JPH06510905A

JPH06510905A - フェナジン含有指示薬を含む試薬および検定法

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Publication number: JPH06510905A
Application number: JP5506327A
Authority: JP
Inventors: ウィルセイ，クリストファー，ディー．; フライターク，ヘルムート
Original assignee: ロシュ　ダイアグノスティックス　コーポレーション
Priority date: 1991-09-19
Filing date: 1992-09-18
Publication date: 1994-12-08
Anticipated expiration: 2018-11-17
Also published as: DE69228554D1; ES2130179T3; DE69228554T2; EP0606296A1; EP0606296B1; EP0606296A4; WO1993006487A1; JP3468517B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】フェナジン含有指示薬を含む試薬および検定法発明の分野本発明は、サンプル中に含まれるアナライトの比色定量法に関するものである。

発明の背景サンプル中に含まれるアナライトの量を測定する比色検定法では、指示薬の還元を容易にするため、酸化−還元反応の媒介物質（レドックス媒介物質）としてフェナジン含有化合物が用いられてきた。かかる検定法では、指示薬の還元型の色強度がサンプル中のアナライトの量に相関する。次の反応式はこれらの検定法を例示するものである：酵素アナライト　士　フェナジンー−→アナライト　＋　フェナジン（還元型）　含有化合物　（酸化型）　含有化合物（酸化型）　（還元型）フェナジン　＋　指示薬−一→フェナジン　＋　指示薬含有化合物　（酸化型）　含有化合物　（還元型）フェナジン含有化合物（酸化型）＝例えば、ＰＭＳ　（フェナジンメトスルフェート）トも提供される。この試薬キットでは、第１試薬がフェナジン含ンアミドアデニンジヌクレオチドの酸化型）指示薬（還元型）＝例えば、ホルマザン、ＮＡＤＨにコチンアミドアデニンジヌクレオチドの還元型）レドックス媒介物質として用いるとき、フェナジン含有化合物は非酵素的触媒として機能し、検定におけるそれらの濃度は非常に低いものである（ｌミリモルよりかなり少ない）。

発明の要約本発明は、サンプル中に含まれるアナライトの濃度を測定するための（またはアナライトの存在を検出するための）新規な試薬および方法に関するものである。

この試薬はフェナジン含有化合物と酵素を含有する。フェナジン含有化合物は、酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応によってセミキノイド（色指示薬）を形成しつるタイプの化合物でなければならない。

重要なことは、セミキノイドの濃度をサンプル中のアナライトの濃度に相関させるに足る（またはサンプル中のアナライトの存在を検出するに足る）量のフェナジン含有化合物が存在することである。

当該試薬はさらに次の成分を含むことができる：すなわち、酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応に適切すｐ　Ｈを与えかつそのｐＨを維持し、さらにセミキノイドの分光光度測定に所望のｐＨを与える緩衝剤；およびセミキノイドの沈殿を防止するに足る量の界面活性剤。

また、サンプル中のアナライトの量を測定するための試薬キラ有化合物を含み、第２試薬が酵素と緩衝剤を含む。

本発明の試薬はフィルムに組み込むこともでき、フィルムは少なくともフェナジン含有化合物と酵素とフィルム形成剤を含有する。フィルム形成剤は、例えば、Ａｑｕａｌｏｎ社（Ｌｉｔｔｌｅ　ＦａｌｌｓＣｅｎｔｒｅ　Ｏｎｅ、　２７１１　Ｃｅｎｔｅｒｖｉｌｌｅ　Ｒｏａｄ、　Ｐ、Ｏ，Ｂｏｘ　１５４１７゜Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、　Ｄｅｌａｗａｒｅ　１９８５０−５４１７）から入手できる微品質ヒドロキシエチルセルロースのナトロゾル（ＮＡＴＲＯ３ＯＬ）−２５０Ｍである。フィルムはさらに緩衝剤、試薬安定剤および界面活性剤を含むことができる。

また、本発明の試薬は織物メツシュ（例えば、ナイロンメツシュ）や紙に含浸させることもできる。当該試薬をガラス繊維にコーティングしてもよい。

サンプル中に含まれるアナライトの量を測定するための（またはアナライトの存在を検出するための）方法で重要なことは、へぞグロビン、ビリルビンおよび濁りによる干渉を減少させる約５８０ナノメートルより大きい波長でセミキノイド指示薬を分光測光的に測定（または検出）することである。さらに、これらの検定法において重要なことは、吸光度を分光測光的に測定する試験サンプル（溶液で行う検定）の場合に約３０秒より短いインキュベーション期間ですみ、そして反射率または透過率を分光測光的に測定する試験サンプル（フィルムで行う検定）の場合には約１゜５分より短いインキュベーション期間ですむことである。

発明の詳細な説明慣例的に、フェナジン含有化合物はアナライトの検定においてレドックス媒介物質（電子運搬体）として低濃度で使用されてきた。例えば、フェナジン含有化合物は一般に酵素、アナライト、およびテトラゾリウム塩のような染料を必要とする反応においてレドックス媒介物質として作用する。かかる反応では、フェナジン含有化合物が染料を還元する際のレドックス媒介物質として働く。還元型の染料はホルマザンのような色指示薬であり、サンプル中のアナライトの量を測定するのに用いられる。

しかしながら、測定すべきアナライトの量に対してフェナジン含有化合物を高濃度で供給すると、当該化合物はアナライトの検定において単なる電子運搬体としてではなく指示薬としてふるまう。

溶液の分光光度測定を行う場合、本発明の試薬は少なくともフェナジン含有化合物と酵素を含有する。

フェナジン含有化合物は、酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応によってセミキノイドを形成するに足るターイブの化合物でなければならず、また、フェナジン含有化合物はセミキノイドを検出する（それによりアナライトの存在を検出する）のに十分な量であるか、または測定すべきサンプル中のアナライトの濃度にセミキノイドの濃度を相関させるのに十分な量でなければならない。アナライトの検定においてレドックス媒介物質として常用されるフェナジン含有化合物はどれも使用することができる。このような化合物の例として、フェナジンエトスルフェート、フェナジンメトスルフェート、Ｎ−エチルメトキシフェナジンエトスルフェート（オハイオ州クリーブランドのＲｅ５ｅａｒｃｈ　Ｏｒｇａｎｉｃｓ社製）、およびｌ−メトキシフェナジンメトスルフニー）　（Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｏｒｇａｎｉｃｓ社製）がある。ところが、Ｎ−エチルメトキシフェナジンエトスルフェートや１−メトキシフェナジンメトスルフェート、その他の多くのフェナジン含有化合物は赤い色をしており、アナライトの検定において高いブランク反応をもたらす。かくして、フェナジンエトスルフェートとフェナジンメトスルフェートが好ましいフェナジン含有化合物である。

なぜなら、それらは黄色であって、アナライトの検定において高いブランク反応を生じないからである。

セミキノイドの濃度を血液サンプル中のグルコースの濃度に相関させるためには、試薬中のフェナジン含有化合物の濃度が少なくとも約４ミリモルであるべきである。血液サンプル中のグルコースの検出（測定ではない）の場合は、試薬中のフェナジン含有化合物の濃度が約１ｍＭはどの低濃度でよい。

サンプル中の特定のアナライトを測定または検出するのに必要な試薬中のフェナジン含有化合物の最少量は次の要因に依存するだろう：１）測定すべきアナライトの濃度；２）レドックス触媒としての酵素の効率；３）移動する電子の数；４）酵素がオキシダーゼである場合、酸素（反応についてフェナジン含有化合物と競合する）を用いるオキシダーゼ反応の効率、およびオキシダーゼとの反応に利用できる酸素の量（すなわち、酸素を用いるオキシダーゼ反応の効率が高ければ高いほど、そしてオキシダーゼとの反応に利用できる酸素が多ければ多いほど、試薬中で必要とされるフェナジン含有化合物の量は多くなる）。

試薬中に加えることができるフェナジン含有化合物の量の上限は、試薬中での当該化合物の溶解度により制限される。

試薬に加える酵素は、酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応を触媒するのに十分なタイプのもので、十分な量で存在しなければならない。

例えば、グルコースが測定しようとするアナライトであるとすると、酵素はグルコースオキシダーゼでありうる。同様に、コレステロールを分析するにはコレステロールオキシダーゼが用いられ、グリセロール−３−リン酸を分析するにはグリセロール−３−リン酸オキシダーゼが用いられる。

緩衝剤は、往々にして、当該試薬に必要なまたは好適な添加剤でありうる。緩衝剤は酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応に適切なｐＨを与え、それを維持するのに十分なタイプのもので、十分な量で存在しなければならない。希望するｐＨに応じて、当該試薬中で用いることができる緩衝剤の例と゛して、“グツド（Ｇｏｏｄ）″緩衝剤を挙げることができ、例えば２−　（Ｎ −モルホリノ）エタンスルホン酸、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−イミノジ酢酸、ピペラジン−Ｎ、Ｎ”　−ビス（２−エタンスルホン酸）　、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸、Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸、Ｎ−１−リス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸、およびＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジン −Ｎ′−２−エタンスルホン酸などがある。グルコースの分析にはマレイン酸も使用できる。

また、界面活性剤は、特にフェナジン含有化合物が高濃度であるとき、当該試薬に加えることが好ましい。界面活性剤はセミキノイド指示薬の沈殿を防止するのに十分なタイプのものであって、十分な量で存在しなければならない。ポリオキシエチレンエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン、およびトリトン（ＴＲＩＴＯＮ）界面活性剤（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａ１社製）のようなノニオン界面活性剤を用いることができる。

特定のアナライトを分析するための特定の試薬は次のように調製されるニゲルコース試薬工程１−　約１００ｍ１の蒸留水に約３．９ｇの２−（Ｎ、−モルホリノ）エタンスルホン酸を溶解して緩衝剤原液を調製した。

緩衝剤原液中の２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸の濃度は約２００ｍＭであった。得られた溶液のｐ　Ｈを水酸化ナトリウムで約５．６に調整した。

工程２−　約８ｍｌの緩衝剤原液に約６キロ単位（ｋｕ）のグルコースオキシダーゼ〔アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ）］を溶解して酵素含有溶液を調製した。

工程３−　約２５ｍ１の蒸留水に約３．３ｇのフェナジンエトスルフェートを溶解してフェナジン含有化合物の溶液を調製した。この溶液中のフェナジンエトスルフェートの濃度は約４００ｍＭであった。

単一のグルコース試薬は、酵素含有溶液とフェナジン含有化合物溶液を約９＝１　（容量：容量）の比率で混ぜ合わせることにより調製できる。また、試薬キットとして提供することもでき、この場合は酵素含有溶液とフェナジン含有化合物溶液をそれぞれ別のバイアルに入れて保存する（凍結乾燥してもよい）。試薬キットを用いるときは、酵素含有溶液とフェナジン含有化合物溶液を上記の比率（約９：１）（容量：容量）で組み合わせてグルコース検定を行うべきである。凍結乾燥したバイアルは水で再調製して、上記の比率で混合する。

コレステロール試薬工程ｌ　−約１００ｍ１の蒸留水に約６．３ｇの３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸を溶解して緩衝剤原液を調製する。緩衝剤原液中の３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸の濃度は約３００ｍＭである。緩衝剤原液のｐＨをＩＮ水酸化ナトリウムを加えて約７．２に調整する。

工程２−　約５．２ｍｌの緩衝剤原液に約２．２ｋｕのコレステロールオキシダーゼ〔ノカルディア・エリトロポリス（Ｎｏｃａｒｄｉａ　ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）由来〕と約１０４ｍｇのフェナジンエトスルフェートを溶解する。得られた溶液にトリトンＸ−１Ｘ−１００（Ｓｉ　Ｃｈｅｍｉｃａ１社製のノニオン界面活性剤）を加えて、この溶液（コレステロール試薬）中のトリトンＸ−１００の濃度を１％（容量：容量）とする。

コレステロール試薬は単一試薬として、あるいは試薬キットとして提供される。

試薬キットでは、フェナジンエトスルフェート（凍結乾燥形が好ましい）を１つの容器に入れて提供し、他の試薬成分（凍結乾燥形が好ましい）を別の容器で提供する。

グリセロール−３−リン酸試薬工程ｌ　−約１００ｍ１の蒸留水に約３．６ｇのＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎｏ　−２−エタンスルホン酸を溶解して緩衝剤原液を調製した。得られた溶液のｐＨをＩＮの水酸化ナトリウムの添加により約７．６に調整した。

工程２−　約８ｍｌの緩衝剤原液に約８ｋｕのグリセロール−３−リン酸オキシダーゼを溶解して酵素含有溶液を調製した。

工程３−　約２５ｍ１の蒸留水に約３．３ｇのフェナジンエトスルフェートを溶解してフェナジン含有化合物の溶液を調製した。得られた溶液中のフェナジンエトスルフェートの濃度は約４００ｍＭであった。

単一のグリセロール−３−リン酸試薬は、酵素含有溶液とフェナジン含有化合物溶液を約９＝１（容量：容量）の比率で組み合わせることにより得られる。また、グリセロール−３−リン酸試薬キットも酵素含有溶液とフェナジン含有化合物溶液を別々に保存することにより提供しつる（各溶液を凍結乾燥することが好ましい）。グリセロール−３−リン酸の検定に試薬キットを用いるときは、酵素含有溶液とフェナジン含有化合物溶液を、単一のグリ・セロ−ルー３−リン酸試薬に関して上で特定した比率と同じ比率で提供すべきである。これらの比率は、水の添加により再調製される凍結乾燥試薬キットにも適用される。

上記の試薬は液体試薬である（または凍結乾燥試薬を水で再調製した後に液体となる）が、これらの試薬をフィルムに組み入れることもできる。フィルムに組み入れる場合、試薬は少なくともフェナジン含有化合物、酵素、および微晶質ヒドロキシエチルセルロースのようなフィルム形成剤を含有する。

液体試薬および凍結乾燥試薬について上述したように、フィルムにおいても、フェナジン含有化合物は酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応によってセミキノイドを形成するのに十分なタイプのもので、セミキノイドを検出する（それによりアナライトの存在を検出する）のに十分な量であるか、または分析すべきサンプル中のアナライトの濃度にセミキノイドの濃度を相関させるのに十分な量でなければならない。従って、血液サンプルのグルコース分析のためにフィルム中に組み込まれるフェナジン含有化合物の量は、分析すべきサンプル中のグルコース濃度にセミキノイド濃度を相関させる場合が、（フィルムが１００％乾燥しているか、■００％固体であると仮定して）乾燥フィルムＩｇあたり少なくとも約１８マイクロモル（μｍｏｌ）で、サンプル中のグルコースの存在を検出する場合が、乾燥フィルムＩｇあたり少なくとも約１１μｍｏｌであるべきである。また、酵素も、酵素とグルコースとフェナジン含有化合物を必要とする反応を触媒するのに十分なタイプのもので、しかも十分な量で存在しなければならない。

緩衝剤をフィルムに組み入れることもできる。使用可能な緩衝剤のタイプおよびこれら緩衝剤の必要条件は、液体試薬および凍結乾燥試薬について上述したものと同じである。（検定を行う際にフィルムを用いる場合は、吸光度を測定するよりもむしろ反射率または透過率を分光測光的に測定する。）フィルムに組み込まれる試薬はさらに界面活性剤を含んでいてもよい。界面活性剤は分析すべきサンプルを添加したときフィルムの表面を湿らせるのに十分なタイプのもので、しかも十分な量でなければならない。

グルコース分析に用いられるフィルムの具体例は次のとおりである：量／ｋｇフィルムフィルム成分　（湿潤重量）リンゴ酸　１５０　ｍＭ硫酸ニッケル　５０　ｍＭ硫酸マンガン　５０　ｍＭ ”セラブライト　２２　！ｌｉ　（ｗｏｗ）ナトロゾル−２５０Ｍ　Ｏ，７５％（ｗｏｗ）デキストラン硫酸　２　Ｘ　（ｗ：ｗ）（分子量＝５０００ｇ／ｍｏ＋）グルコースオキシダーゼ　１５００　ｕｎｉｔｓ／ｇ　（湿潤フィルム）（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ由来、Ｂｉｏｚｙｍｅ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　Ｌｉｍ１ｔｅｄ製）１プロピオ７ｙン７０Ｄ　７　％　（ｗｏｗ）０、トウイーン２０　０．５　Ｘ　（ｗｏｗ）フェナジンエトスルフエｈ　６０ｍＭ水 “ケイソウ上、オハイオ州シンシナチーのＢａｇ！ｅ−ＰｉｃｈｅｒＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社製。

５大きい粒子サイズのプロピオン酸ビニルコポリマーの水性分散体、ＢＡＳＦ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製。この組成物は保護コロイドを含有する。

°ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａ１社製。

このフィルムは２５０マイクロメートルのＣＲＯＮＡＲプラスチック（ゲルバッキングを有するプラスチック、ＤｕＰｏｎ　を社製）にコーティングすることができる。未乾燥塗膜を約５０℃で２０分間乾燥して、湿潤フィルム中の水分を９０％以上除去できる。

本発明の試薬はサンプル中のアナライトの量を測定する方法に用いることが有利である。サンプル中のアナライトの量を測定する（またはアナライトの存在を検出する）ための一般的な方法は次の工程を含んでいる：工程ｌ　−アナライトを含むサンプルを（上記の）単一液体試薬またはフィルムと合わせて試験サンプルを調製すること；工程２−　該試験サンプルをインキュベートすること；工程３−　インキュベートした試験サンプルの吸光度を約５２０〜７４０ｎｍの波長で分光測光的に測定すること；および工程４−　インキュベートした試験サンプルの測定吸光度をサンプル中のアナライトの量（または存在）に相関させること。

重要なことは、指示薬（セミキノイド）の量（または存在）を約５８０〜７４０ｎｍの波長で分光測光的に測定（または検出）しうろことである。このような長波長での分光光度測定は、分析すべきサンプル中に存在しうるヘモグロビン、ビリルビンおよび濁りによる干渉を減少させる。分光光度測定は約５２０〜７４０ｎｍの波長で行うことができるが、より好ましくは約５９０〜７１０ｎｍの波長で、最も好ましくは約６２０〜６７０ｎｍの波長で測定する。

サンプル中のアナライトを測定するための本発明方法のもう１つの利点は、試験サンプルのインキュベーション期間が従来の比５秒間インキュベートする。その後、試験サンプルの分光光度測定法のインキュベーション期間よりもはるかに短いことである。溶液の吸光度を分光測光的に測定するのに液体試薬を用いる場合、インキュベーション期間は約ｌＯ秒〜約１分の範囲であり、通常約１０〜４０秒であろう。反射率または透過率の分光光度測定にフィルムを用いる場合は、インキュベーション期間が約２０秒〜約１．　５分の範囲であり、通常は約２０〜６０秒であろう。

本発明方法を以下の実施例により説明することにする。

実施例１−　グルコース検定１８９．４７２．５．７８７．５および１４１７．　５ｍｇ／ｄｌの濃度の水性（蒸留水）グルコース原液をそれぞれ調製した。

５０μｍの各グルコース原液を、上記のように特別に調製した単一液体グルコース試薬１ｍｌとそれぞれ組み合わせて試験サンプルを調製し、検定を実施した。

各試験サンプルは周囲温度で約１５秒間インキュベートした。その後、インキュベートした各試験サンプルの分光測光的吸光度を６４６ｎｍで測定した。試験サンプルの分光測光的吸光度と分析すべきサンプル（原液）中のグルコース量の間には直接の相関関係があった。

実施例２−　コレステロール検定ＰＲＥＣｌ５ＥＴコレステロール標準（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　ＭａｎｎｈｅｉｍＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製）を用いる。０．５０，１００．１５０．２００．３００および４００ｍｇコレステロール／ｄｉ標準液のコレステロール標準液をそれぞれ調製する。５００μｌのコレステロール標準液を上記のように特別に調製した単一液体コレスチロール試薬５００μＩと組み合わせて試験サンプルを調製し、各コレステロール標準液の検定を実施する。試験サンプルは周囲温度で約１ユベーシヨン期間が開始されるべきである（フェナジン含有化合吸光度を６０２ｎｍで測定する。分光測光的吸光度の強度は分析すべきコレステロール標準液中のコレステロール量に直接相関している。

実施例３−　グリセロール−３−リン酸検定２２゜１．４４，２および６６．３ｍＭの水性（蒸留水）グリセロール−３−リン酸標準液を調製した。５０μｌの各グリセロール−３−リン酸原液を上記のように特別に調製したグリセロール− ３−リン酸液体試薬１ｍｌにそれぞれ加えて試験サンプルを調製（、た。各試験サンプルは周囲温度で約１５秒間インキュベートした。その後、インキュベートした各試験サンプルの分光測光的吸光度を６０２ｎｍで測定した。分光測光的吸光度の強度は各グリセロール−３−リン酸標準液中のグリセロール−３−リン酸の量に直接相関していた。

検定法が試薬キットを用いるときは、分析すべきサンプルの添加に先立って、該キットの第１試薬と第２試薬を混ぜ合わせる（そして、上記のような単一液体試薬を調製する）。あるいは、アナライトを含むサンプルと該キットの第１試薬とを混ぜ合わせて中間サンプルを調製することもできる（第１試薬はフェナジン含有化合物を含む）。その後、中間サンプルを該キットの第２試薬と一緒にして試験サンプルを調製する（該キットの第２試薬は酵素と緩衝剤を含む）。続いて、試験サンプルを上記のようにインキュベートし、インキュベートした試験サンプルを上記のように分光測光的に測定する。この検定法では、フェナジン含有化合物ではなく酵素または測定すべきアナライトの添加によりインキ物の添加に先立って、測定すべきアナライトと酵素を一緒にすると、酵素とアナライトと酸素が関与する望ましくない反応が起こるかもしれない）。

液体試薬の代わりにフィルムを用いる場合は、アナライトを含む液体サンプルとフィルムを一緒にして試験サンプルを調製する（一般方法の工程ｌを参照のこと）。次いで、試験サンプルを周囲温度で約２０〜６０秒間インキュベートする（一般方法の工程２を参照のこと）。その後、インキュベートした試験サンプルの反射率または透過率を上で特定した波長で測定（または検出）する（一般方法の工程３を参照のこと）。インキュベートした試験サンプルの反射率または透過率の強度は分析すべきサンプル中のアナライト量に反比例する（一般方法の工程４を参照のこと）。

当分野で習熟した者が本発明を利用できるように、本発明の最良の実施方法を理解できるように、そして他の発明および旧式のものと本発明とを区別できるように、上記教示において、十分明確にかつ詳細に本発明を説明してきた。多くの変更および改良が容易に考えられるであろうが、これらは以下の請求の範囲内に含まれるものである。

Claims

【特許請求の範囲】１．フェナジン含有化合物および酵素を含有する、サンプル中のアナライトの存在を検出するための試薬であって、該フェナジン含有化合物が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応によってセミキノイドを形成しうるタイプの化合物であって、サンプル中のアナライトの存在を検出するに足る量であり、そして該酵素が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応を触媒しうるタイプの酵素であって、該反応を触媒するに足る量である、ことを特徴とする上記試薬。２．フェナジン含有化合物、酵素および水を含有する、サンプル中のアナライトの存在を検出するための試薬であって、該フェナジン含有化合物が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応によってセミキノイドを形成しうるタイプの化合物であって、サンプル中のアナライトの存在を検出するに足る量であり、そして該酵素が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応を触媒しうるタイプの酵素であって、該反応を触媒するに走る量である、ことを特徴とする上記試薬。３．フェナジン含有化合物および酵素を含有する、サンプル中のアナライトの量を測定するための試薬であって、該フェナジン含有化合物が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応によってセミキノイドを形成しうるタイプの化合物であって、セミキノイドの濃度をサンプル中のアナライトの濃度に相関させるに足る量であり、そして該酵素が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応を触媒しうるタイプの酵素であって、該反応を触媒するに足る量である、ことを特徴とする上記試薬。４．フェナジン含有化合物、酵素および水を含有する、サンプル中のアナライトの量を測定するための試薬であって、該フェナジン含有化合物が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応によってセミキノイドを形成しうるタイプの化合物であって、セミキノイドの濃度をサンプル中のアナライトの濃度に相関させるに足る量であり、そして該酵素が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応を触媒しうるタイプの酵素であって、該反応を触媒するに足る量である、ことを特徴とする上記試薬。５．アナライトがグルコースで、フェナジン含有化合物の濃度が少なくとも約１ミリモルである、請求項２記載の試薬。６．アナライトがグルコースで、フェナジン含有化合物の濃度が少なくとも約４ミリモルである、請求項４記載の試薬。７．フェナジン含有化合物がフェナジンメトスルフェート、フェナジンエトスルフェート、Ｎ−エチルメトキシフェナジンエトスルフェート、および１−メトキシフェナジンメトスルフェートより成る群から選ばれる、請求項４記載の試薬。８．フェナジン含有化合物がフェナジンメトスルフェートおよびフェナジンエトスルフェートより成る群から選ばれる、請求項４記載の試薬。９．酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応に適切なｐＨを与えかつそれを維持するに足るタイプおよび量の緩衝剤をさらに含有する、請求項２記載の試薬。１０．酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応に適切なｐＨを与えかつそれを維持するに足るタイプおよび量の緩衝剤をさらに含有する、請求項１記載の試薬。１１．酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応に適切なｐＨを与えかつそれを維持するに足るタイプおよび量の緩衝剤をさらに含有する、請求項４記載の試薬。１２．酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応に適切なｐＨを与えかつそれを維持するに足るタイプおよび量の緩衝剤をさらに含有する、請求項３記載の試薬。１３．酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応に適切なｐＨを与えかつそれを維持するに足るタイプおよび量の緩衝剤をさらに含有する、請求項４記載の試薬。１４．酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応に適切なｐＨを与えかつそれを維持するに足るタイプおよび量の緩衝剤をさらに含有する、請求項８記載の試薬。１５．セミキノイドの沈殿を防止するに足るタイプおよび量の界面活性剤をさらに含有する、請求項９記載の試薬。１６．セミキノイドの沈殿を防止するに足るタイプおよび量の界面活性剤をさらに含有する、請求項１０記載の試薬。１７．セミキノイドの沈殿を防止するに足るタイプおよび量の界面活性剤をさらに含有する、請求項１１記載の試薬。１８．セミキノイドの沈殿を防止するに足るタイプおよび量の界面活性剤をさらに含有する、請求項１２記載の試薬。１９．界面活性剤がノニオンまたはアニオン界面活性剤である、請求項１７記載の試薬。２０．フェナジン含有化合物、酵素およびフィルム形成剤を含有する、サンプル中のアナライトの存在を検出するためのフィルムであって、該フェナジン含有化合物が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応によってセミキノイドを形成しうるタイプの化合物であって、サンプル中のアナライトの存在を検出するに足る量であり、該酵素が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応を触媒しうるタイプの酵素であって、該反応を触媒するに足る量であり、そして該フィルム形成剤が粘着フィルムを形成するに足る量である、ことを特徴とする上記フィルム。２１．フェナジン含有化合物、酵素およびフィルム形成剤を含有する、サンプル中のアナライトの量を測定するためのフィルムであって、該フェナジン含有化合物が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応によってセミキノイドを形成しうるタイプの化合物であって、セミキノイドの濃度をサンプル中のアナライトの濃度に相関させるに足る量であり、該酵素が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応を触媒しうるタイプの酵素であって、該反応を触媒するに足る量であり、そして該フィルム形成剤が粘着フィルムを形成するに足る量である、ことを特徴とする上記フィルム。２２．アナライトがグルコースで、フェナジン含有化合物の量が乾燥フィルム１グラムあたり少なくとも約１１マイクロモルである、請求項２０記載の試薬。２３．アナライトがグルコースで、フェナジン含有化合物の量が乾燥フィルム１グラムあたり少なくとも約１８マイクロモルである、請求項２１記載の試薬。２４．酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応に適切なｐＨを与えかつそれを維持するに足るタイプおよび量の緩衝剤をさらに含有する、請求項２０記載の試薬。２５．酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応に適切なｐＨを与えかつそれを維持するに足るタイプおよび量の緩衝剤をさらに含有する、請求項２１記載のフィルム。２６．サンプルの添加時にフィルムの表面を湿らせるに足るタイプおよび量の界面活性剤をさらに含有する、請求項２４記載のフィルム。２７．サンプルの添加時にフィルムの表面を湿らせるに足るタイプおよび量の界面活性剤をさらに含有する、請求項２５記載のフィルム。２８．アナライトがグルコースで、フェナジン含有化合物がフェナジンエトスルフェートで、酵素がグルコースオキシダーゼで、フィルム形成剤が微晶質ヒドロキシエチルセルロースで、緩衝剤がリンゴ酸で、そして界面活性剤がポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートである、請求項２７記載のフィルム。２９．フェナジン含有化合物と水を含む第１試薬および酵素と緩衝剤と水を含む第２試薬を含有する、サンプル中のアナライトの存在を検出するための試薬キットであって、該フェナジン含有化合物が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応によってセミキノイドを形成しうるタイプの化合物であって、サンプル中のアナライトの存在を検出するに足る量であり、該酵素が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応を触媒しうるタイプの酵素であって、該反応を触媒するに足る量であり、そして該緩衝剤が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応に適切なｐＨを与えかつそれを維持するに足るタイプおよび量である、ことを特徴とする上記試薬キット。３０．フェナジン含有化合物と水を含む第１試薬および酵素と緩衝剤と水を含む第２試薬を含有する、サンプル中のアナライトの量を測定するための試薬キットであって、該フェナジン含有化合物が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応によってセミキノイドを形成しうるタイプの化合物であって、セミキノイドの濃度をサンプル中のアナライトの濃度に相関させるに足る量であり、該酵素が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応を触媒しうるタイプの酵素であって、該反応を触媒するに足る量であり、そして該緩衝剤が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応に適切なｐＨを与えかつそれを維持するに足るタイプおよび量である、ことを特徴とする上記試薬キット。３１．フェナジン含有化合物を含む第１試薬および酵素と緩衝剤を含む第２試薬を含有する、サンプル中のアナライトの存在を検出するための試薬キットであって、該フェナジン含有化合物が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応によってセミキノイドを形成しうるタイプの化合物であって、サンプル中のアナライトの存在を検出するに足る量であり、該酵素が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応を触媒しうるタイプの酵素であって、該反応を触媒するに足る量であり、そして該緩衝剤が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応に適切なｐＨを与えかつそれを維持するに足るタイプおよび量である、ことを特徴とする上記試薬キット。３２．フェナジン含有化合物を含む第１試薬および酵素と緩衝剤を含む第２試薬を含有する、サンプル中のアナライトの量を測定するための試薬キットであって、該フェナジン含有化合物が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応によってセミキノイドを形成しうるタイプの化合物であって、セミキノイドの濃度をサンプル中のアナライトの濃度に相関させるに足る量であり、該酵素が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応を触媒しうるタイプの酵素であって、該反応を触媒するに足る量であり、そして該緩衝剤が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応に適切なｐＨを与えかつそれを維持するに足るタイプおよび量である、ことを特徴とする上記試薬キット。３３．アナライトがグルコースであり、サンプル中のグルコースの存在を検出するのに必要な量の第１試薬と第２試薬を混ぜ合わせたとき、フェナジン含有化合物の濃度が少なくとも約１ミリモルとなる、請求項２９記載の試薬キット。３４．サンプル中のアナライトの存在を検出するのに前記キットを用いるとき、第２試薬がセミキノイドの沈殿を防止するに足るタイプおよび量の界面活性剤をさらに含有する、請求項２９記載の試薬キット。３５．アナライトがグルコースであり、サンプル中のグルコースの量を測定するのに必要な量の第１試薬と第２試薬を混ぜ合わせたとき、フェナジン含有化合物の濃度が少なくとも約４ミリモルとなる、請求項３０記載の試薬キット。３６．サンプル中のアナライトの量を測定するのに前記キットを用いるとき、第２試薬がセミキノイドの沈殿を防止するに足るタイプおよび量の界面活性剤をさらに含有する、請求項３０記載の試薬キット。３７．サンプル中のアナライトの存在を検出するのに前記キットを用いるとき、第２試薬がセミキノイドの沈殿を防止するに足るタイプおよび量の界面活性剤をさらに含有する、請求項３１記載の試薬キット。３８．サンプル中のアナライトの量を測定するのに前記キットを用いるとき、第２試薬がセミキノイドの沈殿を防止するに足るタイプおよび量の界面活性剤をさらに含有する、請求項３２記載の試薬キット。３９．サンプル中のアナライトの存在を検出する方法であって、ａ．アナライトを含むサンプルと請求項１記載の試薬を混ぜ合わせて試験サンプルを調製し；ｂ．該試験サンプルをインキュベートし；ｃ．インキュベートした試験サンプルの吸光度を約５２０〜７４０ｎｍの波長で分光測光的に測定し；そしてｄ．インキュベートした試験サンプルの測定吸光度をサンプル中のアナライトの存在または非存在に相関させる；各工程を含む上記方法。４０．サンプル中のアナライトの量を測定する方法であって、ａ．アナライトを含むサンプルと請求項１記載の試薬を混ぜ合わせて試験サンプルを調製し；ｂ．該試験サンプルをインキュベートし；ｃ．インキュベートした試験サンプルの吸光度を約５２０〜７４０ｎｍの波長で分光測光的に測定し；そしてｄ．インキュベートした試験サンプルの測定吸光度をサンプル中のアナライトの量に相関させる；各工程を含む上記方法。４１．試験サンプルを約１０秒〜約１分間インキュベートする、請求項３９記載の方法。４２．分光光度測定の波長が約５８０〜７４０ｎｍである、請求項４０記載の方法。４３．アナライトがグルコースで、フェナジン含有化合物の濃度が少なくとも約１ミリモルである、請求項４１記載の方法。４４．試験サンプルを約１０秒〜約１分間インキュベートする、請求項４２記載の方法。４５．前記の試薬が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応に適切なｐＨを与えかつそれを維持するに足るタイプおよび量の緩衝剤をさらに含有する、請求項４１記載の方法。４６．アナライトがグルコースで、フェナジン含有化合物の濃度が少なくとも約４ミリモルである、請求項４４記載の方法。４７．前記の試薬が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応に適切なｐＨを与えかつそれを維持するに足るタイプおよび量の緩衝剤をさらに含有する、請求項４４記載の方法。４８．前記の試薬がセミキノイドの沈殿を防止するに足るタイプおよび量の界面活性剤をさらに含有する、請求項４５記載の方法。４９．前記の試薬がセミキノイドの沈殿を防止するに足るタイプおよび量の界面活性剤をさらに含有する、請求項４７記載の方法。５０．サンプル中のアナライトの存在を検出する方法であって、ａ．アナライトを含むサンプルと請求項２４記載の第１試薬を混ぜ合わせて中間サンプルを調製し；ｂ．該中間サンプルと請求項２４記載の第２試薬を混ぜ合わせて試験サンプルを調製し；ｃ．該試験サンプルをインキュベートし；ｄ．インキュベートした試験サンプルの吸光度を約５２０〜７４０ｎｍの波長で分光測光的に測定し；そしてｅ．インキュベートした試験サンプルの測定吸光度をサンプル中のアナライトの存在または非存在に相関させる；各工程を含む上記方法。５１．サンプル中のアナライトの量を測定する方法であって、ａ．アナライトを含むサンプルと請求項２４記載の第１試薬を混ぜ合わせて中間サンプルを調製し；ｂ．該中間サンプルと請求項２４記載の第２試薬を混ぜ合わせて試験サンプルを調製し；ｃ．該試験サンプルをインキュベートし；ｄ．インキュベートした試験サンプルの吸光度を約５２０〜７４０ｎｍの波長で分光測光的に測定し；そしてｅ．インキュベートした試験サンプルの測定吸光度をサンプル中のアナライトの量に相関させる；各工程を含む上記方法。５２：分光光度測定の波長が約５８０〜７４０ｎｍである、請求項５１記載の方法。５３．試験サンプルを約１０秒〜約１分間インキュベートする、請求項５０記載の方法。５４．試験サンプルを約１０秒〜約１分間インキュベートする、請求項５２記載の方法。５５．第２試薬が試験サンプル中のセミキノイドの沈殿を防止するに足るタイプおよび量の界面活性剤をさらに含有する、請求項５３記載の方法。５６．第２試薬が試験サンプル中のセミキノイドの沈殿を防止するに足るタイプおよび量の界面活性剤をさらに含有する、請求項５４記載の方法。５７．サンプル中のアナライトの存在を検出する方法であって、ａ．アナライトを含むサンプルと請求項１５記載のフィルムを合わせて試験サンプルを調製し；ｂ．該試験サンプルをインキュベートし；ｃ．インキュベートした試験サンプルの反射率または透過率を約５２０〜７４０ｎｍの波長で分光測光的に測定し；そしてｄ．インキュベートした試験サンプルの測定反射率または透過率をサンプル中のアナライトの存在または非存在に相関させる；各工程を含む上記方法。５８．サンプル中のアナライトの量を測定する方法であって、ａ．アナライトを含むサンプルと請求項１５記載のフィルムを合わせて試験サンプルを調製し；ｂ．該試験サンプルをインキュベートし；ｃ．インキュベートした試験サンプルの反射率または透過率を約５２０〜７４０ｎｍの波長で分光測光的に測定し；そしてｄ．インキュベートした試験サンプルの測定反射率または透過率をサンプル中のアナライトの量に相関させる；各工程を含む上記方法。５９．分光光度測定の波長が約５８０〜７４０ｎｍである、請求項５８記載の方法。６０．試験サンプルを約２０秒〜約１．５分間インキュベートする、請求項５７記載の方法。６１．試験サンプルを約２０秒〜約１．５分間インキュベートする、請求項５９記載の方法。６２．アナライトがグルコースで、フェナジン含有化合物の量が乾燥フィルム１グラムあたり少なくとも約１１マイクロモルである、請求項６０記載の方法。６３．アナライトがグルコースで、フェナジン含有化合物の量が乾燥フィルム１グラムあたり少なくとも約１８マイクロモルである、請求項６１記載の方法。６４．前記の試薬が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応に適切なｐＨを与えかつそれを維持するに足るタイプおよび量の緩衝剤をさらに含有する、請求項６０記載の方法。６５．前記の試薬が酵素とアナライトとフェナジン含有化合物を必要とする反応に適切なｐＨを与えかつそれを維持するに足るタイプおよび量の緩衝剤をさらに含有する、請求項６１記載の方法。６６．前記の試薬が、アナライトを含むサンプルと前記フィルムを合わせたとき、該フィルムの表面を湿らせるに足るタイプおよび量の界面活性剤をさらに含有する、請求項６４記載の方法。６７．前記の試薬が、アナライトを含むサンプルと前記フィルムを合わせたとき、該フィルムの表面を湿らせるに足るタイプおよび量の界面活性剤をさらに含有する、請求項６５記載の方法。