NO340738B1 - Farmasøytiske forbindelser - Google Patents

Farmasøytiske forbindelser Download PDF

Info

Publication number
NO340738B1
NO340738B1 NO20073957A NO20073957A NO340738B1 NO 340738 B1 NO340738 B1 NO 340738B1 NO 20073957 A NO20073957 A NO 20073957A NO 20073957 A NO20073957 A NO 20073957A NO 340738 B1 NO340738 B1 NO 340738B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
pyrazole
salt
ylamide
piperidin
carboxylic acid
Prior art date
Application number
NO20073957A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20073957L (no
Inventor
Paul Graham Wyatt
Gary Trewartha
David Charles Rees
Mladen Vinkovic
Original Assignee
Astex Therapeutics Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB0501475A external-priority patent/GB0501475D0/en
Application filed by Astex Therapeutics Ltd filed Critical Astex Therapeutics Ltd
Publication of NO20073957L publication Critical patent/NO20073957L/no
Publication of NO340738B1 publication Critical patent/NO340738B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/14—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D231/38—Nitrogen atoms
    • C07D231/40—Acylated on said nitrogen atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse angår syreaddisjonssalter av forbindelsen 4-(2,6-diklor-benzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, saltene er dannet med en syre valgt fra metansulfonsyre og eddiksyre og blandinger derav, og krystallformer derav, fremgangsmåter for fremstilling av syreaddisjonssaltene, nye kjemiske intermediater for anvendelse i fremgangsmåtene, og terapeutiske anvendelser av syreaddisj onssaltene.
Forbindelsen 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid og hydrokloridsaltaddisjonssaltet derav er beskrevet i tidligere internasjonal søknad nr. PCT/GB2004/003179 (publikasjonsnr. WO 2005/012256) som inhibitorer av syklinavhengige kinaser (CDK-kinaser) og glykogensyntasekinase-3 (GSK3).
Proteinkinaser utgjør en stor familie av strukturelt relaterte enzymer som er ansvarlig for kontroll av et bredt spekter av signaltransduksjonsprosesser i cellen (Hardie, G. and Hanks, S. (1995) The Protein Kinase Facts Book. I and II, Academic Press, San Diego, CA). Kinasene kan kategoriseres i familier ved substratene de fosforylerer (for eksempel protein-tyrosin, protein-serin/treonin, lipider, etc). Sekvensmotivene har blitt identifisert som generelt korresponderer til hver av disse familiene (for eksempel Hanks, S.K., Hunter, T., FASEBJ., 9:576-596 (1995); Knighton, et al, Science, 253:407-414
(1991); Hiles, et al, Cell, 70:419-429 (1992); Kunz, et al, Cell, 73:585-596 (1993); Garcia-Bustos, etal, EMBOJ., 13:2352-2361 (1994)).
Proteinkinaser kan karakteriseres ved deres reguleringsmekanismer. Disse mekanismene inkluderer for eksempel autofosforylering, transfosforylering med andre kinaser, protein-protein-interaksjoner, protein-lipidinteraksjoner og protein-polynukleotid-interaksjoner. En individuell proteinkinase kan reguleres av mer enn én mekanisme.
Kinase regulerer mange forskjellige celleprosesser som inkluderer, men er ikke begrenset til, proliferasjon, differensiering, apoptose, motilitet, transkripsjon, translasjon og andre signaliseringsprosesser, ved å addere fosfatgrupper til målproteiner. Disse fosforyleringshendelsene virker som molekylære på/av-brytere som kan modulere eller regulere målproteinbiologisk funksjon. Fosforylering av målproteiner skjer som respons på et antall ekstracellulære signaler (hormoner, neurotransmittere, vekst og differensieringsfaktorer, etc), cellesyklushendelser, miljømessig eller ernæringsmessig stress etc. Passende proteinkinase fungerer i signalreaksjonsveien med å aktivere eller inaktivere (enten direkte eller indirekte), for eksempel et metabolsk enzym, reguleringsprotein, reseptor, cytoskjelettprotein, ionekanal eller pumpe eller transkripsjonsfaktor. Ikke kontrollert signalisering på grunn av feil ved kontroll når det gjelder proteinfosforylering, har blitt implisert i et antall sykdommer, som for eksempel inkluderer inflammasjon, kreft, allergi/astma, sykdommer og tilstander som gjelder immunsystemet, sykdommer og tilstander som gjelder sentralnervesystemet og angiogenese.
Prosessen med eukaryot celledeling kan bredt deles i en serie sekvensielle faser navngitt Gl, S, G2 og M. Korrekt progresjon gjennom de forskjellige fasene i cellesyklusen har vist seg å være kritisk avhengig av den rommessige og temporale reguleringen av en familie av proteiner kjente som syklinavhengige kinaser (cdk-er) og et forskjellig sett av deres kognatproteinpartnere navngitt sykliner. Cdk-er er cdc2 (også kjent som cdkl) homologe serin-treonin-kinaseproteiner som er i stand til å anvende ATP som et substrat i fosforyleringen av forskjelligartede polypeptider i en sekvensavhengig sammenheng. Sykliner er en familie proteiner kjennetegnet ved en homologiregion som inneholder ca. 100 aminosyrer, navngitt "syklinboksen" som anvendes i binding til, og som definerer selektivitet for, spesifikke cdk-partnerproteiner.
Moduleringen av ekspresjonsnivåene, nedbrytningshastighetene og aktiveringsnivåene til forskjellige cdk-er og sykliner gjennom cellesyklusen fører til den sykliske dannelsen av en serie cdk/syklinkomplekser hvori cdk-ene er enzymatisk aktive. Dannelsen av disse kompleksene kontrollerer passering gjennom atskilte cellesyklussjekkpunkter og muliggjør derved at prosessen med celledeling fortsetter. Svikt når det gjelder å tilfreds-stille de forhåndsgitte, biokjemiske kriteriene ved et gitt cellesykelsjekkpunkt, det vil si svikt når det gjelder å danne et påkrevd cdk/syklinkompleks, kan føre til cellesyklusarrest og/eller cellulær apoptose. Avvikende cellulær proliferasjon som manifesteres i kreft, kan ofte skyldes tap av korrekt cellesykluskontroll. Inhibering av cdk-enzymatisk aktivitet tilveiebringer derfor en måte hvorved abnormal celledeling kan ha deres deling arrestert og/eller bli avlivet. Diversiteten når det gjelder cdk-er og cdk-komplekser og deres kritiske rolle når det gjelder å mediere cellesykuslen, tilveiebringer et bredt spekter for potensielle terapeutiske midler valgt på basis av et definert biokjemisk utgangspunkt.
Progresjon fra Gl-fasen til S-fasen til cellesyklusen blir primært regulert av cdk2, cdk3, cdk4 og cdk6 via assosiasjon med medlemmer av D- og E-type-syklinene. D-type-sykliner opptrer instrumentelt i å muliggjøre passering forbi Gl-restriksjonspunktet, mens cdk2/syklin E-komplekset er nøkkelen til omdanning fra Gl - til S-fasen. Etterfølgende progresjon gjennom S-fasen og inngang i G2 antas å kreve cdk2/syklin A-komplekset. Begge mitoser og G2 til M-faseovergangen som trigger den, reguleres av kompleksene til cdkl og A- og B-type-syklinene.
I løpet av genfasen er retinoblastomprotein (Rb) og relaterte lommeproteiner, slik som pl30, substrater for cdk(2, 4, & 6)/syklinkomplekser. Progresjon gjennom Gl blir delvis lettet ved hyperfosforylering og således inaktivering av Rb og pl30 av cdk(4/6)/syklin D-kompleksene. Hyperfosforylering av Rb og pl30 forårsaker frigivelse av transkripsjonsfaktorer, slik som E2F, og således ekspresjon av genene nødvendig for progresjon gjennom Gl og for inngang i S-fasen, slik som genet for syklin E. Ekspresjon av syklin E letter dannelsen av cdk2/syklin E-komplekset som forsterker eller opprettholder E2F-nivåer via ytterligere fosforylering av Rb. cdk2/syklin E-komplekset fosforylerer også andre proteiner nødvendig for DNA-replikasjon, slik som NP AT, som har blitt implisert i histonbiosyntese. Gl-progresjon og Gl/S-overgang er også regulert via den mitogenstimulerte Myc-reaksjonsveien, som mates inn i cdk2/syklin E-reaksjonsveien. Cdk2 er også bundet til den p53-medierte DNA-skaderesponsreaksjonsveien via p53-regulering av p21-nivåer. p21 er en proteininhibitor av cdk2/syklin E og er således i stand til å blokkere eller forsinke Gl/S-overgang. cdk2/syklin E-komplekset kan således representere et punkt hvorved biokjemisk stimuli fra Rb, Mye og p53-reaksjonsveiene i noen grad er integrert. Cdk2 og/eller cdk2/syklin E-komplekset representerer derfor gode mål for terapeutiske midler designet for å arrestere eller gjenvinne kontroll av cellesyklusen i avvikende delende celler.
Den eksakte rollen til cdk3 i cellesyklusen er ikke klar. Pr. i dag har ingen kognate syklinpartnere blitt identifisert, men en dominant negativ form av cdk3 forsinker celler i Gl, som derved kan tyde på at cdk3 har en rolle når det gjelder regulering av Gl/S-overgangen.
Selv om de fleste cdk-er har blitt implisert i regulering av cellesyklusen er det bevis for at visse medlemmer av cdk-familien er involvert i andre biokjemiske prosesser. Dette blir eksemplifisert ved cdk5 som er nødvendig for korrekt neuronal utvikling og som også er blitt implisert i fosforylering av flere neuronale proteiner slik som Tau, NUDE-1, synapsinl, DARPP32 og Muncl8/SyntaxinlA-komplekset. Neuronal cdk5 blir hensiktsmessig aktivert ved binding til p35/p39-proteinene. Cdk5-aktivitet kan imidlertid dereguleres ved binding til p25, en trunkert versjon av p35. Omdanning av p35 til p25 og etterfølgende deregulering av Cdk5-aktivitet kan induseres ved iskemi, eksitotoksisitet og P-amyloidpeptid. Som en konsekvens har p25 blitt implisert i patogenesen til neurodegenerative sykdommer, slik som Alzheimers, og er derfor av interesse som et mål for terapeutiske midler rettet mot disse sykdommene.
Cdk7 er et nukleært protein som har cdc2 CAK-aktivitet og binder til syklin H. Cdk7 har blitt identifisert som komponent til det TFIIH transkripsjonale komplekset som har RNA-polymerase II C-terminal domene(CTD)-aktivitet. Denne har blitt assosiert med regulering av HIV-1-transkripsjon via en Tat-mediert, biokjemisk reaksjonsvei. Cdk8 binder syklin C og har blitt implisert i fosforyleringen av CTD til RNA-polymerase H Tilsvarende har cdk9/syklin-Tl -komplekset (P-TEFb-komplekset) blitt implisert i forlenget kontroll av RNA-polymerase II. PTEF-b er også krevd for aktivering av transkripsjon av HTV-l-genomet ved den virale transaktivatoren Tat gjennom dens interaksjon med syklin Tl. Cdk7, cdk8, cdk9 og P-TEFb-komplekset er derfor potensielle mål for anti-virale terapeutiske midler.
Ved en molekylær nivåmediering av cdk/syklinkompleksaktivitet kreves en serie av stimulerende og inhiberende fosforylerings- eller defosforyleringshendelser. Cdk-fosforylering utføres av en gruppe cdk-aktiverende kinaser (CAK-er) og/eller kinaser slik som weel, Mytl og Mikl. Defosforylering utføres ved fosfataser slik som cdc25 (a & c), pp2a eller KAP.
Cdk/syklinkompleksaktivitet kan ytterligere reguleres av to familier endogene, cellulære, proteinholdige inhibitorer: Kip/Cip-familien eller INK-familien. INK-proteinene binder spesifikt cdk4 og cdk6. P16"*4 (også kjent som MTS1) er et potensielt tumorundertrykkende gen som muteres eller fjernes i et stort antall primære kreftformer. Kip/Cip-familien inneholder proteiner som p2lciP1'W<afl>jp27<Kipl>og p57kip2. Slik det er diskutert tidligere blir p21 indusert av p53 og er i stand til å inaktivere cdk2/syklin(E/A) og cdk4/syklin(Dl/D2/D3)-kompleksene. Atypisk lave nivåer av p27-ekspresjon har blitt observert i bryst-, kolon- og prostatakreft. På den annen side har overekspresjon av syklin E i faste tumorer vist seg å korrelere med dårlig pasientprognose. Overekspresjon av syklin Dl har blitt assosiert med spiserør, bryst, skjelett og ikke-småcellelungekarsinomer.
Den viktige rollen til cdk-er og deres assosierte proteiner når det gjelder koordinering og driving av cellesyklusen i prolifererende celler har blitt angitt ovenfor. Noen av de biokjemiske reaksjonsveiene hvori cdk-er spiller en rolle, har også blitt beskrevet. Utviklingen av monobehandlinger for behandling av proliferative sykdommer, slik som kreft, ved anvendelse av terapeutiske midler målrettet generelt til cdk-er eller til spesifikke cdk-er, er derfor potensielt svært ønskelig. Cdk-inhibitorer kan hensiktsmessig også anvendes for behandling av andre tilstander slik som virale infeksjoner, autoimmune sykdommer og neurodegenerative sykdommer, blant andre. Cdk-målrettede, terapeutiske midler kan også tilveiebringe kliniske fordeler når det gjelder behandling av tidligere beskrevne sykdommer når de anvendes i kombinasjonsbehandling med enten eksisterende eller nye, terapeutiske midler. Cdk-målrettede, antikreftbehandlinger kan potensielt ha fordeler i forhold til mange verserende anti-tumormidler idet de ikke direkte vil reagere innbyrdes med DNA og vil derfor redusere risiko for sekundær tumorutvikling.
Glykogensyntasekinase-3 (GSK3) er en serin-treoninkinase som opptrer som to allestedsnærværende uttrykte isoformer i mennesker (GSK3a & beta GSK3P). GSK3 har blitt implisert til å ha roller når det gjelder embryonutvikling, proteinsyntese, celleproliferasjon, celledifferensiering, mikrotubule dynamikker, cellemotilitet og cellulær apoptose. Som sådan har GSK3 blitt implisert i progresjon av sykdoms-tilstander slik som diabetes, kreft, Alzheimers sykdom, slag, epilepsi, motorisk neuronsykdom og/eller hodetraume. Fylogenisk GSK3 er svært nært relatert til de syklinavhengige kinasene (CDK-ene).
Konsensuspeptidsubstratsekvensen gjenkjent av GSK3 er (Ser/Thr)-X-X-X-(pSer/pThr), hvor X er en hvilken som helst aminosyre (ved posisjoner (n+1), (n+2), (n+3)) og pSer og pThr er fosfoserin og fosfotreonin respektivt (n+4). GSK3 fosforylerer det første serinet eller treoninet ved posisjon (n). Fosfo-serin eller fosfotreonin, ved (n+4)-posisjon, synes nødvendig for å prime GSK3 for å gi maksimal substratturnover. Fosforylering av GSK3a ved Ser21 eller GSK3P ved Ser9 fører til inhibering av GSK3. Mutageneser og peptidkonkurrerende studier har ført til modellen at den fosforylerte N-terminus til GSK3 er i stand til å konkurrere med fosfo-peptid-substratet (S/TXXXpS/pT) via en autoinhiberingsmekanisme. Det er også data som viser at GSK3a og GSKP kan være vanskelig å regulere ved fosforylering av tyrosinene 279 og 216 respektivt. Mutasjon av disse restene til et Phe forårsaket en reduksjon i in v/vo-kinaseaktivitet. Den røntgenkrystallografiske strukturen til GSK3P har hjulpet til med å kaste lys over alle aspekter ved GSK3 -aktivering og regulering.
GSK3 danner en del av pattedyrinsulinresponsreaksjonsveien og er i stand til å fosforylere og derved inaktivere glykogensyntase. Oppregulering av glykogensyntase-aktivitet og derved glykogensyntese gjennom inhibering av GSK3, har således blitt ansett som en potensiell måte å bekjempe type II eller ikke-insulin-avhengig diabetes mellitus (NIDDM): en tilstand hvori kroppsvev blir resistent overfor insulinstimulering. Den cellulære insulinresponsen i lever, adipose eller muskelvev trigges ved insulin som bindes til en ekstracellulær insulinreseptor. Dette forårsaker fosforyleringen og etterfølgende rekruttering til plasmamembranen til insulinreseptorsubstrat(IRS)-proteinene. Videre fosforylering av IRS-proteinene initierer rekruttering av fosfoinositid-3-kinase (PI3K) til plasmamembranen hvor den er i stand til å frigi den andre budbringeren fosfatidylinosityl-3,4,5-trisfosfat (PIP3). Dette letter kolokalisering av 3-fosfoinositidavhengig proteinkinase 1 (PDK1) og proteinkinase B (PKB eller Akt) til membranen, hvor PDK1 aktiverer PKB. PKB er også i stand til å fosforylere og deretter inhibere GSK3a og/eller GSKP gjennom fosforylering av Ser9 eller ser21, respektivt. Inhibering av GSK3 trigger deretter oppregulering av glykogen syntaseaktivitet. Terapeutiske midler i stand til å inhibere GSK3 kan således være i stand til å indusere cellulære responser tilsvarende de som observeres ved insulinstimulering. Et ytterligere in v/vo-substrat av GSK3 er den eukaryote proteinsynteseinitieringsfaktoren 2B (eIF2B). eIF2B blir inaktivert via fosforylering og er således i stand til å undertrykke proteinbiosyntese. Inhibering av GSK3, for eksempel ved inaktivering av "pattedyrmålet til rapamyein"-proteinet (mTOR), kan således oppregulere proteinbiosyntese. Til slutt er det noe bevis for regulering av GSK3-aktivitet via den mitogenaktiverte proteinkinase(MAPK)-reaksjonsveien gjennom fosforylering av GSK3 av kinaser slik som mitogenaktivert proteinkinaseaktivert proteinkinase 1 (MAPKAP-Kl eller RSK). Disse data viser at GSK3-aktivitet kan moduleres ved mitogen, insulin og/eller aminosyrestimuli.
Det har også vist seg at GSK3P er en nøkkelkomponent i vertebrat Wnt-signaliserings-reaksjonsveien. Denne biokjemiske reaksjonsveien har vist seg å være kritisk for normal embryonutvikling og regulerer celleproliferasjon i normalt vev. GSK3 blir inhibert som respons på Wnt-stimuli. Dette kan føre til defosforyleringen av GSK3-substrater slik som Axin, adenomatøs polyposi-coli(APC)-genprodukt og P-catenin. Avvikende regulering av Wnt-reaksjonsveien har blitt assosiert med mange kreftformer. Mutasjoner av APC og/eller P-catenin er også vanlig ved kolorektal kreft og andre tumorer. P-catenin har også vist seg å være viktig ved celleadhesjon. Således kan GSK3 også modulere cellulære adhesjonsprosesser i noen grad. Bortsett fra de biokjemiske reaksjonsveiene allerede beskrevet, er det også data som impliserer GSK3 når det gjelder regulering av celledeling via fosforylering av syklin-Dl, ved fosforyleringen av transkripsjonsfaktorer slik som c-Jun, CCAAT/forsterkerbindingsprotein a (C/EBPa), c-Myc og/eller andre substrater slik som nukleær faktor av aktiverte T-celler (NFATc), varmesjokkfaktor-1 (HSF-1) og c-AMP-responselementbindingsproteinet (CREB). GSK3 synes også å spille en rolle, skjønt vevsspesifikk, når det gjelder regulering av cellulær apoptose. Rollen til GSK3 når det gjelder modulering av cellulær apoptose via en proapoptosemekanisme, kan være av særlig relevans når det gjelder medisinske tilstander hvori neuronal apoptose kan opptre. Eksempler på disse er hodetraume, slag, epilepsi, Alzheimers og motoriske neuronsykdommer, progressiv supranukleær palsi, kortikobasal degenerering og Picks sykdom. In vitro har det vist seg at GSK3 er i stand til å hyperfosforylere det mikrotubult assosierte proteinet Tau. Hyperfosforylering av Tau forstyrrer dens normale binding til mikrotubuler og kan også føre til dannelse av intra-cellulære Tau-filamenter. Det antas at den progressive akkumuleringen av disse filamentene fører til slutt til neuronal dysfunksjon og degenerering. Inhibering av Tau-fosforylering gjennom inhibering av GSK3, kan således tilveiebringe en måte å begrense og/eller hindre neurodegenerative effekter.
Cellesyklusprogresjon reguleres ved den kombinerte virkningen av sykliner, syklinavhengige kinaser (CDK-er) og CDK-inhibitorer (CDKi), som er negative cellesyklus-regulatorer. p27KIPl er en CDKi-nøkkel i cellesyklusregulering, hvis nedbryting kreves for Gl/S-overgang. Til tross for fravær av p27KIPl-ekspresjon i prolifererende lymfocytter har noen aggressive B-cellelymfomer blitt rapportert å vise en anomaløs p27KIPl-farging. En abnormalt høy ekspresjon av p27KIPl ble funnet i lymfomer av denne typen. Analyse av den kliniske relevansen til disse funnene viser at en høy grad av p27KIPl-ekspresjon i denne typen tumorer er en negativ prognosemarkør, i både univariat og multivariat analyse. Disse resultatene viser at det er abnormal p27KIPl-ekspresjon i diffuse, stor-P-cellelymfomer (DLBCL), med uheldig klinisk signifikans, som viser at dette anomaløse p27KIPl-proteinet kan gjøres ikke-funksjonelt gjennom interaksjon med andre cellesyklusregulatorproteiner. (Br. J. Cancer. 1999 Jul;80(9): 1427-34. p27KIPl blir abnormalt uttrykt i diffuse stor B-cellelymfomer og er assosiert med et negativt klinisk utkomme. Saez A, Sanchez E, Sanchez-Beato M, Cruz MA, Chacon I, Munoz E, Camacho Fl, Martinez-Montero JC, Mollejo M, Garcia JF, Piris MA. Department of Pathology, Virgen de la Salud Hospital, Toledo, Spania.)
B-cellekronisk lymfocyttleukemi (CLL) er den vanligste leukemitypen i vestlige land, med ca. 10 000 nye tilfeller diagnostisert hvert år (Parker SL, Tong T, Bolden S, Wingo PA: Cancer statistics, 1997. Ca. Cancer. J. Clin. 47:5, (1997)). Relativt til andre former for leukemi er den totale prognosen for CLL god, med selv de mest avanserte stadie-pasientene opplever en medianoverlevelse på 3 år.
Tilsetting av fludarabin som initial behandling for symptomatiske CLL-pasienter, har ført til en høyere grad av fullstendige responser (27 % v 3 %) og varighet på progre-sjonsfri overlevelse (33 v 17 måneder) sammenlignet med tidligere anvendte alkylator-baserte behandlinger. Selv om oppnåelse av en fullstendig klinisk respons etter behandling er det initiale trinnet mot forbedret overlevelse ved CLL oppnår hoveddelen av pasientene ikke fullstendig tilbakegang eller responderer ikke på fludarabin. Videre får alle pasienter med CLL behandlet med fludarabin, til slutt tilbakefall, som gjør dens rolle som et enkelt middel kun lindrende (Rai KR, Peterson B, Elias L, Shepherd L, Hines J, Nelson D, Cheson B, Kolitz J, Schiffer CA: En randomisert sammenligning av fludarabin og klorambucil for pasienter med tidligere ikke-behandlet kronisk lymfocyttisk leukemi. En CALGB SWOG, CTG/NCI-C og ECOG Inter-Group Study. Blood 88:141a, 1996 (abstr 552, suppl 1)). Derfor vil identifisering av nye midler med nye virkningsmekanismer som komplementerer fludarabinets cytotoksisitet og overvinner resistensen indusert av iboende CLL-legemiddelresistensfaktorer, være nødvendig hvis ytterligere fremskritt i behandlingen av denne sykdommen skal realiseres.
Den mest inngående studerte, enhetlig predikative faktoren for dårlig respons på behandling og dårligere overlevelse hos CLL-pasienter er avvikende p53-funksjon, som kjennetegnes ved punktmutasjoner eller kromosom 17pl3-utslettinger. Helt klart har i virkeligheten ingen responser på verken alkylator eller purinanalog behandling blitt dokumentert i multiple enkeltinstitusjonstilfelleserier for disse CLL-pasientene med abnormal p53-funksjon. Introduksjon av et terapeutisk middel som har evnen til å overkomme legemiddelresistensen assosiert med p53-mutasjon i CLL, vil potensielt være et viktig fremskritt for behandling av sykdommen.
Flavopiridol og CYC 202, inhibitorer av syklinavhengige kinaser, induserer in vitro-apoptose av malignante celler fra B-cellekronisk lymfocyttisk leukemi (B-CLL).
Flavopiridol-eksponering resulterer i stimuleringen av caspase 3-aktivitet og i caspase-avhengig spalting av p27(kipl), en negativ regulator av cellesyklusen, som er overuttrykt i B-CLL (Blood. 1998 Nov 15;92(10):3804-16 Flavopiridol induser apoptose i kroniske lymfocyttleukemiceller via aktivering av caspase-3 uten tegn på bcl-2-modulering eller avhengig av funksjonell p53. Byrd JC, Shinn C, Waselenko JK, Fuchs EJ, Lehman TA, Nguyen PL, Flinn IW, Diehl LF, Sausville E, Grever MR). WO 02/34721 fra Du Pont beskriver en klasse indeno[l,2-c]pyrazol-4-oner som inhibitorer av syklinavhengige kinaser.
WO 01/81348 fra Bristol Myers Squibb beskriver anvendelsen av 5-tio-, sulfinyl- og sulfonylpyrazolo[3,4-b]-pyridiner som syklinavhengige kinaseinhibitorer.
WO 00/62778 også fra Bristol Myers Squibb, beskriver en klasse proteintyrosin-kinaseinhibitorer.
WO 01/72745A1 fra Cyclacel beskriver 2-substituerte 4-heteroarylpyrimidiner og deres fremstilling, farmasøytiske sammensetninger som inneholder dem og deres anvendelse som inhibitorer av syklinavhengige kinaser (CDK-er) og således deres anvendelse ved behandling av proliferative forstyrrelser slik som kreft, leukemi, psoriasis og lignende.
WO 99/21845 fra Agouron beskriver 4-aminotiazolderivater for inhibering av syklinavhengige kinaser (CDK-er), slik som CDK1, CDK2, CDK4 og CDK6. Oppfinnelsen angår også terapeutisk eller profylaktisk anvendelse av farmasøytiske sammensetninger som inneholder slike forbindelser og fremgangsmåter for behandling av malignanser og andre forstyrrelser ved å administrere effektive mengder av slike forbindelser.
WO 01/53274 fra Agouron beskriver som CDK-kinaseinhibitorer en klasse forbindelser som kan innbefatte en amidsubstituert benzenring bundet til en N-inneholdende heterosyklisk gruppe.
WO 01/98290 (Pharmacia & Upjohn) beskriver en klasse 3-aminokarbonyl-2-karboks-amidotiofenderivater som proteinkinaseinhibitorer.
WO 01/53268 og WO 01/02369 fra Agouron beskriver forbindelser som medierer eller inhiberer celleproliferasjon gjennom inhibering av proteinkinaser slik som syklinavhengig kinase eller tyrosinkinase. Agouronforbindelsene har en aryl eller heteroarylring bundet direkte eller gjennom en CH=CH eller CH=N-gruppe til 3-posisjonen til en indazolring.
WO 00/39108 og WO 02/00651 (begge til Du Pont Pharmaceuticals) beskriver heterosykliske forbindelser som er inhibitorer av trypsinlignende serinproteaseenzymer, særlig faktor Xa og trombin. Forbindelsene angis å være anvendelige som antikoagulanter eller for hindring av tromboemboliske forstyrrelser.
US 2002/0091116 (Zhu et al.), WO 01/19798 og WO 01/64642 beskriver hver forskjellige grupper av heterosykliske forbindelser som inhibitorer av faktor Xa. Noen 1-substituerte pyrazolkarboksamider er beskrevet og eksemplifisert.
US 6 127 382, WO 01/70668, WO 00/68191, WO 97/48672, WO 97/19052 og WO 97/19062 (alle til Allergan) beskriver hver forbindelser som har retinoid-lignende aktivitet for anvendelse ved behandling av forskjellige hyperproliferative sykdommer som inkluderer kreft.
WO 02/070510 (Bayer) beskriver en klasse aminodikarboksylsyreforbindelser for anvendelse ved behandling av kardiovaskulære sykdommer. Selv om pyrazoler er nevnt generelt er det ingen spesifikke eksempler på pyrazoler i dette dokumentet.
WO 97/03071 (Knoll AG) beskriver en klasse heterosyklyl-karboksamidderivater for anvendelse ved behandlingen av sentralnervesystemforstyrrelser. Pyrazoler nevnes generelt som eksempler på heterosykliske grupper, men ingen spesifikke pyrazol-forbindelser er beskrevet eller eksemplifisert.
WO 97/40017 (Novo Nordisk) beskriver forbindelser som er modulatorer av protein-tyrosinfosfataser.
WO 03/020217 (Univ. Connecticut) beskriver en klasse pyrazol-3-karboksamider som cannabinoidreseptormodulatorer for behandling av neurologiske tilstander. Det angis (side 15) at forbindelsene kan anvendes i kreftkjemoterapi, men det er ikke gjort klart om forbindelsene er aktive som anti-kreftmidler eller om de administreres for andre formål.
WO 01/58869 (Bristol Myers Squibb) beskriver cannabinoidreseptormodulatorer som kan blant annet anvendes for å behandle et antall sykdommer. Hovedanvendelsen som angis er behandlingen av respiratoriske sykdommer, selv om referanse gjøres til behandlingen av kreft.
WO 01/02385 (Aventis Crop Science) beskriver l-(kinolin-4-yl)-lH-pyrazolderivater som fungicider. 1-usubsituerte pyrazoler er beskrevet som syntetiske intermediater. WO 2004/039795 (Fujisawa) beskriver amider som inneholder en 1-substituert pyrazol-gruppe som inhibitorer av apolipoprotein B-sekresjon. Forbindelsene angis å være anvendelige ved behandling av slike tilstander som hyperlipidemi.
WO 2004/000318 (Cellular Genomics) beskriver forskjellige aminosubstituerte mono-sykler som kinasemodulatorer. Ingen av de eksemplifiserte forbindelsene er pyrazoler.
Oppfinnelsen tilveiebringer blant annet syreaddisjonssalter av forbindelsen 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid og krystallinske former av syreaddisjonssaltene som er metansulfonsyre- og eddiksyresaltene.
Oppfinnelsen tilveiebringer også nye fremgangsmåter for fremstilling av syreaddisjonssaltene og krystallinske former derav, så vel som nye kjemiske intermediater for anvendelse i fremgangsmåtene.
Oppfinnelsen tilveiebringer videre terapeutiske anvendelser av syreaddisjonssaltene.
Den frie basen av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid fra hvilke saltene er avledet har formelen (I):
Forbindelsen med formel (I) kan refereres til i foreliggende søknad ved dens kjemiske navn eller, av hensiktsmessige grunner, som "forbindelsen", "forbindelsen med formel (I)" eller "forbindelsen ifølge oppfinnelsen". Hvert av disse synonymene refererer til forbindelsen vist i formel (I) ovenfor og har det kjemiske navnet 4-(2,6-diklorbenzoyl-amino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid.
Saltene til hvilke foreliggende søknad angår, er syreaddisjonssalter av 4-(2,6-diklor-benzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid. Uttrykkene "salt" og "syreaddisjonssalt", kan anvendes innbyrdes utbyttbart i foreliggende søknad i tillegg til uttrykkene "salter" og "syreaddisjonssalter". Uttrykkene "salt" og "salter" slik det anvendes heri, refererer til syreaddisjonssaltene med mindre sammenhengen indikerer noe annet.
Referanser til forbindelsen 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid og dens syreaddisjonssalter inkluderer innenfor deres omfang alle solvater, tautomerer og isotoper derav og, der sammenhengen tillater det, N-oksider, andre ioneformer og prodrug.
Syreaddisjonen dannes med en syre valgt fra metansulfonsyre og eddiksyre, og blandinger derav.
I én utførelsesform er saltet et syreaddisjonssalt dannet med metansulfonsyre.
I en annen utførelsesform er saltet et syreaddisjonssalt dannet med eddiksyre.
Av hensiktsmessige grunner kan saltene dannet fra metansulfonsyre og eddiksyre, refereres til heri som metansulfonat- eller mesylatsalter og acetatsalter respektivt.
I fast tilstand kan saltene ifølge oppfinnelsen være krystallinske eller amorfe eller en blanding derav.
I én utførelsesform er saltene amorfe.
I et amorft faststoff eksisterer den tredimensjonale strukturen som normalt eksisterer i en krystallinsk form ikke og posisjonene til molekylene relativt til hverandre i den amorfe formen er i det vesentlige randomisert, se for eksempel Hancock et al. J. Pharm. Sei. (1997), 86, 1.
I en annen utførelsesform er saltene i det vesentlige krystallinske; det vil si de er fra
50 % til 100 % krystallinske, og mer foretrukket kan de være minst 50 % krystallinske, eller minst 60 % krystallinske, eller minst 70 % krystallinske, eller minst 80 % krystallinske, eller minst 90 % krystallinske, eller minst 95 % krystallinske, eller minst 98 % krystallinske, eller minst 99 % krystallinske, eller minst 99,5 % krystallinske, eller minst 99,9 % krystallinske, for eksempel 100 % krystallinske.
I en ytterligere utførelsesform er saltene valgt fra gruppen som består av salter som er fra 50 % til 100 % krystallinske, salter som er minst 50 % krystallinske, salter som er minst 60 % krystallinske, salter som er minst 70 % krystallinske, salter som er minst 80 % krystallinske, salter som er minst 90 % krystallinske, salter som er minst 95 % krystallinske, salter som er minst 98 % krystallinske, salter som er minst 99 % krystallinske, salter som er minst 99,5 % krystallinske, og salter som er minst 99,9 % krystallinske, for eksempel 100 % krystallinske.
Mer foretrukket kan saltene være de (eller kan velges fra gruppen som består av disse) som er 95 % til 100 % krystallinske, for eksempel minst 98 % krystallinske, eller minst 99 % krystallinske, eller minst 99,5 % krystallinske, eller minst 99,6 % krystallinske eller minst 99,7 % krystallinske eller minst 99,8 % krystallinske eller minst 99,9 % krystallinske, for eksempel 100 % krystallinske.
Ett eksempel på et i det vesentlige krystallinsk salt er et krystallinsk salt dannet med metansulfonsyre.
Et annet eksempel på et i det vesentlige krystallinsk salt er et krystallinsk salt dannet med eddiksyre.
Saltene ifølge oppfinnelsen, i fast tilstand, kan være solvatisert (for eksempel hydratisert) eller ikke-solvatisert (for eksempel vannfritt).
I én utførelsesform er saltene ikke-solvatiserte (for eksempel vannfrie). Et eksempel på et ikke-solvatisert salt er det krystallinske saltet dannet med metansulfonsyre som definert heri.
Begrepet "vannfri" slik det anvendes heri, ekskluderer ikke muligheten for tilstedeværelsen av none vann på eller i saltet (for eksempel en krystall av saltet). For eksempel kan det være noe vann til stede på overflaten til saltet (for eksempel saltkrystall) eller mindre mengder inne i saltet (for eksempel krystall). Typisk inneholder en vannfri form mindre enn 0,4 molekyler vann per molekyl forbindelse, og mer foretrukket inneholder den mindre enn 0,1 molekyler vann per molekyl forbindelse, for eksempel 0 molekyler vann.
I en annen utførelsesform er saltene solvatisert. Der saltene er hydratisert kan de for eksempel inneholde opp til tre molekyler krystallisasjonsvann, mer vanlig opp til to vannmolekyler, for eksempel ett vannmolekyl eller to vannmolekyler. Ikke-støkiometriske hydrater kan også dannes, hvori antallet molekyler vann til stede er mindre enn én eller er ellers et ikke-heltall. For eksempel, hvor det er mindre enn ett vannmolekyl tilstede, kan det for eksempel være 0,4 eller 0,5 eller 0,6 eller 0,7 eller 0,8 eller 0,9 molekyler vann til stede per molekyl forbindelse.
Andre solvater inkluderer alkoholater slik som etanolater og isopropanolater.
Saltene ifølge oppfinnelsen kan syntetiseres fra morforbindelsen 4-(2,6-diklorbenzoyl-amino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid ved vanlige, kjemiske fremgangsmåter hvor slike fremgangsmåter er beskrevet i Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl (redaktør), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Hardcover, 388 sider, august 2002. Generelt kan slike salter fremstilles ved omsetting av morforbindelsen 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid med passende syre i vann eller i et organisk løsemiddel, eller i en blanding av de to; generelt blir ikke-vandig media, slik som eter, etylacetat, etanol, isopropanol eller acetonitril anvendt.
I et annet aspekt tilveiebringer oppfinnelsen en fremgangsmåte for fremstilling av syreaddisjonssaltene av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, hvilken fremgangsmåte innbefatter danning av en løsning av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid fri base i et løsemiddel (typisk et organisk løsemiddel) eller blanding av løsemidler, og behandling av løsningen med en passende syre for å danne et presipitat av syreaddisjonssaltet.
Syren kan tilsettes som en løsning i et løsemiddel som er blandbart med løsemidlet hvori den frie basen er løst opp. Løsemidlet hvori den frie basen initialt løses, kan være ett hvori syreaddisjonssaltet derav er uløselig. Alternativt kan løsemidlet hvori den frie basen initialt løses, være ett hvori syreaddisjonssaltet er i det minste delvis løselig, et forskjellig løsemiddel hvori syreaddisjonssaltet er mindre løselig etter at det tilsettes slik at saltet presipiteres ut av løsningen.
I en alternativ fremgangsmåte for å danne et syreaddisjonssalt blir 4-(2,6-diklorbenzoyl-amino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid løst i et løsemiddel som innbefatter en flyktig syre og eventuelt et koløsemiddel, for derved å danne en løsning av syreaddisjonssaltet med den flyktige syren og den resulterende løsningen blir deretter konsentrert eller fordampet for å isolere saltet. Et eksempel på et syreaddisjonssalt som kan fremstilles på denne måten, er acetatsaltet.
I et annet aspekt tilveiebringer oppfinnelsen en fremgangsmåte for å danne et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid som definert heri, hvilken fremgangsmåte innbefatter behandling av en forbindelse med formel (X):
med en organisk syre som definert heri, i et organisk løsemiddel for å fjerne terf-butyloksykarbonylgruppen og danne syreaddisjonssaltene av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid med den organiske syren, og eventuelt isolere syreaddisjonssaltet således dannet.
Saltet blir typisk presipitert fra det organiske løsemidlet idet det dannes, og kan således isoleres ved separasjon av det faste stoffet fra løsningen, for eksempel ved filtrering.
En saltform ifølge oppfinnelsen kan omdannes til den frie basen og eventuelt til en annen saltform ved fremgangsmåter kjente for fagmannen. For eksempel kan den frie basen dannes ved å passere saltløsningen gjennom en kolonne som inneholder en amin-stasjonær fase (for eksempel en Strata-NH2-kolonne). Alternativt kan en løsning av saltet i vann behandles med natriumbikarbonat for å nedbryte saltet og presipitere ut den frie basen. Den frie basen kan deretter kombineres med en annen syre ved én av fremgangsmåtene beskrevet ovenfor eller ellers heri.
Salter slik som syreaddisjonssalter har et antall fordeler i forhold til den korresponderende frie basen. For eksempel vil saltene oppnå én eller flere av følgende fordeler i forhold til den frie basen ved at de: vil være mer løselig og vil således være bedre for i.v.-administrasjon (for eksempel ved infusjon) • vil ha bedre stabilitet (for eksempel forbedret lagringstid); • vil ha bedre termisk stabilitet; • vil være mindre basisk og derfor bedre for i.v.-administrasjon; • vil ha fordeler når det gjelder produksjon; • vil ha forbedret løselighet i vandig løsning; • vil ha bedre fysiokjemiske egenskaper;
• kan ha forbedret anti-kreftaktivitet; og
• kan ha forbedret terapeutisk indeks.
Metansulfonatsaltformen er særlig fordelaktig på grunn av at den har god stabilitet ved hevede temperaturer og ved betingelser ved høy relativ fuktighet, er ikke-hygroskopisk (som definert heri), fravær av polymorf og hydratformulering, og stabilitet under vandige betingelser. Videre har den svært god vannløselighet og har bedre fysiokjemiske egenskaper (slik som høyt smeltepunkt) relativt til andre salter.
Begrepet "stabil" eller "stabilitet", slik det anvendes heri, inkluderer kjemisk stabilitet og fast tilstand (fysisk) stabilitet. Begrepet "kjemisk stabilitet" betyr at forbindelsen kan lagres i en isolert form eller i form av en formulering hvori den blir tilveiebrakt sammenblandet med for eksempel farmasøytisk akseptable bærere, fortynningsmidler eller adjuvanser som beskrevet heri, under normale lagringsbetingelser, med liten eller ingen kjemisk nedbryting eller dekomponering. "Fasttilstandsstabilitet" betyr at forbindelsen kan lagres i en isolert fast form eller i form av en fast formulering hvori den blir tilveiebrakt sammenblandet for eksempel med farmasøytisk akseptable bærere, fortynningsmidler eller adjuvanser som beskrevet heri, under normale lagringsbetingelser, med liten eller ingen fasttilstandsomdanning (for eksempel hydratisering, dehydrering, solvatisering, desolvatisering, krystallisering, rekrystallisering eller fasttilstandsfaseovergang).
Begrepene "ikke-hygroskopisk" og "ikke-hygroskopisitet" og relaterte begreper slik det anvendes heri, refererer til substanser som absorberer mindre enn 5 vekt% (relativt til deres egen vekt) vann når de eksponeres for betingelser med høy relativ fuktighet, for eksempel 90 % relativ fuktighet og/eller ikke gjennomgår forandringer i krystallinsk form under betingelser med høy fuktighet og/eller ikke absorberer vann inne i krystallen (indre vann) under betingelser med høy relativ fuktighet.
Foretrukne salter for anvendelse ved fremstilling av flytende (for eksempelvandig) farmasøytiske sammensetninger er syreaddisjonssalter (slik som mesylatet og acetatet og blandinger derav som definert heri) som har en løselighet i en flytende bærer (for eksempel vann) på mer enn 15 mg/ml av den flytende bæreren (for eksempel vann), mer typisk mer enn 20 mg/ml, foretrukket mer enn 25 mg/ml, og ytterligere foretrukket mer enn 30 mg/ml.
I et annet aspekt er det tilveiebrakt en farmasøytisk sammensetning som innbefatter en vandig løsning som inneholder et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid som er mesylatet og acetatet og blandinger derav som definert heri, og foretrukket mesylatet, i en konsentrasjon på mer enn 15 mg/ml, typisk mer enn 20 mg/ml, foretrukket mer enn 25 mg/ml, og mer foretrukket mer enn 30 mg/ml.
I en foretrukket utførelsesform innbefatter den farmasøytisk sammensetningen en vandig løsning som inneholder syreaddisjonssaltene av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid valgt fra et acetat- eller metansulfonatsalt eller en blanding derav i en konsentrasjon på mer enn 15 mg/ml, typisk mer enn 20 mg/ml, foretrukket mer enn 25 mg/ml, og mer foretrukket mer enn 30 mg/ml.
I et annet aspekt tilveiebringer oppfinnelsen en vandig løsning av syreaddisjonssaltene av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid som er mesylatet og acetatet og blandinger derav som definert heri, hvori den vandige løsningen har en pH på 2 til 12, for eksempel 2 til 9, og mer foretrukket 4 til 7.
I de vandig løsningene definert ovenfor, er syreaddisjonssaltet et mesylat- eller acetatsalt som definert heri, og særlig mesylatsaltet.
Oppfinnelsen tilveiebringer også en vandig løsning av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid i protonert form sammen med ett eller flere motioner og eventuelt ett eller flere ytterligere motioner. Motionene er valgt fra metansulfonat og acetat. I en annen utførelsesform er ett av motionene fra formuleringsbufferen som beskrevet heri, slik som acetat. I en ytterligere utførelsesform kan det være ett eller flere motioner, slik som et kloridion (for eksempel fra saltvann).
Oppfinnelsen tilveiebringer videre en vandig løsning av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid i protonert form sammen med ett eller flere motioner valgt fra metansulfonat og acetat og eventuelt ett eller flere ytterligere motioner, slik som et kloridion.
I situasjonen hvor det er mer enn ett motion vil den vandige løsningen av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid i protonert form eventuelt inneholde en blanding av motioner for eksempel en blanding av metansulfonat og acetatmotioner og eventuelt ett eller flere ytterligere motioner, slik som et kloridion.
Oppfinnelsen tilveiebringer videre en vandig løsning av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid i protonert form sammen med ett eller flere motioner valgt fra metansulfonat og acetat og eventuelt ett eller flere ytterligere motioner slik som et kloridion, og en blanding derav.
De vandige løsningene kan blant annet dannes ved å løse opp et mesylatsalt i en løsning av acetationer (for eksempel en acetatbuffer) eller ved å løse opp et acetatsalt i en løsning av mesylationer. Mesylat- og acetationene kan presenteres i løsningen i et mesylatacetatforhold på fra 10:1 eller mindre, for eksempel 10:1 til 1:10, mer foretrukket mindre enn 8:1, eller mindre enn 7:1, eller mindre enn 6:1, eller mindre enn 5:1 eller mindre enn 4:1 eller mindre enn 3:1 eller mindre enn 2:1 eller mindre enn 1:1, mer foretrukket fra 1:1 til 1:10.1 en utførelsesform er mesylat- og acetationene til stede i løsningen i et mesylat: acetatforhold på fra 1:1 til 1:10, for eksempel 1:1 til 1:8, eller 1:1 til 1:7 eller 1:1 til 1:6 eller 1:1 til 1:5, for eksempel ca. 1:4.8.
De vandige løsningene av saltene kan være bufret eller ikke-bufret, men i én utførelsesform er de bufret.
I sammenheng med syreaddisjonssaltet dannet med metansulfonsyre, er en foretrukket buffer en buffer dannet fra eddiksyre og natriumacetat, for eksempel ved en løsnings-pH på ca. 4,6. Ved denne pH-verdien og i acetatbufferen har metansulfonsyresaltet en løselighet på ca. 35 mg/ml.
Saltene ifølge oppfinnelsen er typisk farmasøytisk akseptable salter, og eksempler på disse og andre farmasøytisk akseptable salter er diskutert i Berge et al, 1977, "Pharmaceutically Acceptable Salts," J. Pharm. Sei., Vol. 66, s. 1-19. Imidlertid kan salter som ikke er farmasøytisk akseptable også fremstilles som intermediatformer som deretter kan omdannes til farmasøytisk akseptable salter.
Forbindelsen 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid kan også danne N-oksider. N-oksider kan dannes ved behandling av det korresponderende aminet med et oksidasjonsmiddel, slik som hydrogenperoksid eller en per-syre (for eksempel en peroksykarboksylsyre), se for eksempel Advanced Organic Chemistry, av Jerry March, 4. utgave, Wiley Interscience. Mer spesielt kan N-oksidene fremstilles ved fremgangsmåten til L. W. Deady ( Syn. Comm. 1977, 7, 509-514) hvori aminforbindelsen behandles med/w-klorperoksybenzosyre (MCPBA), for eksempel i et inert løsemiddel slik som diklormetan.
Forbindelsen 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, fra hvilken syreaddisjonssaltene ifølge oppfinnelsen er avledet, saltene kan eksistere i et antall forskjellige tautomere former og referanser i foreliggende søknad til forbindelsen inkluderer alle slike former.
Mer spesielt, i syreaddisjonssaltene ifølge oppfinnelsen, kan pyrazolringen til 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid eksistere i de to tautomere formene A og B nedenfor. For enkelhets skyld viser formlene i foreliggende søknad kun form A, men formlene skal uansett omfatte begge tautomere formene.
Videre, i sammenheng med syreaddisjonssaltene ifølge oppfinnelsen, inkluderer referanser til 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid og dens salter også varianter med én eller flere isotopsubstitusjoner, og en referanse til et spesielt element inkluderer innenfor sitt omfang, alle isotoper av elementet. For eksempel inkluderer en referanse til hydrogen innenfor sitt omfang<*>H,<2>H (D) og<3>H (T). Tilsvarende inkluderer referanser til karbon og oksygen innenfor deres omfang respektivt<12>C, 13C og 14C og 160 og<18>0.
Isotopene kan være radioaktive eller ikke-radioaktive. I én utførelsesform ifølge oppfinnelsen inneholder forbindelsene ingen radioaktive isotoper. Slike forbindelser er foretrukket for terapeutisk anvendelse. I en annen utførelsesform kan imidlertid forbindelsen inneholde én eller flere radioisotoper. Forbindelser som inneholder slike radioisotoper, kan være anvendelige i en diagnostisk sammenheng.
Også omfattet med referanse til syreaddisjonssaltene (for eksempel mesylatsaltet) av 4-(2,6- diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid er eventuelle, polymorfe former, solvater (for eksempel hydrater), komplekser (for eksempel inklusjonskomplekser eller clatrater med forbindelser slik som syklodekstriner, eller komplekser med metaller) derav.
Krystallstrukturer av syreaddisjonssalter av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid
Som beskrevet ovenfor kan syreaddisjonssalter av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid være amorfe eller i det vesentlige krystallinske. I én særlig utførelsesform er saltene i det vesentlige krystallinske, hvor begrepet "i det vesentlige krystallinsk" har betydningen definert ovenfor. Spesielt er mesylat- og acetatsaltene av4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid i det vesentlige krystallinske.
Krystallene beskrevet heri og deres krystallstrukturer danner ytterligere aspekter av oppfinnelsen.
Krystallene og deres krystallstrukturer kan karakteriseres ved anvendelse av et antall teknikker som inkluderer enkel krystall-røntgenkrystallografi, røntgenpulverdiffraksjon (XRPD), differensiell skanningskalorimetri (DSC) og infrarød spektroskopi, for eksempel Fourier Transform infrarød spektroskopi (FTIR). Oppførselen til krystallene under betingelser med varierende fuktighet, kan analyseres ved gravimetriske dampsorpsjonsstudier og også XRPD.
Bestemmelse av krystallstrukturen til en forbindelse kan utføres med røntgenkrystallografi og kan utføres i henhold til vanlige fremgangsmåter, slik som de som er beskrevet heri og i Fundamentals of Crystallography, C. Giacovazzo, H. L. Monaco, D. Viterbo, F. Scordari, G. Gilli, G. Zanotti og M. Catti, (International Union of Crystallography/Oxford University Press, 1992 ISBN 0-19-855578-4 (p/b), 0-19-85579-2 (h/b)). Denne teknikken involverer analyse og tolkning av røntgendiffraksjonen til enkeltkrystall.
Krystallstrukturen til metansulfonsyresaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid har blitt bestemt ved røntgenkrystallografi, se eksempel 2 nedenfor.
Tabell 2 gir koordinatdata for krystaller av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l H-pyrazol-3 - karboksylsyre-piperidin-4-ylamidmesylatsaltet i Crystallographic Information File (CIF) Format (se Hall, Allen and Brown, Acta Cryst. (1991). A47, 655-685; http://www.iucr.ac.uk/iucr-top/cif/home.html). Alternativt kan filformater slik som et PDB-filformat (for eksempel format i overensstemmelse med det til "the EBI Macromolecular Structure Database" (Hinxton, UK)) anvendes eller foretrukket av fagmannen. Imidlertid vil det være nærliggende at anvendelse av et forskjellig filformat for å presentere eller manipulere koordinatene i tabellene er innenfor omfanget av oppfinnelsen. Krystallstrukturen til mesylatsaltet er illustrert i figurene 1 og 2.
Fra røntgenkrystallografistudier har det blitt funnet at mesylatsaltet har en krystallstruktur som tilhører en ortorombisk mellomromsgruppe slik som Pbca (# 61) og har krystallgitterparametere ved 93 K a=8,90(10), b = 12,44(10), c = 38,49(4) Å, a = P = y = 90°
Følgelig, i en annen utførelsesform, tilveiebringer oppfinnelsen et metansulfonsyresalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid som er krystallinsk og: (a) har en krystallstruktur som angitt i figurene 1 og 2; og/eller (b) har en krystallstruktur som definert ved koordinatene i eksempel 2 heri; og/eller (c) har krystallgitterparametere ved 93 K a=8,90(10), 6=12,44(10), c=38,49(4) Å,
a = P = y = 90°; og/eller
(d) har en krystallstruktur som tilhører en ortorombisk mellomromsgruppe slik som
Vbca (#61).
Alternativt kan krystallstrukturen til en forbindelse analyseres ved fastfaseteknikk av røntgenpulverdiffraksjon (XRPD). XRPD kan utføres i henhold til vanlige fremgangsmåter slik som de som er beskrevet heri (se eksempel 6) og i "Introduction to X-ray Powder Diffraction", Ron Jenkins and Robert L. Snyder (John Wiley & Sons, New York, 1996). Tilstedeværelsen av definerte topper (i motsetning til randomisert bakgrunnsstøy) i et XRPD-diffraktogram, indikerer at forbindelsen har en grad av krystallinitet.
En forbindelses røntgenpulvermønstre er kjennetegnet ved diffraksjonsvinkelen (20) og mellomplanmellomroms(d)-parametere til et røntgendiffraksjonsspektrum. Disse er relatert til Braggs ligning, nÅ=2d Sin 0, (hvor n = 1; A, = bølgelengde til katoden anvendt; d = mellomplansmellomrom; og 0 = diffraksjonsvinkel). Heri er mellomplanmellomrom, diffraksjonsvinkel og totalt mønster viktig for identifikasjon av krystall i røntgenpulverdiffraksjonen på grunn av karakteristikkene til dataene. Den relative intensiteten bør ikke strengt tolkes siden den kan variere avhengig av retningen av krystallveksten, partikkelstørrelsen og målebetingelsene. I tillegg betyr diffraksjonsvinkler vanligvis de som faller sammen i området 20 ± 0,2°. Toppene betyr hovedtopper og inkluderer topper ikke større enn middels ved diffraksjonsvinkler forskjellig fra de som er angitt ovenfor.
Både eddiksyre- og metansulfonsyresaltene av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3- karboksylsyre-piperidin-4-ylamid har blittkarakterisert vedXRPD.
4- (2,6- diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamidmetan-sulfonsyresalt har et røntgenpulverdiffraksjonsmønster essensielt som vist i figur 3.
4-(2,6- diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid-eddiksyresalt har et røntgenpulverdiffraksjonsmønster essensielt som vist i figur 4.
I hvert tilfelle er pulverrøntgendiffraksjonsmønstrene uttrykt som diffraksjonsvinkelen (20), mellomplansmellomrom (d) og relative intensiteter.
Følgelig, i en annen utførelsesform, tilveiebringer oppfinnelsen et i det vesentlige krystallinsk metansulfonsyresalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid som har et røntgenpulverdiffraksjonsmønsterkarakterisert vedtilstedeværelsen av hovedtopper ved diffraksjonsvinkler (20) og mellomplansmellomrom (d) som fremsatt i tabell A.
Røntgenpulverdiffraksjonsmønsteret blir foretrukket ytterligerekarakterisert vedtilstedeværelsen av ytterligere topper ved diffraksjonsvinklene (20) og mellomplanmellomrommene (d) fremsatt i tabell B.
Røntgenpulverdiffraksjonsmønsteret kan også karakteriseres ved tilstedeværelsen av topper ved diffraksjonsvinklene (20) og mellomplanmellomrommene (d), og foretrukket intensiteten vist i tabell C.
Oppfinnelsen tilveiebringer videre et i det vesentlige krystallinsk metansulfonsyresalt av 4-(2,6- diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid som fremviser topper ved samme diffraksjonsvinkler som de til røntgenpulverdiffraksjons- mønsteret vist i figur 3. Foretrukket har toppene samme relative intensitet som toppene i figur 3.
I en foretrukket utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen et i det vesentlige krystallinsk metansulfonsyresalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l H-pyrazol-3 - karboksylsyre-piperidin-4-ylamid som har et røntgenpulverdiffraksjonsmønster i det vesentlige som vist i figur 3.
Oppfinnelsen tilveiebringer også et i det vesentlige krystallinsk eddiksyresalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid som fremviser topper ved samme diffraksjonsvinkler som de til røntgenpulverdiffraksjonsmønsteret vist i figur 4. Foretrukket har toppene samme relative intensitet som toppene i figur 4.
I en foretrukket utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen et i det vesentlige krystallinsk eddiksyresalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid som har et røntgenpulverdiffraksjonsmønster i det vesentlige som vist i figur 4.
De krystallinske syreaddisjonssaltene ifølge oppfinnelsen kan også karakteriseres ved differensiell skanningskalorimetri (DSC).
Mesylatsaltet har blitt analysert med DSC og fremviser en topp ved 379,8 °C på grunn av nedbryting av forbindelsen.
Følgelig, i et annet aspekt, tilveiebringer oppfinnelsen et mesylatsalt av 4-(2,6-diklor-benzoylamino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid som er vannfritt og fremviser en endoterm topp ved 379-380 °C, for eksempel 379,8 °C når den gjøres til gjenstand for DSC.
Acetatsaltet kan analyseres med DSC og fremviser en topp ved 231,50 °C på grunn av tap av eddiksyre og en ytterligere topp ved 292,88 °C på grunn av nedbrytning av forbindelsen. Fravær av topper ved lavere temperaturer indikerer at acetatsaltet er vannfritt.
Følgelig, i et annet aspekt, tilveiebringer oppfinnelsen et eddiksyresalt av 4-(2,6-diklor-benzoylamino)-! H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid som er vannfritt og fremviser endoterme topper ved 231-232 °C (for eksempel 231,50 °C) og 292-293 °C (for eksempel 292,88 °C) når den gjøres til gjenstand for DSC.
Der syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid i det vesentlige er krystallinsk, kan én enkel krystallinsk form dominere, selv om andre krystallinske former kan være til stede i mindre og foretrukket neglisjerbare mengder.
I en foretrukket utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen et i det vesentlige krystallinsk syreaddisjonssalt som er et mesylat- eller acetatsalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid som inneholder en enkel krystallinsk form av syreaddisjonssaltet og ikke mer enn 5 % i forhold til vekt av eventuelle andre krystallinske former av syreaddisjonssaltet.
Foretrukket blir den enkle krystallinske formen ledsaget av mindre enn 4 %, eller mindre enn 3 %, eller mindre enn 2 % av andre krystallformer, og inneholder særlig mindre enn eller lik med ca. 1 vekt% av andre krystallformer. Mer foretrukket blir den enkle krystallformen ledsaget av mindre enn 0,9 %, eller mindre enn 0,8 %, eller mindre enn 0,7 %, eller mindre enn 0,6 %, eller mindre enn 0,5 %, eller mindre enn 0,4 %, eller mindre enn 0,3 %, eller mindre enn 0,2 %, eller mindre enn 0,1 %, eller mindre enn 0,05 %, eller mindre enn 0,01 %, i forhold til vekt av andre krystallformer, for eksempel 0 vekr% av andre krystallformer.
De i det vesentlige krystallinske syreaddisjonssaltene er foretrukket i det vesentlige frie for restorganisk løsemiddel anvendt, for eksempel for å rekrystallisere eller på annen måte rense saltet eller annet løsemiddel slik som vann. 1 en utførelsesform er krystallene av syreaddisjonssaltene som er metansulfonat- eller acetatsaltene av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)- lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid krystaller som inneholder mindre enn 10 vekt% restløs emiddel (for eksempel vann eller et organisk løsemiddel), for eksempel mindre enn 5 % restløsemiddel, for eksempel mindre enn 4 % eller mindre enn 3 %, eller mindre enn 2 %, eller mindre enn 1 %, eller mindre enn 0,5 % løsemiddel.
I én utførelsesform er de krystallinske syreaddisjonssaltene som er metan-sulfonat- eller acetatsaltene, vannfrie, hvor begrepet "vannfri" har betydningen definert ovenfor. Metansulfonatsaltet kan eksistere i en stabil vannfri krystallinsk form som, selv om den absorberer noe overflatevann under betingelser med høy relativ fuktighet, ikke gjennomgår forandringer i krystallstruktur under slike betingelser.
Oppførselen til syreaddisjonssaltene ifølge oppfinnelsen under betingelser med høy fuktighet, kan analyseres ved standard gravimetriske dampsorpsjons(GVS)-metoder, for eksempel som beskrevet i eksempel 7.
Syreaddisjonssaltene ifølge oppfinnelsen kan ytterligere karakteriseres ved infrarød spektroskopi, for eksempel FTIR.
Det infrarøde spekteret av metansulfonatsaltet (KBr-skivemetoden) inneholder karakteristiske topper ved 3233, 3002, 2829, 1679, 1632, 1560,1430, 1198, 1037, 909 og 784 cm"<1>.
Følgelig, i en ytterligere utførelsesform, tilveiebringer oppfinnelsen et (foretrukket i det vesentlige krystallinsk) metansulfonsyresalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid som fremviser et infrarødt spektrum, når det analyseres ved anvendelse av KBr-skivemetoden som inneholder karakteristiske topper ved 3233, 3002, 2829, 1679, 1632, 1560, 1430, 1198, 1037, 909 og 784 cm-1.
Slik det vil være klart fra foregående avsnitt kan syreaddisjonssaltene ifølge oppfinnelsen karakteriseres ved et antall forskjellige fysiokjemiske parametere. Følgelig, i en foretrukket utførelsesform, tilveiebringer oppfinnelsen et metansulfonsyresalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)- lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamidmesylatsalt som er krystallinsk og som karakteriseres ved én eller flere (i en hvilken som helst kombinasjon) eller alle følgende parametere, nemlig at saltet: (a) har en krystallstruktur som fremsatt i figurene 1 og 2; og/eller (b) har en krystallstruktur som definert ved koordinatene i eksempel 2 heri; og/eller (c) har krystallgitterparametere ved 93 K a=8,90(10), 2>=12,44(10), c=38,49(4) Å, a <=>P=Y = 90°; og/eller (d) har en krystallstruktur som tilhører en ortorombisk mellomromsgruppe slik som
Vbca (#61); og/eller
(e) har et røntgenpulverdiffraksjonsmønsterkarakterisert vedtilstedeværelsen av hovedtopper ved diffraksjonsvinkler (20) og mellomplanmellomrom (d) fremsatt i tabell A, og eventuelt tabell B; for eksempel hvori røntgenpulverdiffraksjons-mønsteret erkarakterisert vedtilstedeværelsen av hovedtopper ved diffraksjonsvinklene (20), mellomplanmellomrom (d) og intensiteter slik det er fremsatt i tabell C heri; og/eller (f) fremviser topper ved samme diffraksjonsvinkler som de til røntgenpulver-diffraksjonsmønsteret vist i figur 3, og eventuelt hvori toppene har samme relative intensitet som toppene i figur 3; og/eller (g) har et røntgenpulverdiffraksjonsmønster i det vesentlige som vist i figur 3;
og/eller
(h) er vannfritt og fremviser en endoterm topp ved 379-380 °C for eksempel
379,8 °C når de gjøres til gjenstand for DSC; og/eller
(i) fremviser et infrarødt spektrum når det analyseres ved anvendelse av KBr-skivemetoden som inneholder karakteristiske topper ved 3233, 3002, 2829, 1679, 1632, 1560, 1430, 1198, 1037, 909 og 784 cm"<1>.
Fremgangsmåte for fremstilling av saltene av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid
I eksempel 237 i tidligere søknad PCT/GB2004/003179 (WO 2005/012256) er det beskrevet at 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid kan fremstilles ved en sekvens av trinn som inkluderer: (i) omsette 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre med 4-amino-1-teAY-butyloksykarbonyl-piperidin under tilstedeværelsen av l-etyl-3-(3'-dimetylaminopropyl)-karbodiimid (EDC) og 1-hydroksybenzotriazol (HOBt) i dimetylformamid (DMF) for å gi den N-Boc-beskyttede formen av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid; og
(ii) fjerne den Boc-beskyttende gruppen ved behandling med saltsyre.
Det har nå blitt funnet at istedenfor å anvende EDC og HOBt for å fremme dannelse av amidbindingen kan syrekloridet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 - karboksylsyre omsettes med et 4-aminopiperidin hvori piperidin-nitrogenet er beskyttet.
Følgelig, i et annet aspekt, tilveiebringer oppfinnelsen en fremgangsmåte for fremstilling av syreaddisjonssaltene av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, hvilken fremgangsmåte innbefatter reaksjon mellom en forbindelse med formel (XI):
og en forbindelse med formel (XII): hvori PG er en aminbeskyttende gruppe, i et organisk løsemiddel under nærvær av en ikke-interfererende base, slik som trietylamin, for å gi en forbindelse med formel (XIII):
og deretter fjerne den beskyttende gruppen PG for å gi syreaddisjonssaltene av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid;
og eventuelt rekrystallisere syreaddisjonssaltet for å gi en krystallinsk form, for eksempel en krystallinsk form som definert heri.
Den aminbeskyttende gruppen PG kan være en hvilken som helst beskyttende gruppe kjent for anvendelse ved beskyttelse av amingrupper under betingelsene anvendt i fremgangsmåten ovenfor. Eksempler på beskyttende grupper og fremgangsmåter for beskyttelse og avbeskyttelse av funksjonelle grupper kan finnes i Protective Groups in Organic Synthesis (T. Green and P. Wuts; 3. utgave; John Wiley and Sons, 1999). Således kan piperidinring-nitrogenet beskyttes som et amid (NCO-R) eller uretan (NCO-OR), for eksempel som: et metylamid (NCO-CH3); et benzyloksyamid (NCO-OCH2C6H5, -NH-Cbz); som et tert-butoksyamid (-NCO-OC(CH3)3, N-Boc); et 2-bifenyl-2-propoksyamid (NCO-OCtCH^CeHÆeHs, N-Bpoc), som et 9-fluorenyl-metoksyamid (N-Fmoc), som et 6-nitroveratryloksyamid (N-Nvoc), som et 2-trimetyl-silyletyloksyamid (N-Teoc), som et 2,2,2-trikloretyloksyamid (N-Troc), som et allyloksyamid (N-Alloc) eller som et 2-(fenylsulfonyl)etyloksyamid (-N-Psec). Andre beskyttende grupper for aminer inkluderer toluensulfonyl- (tosyl) og metansulfonyl-(mesyl)-grupper og benzylgrupper slik som en/?ara-metoksybenzyl(PMB)-gruppe. Foretrukne aminbeskyttende grupper er et uretan (NCO-OR), for eksempel et benzyloksyamid (NCO-OCH2C6H5, -NH-Cbz) eller et tert-butoksyamid (-NCO-OC(CH3)3, N-Boc); et allyloksyamid (N-Alloc) eller en /?ara-metoksybenzyl(PMB)-gruppe. En særlig foretrukket, beskyttende gruppe PG er tert-butyloksykarbonyl som kan fjernes under sure betingelser.
Når den beskyttende gruppen PG er én som kan fjernes under sure betingelser kan syren valgt for å fjerne den beskyttende gruppen PG velges for å gi 4-(2,6-diklorbenzoyl-amino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid i en bestemt saltform. Således kan for eksempel metansulfonsyre anvendes for å spalte Boc-gruppen og gi metansulfonsyresaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid.
Oppfinnelsen tilveiebringer også en fremgangsmåte for fremstilling av et intermediat med formel (XHI) ved omsetting av forbindelsen med formel (XI) med forbindelsen med formel (XE) under betingelsene definert heri.
Oppfinnelsen tilveiebringer videre et nytt kjemisk intermediat i seg selv med formel
(XI).
I et annet aspekt tilveiebringer oppfinnelsen en fremgangsmåte for fremstilling av syreaddisj onssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, hvilken fremgangsmåte innbefatter:
(i) behandle en forbindelse med formel (XIV):
med tionylklorid i et ikke-protisk, organisk løsemiddel, eventuelt med oppvarming; (ii) omsette produktet i trinn (i) med en forbindelse med formel (XII) under nærvær av en ikke-interfererende base slik som trietylamin eventuelt med oppvarming, for å gi en forbindelse med formel (XIII); og (iii) fjerne den beskyttende gruppen PG fra forbindelsen med formelen (XIII) for å gi syreaddisj onssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid; og eventuelt (iv) rekrystallisere syreaddisjonssaltet for å gi en krystallinsk form, for eksempel en
krystallinsk form som definert heri.
I trinn (i) kan reaksjonen med tionylklorid utføres med oppvarming, for eksempel til en temperatur i området 80 til 100 °C. Løsemidlet hvori trinn (i) utføres er et ikke-protisk, organisk løsemiddel, og det kan for eksempel være et aromatisk hydrokarbonløsemiddel slik som toluen. Eter at reaksjonen i trinn (i) er ferdig som bedømmes for eksempel ved at utgangsmaterialet (XIV) forsvinner, kan det organiske løsemidlet for eksempel fjernes ved fordamping under redusert trykk for å gi et residu som ytterligere kan tørkes, for eksempel ved azeotropisk tørking, for å gi et residu. Residuet kan deretter omsettes med forbindelsen med formel (XE) i trinn (ii).
I trinn (ii) blir en ikke-interfererende base anvendt. Begrepet "ikke-interfererende base" i foreliggende sammenheng betyr en base slik som trietylamin som ikke vil danne et amid med syren (XIII) eller syrekloridet (XI).
Trinn (ii) blir typisk utført med moderat oppvarming, for eksempel til en temperatur på opp til ca. 55 °C, mer typisk opp til 50 °C, for eksempel en temperatur i området 45 °C til 50 °C.
I trinn (ii) kan reaksjonen utføres i et polart, aprotisk løsemiddel slik som tetrahydrofuran.
I trinn (iii) er den beskyttende gruppen foretrukket én slik som Boc-gruppen som kan fjernes ved behandling med syre, hvor syren velges slik at den gir opphav til et ønsket salt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, for eksempel metansulfonsyresaltet.
Etterfølgende trinn (iii) kan produktet rekrystalliseres (for eksempel ved anvendelse av 2-propanol som løsemiddel) for å øke enhet og for å gi en krystallinsk form.
Når den beskyttende gruppen PG er en tert-butyloksykarbonylgruppe er det totale utbyttet fra trinnene (i), (ii) og (iii) i fremgangsmåten, som ikke inkluderer rekrystalliseringstrinn, over 85 %. Videre er fremgangsmåten fordelaktig ved at den anvender relativt enkle og billige reagenser og løsemidler, og gir produkt med mer enn 99 % renhet ved anvendelse kun av enkel rekrystallisasjon og løsemiddelvasketeknikker og uten behov for kromatografi.
Fremgangsmåter for rekrystallisering av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid og dens salter kan utføres ved fremgangsmåter godt kjente for fagmannen, se for eksempel (P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use", kapittel 8, Publisher Wiley-VCH). Produkter oppnådd fra en organisk reaksjon er sjeldent rene når de isoleres direkte fra reaksjonsblandingen. Hvis saltene er et faststoff, kan det renses og/eller krystalliseres ved rekrystallisasjon fra et passende løsemiddel. Et godt rekrystallisasjonsløsemiddel bør løse opp en moderat mengde av substansen som skal renses ved hevede temperaturer, men kun en liten mengde av substansen ved lavere temperatur. Det bør løse opp urenheter lett ved lav temperatur, men ikke alle. Til slutt bør løsemidlet lett kunne fjernes fra rensede produkter. Dette betyr vanligvis at det har et relativt lavt kokepunkt og fagmannen vil lett finne frem til løsemidler for en bestemt substans, eller hvis informasjonen ikke er tilgjengelig, teste flere løsemidler. For å oppnå et godt utbytte av renset materiale blir minimumsmengde varmt løsemiddel for å løse opp alt urent materiale, anvendt. I praksis blir 35 % mer løsemiddel enn nødvendig anvendt slik at løsningen ikke blir mettet. Hvis den urene forbindelsen inneholder en urenhet som er uløselig i løsemidlet, kan den deretter fjernes ved filtrering og deretter muliggjøre at løsningen krystalliserer. I tillegg, hvis den urene forbindelsen inneholder spor av farget materialesom ikke er opprinnelig for forbindelsen, kan det fjernes ved tilsetting av en liten mengde avfargingskull til den varme løsningen, filtrere den og la den krystallisere. Vanligvis skjer krystallisering spontant etter avkjøling av løsningen. Hvis ikke kan krystalliseringen reduseres ved avkjøling av løsningen til under romtemperatur eller før tilsetting av en enkel krystall av rent materiale (en såkrystall). Rekrystallisering kan også utføres og/eller utbyttet optimeres ved anvendelse av et antiløsemiddel. I dette tilfellet blir forbindelsen løst i et passende løsemiddel ved hevet temperatur, filtrert og deretter blir et ytterligere løsemiddel hvori den ønskede forbindelsen har lav løselighet, tilsatt for å hjelpe til med krystallisering. Krystallene blir deretter typisk isolert ved anvendelse av vakuumfiltrering, vasket og deretter tørket, for eksempel i en ovn eller via desikkasjon.
I noen tilfeller kan spor av Boc-beskyttet 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid være igjen selv eter rekrystallisering og disse kan danne et presipitat når syreaddisjonssaltet ifølge oppfinnelsen løses i vann, for eksempel i en bufret løsning. Vandige løsninger av syreaddisjonssaltene kan derfor filtreres gjennom et mikrofilter, for eksempel et 0,5 um filter eller et 0,4 um filter eller et 0,3 um filter eller mer foretrukket et 0,2 um filter, for å fjerne eventuelt slikt presipitat.
Som et alternativ (eller i tillegg) til filtrering kan en vandig løsning av saltet varmes opp under nærvær av en syre, typisk samme syre (for eksempel metansulfonsyre i tilfellet mesylatsaltet) fra hvilken saltet har blitt dannet. Den ytterligere syrebehandlingen resulterer i hydrolyse av rest-Boc-beskyttet 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid og omdanning til det ønskede saltet. Løsemiddelvandige ekstraksjoner eller kromatografi slik det er fremsatt i eksemplene nedenfor, kan også anvendes for å fjerne eller hindre dannelse av presipitater av rest-Boc-beskyttet forbindelse.
Forbindelsen 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid og dens salter er inhibitorer av syklinavhengige kinaser. For eksempel er de inhibitorer av syklinavhengige kinaser valgt fra CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK5, CDK6 og CDK9, og særlig CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK5 og CDK9, og mer særlig CDK1, CDK2, CDK4 og CDK9. De er også inhibitorer av CDK8 og CDK11.
4-(2,6- diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid og dets salter har også aktivitet overfor glykogensyntasekinase-3 (GSK-3).
Som en konsekvens av deres aktivitet når det gjelder modulering eller inhibering av CDK og glykogensyntasekinase, forventes 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid og dens salter å være anvendelige ved å tilveiebringe en måte å arrestere eller gjenvinne kontroll av cellesyklusen til abnormalt delende celler. Det er derfor tiltenkt at de vil være anvendelige ved behandling eller hindring av proliferative forstyrrelser slik som kreft. Det er også å forstå at de vil være anvendelige ved behandling av tilstander slik som virale infeksjoner, type II eller ikke-insulinavhengige diabetes mellitus, autoimmune sykdommer, hodetraume, slag, epilepsi, neurodegenerative sykdommer slik som Alzheimers, motorisk neuronsykdom, progressiv supranukleær palsi, kortikobasal degenerering og Picks sykdom for eksempel autoimmune sykdommer og neurodegenerative sykdommer for eksempel.
En undergruppe av sykdommer og tilstander hvor det er å forstå at saltene ifølge oppfinnelsen vil være anvendelige, består av virale infeksjoner, autoimmune sykdommer og neurodegenerative sykdommer.
CDK-er spiller en rolle når det gjelder regulering av cellesyklusen, apoptose, transkripsjon, differensiering og CNS-funksjon. Derfor kan CDK-inhibitorer være anvendelige ved behandling av sykdommer hvori det er en forstyrrelse som gjelder proliferasjon, apoptose eller differensiering, slik som kreft. Spesielt kan RB+ve-tumorer være særlig sensitive overfor CDK-inhibitorer. RB-ve-tumorer kan også være sensitive overfor CDK-inhibitorer.
Eksempler på kreftformer som kan inhiberes, inkluderer, men er ikke begrenset til, en karsinom, for eksempel en karsinom i blære, bryst, tarm (for eksempel kolorektale karsinomer slik som tarmadenokarsinom og tarmadenom), nyre, epidermis, lever, lunge, for eksempel adenokarsinom, småcellelungekreft og ikke-småcellelungekarsinomer, spiserør, galleblære, eggstokk, bukspyttkjertel, for eksempel eksokrin bukspyttkjertel-karsinom, mage, cervix, tyroid, prostata eller hud, for eksempel skjelettcellekarsinom; en hematopoietisk tumor i lymfoidlinjen, for eksempel leukemi, akutt lymfocyttisk leukemi, B-cellelymfom, T-cellelymfom, Hodgkins lymfom, ikke-Hodgkins lymfom, hårcellelymfom eller Burketts lymfom; en hematopoietisk tumor i myeloidlinjen, for eksempel akutte og kroniske, myelogene leukemier, myelodysplastisk syndrom eller promyelocyttisk leukemi; tyroid follikulær kreft; en tumor med mesenkymal opprinnelse, for eksempel fibrosarkom eller habdomyosarkom; en tumor i det sentrale eller perifere nervesystemet, for eksempel astrocytom, neuroblastom, gliom eller schwannom; melanom; seminom; teratokarsinom; osteosarkoma; xeroderma pigmentosum; keratoktantom; tyroid follikulær kreft; eller Kaposis sarkom.
Kreftformene kan være kreftformer som er sensitive overfor inhibering av en hvilken som helst én eller flere syklinavhengige kinaser valgt fra CDK1, CDK2, CDK4, CDK6 og CDK9, for eksempel én eller flere CDK-kinaser valgt fra CDK1, CDK2, CDK4 og CDK9, for eksempel CDK1 og/eller CDK2.
Om en bestemt kreftform er én som er sensitiv overfor inhibering av en syklinavhengig kinase eller ikke, kan bestemmes ved hjelp av en cellevekstundersøkelse som fremsatt i eksemplene nedenfor eller ved en fremgangsmåte som fremsatt i fremgangsmåter for diagnose.
CDK-er er også kjent for å spille en rolle i apoptose, proliferasjon, differensiering og transkripsjon og derfor kan CDK-inhibitorer også være anvendelige ved behandlingen av følgende sykdommer forskjellig fra kreft; virale infeksjoner, for eksempel herpes virus, pox virus, Epstein-Barr-virus, Sindbis-virus, adenovirus, HIV, HPV, HCV og HCMV; hindring av AIDS-utvikling hos HTV-infiserte individer; kroniske, inflammatoriske sykdommer, for eksempel systemisk lupus erytematose, autoimmun mediert glomerulonefritt, reumatoid artritt, psoriasis, inflammatorisk tarmsykdom og autoimmun diabetes mellitus; kardiovaskulære sykdommer, for eksempel hjertehypertrofi, restenose, aterosklerose; neurodegenerative forstyrrelser, for eksempel Alzheimers sykdom, AIDS-relatert demens, Parkinsons sykdom, amyotropisk lateral sklerose, retinitt pigmentosa, ryggradmuskulær atropi og cerebellær degenerering; glomerulonefritt; myelodysplastiske syndromer, iskemisk skadeassosierte, myokardiske infarkter, slag og reperfusjonsskade, arytmi, aterosklerose, toksininduserte eller alkoholrelaterte leversykdommer, haematologiske sykdommer, for eksempel kronisk anemi og aplastisk anemi; degenerative sykdommer i muskelskjelettsystemet, for eksempel osteoporose og artritt, aspirin-sensitiv rinosinusititt, systisk fibrose, multippel sklerose, nyresykdommer og kreftsmerte.
Det har også blitt funnet at noen syklinavhengige kinaseinhibitorer kan anvendes i kombinasjon med andre antikreftmidler. For eksempel har den syklinavhengige kinase-inhibitoren flavopiridol blitt anvendt med andre antikreftmidler i kombinasjonsbehandling.
Således, i de farmasøytiske sammensetningene, anvendelsene eller fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen for behandling av en sykdom eller tilstand som innbefatter abnormal cellevekst, er sykdommer eller tilstander som innbefatter abnormal cellevekst, i én utførelsesform kreft.
En gruppe kreft inkluderer human brystkreft (for eksempel primære brysttumorer, node-negativ brystkreft, invasiv kanaladenokarsinomer i brystet, ikke-endometrioid-brystkreft); og mantelcellelymfomer. I tillegg er andre kreftformer kolorektal og endometrial kreft.
Et annet undersett av kreftformer inkluderer hematopoietiske tumorer som gjelder lymfoidtypen, for eksempel leukemi, kronisk lymfocyttisk leukemi, mantelcellelymfom og B-cellelymfom (slik som diffus stor B-cellelymfom).
En særlig kreftform er kronisk lymfocyttisk leukemi.
En annen særlig kreftform er mantelcellelymfom.
En annen særlig kreftform er diffus stor B-cellelymfom.
Et annet undersett av kreftformer inkluderer brystkreft, eggstokk-kreft, tarmkreft, prostatakreft, oesofagealkreft, skjelettkreft og ikke-småcellelungekarsinomer.
Aktiviteten til syreaddisjonssaltene ifølge oppfinnelsen som inhibitorer av syklinavhengige kinaser og glykogensyntasekinase-3 kan måles ved anvendelse av undersøkelsene fremsatt i eksemplene nedenfor og aktivitetsnivået som fremvises, kan defineres som ICso-verdien.
Således er det for eksempel å forstå at syreaddisjonssaltene ifølge oppfinnelsen vil være anvendelige for å lindre eller redusere tilfellet av kreft.
Oppfinnelsen tilveiebringer også blant annet:
• Et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, for anvendelse ved profylakse eller behandling av en sykdom eller tilstand mediert av en syklinavhengig kinase eller glykogensyntasekinase-3. • Et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, for anvendelse ved inhibering av tumorvekst hos et pattedyr. • Et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, for anvendelse ved inhibering av veksten av tumorceller (for eksempel hos et pattedyr). • Et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, for anvendelse i fremgangsmåte for profylakse eller behandling av en sykdom eller tilstand mediert av en syklinavhengig kinase eller glykogensyntasekinase-3, hvilken fremgangsmåte innbefatter administrering til et subjekt som trenger det av syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid. • Et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, for anvendelse i fremgangsmåte for inhibering av tumorvekst hos et pattedyr (for eksempel et menneske), hvilken fremgangsmåte innbefatter administrering til pattedyret (for eksempel et menneske) av en effektiv tumorvekstinhiberende mengde av addisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid. • Et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, for anvendelse i fremgangsmåte for inhibering av veksten av tumorceller (for eksempel tumorceller til stede hos et pattedyr slik som et menneske), hvilken fremgangsmåte innbefatter å bringe tumorcellene i kontakt med en effektiv tumorcellevekstinhiberende mengde av syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid. • Et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, for anvendelse i fremgangsmåte for å lindre eller redusere forekomst av en sykdom eller tilstand mediert av en syklinavhengig kinase eller glykogensyntasekinase-3, hvilken fremgangsmåte innbefatter administrering til et subjekt som trenger det av syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid. • Et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, for anvendelse i fremgangsmåte for behandling av en sykdom eller tilstand som innbefatter eller oppstår fra abnormal cellevekst hos et pattedyr, hvilken fremgangsmåte innbefatter administrering til pattedyret av syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid i en mengde effektiv til å inhibere abnormal cellevekst. • Et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, for anvendelse i fremgangsmåte for å lindre eller redusere forekomsten av en sykdom eller tilstand som innbefatter eller oppstår fra abnormal cellevekst hos et pattedyr, hvilken fremgangsmåte innbefatter administrering til pattedyret av syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid i en mengde effektiv til å inhibere abnormal cellevekst. • Et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, for anvendelse i fremgangsmåte for behandling av en sykdom eller tilstand som innbefatter eller oppstår fra abnormal cellevekst hos et pattedyr, hvor
fremgangsmåten innbefatter administrering til pattedyret av syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid i en mengde effektiv til å inhibere en cdk-kinase (slik som cdkl eller cdk2) eller glykogensyntasekinase-3-aktivitet. • Et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, for anvendelse i fremgangsmåte for å lindre eller redusere forekomsten av en sykdom eller tilstand som innbefatter eller oppstår fra abnormal cellevekst hos et pattedyr, hvor fremgangsmåten innbefatter administrering til pattedyret av syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid i en mengde effektiv til å inhibere en cdk-kinase (slik som cdkl eller cdk2) eller glykogensyntasekinase-3-aktivitet. • Et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, for anvendelse i fremgangsmåte for inhibering av en syklinavhengig kinase eller glykogensyntasekinase-3, hvilken fremgangsmåte innbefatter å bringe kinasen i kontakt med syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid. • Et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, for anvendelse i fremgangsmåte for å modulere en cellulær prosess (for eksempel celledeling) ved å inhibere aktiviteten til en syklinavhengig kinase eller glykogensyntasekinase-3 ved anvendelse av syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid. • Et syreaddisj onssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, for anvendelse ved profylakse eller behandling av en sykdomstilstand som beskrevet heri. • Anvendelsen av et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, for fremstilling av et medikament, hvori medikamentet er for en hvilken som helst én eller flere av anvendelsene definert heri. • En farmasøytisk sammensetning som innbefatter et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, og en farmasøytisk akseptabel bærer. • En farmasøytisk sammensetning for administrasjon i en vandig løsningsform, hvor den farmasøytiske sammensetningen innbefatter et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, hvor saltet har en løselighet i vann på mer enn 15 mg/ml, typisk mer enn 20 mg/ml, foretrukket mer enn 25 mg/ml og mer foretrukket mer enn 30 mg/ml. • Et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, for anvendelse innen medisin. • Et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, for en hvilken som helst av anvendelsene og fremgangsmåtene fremsatt ovenfor, og som beskrevet ellers heri. • Et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, for anvendelse i fremgangsmåte for diagnose og behandling av en sykdom eller tilstand mediert av en syklinavhengig kinase, hvilken fremgangsmåte innbefatter (i) screene en pasient for å bestemme om en sykdom eller tilstand fra hvilken pasienten lider eller kan lide, er én som vil være mottakelig for behandling med en forbindelse som har aktivitet overfor syklinavhengige kinaser; og (ii) der det er indikert at sykdommen eller tilstanden fra hvilken pasienten således er mottakelig, deretter administrerer til pasienten syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklor-benzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid.
Anvendelsen av et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som er et mesylat- eller acetatsalt eller blanding derav, for fremstilling av et medikament for behandling eller profylakse av en sykdom eller tilstand hos en pasient som har blitt screenet og som har blitt bestemt at lider av, eller har risiko for å lide av, en sykdom eller tilstand som vil være mottakelig for behandling med en forbindelse som har aktivitet overfor syklinavhengig kinase.
Syreaddisjonssaltene i aspektene ovenfor ifølge oppfinnelsen er mest foretrukket metansulfonatsaltet.
Oppfinnelsen tilveiebringer også anvendelse av saltene ved behandling av B-cellelymfom, kronisk, lymfocyttisk leukemi og diffus stor B-cellelymfom.
I et ytterligere aspekt tilveiebringer oppfinnelsen syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid eller et solvat, tautomer eller N-oksid derav for anvendelse ved behandling av B-cellelymfom.
Oppfinnelsen tilveiebringer ytterligere syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid eller et solvat, tautomer eller N-oksid derav for anvendelse ved behandling av kronisk, lymfocyttisk leukemi.
Oppfinnelsen tilveiebringer videre syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid eller et solvat, tautomer eller N-oksid derav for anvendelse ved behandling av diffus stor B-cellelymfom.
Ved behandling av B-cellelymfom, diffus stor B-cellelymfom og kronisk, lymfocyttisk leukemi, kan derfor 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid på formen av metansulfonsyre- eller eddiksyreaddisj onssaltet eller blandinger derav anvendes
Mens det er mulig for syreaddisjonssaltene av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid slik som mesylatsaltet å bli administrert alene, er det foretrukket å presentere det som en farmasøytisk sammensetning (for eksempel formulering) som innbefatter forbindelsen eller et salt derav sammen med én eller flere farmasøytisk akseptable bærere, adjuvanser, eksipienser, fortynningsmidler, fyllstoffer, buffere, stabilisatorer, konserveringsmidler, smøremidler eller andre materialer godt kjente for fagmannen. Sammensetningene kan også inkludere andre terapeutiske eller profylaktiske midler, for eksempel midler som reduserer eller lindrer noen av bivirkningene assosiert med kjemoterapi. Særlige eksempler på slike midler inkluderer anti-emetiske midler og midler som hindrer eller reduserer varigheten på kjemoterapiassosiert neutropeni og hindrer komplikasjoner som oppstår fra reduserte nivåer av røde blodceller eller hvite blodceller, for eksempel erytropoietin (EPO), granulocyttmakrofagkolonistimulerende faktor (GM-CSF), og granulocyttkoloni-stimulerende faktor (G-CSF).
Således tilveiebringer foreliggende oppfinnelse ytterligere farmasøytiske sammensetninger som definert ovenfor, og fremgangsmåter for fremstilling av en farmasøytisk sammensetning som innbefatter sammenblanding av saltene av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid (særlig mesylatsaltet) som definert heri, sammen med én eller flere farmasøytisk akseptable bærere, eksipienter, buffere, adjuvanser, stabilisatorer eller andre materialer som beskrevet heri.
Begrepet "farmasøytisk akseptable" slik det anvendes heri, angår forbindelser, materialer, sammensetninger og/eller doseringsformer som er innenfor rimelig medisinsk vurdering, egnet for anvendelse i kontakt med vev til et subjekt (for eksempel menneske) uten overdreven toksisitet, irritasjon, allergisk respons eller annet problem eller komplikasjon, med hensyn til et rimelig fordel/risikoforhold. Hver bærer, eksipient, etc, må også være "akseptabel" i betydningen å være kompatibel med de andre ingrediensene i formuleringen.
De farmasøytiske sammensetningene kan være i en hvilken som helst form egnet for oral, parenteral, topisk, intranasal, oftalmisk, otisk, rektal, intravaginal eller transdermal administrasjon. Der sammensetningene er tiltenkt parenteral administrasjon, kan de formuleres for intravenøs, intramuskulær, intraperitoneal, subkutan administrasjon eller for direkte levering til et målorgan eller vev ved injeksjon, infusjon eller andre leveringsmetoder. Leveringen kan være med bolusinjeksjon, korttidsinfusjon eller langtidsinfusjon og kan være via passiv levering eller ved anvendelse av en egnet infusjonspumpe.
Farmasøytiske formuleringer tilpasset for parenteral administrasjon, inkluderer vandige og ikke-vandige, sterile injeksjonsløsninger som kan inneholde antioksidanter, buffere, bakteriostatiske midler, koløsemidler, organiske løsemiddelblandinger, syklodekstrin-komplekseringsmidler, emulgeringsmidler (for å danne og stabilisere emulsjons-formuleringer), liposomkomponenter for å danne liposomer, gelerbare polymerer for å danne polymere geler, lyofilisasjonsprotektanter og kombinasjoner av midler for blant annet å stabilisere den aktive ingrediensen i en løselig form og gjøre formuleringen isoton med blodet til tiltenkt resipient. Farmasøytiske formuleringer for parenteral administrasjon kan også ha form av vandige og ikke-vandige, sterile suspensjoner som kan inkludere suspenderingsmidler og fortykningsmidler (R. G. Strickly, "Solubilizing Excipients in oral and injectable formulations", Pharmaceutical Research, Vol 21(2) 2004, s. 201-230).
Et legemiddelmolekyl som er ioniserbart, kan solubiliseres til ønsket konsentrasjon ved pH-justering hvis legemidlets pKaer tilstrekkelig langt borte fra formuleringens pH-verdi. Akseptabelt område er pH 2-12 for intravenøs og intramuskulær administrasjon, men for subkutan administrasjon er akseptabelt område pH 2,7-9,0. Løsnings-pH-verdien kontrolleres av enten saltformen til legemidlet, sterke syrer/baser slik som saltsyre eller natriumhydroksid, eller av løsninger av buffere som inkluderer, men er ikke begrenset til, bufferløsninger dannet fra glysin, citrat, acetat, maleat, succinat, histidin, fosfat, tris(hydroksymetyl)aminometan (TRIS) eller karbonat.
Kombinasjonen av en vandig løsning og et vannløselig, organisk løsemiddel/surfaktant (det vil si et koløsemiddel) blir ofte anvendt i injiserbare formuleringer. De vannløselige, organiske løsemidlene og surfaktantene anvendt i injiserbare formuleringer, inkluderer, men er ikke begrenset til, propylenglykol, etanol, polyetylenglykol 300, polyetylenglykol 400, glyserin, dimetylacetamid (DMA), N-metyl-2-pyrrolidon (NMP; Pharmasolve), dimetyl-sulfoksid (DMSO), Solutol HS 15, Cremophor EL, Cremophor RH 60 og polysorbat 80. Slike formuleringer kan vanligvis bli, men ikke alltid, fortynnet før injeksjon.
Propylenglykol, PEG 300, etanol, Cremophor EL, Cremophor RH 60 og polysorbat 80 er helt organisk vannblandbare løsemidler og surfaktanter anvendt i kommersielt tilgjengelige, injiserbare formuleringer og kan anvendes i kombinasjoner med hverandre. De resulterende, organiske formuleringene blir vanligvis fortynnet minst 2 ganger før administrasjon ved rV-bolus eller IV-infusjon.
Alternativt kan økt vannløselighet oppnås ved molekylær kompleksering med syklodekstriner.
Liposomer er lukkede, sfæriske vesikler bestående av ytre lipidbilagmembraner og en indre, vandig kjerne og med en total diameter på <100 um. Avhengig av hydrofobisitetsnivået kan moderat hydrofobe legemidler solubiliseres av liposomer hvis legemidlet blir innkapslet eller interkalatert i liposomen. Hydrofobe legemidler kan også solubiliseres ved liposomer hvis legemiddelmolekylet blir en integrert del av lipidbilagmembranen og i dette tilfellet blir det hydrofobe legemidlet løst i lipid-delen til lipidbilaget. En typisk liposomformulering inneholder vann med fosfolipid ved -5-20 mg/ml, et isotonisitetsfremmende middel, en pH 5-8-buffer og eventuelt kolesterol.
Formuleringene kan presenteres i enhetsdose eller multidosebeholdere, for eksempel forseglede ampuller og medisinflasker og kan lagres i frysetørket (lyofilisert) tilstand som kun krever tilsetting av den sterile, vandige bæreren, for eksempel vann for injeksjon, umiddelbart før anvendelse.
Den farmasøytiske formuleringen kan fremstilles ved å lyofilisere saltene. Lyofilisasjon refererer til prosedyren med å frysetørke en sammensetning. Frysetørking og lyofilisasjon blir derfor anvendt synonymt heri. En typisk fremgangsmåte er å solubilisere forbindelsen og den resulterende formuleringen blir klargjort, sterilfiltrert og aseptisk overført til beholdere passende for lyofilisasjon (for eksempel medisinflasker). I tilfellet medisinflasker blir de delvis stoppet med lyostoppere. Formuleringen kan avkjøles til frysing og lyofiliseres under standard betingelser og deretter hermetisk settes lokk på for å gi en stabil, tørr lyofilisert formulering. Sammensetningen vil typisk ha et lavt restvanninnhold, for eksempel mindre enn 5 %, for eksempel mindre enn 1 % i forhold til vekt basert på vekten av den lyofiliserte formuleringen.
Den lyofiliserte formuleringen kan inneholde andre eksipienter, for eksempel fortykningsmidler, dispergeringsmidler, buffere, antioksidanter, konserveringsmidler og tonisitetsjusterende midler. Typiske buffere inkluderer fosfat, acetat, citrat og glysin. Eksempler på antioksidanter inkluderer askorbinsyre, natriumbisulfitt, natriummetabisulfitt, monotioglyserol, tiourea, butylert hydroksytoluen, butylert hydroksylanisol og etylendiamietetraeddiksyresalter. Konserveringsmidler kan inkludere benzosyre og dens salter, sorbinsyre og dens salter, alkylestere av para-hydroksybenzosyre, fenol, klorbutanol, benzylalkohol, timerosal, benzalkoniumklorid og cetylpyridiniumklorid. Bufferne nevnt tidligere, så vel som dekstrose og natriumklorid, kan anvendes for tonisitetsjustering hvis nødvendig.
Bulkmidler blir generelt anvendt innen lyofiliseringsteknologi for å lette prosessering og/eller tilveiebringe bulk og/eller mekanisk integritet til den lyofiliserte kake. Bulkmidler betyr et fritt vannløselig, fast, partikulært fortynningsmiddel som når det kolyofiliseres med forbindelsen eller et salt derav, tilveiebringer en fysisk stabil lyofilisert kake, en mer optimal frysetørkeprosess og rask og fullstendig rekonstitusjon. Bulkmidlet kan også anvendes for å gjøre løsningen isoton.
Det vannløselige bulkmidlet kan være et hvilket som helst farmasøytisk akseptabelt inert fast materiale som typisk anvendes for lyofilisasjon. Slike bulkmidler inkluderer for eksempel sukker, slik som glukose, maltose, sukrose og laktose; polyalkoholer slik som sorbitol eller mannitol; aminosyrer slik som glysin; polymerer slik som polyvinylpyrrolidin; og polysakkarider slik som dekstran.
Vektforholdet mellom bulkmidlet og den aktive forbindelsen er typisk innenfor området fra ca. 1 til ca. 5, for eksempel fra ca. 1 til ca. 3, for eksempel i området fra ca. 1 til 2.
Alternativt kan de bli tilveiebrakt i en løsningsform som kan konsentreres og forsegles i en passende medisinflaske. Sterilisering av doseringsformer kan gjøres via filtrering eller ved autoklavering av medisinflaskene og deres innholdsstoffer på passende stadier i formuleringsprosessen. Den leverte formuleringen kan kreve ytterligere fortynning eller preparering før levering, for eksempel fortynning i egnede, sterile infusjonspakker.
Ekstemporære injeksjonsløsninger og suspensjoner kan fremstilles fra sterile pulvere, granuler og tabletter.
I én foretrukket utførelsesform ifølge oppfinnelsen er den farmasøytiske sammensetningen i en form egnet for i.v.-administrasjon, for eksempel ved injeksjon eller infusjon.
Farmasøytiske sammensetninger ifølge oppfinnelsen for parenteral injeksjon kan også innbefatte farmasøytisk akseptable, sterile vandige eller ikke-vandige løsninger,
dispersjoner, suspensjoner eller emulsjoner, så vel som sterile pulvere for rekonstitusjon til sterile, injiserbare løsninger eller dispersjoner umiddelbart før anvendelse. Eksempler på egnede vandige og ikke-vandige bærere, fortynningsmidler, løsemidler eller vehikler inkluderer vann, etanol, polyoler (slik som glyserol, propylenglykol, polyetylenglykol og lignende), karboksymetylcellulose og egnede blandinger derav, vegetabilske oljer (slik som olivenolje) og injiserbare, organiske estere slik som etyloleat. Passende fluiditet kan for eksempel opprettholdes ved anvendelse av beleggingsmaterialer slik som lecitin, ved opprettholdelse av påkrevd partikkelstørrelse i tilfellet dispersjoner og ved anvendelse av surfaktanter.
Sammensetningene ifølge oppfinnelsen kan også inneholde adjuvanser slik som konserveringsmidler, fuktemidler, emulgeringsmidler og dispergeringsmidler. Hindring av virkningen fra mikroorganismer kan forsikres ved inklusjon av forskjellige anti-bakterielle og antifungale midler, for eksempel paraben, klorbutanol, fenolsorbinsyre og lignende. Det kan også være ønskelig å inkludere isotone midler, slik som sukker, natriumklorid og lignende. Forlenget absorpsjon av den injiserbare, farmasøytiske formen kan oppnås ved inklusjon av midler som forsinker absorpsjon slik som aluminiummonostearat og gelatin.
Hvis en forbindelse ikke er stabil i vandig media eller har lav løselighet i vandig media, kan den formuleres som et konsentrat i organiske løsemidler. Konsentratet kan deretter fortynnes til en lavere konsentrasjon i et vandig system og kan være tilstrekkelig stabil i den korte tidsperioden i løpet av dosering. Derfor, i et annet aspekt, er det tilveiebrakt en farmasøytisk sammensetning som innbefatter en ikke-vandig løsning bestående fullt og helt av ett eller flere organiske løsemidler som kan doseres slik de er eller mer vanlig fortynnes med en egnet IV-eksipient (saltvann, dekstrose; bufret eller ikke bufret) før administrasjon ("Solubilizing excipients in oral and injectable formulations", Pharmaceutical Research, 21(2), 2004, s. 201-230). Eksempler på løsemidler og surfaktanter er propylenglykol, PEG300, PEG400, etanol, dimetylacetamid (DMA), N-metyl-2-pyrrolidon (NMP, Pharmasolve), Glyserin, Cremophor EL, Cremophor RH 60 og polysorbat. Særlige ikke-vandige løsninger består av 70-80 % propylenglykol og 20-30 % etanol. En bestemt ikke-vandig løsning består av 70 % propylenglykol, og 30 % etanol. En annen er 80 % propylenglykol og 20 % etanol. Normalt blir disse løsemidlene anvendt i kombinasjon og vanligvis fortynnet minst 2 ganger før IV-bolus eller IV-infusjon. De typiske mengdene for bolus IV-formuleringer er -50 % for glyserin, propylenglykol, PEG300, PEG400 og~20 % for etanol. Typiske mengder for rV-infusjonsformuleringer er~15 % for glyserin, 3 % for DMA, og~10 % for propylenglykol, PEG300, PEG400 og etanol.
I én foretrukket utførelsesform ifølge oppfinnelsen er den farmasøytiske sammensetningen i en form egnet for i.v.-administrasjon, for eksempel ved injeksjon eller infusjon. For intravenøs administrasjon kan løsningen doseres som den er, eller kan injiseres inn i en infusjonspose (som inneholder en farmasøytisk akseptabel eksipiens, slik som 0,9 % saltvann eller 5 % dekstrose) før administrasjon.
I en annen foretrukket utførelsesform er den farmasøytiske sammensetningen i en form egnet for subkutan (s.c.) administrasjon.
Farmasøytiske doseringsformer egnet for oral administrasjon inkluderer tabletter, kapsler, kapletter, piller, lozenger, siruper, løsninger, pulvere, granuler, eliksirer og suspensjoner, sublinguale tabletter, wafere eller plastre og buccale plastre.
Farmasøytiske sammensetninger som inneholder syreaddisjonssaltene derav, kan formuleres i henhold til kjente teknikker, se for eksempel "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Company, Easton, PA, USA.
Saltene kan formuleres som beskrevet heri og slik det er beskrevet i foreliggende søknad.
Således kan tablettsammensetninger inneholde en enhetsdosering av aktiv forbindelse sammen med et inert fortynningsmiddel eller bærer slik som et sukker eller en sukker-alkohol, for eksempel laktose, sukrose, sorbitol eller mannitol; og/eller et ikke-sukker-avledet fortynningsmiddel, slik som natriumkarbonat, kalsiumfosfat, kalsiumkarbonat eller en cellulose eller derivat derav slik som metylcellulose, etylcellulose, hydroksy-propylmetylcellulose, og stivelser, slik som maisstivelse. Tabletter kan også inneholde slike standardingredienser som bindemiddel og granuleringsmidler, slik som polyvinyl-pyrrolidon, desintegreringsmidler (for eksempel svellbare, tverrbundne polymerer slik som tverrbundet karboksymetylcellulose), smøremidler (for eksempel stearater), konserveringsmidler (for eksempel parabener), antioksidanter (for eksempel BHT), buffermidler (for eksempel fosfat- eller citratbuffere) og brusemidler slik som citrat/bikarbonatblandinger. Slike eksipienser er godt kjente og trenger ikke å bli diskutert i detalj her.
Kapselformuleringer kan være av hard gelatin eller myk gelatinvariant og kan inneholde den aktive komponenten i fast, delvis fast eller flytende form. Gelatinkapsler kan dannes fra dyregelatin eller syntetiske eller planteavledede ekvivalenter derav.
De faste doseringsformene (for eksempel tabletter, kapsler etc.) kan være belagte eller ikke-belagte, men har typisk et belegg, for eksempel et beskyttende filmbelegg (for eksempel en voks eller lakk) eller et frigivelseskontrollerende belegg. Belegget (for eksempel en Eudragit™-type polymer) kan designes for å frigi den aktive forbindelsen ved et ønsket sted i gastrointestinaltrakten. Således kan belegget velges slik at det brytes ned under visse pH-betingelser i gastrointestinaltrakten og derved selektivt frigir forbindelsen i magen eller i ileum eller tolvfingertarmen.
Istedenfor, eller i tillegg til, et belegg kan legemidlet presenteres i en fast matrisk som innbefatter et frigivelseskontrollerende middel, for eksempel et frigivelsesforsinkende middel som kan tilpasses selektiv frigivelse av forbindelsen under betingelser med varierende surhet eller alkalinitet i gastrointestinaltrakten. Alternativt kan matriks-materialet eller det frigivelsesretarderende belegget ha form av en eroderbar polymer (for eksempel en maleinsyreanhydridpolymer) som blir i det vesentlige kontinuerlig erodert idet doseringsformen passerer gjennom gastrointestinaltrakten. Som et ytterligere alternativ kan den aktive forbindelsen formuleres i et leveringssystem som tilveiebringer osmotisk kontroll av frigivelsen av forbindelsen. Osmotisk frigivelse og andre forsinkende frigivelses- eller vedvarende frigivelsesformuleringer kan fremstilles i henhold til fremgangsmåter godt kjente for fagmannen.
De farmasøytiske formuleringene kan presenteres til en pasient i "pasientpakker" som inneholder hele behandlingsforløpet i en enkel pakke, vanligvis en blendepakke. Pasientpakkene har en fordel i forhold til tradisjonelle pakker, hvor en farmasøyt deler en pasients levering av et farmasøytisk middel fra en bulklevering, i at pasienten alltid har adgang til pakningsinnlegget innbefattet i pasientpakken som normalt ikke er på plass i pasientpakken. Inklusjon av pakningsinnlegg har vist seg å forbedre pasientens etterlevelse av legens instruksjoner.
Sammensetninger for topisk anvendelse inkluderer salver, kremer, sprayer, plastre, geler, flytende dråper og innsettinger (for eksempel intraokulære innsettinger). Slike sammensetninger kan formuleres i henhold til kjente fremgangsmåter.
Sammensetninger for parenteral administrasjon blir typisk presentert som sterile, vandige eller oljeløsninger eller fine suspensjoner eller kan bli tilveiebrakt i fint oppdelt, sterilt pulverform for fremstilling ekstemporært med sterilt vann for injeksjon.
Eksempler på formuleringer for rektal eller intravaginal administrasjon inkluderer pessarer og stikkpiller som for eksempel kan dannes fra et formet støpbart eller voksaktig materiale som inneholder den aktive forbindelsen.
Sammensetninger for administrasjon ved inhalasjon kan ha form av inhalerbare pulver-sammensetninger eller flytende eller pulversprayer og kan administreres i standardform ved anvendelse av pulverinhaleringsinnretninger eller aerosoldispergeringsinnretninger. Slike innretninger er godt kjente. For administrasjon ved inhalasjon innbefatter de pulveriserte formuleringene typisk den aktive forbindelsen sammen med et inert, fast, pulverisert fortynningsmiddel slik som laktose.
Syreaddisjonssaltene vil generelt presenteres i enhetsdoseringsform og vil som sådan typisk inneholde tilstrekkelig forbindelse til å gi en ønsket kiral av biologisk aktivitet. For eksempel kan en formulering inneholde fra 1 nanogram til 2 gram aktiv ingrediens, for eksempel fra 1 nanogram til 2 milligram av aktiv ingrediens. Innenfor dette området er særlige underområder av forbindelse 0,1 milligram til 2 gram av aktiv ingrediens
(mer vanlig fra 10 milligram til 1 gram, for eksempel 50 milligram til 500 milligram)
eller 1 mikrogram til 20 milligram (for eksempel 1 mikrogram til 10 milligram, for eksempel 0,1 milligram til 2 milligram av aktiv ingrediens).
Syreaddisjonssaltene vil administreres til en pasient som trenger det (for eksempel en menneske- eller dyrepasient) i en mengde tilstrekkelig til å oppnå den ønskede terapeutiske effekten.
Det er å forstå at saltene av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid som er mesylat- og acetatsaltene og blandinger derav, vil være anvendelig ved profylakse eller behandling av et antall sykdommer eller tilstander mediert av syklinavhengige kinaser og glykogensyntasekinase-3. Eksempler på slike sykdommer og tilstander er fremsatt ovenfor.
Saltene blir generelt administrert til et subjekt som trenger slik administrasjon, for eksempel en menneske- eller dyrepasient, foretrukket et menneske.
Saltene vil typisk administreres i mengder som er terapeutisk eller profylaktisk anvendelige og som generelt er ikke-toksiske. Imidlertid, i visse situasjoner (for eksempel i tilfellet livstruende sykdommer) kan fordelene ved å administrere saltene oppveie ulempene og eventuelle toksiske effekter eller bivirkninger, hvor det i et slikt tilfelle kan anses ønskelig å administrere saltene i mengder som er assosiert med en grad av toksisitet.
Saltene slik det er definert heri, kan administreres over en forlenget tidsperiode for å opprettholde fordelaktige terapeutiske effekter eller kan administreres kun i en kort tidsperiode. Alternativt kan de administreres på en pulserende eller kontinuerlig måte.
En typisk daglig dose av saltene, slik det er definert heri, kan være i området fra
100 pikogram til 100 milligram per kilogram kroppsvekt, mer typisk 5 nanogram til 25 milligram per kilogram kroppsvekt og mer vanlig 10 nanogram til 15 milligram per kilogram (for eksempel 10 nanogram til 10 milligram og mer typisk 1 mikrogram per kilogram til 20 milligram per kilogram, for eksempel 1 mikrogram til 10 milligram per kilogram) per kilogram kroppsvekt selv om høyere eller lavere doser kan administreres hvis påkrevd. Saltene kan administreres på daglig basis eller på repeterende basis hver 2. eller 3. eller 4. eller 5. eller 6. eller 7. eller 10. eller 14. eller 21. eller 28. dag, for eksempel.
Et eksempel på en dosering for mesylatsaltet er ved en startdose på 5,6-13,5 mg/60 kg/dag (ekvivalent med 93-225 ug/kg/dag/person) og etterfølgende med en effektiv dose på 55-122 mg/60 kg/dag (ekvivalent med 0,9-2,0 mg/kg/dag/person) eller en effektiv dose på 90-345 mg/60 kg/dag (ekvivalent med 1,5-5,8 mg/kg/dag/person) selv om høyere eller lavere doser kan administreres der de er påkrevd. Til slutt vil mengden forbindelse administrert og type sammensetning anvendt bli vurdert ut fra typen sykdom eller fysiologisk tilstand som behandles og vil bestemmes av ansvarlig lege.
I én bestemt doseringsprotokoll vil en pasient bli gitt en infusjon av saltene i en periode på fra én time daglig i opp til ti dager, spesielt opp til fem dager i løpet av én uke, og behandlingen gjentas med et ønsket intervall slik som to til fire uker, særlig hver tredje uke.
Mer spesielt kan en pasient gis en infusjon av saltene i perioder på én time daglig i 5 dager og behandlingen gjentas hver tredje uke.
I et annet spesielt doseringsregime blir en pasient gitt en infusjon i løpet av 30 min til
1 time, fulgt av opprettholdende infusjoner med forskjellig varighet, for eksempel 1 til
5 timer, for eksempel 3 timer.
I et ytterligere spesielt doseringsregime blir en pasient gitt en kontinuerlig infusjon i en periode på 12 timer til 5 dager, og spesielt en kontinuerlig infusjon på 24 timer til 72 timer.
I et annet doseringsregime som kan anvendes for eksempel ved behandling av kronisk lymfocyttisk leukemi, blir en pasient gitt en 2 til 6 timer (mer typisk 3 til 5 timer) infusjon, gjentatt ved intervaller på 6 til 8 dager i 3, 4 eller 5 uker i løpet av 6.1 en foretrukket utførelsesform av dette regimet blir en pasient gitt en 4 timers infusjon, én gang ukentlig, i 4 uker i løpet av 6.
Til slutt vil imidlertid mengden av salter som administreres og type sammensetning som anvendes, vurderes i lys av type sykdom eller fysiologisk tilstand som behandles og vil bestemmes av ansvarlige lege.
Saltene kan administreres som eneste terapeutiske middel eller de kan administreres i kombinasjonsbehandling med én eller flere andre forbindelser for behandling av en bestemt sykdomstilstand, for eksempel en neoplastisk sykdom slik som kreft som tidligere definert. Eksempler på andre terapeutiske midler eller behandlinger som kan administreres eller anvendes sammen (om det er samtidig eller ved forskjellige tidsintervaller) med forbindelsene ifølge oppfinnelsen inkluderer, men er ikke begrenset til, topoisomeraseinhibitorer, alkyleringsmidler, antimetabolitter, DNA-bindemidler, mikrotubule inhibitorer (tubulinmålrettede midler), monoklonale antistoffer og signaltransduksjonsinhibitorer, hvor særlige eksempler er cisplatin, syklofosfamid, doksorubicin, irinotecan, fludarabin, 5FU, taxaner, mitomycin C og radioterapi.
Saltene og annet terapeutisk middel med hvilket den administreres i en kombinasjonsterapi, kan være gitt i individuelt varierende doseringsregimer via forskjellige ruter. Således kan for eksempel mesylat- og acetatsaltene og blandinger derav av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid (for eksempel mesylat- og acetatsaltene og blandinger derav) administreres som løsninger ved den parenterale ruten, mens annet terapeutisk middel kan administreres oralt.
Der syreaddisjonssaltet administreres i kombinasjonsbehandling med ett, to, tre, fire eller flere andre terapeutiske midler (foretrukket ett eller to, mer foretrukket ett), kan forbindelsene og saltene administreres samtidig eller sekvensielt. Når de administreres sekvensielt kan de administreres nær hverandre (for eksempel i løpet av en periode på 5-10 min) eller ved lengre intervaller (for eksempel 1, 2, 3, 4 eller flere timer fra hverandre eller enda lengre perioder fra hverandre hvis påkrevd), hvor det presise doseringsregimet vurderes ut fra egenskapene til de terapeutiske midlene. Syreaddisjonssaltene kan også administreres i forbindelse med ikke-kjemoterapeutiske behandlinger slik som radioterapi, fotodynamisk terapi, genterapi; kirurgi og kontrollerte dietter.
For anvendelse ved kombinasjonsterapi med et annet kjemoterapeutisk middel kan syreaddisjonssaltet og ett, to, tre, fire eller flere andre terapeutiske midler for eksempel formuleres sammen i en doseringsform som inneholder to, tre, fire eller flere terapeutiske midler. I et alternativ kan de individuelle, terapeutiske midlene formuleres separat og presenteres sammen i form av et kitt, eventuelt med instruksjoner for deres anvendelse.
Fagmannen vil kjenne til gjennom hans eller hennes generelle kunnskap hvilke doseringsregimer og kombinasjonsterapier som kan anvendes.
Før administrasjon av syreaddisjonssaltene kan en pasient screenes for å bestemme om en sykdom eller tilstand fra hvilken pasienten lider eller kan lide av, er én som vil være mottakelig for behandling med en forbindelse som har aktivitet overfor syklinavhengige kinaser. For eksempel kan en biologisk prøve som tas fra en pasient, analyseres for å bestemme om en tilstand eller sykdom, slik som kreft, som pasienten lider av eller kan lide av, er en som er kjennetegnet ved en genetisk abnormalitet eller abnormal protein-ekspresjon som fører til overaktivering av CDK-er eller sensitisering av en reaksjonsvei til normal CDK-aktivitet. Eksempler på slike abnormaliteter som resulterer i aktivering eller sensitisering av CDK2-signalet, inkluderer oppregulering av syklin E, (Harwell RM, Mull BB, Porter DC, Keyomarsi K.; J Biol Chem. 2004 Mar 26;279(13):12695-705) eller tap av p21 eller p27 eller tilstedeværelsen av CDC4-varianter (Rajagopalan H, Jallepalli PV, Rago C, Velculescu VE, Kinzler KW, Vogelstein B, Lengauer C; Nature. 2004 Mar 4;428(6978):77-81). Tumorer med mutanter i CDC4 eller oppregulering, særlig overekspresjon, av syklin E eller tap av p21 eller p27, kan være særlig sensitive overfor CDK-inhibitorer. Begrepet oppregulering slik det anvendes heri, inkluderer hevet ekspresjon eller overekspresjon, som inkluderer genamplifikasjon (det vil si multiple genkopier) og økt ekspresjon av en transkripsjonseffekt og hyperaktivitet og aktivering, som inkluderer aktivering ved mutasjoner.
Således kan pasienten gjennomgå en diagnostisk test for å detektere en markør karakteristisk for oppregulering av syklin E eller tap av p21 eller p27 eller tilstedeværelsen av CDC4-varianter. Begrepet diagnose inkluderer screening. Som markør inkluderes genetiske markører som for eksempel inkluderer måling av DNA- sammensetning for å identifisere mutasjoner av CDC4. Begrepet markør inkluderer også markører som er karakteristisk for oppregulering av syklin E som inkluderer enzymaktivitet, enzymnivåer, enzymtilstand (for eksempel fosforylert eller ikke) og mRNA-nivåer til de tidligere nevnte proteinene. Tumorer med oppregulering av syklin E eller tap av p21 eller p27, kan være spesielt sensitive overfor CDK-inhibitorer. Tumorer kan foretrukket screenes for oppregulering av syklin E eller tap av p21 eller p27 før behandling. Således kan pasienten underkastes en diagnostisk test for å detektere en markør karakteristisk for oppregulering av syklin E eller tap av p21 eller p27.
De diagnostiske testene blir typisk utført på en biologisk prøve valgt fra tumorbiopsi-prøver, blodprøver (isolert og anriket av shed-tumorceller), avføringsbiopsier, sputum, kromosomanalyse, pleural fluid, peritoneal fluid eller urin.
Det har blitt funnet fra Rajagopalan et al. (Nature. 4 mars 2004; 428(6978): 77-81) at det var mutasjoner til stede i CDC4 (også kjent som Fbw7 eller Archipelago) ved human kolorektal kreft og endometrial kreft (Spruck et al, Cancer Res. 15. august 2002; 62(16): 4535-9). Identifisering av individer som bærer en mutasjon i CDC4, kan bety at pasienten vil være særlig egnet for behandling med en CDK-inhibitor. Tumorer kan foretrukket bli screenet for tilstedeværelsen av en CDC4-variant før behandling. Screeningsprosessen vil typisk involvere direkte sekvensering, oligonukleotid-mikrooppstillingsanalyse eller et mutant, spesifikt antistoff.
Fremgangsmåter for å identifisere og analysere mutasjoner og oppregulering av proteiner er godt kjente for fagmannen. Screeningsmetoder kan inkludere, men er ikke begrenset til, standardmetoder slik som reverstranskriptase-polymerasekjedereaksjon (RT-PCR) eller in-situ-hybridisering.
Ved screening med RT-PCR blir nivået av mRNA i tumoren bestemt ved å danne en cDNA-kopi av mRNA, fulgt av amplifisering av cDNA med PCR Fremgangsmåter for PCR-amplifikasjon, valg av primere og tilstander for amplifisering er kjente for fagmannen. Nukleinsyremanipuleringer og PCR utføres ved standard metoder, som for eksempel beskrevet i Ausubel, F.M. et al., red. "Current Protocols in Molecular Biology", 2004, John Wiley & Sons Inc. eller Innis, M.A. et-al, red. PCR-protokoller: "a guide to methods and applications", 1990, Academic Press, San Diego. Reaksjoner og manipulasjoner som involverer nukleinsyreteknikker, er også beskrevet i Sambrook et al., 2001, 3. utgave, "Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press". Alternativt kan et kommersielt tilgjengelig kitt for RT-PCR (for eksempel Roche Molecular Biochemicals) anvendes eller metodologi fremsatt i US-patentene 4 666 828, 4 683 202, 4 801 531, 5 192 659, 5 272 057, 5 882 864 og 6 218 529 og innbefattet heri med referanse.
Et eksempel på en in-situ-hybridiseringsteknikk for å bestemme mRNA-ekspresjon, vil være fluorescens-in-situ-hybridisering (FISH) (se Angerer, 1987 Meth. Enzymol., 152: 649).
Generelt innbefatter in situ-hybridisering følgende hovedtrinn: (1) fiksering av vevet som skal analyseres; (2) prehybridiseringsbehandling av prøven for å øke mottakelighet til målnukleinsyren og redusere ikke-spesifikk binding; (3) hybridisering av blandingen av nukleinsyrer til nukleinsyren i den biologiske strukturen eller vevet; (4) post-hybridiseringsvaskinger for å fjerne nukleinsyrefragmenter ikke bundet i hybridiseringen og (5) deteksjon av de hybridiserte nukleinsyrefragmentene. Probene anvendt i slike anvendelser er typisk merket, for eksempel med radioisotoper eller fluorescensreportere. Foretrukne prober er tilstrekkelig lange, for eksempel fra ca. 50, 100 eller 200 nukleotider til ca. 1 000 eller flere nukleotider for å muliggjøre spesifikk hybridisering med målnukleinsyren(e) under stringente betingelser. Standard metoder for utføring av FISH er beskrevet i Ausubel, F.M. et al., red. "Current Protocols in Molecular Biology", 2004, John Wiley & Sons Inc og " Fluorescence In Situ Hybridization: Technical Overview" av John M. S. Bartlett i "Molecular Diagnosis of Cancer, Methods and Protocols", 2. utgave; ISBN: 1-59259-760-2; mars 2004, s. 077-088; Serie: "Methods in Molecular Medicine".
Alternativt kan proteinproduktene uttrykt fra mRNA-er bestemmes ved immunohistokjemi av tumorprøver, fastfase-immunoundersøkelse med mikrotiterplater, Western blotting, 2-dimensjonal SDS-polyakrylamidgelelektroforese, ELISA, strømningscytometri og andre metoder kjente for deteksjon av spesifikke proteiner. Deteksjonsmetoder vil inkludere anvendelsen av setespesifikke antistoffer. Fagmannen vil kjenne til alle slike godt kjente teknikker for deteksjon av oppregulering av syklin E eller tap av p21 eller p27 eller deteksjon av CDC4-varianter som kan være anvendelige i foreliggende tilfelle.
Derfor kan alle disse teknikkene også anvendes for å identifisere tumorer særlig egnet for behandling med forbindelsene ifølge oppfinnelsen.
Tumorer med mutanter i CDC4 eller oppregulering, særlig overekspresjon, av syklin E eller tap av p21 eller p27, kan være særlig sensitive overfor CDK-inhibitorer. Tumorer kan foretrukket screenes for oppregulering, særlig overekspresjon, av syklin E (Harwell RM, Mull BB, Porter DC, Keyomarsi K.; J Biol Chem. 26 mars 2004; 279(13): 12695-705) eller tap av p21 eller p27 eller for CDC4-varianter før behandling (Rajagopalan H, Jallepalli PV, Rago C, Velculescu VE, Kinzler KW, Vogelstein B, Lengauer C; Nature. 4. mars 2004; 428(6978): 77-81).
Pasienter med mantelcellelymfom (MCL) kan velges for behandling med en forbindelse ifølge oppfinnelsen ved anvendelse av diagnostiske tester angitt heri. MCL er en bestemt klinikopatologisk bestanddel ved ikke-Hodgkins lymfom, kjennetegnet ved proliferasjon av små til middels størrelses lymfocytter med koekspresjon av CD5 og CD20, et aggressivt og ikke helbredbart klinisk forløp og hyppig t(l I;14)(ql3;q32) translokasjon. Overekspresjon av syklin Dl mRNA, funnet i mantel cellelymfom (MCL), er en kritisk diagnostisk markør. Yatabe et al (Blood. 1. april 2000; 95(7): 2253-61) foreslår at syklin Dl-positivitet bør inkluderes som ett av standardkriteriene for MCL og at innovative behandlinger for denne ikke-helbredbare sykdommen bør utforskes på basis av dette nye kriteriet. Jones et al. (J Mol Diagn. mai 2004; 6(2): 84-9) utviklet en samtids, kvantitativ, reverstranskripsjons-PCR-undersøkelse for syklin-Dl-(CCNDl)-ekspresjon for å hjelpe til med diagnose av mantelcellelymfom (MCL). Howe et al. (Clin Chem. jan 2004; 50(1): 80-7) anvendte samtidskvantitativ RT-PCR for å evaluere syklin Dl-mRNA-ekspresjon og fant at kvantitativ RT-PCR for syklin Dl-mRNA normalisert til CD 19 mRNA kan anvendes ved diagnose av MCL i blod, bein-marg og vev. Alternativt kan pasienter med brystkreft velges for behandling med en CDK-inhibitor ved anvendelse av diagnostiske tester angitt ovenfor. Tumorceller overuttrykker ofte syklin E og det har blitt vist at syklin E er overuttrykt ved brystkreft (Harwell et al., Cancer Res, 2000, 60, 481-489). Derfor kan brystkreft særlig behandles med en CDK-inhibitor slik det er tilveiebrakt heri.
I en ytterligere aspekt tilveiebringer oppfinnelsen anvendelse av syreaddisjonssaltet av 4-(2,6- diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid som et antifungalt middel.
Syreaddisj onssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid kan anvendes innen dyremedisin (for eksempel ved behandling av pattedyr, slik som mennesker) eller ved behandling av planter (for eksempel innen jordbruk eller hagebruk) eller som generelle antifungale midler, for eksempel som konserveringsmidler og desinfiserende midler.
I én utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklor-benzoylamino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid for anvendelse ved profylakse eller behandling av en fungal infeksjon hos et pattedyr, slik som et menneske.
Også tilveiebrakt er anvendelsen av syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid for fremstilling av et medikament for anvendelse ved profylakse eller behandling av en fungal infeksjon hos et pattedyr slik som et menneske.
For eksempel kan syreaddisjonssaltene ifølge oppfinnelsen administreres til humane pasienter som lider av eller har risiko for infeksjon av topiske, fungale infeksjoner forårsaket blant andre organismer av arter av Candida, Trichophyton, Mikrosporum eller Epidermophyton eller ved mukosale infeksjoner forårsaket av Candida albicans (for eksempel trøske og vaginal candidiasis). Syreaddisjonssaltene ifølge oppfinnelsen kan også administreres for behandling eller profylakse av systemiske, fungale infeksjoner forårsaket for eksempel av Candida albicans, Cryptococcus neoformans, Aspergillus flavus, Aspergillus fumigatus, Coccidiodies, Paracoccidioides, Histoplasma eller Blastomyces.
I et annet aspekt tilveiebringer oppfinnelsen en antifungal sammensetning for jordbruk (som inkludere hagebruk) som innbefatter syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklor-benzoylamino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, sammen med et jordbruksmessig akseptabelt fortynningsmiddel eller bærer.
Oppfinnelsen tilveiebringer videre syreaddisjonssaltet for anvendelse i en fremgangsmåte for behandling av et dyr (som inkluderer et pattedyr slik som et menneske), plante eller frø som har en fungal infeksjon, som innbefatter behandling av nevnte dyr, plante eller frø eller stedet for nevnte plante eller frø, med en effektiv mengde av nevnte syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l H-pyrazol-3 - karboksylsyre-piperidin-4-ylamid.
Oppfinnelsen tilveiebringer også syreaddisjonssaltet for anvendelse i en fremgangsmåte for behandling av en fungal infeksjon i en plante eller frø som innbefatter behandling av planten eller frøet med en antifungal effektiv mengde av en fungicidal sammensetning som inneholder syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l H-pyrazol-3 - karboksylsyre-piperidin-4-ylamid.
Differensielle screeningsundersøkelser kan anvendes for å bestemme spesifisiteten til syreaddisjonssaltene ifølge oppfinnelsen for ikke-humane CDK-enzymer. Salter som virker spesifikt på CDK-enzymene til eukaryote patogener, kan anvendes som antifungale eller anti-parasittiske midler. Inhibitorer av Candida CDK-kinase, CKSI, kan anvendes ved behandling av candidiasis. Antifungale midler kan anvendes mot infeksjoner av typen definert ovenfor eller opportunistiske infeksjoner som ofte opptrer hos svekkede eller immunoundertrykte pasienter slik som pasienter med leukemier og lymfomer, mennesker som har mottatt immunoundertrykkende behandling og pasienter med forhåndsdisponerende tilstander slik som diabetes mellitus eller AIDS, så vel som for ikke-immunoundertrykte pasienter.
Undersøkelser beskrevet i litteraturen kan anvendes for å screene for egnethet når det gjelder inhibering av minst én fungus implisert i mykose, slik som candidiasis, aspergillosis, mucormycosis, blastomycosis, geotrichosis, cryptococcosis, chromoblastomycosis, coccidiodomycosis, conidiosporosis, histoplasmosis, maduromycosis, rhinosporidosis, nocardiosis, para-actinomycosis, penicilliosis, monoliasis eller sporotrichosis. De differensielle screeningsundersøkelsene kan anvendes for å identifisere antifungal aktivitet som kan ha terapeutisk verdi ved behandling av aspergillosis ved å gjøre anvendelse av CDK-genene klonet fra gjær, slik som Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Aspergillus nidulans eller Aspergillus terreus eller hvor den mykotiske infeksjonen er mukon-nykosis, kan CDK-undersøkelsen være avledet fra gjær slik som Rhizopus arrhizus, Rhizopus oryzae, Absidia corymbifera, Absidia ramosa eller Mucorpusillus. Kilder for andre CDK-enzymer inkluderer det patogene Pneumocystis carinii.
Som eksempel kan in v/Yrø-evaluering av den antifungale aktiviteten til syreaddisjonssaltene ifølge oppfinnelsen utføres ved å bestemme minimum inhiberingskonsentrasjon (M.I.C.) som er konsentrasjonen av testforbindelser, i et passende medium, hvorved vekst av den bestemte mikroorganismen ikke opptrer. I praksis blir en serie agarplater som hver har testforbindelsen inkorporert ved en bestemt konsentrasjon, inokulert med en standard kultur av for eksempel Candida albicans og hver plate blir deretter inkubert i en passende periode ved 37 °C. Platene blir deretter undersøkt for tilstedeværelse eller fravær av vekst av fungus og passende M.I.C.-verdi blir notert. Alternativt kan en turbiditetsundersøkelse i flytende kulturer utføres og en protokoll som angir et eksempel på denne undersøkelsen, kan finnes i eksemplene nedenfor.
In v/vo-evalueringen av syreaddisjonssaltene kan utføres ved en serie doseringsnivåer av intraperitoneal eller intravenøs injeksjon eller ved oral administrasjon, til mus som har blitt inokulert med en fungus, for eksempel en stamme av Candida albicans eller Aspergillus flavus. Aktiviteten til saltene kan bestemmes ved å overvåke veksten av den fungale infeksjonen i grupper av behandlede og ikke-behandlede mus (ved histologi eller ved å ta tilbake fungi fra infeksjonen). Aktiviteten kan måles som dosenivå hvorved forbindelsen gir 50 % beskyttelse overfor letal effekt av infeksjonen (PD50).
For human, antifungal anvendelse kan syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoyl-amino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid administreres alene eller blandet med en farmasøytisk bærer valgt i henhold til tiltenkt administrasjonsrute og standard farmasøytisk praksis. Således kan for eksempel saltet administreres oralt, parenteralt, intravenøst, intramuskulært eller subkutant ved hjelp av formuleringene beskrevet ovenfor under omtalen av farmasøytiske formuleringer.
For oral og parenteral administrasjon til menneskepasienter kan det daglige doserings-nivået av saltet være fra 0,01 til 10 mg/kg (i oppdelte doser), avhengig blant annet av potensialet til saltene når de administreres enten ved oral eller parenteral rute. Tabletter eller kapsler av saltene kan for eksempel inneholde fra 5 mg til 0,5 g aktiv forbindelse for administrasjon alene eller to eller flere samtidig hvis hensiktsmessig. Legen vil i et hvilket som helst tilfelle kunne bestemme den aktuelle dosen (effektiv mengde) som vil være mest egnet for en individuell pasient og den vil variere med alder, vekt og respons til den bestemte pasienten.
Alternativt kan saltene administreres i form av en stikkpille eller pessar eller de kan påføres topisk i form av en lotion, løsning, krem, salve eller støvpulver. For eksempel kan de inkorporeres i en krem som består av en vandig emulsjon av polyetylenglykoler eller flytende parafin; eller de kan inkorporeres, ved en konsentrasjon på mellom 1 og 10 % i en salve som består av en hvit voks eller hvit, myk parafinbase sammen med slike stabilisatorer og konserveringsmidler som kan være påkrevd.
I tillegg til de terapeutiske anvendelsene beskrevet ovenfor kan de antifungale midlene utviklet med slike differensielle screeningsundersøkelser, for eksempel anvendes som konserveringsmidler i mat, mattilskudd for å fremme vektøkning hos buskap eller i desinfiserende formuleringer for behandling av ikke-levende materialer, for eksempel for dekontaminering av sykehusutstyr og rom. På tilsvarende måte vil side ved side-sammenligning av inhibering av en pattedyr-CDK og en insekts-CDK, slik som Drosophilia CDK5-genet (Hellmich et al. (1994) FEBS Lett 356:317-21), muliggjøre seleksjon blant forbindelser heri av inhibitorer som diskriminerer mellom human/ pattedyr og insektsenzymer. Følgelig angår foreliggende oppfinnelse uttrykkelig anvendelse og formulering av salter ifølge oppfinnelsen i insekticider, slik som for eksempel håndtering av insekter som bananflue.
I en ytterligere annen utførelsesform kan visse av subjektsaltene velges på basis av inhiberingsspesifisitet for plante-CDK-er relativt til pattedyrenzymet. For eksempel kan et plante-CDK anvendes i en differensiell screening med ett eller flere humane enzymer for å velge de forbindelsene med størst selektivitet for inhibering av planteenzymet. Således angår foreliggende oppfinnelse spesifikke formuleringer av subjektsaltene for jordbruksanvendelser, slik som i form av et løvfjerningsmiddel eller lignende.
For jordbruks- og hagebruksformål kan saltene ifølge oppfinnelsen anvendes i form av en sammensetning formulert hensiktsmessig for den bestemte anvendelsen og tiltenkte
formål. Således kan saltene påføres i form av støvepulveret eller granuler, sådressinger, vandige løsninger, dispersjoner eller emulsjoner, dippløsninger, sprayer, aerosoler eller røyk. Sammensetninger kan også leveres i form av dispergerbare pulvere, granuler eller korn eller konsentrater for fortynning før anvendelse. Slike sammensetninger kan inneholde slike vanlige bærere, fortynningsmidler eller adjuvanser som er kjente og akseptable innen jordbruk og hagebruk og de kan fremstilles i henhold til vanlige fremgangsmåter. Sammensetningene kan også inkorporere andre aktive ingredienser for eksempel forbindelser som har herbicidal eller insekticidal aktivitet eller et ytterligere fungicid. Saltene og sammensetningene kan påføres på et antall måter, for eksempel kan de påføres direkte til plantebladene, stammene, grenene, frøene eller røttene eller til jorden eller annet vekstmedium og de kan anvendes ikke bare for å bekjempe sykdom, men også profylaktisk for å beskytte plantene eller frøene fra angrep. Som eksempel kan sammensetningene inneholde fra 0,01 til 1 vekt% av den aktive ingrediensen. For feltanvendelse kan vanlige påføringsmengder av aktiv ingrediens være fra 50 til 5 000 g/hektar.
Oppfinnelsen omfatter også anvendelse av syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoyl-amino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid for å kontrollere tre-nedbrytende fungi og for å behandle jord hvor planter dyrkes, maisåkre for små planter eller vann for perfusjon. Også tiltenkt ved oppfinnelsen er anvendelsen av et syreaddisj onssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid for å beskytte lagret korn og andre ikke-plantesteder fra fungale angrep. Figur 1 er en angivelse av den tredimensjonale strukturen av 4-(2,6-diklorbenzoyl-amino)- lif-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid-metansulfonat som bestemmes med en enkel krystallrøntgendiffraksjonsstudie. Figur 2 er en grafisk representasjon av strukturen generert ved en røntgendiffraksjons-studie av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)- lif-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid-metansulfonat. Figur 3 er et røntgenpulverdiffraktorgram av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid-metansulfonsyresalt. Figur 4 er en røntgenpulverdiffraktorgram av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid-eddiksyresalt. Figur 5 er et DSC-scan av acetatsaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid.
EKSEMPLER
Foreliggende oppfinnelse vil nå bli illustrert, men ikke begrenset, med referanse til de spesifikke utførelsesformene beskrevet i følgende eksempler.
Eksempel 1
Syntese av metansulfonsyresalt et av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid og krystaller derav
Metansulfonsyresaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid kan fremstilles ved synteseruten vist i skjemaet nedenfor. Trinn 1: Fremstilling av 4-nitro-l/7-pyrazol-3-karboksylsyre-metylester
Et 20 1 reaksjonskar utstyrt med et digitalt termometer og rører ble tilsatt 4-nitro-lif-pyrazol-3-karboksylsyre (1,117 kg, 7,11 mol, 1 vekt) og metanol (8,950 1, 8 vol). Reaksjonsblandingen ble rørt under nitrogen, avkjølt til 0 til 5 °C, tionylklorid (0,581 1, 8,0 mol, 0,52 vol) ble tilsatt i løpet av 180 min og den resulterende blandingen ble varmet opp og rørt ved 18 til 22 °C over natten, hvoretter ^-NMR-analyse (d6-DMSO) indikerte fullstendig reaksjon. Reaksjonsblandingen ble konsentrert under redusert trykk ved 40 til 45 °C, og residuet behandlet med toluen og rekonsentrert (3 x 2,250 1, 3 x 2 volum) under redusert trykk ved 40 til 45 °C som ga 4-nitro-l//-pyrazol-3-karboksyl - syre-metylester som et off-white faststoff (1,210 kg, 99,5 %).
Trinn 2: Fremstilling av 4-amino-l/7-pyrazol-3-karboksylsyre-metylester
Et 20 1 reaksjonskar utstyrt med et digitalt termometer og rører ble tilsatt palladium på karbon (10 % våt fase, 0,170 kg, 0,14 vekt) under nitrogen. I et separat kar ble en slurry av 4-nitro-lif-pyrazol-3-karboksylsyre-metylester (1,210 kg, 7,07 mol, 1 vekt) i etanol (12,10 1, 10 vol) ble varmet opp til 30 til 35 °C for å bevirke oppløsning og løsningen tilsatt til katalysatoren under nitrogen. Etterfølgende en nitrogen-hydrogen-overstrømningssekvens ble en hydrogenatmosfære introdusert og reaksjonsblandingen holdt ved 28 til 30 °C til fullstendig reaksjon (5 til 10 timer) ble notert med tø-NMR-analyse (ds-DMSO). Etterfølgende en overstrømningssyklus ble reaksjonsblandingen filtrert under nitrogen og væsken konsentrert under redusert trykk som ga 4-amino-lif-pyrazol-3-karboksylsyre-metylester (0,987 kg, 98,9 %).
Trinn 3: Fremstilling av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l.ff-pyrazol-3-karboksylsyre-metylester
En løsning av 4-amino-lif-pyrazol-3-karboksylsyre-metylester (0,634 kg, 4,49 mol,
1 vekt) i 1,4-dioksan (8,90 1, 9 vol) under nitrogen ble behandlet med trietylamin (0,761 1, 5,46 mol, 1,2 vol), fulgt av 2,6-diklorbenzoylklorid (0,710 1, 4,96 mol, 0,72 vol) slik at den indre temperaturen ble holdt i området 20 til 25 °C. Rest 2,6-diklorbenzoylklorid ble vasket i en linjerensing av 1,4-dioksan (0,990 1, 1 vol) og reaksjonsblandingen ble rørt ved 18 til 25 °C til fullstendig reaksjon (16 timer) ved TLC-analyse (eluentetylacetatheptan 3:1; Rf amin 0,25, Rf produkt 0,65). Reaksjonsblandingen ble filtrert, filterkaken vasket med 1,4-dioksan (2 x 0,990 1, 2 x 1 vol) og de kombinerte filtratene (rød) tatt med til trinn 4 uten ytterligere isolering. Trinn 4: Fremstilling av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l/7-pyrazol-3- karboksylsyre
Til en løsning av natriumhydroksid (0,484 kg, 12,1 mol) i vann (6,05 1) ble det tilsatt en løsning av trinn 3-esteren i én porsjon: (1,099 kg, 3,50 mol i 6,00 1). Reaksjons blandingen ble rørt til fullstendig reaksjon ved 20 til 25 °C som ble bestemt ved TLC-analyse (eluentetylacetatheptan 3:1; Rfester0,65, Rftnnn4 grunnlinje). Reaksjonsblandingen ble konsentrert under redusert trykk ved 45 til 50 °C, det oljeaktige residuet fortynnet med vann (9,90 1) og surgjort til pH 1 med konsentrert saltsyre slik at temperaturen ble holdt under 30 °C. Det resulterende presipitatet ble samlet opp ved filtrering, vasket med vann (5,00 1), trykt tørt på filteret og deretter vasket med heptan (5,00 1). Filterkaken ble tilsatt til en 20 1 rotasjonsfordampningskoble og tørket fullstendig azeotropisk med toluen (2 x 4,50 1) som ga 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lif-pyrazol-3-karboksylsyre som et gult faststoff (1,044 kg, ca. 99,5 %).
Trinn 5: Fremstilling av 4-{[4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lZT-pyrazol-3-karbonyl]amino}piperidin-l-karboksylsyre-etrt-butylester
Trinn 4 produkt (1,0 vekt) og toluen (10,0 vol) ble tilsatt til en slipkolbe med passende størrelse utstyrt med en mekanisk rører, dryppetrakt og termometer. Innholdsstoffene ble rørt under nitrogen ved 16 til 25 °C og tionylklorid (0,3 volum) ble tilsatt sakte. Innholdsstoffene ble deretter varmet opp til 80 til 100 °C og rørt ved denne temperaturen til reaksjonen ble ansett fullstendig med<*>H NMR. Videre kan toluen (opp til 10 volum) tilsettes på dette trinnet hvis ikke innholdet blir for tykt til å bli rørt. Eter fullstendig reaksjon blir blandingen avkjølt til mellom 40 og 50 °C og deretter konsentrert under vakuum ved 45 til 50 °C til tørrhet. Residuet blir deretter azeotørket med toluen (3 x 2,0 volum).
Det isolerte faststoffet ble overført til en kolbe av passende størrelse og tetrahydrofuran (5,0 volum) tilsettes. Innholdsstoffene røres under nitrogen ved 16 til 25 °C og trietylamin (0,512 volum) tilsettes. Til en separat kolbe tilsettes 4-aminopiperidin-l-k& rboksylsyre- tert- butylester (0,704 vekt) og tetrahydrofuran (5,0 volum). Innholdet røres til fullstendig oppløsning oppnås og løsningen blir deretter tilsatt til reaksjons-kolben, ved en temperatur på mellom 16 og 30 °C. Reaksjonsblandingen blir deretter varmet opp til mellom 45 og 50 °C og innholdet rørt til reaksjonen anses fullstendig med<*>H NMR. Innholdet blir deretter avkjølt til mellom 16 og 25 °C og vann (5,0 volum) tilsettes. Blandede heptaner (0,5 volum) tilsettes og innholdet røres i opp til 10 min og sjiktene separeres. Vannfasen blir deretter ekstrahert med tetrahydrofuran: blandede heptaner [(9:1), 3 x 5,0 vol]. De organiske fasene kombineres, vaskes med vann (2,5 volum) og konsentreres deretter under vakuum ved 40 til 45 °C. Residuet blir azeotropisk behandlet med toluen (3 x 5,0 volum) og konsentrert til tørrhet som gir urent trinn 5-produkt.
Faststoffet blir deretter overført til en kolbe av passende størrelse, metanol:toluen [(2,5:97,5), 5,0 vol] tilsettes og slurryen røres under nitrogen i 3 til 18 timer. Innholdet filtreres, filterkaken vaskes med toluen (2 x 0,7 volum) og faststoffet blir deretter tørket under vakuum ved 40 til 50 °C som gir 4-{[4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lif-pyrazol-3-karbonyl]amino}piperidin-l-karboksylsyre-et7?-butylester som et off-white faststoff.
To batcher av trinn 4-produkt (0,831 kg per batch) behandles på denne måten for å gi totalt 2,366 kg (88,6 % utbytte) av 4-{[4-(2,6-diklorbeiizoylamino)-lif-pyrazol-3-karbonyl]amino} piperidin-1 -karboksylsyre-tert-buty lester.
Trinn 6: Fremstilling av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lZT-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid-metansulfonat
Trinn 5-produkt (1,0 vekt) og 1,4-dioksan (30,0 volum) tilsettes til en slipkolbe av egnet størrelse utstyrt med en mekanisk rører, dryppetrakt og termometer. Innholdet røres under nitrogen og varmes opp til mellom 80 og 90 °C. Metansulfonsyre (0,54 volum) tilsettes i løpet av 30 til 60 min og innholdet blir deretter varmet opp til 95 til 105 °C og røres ved denne temperaturen til reaksjonen anses fullstendig med<J>H NMR. Etter fullstendig reaksjon blir innholdet avkjølt til mellom 20 og 30 °C og det resulterende presipitatet samlet opp ved filtrering. Filterkaken vaskes med 2-propanol (2 x 2,0 volum) og klemmes tørr på filteret i 3 til 24 timer for å gi uren 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lif-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid-metansulfonat som et frittflytende off-white faststoff (80,0 til 120,0 % vekt/vekt, ukorrigert for urenheter eller oppløst materiale).
Flere batcher av trinn 5-produkt ble behandlet på denne måten og detaljene når det gjelder mengder utgangsmateriale og produkt for hver batch er fremsatt i tabell 1 nedenfor.
Trinn 6a: Rekrystallisasjon av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-li/-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamidmetansulfonat
Produktet i trinn 6 ble rekrystallisert for å forsikre om at eventuelle restmengder av Boc-beskyttet produkt i trinn 5 ikke var større enn 0,25 %. Fire batcher av trinn 6-produkt ble rekrystallisert ved anvendelse av følgende protokoll.
Urent trinn 6 produkt og 2-propanol (10,0 volum) ble tilsatt til en kolbe av passende størrelse utstyrt med en mekanisk rører, dryppetrakt og termometer. Innholdet ble rørt under nitrogen og varmet opp til mellom 75 og 85 °C. Vann (opp til 2,5 volum) ble deretter tilsatt til innholdsstoffene til en klar løsning ble oppnådd. Innholdet ble deretter avkjølt til mellom 40 og 60 °C og konsentrert under vakuum ved 40 til 50 °C til reaksjonsvolumet var redusert med ca. 50 %. 2-propanol (3,0 volum) ble tilsatt til kolben og innholdsstoffene ble konsentrert ved 40 til 50 °C til ca. 3,0 volum løsemiddel var fjernet. Denne prosessen ble gjentatt to ganger ytterligere med 2-propanol (2 x 3,0 volum) og vanninnholdet ble sjekket. Den resulterende slurryen ble deretter avkjølt til mellom 0 og 5 °C og blandingen rørt ved denne temperaturen i 1 til 2 timer. Innholdet ble filtrert, filterkaken vasket med 2-propanol (2x1,0 volum) og deretter presset tørr på filteret i opp til 24 timer. Faststoffet ble overført til tørkefat og tørket under vakuum ved 45 til 50 °C til konstant vekt som ga 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lif- pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamidmetansulfonat som et off-white faststoff (60,0 til 100,0 % vekt/vekt).
Rekrystallisasjonsutbytter for de fire batchene varierte fra mellom 85,6 % og 90,4 % og renhetene til det rekrystalliserte produktet varierte fra 99,29 % til 99,39 %. En andre rekrystallisering økte renheten ytterligere.
4-(2,6-diklorbenzoylamino)-li/-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid-metansulfonatet fremstilt ved denne ruten, hadde et smeltepunkt (med DSC) på
379,8 °C.
Infrarødspekteret til metansulfonatsaltet (KBr-skivemetode) inkluderte karakteristiske topper ved 3233, 3002, 2829, 1679, 1632, 1560, 1430, 1198, 1037, 909 og 784 cm"<1>.
Uten ønske om å være bundet til noen bestemt teori antas det at de infrarøde toppene kan tildeles strukturkomponenter til saltet som følger:
Fjerning av rest-Boc-beskyttet produkt i trinn 5
I noen tilfeller når metansulfonatsaltet ble løst i acetatbuffer, ble et fint presipitat som besto av restmengder av Boc-beskyttet fri base, observert. Flere teknikker kan anvendes for å fjerne eller hindre dannelse av presipitatet, slik det er fremsatt nedenfor.
(a) Filtrering
En blanding av metansulfonatsaltet i 200 mM acetatbuffer ble tatt fra en medisinflaske over i en 20 ml éngangssprøyte ved anvendelse av en steril nål og et klinisk kvalitet 0,2 jim filter (en Sartorius Minisart steril éngangsfilter enhet) og deretter festet på sprøyten. Stemplet til sprøyten ble sakte trukket ut og filtartet samlet oppi en ren, klar glassmedisinflaske. Innholdsstoffet i medisinflasken var en klar, fargeløs løsning av metansulfonatsaltet uten partikulært materiale.
(b) Oppvarming i vandig syre
En blanding av metansulfonatsaltet og metansulfonsyre (0,4 eq) i vann (10 volum) ble
varmet opp til 100 °C i 4 timer og deretter avkjølt til 60 °C. Analyse med TLC indikerte at metansulfonatsaltet var til stede som en enkelt komponent. 2-propanol (10 volum) ble tilsatt og blandingen avkjølt til 40 °C. Blandingen ble redusert i vakuum til ca. 10 volum og deretter ble en ytterligere porsjon 2-propanol tilsatt (10 volum) og blandingen ble igjen redusert til 10 volum. Denne syklusen ble gjentatt ytterligere tre ganger. Blandingen ble avkjølt på et isbad og faststoffet som ble dannet, ble samlet opp ved filtrering, vasket med 2-propanol (5 volum) og tørket i vakuum som ga metansulfonatsaltet som et hvitt til off-white faststoff.
(c) Organisk-vandige ekstraksjoner
En blanding av metansulfonatsaltet og metansulfonsyre (0,4 eq.) i vann (10 volum) ble varmet opp til 100 °C i 3 timer og deretter avkjølt til omgivelsestemperatur. Til denne blandingen ble det tilsatt THF-heptan (9:1, 10 volum) og den resulterende blandingen ble rørt kraftig for å gi en løsning. Sjiktene ble separert og vannfasen vasket med THF-heptan (9:1, 2 x 10 volum) og deretter etylacetat (2x10 volum). Til vannfasen ble det tilsatt 2-propanol (10 volum) og løsningen ble redusert i vakuum til ca. 5 volum og deretter ble en ytterligere porsjon 2-propanol tilsatt (10 volum) og blandingen ble igjen redusert til 5 volum. Denne syklusen ble gjentatt ytterligere tre ganger. Faststoffet som ble dannet, ble samlet opp ved filtrering, vasket med 2-propanol (5 volum) og tørket i vakuum som ga metansulfonatsaltet som et hvitt til off-white faststoff.
(d) Kromatografi
Anvendelse av kromatografiske teknikker kan gi en måte å fjerne ikke-polare urenheter fra metansulfonatsaltet. Det er å forstå at anvendelse av omvendtfasemetoder vil være særlig egnet.
Eksempel 2
Bestemmelse av krystallstrukturen til 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-li/-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid-metansulfonat med røntgendiffraksjon
Forbindelsen 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lif-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamidmetansulfonat ble fremstilt som beskrevet i eksempel 1. Krystallen anvendt for diffraksjonseksperimentet var en fargeløs plate med dimensjoner 0,05 x 0,08 x 0,14 mm3 oppnådd ved presipitasjon fra en vannløsning av 2-propanol. Krystallografiske data ble samlet opp ved 93 K ved anvendelse av CuKa-stråling ( k - 1,5418 Å) fra en Rigaku-roterende anode RU3HR, osmisk, blå, konfokal optikk og en Rigaku Jupiter CCD-detektor. Avbildninger ble samlet opp i to co scan ved 20 = 15 og 90° med en detektor til krystalldistanse på 67 mm. Dataoppsamling ble kontrollert med CrystalClear software og avbildninger ble prosessert og skalert med Dtrek. På grunn av høy absorpsjonskoeffisient (u = 4,01 mm"<1>) må data korrigeres ved anvendelse av 4. ordens Fourier-absorpsjonskorreksjon. Det ble funnet at krystallene tilhører en ortorombisk mellomromsgruppe Fbca (#61) med krystallgitterparametere ved 93 K a=8,90(10), 6=12,44(10), c=38,49(4) Å, a = P = y = 90°. Tallet i parentes representerer avviket (s.u. standard usikkerhet).
Krystallene beskrevet ovenfor og krystallstrukturen gir et ytterligere aspekt ved oppfinnelsen.
Krystallstrukturen ble løst opp ved anvendelse av direkte metoder implementert i SHELXS-97. Intensitetsdata for totalt 2710 unike refleksjoner i et oppløsningsområde fra 20-0,9 Å (2,3<0<58,87) ble anvendt ved raffinering av 271 krystallografiske parametere med SHELXL-97. Endelige statistiske parametere var: wR2=0,2115 (alle data), RI =0,0869 (data med I>2o(I)) og tilpasning S=l,264.
Ett molekyl av protonert fri base og ett mesylat-anion ble funnet i den asymmetriske enheten. Elementsammensetningen til den asymmetriske enheten var C17H21CI2N5O5S og beregnet tetthet til krystallene er 1,49 Mg/m . Hydrogenatomer ble generert av geometriske grunner, mens lokalisering av heteroatombundne hydrogenatomer ble bekreftet ved inspeksjon av Fo-Fc-forskjellskart. Posisjonelle og termiske parametere til hydrogenatomene var begrenset til å bygge på korresponderende ikke-hydrogenatomer. Den termiske bevegelsen til ikke-hydrogenatomer ble modulert ved anisotropiske, termiske faktorer (se figur 1).
Krystallstrukturen inneholder én intramolekylær (N15H...07 2,690 Å) og fem inter-molekylære hydrogenbindinger (se pakkingsfigur figur 2). Tre av dem binder det protonerte piperidin-nitrogenet med to mesylat-anioner. Det første mesylat-anionet er bundet gjennom en enkel H-binding N12H12A...02M 2,771 Å, mens den andre er involvert i en bifurkatert H-binding med interaksjoner N12H12B...01M 2,864 Å og N12H12B...02M 3,057 Å. Det gjenværende mesylat-oksygenet 03M er involvert i en hydrogenbinding N8H8...03M 2,928 Å. Naboliggende, protonerte, frie basemolekyler er bundet sammen med en H-binding N15H15...07 2,876 Å, så vel som relativt lang kontakt N15H15...N2 3,562 Å og stabel av fenyl- og pyrazolringer. Disse interaksjonene blir propagert uendelig langs 6-aksen. Krystallpakkinger inneholder 2D-lag (i aé-planet) av mesylat-anioner som en sandwich mellom et omfattende nettverk av ladede H-atomer med to lag protonerte, frie basekationer. De kompakte 2D-sandwichlagene bindes sammen med c-aksen til stabelen av fenylringer og involverer klor...fenylinteraksjon med C12...C18 3,341 Å.
En grafisk representasjon av strukturen generert av røntgendiffraksjonsstudien er tilveiebrakt i figur 2.
Koordinatene for atomene som utgjør strukturen til 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lif-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamidmetansulfonatet, er fremsatt i tabell 2.
Eksempel 3
Bestemmelse av løselighet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lZT-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamidmetansulfonat
Løseligheten til 4-(2,6-diklorbenzoylamino)- lif-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamidmetansulfonat i eksempel 1 i vandig løsning ved pH-verdier som varierer fra 1 til 11, ble undersøkt som beskrevet nedenfor.
Løsninger ble fremstilt ved titrering av standard saltsyre med fortynnet natrium-hydroksidløsning til en ønsket pH. Løsningene som ble fremstilt hadde en pH varierende fra 1 til 11. Disse løsningene ble deretter anvendt for å bestemme løseligheten av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)- lif-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid-metansulfonat.
I hvert eksperiment ble 150 mg av metansulfonatsaltet innveid i en 5 ml klar medisinflaske og 3-4 ml av en løsning ved en gitt pH ble tilsatt. Løsningsblandingen ble deretter rørt i ca. 3 timer ved (i) omgivelsestemperatur og (ii) 4 °C. I hvert tilfelle ble løsningen deretter filtrert gjennom et 0,22 um PVDF-filter, pH til den klare løsningen som ble oppnådd, ble avlest og løsningen ble bestemt for metansulfonatsaltinnhold ved anvendelse av et UV-synlig spektrofotometer og standardløsninger av saltet.
Løselighetsdata oppnådd er vist i tabell 3 og 4. Dataene indikerer at løseligheten er pH-og temperaturavhengig. Beste løseligheter ble oppnådd mellom pH 4 og 7. Ved pH >7 og pH <3 ble presipitasjon av saltet observert etter henstand ved omgivelsestemperatur, selv om høyere løselighet ble oppnådd initialt.
JEtter 6 dager i laboratoriet ble presipitasjon observert i løsning 1. Idet den ble filtrert ble denne løsningen bestemt for mesylatsaltinnhold og pH avlest.
Eksempel 4
Bestemmelse av løseligheten til 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l.H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamidmetansulfonat i bufrede løsninger
En undersøkelse av løseligheten av mesylatsaltet i eksempel 1 i forskjellige buffer-systemer ble utført ved omgivelsestemperatur og ved 4 °C. I et første sett av eksperimenter var bufferne valgt 200 mM succinat pH 5,5, citrat pH 5,5 og tris/maleat pH 5,5, 6,5 og 7,5. Et andre sett buffere som ble anvendt, inkluderte et 200 mM acetat pH 4,6, glysin/metansulfonsyre pH 4,6 og glysin pH 5,5.
Bufferfremstillinger
Maleinsyre, tris, natriumhydroksidbufferløsning
Denne bufferen ble fremstilt ved å løse opp 23,62 g maleinsyre og 24,2 g tris(hydroksy-metyl)aminometan i 1 liter vann. Volumer (50 ml) av denne løsningen ble titrert med 0,2 M natriumhydroksidløsning til mål-pH og tilsatt vann til 200 ml. Løsninger med 0,2 M buffer på pH 5,5, 6,5 og 7,5, ble fremstilt.
Ravsyre, natriumhydroksidbufferløsning
Denne buffer ble fremstilt ved å løse opp 23,62 g ravsyre i 1 liter vann. Et volum
(50 ml) av denne løsningen ble titrert med 0,2 M natriumhydroksidløsning til mål-pH og vann ble tilsatt til 200 ml. En 0,2 M bufferløsning ved pH 5,5 ble fremstilt.
Sitronsyre, natriumcitratbufferløsning
Denne buffer ble fremstilt ved å løse opp 42,02 g sitronsyre i 1 liter vann. Et volum
(50 ml) av denne løsningen ble titrert med 0,2 M tri-natriumcitratløsning (58,82 g i 1 liter vann) til mål-pH-verdien og tilsatt vann til 200 ml. En 0,2 M bufferløsning med pH 5,5, ble fremstilt.
Natriumacetat, eddiksyrebuffer
Denne buffer ble fremstilt ved å løse opp 4,44 g natriumacetat i 200 ml vann. Et volum (50 ml) av denne løsningen ble titrert med 0,20 M eddiksyreløsning (1,3 ml i 200 ml vann) og vann ble tilsatt til 200 ml. En 0,20 M acetatbufferløsning med pH 4,6 ble fremstilt.
Glysinløsning
Denne buffer ble fremstilt ved å løse opp 3,01 g glysin i 200 ml vann. En 0,20 M glysin-løsning med pH 4,9 ble fremstilt.
Metansulfonatsaltløselighetsstudie i buffere
Med hvert pH- og buffersystem ble to eksperimenter utført, ett ved omgivelsestemperatur og ett ved 4 °C. I hvert eksperiment ble det til 4,0 ml bufferløsning tilsatt nominelt 220 mg av mesylatsaltet og løsningsblandingen ble rørt. Røringen ble stoppet etter 3 timer, løsningen filtrert gjennom et PVDF 0,22 um membranfilter, fortynnet i prøvefortynningsmiddel og undersøkt for mesylatsaltinnhold med HPLC. I løpet av eksperimentene ble mesylatinnholdet av hver prøve beregnet ved anvendelse av en enkeltpunktskalibrering hver gang.
Resultatene er vist i tabellene 5 og 6.
Fra resultatene ble det funnet at løseligheten av mesylatsaltet lå mellom 32 og 37 mg/ml i acetatbuffer. Autoklavering ved 121 °C i 15 min, fulgt av oppvarming av løsningen ytterligere ved 40 °C, 55 °C eller 75 °C i 10-12 dager, ble utført på den acetatbufrede saltløsningen. Løsnings-pH og 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lif-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamidmetansulfonat ble funnet å være stabil under disse testbetingelsene. Fryse-tine-stabilitetstester på den acetatbufrede saltløsningen resulterte ikke i presipitasjon av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lif-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid eller dets salt, og løsnings-pH og 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lif-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamidmetansulfonat ble funnet å være stabile under disse testbetingelsene.
Eksempel 5
Bestemmelse av stabiliteten til 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l/7-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamidmetansulfonat
Prøvene av metansulfonatsaltet i eksempel 1 ble lagret i forseglede poser inne i en forseglet beholder ved en temperatur på 40 °C og i en atmosfære på 75 % relativ fuktighet i en periode på seks måneder. Ved perioder på 1 måned, 3 måneder og 6 måneder ble forskjellige tester utført for å bestemme om noen forandringer når det gjelder renhet eller fysisk tilstand til saltet hadde funnet sted. Testene var som følger:
(a) Visuell undersøkelse av farge og fysisk utseende til saltet.
(b) Fourier transformasjonsinfrarød (FTIR) spektroskopi - sammenlignet med
referansestandardspektrum.
(c) Bestemmelse av smeltepunkt ved differensiell skanningskalorimetri (DSC).
(d) Bestemmelse av vanninnhold ved en kolometrisk fremgangsmåte ved
anvendelse av det kolometriske reagenset AKX.
(e) Analyse av urenheter med HPLC.
Resultatene av testene fremsatt i tabell 7. Slik det fremgår finnes fargen og utseendet av saltet igjen uforandret etter seks måneder (test a)) og infrarød spektrum (test b)) ingen forandringer i løpet av denne perioden. I test (c) var det ingen reduksjon i smeltepunktet som således indikerer at nedbryting av saltet ikke hadde funnet sted, og dette ble støttet av HPLC-analyse som vist at ingen av urenhetene til stede i prøven ved tid null hadde økt i konsentrasjon i løpet av testperioden.
Således demonstrerer stabilitetstestene at metansulfonatsaltet har god stabilitet over en forlenget tidsperiode.
Eksempel 6
Røntgenpulverdiffraksjonsstudier av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l/7-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamidmetansulfonsyresalt
Røntgenpulverdiffraksjons(XRPD)-analyse av mesylatsaltet slik det ble fremstilt i eksempel 1, ble utført på et Bruker D500 diffraktometer utstyrt med et roterende trinn og et variabelt temperaturtrinn. Bestrålingskilden var et forseglet kobberrør (Cu Ka-bestråling: 1,5406 Å) og spenning og strøm ble satt til 40 kV og 40 mA. Detektoren som ble anvendt var en scintillasjonsteller. XRPD-analysene ble utført ved anvendelse av Diffrac Plus XRD Commander software v2.3.1.
Prøver ble fremstilt ved lett pressing av en ca. 10 mg prøve av saltet inn i prøveholderen og deretter glatte ut lett for å oppnå et flat overflate.
Diffraktogrammer ble samlet opp over et område på 3<0>til 40 °, 2-t, med en trinn-størrelse på 0,001<0>og en trinntid på 1 sekund.
Et diffraktogram av mesylatsaltet er vist i figur 3.
Eksempel 7
Studier av effekt av varierende relativ fuktighet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l//-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamidmetansulfonsyresalt (i) Gravimetrisk dampsorpsjons(GVS)-studier ble utført for å undersøke oppførselen til mesylatsaltet under betingelser med varierende fuktighet. Mesylatsaltet anvendt i studiene ble fremstilt fra hydrokloridsaltet (se eksempel 11) ved følgende fremgangsmåte.
Hydrokloridsaltet ble tatt opp i MeOH og passert gjennom en Strata-NH2-kolonne, eluert med MeOH. De produktinneholdende fraksjonene ble redusert i vakuum som ga 4-(2,6- diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid fri base. Til en blanding av den frie basen i MeOH ble det tilsatt MsOH (70 % i vann) og blandingen ble rørt ved omgivelsestemperatur i 14 timer og deretter redusert i vakuum og azeotropisk behandlet med toluen (x 3). Residuet ble renset ved triturering med aceton og tørket i vakuumovn som ga mesylatsaltet.
Prøver av mesylatsaltet fremstilt ved fremgangsmåten beskrevet ovenfor, ble kjørt på et Hiden IGASorp-fuktighetssorpsjonsanalysekjørings-CFRSorp-software. Prøvestørrelsene var typisk 10 mg. Fuktighetsadsorpsjons-desorpsjonsisotermer ble utført slik det er fremsatt i følgende tabell:
En dobbel syklus ble kjørt ved anvendelse av en prøve på 12,92 mg av mesylatsaltet. Den resulterende GVS-isotermen demonstrerte at saltet tok opp ca. 4 % vekt av vann i løpet av området 0 % relativ fuktighet til 90 % relativ fuktighet. Imidlertid, forutsatt at saltet ikke ble eksponert for relative fuktigheter på mer enn 80 %, var vannopptaket mindre enn 2,6 % vekt/vekt. Viktig her er at vann som tas opp i løpet av adsorpsjons-stadiet ble tapt i løpet av desorpsjonsstadiet som indikerer at opptaket av vann er en overflateeffekt. (ii) I en separat test ble ca. 10 mg av mesylatsaltet slik det er fremstilt ovenfor, presset flatt på en glass-slide for å oppnå et høyt overflateareal og plassert i en dessikator som inneholder en mettet, vandig løsning av natriumklorid. Denne ble i sin tur plassert i en inkubator holdt ved 40 °C for å gi en atmosfære med ca. 75 % relativ fuktighet. Prøven ble fjernet etter 8 og 18 dager og XRPD-profilene til prøven ved disse tidspunktene ble sammenlignet med XRPD-profilen til saltet før utføring av testen. Ingen forandringer ble observert i XRPD-profilene. HPLC-analyse indikerte at ingen nedbryting av saltet hadde funnet sted i løpet av testen.
Tester (i) og (ii) ovenfor illustrerer at selv om mesylatsaltet tar opp noe vann når det eksponeres for betingelser med høy fuktighet, blir vannet som tas opp tapt idet den relative fuktigheten faller og det er ingen forandring i krystallstrukturen til saltet. Mesylatsaltet er derfor et stabilt vannfritt salt.
Eksempel 8
Fremstilling av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamideddiksyresalt
Til en løsning av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid-hydrokloridsalt (20,6 g, 50 mmol) i vann (500 ml) rørt ved omgivelsestemperatur, ble det tilsatt natriumbikarbonat (4,5 g, 53,5 mmol). Blandingen ble rørt i 1 time og faststoffet som ble dannet, ble samlet opp ved filtrering og tørket i vakuum azeotropisk med toluen (x 3) som ga den korresponderende frie basen av 4-(2,6-diklor-benzoy lamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid.
<*>H NMR (400 MHz, DMSO-</6) 5 10,20 (s, 1H), 8,30 (s, 1H), 8,25 (d, 1H), 7,60 - 7,50 (m, 3H), 3,70 (m, 1H), 3,00 (d, 2H), 2,50 (m, 2H), 1,70 (d, 2H), 1,50 (m, 2H).
Til en rørt suspensjon av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid (10,0 g, 26,2 mmol) i metanol (150 ml) ble det tilsatt iseddiksyre (15 ml, 262 mmol) ved omgivelsestemperatur. Etter 1 time ble en klar løsning oppnådd som ble redusert i vakuum azeotropisk med toluen (x 2). Residuet ble deretter triturert med acetonitril (2 x 100 ml) og faststoffet tørket i vakuum som ga 4-(2,6-diklorbenzoyl-amino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamideddiksyresalt (10,3 g) som et hvitt faststoff.
<*>H NMR (400 MHz, DMSO-</6) 5 10,20 (s, 1H), 8,40 (d, 1H), 8,35 (s, 1H), 7,60 - 7,50 (m, 3H), 3,85 (m, 1H), 3,00 (d, 2H), 2,60 (t, 2H), 1,85 (s, 3H), 1,70 (d, 2H), 1,55 (m, 2H).
Eksempel 9
Differensiell skanningskalorimetristudier av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l/7-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid-eddiksyresalt
Acetatsaltet av eksempel 8 ble underkastet DSC-studier ved anvendelse av et TA-instrument Q1000 utstyrt med en 50 posisjon autoprøvetaker. Indium ble anvendt som en energi og temperaturkalibreringsstandard.
Prøvene ble varmet opp ved en hastighet på 10 °C/min mellom 10 °C og 230 °C. En
nitrogenoverstrømming ved 30 ml/min ble holdt over prøven. Prøvestørrelser på mellom 1 mg og 3 mg ble anvendt og prøvene ble krympet i et hermetisk forseglet kar. Et DSC-scan av acetatsaltet er fremsatt i figur 5. DSC-spor viser en hendelse ved 231,5 °C, som tilskrives tap av eddiksyre og etterfølgende omdanning til den frie basen. Etter ytterligere oppvarming dekomponerer/smelter den faste formen ved 292,9 °C.
Eksempel 10
Røntgenpulverdiffraksjonsstudier av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l/7-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid-eddiksyresalt
Røntgenpulverdiffraksjons(XRPD)-analyse av acetatsaltet i eksempel 8 ble utført på et Bruker D500-diffraktometer i henhold til fremgangsmåten beskrevet i eksempel 6.
Et diffraktogram av acetatsaltet er vist i figur 4.
Eksempel 11 (sammenlikningseksempel)
Fremstilling av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamidhydroklorid
11A. Syntese av 4-nitro-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-metylester
Tionylklorid (2,90 ml, 39,8 mmol) ble sakte tilsatt til en blanding av 4-nitro-3-pyrazol-karboksylsyre (5,68 g, 36,2 mmol) i metanol (100 ml) ved omgivelsestemperatur og blandingen ble rørt i 48 timer. Blandingen ble redusert i vakuum og tørket gjennom azeotrop med toluen som ga 4-nitro-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-metylesteren.
11B. Syntese av 4-amino-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-metylester
En blanding av 4-nitro-l H-pyrazol-3-karboksylsyremetyl ester (34,6 mmol) og 10 % Pd/C (650 mg) i EtOH (150 ml) ble rørt under en hydrogenatmosfære i 20 timer. Blandingen ble filtrert gjennom en celittplugg, redusert i vakuum og tørket gjennom azeotrop med toluen som ga 4-amino-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-metylester.
11C. 4-(2,6-diklorbenzoylamino)- lH-pyrazol-3-karb oksylsyre 2,6-diklorbenzoylklorid (8,2 g; 39,05 mmol) ble forsiktig tilsatt til en løsning av 4-amino-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-metylester (5 g; 35,5 mmol) og trietylamin (5,95 ml; 42,6 mmol) i dioksan (50 ml) under røring ved romtemperatur i 5 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert og filtratet behandlet med metanol (50 ml) og 2M natriumhydroksidløsning (100 ml), varmet opp til 50 °C i 4 timer og deretter fordampet. 100 ml vann ble tilsatt til residuet og deretter ble blandingen surgjort med konsentrert saltsyre. Faststoffet ble samlet opp ved filtrering, vasket med vann (100 ml) og sugd tørt som ga 10,05 g av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre som et matt, fiolett faststoff.
HD. 4-{[4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karbonyl]-amino}-piperidin-1-karboksylsyre-terf-butylester
En blanding av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre (6,5 g,
21,6 mmol), 4-amino-l-BOC-piperidin (4,76 g, 23,8 mmol), EDC (5,0 g, 25,9 mmol) og HOBt (3,5 g, 25,9 mmol) i DMF (75 ml) ble rørt ved romtemperatur i 20 timer. Reaksjonsblandingen ble redusert i vakuum og residuet fordelt mellom etylacetat
(100 ml) og mettet, vandig natriumbikarbonatløsning (100 ml). Det organiske sjiktet ble vasket med saltvann, tørket (MgSC>4) og redusert i vakuum. Residuet ble tatt opp i 5 % MeOH-DCM (-30 ml). Det uløselige materialet ble samlet opp ved filtrering og vasket med DCM og tørket i vakuum som ga 4-{[4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l H-pyrazol-3-karbonyl]-amino}-piperidin-l-karboksylsyre-etrt-butylester (5,38 g) som et hvitt faststoff. Filtratet ble redusert i vakuum og residuet renset med kolonnekromatografi ved anvendelse av gradienteluering 1:2 EtOAc:heksan til EtOAc som ga ytterligere 4-{[4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karbonyl]-amino}-piperidin-l-karboksylsyre-terf-butylester (2,54 g) som et hvitt faststoff.
11E. 4-(2,6-diklorbenzoylamino)- lH-pyrazol-3-karb oksylsyre-piperidin-4-ylamid En løsning av 4-{[4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karbonyl]-amino}-piperidin-l-karboksylsyre-tert-butylester (7,9 g) i MeOH (50 ml) og EtOAc (50 ml) ble behandlet med mettet HCl-EtOAc (40 ml) og blandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Produktet krystalliserte ikke på grunn av tilstedeværelsen av metanol og derfor ble reaksjonsblandingen fordampet og residuet triturert med EtOAc. Det resulterende off-white faststoffet ble samlet opp ved filtrering, vasket med EtOAc og sugd tørt på et sinter som ga 6,3 g av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid som hydrokloridsaltet. (LC/MS: Rt 5,89, [M+H]<+>382/384).
BIOLOGISK AKTIVITET
Eksempel 12
Måling av aktivert CDK2/syklin A-kinaseinhiberingsaktivitetundersøkelse (IC50) CDK2-kinaseinhiberingsaktivitet kan bestemmes ved anvendelse av følgende protokoll.
Aktivert CDK2/ Syklin A (Brown et al., Nat. Cell Biol., 1, s. 438-443, 1999; Lowe, E.D., et al Biochemistry, 41, s. 15625-15634, 2002) fortynnes til 125 pM i 2,5 X sterk undersøkelsesbuffer (50 mM MOPS, pH 7,2, 62,5 mM Ø-glyserofosfat, 12,5 mM EDTA, 37,5 mM MgCl2, 112,5 mM ATP, 2,5 mM DTT, 2,5 mM natriumortovanadat, 0,25 mg/ml bovint serumalbumin), og 10 ul blandet med 10 ul histonsubstratblanding (60 ul bovint histon Hl (Upstate Biotechnology, 5 mg/ml), 940 ul H20, 35 uCi y<33>P-ATP) og tilsatt til 96 brønnsplater sammen med 5 ul av forskjellige fortynninger av testforbindelser i DMSO (opp til 2,5 %). Reaksjonen får forløpe i 2 til 4 timer før den stoppes med et overskudd orto-fosforsyre (5 ul ved 2 %). y 33P-ATP som er igjen ikke-inkorporert i histonet Hl, separeres fra det fosforylerte histonet Hl på en Millipore MAPH-filterplate. Brønnene til MAPH-platen fuktes med 0,5 % orto-fosforsyre og deretter blir resultatene av reaksjonen filtrert med en Millipore-vakuumfiltreringsenhet gjennom brønnene. Etterfølgende filtrering blir residuet vasket to ganger med 200 ul 0,5 % orto-fosforsyre. Etter tørking av filtrene blir 20 ul Microscint 20 scintillant tilsatt og deretter blir de telt på en Packard Topcount i 30 sekunder.
% inhibering av CDK2-aktivitet beregnes og plottes for å bestemme konsentrasjonen av testforbindelse som kreves for å inhibere 50 % av CDK2-aktiviteten (IC50).
Forbindelsen 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lif-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid har en IC50-verdi på mindre enn 0,1 uM i den ovenfor angitte CDK2-undersøkelsen.
Eksempel 13
Måling av aktivert CDKl/syklin B-kinaseinhiberingsaktivitetsundersøkelse (IC50) CDKl/syklin B-undersøkelsen er identisk med CDK2/syklin A ovenfor, unntatt at CDKl/syklin B (Upstate Discovery) anvendes og enzymet fortynnes til 6,25 nM.
Forbindelsen 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lif-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid har en ICso-verdi på mindre enn 0,1 uM i CDK1-undersøkelsen ovenfor.
Eksempel 14
GSK3-B-kinaseinhiberingsaktivitetsundersøkelse
GSK3-P (Upstate Discovery) fortynnes til 7,5 nM i 25 mM MOPS, pH 7,00, 25 mg/ml BSA, 0,0025 % Brij-35, 1,25 % glyserol, 0,5 mMEDTA, 25 mMMgCl2, 0,025 % p-merkaptoetanol, 37,5 mM ATP og 10 ul blandet med 10 ul substratblanding. Substrat-blandingen for GSK3-P er 12,5 uM fosfoglykogensyntase peptid-2 (Upstate Discovery) i lml vann med 35 uCi y 33P-ATP. Enzym og substrat tilsettes til 96 brønns plater sammen med 5 ul av forskjellige fortynninger av testforbindelsen i DMSO (opp til 2,5 %). Reaksjonen pågår i 3 timer (GSK3-P) før den stoppes med overskudd orto-fosforsyre (5 ul ved 2 %). Filtreringsprosedyren er som for aktivert CDK2/syklin A-undersøkelsen ovenfor.
Forbindelsen 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lif-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid har en ICso-verdi på mindre enn 0,1 uM i GSK3-B-undersøkelsen ovenfor.
Eksempel 15
Anti-proliferativ aktivitet
De anti-proliferative aktivitetene til en forbindelse kan bestemmes ved å måle evnen til forbindelsen til å inhibere cellevekst i et antall cellelinjer. Inhibering av cellevekst måles ved anvendelse av Alamar Blue-undersøkelsen (Nociari, M. M, Shalev, A., Benias, P., Russo, C. Journal of ImmunologicalMethods 1998, 213, 157-167). Denne metoden er basert på evnen til levedyktige celler til å redusere resazurin til dens fluorescensprodukt resorufin. For hver proliferasjonsundersøkelse blir celler tilsatt 96-brønns plater og får komme seg i 16 timer før tilsetting av inhibitorforbindelser i ytterligere 72 timer. Ved slutten av inkuberingsperioden blir 10 % (volum/volum) Alamar Blue tilsatt og deretter følger inkubering i ytterligere 6 timer før bestemmelse av fluorescensproduktet ved 535 nM eks/590 nM em. I tilfellet den ikke-prolifererende celleundersøkelsen blir celler holdt ved konfluens i 96 timer før tilsetting av inhibitorforbindelser i ytterligere 72 timer. Antallet levedyktige celler bestemmes med Alamar Blue-undersøkelsen som tidligere. Cellelinjer kan oppnås fra the ECACC (European Collection of cell Cultures).
Ved anvendelse av denne undersøkelsen ble metansulfonsyresaltet av 4-(2,6-diklor-benzoylamino)-lif-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid funnet å ha en ICso-verdi på 0,11 i HCT-116-celler.
FARMASØYTISKE FORMULERINGER
Eksempel 16
(i) Tablettformulering
En tablettsammensetning som inneholder syreaddisjonssaltet som definert heri, fremstilles ved å blande 50 mg av forbindelsen eller dens salt med 197 mg laktose (BP) som fortynningsmiddel og 3 mg magnesiumstearat som smøremiddel og deretter følges sammenpressing for å danne en tablett på kjent måte.
(ii) Kapselformulering
En kapselformulering fremstilles ved å blande 100 mg av syreaddisjonssaltet som definert heri, med 100 mg laktose og fylle den resulterende blandingen i standard opake, harde gelatinkapsler.
(iii) Injiserbar formulering I
En parenteral sammensetning for administrasjon ved injeksjon kan fremstilles ved å løse opp syreaddisjonssaltet i vann som inneholder 10 % propylenglykol, for å gi en konsentrasjon av aktiv forbindelse på 1,5 vekt%. Løsningen blir deretter sterilisert ved filtrering, fylt i en ampulle og forseglet.
(iv) Injiserbar formulering II
En parenteral sammensetning for injeksjon fremstilles ved å løse opp i vann syreaddisjonssaltet (2 mg/ml) og mannitol (50 mg/ml), sterilfiltrere løsningen og fylle den i forseglbare 1 ml medisinflasker eller ampuller.
v) Injiserbar formulering m
En formulering for i.v.-levering ved injeksjon eller infusjon kan fremstilles ved å løse opp syreaddisjonssaltet i vann med 20 mg/ml. Medisinflasken blir deretter forseglet og sterilisert ved autoklavering.
vi) Injiserbar formulering IV
En formulering for i.v.-levering ved injeksjon eller infusjon kan fremstilles ved å løse opp syreaddisjonssaltet i vann som inneholder en buffer (for eksempel 0,2 M acetat pH 4,6) ved 20 mg/ml. Medisinflasken blir deretter forseglet og sterilisert ved autoklavering.
(vii) Subkutan injeksjonsformulering
En sammensetning for subkutan administrasjon fremstilles ved å blande syreaddisjonssaltet som definert heri, med farmasøytisk kvalitet maisolje for å gi en konsentrasjon på 5 mg/ml. Sammensetningen steriliseres og fylles i en passende beholder.
viii) Lyofilisert formulering
Aliquoter av formulert syreaddisjonssalt derav som definert heri, tilsettes 50 ml medisinflasker og lyofiliseres. I løpet av lyofilisasjonen blir sammensetningene frosset ved anvendelse av en én-trinns frosset protokoll til —45 °C. Temperaturen heves til -10 °C for størkning og blir deretter frosset igjen til -45 °C, fulgt av primær tørking ved +25 °C i ca. 3400 min, fulgt av en sekundær tørking med økende trinn til temperatur 50 °C. Trykket i løpet av den primære og sekundære tørkingen settes til 80 millitor.
(ix) Konsentrat for anvendelse i i.v.-administrasjon
En vandig bufret løsning fremstilles ved å løse opp 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lif-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamidmetansulfonat ved en konsentrasjon på
20 mg/ml i en 0,2 M natriumacetat/eddiksyrebuffer ved en pH på 4,6.
Den bufrede løsningen fylles med filtrering for å fjerne partikulært materiale over i en beholder (slik som klasse 1-glassmedisinflasker) som deretter forsegles (for eksempel ved hjelp av en Florotec-stopper) og sikres (for eksempel med en aluminiumkrymping). Hvis forbindelsen og formuleringen er tilstrekkelig stabil blir formuleringen sterilisert ved autoklavering ved 121 °C i en passende tidsperiode. Hvis formuleringen ikke er stabil ved autoklavering kan den steriliseres ved anvendelse av et passende filter og fylles under sterile betingelser i sterile medisinflasker. For intravenøs administrasjon kan løsningen doseres slik den er eller injiseres inn i en infusjonspose (som inneholder en farmasøytisk akseptabel eksipiens, slik som 0,9 % saltvann eller 5 % dekstrose) før administrasjon.
Eksempel 17
Bestemmelse av antifungal aktivitet
Den antifungale aktiviteten til saltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lif-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid kan bestemmes ved anvendelse av følgende protokoll. Saltene testes overfor et panel av fungi som inkluderer Candida parpsilosis, Candida tropicalis, Candida albicans-ATCC 36082 og Cryptococcus neoformans. Test-organismene holdes på skrå Sabourahd dekstrose-agar ved 4 °C. Enkeltsuspensjoner av hver organisme fremstilles ved å dyrke gjær over natten ved 27 °C på en roterende trommel i gjær-nitrogenbasebuljong (YNB) med aminosyrer (Difco, Detroit, Mich.), pH 7,0 med 0,05 M morfolinpropansulfonsyre (MOPS). Suspensjonen blir deretter sentri-fugert og vasket to ganger med 0,85 % NaCl før lydbehandling av den vaskede celle-suspensjonen i 4 sekunder (Branson Sonifier, modell 350, Danbury, Conn.). Enkelt-blastosporer telles i et haemocytometer og justeres til ønsket konsentrasjon i 0,85 % NaCl.
Aktiviteten til testforbindelsene bestemmes ved anvendelse av en modifikasjon av en buljongmikrofortynningsteknikk. Testforbindelser fortynnes i DMSO til et 1,0 mg/ml forhold og fortynnes deretter til 64 ug/ml i YNB-buljong, pH 7,0 med MOPS (Fluconazol anvendes som kontroll) for å gi en arbeidsløsning av hver forbindelse. Ved anvendelse av en 96-brønns plate blir brønnene 1 og 3 til og med 12 preparert med YNB-buljong, ti ganger fortynninger av forbindelsesløsning gjøres i brønnene 2 til 11 (konsentrasjonsområder er 64 til 0,125 ug/ml). Brønn 1 tjener som en sterilkontroll og blindprøve for de spektrofotometriske undersøkelsene. Brønn 12 tjener som en vekst-kontroll. Mikrotiterplatene inokuleres med 10 ul i hver av brønnene 2 til 11 (Slutt-inokulumstørrelse er IO<4>organismer/ml). Inokulerte plater inkuberes i 48 timer ved 35 °C. IC50-verdiene bestemmes spektrofotometrisk ved å måle absorbansen ved 420 nm (Automatic Microplate Reader, DuPont Instruments, Wilmington, Del.) etter røring av platene i 2 min med en virvler-blander (Vorte-Genie 2 Mixer, Scientific Industries, Inc., Bolemia, N.Y.). ICso-sluttverdiene defineres som laveste legemiddelkonsentrasjon som fremviser ca. 50 % (eller mer) reduksjon av veksten sammenlignet med kontrollbrønnen. Med turbiditetsundersøkelsen er dette definert som den lavete legemiddelkonsentrasjon hvorved turbiditeten i brønnen er <50 % av kontrollen (IC50). Minimale, cytolytiske konsentrasjoner (MCC) bestemmes ved underdyrking av alle brønnene fra 96-brønns platen på en Sabourahd dekstrose-agar (SDA) plate, inkubere i 1 til 2 dager ved 35 °C og deretter sjekke levedyktigheten.
Eksempel 18
Protokoll for biologisk aktivering av kontroll av in vivo helplantefungal infeksjon
Et salt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lif-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid løses i aceton med etterfølgende seriefortynninger i aceton for å oppnå et antall ønskede konsentrasjoner. Endelige behandlingsvolumer oppnås ved tilsetting av 9 volum 0,05 % vandig Tween-20 ™ eller 0,01 % Triton X-100™, avhengig av patogenet.
Sammensetningene blir deretter anvendt for å teste aktiviteten til forbindelsene ifølge oppfinnelsen overfor tomatbladlus (Phytophthora skadedyr) ved anvendelse av følgende protokoll. Tomater (cultivar Rutgers) dyrkes fra frø i en jordløs torvbasert potteblanding til de små plantene er 10-20 cm lange. Plantene blir deretter sprayet med testforbindelsen i en andel på 100 ppm. Etter 24 timer blir testplantene inokulert med spraying med en vandig sporangia-suspensjon av Phytophthora-skadedyr, og holdt i et dukkammer over natten. Plantene blir deretter overført til drivhuset til sykdommen utvikles på de ikke-behandlede kontrollplantene.
Tilsvarende protokoller anvendes for å teste aktiviteten til forbindelsene ifølge oppfinnelsen ved bekjemping av brun rust på hvete (Puccinia), pulvermeldugg på hvete (Ervsiphe vraminis), hvete (cultivar Monon), bladflekker på hvete (Septoria tritici) og dekkbladflekk på hvete (Leptosphaeria nodorum).
Eksempel 19
Generell protokoll for bestemmelse av løselighetene til den frie basen og saltene av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lZT-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid
Løselighetene til forskjellige salter av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lif-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid kan bestemmes ved hjelp av følgende protokoll.
Fremgangsmåte
Til en 8 ml medisinflaske ble det tilsatt den frie basen (50 mg, 0,131 mmol) og vann (0,5 ml). Til medisinflasken ble det tilsatt passende syre (1 ekv., 0,131 mmol) og medisinflasken ble ristet ved omgivelsestemperatur i 14-16 timer. Deretter ble medisinflaskene visuelt inspisert. Hvis en homogen løsning ble observert ble eksperimentet terminert og det ble konkludert at saltet således dannet, hadde en løselighet større enn 100 mg/ml.
Hvis faststoff var igjen ble ytterligere 0,5 ml vann tilsatt og medisinflasken ble ristet i 6 timer. Dersom en homogen løsning ble dannet på dette stadiet kan det konkluderes at saltet har en løselighet større enn 50 mg/ml.
Hvis faststoff var igjen på dette tidspunktet ble ytterligere 1 ml vann tilsatt og medisinflasken ble ristet ved omgivelsestemperatur. Hvis dette resulterte i en homogen løsning kan det konkluderes med at løseligheten er større enn 25 mg/ml. Hvis faststoff fremdeles var igjen kan det konkluderes at løseligheten av saltet var mindre enn 25 mg/ml.
Saltformer ifølge oppfinnelsen fremviser én eller flere av følgende fordeler i forhold til den frie base, i at de: • vil være mer løselige og således vil være bedre for i.v.-administrasjon (for eksempel ved infusjon) • vil ha bedre stabilitet (for eksempel forbedret lagringstid); • vil ha bedre termisk stabilitet; • vil være mindre basiske og derfor bedre for i.v.-administrasjon; • vil ha produksjonsfordeler; • vil ha forbedret løselighet i vandig løsning; • vil ha bedre fysiokjemiske egenskaper;
• kan ha forbedret antikreftaktivitet; og
• kan ha en forbedret terapeutisk indeks.

Claims (32)

1. Syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, hvor saltet dannes med en syre valgt fra metansulfonsyre og eddiksyre og blandinger derav.
2. Syreaddisjonssalt ifølge krav 1, som er et syreaddisjonssalt dannet med metansulfonsyre.
3. Syreaddisjonssalt ifølge krav 1, som er et syreaddisjonssalt dannet med eddiksyre.
4. Syreaddisjonssalt ifølge hvilket som helst av de foregående krav, som er krystallinsk.
5. Syreaddisjonssalt ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 3, som er amorft.
6. Krystallinsk metansulfonsyresalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid ifølge krav 2, som har et røntgenpulverdiffraksjonsmønster kjennetegnet ved tilstedeværelsen av hovedtopper ved diffraksjonsvinklene (29) og mellomplansmellomrommene (d) som fremsatt i tabell A:
7. Krystallinsk eddiksyresalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid ifølge krav 3, som har et røntgenpulverdiffraksjonsmønster som fremviser topper ved samme diffraksjonsvinkler som de i røntgenpulverdiffraksjonsmønstrene vist i figur 4 nedenfor:
8. Mesylatsalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid ifølge krav 2, som er vannfritt og fremviser en endoterm topp ved 379-380 °C når det underkastes DSC.
9. Eddiksyresalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid ifølge krav 3, som er vannfritt og fremviser eksoterme topper ved 231-232 °C og 292-293 °C når den underkastes DSC.
10. Krystallinsk syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid ifølge krav 1, som inneholder en enkel krystallinsk form av syreaddisjonssaltet og ikke mer enn 5 vekt% av en hvilken som helst annen krystallinsk form av syreaddisjonssaltet.
11. Metansulfonsyresalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid ifølge krav 2, som er krystallinsk og er kjennetegnet ved en hvilken som helst én eller flere (i en hvilken som helst kombinasjon) eller alle følgende parametere, nemlig at saltet: (a) har en krystallstruktur som fremsatt i figurene 1 og 2;
og/eller (b) har en krystallstruktur som definert ved de følgende koordinatene: mellomromsgruppe: Pbca enhetscelle ved 93K med a, b&c som har 5 % s.u.: a= 8 .9 b=12.4 c=38.5 alfa=beta=gamma=90 Koordinater i cif-format:
; og/eller (c) har krystallgitterparametere ved 93 K a=8,90(l0), 2>=12,44(10), £-=38,49(4) Å, a = P = Y = 90°; og/eller (d) har en krystallstruktur som tilhører en ortorombisk mellomromsgruppe; og/eller (e) har et røntgenpulverdiffraksj onsmønster kj ennetegnet ved tilstedeværelsen av hovedtopper ved diffraksjonsvinklene (29) og mellomplanmellomrommene (d) som fremsatt i tabell A, og eventuelt tabell B nedenfor:
; og/eller (f) fremviser topper ved samme diffraksjonsvinkler som de til røntgenpulverdiffraksj onsmønsteret vist i figur 3 og eventuelt hvori toppene har samme relative intensitet som toppene i figur 3 nedenfor:
og/eller (g) har et røntgenpulverdiffraksj onsmønster i det vesentlige som vist i figur 3; og/eller (h) er vannfritt og fremviser en endoterm topp ved 379-380 °C når den underkastes DSC; og/eller (i) fremviser et infrarødt spektrum som, når det analyseres ved anvendelse av KBr-skivemetoden, inneholder karakteristiske topper ved 3233, 3002, 2829, 1679, 1632, 1560, 1430, 1198, 1037, 909 og 784 cm"<1>.
12. Metansulfonsyresalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid ifølge krav 11, som har en endoterm topp ved 379,8 °C når det underkastes DSC.
13. Metansulfonsyresalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid ifølge krav 11, som har en krystallstruktur som tilhører en ortorombisk mellomromsgruppe som er Vbca (#61).
14. Metansulfonsyresalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid ifølge krav 11, hvori røntgenpulver diffraksjons mønsteret er kjennetegnet ved tilstedeværelse av topper ved diffraksjonsvinklene (20) og mellomplanmellomrommene (d) og intensiteten vist i tabell C heri.
15. Farmasøytisk sammensetning, som innbefatter en vandig løsning som inneholder et syreaddisj onssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid som definert i et hvilket som helst av kravene 1 til 14, i en konsentrasjon som er større enn 15 mg/ml.
16. Vandig løsning av et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 14, hvori den vandige løsningen har en pH på 4 til 7.
17. Vandig løsning ifølge krav 16, hvori syreaddisjonssaltet er et salt dannet med metansulfonsyre, og løsningen er bufret med en buffer dannet fra eddiksyre og natriumacetat.
18. Farmasøytisk sammensetning, som innbefatter et salt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som definert i et hvilket som helst av kravene 1 til 14, og en farmasøytisk akseptabel bærer.
19. Fremgangsmåte for fremstilling av et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid som definert i et hvilket som helst av kravene 1 til 14, hvor fremgangsmåten innbefatter omsetting av en forbindelse med formel (XI):
med en forbindelse med formel (XII):
hvor PG er en aminbeskyttende gruppe, i et organisk løsemiddel under nærvær av en ikke-interfererende base slik som trietylamin, for å gi en forbindelse med formel (XHI):
og deretter fjerne den beskyttende gruppen PG for å gi syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, og eventuelt rekrystallisere syreaddisjonssaltet således dannet for å gi en krystallinsk form.
20. Fremgangsmåte for fremstilling av et syreaddisjonssalt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid som definert i et hvilket som helst av kravene 1 til 14, hvor fremgangsmåten innbefatter: (i) behandle en forbindelse med formel (XIV):
med tionylklorid i et ikke-protisk, organisk løsemiddel, eventuelt med oppvarming; (ii) omsette produktet i trinn (i) med en forbindelse med formel (XE) under nærvær av en ikke-interfererende base slik som trietylamin eventuelt med oppvarming, for å gi en forbindelse med formel (XIII); og (iii) fjerne den beskyttende gruppen PG fra forbindelsen med formel (XIII) for å gi syreaddisjonssaltet av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid; og eventuelt (iv) rekrystallisere syreaddisjonssaltet for å gi en krystallinske form, for eksempel en krystallinske form som definert i et hvilket som helst av de foregående krav.
21. Forbindelse med formel (XI):
22. Salt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som definert i et hvilket som helst av kravene 1 til 14, for anvendelse innen medisin.
23. Salt av 4-(2,6-diklor-benzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som definert i hvilket som helst av kravene 1-14, for anvendelse i profylakse eller behandling av sykdomsstadiet eller tilstanden valgt fra proliferative lidelser, virale infeksjoner, autoimmune sykdommer og neurodegenerative sykdommer.
24. Salt av 4-(2,6-diklor-benzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som definert i hvilket som helst av kravene 1-14, for anvendelse i behandling av en sykdom eller tilstand som innbefatter eller oppstår fra abnormal cellevekst hos et pattedyr.
25. Salt av 4-(2,6-diklor-benzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, for anvendelse ifølge krav 24, hvori sykdommen eller tilstanden er kreft.
26. Salt av 4-(2,6-diklor-benzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, for anvendelse ifølge krav 24, hvori sykdommen eller tilstanden er kreft valgt fra et karsinom i blære, bryst, kolon, nyre, epidermis, lever, lunge, oesofagus, galleblære, ovarie, bukspyttkjertel, mage, livmorhals, tyroid, prostata, eller hud; en hematopietisk tumor av lymfoid avstamning; en hematopoietisk tumor av myeloid avstamning; en tumor med mesenkymal opprinnelse; en tumor i det sentrale eller perifere nervesystemet; melanom; seminom; teratokarsinom; osteosarkoma; xeroderma pigmentosum; keratoktantom; tyroid follikulær kreft; eller Kaposis sarkom.
27. Salt av 4-(2,6-diklor-benzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, for anvendelse ifølge krav 24, hvori sykdommen eller tilstanden er kreft valgt fra brystkreft, ovariekreft, kolonkreft, prostatakreft, oesofaguskreft, skjelettkreft og ikke-småcelle lungekreft.
28. Salt av 4-(2,6-diklor-benzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, for anvendelse ifølge krav 24, hvori sykdommen eller tilstanden er en leukemi.
29. Salt av 4-(2,6-diklor-benzoylamino)-1 H-pyrazol-3 -karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, for anvendelse ifølge krav 24, hvori sykdommen eller tilstanden er valgt fra akutt lymfocytisk leukemi, B-cellelymfom, T-cellelymfom, Hodgkins lymfom, ikke-Hodgkins lymfom, hårete cellelymfom eller Burketts lymfom.
30. Salt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, for anvendelse ifølge krav 24, hvori sykdommen eller tilstanden er kronisk lymfocytt leukemi.
31. Salt av 4-(2,6-diklorbenzoylamino)-l H-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, for anvendelse ifølge krav 24, hvori sykdommen eller tilstanden er mantelcellelymfom.
32. Anvendelse av et salt av 4-(2,6-diklor-benzoylamino)-lH-pyrazol-3-karboksylsyre-piperidin-4-ylamid, som definert i hvilket som helst av kravene 1-14, for fremstilling av et medikament, hvori medikamentet er for en hvilken som helst eller flere av anvendelsene definert i kravene 23 til 31.
NO20073957A 2005-01-21 2007-07-27 Farmasøytiske forbindelser NO340738B1 (no)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US64597305P 2005-01-21 2005-01-21
GB0501475A GB0501475D0 (en) 2005-01-22 2005-01-22 Pharmaceutical compounds
PCT/GB2006/000207 WO2006077426A2 (en) 2005-01-21 2006-01-20 4- (2, 6-DICHLOROBENZOYLAMINO) -lH-PYRAZOLE-3 -CARBOXYLIC ACID PIPERIDIN- 4 -YLAMID ACID ADDITION SALTS AS KINASE INHIBITORS

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20073957L NO20073957L (no) 2007-10-12
NO340738B1 true NO340738B1 (no) 2017-06-06

Family

ID=36129898

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20073957A NO340738B1 (no) 2005-01-21 2007-07-27 Farmasøytiske forbindelser

Country Status (18)

Country Link
US (2) US8013163B2 (no)
EP (1) EP1846393B1 (no)
JP (1) JP5184892B2 (no)
KR (1) KR101344691B1 (no)
AR (1) AR054425A1 (no)
AU (1) AU2006207323B2 (no)
BR (1) BRPI0606594A2 (no)
CA (1) CA2593560C (no)
IL (1) IL184504A (no)
MA (1) MA29256B1 (no)
MX (1) MX2007008783A (no)
NO (1) NO340738B1 (no)
NZ (1) NZ556471A (no)
PE (2) PE20091785A1 (no)
RU (1) RU2410385C2 (no)
SA (1) SA06260465B1 (no)
TN (1) TNSN07277A1 (no)
WO (1) WO2006077426A2 (no)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4681548B2 (ja) 2003-07-22 2011-05-11 アステックス・セラピューティクス・リミテッド ３，４−ジ置換１ｈ−ピラゾール化合物および、そのサイクリン依存性キナーゼ（ｃｄｋ）およびグリコーゲン・シンセターゼ・キナーゼ−３（ｇｓｋ−３）調節剤としての使用
AR053662A1 (es) * 2005-01-21 2007-05-16 Astex Therapeutics Ltd Compuestos de pirazol inhibidores de la actividad quinasa cdk y gsk
AR054425A1 (es) 2005-01-21 2007-06-27 Astex Therapeutics Ltd Sales de adicion de piperidin 4-il- amida de acido 4-(2,6-dicloro-benzoilamino) 1h-pirazol-3-carboxilico.
US20080161251A1 (en) * 2005-01-21 2008-07-03 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical Compounds
BRPI0606455A (pt) * 2005-01-21 2008-03-11 Astex Therapeutics Ltd compostos farmacêuticos
CA2593475A1 (en) * 2005-01-21 2006-07-27 Astex Therapeutics Limited Combinations of pyrazole kinase inhibitors and further antitumor agents
US8404718B2 (en) 2005-01-21 2013-03-26 Astex Therapeutics Limited Combinations of pyrazole kinase inhibitors
US20080139620A1 (en) * 2005-01-21 2008-06-12 Astex Therapeutics Limited Pyrazole Derivatives For The Inhibition Of Cdk's And Gsk's
WO2006093271A1 (ja) * 2005-03-03 2006-09-08 Mitsubishi Rayon Co., Ltd. ポリマー粒子、これを含む樹脂組成物、成形体
DK1877379T3 (da) 2005-04-13 2013-04-08 Astex Therapeutics Ltd Hydroxybenzamidderivater og anvendelse heraf som inhibitorer af hsp90
WO2007129066A1 (en) * 2006-05-05 2007-11-15 Astex Therapeutics Limited 4- (2,6-dichloro-benzoylamino) -1h-pyrazole-3-carboxylic acid (1-methanesulphonyl-piperidin-4-yl) -amide for the treatment of cancer
EP2026805A1 (en) * 2006-05-08 2009-02-25 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations of diazole derivatives for cancer treatment
US20100004243A1 (en) * 2006-07-14 2010-01-07 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical compounds
EP2073807A1 (en) 2006-10-12 2009-07-01 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
EP2073804B1 (en) 2006-10-12 2017-09-13 Astex Therapeutics Limited Hydroxy-substituted benzoic acid amide compounds for use in the treatment of pain
US8916552B2 (en) * 2006-10-12 2014-12-23 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
GB0620259D0 (en) 2006-10-12 2006-11-22 Astex Therapeutics Ltd Pharmaceutical compounds
US7858663B1 (en) * 2007-10-31 2010-12-28 Pisgah Laboratories, Inc. Physical and chemical properties of thyroid hormone organic acid addition salts
WO2009084531A1 (ja) * 2007-12-27 2009-07-09 Kissei Pharmaceutical Co., Ltd. ピラゾール誘導体のモノセバシン酸塩
UY32297A (es) * 2008-12-22 2010-05-31 Almirall Sa Sal mesilato de 5-(2-{[6-(2,2-difluoro-2-fenilitoxi) hexil]amino}-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2( 1h)-ona como agonista del receptor b(beta)2 acrenérgico
BR112018015389B1 (pt) 2016-03-17 2023-12-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Derivado de 5-etil-4-metil-pirazol-3-carboxamida, seu processo de fabricação, preparação farmacêutica oral e uso
WO2017161253A1 (en) * 2016-03-18 2017-09-21 Tufts Medical Center Compositions and methods for treating and preventing metabolic disorders
CA3034875C (en) 2016-08-23 2024-05-28 Eisai R&D Management Co., Ltd. Combination therapies for the treatment of hepatocellular carcinoma
MA47776A (fr) 2017-03-16 2020-01-22 Eisai R&D Man Co Ltd Polythérapies pour le traitement du cancer du sein

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002062804A1 (en) * 2001-02-02 2002-08-15 Pharmacia Italia S.P.A. Oxazolyl-pyrazole derivatives as kinase inhibitors
WO2005012256A1 (en) * 2003-07-22 2005-02-10 Astex Therapeutics Limited 3, 4-disubstituted 1h-pyrazole compounds and their use as cyclin dependent kinases (cdk) and glycogen synthase kinase-3 (gsk-3) modulators

Family Cites Families (130)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2917432A (en) 1954-10-05 1959-12-15 Burroughs Wellcome Co Leukemia treatment
US3046301A (en) 1959-10-29 1962-07-24 Burroughs Wellcome Co Method of making chlorambucil
GB1354939A (en) 1971-10-28 1974-06-05 Ici Ltd Process for the manufacture of 1,1,2-triphenylalk-1-enes
US4005063A (en) 1973-10-11 1977-01-25 Abbott Laboratories [Des-gly]10 -GnRH nonapeptide anide analogs in position 6 having ovulation-inducing activity
GB1524747A (en) 1976-05-11 1978-09-13 Ici Ltd Polypeptide
US4282361A (en) * 1978-03-16 1981-08-04 Massachusetts Institute Of Technology Synthesis for 7-alkylamino-3-methylpyrazolo [4,3-d]pyrimidines
DE2845574A1 (de) 1978-10-19 1980-04-24 Deutsches Krebsforsch Durch heterocyclische ringe oder alkylreste substituierte analoga von ccnu und verfahren zu deren herstellung
LU88769I2 (fr) 1982-07-23 1996-11-05 Zeneca Ltd Bicalutamide et ses sels et esters pharmaceutiquement acceptables (Casodex (R))
US4978672A (en) 1986-03-07 1990-12-18 Ciba-Geigy Corporation Alpha-heterocyclc substituted tolunitriles
JPS6425763A (en) 1987-04-24 1989-01-27 Mitsubishi Chem Ind Pyrazoles and insecticide and acaricide containing said pyrazoles as active ingredient
US5164196A (en) 1987-05-19 1992-11-17 Ventech Research, Inc. Crotoxin complex as cytotoxic agent
US5002755A (en) 1988-02-18 1991-03-26 Vanderbilt University Method of controlling nephrotoxicity of anti-tumor plaintum compounds
AU7885991A (en) 1990-05-26 1991-12-31 Byk Gulden Lomberg Chemische Fabrik Gmbh 1,4-dihydropyridines for application in combatting resistance to drugs
IL100110A0 (en) 1990-12-26 1992-08-18 American Cyanamid Co Insecticidal and synergistic miticidal compositions
SK44894A3 (en) 1991-10-18 1995-04-12 Monsanto Co Trisubstituted aromatic compounds, method of their preparation and fungicidal agents
ES2091684T3 (es) 1992-11-13 1996-11-01 Idec Pharma Corp Aplicacion terapeutica de anticuerpos quimericos y radiomarcados contra el antigeno de diferenciacion restringida de los linfocitos b humanos para el tratamiento del linfoma de las celulas b.
NZ257770A (en) 1992-12-17 1997-02-24 Pfizer 3- acylpyrazole and pyrazolo[3,4-d]pyrimidine derivatives
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5916908A (en) 1994-11-10 1999-06-29 Cor Therapeutics, Inc. Pharmaceutical pyrazole compositions useful as inhibitors of protein kinases
US5502068A (en) * 1995-01-31 1996-03-26 Synphar Laboratories, Inc. Cyclopropylpyrroloindole-oligopeptide anticancer agents
US5663357A (en) 1995-11-22 1997-09-02 Allergan Substituted heteroarylamides having retinoid-like biological activity
US5675024A (en) 1995-11-22 1997-10-07 Allergan Aryl or heteroaryl amides of tetrahydronaphthalene, chroman, thiochroman and 1,2,3,4,-tetrahydroquinoline carboxylic acids, having an electron withdrawing substituent in the aromatic or heteroaromatic moiety, having retinoid-like biological activity
WO1997027852A1 (en) * 1996-01-30 1997-08-07 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
AU716381B2 (en) 1996-04-03 2000-02-24 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
JP2000507956A (ja) 1996-04-03 2000-06-27 メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤
JP2000507592A (ja) 1996-04-03 2000-06-20 メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド ファルネシル―タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤
WO1997041824A2 (en) 1996-05-03 1997-11-13 Abbott Laboratories Antiangiogenic peptides derived from plasminogen
CA2258313A1 (en) 1996-06-21 1997-12-24 Allergan Sales, Inc. Substituted tetrahydronaphthalene and dihydronaphthalene derivatives having retinoid and/or retinoid antagonist-like biological activity
TW523506B (en) 1996-12-18 2003-03-11 Ono Pharmaceutical Co Sulfonamide or carbamide derivatives and drugs containing the same as active ingredients
WO1998028269A1 (en) 1996-12-23 1998-07-02 Du Pont Pharmaceuticals Company NITROGEN CONTAINING HETEROAROMATICS AS FACTOR Xa INHIBITORS
US6020357A (en) * 1996-12-23 2000-02-01 Dupont Pharmaceuticals Company Nitrogen containing heteroaromatics as factor Xa inhibitors
US6306393B1 (en) 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
EP0977756A1 (en) 1997-04-25 2000-02-09 Pfizer Limited PYRAZOLOPYRIMIDINONES WHICH INHIBIT TYPE 5 CYCLIC GUANOSINE 3',5'-MONOPHOSPHATE PHOSPHODIESTERASE (cGMP PDE5) FOR THE TREATMENT OF SEXUAL DYSFUNCTION
EP1019394A1 (en) 1997-05-22 2000-07-19 G.D. Searle & Co. PYRAZOLE DERIVATIVES AS p38 KINASE INHIBITORS
HUP0003906A2 (hu) 1997-06-19 2001-05-28 Du Pont Pharmaceuticals Co. Xa faktort gátló hatású heterociklusos vegyületek és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények
ATE260103T1 (de) 1997-12-19 2004-03-15 Schering Ag Ortho-anthranilamide derivate als antikoagulantien
JP2001526268A (ja) 1997-12-22 2001-12-18 デュポン ファーマシューティカルズ カンパニー Ｘａ因子阻害剤としての、オルト−置換Ｐ１を有する、窒素含有複素環式芳香族化合物
WO1999067235A1 (fr) 1998-06-25 1999-12-29 Sumitomo Pharmaceuticals Co., Ltd. Composes cycliques a cinq elements
JP2000186092A (ja) 1998-12-22 2000-07-04 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd Ｕｃｎ−０１の製造法
CA2348740A1 (en) 1998-12-23 2000-07-06 Ruth R. Wexler Thrombin or factor xa inhibitors
DE60003025T2 (de) 1999-04-02 2004-03-18 Bristol-Myers Squibb Pharma Co. Arylsulfonyle als faktor xa inhibitoren
WO2000062778A1 (en) 1999-04-15 2000-10-26 Bristol-Myers Squibb Co. Cyclic protein tyrosine kinase inhibitors
US6166244A (en) 1999-05-07 2000-12-26 Allergan Sales, Inc. Oxygen, sulfur and nitrogen substituted cyclohexene and cyclohexane derivatives having retinoid-like biological activity
WO2000071515A2 (en) 1999-05-24 2000-11-30 Cor Therapeutics, Inc INHIBITORS OF FACTOR Xa
FR2795726A1 (fr) 1999-06-30 2001-01-05 Aventis Cropscience Sa Nouveaux pyrazoles fongicides
PE20010306A1 (es) 1999-07-02 2001-03-29 Agouron Pharma Compuestos de indazol y composiciones farmaceuticas que los contienen utiles para la inhibicion de proteina kinasa
WO2001014331A2 (en) 1999-08-24 2001-03-01 Regents Of The University Of California Non-quinoline inhibitors of malaria parasites
US6632815B2 (en) * 1999-09-17 2003-10-14 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of factor Xa
CN1390206A (zh) 1999-09-17 2003-01-08 千嬉药品公司 因子Xa的抑制剂
EP1216228B1 (en) 1999-09-17 2008-10-29 Millennium Pharmaceuticals, Inc. BENZAMIDES AND RELATED INHIBITORS OF FACTOR Xa
US6485907B1 (en) 2000-01-11 2002-11-26 Syngenta Participations Ag PCR-based detection of Rhizoctonia cerealis
HN2001000008A (es) 2000-01-21 2003-12-11 Inc Agouron Pharmaceuticals Compuesto de amida y composiciones farmaceuticas para inhibir proteinquinasas, y su modo de empleo
AU2001234958A1 (en) 2000-02-11 2001-08-20 Bristol-Myers Squibb Company Cannabinoid receptor modulators, their processes of preparation, and use of cannabinoid receptor modulators for treating respiratory and non-respiratory diseases
WO2001064643A2 (en) 2000-02-29 2001-09-07 Cor Therapeutics, Inc. BENZAMIDES AND RELATED INHIBITORS OF FACTOR Xa
AU2001241128A1 (en) * 2000-03-14 2001-09-24 Fujisawa Pharmaceutical Co. Ltd. Novel amide compounds
WO2001081345A1 (fr) 2000-04-20 2001-11-01 Mitsubishi Pharma Corporation Composes d'amides aromatiques
AU2001259218A1 (en) 2000-04-27 2001-11-07 Abbott Laboratories Substituted phenyl farnesyltransferase inhibitors
US6414013B1 (en) 2000-06-19 2002-07-02 Pharmacia & Upjohn S.P.A. Thiophene compounds, process for preparing the same, and pharmaceutical compositions containing the same background of the invention
WO2002000651A2 (en) 2000-06-27 2002-01-03 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Factor xa inhibitors
EP1305304A1 (en) 2000-07-31 2003-05-02 Smithkline Beecham Plc Carboxamide compounds and their use as antagonists of a human 11cby receptor
JP2004507526A (ja) 2000-08-31 2004-03-11 ファイザー・プロダクツ・インク ピラゾール誘導体及びそのプロテインキナーゼ阻害剤としての使用
US6638926B2 (en) 2000-09-15 2003-10-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors
EP1414804A1 (en) 2000-10-20 2004-05-06 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Acylsemicarbazides and their use as cyclin dependent kinase (cdk) inhibitors
US6455559B1 (en) * 2001-07-19 2002-09-24 Pharmacia Italia S.P.A. Phenylacetamido-pyrazole derivatives, process for their preparation and their use as antitumor agents
CA2432303C (en) * 2000-12-21 2010-04-13 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors
DE10064823A1 (de) 2000-12-22 2002-06-27 Knoll Ag Integrinrezeptorliganden
US6878714B2 (en) * 2001-01-12 2005-04-12 Amgen Inc. Substituted alkylamine derivatives and methods of use
US6995162B2 (en) * 2001-01-12 2006-02-07 Amgen Inc. Substituted alkylamine derivatives and methods of use
US7105682B2 (en) * 2001-01-12 2006-09-12 Amgen Inc. Substituted amine derivatives and methods of use
MY130778A (en) 2001-02-09 2007-07-31 Vertex Pharma Heterocyclic inhibitiors of erk2 and uses thereof
WO2002069955A1 (en) 2001-02-28 2002-09-12 Giles Brian C Method and formula for anti-tumor and anti-matastatic effect
ES2364550T3 (es) 2001-03-05 2011-09-06 E. I. Du Pont De Nemours And Company Agentes de control de plagas de invertebrados de diamidas heterocíclicas.
MXPA03006310A (es) 2001-03-16 2003-09-16 Pfizer Compuestos farmaceuticamente activos.
GB0106661D0 (en) 2001-03-16 2001-05-09 Pfizer Ltd Pharmaceutically active compounds
WO2002074298A1 (fr) * 2001-03-21 2002-09-26 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Inhibiteurs de production d'il-6
NZ560453A (en) 2001-04-16 2009-03-31 Schering Corp 3,4-di-substituted cyclobutene-1,2-diones as CXC-chemokine receptor ligands
US6905669B2 (en) 2001-04-24 2005-06-14 Supergen, Inc. Compositions and methods for reestablishing gene transcription through inhibition of DNA methylation and histone deacetylase
JP2005503131A (ja) 2001-05-11 2005-02-03 ザ バーナム インスティチュート Ｒｉｚに関するスクリーニング、診断および治療の方法
WO2002094183A2 (en) 2001-05-18 2002-11-28 Tap Pharmaceutical Products Inc. A method for tumor treatment with fumagillol derivatives
AU2002305669B2 (en) 2001-05-21 2008-09-11 E.I. Du Pont De Nemours And Company Diamide invertebrate pest control agents containing a non-aromatic heterocyclic ring
US20030236198A1 (en) 2001-06-13 2003-12-25 Genesoft, Inc. Antipathogenic benzamide compounds
US6916798B2 (en) 2001-08-03 2005-07-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of GSK-3 and uses thereof
AUPR738301A0 (en) 2001-08-30 2001-09-20 Starpharma Limited Chemotherapeutic agents
JP2005507875A (ja) 2001-08-31 2005-03-24 ユニバーシティ オブ コネチカット カンナビノイド受容体に作用する新規なピラゾール類似体
WO2003024448A2 (en) 2001-09-14 2003-03-27 Methylgene, Inc. Inhibitors of histone deacetylase
HN2002000317A (es) * 2001-11-02 2003-05-21 Pfizer Inhibidores de pde9 para tratamiento de trastornos cardiovasculares
US6919359B2 (en) 2001-11-08 2005-07-19 Pfizer Inc Azabicyclic-substituted-heteroaryl compounds for the treatment of disease
AU2002350217A1 (en) 2001-12-04 2003-06-17 Bristol-Myers Squibb Company Glycinamides as factor xa inhibitors
KR20060111716A (ko) 2002-01-22 2006-10-27 워너-램버트 캄파니 엘엘씨 2-(피리딘-2-일아미노)-피리도[2,3-ｄ]피리미딘-7-온
US7205307B2 (en) 2002-02-14 2007-04-17 Icagen, Inc. Pyrimidines as novel openers of potassium ion channels
EP2322160A1 (en) 2002-03-04 2011-05-18 Merck HDAC Research, LLC Methods of inducing terminal differentiation
WO2003077918A1 (en) 2002-03-12 2003-09-25 Merck & Co., Inc. Di-aryl substituted tetrazole modulators of metabotropic glutamate receptor-5
ATE478872T1 (de) 2002-03-28 2010-09-15 Ustav Ex Botan Av Cr V V I I O Pyrazoloä4,3-düpyrimidine, verfahren zu ihrer herstellung und therapeutische anwendung
US6995168B2 (en) 2002-05-31 2006-02-07 Euro-Celtique S.A. Triazaspiro compounds useful for treating or preventing pain
WO2004000318A2 (en) 2002-06-21 2003-12-31 Cellular Genomics, Inc. Certain amino-substituted monocycles as kinase modulators
GB0218625D0 (en) 2002-08-10 2002-09-18 Astex Technology Ltd Pharmaceutical compounds
MY133311A (en) 2002-09-19 2007-11-30 Schering Corp Novel imidazopyridines as cyclin dependent kinase inhibitors
WO2004039795A2 (en) 2002-10-29 2004-05-13 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Amide compounds for the treatment of hyperlipidemia
US20050026877A1 (en) 2002-12-03 2005-02-03 Novacea, Inc. Pharmaceutical compositions comprising active vitamin D compounds
US7144911B2 (en) 2002-12-31 2006-12-05 Deciphera Pharmaceuticals Llc Anti-inflammatory medicaments
US7202257B2 (en) 2003-12-24 2007-04-10 Deciphera Pharmaceuticals, Llc Anti-inflammatory medicaments
US7169797B2 (en) * 2003-02-14 2007-01-30 Abbott Laboratories Protein-tyrosine phosphatase inhibitors and uses thereof
US7320989B2 (en) * 2003-02-28 2008-01-22 Encysive Pharmaceuticals, Inc. Pyridine, pyrimidine, quinoline, quinazoline, and naphthalene urotensin-II receptor antagonists
AR043633A1 (es) 2003-03-20 2005-08-03 Schering Corp Ligandos de receptores de canabinoides
WO2004099127A1 (en) 2003-05-07 2004-11-18 Novo Nordisk A/S Novel compounds as kinase inhibitors
JP2006525987A (ja) 2003-05-09 2006-11-16 ファルマシア・アンド・アップジョン・カンパニー・エルエルシー 置換ピリミジン誘導体
WO2005000309A2 (en) 2003-06-27 2005-01-06 Ionix Pharmaceuticals Limited Chemical compounds
JPWO2005000356A1 (ja) 2003-06-27 2006-08-03 小野薬品工業株式会社 尿路疾患治療剤
TWI372050B (en) 2003-07-03 2012-09-11 Astex Therapeutics Ltd (morpholin-4-ylmethyl-1h-benzimidazol-2-yl)-1h-pyrazoles
SE0303396D0 (sv) 2003-12-16 2003-12-16 Astrazeneca Ab Chemical compounds
AU2005216904B2 (en) 2004-02-20 2010-11-25 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Modulation of inflammatory and metastatic processes
EP1725528B1 (en) 2004-03-11 2013-05-29 4Sc Ag Sulphonylpyrroles as hdac inhibitors
US20060084691A1 (en) 2004-10-18 2006-04-20 Bilal Piperdi Combined treatment with bortezomib and an epidermal growth factor receptor kinase inhibitor
US8404718B2 (en) 2005-01-21 2013-03-26 Astex Therapeutics Limited Combinations of pyrazole kinase inhibitors
AR053662A1 (es) * 2005-01-21 2007-05-16 Astex Therapeutics Ltd Compuestos de pirazol inhibidores de la actividad quinasa cdk y gsk
US20080161251A1 (en) * 2005-01-21 2008-07-03 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical Compounds
BRPI0606455A (pt) * 2005-01-21 2008-03-11 Astex Therapeutics Ltd compostos farmacêuticos
CA2593475A1 (en) * 2005-01-21 2006-07-27 Astex Therapeutics Limited Combinations of pyrazole kinase inhibitors and further antitumor agents
US20080139620A1 (en) * 2005-01-21 2008-06-12 Astex Therapeutics Limited Pyrazole Derivatives For The Inhibition Of Cdk's And Gsk's
AR054425A1 (es) 2005-01-21 2007-06-27 Astex Therapeutics Ltd Sales de adicion de piperidin 4-il- amida de acido 4-(2,6-dicloro-benzoilamino) 1h-pirazol-3-carboxilico.
EP1847531A4 (en) 2005-02-09 2009-04-22 Takeda Pharmaceutical PYRAZOLE DERIVATIVE
NZ564759A (en) 2005-06-30 2011-08-26 Prosidion Ltd GPCR agonists
WO2007129066A1 (en) 2006-05-05 2007-11-15 Astex Therapeutics Limited 4- (2,6-dichloro-benzoylamino) -1h-pyrazole-3-carboxylic acid (1-methanesulphonyl-piperidin-4-yl) -amide for the treatment of cancer
EP2026805A1 (en) 2006-05-08 2009-02-25 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations of diazole derivatives for cancer treatment
EP2043635A2 (en) 2006-06-29 2009-04-08 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
EP2046330A2 (en) 2006-07-14 2009-04-15 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
US20100004243A1 (en) 2006-07-14 2010-01-07 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical compounds
JP2009543768A (ja) 2006-07-14 2009-12-10 アステックス・セラピューティクス・リミテッド 医薬組み合わせ
US20090318430A1 (en) 2006-07-21 2009-12-24 Astex Therapeutics Limited Medical use of cyclin dependent kinases inhibitors
US8916552B2 (en) 2006-10-12 2014-12-23 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002062804A1 (en) * 2001-02-02 2002-08-15 Pharmacia Italia S.P.A. Oxazolyl-pyrazole derivatives as kinase inhibitors
WO2005012256A1 (en) * 2003-07-22 2005-02-10 Astex Therapeutics Limited 3, 4-disubstituted 1h-pyrazole compounds and their use as cyclin dependent kinases (cdk) and glycogen synthase kinase-3 (gsk-3) modulators
NO20060855L (no) * 2003-07-22 2006-04-21 Astex Therapeuties Ltd 3,4-disubstituerte 1H-pyrazolforbindelser og deres anvendelse som cyklinavhengige kinaser (CDK og glykogensyntasekinase-3 (GSK-3) modulatorer

Also Published As

Publication number Publication date
EP1846393A2 (en) 2007-10-24
US8293767B2 (en) 2012-10-23
IL184504A0 (en) 2007-10-31
US8013163B2 (en) 2011-09-06
TNSN07277A1 (en) 2008-12-31
IL184504A (en) 2015-10-29
AR054425A1 (es) 2007-06-27
NO20073957L (no) 2007-10-12
AU2006207323A1 (en) 2006-07-27
PE20061018A1 (es) 2006-10-31
WO2006077426A3 (en) 2006-09-28
RU2007131100A (ru) 2009-02-27
MA29256B1 (fr) 2008-02-01
US20110274616A1 (en) 2011-11-10
RU2410385C2 (ru) 2011-01-27
MX2007008783A (es) 2007-09-11
CA2593560C (en) 2014-12-09
KR20070107050A (ko) 2007-11-06
EP1846393B1 (en) 2020-02-19
JP5184892B2 (ja) 2013-04-17
PE20091785A1 (es) 2009-12-16
JP2008528470A (ja) 2008-07-31
NZ556471A (en) 2010-12-24
BRPI0606594A2 (pt) 2009-07-07
KR101344691B1 (ko) 2013-12-26
AU2006207323B2 (en) 2012-06-07
WO2006077426A2 (en) 2006-07-27
US20090012124A1 (en) 2009-01-08
SA06260465B1 (ar) 2010-06-20
CA2593560A1 (en) 2006-07-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2006207323B2 (en) 4- (2, 6-dichlorobenzoylamino) -lH-pyrazole-3 -carboxylic acid piperidin- 4 -ylamid acid addition salts as kinase inhibitors
KR101334511B1 (ko) Ｃｄｋ, ｇｓｋ 및 오로라 키나아제의 활성을 조절하는피라졸 화합물
AU2006207313A1 (en) Pyrazole derivatives for the inhibition of CDK&#39; s and GSK&#39; s
US20080139620A1 (en) Pyrazole Derivatives For The Inhibition Of Cdk&#39;s And Gsk&#39;s
US20090318500A1 (en) 4-(2, 6-Dichloro-benzoylamino)-1H-pyrazole-3-carboxylic acid (1-methanesulphonyl-piperidin-4-yl)-amide for the Treatment of Cancer
CN101379058B (zh) 调节cdk、gsk极光激酶活性的吡唑类化合物
CN101146791B (zh) 作为激酶抑制剂的4-(2，6-二氯-苯甲酰基氨基)-1h-吡唑-3-甲酸哌啶-4-基酰胺的酸加成盐

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees