NO753268L - - Google Patents
Info
- Publication number
- NO753268L NO753268L NO753268A NO753268A NO753268L NO 753268 L NO753268 L NO 753268L NO 753268 A NO753268 A NO 753268A NO 753268 A NO753268 A NO 753268A NO 753268 L NO753268 L NO 753268L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- approx
- weight
- solution
- iodophenyl
- stated
- Prior art date
Links
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 30
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 13
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 12
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 9
- FVFWUNAWQMROIF-UHFFFAOYSA-N n-(4-iodophenyl)imino-n'-(4-nitroanilino)benzenecarboximidamide Chemical compound C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1NN=C(C=1C=CC=CC=1)N=NC1=CC=C(I)C=C1 FVFWUNAWQMROIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000012087 reference standard solution Substances 0.000 claims description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 7
- 230000008961 swelling Effects 0.000 claims description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 6
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 6
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 claims description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 5
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims 2
- BWJJSYVJOLHQFF-AMLDTQNSSA-N N'-(4-iodoanilino)-N-(4-nitrophenyl)iminobenzenecarboximidamide Chemical compound C1=CC=C(C=C1)/C(=N/NC2=CC=C(C=C2)I)/N=NC3=CC=C(C=C3)[N+](=O)[O-] BWJJSYVJOLHQFF-AMLDTQNSSA-N 0.000 description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 8
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- JORABGDXCIBAFL-UHFFFAOYSA-M iodonitrotetrazolium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1N1[N+](C=2C=CC(I)=CC=2)=NC(C=2C=CC=CC=2)=N1 JORABGDXCIBAFL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 5
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 5
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 3
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 3
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N NADPH Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- VEPOHXYIFQMVHW-XOZOLZJESA-N 2,3-dihydroxybutanedioic acid (2S,3S)-3,4-dimethyl-2-phenylmorpholine Chemical compound OC(C(O)C(O)=O)C(O)=O.C[C@H]1[C@@H](OCCN1C)c1ccccc1 VEPOHXYIFQMVHW-XOZOLZJESA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N Phenazine Natural products C1=CC=CC2=NC3=CC=CC=C3N=C21 PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- ALSTYHKOOCGGFT-KTKRTIGZSA-N (9Z)-octadecen-1-ol Chemical class CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCO ALSTYHKOOCGGFT-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 1
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091006149 Electron carriers Proteins 0.000 description 1
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 241000978776 Senegalia senegal Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 239000000538 analytical sample Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- IRXRGVFLQOSHOH-UHFFFAOYSA-L dipotassium;oxalate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C(=O)C([O-])=O IRXRGVFLQOSHOH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000007824 enzymatic assay Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- WZWGGYFEOBVNLA-UHFFFAOYSA-N sodium;dihydrate Chemical compound O.O.[Na] WZWGGYFEOBVNLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N31/00—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods
- G01N31/22—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods using chemical indicators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
- C12Q1/50—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase involving creatine phosphokinase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/54—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
Description
"Stabil, farvet referansestandard for enzymatiske bestemmelser"
Metoder for kvantitativ bestemmelse av visse enzymer er basert på fremstillingen av NADH (redusert nikotinamid-adenin-dinukleotid) eller NADPH (redusert nikotinamid-adenin-dinukleotid-fosfat) som et resultat av den enzymatiske omsetningen på et substrat; NADH eller NADPH reduserer igjen fargeløst 2- (p-jodfenyl) -3-(p-nitrofenyl)-5-fenyltetrazoliumklorid (kjent som INT) i nær-vær av en elektronbærer slik som fenazinmetsulfat, til 1-(p-jodfenyl) -5-(p-nitrofenyl)-3-fenylformazan (kjent som INT formazan) , som er sterkt rødfarget og kan måles spektrofotometrisk. Enzym-konsentrasjoner bestemmes ved samtidig å utføre omsetningen på en referanseprøve som inneholder'kjente mengder av enzymet og sammen-ligne spektrofotometriske avlesninger av den ukjente prøven mot referanseprøven.
Representative enzymatiske bestemmelser hvor den ovenfor nevnte generelle metode anvendes, omfatter de følgende: Babson, A.L. og Phillips, G.E., " A Rapid Colorimetric Assay for Serum Lactic Dehydrogenase" , Clin. Chim. Acta 12_, 210-215 (1965);
Van Der Veen et al., " Isoenzymes of Creatine Phosphokinase in Tissue Extracts and in Normal and Pathological Sera", Clin. Chim. Acta 13., 312-316 (1966); ogNachlas, M.M. , et al., " The Determina-tion of Lactic Dehydrogenase with a Tetrasodium Salt", Anal.Biochem., 1, 317-326 (1960).
Nøyaktigheten av de ovenfor nevnte metoder for bestemmelse av enzymatiske virkninger er i høy grad avhengig av fremstillingen og stabiliteten av referanseprøven som inneholder den kjente mengde av enzym som analyseprøven skal sammenlignes med. Dessuten omfatter disse enzymatiske analysemetoder dobbelt arbeid, siden analysen må utføres i hvert tilfelle mot referanseprøven, så vel som mot den ukjente prøven. Slik duplisering krever utstrakt kontroll for å være sikker på at man ikke får unøyaktige resultater.
Behovet for og fordelene ved en stabil, farvet referansestandard for anvendelse ved enzymatiske bestemmelser uten samtidig å utføre en kontroll er åpenbar. Slikt et produkt er imidlertid ikke kommersielt tilgjengelig.
En stabil, farvet sammenli.gningsstandard består av en vandig løsning som inneholder fra 0,001%-0,020 vekt-%, basert på vekten av hele løsningen av 1- (p-jodfenyl)-5-(p-nitrofenyl)-3-fenyl-formazan, fra 0,01-0,10 vekt-% serumalbumin, fra 2-10 vekt-% av en løsning slik som N,N<1->dimetylformamid eller dimetylsulfoksyd og fra 2-10 vekt-% isopropylalkohol. Det kan tilsettes fra 5% til 20 vekt-% av et inert svellemiddel til den vandige, fargede referansestandard-løsningen, som deretter kan lyofiliseres. Det lyofiliserte produkt rekondisjoneres lett med vann. Den vandige, fargede referansestandard-løsningen har et absorpsjonsmaksimum ved 500 nanometer og er anvendbar for bestemmelse av visse enzymvirkninger, slik som serumlaktat dehydrogenas, kreatin fosfokinas, glukose-6-fosfat dehydrogenase og lignende.
Man har nå funnet at en farget referansestandard for anvendelse ved bestemmelse av visse enzymvirkninger som inneholder,
i en vandig løsning, fra 0,001-0,020 vekt-%, basert på vekten av den totale løsningen av 1-(p-jodfenyl)-5-(p-nitrofenyl)-3-fenyl-formazan, fra 0,01-0,10 vekt-% serumalbumin, fra 2-10 vekt-% av et løsningsmiddel valgt fra gruppen som består av N,N'-dimetyl-formamid og dimetylsulfoksyd, og fra 2-10 vekt-% isopropylalkohol har et absorpsjonsmaksimum ved 500 nanometer. Tilsetningen av fra 5-20 vekt-% av et inert svellemiddel gir en løsning som kan lyofiliseres. Den lyofiliserte form av den fargede referansestandarden i følge foreliggende oppfinnelse er stabil minst i 6 måneder ved 4°C og 24°C. Den lyofiliserte formen av referansestandarden i følge foreliggende oppfinnelse kan dessuten rekondisjoneres med vann for å gi en klar løsning som kan anvendes, ruten vanskelighet, som en referansestandard ved enzymatiske bestemmelser.
1-(P-jodfenyl) -5-(p-nitrofenyl) -3-fenylformazan i den fargede referansestandarden i følge oppfinnelsen (kjent som INT formazan) er kommersielt tilgjengelig (National Biochemicals Corp., Cleveland, Ohio) og har følgende formel:
Man treffer ofte på INT formazan i mikrobiologiske identifiseringsteknikker, særlig for undersøkelse av næringsmidler og patologiske prøver som dersom bakterier er til stede, reduserer det fargeløse 2-(p-jodfenyl)-3-(p-nitrofenyl)-5-fenyltetrazolium-klorid (kjent som INT) som har formelen:
til et kraftig farget INT formazan. Visse enzymatiske omsetninger vil dessuten forårsake reduksjon av INT til INT formazan og det er ved bestemmelsen av disse enzymer at den fargede referansestandarden i følge foreliggende oppfinnelse finner anvendelse.
Løsningsmidler som har vist seg å forbedre løseligsegen-skapene av INT formazan og å tillate lett rekondisjonering med vann etter lyofilisering omfatter N,N'-dimetylformamid eller di-metylsulf oksyd. Tilsetningen av isopropylalkohol letter også denne løselighetsprosessen. Det er av vesentlig betydning at disse løsningsmidler- ikke forstyrrer absorpsjonsmaksimum av den vandige,'fargede referansestandarden.
Den stabile, fargede referansestandarden i følge oppfinnelsen inneholder også serumalbumin. Det er foretrukket å an-vende bovin-serumalbumin. Dette materiale antas å hjelpe til å stabilisere både den lyofiliserte og den vandige formen av referansestandarden.
Egnede inerte svellemidler for anvendelse i referansestandarden i følge foreliggende oppfinnelse omfatter naturlige og syntetiske gummier, slik som gummi arabikum, natriumalginat, ekstrakt av knuskaragen, karboksymetylcellulose, polyvinylpyrrolidinon og lignende; sukker slik som sorbitol, mannitol, sukrose og lignende;,
og karbohydrater slik som stivelse, dekstran og lignende. Det foretrukne svellemiddel er et dekstran som har en molekylvekt på ca.10 000.
En foretrukket farget referansestandard kan fremstilles i følge foreliggende oppfinnelse ved å fremstille en vandig løsning, egnet for lyofilisering,som inneholder 0,005-0,015 vekt-%, basert på vekten av den totale løsningen av 1-(p-jodfenyl)-5-(p-nitrofenyl)-3-fenylformazan; fra 0,02-0,075 vekt-% bovin-serumalbumin;
fra 8-14 vekt-% .dekstran som har en molekylvekt på ca. 10 000;
2-10 vekt-% N,N'-dimetylformamid og fra 2-10 vekt-% isopropylalkohol.
En særlig foretrukket fargereferansestandard i følge foreliggende oppfinnelse inneholder, i en vandig løsning, 0,0123 vekt-%, basert på vekten av hele løsningen, av 1-(p-jodfenyl)-5-(p-nitrofenyl)-3-fenylformazan; 0,563 vekt-% bovin-serum-albumin;
9 vekt-% dekstran som har en molekylvekt på ca. 10 000; 2,5 vekt-% N,N<1->dimetylformamid og 7,5 vekt-% isopropylalkohol. Absorpsjonen
av den vandige, fargede referansestandarden av denne løsningen ved 500 nanometer er ca. 1,34.
Den lyofiliserte formen av den fargede referansestandarden
i følge foreliggende oppfinnelse har vist seg å være stabil i minst 6 måneder ved temperaturer fra 4°C og 24°C. Den lyofiliserte stan-darden som er rekondisjonert med vann eller 0,1 N saltsyre er lett håndterbar for fortynninger som kan være nødvendig for å konstruere standardkurver for fast-punkt-kolorimetrisk enzymatiske analyser. Rekondisjonerte, fargede referansestandard-løsninger er stabile
i 8 timer ved væreIsestemperatur, og minst 48 timer ved 4°C.
For å fremstille den stabile, fargede referansestandard
i følge foreliggende oppfinnelse må de forskjellige bestanddeler ovenfor tilsettes på en spesiell måte for å oppnå et produkt som har den nødvendige stabilitet og løselighet som tillater rekondisjonering eller lyofilisering. Slike egenskaper oppnås først ved å oppløse INT formazan fullstendig i det valgte løsningsmiddel; deretter tilsette isopropylalkohol, under god blanding; oppløs serum-albumin i vann; og langsomt tilsette løsningen av INT formazan til serum-albuminløsningen under omrøring. Ved den foretrukne ut-førelsesform i følge foreliggende oppfinnelse, når lyofilisering er ønsket, oppløses det inerte svellemiddel i vann sammen med serum - albuminet. Den resulterende løsning som oppnås, oppdeles i like
porsjoner og underkastes de vanlige lyofiliseringsmetoder.
For anvendelse ved enzymatiske bestemmelser rekondisjoneres den ovenfor angitte lyofiliserte form av den fargede referansestandarden vann eller 0,1 N saltsyre. Den fargede referansestandard-løsningen tjener som en standard av kjent virkning som ukjente analyseprøver kan avleses mot for å bestemme enzymvirkningen i den ukjente prøven. Den fargede referansestandard-løsningen i følge oppfinnelsen kan fortynnes om ønsket for å konstruere kurver for fast-punkt-kolometrisk enzymatiske analyser.
Det er således skaffet til veie en farget referansestandard som har utmerket stabilitet i lyofilisert tilstand og
som ved rekondisjonering er lett å håndtere ved enzymatiske bestemmelser.
De følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen:
Eksempel I
Fremstilling av stabil, farget referansestandard- løsning.
A. 12,3 mg INT formazan oppløses i 2,5 ml N,N<1->dimetyl-formamid. Til denne løsning tilsettes 7,5.ml isopropanol av analysekvalitet og blandes deretter godt.
B. 9,0 g dekstran som har en molvekt på ca. 10 000 og 56,3 mg bovin-serumalbumin oppløses i 90 ml renset vann. C. Løsningen A tilsettes langsomt til løsningen B ved om-røring. Den kombinerte løsningen oppdeles i like deler på 4,0 ml i 10 ml ampuller. Ampullene forsynes med hette under tørr nitrogen. Hver ampulle rekondisjoneres med 10 ml av 0,1 N saltsyre og absorpsjon ved 500 nanometer er 1,340 0,010 som utgjør 540 internasjonale enheter av laktat-dehydrogenasevirkning ved 37°C; eller 420 inter
nasjonale enheter av kreatinfosfokinaseyirkning ved 30°C.
Eksempel II
Kolometrisk analyse på serumlaktat- dehydrogenase.
Reagensene for analysen fremstilles som følger: Fargereaqens: 50 mg INT oppløses i ca. 15 ml vann under lengre tids omrøring inntil man får fullstendig oppløsning. Det tilsettes og oppløses 125 mg nikotinamid-adenin-dinukleotid, etter-fulgt av tilsetningen av 12,5 mg fenazin-metsulfat. Løsningen over-føres under vasking umiddelbart til en lavaktinisk måleflaske på
25 ml og fortynnes med vann til merket.
Pufferreaqens: 1,0 g etoksylert oleylalkohol ("Lipal 10-OA," Drew ChemialCo., Boonton, N.J.) oppløses i 10 ml vann under oppvarmnihg til ca. 95°C. Løsningen fortynnes med vann til 50 ml og tilsettes 12,1 g Tris. pH justeres til 8,2 med 3 N HCl og fortynnes deretter til 100 ml.
Substratreaqens: (0,1 M 1(+) laktat) 5,0 ml av en 20% løsning av L(+) melkesyre tilsettes til ca. 50 ml vann. pH justeres til 5,5 med IN NaOH og fortynnes til 120 ml med vann. Løsningen mettes med noen få dråper kloroform.
Kontrollreagens: 0,2 g kaliumoksalat go 0,2 g etylen-diamintetraeddiksyre, natriumdihydrat oppløses i 100 ml vann. Fremstillingene ovenfor er beskrevet av Babson et al. Clin Chim. Acta 12i 210-215 (1965).
Fremgangsmåte: 0,1 ml serum og 0,2 ml pufferreagens pipetteres i hver av glassene. 0,5 ml substrat tilsettes til
ett glass og 0,5 ml av kontrollreagensen tilsettes til det andre glasset. Begge glassene blandes og varmes til 37°C. Ved nøy-aktig fastlagte intervaller tilsettes 0,2 ml fargereagens til begge glassene og innholdene blandes og returneres umiddelbart til vann-badet. Nøyaktig 5 minutter etter tilsetningen av fargereagensen tilsettes 5 ml av 0,1 N HCl til begge glassene og innholdene blandes. Forskjellen i absorpsjon mellom kontrollglasset og glasset med serum-prøven bestemt ved 500 nm i løpet av 20 minutter er 0,67. Denne absorpsjon sammenlignes med den fargede referansestandarden i eksempel 1 som har en absorpsjon på 1,340 0,010 som er ekvalent med 540 internasjonale enheter av laktat-dehydrogenase-virkning. Laktat-dehydrogenase-virkningen i serumet beregnes til å være 270 internasjonale enheter ved 37°C.
Claims (12)
1.F arget referansestandard for anvendelse ved diagnostiske bestemmelser omfattende enzymatiske omsetninger hvor det fremstilles 1-(p-jodfenyl) -5-(p-nitrof enyl) -3-fenylf ormazan, karakterisert ved at den består av en vandig løsning av:
A. Fra ca. 0,001 til ca. 0,020 vekt-%, basert på vekten av hele løsningen, . av 1-(p-jodfenyl)-5- (p-nitrofenyl)-3-fenylformazan;
B. Fra ca. 0,01 til ca. 0,10 vekt-% serumalbumin;
C. Fra ca. 2 til ca. 10 vekt-% løsningsmiddel valgt fra gruppen som består av N,N <1-> dimetylformamid og dimetylsulfoksyd og
D. Fra ca. 2 til ca. 10 vekt-% isopropylalkohol;
idet den vandige fargestandardløsningen har et absorpsjonsmaksimum ved 500 nanometer.
2. Farget referansestandard som angitt i krav 1, karakterisert ved at den dessuten inneholder fra ca. 5 til ca. 20 vekt-% av et inert svellemiddel i den vandige løsningen, og hvor den vandige løsningen som inneholder svelle-
rhidlet er lyofilisert.
3. Farget referansestandardløsning som angitt i krav 1, karakterisert ved at den består av en vandig løsning av:
A. Fra ca. 0,005 til ca. 0,015 vekt-%, basert på vekten av hele løsningen, av 1-(p-jodfenyl)-5-(p-nitrofenyl)-3 - f e ny 1 f orma za n;
B. Fra ca. 0,02 til ca. 0,075 vekt-% serumalbumin;
C. Fra ca. 2 til ca. 10 vekt-% N,N <1-> dimetylformamid.
D. Fra ca. 2 til ca. 10 vekt-% isopropylalkohol, og dessuten
E. Fra ca. 8 til ca. 14 vekt-% dekstran som har en molekylvekt på ca. 10 000.
4. Farget referansestandard som angitt i krav 3,
karakterisert ved at den vandige løsningen er lyofilisert.
5. Farget referansestandard som angitt i krav 3, karakterisert ved at den består av:
A. Ca. 0,0123 vekt-% basert på vekten av hele løsningen, av 1- (p-jodfenyl) -5- (p-nitrofenyl) -3-fenylf ormazan
B. Ca. 0,0563 vekt-% bovin-serumalbumin;
C. Ca.2,5 vekt-% N,N <1-> dimetylformamid;
D. Ca. 7,5 vekt-% isopropylalkohol og
E. Ca. 9 vekt-% dekstran som har en molekylvekt på ca.
10 000,
idet den vandige fargestandardløsningen har en absorpsjon ved 500 nanometer som tilsvarer ca. 1,34.
6. Farget referansestandard som angitt i krav 5, karakterisert ved at den vandige løsningen er lyofilisert.
7. Fremgangsmåte for fremstilling av en farget referanse-
. standard for anvendelse ved diagnostiske bestemmelser omfattende enzymatiske omsetninger hvor det fremstilles 1-(p-jodfenyl)-5-(p-nitrofenyl)-3-fenylformazan , karakterisert ved at man:
A. Oppløser fullstendig fra ca. 0,001 til ca. 0,020 vekt-%, basert på vekten av hele løsningen, av 1-(p-jodfenyl)-' 5-(p-nitrofenyl)-3-fenylformazan i en vandig løsning som inneholder fra ca. 2 til ca. 10 vekt-% av løs-ningsmiddel valgt fra gruppen som består, av N, N 1 - dimetylformamid og dimetylsulfoksyd;
B. Tilsette langsomt fra ca. 2 til ca. 10 vekt-% isopropylalkohol til (A) og blander godt;
C. Oppløser fra ca. 0,01 til ca. 0,10 vekt-% av serum-albumin i ca. 80 til ca. 95 vekt-% vann;
D. Tilsette langsomt (B) til løsningen (C) under om-røring.
8. Fremgangsmåte som angitt i krav 7, karakterisert ved at i trinn C oppløses fra ca. 5 til ca. 20 vekt-% inert svellemiddel, i tillegg til serumalbumin, i vann; i trinn D tilsettes løsningen (B) langsomt under omrøring til løsningen (C) som inneholder svellemidlet og serumalbuminen og hvor løsningen (D) lyofiliseres i et ytterligere trinn.
9. Fremgangsmåte som angitt i krav 7, karakterisert ved at i trinn (A) oppløses fra 0,005 til ca. 0,015 vekt-% 1-(p-jodfenyl)-5-(p-nitrofenyl)-3-fenylformazan i en vandig løsning som inneholder fra ca. 2 til ca. 10 vekt-%N ,N'-dimetyl-formamid og i trinn C er til.stede ca 0,02 til ca. 0,075 vekt-% serumalbumin i tillegg til fra ca. 8 til ca. 14 vekt-% dekstran svellemiddel som har en molekylvekt på ca. 10 000.
10. Fremgangsmåte som angitt i krav 8, karakterisert ved at den resulterende løsningen lyofiliseres i et ytterligere trinn.
11. Fremgangsmåte som angitt i krav 9,
karakterisert ved at i trinn (A) oppløses ca. 0,0123 vekt-% 1-(p-jodfenyl)-5-(p-nitrofenyl)-3-fenylformazan i en vandig løsning som inneholder 2,5 vekt-% N,N <1-> dimetylformamid; i trinn B tilsettes ca. 7,5 vekt-% isopropylalkohol og i trinn C oppløses 9 vekt-% dekstran som har en molekylvekt på ca. 10 000 og 0,0563 vekt-% bovin-serumalbumin i 90 vekt-% vann.
12. Fremgangsmåte som angitt i krav 11, karakterisert ved at den resulterende løsningen lyofiliseres i et ytterligere trinn.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US51226174A | 1974-10-04 | 1974-10-04 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO753268L true NO753268L (no) | 1976-04-06 |
Family
ID=24038352
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO753268A NO753268L (no) | 1974-10-04 | 1975-09-25 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS557239B2 (no) |
| CA (1) | CA1043677A (no) |
| CH (1) | CH617268A5 (no) |
| DE (1) | DE2537499A1 (no) |
| DK (1) | DK442775A (no) |
| FR (1) | FR2287036A1 (no) |
| GB (1) | GB1468494A (no) |
| IT (1) | IT1043092B (no) |
| NO (1) | NO753268L (no) |
| SE (1) | SE408232B (no) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3048662A1 (de) * | 1980-12-23 | 1982-07-22 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Stabilisierte zubereitung von tetrazoliumsalzen |
| JPS59219270A (ja) * | 1983-05-30 | 1984-12-10 | Wako Pure Chem Ind Ltd | テトラゾリウム塩を含有する溶液の安定化方法 |
| CN110726833B (zh) * | 2018-07-17 | 2024-01-09 | 上海瀚联诊断科技有限公司 | 一种血糖质控液配置方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1322951A (en) * | 1969-10-29 | 1973-07-11 | Warner Lambert Co | Process and agent for the determination of glucose |
-
1975
- 1975-08-22 DE DE19752537499 patent/DE2537499A1/de not_active Withdrawn
- 1975-09-05 FR FR7527274A patent/FR2287036A1/fr active Granted
- 1975-09-15 GB GB3774775A patent/GB1468494A/en not_active Expired
- 1975-09-25 NO NO753268A patent/NO753268L/no unknown
- 1975-10-01 DK DK442775A patent/DK442775A/da unknown
- 1975-10-02 JP JP11829675A patent/JPS557239B2/ja not_active Expired
- 1975-10-03 SE SE7511133A patent/SE408232B/xx unknown
- 1975-10-03 CH CH1285975A patent/CH617268A5/de not_active IP Right Cessation
- 1975-10-03 IT IT27920/75A patent/IT1043092B/it active
- 1975-10-03 CA CA236,982A patent/CA1043677A/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IT1043092B (it) | 1980-02-20 |
| FR2287036A1 (fr) | 1976-04-30 |
| FR2287036B1 (no) | 1978-04-07 |
| CH617268A5 (en) | 1980-05-14 |
| GB1468494A (en) | 1977-03-30 |
| DE2537499A1 (de) | 1976-04-15 |
| JPS557239B2 (no) | 1980-02-23 |
| SE7511133L (sv) | 1976-04-05 |
| SE408232B (sv) | 1979-05-21 |
| JPS5162091A (no) | 1976-05-29 |
| DK442775A (da) | 1976-04-05 |
| CA1043677A (en) | 1978-12-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4211844A (en) | Bilirubin-specific fungal enzyme preparation | |
| US4215197A (en) | Test means and method for creatinine determination | |
| CS244665B2 (en) | Method of enzymatic determination of enzyme substrates | |
| Wahlefeld et al. | Creatinine | |
| US4120755A (en) | Kinetic method for determination of glucose concentrations with glucose dehydrogenase | |
| JP2539225B2 (ja) | グルコ−ス定量用安定化液体酵素組成物、それを用いる試薬キット及び定量方法 | |
| US4097338A (en) | Fluorimetric demonstration and determination of a reduced coenzyme or derivative in an aqueous system | |
| EP0133681B1 (en) | Enzymatic urea assay | |
| US4056485A (en) | Stable colored reference standard for enzymatic determinations | |
| Watson | Enzymic determination of glucose and easily hydrolyzable glucose esters in blood | |
| US4012286A (en) | Determination of creatine phosphokinase in body fluids | |
| JPH04287695A (ja) | エタノール分析用組成物 | |
| JPH06510905A (ja) | フェナジン含有指示薬を含む試薬および検定法 | |
| NO753268L (no) | ||
| JPH0571239B2 (no) | ||
| US4596772A (en) | Reagent for assaying cholinesterase | |
| Lim et al. | Determination of ethanol in serum by an enzymatic PMS-INT colorimetric method | |
| JPH0373276B2 (no) | ||
| EP0513914A1 (en) | Stabilization of the enzyme urate oxidase in liquid form | |
| JPH06217799A (ja) | 物質の測定法 | |
| JP2880209B2 (ja) | 総ビリルビンの定量法及びそれに用いる試薬 | |
| US4816394A (en) | Quantitative analysis of 3α-hydroxysteroid and reagent useful therefor | |
| JPS61293397A (ja) | トリグリセリド検出用組成物 | |
| EP0104780B1 (en) | Measurement of alpha-amylase activity | |
| JP4544598B2 (ja) | 液状試薬および保存方法 |