DK154749B - Fremgangsmaade til fremstilling af en influenzavirusvaccine i en flydende cellekultur - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af en influenzavirusvaccine i en flydende cellekultur Download PDFInfo
- Publication number
- DK154749B DK154749B DK212580AA DK212580A DK154749B DK 154749 B DK154749 B DK 154749B DK 212580A A DK212580A A DK 212580AA DK 212580 A DK212580 A DK 212580A DK 154749 B DK154749 B DK 154749B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- virus
- cells
- influenza virus
- trypsin
- influenza
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 40
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 title claims description 29
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims description 23
- 229940124873 Influenza virus vaccine Drugs 0.000 title claims description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 76
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 73
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 48
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 39
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 39
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 38
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 38
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 claims description 37
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 20
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 20
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 20
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 claims description 19
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 18
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 12
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 claims description 2
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 claims description 2
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 claims description 2
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 claims description 2
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 claims description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 claims description 2
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 claims description 2
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 claims description 2
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 claims description 2
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims description 2
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 claims description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 22
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 20
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 14
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 10
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 10
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 10
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 9
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 9
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 8
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 6
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 5
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 5
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 5
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 5
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 5
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 5
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 5
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 5
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 5
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 3
- 108010093965 Polymyxin B Proteins 0.000 description 3
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 3
- PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N framycetin Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O2)N)O[C@@H]1CO PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N 0.000 description 3
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 3
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 3
- 229940049018 mycostatin Drugs 0.000 description 3
- VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N nystatin A1 Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/CC/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N 0.000 description 3
- 229920000024 polymyxin B Polymers 0.000 description 3
- 229960005266 polymyxin b Drugs 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710131583 Trypsin-10 Proteins 0.000 description 2
- 101710119636 Trypsin-5 Proteins 0.000 description 2
- -1 alum Chemical compound 0.000 description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 238000012832 cell culture technique Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 239000012499 inoculation medium Substances 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 2
- 229940053050 neomycin sulfate Drugs 0.000 description 2
- 238000012808 pre-inoculation Methods 0.000 description 2
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 2
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 239000012594 Earle’s Balanced Salt Solution Substances 0.000 description 1
- 208000015220 Febrile disease Diseases 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 208000004467 Infectious Canine Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 241000606651 Rickettsiales Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019365 chlortetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000001524 infective effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/543—Mucosal route intranasal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
- C12N2760/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Mycology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
i
DK 154749 B
Den foreliggende opfindelse angår en hidtil ukendt fremgangsmåde til fremstilling af en influenzavaccine, ved hvilken fremgangsmåde celler inficeres med et influenzavirus, viruset formeres i cellerne, hvorefter viruset isoleres, og 5 ud fra det isolerede virus fremstilles der en vaccine.
Influenzavacciner har været anvendt siden begyndelsen af 1940 til humanvaccination og siden slutningen af I960 til hestevaccination. Alle de influenzavacciner, der anvendes i øjeblikket, fremstilles ved at dyrke vaccinevirusstammerne 10 i kyllingeæg på fosterstadiet. De resulterende virusstammer anvendes derpå til fremstilling af levende virusvacciner eller oparbejdes yderligere til fremstilling af dræbte virusvacciner .
Det er almindeligt kendt af virologer, at influen-15 zavira i meget begrænset omfang vokser i cellekulturer. Væksten betegnes "et-trins-vækstcyklus"; dvs. kun replikation af virustyperne i de oprindeligt inficerede celler. Dette fænomen beskrives f.eks. af Davis et al. MICROBIOLOGY, Harper and Row Publishers, kapitel 44, pp. 1138-39 (1968). Da vi-20 raene af de oprindeligt inficerede celler ikke er i stand til at inficere efterfølgende antal celler i den samme cellekultur, er de resulterende udbytter alt for lave til at kunne anvendes i fremstillingen af virusvacciner. Således har flydende cellekulturer ikke været anvendt til kommerciel 25 produktion af influenzavirusvacciner.
Kyllingeæg på fosterstadiet anvendes til fremstilling af vira med titre, der er tilstrækkelige høje til at kunne anvendes i fremstillingen af vacciner. Uheldigvis kræver embryo-dyrkede vira sædvanligvis koncentration, og, i til-30 fælde af human-vacciner, kræver de også nogen form for rensning for at reducere toksiske reaktioner på grund af uønskede ægproteiner. Anvendelsen af æggene til vaccinefremstilling er tidsrøvende, kræver meget arbejde og relativt store materialeomkostninger, og udbyttet fra et æg er i almindelighed 35 kun nok til at fremstille vaccine til ca. 1 til 1,5 doser. Således kræver fremstillingen af millioner af doser inoku-
DK 154749 B
2 lering og høstning af millioner af æg på fosterstadiet.
Det er for nylig blevet konstateret, at mange forskellige typer A-influenzavirus omfattende human-, heste-, svine-og fuglestammer, vokser produktivt i en etableret linie af 5 hundenyreceller under et overlejret middel indeholdende trypsin og danner velafgrænsede pletter uden hensyn til deres tidligere passagehistorie. Se artiklen af K. Tobita et al, "Plaque Assay and Primary Isolation of Influenza A Viruses in an Established Line of Canine Kidney Cells (MDCK) 10 in the presence of Trypsin", Med. Microbiol. Immunol. 162, 9-14 (1975). Se også artiklen af Hans-Dieter Klenk et al, "Activation of Influenza A Viruses by Trypsin Treatment", Virology 68, 426-439 (1975). Det skal understreges, at virkningerne af trypsin på influenzaviruspropagering i de oven-15 nævnte rapporter er konstateret i halv-faste kulturer ved pletdannelsesanalyser og isoleringsmetoder, hvoraf ingen angår flydende cellekulturer eller den store skala eller kommercielle propagering af influenzavira til vaccinefremstilling. Udtrykket flydende cellekultur anvendt i den fore-20 liggende tekst beskriver in vitro-væksten af celler og propagering af virus i et kemisk defineret flydende middel.
Helt overraskende har det nu vist sig, at proteolyti-ske enzymer også kan anvendes i flydende cellekulturer til at fremme infektionen af efterfølgende antal celler i den 25 samme cellekultur. Ved således at overvinde begrænsningerne af "et-trins-vækstcyklen" af tidligere flydende cellekulturteknikker er det muligt at opnå et udbytte af influenzavirus, som er i området fra ca. 1.000 til 10.000 gange større end ikke-protease-behandlede kulturer. Dette muliggør anvendelsen 30 af flydende celledyrkningsteknik til den kommercielle fremstilling af influenzavacciner, hvorved de ulemper, der er forbundet med at anvende kyllingeæg på fosterstadiet, undgås. Enkeltheder ved det her omhandlede dyrkningsmedium, viruspro-pageringsteknikken og vaccinefremstilling og anvendelses-35 metoder beskrives i det følgende.
I Chem. Abstr. 84 (1976), 71361p og 71362q, er (lige-
DK 154749 B
3 som i ovennævnte publikationer) beskrevet anvendelsen af trypsin til forhøjelse af infektionsevnen af influenzavira ved pletdannelse. Dette kan dog ikke sammenlignes med anvendelsen af trypsin (eller andre proteaser) til formering af 5 influenzavira i flydende cellekulturer og til fremstilling af vacciner. I de to litteratur steder er der ikke angivet noget om vaccinefremstilling. De angår derimod undersøgelse til forståelse af mekanismen ved virussmitsomhed og ved forøgelsen af denne smitsomhed ved enzymatisk spaltning af 10 bestemte grupper på disse vira. Dette fænomen følges ved pletdannelse.
Pletdannelsen tyder på, at de undersøgte vira har en nævneværdig smitsomhed. Sådanne pletter undersøges i et halvfast medium, som regel agar.
15 I modsætning hertil anvendes der ifølge den forelig gende opfindelse ingen halvfaste medier, og der dannes heller ingen pletter. Tværtimod anvendes der flydende cellekulturer til virusformeringen. Ifølge den kendte teknik har sådanne flydende cellekulturer ikke kunnet anvendes til fremstillin-20 gen af influenzavirusvacciner, da viruset ikke udviser nogen nævneværdig formeringshastighed i sådanne kulturer. Den her omhandlede medanvendelse af proteolytiske enzymer muliggør for første gang anvendelsen af flydende cellekulturer til fremstilling af influenzavirusvacciner i den ovenfor omtalte 25 målestok.
I overensstemmelse hermed angår den foreliggende opfindelse en fremgangsmåde af den indledningsvis angivne art til fremstilling af en influenzavirusvaccine, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at en del af cellerne i 30 en flydende cellekultur inficeres med et influenzavirus, og den inficerede kultur inkuberes i nærværelse af et proteoly-tisk enzym, hvis koncentration er tilstrækkelig til at bevirke vækst i flere cyklusser uden at forårsage en løsrivelse af celler i de tilfælde, hvor der som cellekultur anvendes 35 et sammenflydende monolag.
Det ved den her omhandlede fremgangsmåde anvendte
DK 154749 B
4 influenzaviruspropageringsmedium omfatter en cellekultur, der kan inficeres med et influenzavirus, et influenzavirus og et proteinhydrolyserende enzym, idet mængden af enzym er tilstrækkelig til at udelukke et-trin-vækstcyclen af viruset.
5 Den her omhandlede fremgangsmåde omfatter inokulering eller inficering af en flydende influenzaviruscellekultur med influenzavirustyperne, inkubering af inokulatet i nærværelse af et proteinhydrolyserende enzym under betingelser, der er tilstrækkelige til at sikre den i eksemplerne viste virus-10 vækst (eller en tilsvarende cytopatisk virkning), og høstning af viruset. Inficering af celler med viruset kan ske før eller efter cellemonolagsdannelse eller, som et alternativ, ved simpelt hen at inficere en flydende suspension af cellerne. I et efterfølgende trin dræbes det høstede virus, 15 eller det svækkes til vaccineanvendelse ved yderligere cellekulturpassage. Særligt foretrukne udførelsesformer anvender proteasetrypsin i forbindelse med en hundenyrecellelinie til propagering af en hvilken som helst af de forskellige typer influenzavira.
20 Opfindelsen skal i det følgende illustreres nærmere under henvisning til tegningen.
Fig. 1-5 er søjlediagrammer, der illustrerer stigningerne i opnået titer, når de angivne virusstammer inkuberes i en flydende cellekultur i nærværelse af forskellige 25 mængder af en typisk protease, trypsin. Resultater angives som geometriske middeltitre. Specielle udførelsesformer for opfindelsen er beskrevet i det følgende.
Den her omhandlede vaccinefremstillingsmetode indebærer anvendelsen af influenzavaccinevira. Anvendt i den 30 foreliggende tekst omfatter udtrykket influenzavirus en hvilken som helst type virus, der er i stand til at forårsage en febril sygdomstilstand hos dyr og mennesker, der viser sig ved åndedrætssymptomer, betændelse af slimhinder og ofte systemiske følger. Den her omhandlede fremgangsmåde er 35 især anvendelig ved dyrkningen af forskellige influenzavira, inklusiv human-, heste-, svine- og fuglestammer. Eksempler
DK 154749 B
5 på produktionen af typiske A- og B-influenzavirustyper beskrives i det efterfølgende.
Fremstillede vaccinepræparater omfatter et hvilket som helst præparat af dræbte, levende, svækkede eller fuldt 5 ud virulente influenzavira, der kan indgives til at frembringe eller kunstigt at forøge immuniteten over for en hvilken som helst influenzasygdom. I foretrukne udførelsesformer omfatter vaccinen en vandig suspension af viruspartiklerne i brugsfærdig form.
10 De cellekulturer, der anses for at være anvendelige ved udførelsen af den er omhandlede fremgangsmåde, omfatter en hvilken som helst animalsk cellelinie eller cellestamme, der kan inficeres af, og som tillader replikation af en eller flere givne influenzavirusstammer. Skønt et antal af 15 sådanne celler er kendte og betragtes som anvendelige for den her omhandlede fremgangsmåde, er der opnået særlig gode resultater med en bestemt cellelinie, nemlig en hundenyrecel-lelinie, som er kendt som Cutter Laboratories Dog Kidney (CLDK)-cellelinie. CLDK-cellelinien er anerkendt af U.S.
20 Department of Agriculture til anvendelse ved fremstillingen af veterinærvacciner og er af samme art som Madin Darby Dog Kidney Cell Line (ATCC NO. CCL 34) og den hundenyrecelleli-nie, der er beskrevet i USA-patentskrift nr. 3.616.203. En kort historie og beskrivelse af den specielle mastercelle-25 stamme, der anvendes for cellelinien i eksemplerne, følger, skønt det må forstås, at den her omhandlede teknik er anvendelig i forbindelse med enhver influenzavirus-modtagelig cellekultur.
30 CUTTER LABORATORIES DOG KIDNEY (CLDK)-CELLELINIE Historie
Stamlinien af CLDK er oprettet ved Cutter Laborato-35 ries, Inc., Berkeley, Californien, fra nyren af en tilsyneladende normal beaglehund fra University of California i Davis.
DK 154749 B
6
Linien holdes på 0,5% lactalbumin-hydrolysat og 0,2% gærekstrakt i Earle's afbalancerede saltopløsning plus 5% kalve-, lamme- eller hesteserum og antibiotika og dyrkes efter fremgangsmåder ifølge J.S. Younger (Proc. of Exp. Biol, and 5 Med., bind 85, 202 (1963)).
En frossen ampul af den 142ende passage af denne cellelinie plantes derpå i en 75 cm2 (250 ml) Falcon-kolbe, i vævskulturmedium bestående af Earle's afbalancerede saltopløsning Minimum Essential Medium (MEM) og 10% oksefoster-10 serum. Cellerne dyrkes som en subkultur på samme måde og medium til fremstilling af den frosne master-cellestamme ved passage 148.
En ampul af master-cellestammen optøes, plantes og dyrkes i serie som subkultur 20 gange til opnåelse af fla-15 skekulturer af den 168ende passage. Disse celler fryses derpå.
BESKRIVELSE AF MASTER-CELLESTAMME fMCSl Antal serie-subkulturer fra oprindeligt væv: 148 20 Frysemedium: Minimum Essential Medium (Eagle) i Earle's BSS med reduceret bicarbonat (1,65 gm/liter) 80%; oksefosterserum 10%, dimethylsulfoxid 10%.
Levedygtighed: Ca. 75% (farveudelukkelse).
Kulturmedium: Minimum Essential Medium (Eagle) i Earle's 25 BSS med reduceret bicarbonat (1,65 gm/liter) 90%; okseserum 2-10%; antibiotics penicillin og streptomycin 100 U. eller Tr/ml.
Vækstkarakteristika af optøede celler: Et podestof af 3 x 106 levedygtige celler/ml dyrket i det ovennævnte kul-30 turmedium ved 37°C i et lukket system, multipliceres 6-8 fold på 5 dage.
Morphologi: Epitel-lignende.
Karyologi: Chromosom-frekvens-fordeling 100 celler: 2N = 72.
35
DK 154749 B
7
Celler 112469 69 53
Chromosomer 60 65 68 69 70 71 72 73 74 5 Ingen markeringschromosomer.
Sterilitetsforsøq: Fri for mycoplasma, bakterier og svampe. Arter; Bekræftet som værende af hundetypen ved hjælp af immunofluorescensforsøg.
Virusmodtaqeliahed; Modtagelig over for influenzavira, ra-10 biesvirus, smitsom okserhinotracheitis, smitsom hundehepatitis, hundesygevirus, og muligvis andre vira.
Proteinhydrolyserende enzymer (proteolytisk enzym eller protease), der har vist sig anvendelige til formålene ifølge opfindelsen, omfatter velkendte proteaser, såsom 15 trypsin, chymotrypsin, pepsin, pancreatin, papain, pronase og carboxypeptidase, hvoraf trypsin er et særligt foretrukket enzym. Den(de) nøjagtige mekanisme(r), ved hvilken en protease, såsom trypsin, forstærker influenzavirusinfektionsevnen, er ikke fuldstændig kendt. En mulig mekanisme er 20 foreslået i den ovennævnte artikel af Klenk et al.
Som beskrevet nedenfor skal mængden af aktiv protease, der er nødvendig til at forstærke efterfølgende infektionsevne, være mindst så stor, at den udelukker begrænsningerne ved ettrins-vækstcyclen, men i tilfælde af sammenflydende 25 monolagskulturer ikke så stor, at der sker en løsrivelse af sammenflydende celler fra overfladerne af vævsdyrkningsbeholderen (f.eks. den indre overflade af en roterende flaske).
Hvor der er tale om det specifikke enzym, der anvendes i de efterfølgende eksempler, foretrækkes det, at mængden af 30 enzymet er i området fra 4 til 25 μg pr. ml flydende vævskulturmedium, fortrinsvis ca. 10 jug/ml.
VIRUSPROPAGERINGSMETODER
35 Den her omhandlede fremgangsmåde til influenzavirus- propagering omfatter de tre generelle trin inficering af en del af cellerne i en flydende cellekultur med influenzaviru-
DK 154749 B
8 set^ inkuber inc^ af cellerne i nærværelse af et proteolytisk enzym under betingelser, der er tilstrækkelige til at sikre maksimal cytopatisk (CP) virkning, og høstning af viraene fra kulturen. Til vaccinefremstilling knytter sig hertil et 5 efterfølgende trin til modificering af det høstede virus ved kendte metoder, som resulterer i en vaccine med levende, virulent eller svækket virus eller en vaccine med dræbt (inaktivt) virus. Vaccinen kan være tilgængelig i tør form, som kan blandes med et fortyndingsmiddel, eller i flydende, 10 brugsfærdig form. Egnede hjælpestoffer kan tilsættes, som beskrevet nedenfor, for at forøge immunogeniteten.
Proteasen kan sættes til en vandig suspensionscellekultur eller efter dannelsen af en sammenflydende monolagskultur. Eksempler på nogle af de forskellige propage-15 ringsmetoder er beskrevet nedenfor.
METODE A - Inficering af præ-fremstillede monolag 1. Celler dyrkes til sammenløb i kulturbeholdere, f.eks.
20 roterende flasker, Povitsky-kolber, eller Roux-flasker, idet der anvendes kendte cellekulturvækstmedier.
2. Inden inficering fjernes vækstmediet fra cellemonolagene.
25 3. Influenzavirus-arbejdspodestoffet opløses i et vækstmedium med en pH-værdi på 6,6 til 6,8 og indeholdende yderligere vitaminer, ikke-essentielle aminosyrer, L-glutamin, dextrose og antibiotika.
30 4. En mængde fortyndingsmiddel, der indeholder viruset, sættes til cellemonolaget i mængder på fra 10% til 100% af det endelige høstvolumen.
5. De inficerede monolag inkuberes ved 34°C til 37°C i 1 35 til 72 timer.
DK 154749 B
9 6. Protease, alene eller i kombination med viruspropagerin-gsmidlet, tilsættes i en koncentration, som stimulerer multipel cyklusvækst uden at producere løsrevne celler. For trypsin er denne optimale koncentration mellem 8 og 15 μ^/τύ..
5 7. Virusvækstbeholderne inkuberes endnu en gang ved 34°C til 37“C, indtil der konstateres maksimale cytopatiske virkninger. På dette stadium høstes virusvæskerne.
10 8. Høst indebærer, at beholderne rystes kraftigt for at fjerne cellerne, og væskerne og cellerne overføres til en steril beholder til yderligere behandling.
METODE B - Inficering af flydende cellesuspension inden 15 dannelse af monolag 1. Celler fjernes fra vækstbeholdere under anvendelse af gængse metoder.
20 2. Celler koncentreres ved centrifugering, resuspenderes derpå i en mængde af frisk vækstmedium indeholdende yderligere vitaminer, ikke-essentielle aminosyrer, L-glutamin, dextrose og antibiotika.
25 3. Influenzavirus sættes derpå til denne koncentrerede cel- lesuspension.
4. Cellevirussuspensionen inkuberes (25°C til 37°C) i en steril, lukket beholder (f.eks. en Erlenmeyer-kolbe med 30 skruekapsel), medens den blandes på en ryster med magnetom-rører eller rotation i 10 minutter til 4 timer.
5. Aliquotter af cellevirussuspensionen anbringes i vækstbeholdere (roterende flasker, Roux-flasker, Povitsky-kolber) 35 med det fulde volumen af medium indeholdende ingredienser angivet i B-2 plus 5% kalvefosterserum.
DK 154749 B
10 6. Vækstbeholdere inkuberes ved 34°C til 37°C, indtil der er dannet sammenflydende monolag (2 til 4 dage).
7. Efter dannelse af monolag, tilsættes protease i en kon-5 centration, som vil stimulere multipel cyklusvækst uden at producere celleslam. For trypsin er denne optimale koncentration mellem 10 og 25 μg/ml.
8. Vækstbeholdere inkuberes ved 34°C til 37°C, indtil der 10 konstateres maksimale cytopatiske virkninger. Virus høstes derpå.
9. Høst medfører, at beholdere rystes kraftigt til fjernelse af celler og overføring af celler og væsker til en steril 15 beholder til yderligere behandling.
METODE C - Inficering af flydende suspensionskultur 1. Celler tilpasset en suspensionskultur dyrkes til et op-20 timalt punkt i et vækstmedium i suspensionsvækstbeholdere.
2. celler centrifugeres og resuspenderes i en mængde af frisk medium indeholdende yderligere vitaminer, ikke-essen-tielle aminosyrer, L-glutamin, dextrose og antibiotica.
25 3. Influenzavirus tilsættes derpå, og kulturen inkuberes ved 34°C til 37°C i 1 til 72 timer.
4. Kalvefosterserum kan tilsættes, og kultursuspensionen 30 inkuberes yderligere ved 34°C til 37°C i 1 til 72 timer.
5. Protease tilsættes i en koncentration, som vil tillade multipel cyklusvækst uden at producere en skadelig virkning på cellerne.
35 6. Inkubation ved 34°C til 37°C fortsættes, indtil der kon-
DK 154749 B
11 stateres maksimale cytopatiske virkninger, på hvilket tidspunkt væskerne høstes.
7. Høst medfører overføring af væsker til en steril beholder 5 til yderligere behandling.
Specifikke eksempler på anvendelse af de her omhandlede metoder og medier ti propagering af udvalgte stammer af influenzavira følger. Med mindre andet er angivet anvendes 10 gængse vævsdyrkningsmetoder. Da fremstillingen af både celler og medier er kendt, beskrives den ikke her i detaljer.
Eksempel 1 A2-heste influenzaviruset, betegnet Miami-stammen, 15 isoleret oprindeligt fra en hest ved the University of Miami. Dette virus opnås fra the University of Pennsylvania Medical School, hvor seks passager foretages i kyllingefostre. Den syvende passage foretages og opnås fra Lederle Laboratories. Stammen underkastes yderligere kyllingefosterpassage og 20 anvendes ved passagerne 11-16.
Den her omhandlede foretrukne fremgangsmåde til vævskul turpropager ing af A2-stammer medfører inficering af et ungt, sammenflydende monolag af CLDK-celler. Celler plantes i cylindre under anvendelse af Hank's Minimum Essential 25 Medium (MEMH) indeholdende følgende bestanddele:
Oksefosterserum 5-10%
Ikke-essentielle aminosyrer, 10 ml/liter (Gibco) L-glutamin, 10 ml/liter (Gibco) 30 Neomycinsulfat, 30.000 /xg/liter
Polymyxin B, 30.000 enheder/liter Mycostatin, 25.000 enheder/liter
Cellerne er almindeligvis sammenflydende inden for 35 72 timer, på hvilket tidspunkt mediet hældes ud, og cellerne inficeres. Inokuleringsmediet indeholder A2-virus fortyndet
DK 154749 B
12 til en Egg Infective Dose (EID50) titer på ca. 103'°/hlL i MEMH suppleret med følgende bestanddele: 50% dextrose, 2,6 ml/liter 5 MEH-vitaminer, 30 ml/liter (Gibco)
Ikke-essentielle aminosyrer, 10 ml/liter (Gibco) L-Glutamin, 10 ml/liter (Gibco)
Neomycinsulfat, 30.000 jug/liter Polymyxin B, 30.000 enheder/liter 10 Mycostatin, 25.000 enheder/liter
Inokuleringsmedium svarende til 14% af slutvolumenet sættes til hver cylinder, og beholderne inkuberes ved 34°C til 35°c i 72 timer. På dette tidspunkt sættes det resterende 15 medium (86%) indeholdende 12 /zg/ml steril trypsin- (Sigma, 1:250) opløsning (0,1 g/100 ml) til hver cylinder. Beholderne inkuberes atter ved 34°C til 35°C, indtil der konstateres maksimal cytopatisk virkning (48-72 timer), på hvilket tidspunkt væskerne høstes. Høst medfører kraftig omrystning af 20 alle cylindre til fjernelse af alle fastgjorte celler og overførsel af celler og virusvæsker til en steril chargeringsbeholder til yderligere oparbejdning.
Høst-EID5o“titre af A2-influenzavirus, der dyrkes under anvendelse af den her omhandlede teknik, vises i tabel 25 I. Se også fig. 1. Der foretages en sammenligning med A2-virus dyrket ved samme metode, men uden tilsætning af trypsin.
30 35
DK 154749 B
13
Tabel I eid50 af
Hesteinfluenzavirus af Miami-stammen dyrket i CLDK-celler med og uden trypsin 5 Mængde trypsin Titer (EID5o/ml) Fold forøgelse (/xg/ml) Tilførsel Høst med trypsin 10
Ingen 102'6 106'2 ----
Ingen ίο3'2 io6'2 ---- 5 102'9 108'3 126 5 ΙΟ2'9 108'1 19 15 5 102'6 >109'2 >1.00.0 10 102'9 109'2 1.000 10 ΙΟ2'9 108'5 200 10 103'2 108'2 100 10 ίο3'2 1010'0 6.310 20 10 103/1 1014'5 199.526.232 15 ΙΟ3'1 108/9 50:1
Inkorporering af trypsin i vækstmediet giver en geometrisk middelforøgelse på 3,2 log eller 1711 gange så mange 25 viruspartikler/ml i løbet af produktionen af Miami-stammen.
Eksempel 2
En prøve på en virulent type Al-hesteinfluenzavirus opnås fra the University of Pennsylvania Medical School.
30 Stammen, betegnet Pennsylvania (Al), isoleres fra en hest og passeres gennem kyllingefoster seks gange. Stammen underkastes yderligere kyllingefosterpassage og anvendes til vævskulturfremstilling ved passagerne 12-17.
Den foretrukne metode til vævskulturpropagering af 35 Al-stammen medfører inficering af en suspension af CLDK- -celler inden monolagdannelse. CLDK-celler i en koncentration på ca. 105'5/ml, Pennsylvania-virusstamme ved en EIB50-titer på 103'0 af 10 3'°/ml til 105'°/ml og Hank's Minimum
DK 154749 B
14
Essential Medium (MEMH) suppleret med de nedenfor nævnte bestanddele, inkuberes ved 25°C, medens de blandes på en magnetisk omrører i en lukket, steril Erlenmeyer-kolbe. pH-Værdien holdes på 6,7-6,8 med 1 N HCl i løbet af inkubations-5 perioden på 2-3 timer.
Suppleret MEMH
50% dextrose, 2,6 ml/liter MEM-vitaminer, 30 ml/liter (gibco) 10 Ikke-essentielle Aminosyrer, 10 ml/liter (Gibco) L-glutamin, 10 ml/liter (Gibco)
Neomycinsulfat, 30.000 /xg/liter Polymyxin B, 30.000 enheder/liter Mycostatin, 25.000 enheder/liter 15
Efter denne suspensionsinkubation sættes 10 ml ali-quotter af cellevirussuspensionen til cylindre indeholdende 1 liter MEMH suppleret som ovenfor nævnt og indeholdende 5% kalvefosterserum. Cylindrene inkuberes ved 34°C til 35°C, 20 indtil monolaget er sammenflydende (ca. 48 til 72 timer), hvorefter 20 ml af en steril 1 mg/ml trypsinopløsning (Sigma 1:250) sættes til hver cylinder. Cylindrene inkuberes atter ved 34° C til 35 “C, indtil maksimal cytopatisk virkning er konstateret (3-5 dage). Virusvæskerne høstes ved at ryste 25 alle cylindrene kraftigt til fjernelse af celler, som er blevet tilbage, og overføre celler og væsker til en steril beholder til yderligere oparbejdning.
Høst-EIDsg-titre af Al-influenzavirus dyrket under anvendelse af den her omhandlede teknik vises i tabel II.
30 Se også fig. 2. Der foretages en sammenligning med Al-virus dyrket efter samme metode eksklusiv trypsin.
35
DK 154749 B
15
Tabel II EIDsø-titre af
Hesteinfluenzavirus af Pennsylvania-stammen dyrket i CLDK-celler med og uden trypsin 5 Mængde trypsin Titer (EIDgg/ml) Fold forøgelse (pg/ml) Tilførsel Høst med trypsin 10
Ingen 105'3 105'9 ----
Ingen ΙΟ4'9 105'4 ---- 10 105'3 107'4 50 10 104'9 106,8 13 15 10 105/1 108'0 200 20 IO5/3 108'7 1.000 20 ΙΟ4'9 108'5 631 20 105'0 107'1 25 20 ΙΟ4'9 IO8/3 398 20 20 103'2 109'2 3.162 20 ΙΟ3'2 107'5 63 20 103'2 108'2 316
Inkorporering af trypsin i vækstmediet giver en geo-25 metrisk middelforøgelse af 2,3 log eller 187 gange så mange viruspartikler/ml i løbet af produktionen af Pennsylvania-stammen .
Eksempel 3 30 En stamme af human-influenzavirus betegnet B/Hong
Kong/5/72 (BX-1) opnås fra The Center for Disease Control i Atlanta, Georgia. Denne passeres én gang gennem kyllingeæg på fosterstadiet og fryses ved -70“C som arbejdspodevirus.
Den foretrukne fremgangsmåde til vævskulturpropagering 35 af B/Hong Kong/5/72-stammen medfører inficering af et ungt sammenflydende monolag af CLDK-celler, der ligner monolaget i eksempel 1. Cellerne dyrkes som beskrevet i eksempel 1« Vækstmediet fjernes fra cellerne og kasseres. Cellerne in=
DK 154749 B
16 ficeres derpå med virus opløst i det inokulerede medium angivet i eksempel 1 til en EID50-titer på ca. 103'°“5'°/ml. Inokulet består et volumen ækvivalent med 33,3% af sluthøst-volumenet. Beholdere inkuberes ved 3 4° C til 35eC i 40 til 5 48 timer, hvorefter det tilbageværende medium (66,7%) in deholdende 12 Mg/ml trypsinopløsning (0,1 g/100 ml) sættes til hver beholder. Inkubering ved 3 4° C - 35° C fortsættes, indtil der er konstateret maksimal cytopatisk virkning (48-72 timer), på hvilket tidspunkt virusvæskerne høstes. Høst 10 medfører kraftig omrystning af alle beholdere til fjernelse af celler og overføring af celler og væsker til en steril beholder til yderligere oparbejdning.
Høst-EID5Q-titre af B/Hong Kong/5/72-influenzavirus dyrket under anvendelse af denne teknik vises i tabel III.
15 Se også fig. 3. En sammenligning foretages med denne stamme dyrket efter samme metode, men uden tilsætning af trypsin.
Tabel III
EID50-titre af human-influenzavirus af B/Hong 20 Kong/5/72-stammen dyrket i CLDK-celler med og uden trypsin Mængde trypsin Titer (EID5o/ml) Fold forøgelse 25 (jtig/ml) Tilførsel Høst med trypsin
Ingen 103'2 106'0 ----
Ingen ΙΟ5'7 106'4 ---- 30 8 ΙΟ3'0 108'7 316 8 ΙΟ2'0 109'0 631 8 ΙΟ4'5 109'5 1.995 8 103'5 >1010'2 >10.000 35 Inkorporering af trypsin i vækstmediet giver en geo metrisk middelforøgelse på 3,1 log eller 1412 gange så mange viruspartikler i løbet af produktionen af B/Hong Kong-stam-men.
DK 154749 B
17
Eksempel 4
En stamme af human-influenzavirus betegnet A/Texas/-1/77 opnås fra The Center for Disease Control i Atlanta, Georgia. Denne passeres én gang gennem kyllingeæg på foster-5 stadiet og fryses ved -70°C som arbejdspodevirus.
Den foretrukne fremgangsmåde til vævskulturpropagering af A/Texas/l/77-stammen er den, der beskrives i eksempel 3.
Høst-EID50-titre af A/Texas/l/77-humaninfluenzavirus dyrket under anvendelse af denne teknik vises i tabel IV.
10 En sammenligning foretages med denne stamme dyrket efter samme metode, men uden tilsætning af trypsin.
Tabel IV
15 EIDgg-titre af human-influenzavirus af A/Texas/1/77- stammen dyrket i CLDK-celler med og uden trypsin Mængde trypsin Titer (EID50/111I) Fold forøgelse 20 (Mg/ml) Tilførsel Høst med trypsin
Ingen ΙΟ5'2 105'2 ---- 8 105'1 108'9 5.012 25 8 104'1 >1010'2 >100.000 10 ΙΟ3'0 108'3 1.259 10 102'0 109'8 39.811
Inkorporering af trypsin med vækstmediet giver en 30 geometrisk middelforøgelse på 4,1 log eller 12590 gange så mange viruspartikler/ml i løbet af produktionen af A/Texas-stammen.
Eksempel 5 35 En stamme af human-influenzavirus betegnet A/USSR/9Q/- 77 opnås fra The Center for Disease Control i Atlanta, Georgia. Denne passeres én gang gennem kyllingeæg på fosterstadiet og fryses ved -70°c som arbejdspodevirus.
IS
DK 154749B
Den foretrukne metode til vævskulturpropagering af A/USSR/90/77-stammen er den samme som beskrevet i eksempel 3.
Høst-EID50-titre af A/USSR/90/77-humaninfluenzavirus 5 dyrket under anvendelse af denne teknik vises i tabel V. Se også fig. 5. En sammenligning foretages med denne stamme dyrket efter samme metode, men uden tilsætning af trypsin.
Tabel V
10 EIDgQ-titre af human-influenzavirus af A/USSR/90/77- stammen dyrket i CLDK-celler med og uden trypsin Mængde trypsin Titer (EIDsg/ml) Fold forøgelse 15 (μq/τal) Tilførsel Høst med trypsin
Ingen ΙΟ4'0 106'3 ---- 10 ΙΟ4'0 108'7 251 20 10 104'0 109'0 501 10 ΙΟ4'5 108'4 126
Inkorporering af trypsin i vækstmediet giver en geometrisk middelforøgelse på 2,4 log eller 251 gange så mange 25 viruspartikler/ml i løbet af fremstillingen af A/USSR-stam-men.
VACCINEFREMSTILLING
30 Eksempel 6 - Virussvækkelse
Svækkelse af viruset fra høstede væsker ifølge eksempel 1 opnås kemisk eller ved standardseriepassager omfattende slutfortyndingspassagemetoder, hvorved der anvendes et tilstrækkeligt antal passager i en modtagelig cellekultur, 35 indtil viruset er gjort ikke-patogent uden tab af immunoge-nicitet. En vaccine fremstillet på denne måde vil stimulere en immunreaktion hos dyr, der er modtagelige for sygdomme, uden i bemærkelsesværdig grad at fremkalde de kliniske symp
DK 154749B
19 tomer, der normalt skyldes det virulente stof. Propageringen kan foretages i væv, som er de samme som eller forskellige fra de væv, der anvendes i den foregående passage.
5 Eksempel 7 - Virusinaktiverina
Metoden er den samme som beskrevet i eksempel 1 og 2, men de høstede virusmættede væsker oparbejdes yderligere ved inaktivering med 0,1% koncentration af formaldehyd (i området fra 0,05 til 0,2%), og det behandlede materiale in-10 kuberes ved 4°C i 10 til 14 dage. Afprøvning af det endelige inaktiverede viruspræparat viser, at det ikke indeholder levende virus. Kendte hjælpestoffer, f.eks. aluminiumhydroxid, alun, aluminiumphosphat, Freund's, eller de hjælpestoffer, der er beskrevet i USA-patentskrifter nr. 3.790.665 og 15 3.919.411, kan tilsættes. Det foretrukne hjælpestof ifølge den her omhandlede opfindelse og det, der anvendes i den her omhandlede vaccine, er en acrylsyrepolymer, der er tværbundet med et polyallylsaccharid ("Carbopol® 934 P"), der er det samme som det, der er beskrevet i ovennævnte patent-20 skrifter.
Eksempel 8 - Inaktiveret virusvaccine Fremstilling og anvendelse
En 0,1 ml hestedosis består af 0,45 ml af Pennsyl-25 vania-(Al)-stammen, 0,45 ml af Miami-(A2) -stammen og 0,10 ml af "Carbopol®"-hjælpestoffet. Lige dele af de inaktiverede vaccinestammer opnået fra eksempel 7 blandes, og 1 ml ali-quotter indgives intramuskulært til 19 heste. Der konstateres ikke nogen klinisk sygdom eller symptomer på influenza hos 30 nogen af hestene efter vaccination. Antistof-titre imod både Al-hesteinfluenza og A2-hesteinfluenza opnås på blodsera hos alle dyr ved 2-, 4- og 8-ugers efterfølgende inokulering.
Disse sammenlignes med præ-inokulerings-niveauer (tabel VI) under anvendelse af standard-haemagglutinations-inhiberings-35 -forsøg (DIAGNOSTIC PROCEDURES for Viral and Rickettsial Infections, 4. udgave; Lennette and Schmidt^ side 665-66
DK 154749 B
20 (1969). American Public Health Association, N.Y., N.Y.
10019).
Tabel VI 5
Antistofreaktioner (Haemagglutination-inhibering)
Al-hesteinfluenza A2-hesteinfluenza 10__
Hest nr. Præ. 2 uger 4 uger*) 8 uger Præ. 2 uger 4 uger*) 8 uger 15 2 <8 8.192 8.192 8.192 <8 512 128 256 11 <8 128 256 128 <8 64 1.024 64 13 <8 128 256 2.048 <8 256 256 1.024 19 <8 256 64 64 <8 128 128 64 20 21 <8 128 64 512 <8 64 64 512 23 <8 256 128 128 <8 512 512 128 29 <8 128 32 1.024 <8 256 64 128 32 <8 1.024 256 2.048 <8 64 64 128 37 <8 128 32 512 <8 64 32 64 25 38 <8 1.024 512 1.024 <8 512 256 64 40 <8 256 128 1.024 <8 128 128 128 55 <8 512 512 8.192 <8 512 256 256 61 <8 512 64 256 <8 1.024 128 128 68 <8 128 32 128 <8 512 256 256 30 79 <8 64 128 2.048 <8 256 128 128 121 <8 <8 32 512 <8 1.024 256 64 125 <8 256 32 128 <8 256 128 128 128 <8 512 128 512 <8 256 128 256 129 <8 256 128 2.048 <8 512 512 256 35 *) Fornyet indgift til forøgelse af effekten.
Som det fremgår af tabel VI, udvikles der antistoffer mod begge virusantigener i heste, der modtager inokuleringer.
40 Disse vaccinerede dyr er immune over for hesteinfluenza, idet antistoftitre på mere end 1:20 over for A2 og 1:60 over for Al anerkendes af the National Veterinary Services Laboratories of the U.S. Department of Agriculture som værende beskyttende.
45 Kliniske prøver i 420 heste af forskellig race og alder viser, at vaccinen er sikker, og at den ikke medfører
DK 154749 B
21 uheldige reaktioner efter intramuskulær inokulering.
Eksempel 9 - Anvendelse af svækket virusvaccine 5 ml af den levende, svækkede A2-hesteinfluenzavac-5 cinestamme ifølge eksempel 6 indgives intranasalt til tre heste. Der observeres ingen klinsk sygdom eller symptomer på influenza hos nogen af hestene efter vaccination. Anti-stof-titre imod vaccine-stammen opnå på blodsera hos alle dyr ved inokulering efter 1, 2 og 4 uger og sammenlignes 10 med præ-inokuleringsniveauet under anvendelse af standard--haemagglutinations-inhiberings-forsøg (HAI).
Tabel VII
ANTISTOFREAKTION fHAIi - A2-Hesteinfluenza 15
Hest nr. Præ 1 uae 2 uaer 4 ucrer 19 <8 128 256 128 23 8 64 128 128 20 61 <8 128 256 128
Endnu engang er de opnåede antistoftitre større end nødvendigt til beskyttelse.
Det skal bemærkes, at den foreliggende opfindelse 25 angår både et hidtil ukendt influenzakultursystem og anvendelsen af mediet til fremstilling af en hidtil ukendt in-fluenzavaccine. Det flydende cellekultursystem, der anvendes ved den her omhandlede opfindelse, medfører anvendelsen af modtagelige celler, influenzavira, et næringsmedium og et 30 proteolytisk enzym, men i modsætning til kendte systemer (f.eks. Tobita et al) kræver det ikke anvendelse af agar, som reducerer systemet til en halv-fast tilstand. Udelukkelsen af agar muliggør således produktion af vira i stor målestok på sædvanligvis kendt måde og resulterer i fremstil!in-35 gen af virusvæsker med tilstrækkelig høje titre til fremstilling af vacciner.
DK 154749 B
22
Selve influenzavaccinefremstillingen omfatter effektive mængder af en eller flere stammer af givne influenzaviruspartikler og et farmaceutisk acceptabelt bæremateriale, idet slutproduktet, fortrinsvis i vandig form, i det 5 væsentlige er fri for reaktionsdygtige proteiner, f.eks, ægproteiner. Som anvendt i det foreliggende betyder udtrykket i det væsentlige fri for ægprotein, at den eneste mulige ægproteinkilde i vaccinepræparaterne er podeviruset, som er fortyndet >1:100.000.
10 Vaccinerne indgives til dyr på forskellig måde, f.eks.
intramuskulært, intravenøst, subcutant, intratrachealt, intranasalt eller ved aerosolspray, og vaccinerne er beregnet på fordelagtig anvendelse i forskellige dyr, inklusiv humanheste-, orme- og fuglegrupper.
15 Viruspræparaterne fremstillet ifølge den foreliggende opfindelse kan fortyndes med vand til regulering af deres styrke, og de kan være tilsat stabiliseringsmidler, f.eks. saccharose, dextrose, lactose, eller andre ikke-toksiske bestanddele. Viruspræparaterne kan være tørret ved hjælp af 20 frysetørring til oplagringsformål eller til efterfølgende udformning i svækkede vacciner, eller de kan være kemisk inaktiverede til fremstilling af dræbte virusvacciner.
Claims (5)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af en influenzavi-rusvaccine, ved hvilken fremgangsmåde celler inficeres med et influenzavirus, viruset formeres i cellerne, hvorefter 5 viruset isoleres, og ud fra det isolerede virus fremstilles der en vaccine, kendetegnet ved, at en del af cellerne i en flydende cellekultur inficeres med et influenzavirus, og den inficerede kultur inkuberes i nærværelse af et proteolytisk enzym, hvis koncentration er tilstrækkelig 10 til at bevirke vækst i flere cyklusser uden at forårsage en løsrivelse af celler i de tilfælde, hvor der som cellekultur anvendes et sammenflydende monolag.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der som proteolytisk enzym anvendes trypsin, 15 chymotrypsin, pepsin, pancreatin, papain, pronase og carboxy-peptidase.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 og 2, kendetegnet ved, at der som proteolytisk enzym tilsættes trypsin i en mængde på fra 4 til 25 βg pr. ml flydende celle- 20 kultur.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1-3, kendetegnet ved, at der som virus anvendes et hesteinfluenzavirus eller et humaninfluenzavirus.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 1-4, kendete g-25 net ved, at der som celler i den flydende cellekultur anvendes hundenyreceller.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US3923679A | 1979-05-15 | 1979-05-15 | |
| US3923679 | 1979-05-15 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK212580A DK212580A (da) | 1980-11-16 |
| DK154749B true DK154749B (da) | 1988-12-19 |
| DK154749C DK154749C (da) | 1989-05-16 |
Family
ID=21904398
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK212580A DK154749C (da) | 1979-05-15 | 1980-05-14 | Fremgangsmaade til fremstilling af en influenzavirusvaccine i en flydende cellekultur |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0019218B2 (da) |
| JP (1) | JPS55153723A (da) |
| AR (1) | AR220838A1 (da) |
| AT (1) | ATE16454T1 (da) |
| AU (1) | AU535804B2 (da) |
| CA (1) | CA1122527A (da) |
| DE (1) | DE3071225D1 (da) |
| DK (1) | DK154749C (da) |
| ES (1) | ES491517A0 (da) |
| IL (1) | IL60063A0 (da) |
| NO (1) | NO801443L (da) |
| RO (1) | RO79525B (da) |
| YU (1) | YU41923B (da) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6146873A (en) * | 1994-11-10 | 2000-11-14 | Baxter Aktiengesellschaft | Production of orthomyxoviruses in monkey kidney cells using protein-free media |
| US5753489A (en) * | 1994-11-10 | 1998-05-19 | Immuno Ag | Method for producing viruses and vaccines in serum-free culture |
| EP0791055B1 (en) * | 1994-11-10 | 2012-01-25 | Baxter Healthcare S.A. | Method for producing biologicals in protein-free culture |
| US5698433A (en) * | 1994-11-10 | 1997-12-16 | Immuno Ag | Method for producing influenza virus and vaccine |
| WO1996015232A1 (en) * | 1994-11-16 | 1996-05-23 | St. Jude Children's Research Hospital | Novel replication process |
| DE19612967A1 (de) * | 1996-04-01 | 1997-10-02 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Vermehrung von Influenzaviren in Zellkultur, sowie die durch das Verfahren erhältlichen Influenzaviren |
| DE19612966B4 (de) | 1996-04-01 | 2009-12-10 | Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh & Co. Kg | MDCK-Zellen und Verfahren zur Vermehrung von Influenzaviren |
| DE10144906B4 (de) | 2001-09-12 | 2013-11-28 | Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh | Verfahren zur großtechnischen Herstellung von Impfstoffen |
| US6830917B2 (en) | 2001-12-10 | 2004-12-14 | Baxter Healthcare S.A. | Method of isolation and purification of trypsin from pronase protease and use thereof |
| EP2923711A1 (en) | 2004-11-03 | 2015-09-30 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Influenza vaccination |
| US7883844B2 (en) | 2006-05-11 | 2011-02-08 | Juridical Foundation The Chemosero-Therapeutic Research Institute | Method for propagating influenza virus |
| US8506966B2 (en) | 2008-02-22 | 2013-08-13 | Novartis Ag | Adjuvanted influenza vaccines for pediatric use |
| TW201012930A (en) * | 2008-06-16 | 2010-04-01 | Intervet Int Bv | Method of replicating viruses in suspension |
| EP2396032B1 (en) | 2009-02-10 | 2016-09-28 | Seqirus UK Limited | Influenza vaccines with reduced amounts of squalene |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2262962A1 (da) * | 1974-03-05 | 1975-10-03 | Science Union & Cie |
-
1980
- 1980-04-22 CA CA350,366A patent/CA1122527A/en not_active Expired
- 1980-04-30 AR AR280860A patent/AR220838A1/es active
- 1980-05-08 DE DE8080102525T patent/DE3071225D1/de not_active Expired
- 1980-05-08 EP EP80102525A patent/EP0019218B2/de not_active Expired - Lifetime
- 1980-05-08 AT AT80102525T patent/ATE16454T1/de not_active IP Right Cessation
- 1980-05-09 AU AU58244/80A patent/AU535804B2/en not_active Expired
- 1980-05-13 YU YU1265/80A patent/YU41923B/xx unknown
- 1980-05-13 JP JP6235780A patent/JPS55153723A/ja active Granted
- 1980-05-13 IL IL60063A patent/IL60063A0/xx unknown
- 1980-05-13 RO RO101109A patent/RO79525B/ro unknown
- 1980-05-14 DK DK212580A patent/DK154749C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-05-14 ES ES491517A patent/ES491517A0/es active Granted
- 1980-05-14 NO NO801443A patent/NO801443L/no unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2262962A1 (da) * | 1974-03-05 | 1975-10-03 | Science Union & Cie |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL60063A0 (en) | 1980-07-31 |
| JPH0124769B2 (da) | 1989-05-15 |
| EP0019218A2 (de) | 1980-11-26 |
| NO801443L (no) | 1980-11-17 |
| AU5824480A (en) | 1980-11-20 |
| RO79525B (ro) | 1984-09-30 |
| YU41923B (en) | 1988-02-29 |
| DK154749C (da) | 1989-05-16 |
| EP0019218A3 (en) | 1981-03-25 |
| ES8104405A1 (es) | 1981-04-01 |
| AR220838A1 (es) | 1980-11-28 |
| YU126580A (en) | 1983-12-31 |
| EP0019218B2 (de) | 1995-03-01 |
| DE3071225D1 (en) | 1985-12-19 |
| JPS55153723A (en) | 1980-11-29 |
| DK212580A (da) | 1980-11-16 |
| CA1122527A (en) | 1982-04-27 |
| AU535804B2 (en) | 1984-04-05 |
| RO79525A (ro) | 1984-07-17 |
| ATE16454T1 (de) | 1985-11-15 |
| EP0019218B1 (de) | 1985-11-13 |
| ES491517A0 (es) | 1981-04-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4500513A (en) | Influenza vaccine production in liquid cell culture | |
| JP4447054B2 (ja) | 細胞培養におけるインフルエンザウイルスの複製の方法、および本方法によって入手可能なインフルエンザウイルス | |
| DK154749B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af en influenzavirusvaccine i en flydende cellekultur | |
| HU183765B (en) | Process for producing lyophilized vaccine against duck hepatitis | |
| IE51553B1 (en) | Herpes simplex type 1 subunit vaccine | |
| USRE33164E (en) | Influenza vaccine production in liquid cell culture | |
| US3080291A (en) | Serial passage of distemper virus in tissue cultures of chick embryo and canine tissue and vaccine therefrom | |
| EP0011864B1 (en) | Attenuated strain of feline infectious peritonitis virus, method for preparing it and vaccine comprising it | |
| IE51389B1 (en) | Feline infectious peritonitis virus,its preparation and vaccines containing it | |
| JPS637754B2 (da) | ||
| CN102965344B (zh) | 用细胞系生产鸡传染性支气管炎病毒与疫苗 | |
| US3585266A (en) | Live rabies virus vaccine and method for the production thereof | |
| US3429965A (en) | Avian pox virus vaccine and process of preparing same | |
| CA2178553A1 (en) | Marek's disease vaccine | |
| US20070111211A1 (en) | Integrated viral complexes, methods of production thereof, vaccines containing same and methods of use thereof | |
| US3098011A (en) | Process of producing a vaccine against distemper | |
| EP0011865B1 (en) | Feline infectious peritonitis vaccine and process for its preparation | |
| CN112080478B (zh) | 一种h5亚型禽流感病毒的高效增殖方法及应用 | |
| KR830002615B1 (ko) | 세포배양액내에서 인플루엔자 왁진의 제조방법 | |
| US3629396A (en) | Avian encephalomyelitis vaccine | |
| Toba et al. | Role of interferon in enhanced replication of Newcastle disease virus in swine cells infected with hog cholera virus | |
| CN111057683A (zh) | 一种鸡胚接种用病毒稀释液及其制备方法和应用 | |
| El‐Zein et al. | Preparation and testing of a goat pox vaccine from a pathogenic field isolate attenuated in cell culture | |
| Habashi et al. | Production of antisera against the virus of viral haemorrhagic septicaemia (VHS) of rainbow trout | |
| Ritova et al. | Live tissue-culture influenza vaccine |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |