NO780862L - Fremgangsmaate til fremmstilling av polysakkarid - Google Patents
Fremgangsmaate til fremmstilling av polysakkaridInfo
- Publication number
- NO780862L NO780862L NO780862A NO780862A NO780862L NO 780862 L NO780862 L NO 780862L NO 780862 A NO780862 A NO 780862A NO 780862 A NO780862 A NO 780862A NO 780862 L NO780862 L NO 780862L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- polysaccharide
- medium
- protease
- viscosity
- cultivation
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 10
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 36
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 32
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 32
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 24
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 22
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 17
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 15
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 15
- 241000589149 Azotobacter vinelandii Species 0.000 claims description 12
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 7
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 claims description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 4
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 claims description 3
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 claims description 3
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 claims description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims 5
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 32
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 10
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 102000005158 Subtilisins Human genes 0.000 description 5
- 108010056079 Subtilisins Proteins 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 4
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 108010004131 poly(beta-D-mannuronate) lyase Proteins 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- 210000000712 G cell Anatomy 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 2
- 108010009355 microbial metalloproteinases Proteins 0.000 description 2
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 2
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 description 2
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 description 2
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 description 2
- 241001136782 Alca Species 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-SQOUGZDYSA-N L-guluronic acid Chemical group O=C[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 description 1
- WWFIBCJIEVRVNM-UHFFFAOYSA-N OI(=O)(=O)=O.O=C1CC(=O)NC(=S)N1 Chemical compound OI(=O)(=O)=O.O=C1CC(=O)NC(=S)N1 WWFIBCJIEVRVNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000199919 Phaeophyceae Species 0.000 description 1
- 241000589634 Xanthomonas Species 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000012807 shake-flask culturing Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/813—Continuous fermentation
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/831—Azotobacter
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Macromolecular Compounds Obtained By Forming Nitrogen-Containing Linkages In General (AREA)
- Polymers With Sulfur, Phosphorus Or Metals In The Main Chain (AREA)
Description
Den foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte til fremstilling av mikrobielt alginat med regulert viskositet.
Mikrobielt alginat er et polysakkarid som kan fremstilles
ved dyrking av mikroorganismer av arten Azotobacter vinelandii, f.eks. ifølge den fremgangsmåte som er kjent fra britisk patent-skrift 1.331.771. Produktet er en delvis acetylert, varierende blokkopolymer av 1,4-sammenbundete-D-mannuronsyre- og L-guluron-syrerester, vanligvis med en acetyleringsgrad på ca. 20%, og bortsett fra acetylgruppene er de kjemisk likt alginsyre som er ekstrahert fra visse arter av brun tang.
Et problem som oppstår ved fremstillingen av mikrobielt alginat, særlig når det anvendes kontinuerlige dyrkingsbetingel-
ser som involverer høy cellemasse- og høy polysakkaridproduk-tivitet, er at den oppnådde polysakkaridløsning har lav viskositet. Det antas at dette skyldes en senkning av polysakkaridets gjennomsnittlige molekylvekt, forårsaket av spalting av enzymet alginatlyase, se Haug og Larsen, Carbohydråte Research, 17,
297-308 (1971).. Det antas at dette enzym virker utenfor cellene,
og den forårsakete spalting kan påvirke løsningens viskositet sterkt og derved polysakkaridproduktets kommersielle anvendbarhet.
Det har ifølge oppfinnelsen vist seg at spaltingen av polysakkaridet kan reguleres, og derved produktets viskositet økes,
ved innføring av et proteolyttisk enzym i dyrkingsmediet. Det proteolyttiske enzym kan innføres i dyrkingsmediet som mikroorganismen dyrkes i, eller tilsettes til dyrkingsmediet på en annen måte under dyrkingen av mikroorganismen, eller også tilsettes til mediet etter dyrking, men før polysakkaridet isoleres.
Ifølge oppfinnelsen er det således frembrakt en fremgangsmåte til fremstilling av et polysakkarid ved dyrking av en polysakkaridproduserende stamme avAzotobacter vinelandii i et dyrkingsmedium for denne.Fremgangsmåten kjennetegnes ved at viskositeten i.løsningen av det fremstilte polysakkarid reguleres ved at det i dyrkingsmediet innføres, under dyrkingen og /eller etter dyrkingen, men før isolering av polysakkaridproduktet, et proteolyttisk enzym som har proteolyttisk aktivitet ved dyrkingsmediets pH.
Denne bruk av et proteolyttisk enzym i en fermentering
som inneholder levedyktige mikroorganismer er en overraskende nyhet på området polysakkaridfremstilling. Dette vil innses når det tas i betraktning at en kjent bruk av proteolyttiske enzymer, såsom alkaliske proteaser, er fjerning av celleavfall fra xantan-gummiløsninger fremstilt ved dyrking av stammer av mikroorganismer av slektenXanthomonas. Ifølge den kjente fremgangsmåte spaltes mikrobielle celler og cellefragmenter, som er vanskelig å fjerne fra xantangummiløsningen ved hjelp av fysikalske midler, in situ ved tilsetning av enzymet. Hen helt i motsetning til denne bruk av proteaser for spaltingen av mikrobielle celler er det ifølge oppfinnelsen overraskende iakttatt at et slikt enzym kan tilsettes til en fermentering av Azotobacter vinelandii på slik måte at produktets viskositet kan reguleres uten alvorlig på-virkning av mikroorganismens levedyktighet. Noen ganger kan man erfare et visst tap i polysakkaridkonsentrasjon, fastsatt ved hjelp av stoff som er utfellbart med isopropanol, men dette blir mer enn oppveiet av produktets økte viskositet.
Forsjellige proteolyttiske enzymer har optimal aktivitet
ved forskjellige pH-verdier. De som har optimal aktivitet ved pH-verdier på over nøytral benevnes alkaliske proteaser, de som har optimal aktivitet ved nøytrale pH-verdier benevnes nøytrale proteaser osv. Ethvert av disse forskjellige proteolyttiske enzymer Jean generelt anvendes ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen forutsatt at de har tilstrekkelig aktivitet ved dyrkingsmediets pH som vanligvis vil være ca. 7. Det proteolyttiske enzym kan avledes fra enhver passende kilde, men bakterielle proteaser og sopp-proteaser er særlig anvendelige, såsom "Alcalase" og "Neutrase". For kontinuerlig dyrking er det særlig foretrukket å arbeide ved en pH på ca. 7,4 med en nøytral eller alkalisk protease.
Proteasene er anvendbare både for økning av polysakkaridet som frembringes av kulturen og i stand til å stabilisere polysakkaridet i volumer av dyrkingsmediet som lagres for bearbeidelse. ' Dette kan anvendes for å overvinne et problem som påtreffes særlig i kontinuerlige dyrkingsprosessernår satser av dyrkingsmediet tas ut av fermenteringsbeholderen og deretter lagres i et betydelig tidsrom før isolering av polysakkaridet, og det da finnes at produktets viskositet har falt betydelig. Ifølge denne utfør-elsesform av oppfinnelsen hvor dyrkingen utføres i en fermenter-^ ingsbeholder og dyrkingsmediet etterpå fjernes fra beholderen, reguleres viskositeten i løsningen av fremstilte polysakkarid ved tilsetning til dyrkingsmediet, etter at dette er fjernet fra fermenteringsbeholderen men før isolering av polysakkaridproduktet, et proteolyttisk enzym som har proteolyttisk aktivitet ved mediet pK. På denne 'måte kan den aktuelle dyrking utføres i fravær av enzymet, eller ved små konsentrasjoner av enzymet,
og deretter kan konsentrasjonen av proteolyttisk enzym i dyrkingsmediet økes før lagring.
Konsentrasjonen av proteolyttisk enzym som anvendes i ut-førelsesformene av oppfinnelsen vil selvfølgelig avhenge av den nødvendige grad av viskositetsregulering og enzymets rela-tive aktivitet. Idet urimelig høye enzymkonsentrasjoner bør unngås under dyrkingen av mikroorganismen for å unngå enhver risiko for å svekke mikroorganismecellenes levedyktighet, kan imidlertid høyere konsentrasjoner anvendes når enzymet tilsettes etter dyrkingen, f.eks. til medium fjernet for lagring, idet mikroorganismens levedyktighet da ikke lenger er viktig. Generelt foretrekkes det å anvende proteolyttisk enzym i en konsentrasjon på fra 0,005 til 1,0 Anson^-enheter pr. liter medium, og et område på fra 0,005 til 0,5 Anson-enheter pr. liter foretrekkes sterkt for bruk under dyrkingen av mikroorganismen. (Anson-enheten er definert som den mengde enzym som vil frigjøre 1 milliekvival-ent tyrosin pr. min. fra denaturert hemoglobin ved 30°C og pH 7,5).
Oppfinnelsen vil bli nærmere forklart ved hjelp av de etter-^-følgende eksempler.
Eksempel 1
Dette eksempel viser økningen av viskositeten til løsning
av polysakkaridproduktet fra kontinuerlige kulturer av Azotobacter vinelandii ved tilsetning av protease til kulturen.
Tre 2 liter kontinuerlige kulturer av Azotobacter vinelandii NCIB9 068 ble etablert under anvendelse av et dyrkingsmedium som inneholdt:
Luft ble tilført til den omrørte kultur i 1,4 l/min., temperaturen var 36°C, fortynningshastigheten var 0,13 h ^ og pH var 7,4 (regulert ved automatisk tilsetning av IM NaOH). Skumming ble regulert ved tilsetning av et silikonantiskum-middel. Under disse betingelser lå organismens spesifikke respirasjonshastighet i området 20-30 mmol O^/ h/ g celle. Konsentrasjonen av isopropanol-utfellbar substans i dyrkingsmediet ble bestemt på følgende måte: En prøve på 2 5 ml av dyrkingsmediet ble tilsatt til 7 5 ml isopropanol, blandingen ble rystet og den oppnådde utfelling ble oppsamlet ved filtrering gjennom en glassfiberfilterskive som var veiet på forhånd. Skiven pluss utfellingen ble tørket til konstant vekt under vakuum ved 4 5°C.
Dyrkingsmediets konsistensindeks ble bestemt ved måling
av dyrkingsmediets tilsynelatende viskositet i et skjærhastig-hetsområde på mellom 1 og 1000 sek under anvendelse av et Wells-Brookfield viskosimeter med konus og plate, av modell
LVT eller HBT. Logaritmen til den tilsynelatende viskositet
ble deretter tegnet inn mot logaritmen for skjærhastigheten,
og den oppnådde inntegning ble ekstrapolert for bestemmelse av konsistensindeksen (dvs. den tilsynelatende viskositet ved en skjærhastighet på 1 sek-"*") .
Tilsetningen av et proteasepreparat ("Neutrase", 3 Anson^--enheter/g) til sluttkonsentrasjoner på 0,006 g/l og 0,012 g/l i to av de tre kulturmediet (disse konsentrasjoner ble deretter bibeholdt ved ytterligere tilsetning av proteasen i det inn-strømmende dyrkingsmedium) ble fulgt av en markert økning i kulturens viskositet i disse medier selv om konsentrasjonen av isopropanolutfellbar substans avtok.
Prøver av dyrkingsmedium ble fjernet etter seks oppholds-tider (2 døgn), natriumklorid ble tilsatt til en sluttkonsen trasjon på 0,1 M, og bakteriecellene ble fjernet ved sentrifugering ved 25.000 g i 40 min. Det oppnådde sediment ble suspendert igjen i destillert vann, sentrifugert igjen og tørket ved 105°C til konstant vekt for bestemmelse av cellemasse. Væsken fra den første sentrifugering ble tilsatt til tre volumdeler isopropanol, og det utfelte polysakkarid ble oppsamlet og frysetørket. En 1 pro---sentig (vekt/volum) løsning av det frysetørkete, cellefrie polysakkarid ble fremstilt og løsningens konsistensindeks bestemt.
Resultatene er angitt i tabell 1 nedenfor.
Eksempel 2
To kontinuerlige kulturer av en Azotobacter vinelandii-stamme avledet fra Azotobacter vinelandii NCIB 9068 ble til-beredet under anvendelse av dyrkingsmediet og betingelsene som er beskrevet i eksempel 1. Til en kultur ble protease-preparatet "Alcalase" (1,5Anson-enheter/g) tilsatt til en sluttkonsentrasjon på 6 mg/l, mens ingen protease ble tilsatt til den annen kultur. I likevektstilstanden som ble opprettet var viskositeten i den proteasebehandlete kultur høyere enn i den ikke-proteasebehandlete kontroll, men polysakkaridkonsentra-sjonen i kulturene var like. Dessuten var viskositeten i løs-^ninger av det cellefrie polysakkarid fra den proteasebehandlete kultur høyere enn for kontrollen (tabell 2).
I
Eksempel 3
Et tilsvarende forsøk ble utført under anvendelse av "Alcalase" (6 Anson-enheter/g) i en konsentrasjon på 0,01 g/l og måling av konsistensindeksen og innholdet av 4,5-umettet uron-
syre av cellefritt polysakkarid før og etter enzymtilsetning.
Det 4,5-umettede uronsyreprodukt av alginatlyaseaktivitet
ble beregnet ved anvendelse av periodat-tiobarbitursyreprøven som er beskrevet av A.Weissbach, J. Hurwitz i Journal of Biological Chemistry, 234, 705-709 (1958): 0,01 mikromol av 4,5-umettet uronsyre ble anvendt for å frembringe en ekstingsjon på 0,29 ved en bølgelengde på 549 nm (Preiss og Ashwell,
Journal of Biological Chemistry, 237, 309-316 (1962) og under anvendelse av denne standard, hvor innholdet av 4,5-umettede uronsyrerester ble bestemt og uttrykt som en prosentandel av de totale uronsyrerester. Resultatene er vist i tabell 3 nedenfor.
Prøvene av cellefritt polysakkarid, som var oppnådd etter tilsetning av protease til kulturen, ga løsninger med mye høyere viskositet enn prøven som var tatt før proteasetilsetningen.
Det er klart at protease gjør det mulig å oppnå et .produkt med
høy viskositet. Det reduserte innhold av 4,5-umettet uronsyre,
som ble dannet ved virkningen av alginatlyase i prøve 2, viser at protease regulerer spaltingen av polysakkaridet med alginatlyase. Det oppnås derfor en polymer med høyere løsningsviskositet.
Eksempel 4
Dette eksempel viser økningen i viskositet av polysakkaridproduktet som oppnås fra satskulturer av Azotobacter vinelandii, som har vokst i nærvær av protease.
Azotobacter vinelandii NCIB 9068 ble dyrket i satskulturer
i luftede, omrørte fermenteringsbeholdere som inneholdt 8 1 av følgende medium:
Til to slike f ermenteringsbeholdere ble det tilsatt "Alca<r lase" (1,5 Anson-enheter/g) til en sluttkonsentrasjon på hen-holdsvis 0,1 g/l og 0,01 g/l, mens en identisk kultur uten protease funksjonerte som kontrollforsøk. Fermenteringspara-metrene var: temperatur 3 6°C, pH 7,4 regulert ved automatisk tilsetning av 2M NaOH, samt luftstrømningshastighet 4 l/min. Skumming ble regulert ved tilsetning av et silikonantiskum-middel. Rørerhastigheten som i begynnelsen var 3 50 omdr/min. ble økt i løpet av fermenteringen for å bibeholde den spesifikke respirasjonshastighet for organismen i området 6-14 mmol 02/h/g celle.
Fermenteringen ble påbegynt ved tilsetning av 160 ml av en rysteflaskekultur av organismen, og fortsatt i 40 timer. Etter 4 0 timer ble isopropanolutfellbar substans i mediet bestemt, en cellefri prøve av det dannete polysakkarid ble frembrakt, og konsistensindeksen for en 1 prosentig (vekt/volum) løsning av denne prøve ble bestemt (tabell 4).
Eksempel 5
Dette eksempel viser stabiliseringen av viskositeten i Azotobacter vinelandii-kulturmedier ved lagring i nærvær av
en protease.
Til 20 ml prøver av et fermenteringsmedium av polysakkarid-dannende, kontinuerlig kultur av Azotobacter vinelandii NCIB 9068 ble det tilsatt 0,2 ml av en løsning av "Alcalase" (6 Anson-enheter/g) for å oppnå en sluttkonsentrasjon av "Alcalase" på
0,1 g/l. Samme volum vann ble tilsatt til resterende prøver som funksjonerte som ubehandlete kontrollprøver. Prøvene ble inkubert ved 30°C , og den tilsynelatende viskositet med en skjærhastig-
het på 46 sek 1 ble målt periodisk i et Wells-Brookfield viskos simeter av modell LYT. Den tilsynelatende viskositet i det proteasebehandlete medium forble i samme område gjennom hele forsøket, mens viskositeten i det ubehandlete medium falt vesentlig (tabell 5).
Claims (4)
1. Fremgangsmåte til fremstilling av et polysakkarid ved dyrking av en polysakkaridproduserende stamme av Azotobacter vinelandii i et næringsmedium for denne, karakterisert ved at viskositeten i løsningen av det dannete polysakkarid reguleres ved at det til dyrkingsmediet, under dyrkingen og/eller etter dyrkingen, men før isoleringen av produktet fra mediet, tilsettes en protease som har proteolyttisk aktivitet ved pH-verdien i dyrkingsmediet.
2. Fremgangsmåte i samsvar med krav 1, karakterisert ved at proteasen anvendes i en konsentrasjon på fra 0,005 til 1,0 Anson-enheter pr. liter medium.
3. Fremgangsmåte i samsvar med krav 2, karakterisert ved at proteasen tilsettes under dyrkingen i en konsentrasjon på fra 0,005 til 0,5 Anson-enheter pr.
liter medium.
4. Fremgangsmåte i samsvar med krav 1, hvor dyrkingen utføres i en fermenteringsbeholder, fortrinnsvis som en kontinuerlig fermentering og ved en pH på ca. 7,4, og hvor dyrkingsmediet deretter fjernes fra fermenteringsbeholderen, karakterisert ved at viskositeten for løsningen av det dannete polysakkarid reguleres ved tilsetning av proteasen, som fortrinnsvis er en nøytral eller alkalisk, protease, til dyrkingsmediet etter at dette er blitt fjernet fra fermenteringsbeHolderen, men før polysakkaridet isoleres fra mediet.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB10695/77A GB1548078A (en) | 1977-03-14 | 1977-03-14 | Process for the production of polysaccarides of controlled viscosity |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO780862L true NO780862L (no) | 1978-09-15 |
Family
ID=9972599
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO780862A NO780862L (no) | 1977-03-14 | 1978-03-13 | Fremgangsmaate til fremmstilling av polysakkarid |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4234688A (no) |
| JP (1) | JPS53113854A (no) |
| AU (1) | AU3410978A (no) |
| BE (1) | BE864823A (no) |
| DE (1) | DE2809777C3 (no) |
| DK (1) | DK111278A (no) |
| FI (1) | FI780797A (no) |
| FR (1) | FR2384020A1 (no) |
| GB (1) | GB1548078A (no) |
| IL (1) | IL54259A0 (no) |
| IT (1) | IT7821133A0 (no) |
| LU (1) | LU79222A1 (no) |
| NL (1) | NL7802767A (no) |
| NO (1) | NO780862L (no) |
| NZ (1) | NZ186676A (no) |
| SE (1) | SE7802840L (no) |
| ZA (1) | ZA781472B (no) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0078621A1 (en) * | 1981-10-29 | 1983-05-11 | Kelco Biospecialties Limited | Treatment of Xanthan gum solutions |
| CN86100490B (zh) * | 1986-04-08 | 1987-09-30 | 相振华 | 利用抗氨固氮菌生产富硒单细胞蛋白, 维生素e和菌肥的方法 |
| JPS63226220A (ja) * | 1987-03-17 | 1988-09-20 | 明治製菓株式会社 | 果物の品質改良方法 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BE613065A (fr) * | 1961-02-21 | 1962-05-16 | Electro Chimie Soc D | Procédé continu de récupération de brome |
| GB1288843A (no) * | 1969-07-12 | 1972-09-13 | ||
| JPS537519B2 (no) * | 1973-05-29 | 1978-03-18 | ||
| US3966618A (en) * | 1974-03-11 | 1976-06-29 | Merck & Co., Inc. | Clarification of xanthan gum |
| GB1513104A (en) * | 1976-05-28 | 1978-06-07 | Tate & Lyle Ltd | Process for the production of polysaccharide |
| US4094739A (en) * | 1976-12-27 | 1978-06-13 | The Lubrizol Corporation | Method for purifying microbial polysaccharides |
| US4119491A (en) * | 1977-05-16 | 1978-10-10 | Shell Oil Company | Enzyme-filtration clarification of xanthan gum polymer solution |
-
1977
- 1977-03-14 GB GB10695/77A patent/GB1548078A/en not_active Expired
-
1978
- 1978-03-07 DE DE2809777A patent/DE2809777C3/de not_active Expired
- 1978-03-08 FR FR7806626A patent/FR2384020A1/fr not_active Withdrawn
- 1978-03-10 US US05/885,272 patent/US4234688A/en not_active Expired - Lifetime
- 1978-03-13 BE BE185877A patent/BE864823A/xx unknown
- 1978-03-13 SE SE7802840A patent/SE7802840L/xx unknown
- 1978-03-13 IT IT7821133A patent/IT7821133A0/it unknown
- 1978-03-13 DK DK111278A patent/DK111278A/da not_active Application Discontinuation
- 1978-03-13 LU LU79222A patent/LU79222A1/xx unknown
- 1978-03-13 NZ NZ186676A patent/NZ186676A/xx unknown
- 1978-03-13 NO NO780862A patent/NO780862L/no unknown
- 1978-03-13 IL IL54259A patent/IL54259A0/xx unknown
- 1978-03-14 AU AU34109/78A patent/AU3410978A/en active Pending
- 1978-03-14 FI FI780797A patent/FI780797A/fi not_active Application Discontinuation
- 1978-03-14 JP JP2977478A patent/JPS53113854A/ja active Granted
- 1978-03-14 NL NL7802767A patent/NL7802767A/xx not_active Application Discontinuation
- 1978-03-14 ZA ZA00781472A patent/ZA781472B/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA781472B (en) | 1979-03-28 |
| IT7821133A0 (it) | 1978-03-13 |
| LU79222A1 (fr) | 1978-06-28 |
| JPS5632917B2 (no) | 1981-07-30 |
| DK111278A (da) | 1978-09-15 |
| IL54259A0 (en) | 1978-06-15 |
| US4234688A (en) | 1980-11-18 |
| GB1548078A (en) | 1979-07-04 |
| DE2809777A1 (de) | 1978-09-21 |
| AU3410978A (en) | 1979-09-20 |
| JPS53113854A (en) | 1978-10-04 |
| DE2809777B2 (de) | 1980-03-20 |
| FR2384020A1 (fr) | 1978-10-13 |
| NL7802767A (nl) | 1978-09-18 |
| DE2809777C3 (de) | 1980-11-13 |
| SE7802840L (sv) | 1978-09-15 |
| BE864823A (fr) | 1978-07-03 |
| FI780797A (fi) | 1978-09-15 |
| NZ186676A (en) | 1979-06-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3071583B2 (ja) | 高分子量のプルランおよびその製造方法 | |
| FI79345B (fi) | Enzymprodukt innehaollande en -1,6-glukosidas och foerfarande foer framstaellning av denna. | |
| US8865241B1 (en) | Mutant bacterial strains of the genus Sphingomonas deficient in production of polyhydroxybutyrate and a process of clarification of sphingans and compositions thereof | |
| US4728613A (en) | Method for the recovery of extracellular enzymes from whole fermentation beer | |
| NO155446B (no) | Fremgangsmaate til fremstilling av isomaltulose. | |
| NO831406L (no) | Mikrobielle polysakkarider, fremgangsmaate til deres fremstilling, dertil egnede mikroorganismer, og polysakkaridenes anvendelse | |
| Schulze et al. | Determination of intracellular trehalose and glycogen in Saccharomyces cerevisiae | |
| NO134685B (no) | ||
| Schoutens et al. | Continuous butanol production from whey permeate with immobilized Clostridium beyerinckii LMD 27.6 | |
| NO140233B (no) | Fremgangsmaate til gjennomfoering av en enzymkatalysert omdannelse, samt enzymholdig aggregat for bruk ved fremgangsmaaten | |
| SU923374A3 (ru) | Способ получени биомассы микроорганизмов | |
| CA2063490A1 (en) | Extracellular preparation of high molecular weight homopolysaccharides and the use thereof, and the fungal strains therefor | |
| Marqués et al. | Production and rheological properties of the extracellular polysaccharide synthesized by Pseudomonas sp. strain EPS-5028 | |
| DK151268B (da) | Enzympraeparat med inulinaseaktivitet, fremgangsmaade til hydrolyse af inulin og fremgangsmaade til fremstilling af enzympraeparatet | |
| DK158522B (da) | Beta-amylase, samt fremstilling og anvendelse deraf | |
| JPH10158303A (ja) | 微細繊維状セルロースのアルカリ溶液又はゲル化物 | |
| Galliher et al. | Regulation of heparinase synthesis in Flavobacterium heparinum | |
| Moreton | Growth of Candida utilis on enzymatically hydrolyzed potato waste | |
| NO780862L (no) | Fremgangsmaate til fremmstilling av polysakkarid | |
| EP0078643B1 (en) | Polysaccharide production | |
| Yoshida et al. | Production and application of maltose phosphorylase and trehalose phosphorylase by a strain of Plesiomonas | |
| NO853690L (no) | Stabilisering av enzymer brukbare ved f.eks. fremstilling av glukoson. | |
| US5273891A (en) | Process for the production of microbial cellulose | |
| Fellows et al. | An investigation into the pectolytic activity of the yeast Saccharomycopsis fibuliger | |
| CA1123768A (fr) | Polysaccharides de xanthomonas utilisables pour preparer des gels aqueux de filtrabilite amelioree |