NO339291B1 - Preparat, som kombinerer minst to fytaser for hydrolysen av fytinsyre, anvendelse derav for fremstillingen av et ernæringstilskudd for dyr eller et dyrefor, sett eller sammensetning til foring av dyr samt en fremgangsmåte for hydrolyse av fytinsyre. - Google Patents
Preparat, som kombinerer minst to fytaser for hydrolysen av fytinsyre, anvendelse derav for fremstillingen av et ernæringstilskudd for dyr eller et dyrefor, sett eller sammensetning til foring av dyr samt en fremgangsmåte for hydrolyse av fytinsyre. Download PDFInfo
- Publication number
- NO339291B1 NO339291B1 NO20080701A NO20080701A NO339291B1 NO 339291 B1 NO339291 B1 NO 339291B1 NO 20080701 A NO20080701 A NO 20080701A NO 20080701 A NO20080701 A NO 20080701A NO 339291 B1 NO339291 B1 NO 339291B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- phytase
- hydrolysis
- phytic acid
- phytases
- seq
- Prior art date
Links
- 108010011619 6-Phytase Proteins 0.000 title claims description 255
- IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N Inositol-hexakisphosphate Chemical compound OP(O)(=O)O[C@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N 0.000 title claims description 75
- IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N Phytic acid Natural products OP(O)(=O)OC1C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 75
- 235000002949 phytic acid Nutrition 0.000 title claims description 62
- 229940068041 phytic acid Drugs 0.000 title claims description 54
- 239000000467 phytic acid Substances 0.000 title claims description 54
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 title claims description 50
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 title claims description 50
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims description 39
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 23
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 title claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 11
- 229940085127 phytase Drugs 0.000 claims description 175
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 59
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 44
- 108010080981 3-phytase Proteins 0.000 claims description 19
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 17
- 241000311088 Schwanniomyces Species 0.000 claims description 16
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims description 16
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 claims description 14
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims description 13
- 241001123231 Schwanniomyces capriottii Species 0.000 claims description 12
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims description 11
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 11
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 8
- 235000019621 digestibility Nutrition 0.000 claims description 6
- 150000004712 monophosphates Chemical class 0.000 claims description 5
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 claims description 4
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 claims description 4
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 55
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 21
- 241001676646 Peniophora lycii Species 0.000 description 18
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 13
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 12
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 11
- 241001136494 Talaromyces funiculosus Species 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 8
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 7
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 7
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 7
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 7
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 7
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 5
- 229910052816 inorganic phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 5
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 5
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- -1 myoinositol phosphates Chemical class 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 3
- CTPQAXVNYGZUAJ-UHFFFAOYSA-N (2-hydroxy-3,4,5,6-tetraphosphonooxycyclohexyl) dihydrogen phosphate Chemical compound OC1C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C1OP(O)(O)=O CTPQAXVNYGZUAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000228195 Aspergillus ficuum Species 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 241001123650 Schwanniomyces occidentalis Species 0.000 description 2
- FENRSEGZMITUEF-ATTCVCFYSA-E [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].OP(=O)([O-])O[C@@H]1[C@@H](OP(=O)([O-])[O-])[C@H](OP(=O)(O)[O-])[C@H](OP(=O)([O-])[O-])[C@H](OP(=O)(O)[O-])[C@H]1OP(=O)([O-])[O-] Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].OP(=O)([O-])O[C@@H]1[C@@H](OP(=O)([O-])[O-])[C@H](OP(=O)(O)[O-])[C@H](OP(=O)([O-])[O-])[C@H](OP(=O)(O)[O-])[C@H]1OP(=O)([O-])[O-] FENRSEGZMITUEF-ATTCVCFYSA-E 0.000 description 2
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 229940083982 sodium phytate Drugs 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 241001660906 Agrocybe pediades Species 0.000 description 1
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 241000222178 Candida tropicalis Species 0.000 description 1
- 241001676372 Ceriporia sp. Species 0.000 description 1
- 241000235035 Debaryomyces Species 0.000 description 1
- 241000147019 Enterobacter sp. Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 241000588754 Klebsiella sp. Species 0.000 description 1
- 244000285963 Kluyveromyces fragilis Species 0.000 description 1
- 235000014663 Kluyveromyces fragilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 1
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 1
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 description 1
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 description 1
- 241001676647 Trametes pubescens Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 241000222124 [Candida] boidinii Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- QGAVSDVURUSLQK-UHFFFAOYSA-N ammonium heptamolybdate Chemical compound N.N.N.N.N.N.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.[Mo].[Mo].[Mo].[Mo].[Mo].[Mo].[Mo] QGAVSDVURUSLQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- 235000019728 animal nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 235000004458 antinutrient Nutrition 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000030609 dephosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006209 dephosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-M dihydrogenphosphate Chemical compound OP(O)([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012851 eutrophication Methods 0.000 description 1
- HOXINJBQVZWYGZ-UHFFFAOYSA-N fenbutatin oxide Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(C)(C)C[Sn](O[Sn](CC(C)(C)C=1C=CC=CC=1)(CC(C)(C)C=1C=CC=CC=1)CC(C)(C)C=1C=CC=CC=1)(CC(C)(C)C=1C=CC=CC=1)CC(C)(C)C1=CC=CC=C1 HOXINJBQVZWYGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000004459 forage Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 210000004317 gizzard Anatomy 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003405 ileum Anatomy 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000009309 intensive farming Methods 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 description 1
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003017 phosphorus Chemical class 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000003751 purification from natural source Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000012868 site-directed mutagenesis technique Methods 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000002352 surface water Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P3/00—Preparation of elements or inorganic compounds except carbon dioxide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/18—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic polyhydric
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Public Health (AREA)
- Hematology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Obesity (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Description
Oppfinnelsen vedrører den synergistiske effekten av kombinasjonen av fytaser på hydrolysen av fytinsyren.
Fytinsyresalter (myoinositolheksakisfosfat) eller fytater (myoinositolheksakis-dihydrogenfosfat) er hovedlagringsformen for fosfor i kornsorter, belgeplanter og oljegivende planter. De utgjør slik hovedkilden for fosfor i plantebaserte dyrefortyper, som er hovedkomponentene i diettene til énmagede dyr (fjærkre og svin). Den biologiske tilgjengeligheten av dette fosforet i fortyper er likevel begrenset for disse dyrene. Dette skyldes at de ikke har de tarmenzymene som degraderer fytater i tilstrekkelig mengde for å tillate hydrolyse av fytater og slik tilveiebringe mengdene av uorganisk fosfat som er nødvendige for dem. I tillegg er fytinsyre et anti-ernæringsstoff som danner komplekser med proteiner og ioner (Fe<3+>, Ca<2+>, Zn<2+>, Mg<2+>) og som slik reduserer tilgjengeligheten av disse elementene.
Forrasjonene for fjærkre og svin må derfor suppleres med uorganisk fosfat, mens fosforet i fytasene blir utskilt og bidrar til eutrofieringen av overflatevann i områder der det foregår intensivt oppdrett av énmagede dyr.
Fytaser (myoinositolheksakisfosfat-3- og -6-fosfohydrolaser EC 3.1.3.8 og 3.1.3.26) er en del av familien av histidinsyrefosfataser. Fytaser er heksakisfosfohydro-laser som hydrolyserer fosfoesterbindingene som er til stede i fytinsyren eller fytatet. Slik katalyserer de hydrolysen av myoinositolheksakisfosfat (fytinsyre, InsP6) til uorganiske monofosfater og til myoinositolfosfater med en lavere grad av fosforylering (InsP5til InsPi) og til fritt myoinositol i visse tilfeller.
Det eksiterer to underklasser av fytaser, som bare differensieres ved posisjonen til det første fosfatet som ble hydrolysert. 3-fytasene (EC 3.1.3.8) hydrolyserer fosfatet på 3-posisjonen og 6-fytasene (EC 3.1.3.26) hydrolyserer fosfatet på 6-posisjonen.
Disse enzymene, anvendt som tilsetningsstoffer i dyrefor, gjør det på den ene siden mulig å øke tilgjengeligheten av fytinfosforet og på den andre siden å forbedre fordøyeligheten av foret. I tillegg minsker frigjøringen av fytinfosfat vesentlig kostnadene som skyldes tilsetning av fosfat, samt forurensningen forårsaket av et overskudd av utskilte fosfater.
Fytasene blir produsert av en rekke forskjellige organismer: planter, dyr og spesielt mikroorganismer. Disse fytasene har svært forskjellige biokjemiske særtrekk, spesielt deres aktivitet i forhold til pH og deres temperaturstabilitet. I tillegg oppviser disse enzymene forskjeller på nivået: (a) av deres effektivitet i hydrolysering av alle fosfatene, (b) deres stereospesifisitet og (c) deres affinitet med hensyn til inositolfosfater.
Blant fytaseproduserende mikroorganismer vil de følgende bli nevnt spesielt: soppene av slektene Aspergillus, Penicilluim, Mucor og Rhizopus, bakteriene: Pseudomonas sp. Klebsiella sp., Escherichia coli, Enterobacter sp., Bacillus subtilis og gjær: Saccharomyces cerevisiae, Candida tropicalis, Torulopsis candida, Debaryomyces castellii, Debaryomyces occidentalis (synonym Schwanniomyces castellii), Kluyveromyces fragilis.
Utallige fytaser fra mikroorganismer har allerede blitt studert og anvendt i ulike agro-industrielle applikasjoner. Effektiviteten til disse enzymene i foret og i fordøyelsen hos dyret avhenger av deres evne til å opprettholde deres potensiale, uavhengig av de forskjellige betingelsene som gjelder i trinnene for fremstilling av foret og i fordøyelses-kanalen. Fremstilling av disse forene krever term ores isten te enzymer, mens pH-verdiene varierer for eksempel fra 5,02, 2,75, 6,28, 6,63 og 5,98 i løpet av passasjen gjennom de ulike avdelingene krås, magen, duodenum, jejunum og ileum hos fjærkre.
De fleste av fytasene som per i dag er beskrevet, hydrolyserer kun delvis fytinsyre og noen med svært sen kinetikk. Slik hydrolyserer utallige fytaser kun 5 fosfatbindinger på fytinsyre, det vil si 83 % av det potensielle fosforet.
Per i dag, blant gjærtypene, har kun fytasen fra gjæren Schwanniomyces occidentalis blitt beskrevet som å være i stand til å hydrolysere alle fosfatbindingene i fytat (EP 0 699 762 og Segueilha L, Lambrechts C, Boze H., Moulin G., Galzy P., (1992) Purification and properties of a phytase from Schwanniomyces castellii, J. Ferm. Bioeng., 74, 7-11).
Under eksperimentelle betingelser oppnår man likevel ikke fullstendig hydrolyse av fytat eller av fytinsyre.
For å oppnå en mer effektiv hydrolyse av fytinsyre har det derfor blitt foreslått å kombinere forskjellige fytaser.
WO 98/30681 beskriver kombinasjonen av fytaser som har forskjellige stereo-spesifisiteter, og spesielt kombinasjonen av 3-fytase og 6-fytase. Dette dokumentet beskriver spesielt kombinasjonen av en 6-fytase fra Peniophora lycii og en 3-fytase fra Aspergillus niger (phytase «Novo»).
US 6183 740 beskriver også kombinasjonen av fytaser med forskjellige spesifisiteter og også kombinasjonen med andre, sure fosfataser.
WO 02/098442 beskriver preparater med fytaser, spesielt fytaser fra Aspergillus ficuum eller Aspergillus niger.
Fullstendig hydrolys av fytinsyre til fosfat og inositol blir imidlertid ikke observert.
Problemet som skal løses ved foreliggende oppfinnelse, består i å forbedre hastigheten og effektiviteten av hydrolyse av fytinsyre for å oppnå fullstendig hydrolyse av fytinsyre i forskjellige agro-industrielle applikasjoner.
Dette problem blir løst ved preparatene og fremgangsmåtene ifølge foreliggende oppfinnelse i hvilken man kombinerer minst to spesifikke fytaser. På en fordelaktig måte tillater preparatene ifølge foreliggende oppfinnelse fullstendig hydrolyse av alle fosfatgruppene på fytinsyre takket være den synergistiske effekten som blir observert. Fordelaktig er preparatene ifølge foreliggende oppfinnelse aktive i et bredt pH-område som er passende for agro-industrielle applikasjoner av fytaser, og spesielt i anvendelser på området med dyrefor. En annen fordel ved foreliggende oppfinnelse er at fytasene som er anvendt er termostabile.
Beskrivelse av oppfinnelsen
Et mål for foreliggende oppfinnelse er et preparat som er kjennetegnet ved at det kombinerer minst to fytaser for hydrolysen av fytinsyren (myoinositol-1,2,3,4,5,6-heksakisfosfat), som omfatter: en første fytase som oppviser minst 80 % identitet med fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 1 eller som oppviser minst 80 % identitet med fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 2 som er en 3-fytase som katalyserer hydrolysen av de seks fosfatbindingene i fytinsyre;
en andre fytase som oppviser minst 80 % identitet med fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 3 som er en 3-fytase som katalyserer hydrolysen av minst fem fosfatbindinger i fytinsyre.
Fortrinnsvis har den første fytasen et temperaturoptimum på mellom 55 °C og
80 °C og et pH-optimum på mellom pH 3,5 og pH 5.
I en foretrukket utførelsesform er den første fytasen en fytase fra gjæren Schwanniomyces castellii eller en fytase fra gjæren Debaryomyces castellii.
I en annen foretrukket utførelsesform er den første fytasen fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 1 eller fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 2.
Fortrinnsvis har den andre fytasen et temperaturoptimum på mellom 50 °C og 60 °C og et pH-optimum på mellom pH 2 og pH 6.
I en foretrukket utførelsesform er den andre fytasen en fytase fra Aspergillus niger.
I en annen foretrukket utførelsesform er den andre fytasen fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 3.
Fortrinnsvis består preparatene ifølge oppfinnelsen av et ernæringstilskudd for dyr eller av et dyrefor.
Et mål for foreliggende oppfinnelse er også anvendelsen av et preparat ifølge oppfinnelsen i fremstillingen av et ernæringstilskudd for dyr eller av et dyrefor.
Et mål for foreliggende oppfinnelse er også anvendelsen av preparatet ifølge oppfinnelsen for å øke tilgjengeligheten av fytinfosfor og forbedre fordøyeligheten av dyrefortyper.
Foreliggende oppfinnelse vedrører også en fremgangsmåte for hydrolyse av fytinsyre (myoinositol-l,2,3,4,5,6-heksakisfosfat) til uorganisk monofosfat, til myoinositoler med en lavere grad av fosforylering og til fritt myoinositol, som omfatter de følgende trinnene: man tilveiebringer en første fytase som oppviser minst 80 % identitet med fytasen
ifølge SEKV. ID. NR.: 1 eller som oppviser minst 80 % identitet med fytasen ifølge
SEKV. ID. NR.: 2,
man tilveiebringer en andre fytase som oppviser minst 80 % identitet med fytasen
ifølge SEKV. ID. NR.: 3,
man bringer samtidig fytinsyren i kontakt med den første fytasen og den andre fytasen.
Fortrinnsvis er den første fytasen en 3-fytase som katalyserer hydrolysen av de seks fosfatbindingene på fytinsyre.
Fortrinnsvis har den første fytasen et temperaturoptimum på mellom 55 °C og
80 °C og en pH-optimum på mellom pH 3,5 og pH 5.
I en foretrukket utførelsesform er den første fytasen en fytase fra gjærtypen Schwanniomyces castellii eller fytase fra gjærtypen Debaryomyces castellii.
I en spesiell fordelaktig utførelsesform er den første fytasen fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 1 eller fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 2.
Fortrinnsvis er den andre fytasen en 3-fytase som katalyserer hydrolysen av minst fem fosfatbindinger på fytinsyre.
Fortrinnsvis har den andre fytasen et temperaturoptimum på mellom 50 °C og
60 °C og et pH-optimum på mellom pH 2 og pH 6.
I en fordelaktig utførelsesform er den andre fytasen en fytase fra Aspergillus niger.
I en spesielt fordelaktig utførelsesform er den andre fytasen fytasen ifølge SEKV.
ID. NR.: 3.
Et mål for foreliggende oppfinnelse er også et sett eller en sammensetning for foring av dyr som omfatter: Fytasen fra Schwanniomyces castellii ifølge SEKV. ID. NR.: 1, eller fytasen fra
Debaryomyces castellii ifølge SEKV. ID. NR.: 2,
fytasen fra Aspergillus niger ifølge SEKV. ID. NR.: 3.
Preparatene ifølge oppfinnelsen kombinerer en første fytase som oppviser minst 80 % identitet med fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 1 eller som oppviser minst 80 % identitet med fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 2, og en andre fytase som oppviser minst 80 % identitet med fytasen ifølge SEKV. ID. NR. 3.
Pa en overraskende måte gjør denne spesifikke kombinasjon av fytaser det mulig å oppnå en synergistisk effekt på hydrolysen av fytinsyre. Preparatene ifølge oppfinnelsen katalyserer dermed en rask og fullstendig hydrolyse av fytinsyre i et bredt pH-område.
Man forstår med «fytase» myoinositolhekskisfosfatfosfohydrolaser (EC 3.1.3.8 og 3.1.3.26). Disse enzymene katalyserer hydrolysen av myoinositol 1,2,3,4,5,6-heksakisfosfat (fytinsyre InsP6) til uorganiske monofosfater og til myoinositolfosfat med en lavere grad av fosforylering (InsP5til InsPi) og til fritt myoinositol forvisse fytaser.
Preparatene ifølge oppfinnelsen omfatter en første fytase som oppviser minst
80 % identitet med fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 1, eller som oppviser minst 80 % identitet med fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 2.
Fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 1 er en fytase fra gjærtypen Schwanniomyces castellii, mens fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 2 er en fytase fra gjærtypen Debaryomyces castellii.
Disse fytasene har svært like katalytiske egenskaper og kan derfor brukes om hverandre i kombinasjonene av fytaser ifølge oppfinnelsen.
Fortrinnsvis oppviser den første fytasen minst 80 %, 90 %, 95 %, 98 % og fortrinnsvis minst 99 % av aminosyrene som er identiske med fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 1 eller oppviser minst 80 %, 90 %, 95 %, 98 % og fortrinnsvis minst 99 % av aminosyrene som er identiske med fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 2.
Fortrinnsvis har den første fytasen de samme egenskapene og spesielt de samme katalytiske egenskapene som fytasene ifølge SEKV. ID. NR.: 1 og SEKV. ID. NR.: 2. Fortrinnsvis er den første fytasen er isolert fra andre stammer av Schwanniomyces castellii eller fra Debaryomyces castellii eller fra andre gjærtyper. Alternativt kan den første fytasen for eksempel bli fremskaffet ved hjelp av teknikker for seterettet mutagenese.
Med "aminosyrer som er identiske" forstår man aminosyrer som ikke varierer mellom to sekvenser. Den første fytasen kan oppvise en delesjon, en addisjon eller en substitusjon av minst én aminosyre i forhold til fytasene ifølge SEKV. ID. NR.:1 eller SEKV.
ID. NR.: 2.
Fytasene ifølge SEKV. ID. NR.: 1 og SEKV. ID. NR.: 2 har felles, katalytiske egenskaper. Ifølge oppfinnelsen oppviser den første fytasen som blir benyttet i preparatene og fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen en grad av identitet med fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 1 eller SEKV. ID. NR.: 2 og konserverer disse felles, katalytiske egenskapene.
Fortrinnsvis har den første fytasen aktivitet som 3-fytase. Fortrinnsvis katalyserer den første fytasen hydrolysen av de seks fosfatbindingene på fytinsyre.
3-fytasene (EC 3.1.3.8) hydrolyserer først fosfatet på 3-posisjonen
En fytase som er i stand til å hydrolysere alle fosfatbindingene på fytinsyre (1-,
2-, 3-, 4-, 5- og 6-posisjoner) katalyserer hydrolysen av myoinositol-1,2,3,4,5,6-heksakisfosfat (fytinsyre, InsP6) til uorganiske monofosfater og til fritt myoinositol.
Mange fytaser hydrolyserer kun 5 fosfatbindinger på fytinsyre, dvs. 83 % av det potensielle fosforet. Disse enzymene hydrolyserer fytinsyre til myoinositolmonofosfat, men ikke til fritt myoinositol.
Med "aktivitet for fytasen" forstår man den enzymatiske aktiviteten for fytasen. Denne aktiviteten blir uttrykt i internasjonale enheter (LU.) per milligram protein. En LU. med enzymatisk aktivitet er den katalytiske evnen til å omdanne et mikromol substrat per tidsenhet, ved en gitt pH og ved en gitt temperatur.
Fortrinnsvis har den første fytasen et temperaturoptimum på mellom 55 °C og 80 °C og en pH-optimum på mellom pH 3,5 og pH 5.
I en foretrukket utførelsesform er den første fytasen en fytase fra gjærtypen Schwanniomyces castellii eller en fytase fra gjærtypen Debaryomyces castellii.
I en annen spesielt fordelaktig utførelsesform er den første fytasen fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 1 eller fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 2.
Preparatene ifølge oppfinnelsen omfatter minst én andre fytase som oppviser minst 80 % identitet med fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 3.
Fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 3 er en fytase fra den filamentøse soppen Aspergillus niger.
Fortrinnsvis oppviser den andre fytasen mint 80 %, 90 %, 95 %, 98 % og fortrinnsvis minst 99 % av aminosyrene som er identiske med fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 3.
Den andre fytasen konserverer fortrinnsvis egenskapene og spesielt de katalytiske egenskapene til fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 3. Fortrinnsvis blir denne fytasen isolert fra andre stammer av Aspergillus niger eller fra andre filamentøse sopper. Alternativt kan denne fytasen bli fremskaffet ved hjelp av for eksempel teknikker for seterettet mutagenese.
Med "aminosyrer som er identiske" forstår man aminosyrer som ikke varierer mellom to sekvenser. Den andre fytasen kan oppvise en delesjon, en addisjon eller en substitusjon på minst én aminosyre med hensyn til fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 3.
Ifølge oppfinnelsen oppviser den andre fytasen som blir benyttet i preparatene og fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen derfor en grad av identitet med fytasen ifølge SEKV.
ID. NR.: 3 og konserverer de katalytiske egenskapene til den siste.
Fortrinnsvis er den andre fytasen er en 3-fytase som katalyserer hydrolysen av minst fem fosfatbindinger på fytinsyre.
Fortrinnsvis har den andre fytasen et temperaturoptimum på mellom 50 °C og
60 °C og et pH-optimum på mellom pH 2 og pH 6. Enda mer foretrukket har den andre fytasen et første pH-optimum på mellom pH 2,5 og 3,5 og et andre pH-optimum på mellom pH 4,5 og 5,5.
I en foretrukket utførelsesform er den andre fytasen en fytase fra Aspergillus niger. I en fordelaktig utførelsesform er den andre fytasen fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 3.
Den enzymatiske aktiviteten til en fytase varierer spesielt som en funksjon av pH. Fytasene har dermed pH-områder (eller sfærer) der deres enzymatiske aktivitet er høyere eller optimal. Med "område" forstår man en gitt pH-sfære eller -intervall. To fytaser har enzymatiske aktiviteter i komplementære pH-områder når disse fytasene har en aktivitet i ulike pH-områder. Fortrinnsvis overlapper, eller utfyller disse områdene hverandre delvis. Fytasene har typisk en høyere enzymatisk aktivitet ved en sur pH. To fytaser som har komplementære pH-områder har dermed, for eksempel, en maksimal, enzymatisk aktivitet mellom pH 2 og pH 4 for den første fytasen og en maksimal, enzymatisk aktivitet mellom pH 4 og pH 6 for den andre fytasen. I preparatene og fremgangsmåtene ifølge foreliggende oppfinnelse har den første og den andre fytasen fortrinnsvis komplementære pH-områder eller komplementære pH-optimum. Preparatene og fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen muliggjør slik hydrolyse av fytinsyre i et bredt pH-område.
Fremgangsmåtene for måling, og identifisering av graden av identitet mellom polypeptider er kjent for fagfolk på området. Man kan for eksempel benytte Vektor NTi 9.1.0, sammenstillingsprogrammet AlignX (Clustal W algoritme) (Invitrogen INFORMAX, http:// www. invitroqen. com). Fortrinnsvis anvender man standard innstillingene.
Fytasene i preparatene og fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen blir isolert og renset fra deres naturlige miljø. Fytasene kan bli fremstilt ved hjelp av forskjellige fremgangsmåter. Disse fremgangsmåtene er spesielt rensing fra naturlige kilder, slik som celler som naturlig uttrykker disse fytasene, rekombinant fremstilling av fytaser ved hjelp av egnede vertceller og etterfølgende rensing derav, fremstilling ved hjelp av kjemisk syntese eller, til slutt, en kombinasjon av disse forskjellige tilnærmingene. Disse forskjellige fremgangsmåtene for fremstilling er velkjente for fagfolk på området. Dermed kan fytasene som blir benyttet i preparatene og fremgangsmåtene ifølge foreliggende oppfinnelse bli isolert fra Schwanniomyces castellii, fra Debaryomyces castellii eller Aspergillus niger. I en annen utførelsesform blir fytasene ifølge foreliggende oppfinnelse isolert fra rekombinante vertsorganismer.
Fortrinnsvis består preparatene ifølge oppfinnelsen av et ernæringstilskudd for dyr eller av dyrefor.
Målet for foreliggende oppfinnelse er også anvendelsen av et preparat ifølge oppfinnelsen for fremstillingen av et ernæringstilskudd for dyr eller av et dyrefor.
Foreliggende oppfinnelse vedrører derfor forti Isetn inge r som tilveiebringer en fytaseaktivitet. Tilveiebringelsen av denne typen av enzymatisk aktivitet gjør det mulig å forbedre fordøyeligheten av foret og forbedre dets ernæringsverdi.
Man forstår med "ernæringstilskudd" et stoff som forsettelig er tilsatt til et for, generelt i små mengder, for å forbedre dens ernæringskarakteristika eller dets fordøyelighet. Ernæringstilskuddene for dyr kan for eksempel inneholde vitaminer, mineralsalter, aminosyrer og enzymer.
Den foreliggende oppfinnelsen vedrører også dyrefor. Disse forene foreligger vanligvis i form av mel eller granuler hvor tilskuddene ifølge oppfinnelsen er inkorporert. Man forstår med "for" alt som kan bli benyttet for å fore dyr. For den intensive avlen av dyr, omfatter dyrefortypene vanligvis en ernæringsbase og ernæringstilskudd. Man forstår med "ernæringsbase" det som utgjør det meste av dyrets forinntak, som for eksempel består av en blanding av kornblanding, proteiner og fett-typer av animalsk og/eller vegetabilsk opprinnelse.
Ernæringsbasen for dyr er tilpasset til kostholdet til disse dyrene og velkjente for fagfolk på området. Vanligvis omfatter disse ernæringsbasene for eksempel mais, hvete, erter og soyabønner. Disse ernæringsbasene er tilpasset behovene for de ulike dyreartene som de er ment for. Disse ernæringsbasene kan allerede inneholde ernæringstilskudd, slik som vitaminer, mineralsalter og aminosyrer.
I en foretrukket utførelsesform vedrører oppfinnelsen fortyper for énmagede dyr, og spesielt for fjærkre og svin. Fjærkre omfatter spesielt verpehøner, kyllinger for kjøttproduksjon, kalkuner og ender. Svinene omfatter spesielt voksende og ferdig vokste griser og også grisunger.
Et mål for foreliggende oppfinnelse er også anvendelsen av et preparat ifølge oppfinnelsen for å øke tilgjengeligheten av fytinfosfor og forbedre fordøyeligheten av dyrefor.
Preparatene og fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen kombinerer en første fytase som er i stand til å hydrolyse alle fosfatbindingene på fytinsyre, som er valgt fra fytaser fra Schwanniomyces castellii og fytaser fra Debaryomyces castellii, og en andre fytase som er i stand til hydrolysere minst fem fosfatbindinger på fytinsyre og som har en enzymatisk aktivitet i et pH-område som er komplementært med pH-området til den første fytasen.
Figurer
Figur 1: Sammenligning av kinetikken for hydrolyse og fytinsyre ved ulike pH-verdier for de 6 fytasene alene eller kombinert to og to. Resultatene er uttrykt som % av teoretiske fosfater frigjort. Figur 2: Prosentvis hydrolyse av fytinsyre ved de ulike fytasene etter reaksjon i 120 minutter. (A) fytaser alene, (B) kombinerte fytaser. De prikkede linjene tilsvarer hydrolysen av 5 fosfatbindinger. Figur 3: Sammenligning av utgangshastighetene for hydrolyse av fytinsyre (umol.mr^min"<1>) for 6 fytaser ved ulike pH-verdier. (A) fytaser alene, (B) kombinerte fytaser. Hastighetene er beregnet i løpet av de første 10 minuttene i reaksjonen.
EKSEMPLER
Materialer og metoder
1. Fytaseopphav
■ Aspergillus niger Natuphos (AN): lot R2503 eller lot 057NPHO2
Wim van Hartingsveldt, Cora M. J. van Zeijl, G. Marian Harteveld, Robin J. Gouka, Marjon E.G. Suykerbuyk, Ruud G. M. Luiten, Peter A. van Paridon, Gerard C. M. Selten. Annemarie E. Veenstra, Robert F. M. van Gorcom og Cees A. M. J. van den Hondel, Cloning, characterization and overexpression of the phytase-encoding gene (phyA) of Aspergillus niger. Gene 127, (1) 87-94 (1993)
■ Peniophora lycii (PL): lot 172NHS02
Lassens, S.F., Breinholt, J., Ostergaard, P.R., Brugger, R, Bischoff, A., Wyss, M. og Fuglsang, CC, Expression, gene cloning, and characterization of five novel phytases from four basidimomycete fungi: Peniphora lycii, Agrocybe pediades, a Ceriporia sp., and Trametes pubescens. Appl. Environ. Microbiol. 67 (10), 4701-4707 (2001)
■ Penicillium funiculosum (PF): Godo A1346 lot 1301
WO 03054199
■ Hvete (B): Sigma-referanse P1259.
WO 0183763 ■ Schwanniomyces castellii (SC): fremstilt i Candida boidinii lot 10059 CN 25 EP 0931837
■ Debaryomyces cas£e///7'-stamme CBS 2923 (DC).
2. Enzymatisk fremgangsmåte
Fytaseaktiviteten måles ved å følge frigjøringen av uorganisk fosfat over tid.
Aktiviteten måles i nærvær av 8 mM natriumfytat (Sigma) løst i en natrium-acetatbuffer på 200 mM, pH 5,5, ved 37 °C (5 volumer). Reaksjonen utløstes ved tilsetningen av det enzymatiske ekstraktet (1 volum). Reaksjonen stoppes ved surgjøring av mediet med 20 % trikloreddiksyre (1 volum med reaksjonsmedium + 1 volum syre). Mengden av fosfat som blir frigjort bestemmes etter ulike inkuberingstider.
Et enzymatisk enhet (U) er definert som mengden av enzym som frigjør et^mol med uorganisk fosfat i løpet av ett minutt.
3. Betingelser for hydrolyse av fytater ved ulike pH-verdier
Hydrolysen utføres ved 40 °C i 10 ml 250 mM acetatbuffer med pH-verdier fra 4 til 6,5 eller med 200 mM glysinbuffer ved pH 3, inneholdende: 0,340 mM natriumfytat, 0,04 eller 0,08 U/ml fytase. Prøver tas ved ulike tidspunkter under 120 minutter. Reaksjonen stoppes ved tilsetningen av trikloreddiksyre.
Fosfatene analyseres direkte uten fortynning.
4. Fosfatanalyse
Mengden av fosfat frigjort visualiseres ved hjelp av kolorimetri. Visualiserings-løsningen, som er fremstilt ekstemporært, inneholder jernsulfat (380 mM, 1 volum) og ammoniumheptamolybdat (12 mM, 4 volumer). Absorbansen måles ved 700 nm etter visualisering i 30 minutter ved romtemperatur (1 volum med reaksjonsmedium + 1 volum visualiseringsløsning), ved å benytte et UV/synlig spektrofotometer (Beckmann DU 530).
En kalibreringskurve blir etablert på forhånd med kaliumdihydrogenfosfat.
Resultater
1. Fytaser testet
Fytasene som er testet er forskjellige fra hverandre i forhold til flere forskjellige kriterier: (1) biokjemiske karakteristika (pH-optimum, stereospesifisitet: 3-, 4- eller 6-fytaser), (2) antall fosfatbindinger som blir hydrolysert.
Alle disse fytasene har et pH-optimum for hydrolyse som ligger nærme 5, likevel har AN- og PL-fytasene et andre pH-optimum på 2,5. Tre hydrolyserer fullstendig fosfatene (SC, DC, hvete). Posisjonen som blir hydrolysert først er enten 3-posisjonen (AN, PL, DC) eller 6-posisjonen (PL), eller 4-posisjonen (hvete) (tabell 1).
(1) Ullah, A.H.J, og Sethumadhavan, K., (2003) PhyA gene product of Aspergillus ficuum og Peniophora lycii produces dissimilar phytases. Biochemical and Biophysical Research Communications 303: 463-468 (2) WO 03054199 arkivert 13. juni 2003, Bohlmann, R., Moussu, F., Nore, O., Pierrard, J., Saunier, D., Testeniere, O., New polynucleotide encoding fungal phytase, useful as feed additive to improve phoshate assimilation, also new strain of Peniciliium. (3) Nakano, T., Joh, T., Narita, K., Hayakawa, T. (2000) The pathway of dephosphorylation of myo-Inositol Hexakisphosphate by Phytases from Wheat Brån of Tricicum aestivum L. cv Nourin#61. Biosci. Biotechnol. Biochem., 64:995-1003 (4) Segueilha, L, Lambrechts, C, Boze, H., Moulin, G. and Galzy, P. (1992) Purification and Properties of the Phytase from Schwanniomyces castellii, J. Ferment. Bioeng. 74(1) : 7-11. 2. Sammenligning av effektivitetene av fytinsyrehydrolyse ved 6 fytaser ved ulike pH-verdier
Undersøkelsen ble utført i nærvær av 0,340 mM fytat. Mengden enzym introdusert tilsvarer 0,08 U/ml med fytase, målt ved standardbetingelser ved pH 5,5. pH-verdiene som er testet er 3, 4, 5,5, 6, 6,5. Reaksjonen ble fulgt i 120 minutter. Prøver ble tatt over tid, reaksjonen ble stoppet ved surgjøring, og fosfatene ble analysert ved hjelp av kolorimetri.
Sammenligningen av de ulike fytasene ble utført som en funksjon av hydrolyseeffektiviteten, dvs. prosentandelen av fosfat frigjort relativt i forhold til den teoretiske prosentandelen. Resultatene er presentert i figur IA.
Ifølge litteraturen er 4 fytaser (PF, SC, DC, B) i stand til fullstendig å hydrolysere fytinsyre til inositol og fosfat, 2 fytaser (AN og PL) hydrolyserer kun 5 bindinger, dvs.
83 % av det potensielle fosforet.
Ved betingelsene som ble testet ved pH 3 og pH 4, hydrolyserte 4 fytaser (SC, PF, DC og PL) minst 80 % av fytinsyren. Hvete-fytasen er så vidt aktiv ved pH 3 og pH 4. For pH-verdier over pH 5,5, hydrolyserer ingen fytase mer enn 70 % av fytinsyren. PF- og DC-fytasene er så vidt aktive ved pH 6,5. AN-fytasen er den minst sensitive overfor variasjoner i pH, men den frigjør kun 60 til 70 % av fosfatene, dvs. verdier 10 til 20 % lavere enn de som var forventet (fig. 2A).
Sammenligningen av utgangshastighetene for fosfatfrigjøring viser en stor del heterogenitet mellom fytasene (fig. 3A). Den mest effektive fytasen ved sur pH er den fra Schwanniomyces castellii, mens den fra A. nigerer den mest effektive ved pH-verdier over 5,5. Hvete-fytasen er den minst effektive uavhengig av betingelsene som ble testet.
3. Påvirkning av pH på hastigheten av fosfatfrigjøring i nærvær av kombinerte fytaser
For å forbedre effektiviteten av hydrolysen av fytinsyre, ble flere kombinasjoner av to fytaser testet. Hver fytase blir introdusert ved 0,04 U/ml, dvs. en totalverdi på 0,08 U/ml i reaksjonsrøret. DC-fytasen, som hydrolyserer 6 fosfatbindinger, ble systematisk testet i kombinasjon med de andre fytasene, som hydrolyserer 5 eller 6 fosfatbindinger. To andre kombinasjoner ble også anvendt for å sammenligne, for det først en annen kombinasjon av fytaser som er i stand til å frigjøre 6 og 5 fosfater (SC/AN) og, for det andre, to fytaser, PL/AN, som har svært lignende biokjemiske karakteristika (fig. IB).
En totalanalyse gjør det mulig å vise at kombinasjon av to fytaser for det meste fremmer effektiviteten av fytinsyrehydrolyse. Ved de samme betingelsene hydrolyserer ingen fytase fullstendig fytinsyre, for 2 blandinger (DC/AN og SC/AN), blir 100 % til 85 % av fosfatbindingene hydrolysert uavhengig av pH. For DC/PL-kombinasjonen kan man også observere en økning på omtrent 20 % ved sure pH-verdier. Kombinasjonene PL/AN, DC/PF og DC/SC tilveiebringer så vidt forbedring (fig. 2B).
Sammenligning av utgangshastighetene for hydrolyse viser at en sterk synergistisk effekt eksisterer for kombinasjonen SC/AN og for kombinasjonen DC/AN sammenlignet med fytasen alene og sammenlignet med de andre fytasekombinasjonene. De pH-relaterte forskjellene i hydrolysehastigheter ble minimalisert når kombinasjonen ble benyttet. De andre kombinasjonene er mindre effektive, den synergistiske effekten er kun synlig forvisse pH-verdier, for eksempel for DC/PL ved pH 3 og pH 4 (fig. 3).
Den synergistiske effekten ser i stor grad ut til å skyldes evnen til fytasene til å hydrolysere alle fosfatene. I tillegg vedrører de beste kombinasjonene fytaser som har komplementære pH-optimum for aktivitet (2,5-4,5). Det bør likevel påpekes at det er så vidt synergistisk effekt for fytasene som er minst effektive når det gjelder hydrolyseeffektivitet, slik som den for hvete og fra Penicillium funiculosum. 4. Påvirkning av konsentrasjonene og andelen av fytase på effektiviteten av hydrolysen av fytinsyre.
Vi har sammenlignet påvirkningen av mengden av fytase (doseeffekter) og av andelen av blandingen av fytaser på fytinsyrehydrolyser. Tre kombinasjoner ble benyttet, DC/AN, DC/PL og AN/PL, og 2 fytasekonsentrasjoner (0,04 og 0,08 U/ml) ble testet (tabell 2 og 3).
Verdiene i parentesene representerer forholdet mellom verdiene oppnådd med 0,04 U/ml og de i nærvær av 0,08 U/ml.
Prosentdelen av hydrolyse i løpet av undersøkelsen med blandingen av enzymer (total konsentrasjon 0,08 U/ml) er høyere enn de som er bestemt med enzymene alene (0,08 U/ml) og nær 100 % for blandingene AN/DC og PL/DC, i et pH-område som varierer fra 3 til 6. Blandingen AN/PL øker ikke signifikant prosentdelen av hydrolyse observert med hver fytase tatt separat. Reduksjonen med en faktor 2 i den totale mengden som er tilveiebrakt (0,04 U/ml) induserer ikke en 2-ganger minskning i frigjort fosfat. I visse tilfeller, ved AN/DC og PL/DC ved pH 4 og pH 5,5, og AN/PL ved pH 4 til 6, så er prosentdelene av hydrolyse ekvivalente med de som er observert i nærvær av 0,08 U/ml (tabell 3).
Verdiene i parentesene representerer forholdet mellom hastigheten oppnådd med 0, 04 U/ ml og de i nærvær av 0, 08 U/ ml.
Kombinasjonen av fytase gjør det derfor mulig å minske mengden av fytase i reaksjonsmediet med en faktor på to, mens man opprettholder en identisk hydrolyseeffektivitet, innenfor et bredt pH-område. Det er en klar doseeffekt på frigjøringen av fosfat.
På den annen side er utgangshastighetene for hydrolyse av fytinsyre minst to ganger lavere i nærvær av 0,04 U/ml fytase enn i nærvær av 0,08 U/ml (tabell 3). Disse resultatene støtter hypotesen om at synergien mellom fytasene muliggjør i den vesentlige fullstendige hydrolyse av fosfatene som foreligger.
Andelen av hver fytase i reaksjonsmediet ser ikke ut til å ha noen stor påvirkning på hydrolyseeffektiviteten (tabell 4). I alle tilfellene blir en økning i mengden av fosfat som blir frigjort observert, med en liten fordel for en kombinasjon på 50 % av hver fytase, i hovedsak for pH-verdier over 5,5.
Ved våre eksperimentelle betingelser hydrolyserer ingen fytase fullstendig fytinsyre til inositol og fosfater, selv om 4 av dem er i stand til å frigjøre alle fosfatene ifølge litteraturen. Fire fytaser SC, PF, DC og hydrolyserer 80 % av fosfatbindingene ved pH-verdi på 3 og 4. To blandinger, DC/AN og SC/AN, hydrolyserer fra 80 % til 100 % av fosfatbindingene ved alle pH-verdiene som ble testet.
Kombinasjonen av fytase av 3-fytase (AN, DC, PF), 4-fytase (B) eller 6-fytase (PL)-type, med hverandre, tilveiebringer ikke noen påviselig forbedring.
Komplementeringen og synergien mellom fytaser ser ut til å være avhengig av to kriterier som er spesifikke for hver fytase: (1) på deres aktivitetsprofil som en funksjon av pH, (2) på deres evne til å hydrolysere, eller ikke, alle fosfatene.
Anvendelsen av slike kombinasjoner i dyreernæring kan gjøre det mulig å minske mengden av fytaser som blir benyttet med minst 20 %, og dermed redusere kostnader. Innholdet av fosfat med fytin-opprinnelse i foret vil også bli økt, noe som forbedrer for-verdien og dermed gjør det mulig å minske inntaket av uorganisk fosfat. Forurensningen som er forårsaket av utilgjengelig fosfatavfall vil således bli minsket.
Claims (18)
1. Preparat, som kombinerer minst to fytaser for hydrolysen av fytinsyre (myoinositol-1,2,3,4,5,6-heksakisfosfat),karakterisert vedat det omfatter: a) en første fytase som oppviser minst 80 % identitet med fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 1, eller som oppviser minst 80 % identitet med fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 2, som er en 3-fytase som katalyserer hydrolysen av de seks fosfatbindingene i fytinsyre; b) en andre fytase som oppviser minst 80 % identitet med fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 3 som er en 3-fytase som katalyserer hydrolysen av minst fem fosfatbindinger i fytinsyre.
2. Preparat ifølge det foregående krav, hvor den første fytasen har et temperaturoptimum på mellom 55 °C og 80 °C, og et pH-optimum på mellom pH 3,5 og pH 5.
3. Preparat ifølge ett av de foregående krav, hvor den første fytasen er en fytase fra gjærtypen Schwanniomyces castellii eller fytase fra gjærtypen Debaryomyces castellii.
4. Preparat ifølge ett av de foregående krav, hvor den første fytasen er fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 1 eller fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 2.
5. Preparat ifølge ett av de foregående krav, hvor den andre fytasen har et temperaturoptimum på mellom 50 °C og 60 °C, og et pH-optimum på mellom pH 2 og pH 6.
6. Preparat ifølge ett av de foregående krav, hvor den andre fytasen er en fytase fra Aspergillus niger.
7. Preparat ifølge ett av de foregående krav, hvor den andre fytasen er fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 3.
8. Preparat ifølge ett av de foregående krav, hvor den består av et ernæringstilskudd for dyr eller av et dyrefor.
9. Anvendelse av et preparat ifølge ett av kravene 1 til 7, for fremstillingen av et ernæringstilskudd for dyr eller av et dyrefor.
10. Anvendelse av et preparat ifølge ett av kravene 1 til 8, for økning av tilgjengeligheten av fytinfosfor og forbedre fordøyeligheten av dyrefor.
11. Fremgangsmåte for hydrolyse av fytinsyre (myoinositol-l,2,3,4,5,6-heksakisfosfat) til uorganiske monofosfater, til myoinositoler med en lavere grad av fosforylering og til fritt myoinositol,
karakterisert vedat den omfatter de følgende trinnene: a) en første fytase som oppviser minst 80 % identitet med fytasen ifølge SEKV. ID.
NR.: 1, eller som oppviser minst 80 % identitet med fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 2 som er en 3-fytase som katalyserer hydrolysen av de seks fosfatbindingene i fytinsyre, blir tilveiebrakt, b) en andre fytase som oppviser minst 80 % identitet med fytasen ifølge SEKV. ID.
NR.: 3 som er en 3-fytase som katalyserer hydrolysen av minst 5 fosfatbindinger i fytinsyre, blir tilveiebrakt, c) fytinsyren blir samtidig brakt i kontakt med den første fytasen og den andre fytasen.
12. Fremgangsmåte ifølge krav 11, hvor den første fytasen har et temperaturoptimum på mellom 55 °C og 80 °C, og et pH-optimum på mellom pH 3,5 og pH 5.
13. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 11 til 12, hvor den første fytasen er en fytase fra gjærtypen Schwanniomyces castellii eller en fytase fra gjærtype Debaryomyces castellii.
14. Fremgangsmåte ifølge ethvert av kravene 11 til 13, hvor den første fytasen er fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 1 eller fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 2.
15. Fremgangsmåte ifølge ett av kravene 11 til 14, hvor den andre fytasen har et temperaturoptimum på mellom 50 °C og 60 °C, og et pH-optimum på mellom pH 2 og pH 6.
16. Fremgangsmåte ifølge ett av kravene 11 til 15, hvor den andre fytasen er en fytase fra Aspergillus niger.
17 Fremgangsmåte ifølge ett av kravene 11 til 16, hvor den andre fytasen er fytasen ifølge SEKV. ID. NR.: 3.
18. Sett eller sammensetning til foring av dyr,
karakterisert vedat det omfatter: a) fytasen fra Schwanniomyces castellii ifølge SEKV. ID. NR.: 1 eller fytasen fra Debaryomyces castellii ifølge SEKV. ID. NR.: 2; b) fytasen fra Aspergillus niger ifølge SEKV. ID. NR.: 3.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0507335A FR2888249B1 (fr) | 2005-07-08 | 2005-07-08 | Effet synergique de l'association de phytases sur l'hydrolyse de l'acide phytique |
| PCT/FR2006/001652 WO2007006952A1 (fr) | 2005-07-08 | 2006-07-07 | Effet synergique de l'association de phytases sur l'hydrolyse de l'acide phytique |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20080701L NO20080701L (no) | 2008-04-07 |
| NO339291B1 true NO339291B1 (no) | 2016-11-21 |
Family
ID=35840093
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20080701A NO339291B1 (no) | 2005-07-08 | 2008-02-07 | Preparat, som kombinerer minst to fytaser for hydrolysen av fytinsyre, anvendelse derav for fremstillingen av et ernæringstilskudd for dyr eller et dyrefor, sett eller sammensetning til foring av dyr samt en fremgangsmåte for hydrolyse av fytinsyre. |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8541036B2 (no) |
| EP (1) | EP1910531B1 (no) |
| JP (1) | JP4955675B2 (no) |
| KR (1) | KR101306774B1 (no) |
| CN (1) | CN101258239B (no) |
| AR (1) | AR054159A1 (no) |
| AT (1) | ATE465249T1 (no) |
| AU (1) | AU2006268479B2 (no) |
| BR (1) | BRPI0612635B1 (no) |
| CA (1) | CA2614359C (no) |
| DE (1) | DE602006013829D1 (no) |
| DK (1) | DK1910531T3 (no) |
| ES (1) | ES2343334T3 (no) |
| FR (1) | FR2888249B1 (no) |
| MX (1) | MX2008000415A (no) |
| MY (1) | MY145654A (no) |
| NO (1) | NO339291B1 (no) |
| PL (1) | PL1910531T3 (no) |
| RU (1) | RU2407791C2 (no) |
| SI (1) | SI1910531T1 (no) |
| TW (1) | TWI410496B (no) |
| UA (1) | UA92352C2 (no) |
| WO (1) | WO2007006952A1 (no) |
| ZA (1) | ZA200800451B (no) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2245621T3 (es) | 2003-03-10 | 2010-05-19 | Novozymes A/S | Procesos para un producto alcoholico. |
| FR2911253A1 (fr) * | 2007-01-12 | 2008-07-18 | Adisseo France Sas Soc Par Act | Phytase presentant une arginine dans son site catalytique pour l'hydrolyse de l'acide phytique en monophosphate inorganique et en myo-inositol libre |
| FR3017134B1 (fr) | 2014-02-06 | 2018-04-20 | Lesaffre Et Compagnie | Levure biologique, procede d'obtention et utilisations |
| NL2020952B1 (en) * | 2018-05-17 | 2019-11-25 | Stichting Wageningen Res | Method for producing inositol and inorganic phosphate |
| EP3670653A1 (en) * | 2018-12-21 | 2020-06-24 | AB Enzymes Oy | Polypeptides having phytase activity |
| DE102020200670A1 (de) * | 2020-01-21 | 2021-07-22 | Rheinisch-Westfälische Technische Hochschule (Rwth) Aachen | Verfahren zur Bereitstellung von Phosphat aus einer Phytat-haltigen Biomasse, Phytat- und Phosphat-reduzierte Biomasse und Verwendungen hiervon |
| CN112852779B (zh) * | 2021-04-25 | 2021-09-10 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 植酸酶突变体及其编码基因和应用 |
| FR3127370A1 (fr) | 2021-09-24 | 2023-03-31 | Roquette Freres | Methode de reduction de l’amertume d’une proteine de legumineuse |
| WO2023180551A1 (en) * | 2022-03-25 | 2023-09-28 | Adisseo France S.A.S. | Zootechnical additive for insects |
| FR3133726A1 (fr) * | 2022-03-25 | 2023-09-29 | Adisseo France S.A.S. | Additif zootechnique pour insectes |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998030681A1 (en) * | 1997-01-09 | 1998-07-16 | Novo Nordisk A/S | Phytase combinations |
| WO2000071728A1 (en) * | 1999-05-25 | 2000-11-30 | Diversa Corporation | Recombinant bacterial phytases and uses thereof |
| WO2002098442A2 (de) * | 2001-06-01 | 2002-12-12 | Krüger Gmbh & Co Kg | Phytasehaltige zusammensetzung |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ289014B6 (cs) * | 1989-09-27 | 2001-10-17 | Dsm N. V. | Vyčiątěná a izolovaná sekvence DNA kódující fungální fytázu, konstrukt pro expresi, vektory a transformované hostitelské buňky a způsob produkce fytázy |
| DK0619369T3 (da) * | 1993-04-05 | 2003-10-06 | Aveve Nv | Phytathydrolyse og enzymsammensætning til hydrolyse af phytat |
| JP3570784B2 (ja) * | 1994-07-05 | 2004-09-29 | 三井化学株式会社 | 新規なるフィターゼ |
| US5830732A (en) | 1994-07-05 | 1998-11-03 | Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. | Phytase |
| CN1192103C (zh) | 1998-01-27 | 2005-03-09 | 三井化学株式会社 | 生产植酸酶的方法 |
| ATE363538T1 (de) | 2000-05-04 | 2007-06-15 | Plant Bioscience Ltd | Polypeptide mit phytase-aktivität |
| FR2833272B1 (fr) | 2001-12-10 | 2004-02-27 | Aventis Animal Nutrition Sa | Nouvelles phytases et procede de production de ces phytases |
-
2005
- 2005-07-08 FR FR0507335A patent/FR2888249B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2006
- 2006-06-28 TW TW095123305A patent/TWI410496B/zh not_active IP Right Cessation
- 2006-07-06 AR ARP060102906A patent/AR054159A1/es not_active Application Discontinuation
- 2006-07-07 AT AT06778825T patent/ATE465249T1/de active
- 2006-07-07 ES ES06778825T patent/ES2343334T3/es active Active
- 2006-07-07 DK DK06778825.7T patent/DK1910531T3/da active
- 2006-07-07 RU RU2008101939/10A patent/RU2407791C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2006-07-07 BR BRPI0612635-9A patent/BRPI0612635B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2006-07-07 AU AU2006268479A patent/AU2006268479B2/en not_active Ceased
- 2006-07-07 WO PCT/FR2006/001652 patent/WO2007006952A1/fr active Application Filing
- 2006-07-07 UA UAA200800316A patent/UA92352C2/uk unknown
- 2006-07-07 JP JP2008519970A patent/JP4955675B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2006-07-07 CN CN2006800327093A patent/CN101258239B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2006-07-07 KR KR1020087003104A patent/KR101306774B1/ko active IP Right Grant
- 2006-07-07 SI SI200630727T patent/SI1910531T1/sl unknown
- 2006-07-07 CA CA2614359A patent/CA2614359C/fr not_active Expired - Fee Related
- 2006-07-07 US US11/988,403 patent/US8541036B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-07-07 MY MYPI20063253A patent/MY145654A/en unknown
- 2006-07-07 DE DE602006013829T patent/DE602006013829D1/de active Active
- 2006-07-07 PL PL06778825T patent/PL1910531T3/pl unknown
- 2006-07-07 EP EP06778825A patent/EP1910531B1/fr not_active Not-in-force
- 2006-07-07 MX MX2008000415A patent/MX2008000415A/es active IP Right Grant
-
2008
- 2008-01-15 ZA ZA200800451A patent/ZA200800451B/xx unknown
- 2008-02-07 NO NO20080701A patent/NO339291B1/no not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998030681A1 (en) * | 1997-01-09 | 1998-07-16 | Novo Nordisk A/S | Phytase combinations |
| WO2000071728A1 (en) * | 1999-05-25 | 2000-11-30 | Diversa Corporation | Recombinant bacterial phytases and uses thereof |
| WO2002098442A2 (de) * | 2001-06-01 | 2002-12-12 | Krüger Gmbh & Co Kg | Phytasehaltige zusammensetzung |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Vohra et al. | Phytases: microbial sources, production, purification, and potential biotechnological applications | |
| Greiner et al. | Phytases: biochemistry, enzymology and characteristics relevant to animal feed use | |
| NO339291B1 (no) | Preparat, som kombinerer minst to fytaser for hydrolysen av fytinsyre, anvendelse derav for fremstillingen av et ernæringstilskudd for dyr eller et dyrefor, sett eller sammensetning til foring av dyr samt en fremgangsmåte for hydrolyse av fytinsyre. | |
| Singh et al. | Developments in biochemical aspects and biotechnological applications of microbial phytases | |
| Mullaney et al. | Advances in phytase research | |
| Lei et al. | Biotechnological development of effective phytases for mineral nutrition and environmental protection | |
| Konietzny et al. | Molecular and catalytic properties of phytate‐degrading enzymes (phytases) | |
| JP3587876B2 (ja) | フィチン酸加水分解用酵素組成物及びフィチン酸の加水分解方法 | |
| Pandey et al. | Production, purification and properties of microbial phytases | |
| Gontia-Mishra et al. | Molecular characterization and comparative phylogenetic analysis of phytases from fungi with their prospective applications | |
| CZ20004805A3 (cs) | Nadexprese genů fytasy v kvasinkových systémech | |
| Balwani et al. | Role of phytase producing microorganisms towards agricultural sustainability | |
| Singh et al. | Phytase: The feed enzyme, an overview | |
| Neira-Vielma et al. | Optimized production of phytase by solid-state fermentation using triticale as substrate and source of inducer | |
| Greiner et al. | Update on characteristics of commercial phytases | |
| Olukosi | Biochemistry of phytate and phytases: Applications in monogastric nutrition | |
| Coban et al. | Phytase as a diet ingredient: from microbial production to its applications in food and feed industry | |
| Zyla | Phytase applications in poultry feeding: Selected issues | |
| Santos | Optimisation of phytase production by Aspergillus niger using solid state fermentation | |
| FR2911253A1 (fr) | Phytase presentant une arginine dans son site catalytique pour l'hydrolyse de l'acide phytique en monophosphate inorganique et en myo-inositol libre | |
| Rizwanuddin et al. | Journal of Agriculture and Food Research | |
| Ghosh et al. | Biotechnological approach to improve the nutritional availability in livestock and consequence for reduction the environment pollution by implement of transgenic phytase in animal feed | |
| KAUR et al. | Developments in Production | |
| Joshi et al. | Phytase of the Unconventional Yeast | |
| Greiner | Advances in phytase research. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |