartet sykdomsfremkaller. For- meringen kan utfores i samme eller forskjellig vev enn de som anvendt i foregående passasje.
Eksempel 7 - Virusinaktivering
Teknikken er lignende den som er beskrevet i eksempler 1 og 2, men: de hostede virusirmeholdende fluida blir videre bearbeidet ved inaktivering med 0,1% konsentrert formaldehyd (området 0,05 - 0,2%) og det behandlede material inkuberes ved 4°C i 10 - 14 dager. Proving av det sluttinaktiverte viruspreparat viste at det var fritt fra levende virus. Hjeldemidler.som er kjent for fagmannen, slik som aluminiumhydroksyd, alum, alumini.umfosfat, "Freund' s" eller slik som beskrevet i U.S. patent nr. 3.790.665 og 3.919.411 kan tilsettes. Det foretrukne hjelpemidlet i henhold til oppfinnelsen og det som er anvendt i vår vaksine er en akrylsyrepolymer tverrbundet med et polyallylsakkarid ("Carbopol 934 P") lignende det som er beskrevet i de ovenfor nevnte patenter.
Eksempel 8 - Inaktivert virusvaksine
Fremstilling og anvendelse
En 1,0 ml hestedose bestående av 0,45 ml av Pennsylvania (Al)-stamme,:0,45 ml av Miami (A2)-stamme og 0,10 ml av "Carbopol" hjelpemiddel. Like deler av inaktivert vaksinestammer erholdt fra eksempel 7 ble blandet og 1 ml aliquotedel ble administrert intramuskulært til 19 hester. Ingen klinisk sykdom eller symptomer av influensa ble observert hos noen av hestene etter vaksinasjon. Antikropp mot både Equine Inflenza Al og Equine Influenza A2 ble erholdt på blodsera fra alle dyr etter 2, 4 og 8 uker fulgt av inoksulering. Disse blir sammenlignet med pre-inokuleringnivåer (tabell 6) ved anvendelse av standard hæmagglutineringshemningstest (DIAGN0STIC PR0CEDURES for Viral and Rickettsial Infections, Fourth Edition; Lennette and Schmidt, pp. 665-66 (1969). American Public Health Association, N.Y., N.Y. 10019).
Som det kan'ses fra tabell 6, utviklet anti-kropper for begge virusantigener i hester som mottok in-okuleringene. Disse vaksinater vil være immun mot Equine Influenza da antikropptiter i overskudd av 1:20 til A2 og 1:60 for Al er akseptert å være beskyttende av National Veterinary Services Laboratories fra U.S.' Department of Agriculture.
Kliniske prover av 420 hester av forskjellige raser og aldre viste at vaksinen er sikker og gir ikke uhel-dige reaksjoner etter intramuskulær inokulering.
Eksempel 9 - Anvendelse av svekket virusvaksine
Tre hester ble gitt intranasalt 5 ml av levende, svekket Equine Influenza A2-vaksinestamme fra eksempel 6. Ingen klinisk sykdom eller symptomer av influensa ble observert i noen av hestene etter vaksinasjon. Antilegemetiter mot vaksinestammen ble erholdt på bloksera av alle dyr ved 1, 2 og 4 uker etterfulgt av inokulering og sammenlignet med pre-inokuleringsnivå ved anvendelse av standard hæmaggluteringshemningstest (HAI).
En gang igjen, antilegemetiter erholdt er stbrre
enn krevet for beskyttelse.
Denne oppfinnelse vedrorer både et nytt influ-ensakulturstystem og anvendelse av mediet for produksjon av et nytt influensayaksin. Væskecellekultursystemet anvendt ved denne oppfinnelse, medfbrer anvendelse åv mottagelig celler, influensaviruser, et næringsmedium og et proteolytisk enzym, men ulik tidligere systemer (f.eks. Tobita et al), kreves ikke anvendelse av agar som redu-serer systemet til et<1>semi-fest system. Utelukkelse av agar muliggjbr storskalaproduksjon av viruser på konvensjonell måte som er kjent for fagfolk og resulterer i produksjon av viruser med tilstrekkelig hby titer for fremstilling av vaksiner.
Inflensavaksinepreparat omfatter en virksom meng-
de av én eller flere stammer fra gitte influensaviruspartikler og en farmasøytisk tålbar bærer, hele preparatet, fortrinnsvis i væskeform, er i det vesentlig fritt for reaktive proteiner slik som eggproteiner. Som anvendt her, betyr betegnelsen i det vesentlig fri for eggprotein at
den eneste mulige kilde for eggprotein i vaksinepreparater er frovirus som er fortynnet >lrlOO.000.
Vaksinene administreres til dyr ved forskjellige måter, omfattende intreamuskulær, intravenos, subkutan, iritratracheal, intranasal eller ved aerosolspray og vaksinene brukes for fordelaktig anvendelse ved forskjellige dyr, omfattende menneske, hest, svin og fjærfe.
Viruspreparatet som fremstilt ifolge oppfinnelsen kan fortynnes med vann for å justere dens styrke, og kan tilsettes stabilisatorer slik som sukrose, dekstrose, laktose eller andre ikke-toksiske substanser. Viruspre-paratene kan torres ved frysetorring for lagring eller for senere formulering i svekkede vaksiner eller de kan kjemisk inaktiveres for fremstilling av dodvirusvaksiner.
Det må forstås at de ovenfor angitte eksempler kun er illustrative og at omfanget av oppfinnelsen bare begrenses av etterfølgende patentkrav.
I
i
i i
Claims (39)
1. En fremgangsmåte for fremstilling av influensa-virusvaksine som omfatter folgende trinn: (a) inflisering av en del av cellene fra en væskecellekultur med en influensavirus; (b) inkubering av den infiserte kulturen i nærvær av et proteolytisk enzym under betingelser tilstrekkelig for å sikkerstille jvidere infisering og formering av viruset i celler andre enn de celler som opprinnelig ble infisert; , (c) hbstning av viruset fra kulturen og; (d) fremstilling av et vaksin fra den hostede virus.
2. Fremgangsmåte i henhold til krav 1 hvor cellekulturen fra trinn (a) omfatter et sammenflytende monolag av celler.
3. Fremgangsmåte i henhold til krav 1 hvor cellekulturen fra trinn (a) omfatter en væskesuspensjon av celler.
4. Fremgangsmåte i henhold til krav 1, hvor vak-sinfremstillingen i trinn (d) omfatter trinnet ved inaktivering av hostet virus.
5. Fremgangsmåte i henhold til krav 1 hvor vaksin-fremstillingen i trinn (d) omfatter trinnet ved fortyn-ning av hostet virus.
6. Fremgangsmåte i henhold til krav 1 hvor det proteolytiske enzym fra trinn (b) velges fra trypsin, chymotrypsin, pepsin, pankreatin, papain, pronase og karboksypeptidase.
7. Fremgangsmåte i henhold til krav 1 hvor viruset er en hesteinfluensavirus.
8. Fremgangsmåte i henhold til krav 7 hvor viruset er en stamme valgt fra hesteinfluensa Al og hesteinfluensa A2-virusstammer.
9. Fremgangsmåte i henhold til kravl hvor viruset er en human influensavirus.
10. Fremgangsmåte i henhold til krav 9 hvor viruset er utvalgt fra B/Hong Kong, A/Texas og A/USSR-virusstammer.
11. Fremgangsmåte i henhold til krav 1 hvor cellene fra cellekulturen er hundnyreceller.
12. Fremgangsmåte i henhold til krav 1 hvor cellekulturen fra trinn (a) er en hundnyrecellekultur, viruset fra trinn (a) er en hesteinfluensavirus og enzymet fra trinn (b) er trypsin.
13. Fremgangsmåte i henhold til krav 1 hvor cellekulturen fra trinn (a) er en hundnyrecellekul.tur, viruset fra trinn (a) er en human influensavirus og enzymet fra trinn (b) er trypsin.!
14. Fremgangsmåte i henhold til krav 1 hvor enzymet fra trinn (b) er nærvære i en mengde tilstrekkelig for å sikkerstille infisering og formering av viruset i kultur-celler andre enn cellene som omfatter den del som ble infisert i trinn (a).
15. Fremgangsmåte i, henhold til krav 14 hvor mengden av trypsin varierer fra ca. 4 - ca. 25^ug/ml kulturmedia.
16. Et influensavaksinpreparat omfattende en effek-tiv mengde av influensaviruspartikler og en farmasøytisk tålbar bærer, hvorvedi preparatet er i det vesentlige fritt for eggproteiner.
17. Preparat i henhold til krav 16 hvor viruspartikler er svekket.
18. Preparat i henhold til-krav 16 hvor.viruspartik-lene er dbde..!
19. Preparat i henhold til krav 16 hvor viruset er utvalgt fra gruppen bestående av human, heste-, fjærfe- og svinestammene.
20. Vaksinpreparat i henhold til krav 16 hvor virusa et er en hesteinfluensavirus valgt fra hesteinfluensa Al og hesteinfluensa A2-stammer.
21. Vaksinpreparat i henhold til krav ly hvor viruset er en humanvirus valgt fra B/Hong Kong, A/Texas og A/USSR-viruser.
22. Vaksinpreparat i henhold til krav 16 hvor bærer-en er væske.
23. Vaksinpreparat i henhold til krav 22 hvor væske-bærereri omfatter et hjelpemiddel valgt fra aluminiumhydroksyd, alum, aluminiumfpsfat, Freunds's og en akrylsyrepolymer tverrbundet med et polyallylsakkarid.
24. En fremgangsmåte for formering av influensaviruser 1 et væskecellekulturmedium som omfatter infisering av en væskecellekultur med et influensavirus, inkubering av den infiserte kulturen i nærvær av et proteolytisk enzym under betingeler tilstrekkelig for å sikkerstille virus-formering og . ?
25. Fremgangsmåte i henhold til krav 24 hvor influensaviruset er en hesteinfluensavirus.
26. Fremgangsmåte i henhold til krav 25 hvor viruset er utvalgt fra hesteinfluensa Al og hesteinfluensa-A2-viruser.
27. Fremgangsmåte i henhold til krav 24 hyor viruset er en human influensavirus.
28. Fremgangsmåte i henhold til krav 27 hvor viruset er en stamme valgt fra B/Hong Kong, A/Texas og A/USSR-viruser.
29. Fremgangsmåte i henhold til krav 24 hvor det proteolytiske enzym er valgt fra trypsin, chymtrypsin, pepsin, pankreatin, papain, pronase og karboksypeptidase.
30. Fremgangsmåte i henhold til krav 24 hvor enzymet er trypsin i en mengde varierende fra ca. 4 - ca. 25 ^ug/ml væskecellekultur.
31. Fremgangsmåte i henhold til krav 24 hvor vevs-kulturen omfatter hundnyreceller, influensaviruset er valgt fra hest og human virusstammer og det proteolytiske enzymet er trypsin.
32.. En influensavirus-inokulert væskecellekultur omfattende influensaviruser, en cellekultur egnet for vert-formering av virusene og et proteolytisk enzym, mengden av enzymet er tilstrekkelig for å sikkerstille infisering og formering av virusene i det vesentlige i alle celler av væskecellekulturen.
33. Cellekultur, i henhold til krav 32 hvor viruset er et hesteinfluensavirus.
34. Cellekultur: i henhold til krav 33 hvor viruset er en stamme valgt fra hesteinfluensa Al og hesteinfluensa A2-viruser. j
35. Cellekultur1 i henhold til krav 32 hvor viruset er en human influensavirus.
36. Cellekultur: i henhold til krav 35 hvor viruset er en stamme valgt fra B/Hong Kong, A/Texas og A/USSR-viruser..
37. Cellekultur! i henhold til krav 32 hvor det proteolytiske enzym er valgt fra trypsin, chymotrypsin, pepsin, pankreatin, papain, prohase og karboksypeptidase.
38. Kulturmedium i henhold til krav 32 hvor celle-linjevevskulturen omfatter hundnyreceller, influensaviruset er valgt fra hest og human influensavirusstammer og det proteolytiske enzym er trypsin.
39. Kulturmedium i henhold til krav 38 hvor mengden av trypsin varierer fra ca. 4 - ca. 25 yug/ml av væske
cellekultur . j
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US3923679A | 1979-05-15 | 1979-05-15 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO801443L true NO801443L (no) | 1980-11-17 |
Family
ID=21904398
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO801443A NO801443L (no) | 1979-05-15 | 1980-05-14 | Fremgangsmaate til fremstilling av influensavaskine i flytende celle-kultur |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0019218B2 (no) |
| JP (1) | JPS55153723A (no) |
| AR (1) | AR220838A1 (no) |
| AT (1) | ATE16454T1 (no) |
| AU (1) | AU535804B2 (no) |
| CA (1) | CA1122527A (no) |
| DE (1) | DE3071225D1 (no) |
| DK (1) | DK154749C (no) |
| ES (1) | ES8104405A1 (no) |
| IL (1) | IL60063A0 (no) |
| NO (1) | NO801443L (no) |
| RO (1) | RO79525B (no) |
| YU (1) | YU41923B (no) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5753489A (en) * | 1994-11-10 | 1998-05-19 | Immuno Ag | Method for producing viruses and vaccines in serum-free culture |
| US5698433A (en) * | 1994-11-10 | 1997-12-16 | Immuno Ag | Method for producing influenza virus and vaccine |
| US6146873A (en) * | 1994-11-10 | 2000-11-14 | Baxter Aktiengesellschaft | Production of orthomyxoviruses in monkey kidney cells using protein-free media |
| DE69535940D1 (de) * | 1994-11-10 | 2009-06-04 | Baxter Healthcare Sa | Verfahren zur Herstellung von biologischen Produkten in Protein-freiem Kultur |
| JPH11509081A (ja) * | 1994-11-16 | 1999-08-17 | セント ジュード チルドレンズ リサーチ ホスピタル | 新規の複製プロセス |
| DE19612967A1 (de) * | 1996-04-01 | 1997-10-02 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Vermehrung von Influenzaviren in Zellkultur, sowie die durch das Verfahren erhältlichen Influenzaviren |
| DE19612966B4 (de) | 1996-04-01 | 2009-12-10 | Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh & Co. Kg | MDCK-Zellen und Verfahren zur Vermehrung von Influenzaviren |
| DE10144906B4 (de) | 2001-09-12 | 2013-11-28 | Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh | Verfahren zur großtechnischen Herstellung von Impfstoffen |
| US6830917B2 (en) * | 2001-12-10 | 2004-12-14 | Baxter Healthcare S.A. | Method of isolation and purification of trypsin from pronase protease and use thereof |
| EP2923711A1 (en) | 2004-11-03 | 2015-09-30 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Influenza vaccination |
| EP2022849A4 (en) * | 2006-05-11 | 2010-10-06 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | METHOD FOR PROLIFERATION OF INFLUENZA VIRUS |
| US8506966B2 (en) | 2008-02-22 | 2013-08-13 | Novartis Ag | Adjuvanted influenza vaccines for pediatric use |
| TW201012930A (en) * | 2008-06-16 | 2010-04-01 | Intervet Int Bv | Method of replicating viruses in suspension |
| EA201500910A1 (ru) | 2009-02-10 | 2016-04-29 | Новартис Аг | Вакцины против гриппа со сниженным количеством сквалена |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2262962B1 (no) * | 1974-03-05 | 1977-11-04 | Science Union & Cie |
-
1980
- 1980-04-22 CA CA350,366A patent/CA1122527A/en not_active Expired
- 1980-04-30 AR AR280860A patent/AR220838A1/es active
- 1980-05-08 DE DE8080102525T patent/DE3071225D1/de not_active Expired
- 1980-05-08 AT AT80102525T patent/ATE16454T1/de not_active IP Right Cessation
- 1980-05-08 EP EP80102525A patent/EP0019218B2/de not_active Expired - Lifetime
- 1980-05-09 AU AU58244/80A patent/AU535804B2/en not_active Expired
- 1980-05-13 JP JP6235780A patent/JPS55153723A/ja active Granted
- 1980-05-13 YU YU1265/80A patent/YU41923B/xx unknown
- 1980-05-13 RO RO101109A patent/RO79525B/ro unknown
- 1980-05-13 IL IL60063A patent/IL60063A0/xx unknown
- 1980-05-14 NO NO801443A patent/NO801443L/no unknown
- 1980-05-14 ES ES491517A patent/ES8104405A1/es not_active Expired
- 1980-05-14 DK DK212580A patent/DK154749C/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| YU126580A (en) | 1983-12-31 |
| IL60063A0 (en) | 1980-07-31 |
| RO79525A (ro) | 1984-07-17 |
| ES491517A0 (es) | 1981-04-01 |
| DK212580A (da) | 1980-11-16 |
| YU41923B (en) | 1988-02-29 |
| EP0019218B2 (de) | 1995-03-01 |
| CA1122527A (en) | 1982-04-27 |
| RO79525B (ro) | 1984-09-30 |
| EP0019218A3 (en) | 1981-03-25 |
| DK154749B (da) | 1988-12-19 |
| JPS55153723A (en) | 1980-11-29 |
| DE3071225D1 (en) | 1985-12-19 |
| ATE16454T1 (de) | 1985-11-15 |
| DK154749C (da) | 1989-05-16 |
| JPH0124769B2 (no) | 1989-05-15 |
| AR220838A1 (es) | 1980-11-28 |
| AU5824480A (en) | 1980-11-20 |
| EP0019218B1 (de) | 1985-11-13 |
| ES8104405A1 (es) | 1981-04-01 |
| EP0019218A2 (de) | 1980-11-26 |
| AU535804B2 (en) | 1984-04-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4500513A (en) | Influenza vaccine production in liquid cell culture | |
| CA2250078C (en) | Processes for the replication of influenza viruses in cell culture, and the influenza viruses obtainable by the process | |
| US6656720B2 (en) | Animal cells and processes for the replication of influenza viruses | |
| NO801443L (no) | Fremgangsmaate til fremstilling av influensavaskine i flytende celle-kultur | |
| CZ105098A3 (cs) | Vakcína proti chřipce a způsob její přípravy | |
| WO2002024876A2 (en) | Live influenza vaccine and method of manufacture | |
| AU2002223560A1 (en) | Live influenza vaccine and method of manufacture | |
| US4338296A (en) | Influenza virus and process of producing a vaccine therefrom | |
| US3950512A (en) | Animal vaccines | |
| US4302444A (en) | Vaccines for immunizing egg-laying birds against Egg Drop disease, preparation of said vaccines, and method of use of said vaccines | |
| USRE33164E (en) | Influenza vaccine production in liquid cell culture | |
| US3080291A (en) | Serial passage of distemper virus in tissue cultures of chick embryo and canine tissue and vaccine therefrom | |
| HU181993B (en) | Process for producing weakened stock of virus of peritonitis | |
| US3961046A (en) | Mumps vaccine and preparation thereof | |
| RU2126268C1 (ru) | Вакцина для профилактики инфекционного заболевания сумки у цыплят, лиофилизированная вирусная композиция, способ защиты цыплят от этого заболевания и способ получения живой вакцины | |
| US4351827A (en) | Novel polyvalent virus vaccine | |
| CA1152895A (en) | Process for the preparation of novel influenza virus strains and influenza virus vaccines containing them | |
| EP0009277B1 (en) | Combined vaccine active against newcastle disease and egg production drop caused by adeno-like viruses, process for preparing it, adeno-like and newcastle disease virus strains | |
| US3962423A (en) | Live influenza type B virus vaccines and preparation thereof | |
| KR101093510B1 (ko) | 돼지 인플루엔자 예방을 위한 세포 기원 불활화 백신 및 그의 제조방법 | |
| KR830002615B1 (ko) | 세포배양액내에서 인플루엔자 왁진의 제조방법 | |
| NZ199561A (en) | Vaccine against enzootic abortion in ewes | |
| US3629396A (en) | Avian encephalomyelitis vaccine | |
| US3432391A (en) | Attenuated infectious canine hepatitis live virus vaccine and method of producing same | |
| CA1216234A (en) | Preparation of modified strains of bovine diarrhoea virus and vaccines containing them |