TWI410496B - 植酸酶組合物用於植酸水解之協同效用 - Google Patents
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Description
本發明係關於植酸酶組合物對於植酸水解之協同作用。
植酸鹽(肌醇六磷酸鹽(myo－inositol hexakisphosphate))或植酸(肌醇六磷酸二氫酯(myo－inositol hexakis dihydrogen phosphate))係磷在穀類、豆科植物和產油植物中主要的儲存型態。因此在植物為主的動物飼料中，它們構成磷的主要來源，為單胃型動物(禽類和豬)的飲食之主要成分。然而，對這些動物來說，這種磷在飼料中的生物可利用率是有限的。這是因為它們不具有分解足夠量的植酸的小腸酵素，使植酸水解可進行且因而提供它們所需要的無機磷的量。此外，植酸係一個抗營養因子，其與蛋白質和離子(Fe3 ＋
、Ca2 ＋
、Zn2 ＋
、Mg2 ＋
)形成錯合物而因此降低這些元素的可利用率。
因此禽類和豬隻的飼料攝取必須補充以無機磷酸鹽，然而在密集飼養單胃型動物的地區，植酸的磷會被排泄出來且造成表層水的優氧化。
植酸酶(肌醇六磷酸酯3－及6－磷酸水解酶EC 3.1.3.8 and 3.1.3.26)係組胺酸磷酸酶(histidine acid phosphatase)家族的一部份。植酸酶係六磷酸水解酶(hexakisphosphohydrolases)，其水解植酸(phytic acid)或植酸(phytate)中的磷酸酯鍵。因此，它們催化植酸(植酸，InsP6
)的水解反應，使其變成無機單磷酸鹽以及較低程度磷酸化(InsP5
變為InsP1
)的肌醇磷酸酯(myo－inositol phosphates)以及在一些情況下成為游離形式的肌醇。
有兩個種類的植酸酶存在，其分別只在於其第一個水解的磷酸之位置。3－植酸酶(EC 3.1.3.8)水解的第3位置上的磷酸根而6－植酸酶(EC 3.1.3.26)水解第6個位置上的磷酸根。
這些酵素，被用為動物營養的添加物，其使得，第一，去增加植酸磷的可利用率，以及第二，去改善飼料的消化率變成可能。此外，植酸磷酸鹽的釋放大量地減少補充磷酸鹽所造成的花費以及也減少被排放過量的磷酸鹽所造成的污染。
植酸酶由許多種生物體所產生：植物、動物、以及特別地，微生物。這些植酸酶具有非常不同的生化特性，尤其它們活性隨pH改變以及它們的溫度穩定性。此外，這些酵素表現差異性在(a)其水解所有磷酸酯的有效性，(b)其立體特異性(stereospecificity)以及(c)其關於肌醇磷酸酯的親合力方面。
在生產植酸酶的微生物中，將會特別提及：多種真菌：麴黴菌(Aspergillus)
、青黴菌(Penicillium)
、毛黴菌(Mucor)
以及根黴菌(Rhizopus)
；細菌：假單胞菌屬(Pseudomonas sp.)
、克雷氏菌屬(Klebsiella sp.)
、大腸桿菌(Escherichia coli)
、腸桿菌(Enlerobacter sp.)
、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)
；以及酵母菌：釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)
、熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)
、白球擬酵母(Torulopsis candida)
,卡斯特利得巴利酵母(Debaryomyces castellii)
、卡斯許旺酵母(Debaryomyces occidentalis)
(同義字Schwanniomyces castellii
)、脆壁克魯維酵母(Kluyveromyces fragilis)
。
許多微生物植酸酶已經被研究及被使用於許多農業工業的應用中。在飼料中和動物的消化過程中，這些酵素的效用是根據它們維持電位的能力，不考慮在飼料製備步驟中以及消化道中所遇到的許多情況。飼料的製備需要抗熱的酵素，就pH數值範圍而論，例如，在通過禽類不同的嗉囊、胃、十二指、空腸以及迴腸部分時，pH值在5.02，2.75，6.28，6.63，和5.98間。
迄今，大部分的植酸酶被描述僅部分水解植酸以及其中一些有很緩慢的動力學。因此，許多植酸酶水解僅5個植酸的磷酸酯鍵結，亦即，潛在磷的83%、迄今，在酵母菌中，只有酵母菌卡斯許旺酵母(Schwanniomyces occidentalis)
植酸被敘述可水解植酸酯所有的磷酸酯鍵結(EP 0 699 762和Segueilha L.,Lambrechts C.,Boze H.,Moulin G.,Galzy P.,(1992)Purification and properties of a phytate fromSchwanniomyces occidentalis，
J.Ferm.Bioeng.,74,7－11)。
然而，在實驗條件之下，植酸酯(phytate)或植酸(phytic acid)的完全水解是不能被獲得的。
為了取得植酸的一個較有效率的水解，組合不同的植酸酶因此被提議。
WO 98/30681敘述植酸酶的組合物有許多空間特異性，以及特別敘述3－植酸酶和6－植酸酶的組合物。此文件特別敘述一個林希隔孢伏革菌(Peniophora lycii)
6－植酸酶和一個黑麴黴菌(Aspergillus niger)
3－植酸酶(phytase NovoT M
)的組合物。
US 6,183,740也描述許多特異性的植酸酶之組合物以及與其他酸的磷酸酶組合物。
然而，植酸完全水解成磷酸根和肌醇沒有被觀察到。
本發明欲解決的問題在於在各式農業工業的應用中改善植酸水解的速率和效能以獲得植酸完全水解。
這個問題藉由本發明的組成物和方法被解決，其中結合至少兩種特殊的植酸酶。有利地，藉由被觀察到的協同作用的優點，本發明的組成物可將植酸的所有磷酸酯完全水解。有利地，本發明的組成物於廣大的pH範圍中具有活性，其適合於植酸的農業工業之應用，且尤其適合應用在動物營養的領域。本發明的另一個優點係所使用的植酸酶係耐熱性的。
序列辨識編號1：卡斯許旺酵母(Schwanniomyces castellii)
植酸酶。
序列辨識編號2：卡斯特利得巴利酵母(Debaryomyces castellii)
植酸酶。
序列辨識編號3：黑麴黴菌(Aspergillus niger)
植酸酶。
序列辨識編號4：繩狀青黴(Penicillium funiculosum)
植酸酶。
序列辨識編號5：林希隔孢革菌(Peniophora lycii)
植酸酶。
序列辨識編號6：序列編碼小麥植酸酶。
序列辨識編號7：小麥(Triticum aestivum)植酸酶。
本發明的主題係用於植酸(myo－inositol 1,2,3,4,5,6－hexakisphosphate)水解的一種組成物，其結合至少兩種植酸酶，包含：－一第一植酸酶，其和序列辨識編號1之植酸酶表現至少80%的相同度，或和序列辨識編號2之植酸酶表現至少80%的相同度；－一第二個植酸酶，其和序列辨識編號3之植酸酶表現至少80%的相同度。
較佳地，第一植酸酶係一3－植酸酶，其催化植酸之6個磷酸酯鍵結的水解。
較佳地，第一植酸酶具有一在55℃到80℃間的最佳溫度以及一在pH 3.5到pH 5間的最佳pH值。
在一個較佳的具體例中，第一植酸酶係一個酵母菌卡斯許旺酵母植酸酶或一個酵母菌卡斯特利得巴利酵母植酸酶。
在另一個較佳的具體例中，第一植酸酶係序列辨識編號1之植酸酶，或序列辨識編號2之植酸酶。
較佳地，第二植酸酶係一3－植酸酶，其催化植酸之至少5個磷酸酯鍵結的水解。
較佳地，第二植酸酶具有一在50℃到60℃間的最佳溫度以及一在pH 2到pH 6間的最佳pH值。
在一個較佳的具體例中，第二植酸酶係一個黑麴黴菌植酸酶。
在另一個較佳的具體例中，第二植酸酶係序列辨識編號3之植酸酶。
較佳地，根據本發明之組成物組成一個用於動物的營養添加物或動物飼料。
本發明的主題也在於根據本發明之組成物的用途，其用於動物的營養添加物或動物飼料的製造。
本發明的主題也在於根據本發明之組成物的用途，其用於增加植酸磷的利用率以及改善動物飼料的消化率。
本發明也關於一個方法，其將植酸((肌醇1,2,3,4,5,6－六磷酸酯)myo－inositol 1,2,3,4,5,6－hexakisphosphate)水解成無機單磷酸鹽、具較低程度磷酸化的肌醇以及游離的肌醇，包含以下步驟：－一第一植酸酶被提供，該第一植酸酶和序列辨識編號1之植酸酶表現至少80%的相同度，或和序列辨識編號2之植酸酶表現至少80%的相同度。
－一第二植酸酶被提供，該第二植酸酶和序列辨識編號3之植酸酶表現至少80%的相同度的。
－植酸同時地與第一個植酸酶和第二個植酸酶發生接觸。
較佳地，第一植酸酶係一3－植酸酶，其催化植酸之6個磷酸酯鍵結的水解。
較佳地，第一植酸酶具有一在55℃到80℃間的最佳溫度以及一在pH 3.5到pH 5間的最佳pH值。
在一個較佳的具體例中，第一植酸酶係一個酵母菌卡斯許旺酵母植酸酶或一個酵母菌卡斯特利得巴利酵母植酸酶。
在一個特別有利的具體例中，第一植酸酶係序列辨識編號1之植酸酶或係序列辨識編號2之植酸酶。
較佳地，第二植酸酶係一個3－植酸酶，其催化植酸之至少5個磷酸酯鍵結的水解。
較佳地，第二植酸酶具有一在50℃到60℃間的最佳溫度以及一在pH 2到pH 6間的最佳pH值。
在一個有利的具體例中，第二植酸酶係一黑麴黴菌植酸酶。
在一個特別地有利的具體例中，第二植酸酶係序列辨識編號3之植酸酶。
本發明的主題也係用於飼養動物的一個套組或是組合，其包含：－序列辨識編號1之卡斯許旺酵母植酸酶，或序列辨識編號2之卡斯特利得巴利酵母植酸酶；－序列辨識編號3之黑麴黴菌(Aspergillus niger)
植酸酶。
根據本發明之組成物，其結合一第一植酸酶和一第二個植酸酶；該第一植酸酶和序列辨識編號1之植酸酶表現至少80%的相同度或和序列辨識編號2之植酸酶表現至少80%的相同度；該第二植酸酶表現與序列辨識編號3之植酸酶至少80%的相同度。
令人驚訝地，這個特別的植酸酶組成物使得在植酸鹽水解上獲得一個協同作用成為可能。因此，根據本發明之組合物，其在一個廣大範圍的pH值中催化一個快速和完全的植酸水解。
「植酸酶」一詞是意指肌醇六磷酸磷酸水解酶(myo－inositol hexakisphosphate phosphohydrolases)(EC 3.1.3.8 and 3.1.3.26)。這些酵素催化植酸(phytic acid,InsP6
)的水解作用使之變為無機單磷酸鹽和具較低程度磷酸化的肌醇磷酸鹽(由InsP5
變為InsP1
)以及就某些植酸酶來說成為游離的肌醇。
根據本發明之組成物，其包含一個第一植酸酶，和序列辨識編號1之植酸酶表現至少80%的相同度，或和序列辨識編號2之植酸酶表現至少80%的相同度。
序列辨識編號1之植酸酶係一酵母菌卡斯許旺酵母植酸酶，而序列辨識編號2之植酸酶係一個酵母菌卡斯特利得巴利酵母植酸酶。
這些植酸酶具有非常相似的催化特性，因此在根據本發明之植酸酶組合物中係可交互替換的。
較佳地，第一植酸酶顯示其至少80%、90%、95%、98%，以及較佳地至少99%的胺基酸，與序列辨識編號1植酸酶是相同的，或顯示其至少80%、90%、95%、98%，以及較佳地至少99%的胺基酸與序列辨識編號2之植酸酶是相同的。
較佳地，第一植酸酶與序列辨識編號1之植酸酶以及序列辨識編號2之植酸酶具有相同的特性且尤其是相同的催化特性。較佳地，第一個植酸酶從卡斯許旺酵母或卡斯特利得巴利酵母的其他品系，或從其他酵母菌中被分離出來。選擇性地，例如，藉由定點突變法技術，該第一個植酸酶可以被得到。
「胺基酸是相同的」一詞是意指胺基酸在兩個序列間沒有變異。關於序列辨識編號1或序列辨識編號2之植酸酶，第一植酸酶可表現一段缺失、一段添加，或是一個至少在一個胺基酸上發生的取代。
序列辨識編號1之植酸酶或序列辨識編號2之植酸酶具有共通的催化特性。根據本發明，被用於根據本發明之組成物和方法中的第一植酸酶與序列辨識編號1之植酸酶或與序列辨識編號2之植酸酶表現一個程度的相同性，以及保留它們共通的催化特性。
較佳地，第一個植酸酶具有3－植酸酶活性。較佳地，第一個植酸酶催化植酸之6個磷酸酯鍵的水解作用。
3－植酸酶(EC 3.1.3.8)首先地水解在第3個位置上的磷酸根。
植酸酶具水解植酸所有磷酸酯鍵結(1－,2－,3－,4－,5－,以及6－位置)的能力，其催化植酸(phytic acid,InsP6
)的水解作用使之成為無機一磷酸鹽以及游離的肌醇。
許多植酸酶只水解植酸的5個磷酸酯鍵結，亦即，潛在磷的83%。這些酵素將植酸水解成肌醇單磷酸鹽(myo－inositol monophosphate)而非游離的肌醇。
「植酸酶的活性」一詞是意指植酸酶的酵素活性。此活性以國際單位(I.U)每毫克的蛋白質表示。1I.U.的酵素活性是指在一指定的pH值和一指定的溫度之下，在1單位時間內轉變1微莫耳受質的催化能力。
較佳地，第一植酸酶具有一在55℃到80℃間的最佳溫度以及一在pH3.5到pH5間的最佳pH值。
在一個較佳的具體例中，第一植酸酶係一個酵母菌卡斯許旺酵母植酸酶或係一個酵母菌卡斯特利得巴利酵母植酸酶。
在另一個特別有利的具體例中，第一植酸酶係序列辨識編號1之植酸酶，或序列辨識編號2之植酸酶。
根據本發明之組成物，其包含至少一個第二植酸酶，該植酸酶與序列辨識編號3之植酸酶至少具有80%的相同性。
序列辨識編號3之植酸酶係一個絲狀真菌黑麴黴菌植酸酶。
較佳地，第二植酸酶顯示其至少80%、90%、95%、98%，以及較佳地至少99%的胺基酸與序列辨識編號3之植酸酶是相同的。
較佳地，第二植酸酶保留序列辨識編號3之植酸酶的特性且特別是序列辨識編號3之植酸酶的催化特性。較佳地，此植酸酶是從黑麴黴菌的其他品系，或從其他絲狀真菌中被分離出來。選擇性地，例如，藉由定點突變法的技術，該第二植酸酶可以被得到。
「胺基酸是相同的」一詞是意指胺基酸在兩個序列間沒有變化。關於序列辨識編號3之植酸酶，第二植酸酶可表現一段缺失，一段添加，或是一個至少在一個胺基酸上發生的取代。
根據本發明，被用於根據本發明的組成物和方法中之第二植酸酶因此與序列辨識編號3之植酸酶表現一個程度的相同性，以及保留後半部的催化特性。
較佳地，第二植酸酶係一個3－植酸酶，其催化植酸的至少5個磷酸酯鍵結的水解。
較佳地，第二植酸酶有一在50℃到60℃間的最佳溫度以及一在pH 2到pH 6間的最佳pH值。甚至更佳地，第二植酸酶有一第一最佳的pH值在pH2.5到pH3.5之間，以及一第二最佳的pH值在pH 4.5到pH 5.5之間。
在一個較佳地具體例中，第二植酸酶係一個黑麴黴菌植酸酶。
在一個有利的具體例中，第二植酸酶係序列辨識編號3之植酸酶。
一個植酸酶的酵素活性特別地隨著pH變化，植酸酶因此具有pH範圍(範圍領域)，在其中它們的酵素活性是較高或最佳的。「範圍」一詞是意指一個被指定的範圍或區間。當這些植酸酶在不同的pH值範圍中具活性時，兩個植酸酶在互補的pH值範圍中具有酵素活性。較佳地，這些範圍重疊或部分重疊。典型地，植酸酶在一酸性pH值中具有一個較高的酵素活性。兩個植酸酶有互補的pH值範圍，因此，例如，對第一植酸酶來說，其具有一個最大酵素活性在pH 2到pH 4間，以及對第二植酸酶來說，其具有一個最大酵素活性在pH 4到pH 6間。在本發明的組成物和方法中，第一植酸酶和第二植酸酶，較佳地，具有互補的pH值範圍或互補的最佳pH值。根據本發明的組成物和方法因此使得植酸的水解作用於一廣大的pH值範圍中。
測量及鑑定多肽鍊間相同程度的方法是被熟悉的習知技藝。例如，可使用Vector NTi 9.1.0,alignment program AlignX(Clustal W algorithm)(Invitrogen INFORMAX,http：//www.invitrogen.com
)。較佳地，預設參數被使用。
根據本發明的組成物和方法之植酸酶，其從它們的自然環境中被分離或純化出來。該植酸酶可藉由許多方法被製備。這些方法尤其地是由自然來源中純化，例如細胞自然地表現這些植酸酶、藉由適合的寄主細胞生產重組植酸酶以及其後來的純化、藉由化學合成生產或，最終地，這些各式方法的組合。這些生產的各式方法是被熟悉的習知技藝。因此，使用於本發明之組成物和方法的植酸酶可從卡斯許旺酵母，從卡斯特利得巴利酵母或從黑麴黴菌中被分離出來。另一具體例中，本發明之植酸酶從重組的寄主生物中被分離出來。
較佳地，根據本發明之組成物組成一個用於動物的營養添加物或動物飼料。
本發明的主題也在於根據本發明之組成物的用途，其用於動物的營養添加物或動物飼料的製造。
因此，本發明也關於飼料添加物，其提供一個植酸酶活性。此類酵素活性的提供使得改善飼料的消化率以及改善飼料的營養價值變得可能。
「營養添加物」一詞是意指一種物質有目的地被加入飼料中，一般為少量，用以改善飼料之營養的特性或其消化率。動物的營養添加物，例如，可包含維他命、礦物鹽、胺基酸以及酵素。
本發明也關於動物飼料。這些飼料通常是粉末或顆粒狀，根據本發明之添加物被混入其中。「飼料」一詞意指可以用來飼養動物的任何物質。就動物的密集飼養而言，動物飼料通常包含一營養基料和營養添加物。「營養基料」一詞是意指組成大部分動物的食物攝取之東西，例如，由榖類混合物、蛋白質混合物和動物的以及/或植物來源的脂肪混合物所組成。
動物的營養基料適合這些動物的飲食，且為廣為人知的習知技藝。通常，這些營養基料包含：例如，玉米、小麥、豌豆及大豆。這些營養基料適合所欲的各式動物物種的需求。這些營養基料可能已經含有營養添加物例如維他命、礦物鹽以及胺基酸。
在一個較佳地具體例中，本發明關於單胃型動物的飼料，且特別關於禽類和豬隻的飼料。禽類，特別包含產蛋母雞、肉雞、火雞，以及鴨。豬隻特別包含成長中的豬和成豬以及小豬。
本發明的主題也為根據本發明之組成物的用途，用以增加植酸磷的可利用率以及改善動物飼料的消化率。
根據本發明之組成物和方法，其結合一第一植酸酶，該植酸酶被挑選自卡斯許旺酵母植酸酶和卡斯特利得巴利酵母植酸酶，可水解植酸的所有磷酸酯鍵結，和一第二植酸酶，其可水解植酸的至少5個磷酸酯鍵結以及在互補於第一植酸的pH值範圍的pH範圍中具有酵素活性。
第1圖：
對於6個植酸酶單獨或兩兩結合在各個pH值中，植酸水解作用之動力學的比較。此結果以釋出理論上之磷酸根的百分比來表示。
第2圖：
以各種植酸酶經反應120分鐘後植酸水解的百分比。(A)單一的植酸酶，(B)組合的植酸酶。虛線對應的是5個磷酸酯鍵結的水解。
第3圖：
對於6個植酸酶在各種pH中，植酸水解作用的初始速率(μmol.ml－ 1
.min－ 1
)的比較。(A)單一的植酸酶，(B)組合的植酸酶。速率在反應的最初10分鐘之中被計算。
1.植酸來源黑麴黴菌(Aspergillus niger)
Natuphos(AN)：batch R2503或batch 057NPHO2 Wim van Hartingsveldt,Cora M.J.van Zeijl,G.Marian Harteveld,Robin J.Gouka,Marjon E.G.Suykerbuyk,Ruud G.M.Luiten,Peter A.van Paridon,Gerard C.M.Selten,Annemarie E.Veenstra,Robert F.M.van Gorcom和Cees A.M.J.van den Hondel；Cloning,characterization and overexpression of the phytase－encodinggene(phy
A)ofAspergillus niger
.Gene,127,(1)87－94(1993)
林希隔孢革菌(Peniophora lycii)
(PL)：batch 172NHSO2 Lassens,S.F.,Breinholt,J.,Ostergaard,P.R.,Brugger,R.,Bischoff,A.,Wyss,M.和Fuglsang,C.C.；Expression,gene cloning,and characterization of five novel phytases from four basidiomycete fungi：Peniophora lycii,Agrocybe pediades,a Ceriporia sp.,和Trametes pubescens.Appl.Environ.Microbiol.67(10),4701－4707(2001)
繩狀青黴菌(Penicillium funiculosum)
(PF)：Godo A1346 batch 1301 WO 03054199
小麥(B)：Sigma reference P1259.WO 0183763
卡斯許旺酵母(Schwanniomyces castellii)
(SC)：被產生於嗜甲基酵母菌(Candida boidinii)
batch 10059 CN 25 EP 0931837
卡斯特利得巴利酵母(Debaryomyces castellii)
strain CBS 2923(DC).
2.酵素的方法植酸酶活性藉由無機磷酸根隨時間的釋出被測量。
此活性被測量於8mM的植酸鈉(Sigma)溶解於200mM的醋酸鈉之緩衝液中，其pH5.5，37℃(5體積)。
藉由酵素之萃取物的添加(1體積)該反應被引發。藉由使用20%三氯乙酸(trichloroacetic acid)(1體積的反應介質＋1體積的酸)來酸化介質此反應被中止。經不同的培養時間之後磷酸根釋放的量被決定。
1酵素單位(U)被定義為於一分鐘內釋放1微莫耳無機磷酸根之酵素的量
3.在各種pHs中植酸水解的反應條件。
水解作用發生在40℃，pH 4到6.5，10ml之250mM醋酸鹽緩衝液中或pH3，10ml之200mM甘胺酸緩衝液中，其包含：0.340mM的植酸鈉，0.04或0.08U/ml的植酸酶。樣品在120分鐘內各個時間被取出。反應藉由三氯乙酸的添加被中止。
磷酸根不經過稀釋直接地被測定。
4.磷酸根測定磷酸根釋放的量藉由比色法被顯現。顯影溶液臨時地被製備，其包含硫酸鐵(iron sulphate)(380mM，1體積)以及七鉬酸胺(ammonium heptamolybdate)(12mM，4體積)。吸收率在週遭溫度中經顯影反應30分鐘後使用UV/可見光分光光度計(Beckman DU 530)，以700nm被測量。
一校準線事前以磷酸二氫鉀建立。
1.植酸酶試驗植酸酶的試驗彼此間不同是根據各種標準：(1)生化特性(最佳pH值，立體特異性：3、4、或6植酸酶)，(2)水解磷酸酯鍵結的數量。
所有這些植酸酶具有一接近於5之最佳的水解pH值；然而，AN和PL植酸酶具有一次佳的pH值在2.5。三個植酸酶完全地水解磷酸酯鍵結(SC,DC,wheat)。第一個被水解的位置是第3個位置(AN,PL,DC)或第6個位置(PL)或是第4個位置(小麥)(表1)
2.由6個植酸酶在各種pH值中所執行的植酸水解效用的比較。
本研究是實行於0.340mM植酸存在時。所使用酵素的量相當於0.08U/ml的植酸酶,其於標準條件pH5.5之下被測量。用以測試的pH值是3、4、5.5、6、6.5。反應持續120分鐘。樣本在不同時間點被取出，反應經由酸化被停止，且磷酸根藉由比色法被測定。
各種植酸酶的比較被執行作為水解有效性的函數，亦即，磷酸根釋出的百分比相對於理論的百分比，結果被表示於第1A圖.中。
根據文獻，4個磷酸酶(PF,SC,DC,B)有能力完全將植酸水解成肌醇和磷酸根；2個植酸酶(AN和PL)水解僅5個鍵，亦即，潛在磷的83%。
在pH3和pH4的試驗條件下，4個植酸酶(SC,PF,DC和PL)水解80%的植酸。小麥植酸酶在pH3和pH4中不是非常活躍。對於高於pH5.5的pH值，沒有植酸酶水解多於70%的植酸。PF以及DC植酸酶在pH6.5中不很活躍。AN植酸酶對pH值的變化最不敏感；然而，其僅釋出60%到70%的磷酸根，亦即，數值低於預期的10%到20%。(第2A圖)。
釋放磷酸根之初始速率的比較顯示大量的異質性於植酸酶之間(第3A圖)。在酸性pH值中最有效率的植酸酶係卡斯許旺酵母之植酸酶，而在高於pH5.5中最有效率的植酸酶係黑麴黴菌植酸酶。不考慮試驗條件，小麥植酸酶是最沒效率的。
3.在組合的植酸酶存在時，pH值對於磷酸根釋放速率的影響。
為了改善植酸水解的效率，數個兩個植酸酶之組合物被試驗。每一個植酸酶以0.04U/ml被使用，亦即，在反應試管中全部的數值0.08U/ml。DC植酸酶水解6個磷酸酯鍵結，該植酸酶與其他水解5或6個磷酸酯鍵結的植酸酶的組合被系統性地試驗。兩個其他的組合物也被用於比較，第一，另一個植酸酶組合物可以釋放6和5個磷酸鹽(SC/AN)，以及，第二，兩個植酸酶，PL/AN具有非常相似的生化特性(第1B圖)。
全部的分析使得顯示兩個植酸酶的組合物主要地促進植酸水解的效率成為可能。雖然，在相同的條件下，沒有植酸酶完全地水解植酸，對於兩個混合物(DC/AN和SC/AN)而言，無論在什麼pH值中，100%到85%的磷酸酯鍵結被水解。對於DC/PL組合物，在酸性pHs值中大約20%的增加也被觀察到。PL/AN，DC/PF以及DC/SC組合物提供很少改善(第2B圖)。
起始水解速率的比較顯示對於SC/AN組合物和DC/AN組合物相較於單獨的植酸酶以及相較於其他植酸酶來說，有一個強烈的協同作用存在。當組合物被使用時，水解速率之pH相關的差異性被最小化。其他組合物係較無效率的，協同作用只可見於某些pHs值，例如對於DC/PL來說在pH3和pH4中(第3圖)。
協同作用應起因於植酸酶水解所有磷酸酯的能力至一大範圍。此外，最佳的植酸酶組合物對於其活性有互補的最佳pHs值(2.5－4.5)。然而，對於植酸酶有很少協同作用應該被注意，該植酸酶就水解有效性而言是最沒效率的，例如小麥植酸酶，以及繩狀青黴菌植酸酶。
4.植酸酶的濃度和比例對於植酸水解的有效性的影響我們比較植酸酶的量(劑量影響)以及植酸酶混合物的比例對於植酸水解上的影響。三種組合物被使用，DC/AN、DC/PL和AN/PL以及兩種植酸濃度(0.04和0.08U/ml)被試驗(表2和表3)。
表2：在兩個最終濃度0.04和0.08U/ml中，對於各種組合物其植酸水解之百分比的比較。前三欄的數值為濃度0.08U/ml的三種組合物單獨存在時。
在括弧中的數值表示從濃度0.04U/ml所獲得的數值對0.08U/ml存在時所獲得的數值之比率。
在研究中使用酵素的混合物(全部的濃度0.08U/ml)之水解作用的百分比高於使用單一酵素(0.08U/ml)所測定的百分比，且對於AN/DC和PL/DC混合物，pH在3至6的變化範圍中，其百分比接近100%。和每一個植酸酶分別地被使用一起觀察，AN/PL混合物沒有顯著地增加水解的百分比。全部被提供的劑量減少為原1/2不導致被釋放的磷酸根減少為1/2。在某些案例中，AN/DC和PL/DC在pH4和pH5.5,以及AN/PL在pH4到pH6中，其水解的百分比相當於其在0.08U/ml時被觀察到的百分比(表3)。
當維持相同水解速率於一大範圍的pH值中時，植酸酶組合物使減少植酸酶的1/2的量於反應介質中變的可能。有一個清楚的劑量影響在磷酸根的釋放上。
另一方面，植酸水解的初始速率於0.04U/ml的植酸酶存在時至少兩倍低於0.08U/ml的植酸酶存在時(表3)。這些結果支持植酸酶間的協同作用基本上允許存在的植酸酯完全水解之假說。
在反應介質中每一種植酸酶的比例沒有顯示出對於水解效率有巨大的影響(表4)。在所有事例中，磷酸鹽釋放量的增加是被觀察到的，主要於pH5.5以上時，對於組合物含有50%的每一種植酸酶而言有少許的優勢。
在我們的實驗條件下，無植酸酶完全地將植酸水解為肌醇以及磷酸根，雖然根據文獻記載，其中的4個有能力釋放所有的磷酸鹽。4個植酸酶SC、PF、DC以及PL，在pH值3和4時水解80%的磷酸酯鍵結。兩種混合物，DC/AN和SC/AN，在所有pHs的試驗中水解從80%到100%的磷酸酯鍵結。
3－植酸酶(AN,DC,PF)、4－植酸酶(B)或6－植酸酶類型之植酸酶的組合沒有提供任何顯著改善。
植酸酶間的互補和協同作用似乎根據每個植酸酶兩個特有的標準：(1)根據他們的活性的輪廓與pH的對應關係,(2)根據他們能否水解所有磷酸酯的能力。
在動物營養物中這種組合物的使用，可以使減少至少20%的植酸酶使用量成為可能，而因此去降低花費。飼料中植酸來源的磷酸鹽的含量也會被增加，改善食物價值且因此讓減少無機磷酸鹽成為可能。由不能利用的磷酸鹽廢物所造成的污染可以因此被減少。
AN．．．黑麴黴菌(Aspergillus niger)
Natuphos植酸酶
PL．．．林希隔孢革菌(Peniophora lycii)
植酸酶
B．．．小麥(Triticum aestivum)
植酸酶
PF．．．繩狀青黴菌(Penicillium funiculosum)
植酸酶
SC．．．卡斯許旺酵母(Schwanniomyces castellii)
植酸酶
DC．．．卡斯特利得巴利酵母(Debaryomyces castellii)
植酸酶
第1圖：
對於6個植酸酶單獨或兩兩結合在各個pH值中，植酸水解作用之動力學的比較。此結果以釋出理論上之磷酸根的百分比來表示。
第2圖：
以各種植酸酶經反應120分鐘後植酸水解的百分比。(A)單一的植酸酶，(B)組合的植酸酶。虛線對應的是5個磷酸酯鍵結的水解。
第3圖：
對於6個植酸酶在各種pH中，植酸水解作用的初始速率(μmol.ml－ 1
.min－ 1
)的比較。(A)單一的植酸酶，(B)組合的植酸酶。速率在反應的最初10分鐘之中被計算。
<110> 艾迪索法國股份有限公司(ADISSEO FRANCE S.A.S.)
<120> 植酸酶組合物用於植酸水解之協同效用
<130> KH/SG/BR050016
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植酸酶
SC．．．卡斯許旺酵母(Schwanniomyces castellii)
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植酸酶
Claims (22)
- 一種結合至少兩種3-植酸酶用於植酸(肌醇1,2,3,4,5,6-六磷酸酯)水解之組成物，其特徵在於其包含：(a)一第一植酸酶，其與序列辨識編號1之植酸酶呈現至少95%的相同度，或與序列辨識編號2之植酸酶呈現至少95%的相同度；及(b)一第二植酸酶，其與序列辨識編號3之植酸酶呈現至少95%的相同度，其中，在沒有相異之立體特異性(stereospecificty)之植酸酶存在下，該等第一及第二植酸酶對植酸之水解具有協同效果(synergistic effect)。
- 如申請專利範圍第1項之組成物，其特徵在於該第一植酸酶係一個3-植酸酶，其催化植酸的6個磷酸酯鍵結之水解。
- 如申請專利範圍第1或2項之組成物，其特徵在於該第一植酸酶具有一最佳溫度於55℃和80℃之間以及一最佳pH值於pH 3.5和pH 5之間。
- 如申請專利範圍第1或2項之組成物，其特徵在於該第一植酸酶係酵母菌卡斯許旺酵母(Schwanniomyces castellii) 植酸酶或酵母菌卡斯特利得巴利酵母(Debaryomyces castellii) 植酸酶。
- 如申請專利範圍第1或2項之組成物，其特徵在於該第一植酸酶係序列辨識編號1之植酸酶或序列辨識編號2之植酸酶，以及該第二植酸酶係序列辨識編號3之植酸酶。
- 如申請專利範圍第1或2項之組成物，其特徵在於該第二植酸酶係一個3-植酸酶，其催化植酸的至少5個磷酸酯鍵結之水解。
- 如申請專利範圍第1或2項之組成物，其特徵在於該第二植酸酶具有一最佳溫度於50℃和60℃之間以及一最佳pH值於pH 2和pH 6之間。
- 如申請專利範圍第1或2項之組成物，其特徵在於該第二植酸酶是一個黑麴黴菌(Aspergillus niger) 植酸酶。
- 如申請專利範圍第1或2項之組成物，其特徵在於，該第一植酸酶與序列辨識編號1之植酸酶呈現至少99%的相同度，或與序列辨識編號2之植酸酶呈現至少99%的相同度，且該第二植酸酶與序列辨識編號3之植酸酶呈現至少99%的相同度。
- 如申請專利範圍第1或2項之組成物，其特徵在於其構成動物用的一種營養添加物或一動物飼料。
- 一種如申請專利範圍第1項到第9項中任一項之組成物的用途，其用於動物用營養添加物的製造或動物飼料的製造。
- 一種如申請專利範圍第1項到第10項中任一項之組成物的用途，其用於增加植酸磷的利用率以及改善動物飼料的消化率。
- 一種將植酸(肌醇1,2,3,4,5,6-六磷酸酯)水解成無機單磷酸鹽、較低程度磷酸化的肌醇以及游離肌醇的方法，其特徵在於，該方法包含以一第一植酸酶及一第二植酸 酶水解植酸，該第一植酸酶與序列辨識編號1之植酸酶呈現至少95%的相同度，或與序列辨識編號2之植酸酶呈現至少95%的相同度；且該第二植酸酶與序列辨識編號3之植酸酶呈現至少95%的相同度；其中，在沒有相異之立體特異性之植酸酶存在下，該第一植酸酶和該第二植酸酶對植酸之水解具有協同效果。
- 如申請專利範圍第13項之方法，其特徵在於該第一植酸酶是一個3-植酸酶，其催化植酸的6個磷酸酯鍵結的水解。
- 如申請專利範圍第13或14項之方法，其特徵在於該第一植酸酶具有一最佳溫度於55℃和80℃之間以及一最佳pH值於pH 3.5和pH 5之間。
- 如申請專利範圍第13或14項之方法，其特徵在於該第一植酸酶是酵母菌卡斯許旺酵母植酸酶或酵母菌卡斯特利得巴利酵母植酸酶。
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- 如申請專利範圍第13或14項之方法，其特徵在於該第二植酸酶是一個3-植酸酶，其催化植酸的至少5個磷酸酯鍵結的水解。
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- 如申請專利範圍第13或14項之方法，其特徵在於，該第一植酸酶與序列辨識編號1之植酸酶呈現至少99%的相同度，或與序列辨識編號2之植酸酶呈現至少99%的相同度；且該第二植酸酶與序列辨識編號3之植酸酶呈現至少99%的相同度。
- 一種用以飼養動物的套組或組合，其特徵在於其包括：(a)序列辨識編號1之卡斯許旺酵母之3-植酸酶或序列辨識編號2之卡斯特利得巴利酵母之3-植酸酶；及(b)序列辨識編號3之黑麴黴菌之3-植酸酶，其中，在沒有相異之立體特異性之植酸酶存在下，序列辨識編號1之該卡斯許旺酵母之3-植酸酶或序列辨識編號2之卡斯特利得巴利酵母之3-植酸酶以及序列辨識編號3之黑麴黴菌之3-植酸酶對植酸之水解具有協同效果。
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Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998030681A1 (en) * | 1997-01-09 | 1998-07-16 | Novo Nordisk A/S | Phytase combinations |
| US5830732A (en) * | 1994-07-05 | 1998-11-03 | Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. | Phytase |
Family Cites Families (8)
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|---|---|---|---|---|
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| ATE244302T1 (de) * | 1993-04-05 | 2003-07-15 | Aveve Nv | Phytate-hydrolyse und enzymatische zusammensetzung für die hydrolyse von phytat |
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5830732A (en) * | 1994-07-05 | 1998-11-03 | Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. | Phytase |
| WO1998030681A1 (en) * | 1997-01-09 | 1998-07-16 | Novo Nordisk A/S | Phytase combinations |
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