NO333349B1 - Avleveringssystem for innforing i den ytre oregangen som omfatter en flyktig substans for a behandle eller forebygge mellomorebetennelse. - Google Patents

Abstract

Avleveringssystem for behandling eller forebyggelse av mellomørebetennelse omfattende et omslag av et dampimpermeabelt materiale inneholdende en flyktig substans med terapeutisk effekt på mellomørebetennelse, der omslaget har en damppermeabel åpning.

Description

Foreliggende oppfinnelse angår et avleveringssystem samt en flyktig substans som sammen med avleveringssystemet anvendes til å behandle eller forebygge mellomørebetennelse.

Bakgrunn

Mellomørebetennelse er en av de mest vanlige barneinfeksjonene og er en hovedårsak til smerte og ubehag blant barn og engstelse hos foreldre. Hovedpatogenene er Streptococcus pneumonia og Hemofilus influensa. De viktigste antimikrobielle midler anvendt for å behandle mellomørebetennelse er amoksicillin, amoksicillin med klavulansyre og trimetoprimsulfametoksazol. Mellomørebetennelse er den ledende indikasjon for foreskrivelse av antimikrobielle midler hos barn i de utviklede land. I løpet av de siste to tiår er antimikrobiell resistens mot de fleste vanlige bakterier som forårsaker mellomørebetennelse blitt utbredt og svært alminnelig i noen områder. Dette har ført til problemer innen medisinsk behandling av tilstanden der mislykket behandling blir hyppigere. Selv om det er estimert at omtrent tre fjerdedeler av mellomørebetennelsestilfellene bedres spontant, er antimikrobiell behandling ikke desto mindre nødvendig for å få kontroll, siden det ofte er vanskelig eller umulig å forutsi hvilke barn som behøver antimikrobielle midler. En alternativ behandling som ikke krever systemisk administrering av antimikrobielle midler er derfor svært ønskelig.

Essensielle oljer er vanlig anvendt innen alternativ medisin, og slik behandling betegnes derfor ofte som aromaterapi. Vanlige applikasjonsmåter er hudoljer og lotion (for eksempel for anvendelse ved massasje), varme og kalde kompresser, hårkurprodukter, (for eksempel sjampoer) og blomstervann, og vanlige applikasjonsmetoder er bad, damp (for eksempel i duftrom og for inhalasjon), dampinhalasjon, dusj, ublandet påføring og oral administrering (internt bruk).

Essensielle oljer anvendes innen alternativ medisin for behandling av ulike lidelser. I "Encyclopedia of Essential Oils" (Julia Lawless, Element Books, Shaftesbury, 1992) beskrives at basilikum olje er egnet for behandling av de følgende lidelser: insektbitt, gikt, muskelverk og -smerter, reumatisme, bronkitt, øreverk, sinusitt, dyspepsi, oppblåsthet, kvalme, kramper, skrantende perioder, kulde, feber, influensa, infeksjonssykdommer, angst, depresjon, tretthet, søvnløshet, migrene og nervøse spenninger.

I håndbøker om plantemedisin er kjent at basilikumolje har antibakteriell effekt og at den kan anvendes som øredråper ved øreinfeksjoner.

Fra medikamentkataloger er det kjent som et generelt prinsipp at lokal behandling av øreinfeksjoner kan utføres ved å påføre dråper av et medikament eller en salve inneholdende et medikament på en vattdott eller en svamp. Tidlige kjente metoder for administrering av medikamentene lider imidlertid av den ulempe at medikamentet, for eksempel de essensielle oljene, er i direkte kontakt med huden i øret, hvilket forårsaker irritasjon og inflammasjon i huden. Konvensjonelle medisiner som inkluderer tidligere kjente antimikrobielle midler er heller ikke i stand til å penetrere eller diffundere gjennom den intakte trommehinnen. Følgelig foreskriver aldri leger ytre lokal behandling for mellomørebetennelse.

EP-A2-734 727 beskriver en farmasøytisk formulering for behandling av bakterielle øreinfeksjoner der formuleringen inneholder ca. 85 volum % av makadamia nøtteolje og 10 volum % av tetreolje, der 3 volum % basilikumolje tilsettes som et duftmiddel.

WO 97/01348 beskriver en farmasøytisk sammensetning for behandling for eksempel av øreinfeksjoner omfattende essensielle oljer oppnådd ved dampdestillasjon av planter fra oreganoslekten.

WO 96/37210 beskriver en farmasøytisk sammensetning inneholdende eteriske oljer utvalgt blant et antall planter. Sammensetningen anvendes som et antiinflammatorisk middel for behandling av for eksempel øre.

Inoye et al. (27) (publisert etter prioritetsdatoen til foreliggende oppfinnelse) beskriver det faktum at damp fra 14 essensielle oljer har antibakteriell aktivitet.

WO/9907347 beskriver et avleveringssystem for å administrere medisinsk væske inn i øret. Systemet består av et elastisk materiale som er vanntett og uløselig i organiske løsningsmidler.

OPPSUMMERING AV OPPFINNELSEN

Foreliggende oppfinnelse omfatter avleveringssystem tilpasset innføring i den ytre øregangen, kjennetegnet ved det omfatter et omslag av et dampimpermeabelt materiale inneholdende en flyktig substans med terapeutisk effekt på mellemørebetennelse, der omslaget har en damppermeabel åpning, der den damppermeable åpningen er forseglet med en væskeimpermeabel og damppermeabel film.

Et første aspekt ifølge oppfinnelsen er å frembringe et forbedret avleveringssystem for administrering av en flyktig substans til øret.

Dette første aspekt oppnås ved et avleveringssystem tilpasset innføring i den ytre ørekanal omfattende et omslag ("casing") av et dampimpermeabelt materiale inneholdende en flyktig substans med terapeutisk effekt på mellomørebetennelse, der omslaget har en damppermeabel åpning.

Grunnlaget for foreliggende oppfinnelse er det funn at flyktige forbindelser som plasseres i den ytre ørekanal vil fordampe og kan bringes til å penetrere eller diffundere gjennom trommehinnen inn til mellomøret for å bekjempe den tilstedeværende infeksjonen, og at det er mulig å administrere en terapeutisk substans på denne måten i en mengde tilstrekkelig for å behandle mellomørebetennelsen effektivt.

Oppfinnelsen baseres på det første rasjonale at når det anvendes et dampimpermeabelt omslag for å inneholde medikamentet, kan den direkte kontakt mellom medikamentet og huden i øret unngås. For det andre baseres oppfinnelsen på det rasjonale at når det anvendes et dampimpermeabelt omslag, som er lukket mot det ytre og åpent mot det indre er det mulig ål) rette dampen i retning av trommehinnen, 2) forhindre fordampning av dampen ut av øret og 3) øke konsentrasjonen av dampen i den ytre ørekanal for kraftig å fremme transporten av damp over trommehinnen inn i mellomøret.

Følgelig har foreliggende oppfinnelse frembrakt en mulighet for å behandle mellomørebetennelse lokalt på en effektiv måte.

Det er derfor mulig å frembringe en forbedret fremgangsmåte for å behandle eller forebygge mellomørebetennelse.

Fremgangsmåten omfatter introduksjon i den ytre ørekanal av en flyktig substans med en terapeutisk effekt på mellomørebetennelse ved hjelp av avleveringssystemet ifølge oppfinnelsen.

Det er videre mulig å anvende/rfemstille følgende:

Basilikumolje for behandling eller forebyggelse av mellomørebetennelse. Anvendelse av basilikumolje for fremstilling av et medikament for behandling eller forebyggelse av mellomørebetennelse. • En farmasøytisk sammensetning inneholdende basilikumolje som aktiv ingrediens. • En farmasøytisk sammensetning for behandling eller forebyggelse av mellomørebetennelse inneholdende basilikumolje som aktiv ingrediens. • Anvendelse av en farmasøytisk sammensetning inneholdende basilikumolje som aktiv ingrediens for fremstilling av et medikament for behandling eller forebyggelse av mellomørebetennelse. • Farmasøytisk sammensetning inneholdende en effektiv dose av basilikumolje som aktiv ingrediens. • En farmasøytisk sammensetning inneholdende basilikumolje som den primære aktive ingrediens. • En farmasøytisk sammensetning inneholdende basilikumolje som det eneste aktive ingrediens. • En farmasøytsisk sammensetning inneholdende basilikumolje som aktiv ingrediens og som ikke omfatter sammensetningen beskrevet i EP-A2-734 727: ca. 85 volum % makadamia nøtteolje, 10 volum % tetreolje, 3 volum % basilikumolje og 2 % av et duftmiddel.

Det er overraskende blitt funnet at basilikumolje har en antibakteriell effekt, og at basilikumoljen er effektiv ved behandling av mellomørebetennelse når den innføres i den ytre ørekanal. Det antas at virkningsmåten for basilikumolje er som følger: flyktige komponenter fra basilikumoljen fordamper fra overflaten der den er påført og trenger gjennom trommehinnen inn til mellomøret for å bekjempe bakteriene som er til stede der.

DETALJERT BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN

Avleveringssystem

En foretrukken utførelsesform av avleveringssystemet ifølge oppfinnelsen omfatter videre en bærer omfattende den flyktige substansen.

Egnet som bærer i avleveringssystemet ifølge oppfinnelsen er et hvilket som helst materiale eller hjelpemiddel, som kan introduseres i omslaget og forbli der, og som kan bære den flyktige substansen på en slik måte at den flyktige substansen tillates å fordampe fra bæreren.

Bærere kan for eksempel være bandasjer, plastre, vattdotter, puter, kluter, svamper og strimler. Bærerne kan være laget av bomull etc.

Ved fremstilling av avleveringssystemet ifølge oppfinnelsen introduseres en egnet formulering av den flyktige substans til det indre av omslaget. Som flyktig substansformulering kan en hvilken som helst formulering nevnt nedenfor anvendes.

Når formuleringen av flyktig substans er fast eller halvfast, for eksempel i form av en pasta eller gel, påføres den fortrinnsvis til bæreren eller veggen av omslaget i form av et lag, fra hvilket fordampning av den flyktige substans kan finne sted.

Når en flytende formulering av den flyktige substans anvendes kan formuleringen absorberes i en egnet bærer, for eksempel en vattdott eller svamp. Den fuktede bærer plasseres deretter i det indre av omslaget. Alternativt plasseres den flytende formuleringen i det indre av omslaget uten å ha blitt absorbert på en bærer.

For å unngå at den flytende formuleringen renner ut av omslaget kan den damppermeable åpningen forsegles med en væske impermeabel og damppermeabel film.

De aktive komponenter i den flyktige substansformuleringen forhindres fortrinnsvis fra fordampning fra avleveringssystemet ved lagring ved forsegling av den damppermeable åpningen med en impermeabel film eller deksel som kan fjernes. Filmen som kan fjernes kan være laget av et hvilket som helst egnet dampugjennomtrengelig materiale, slik som en folie, for eksempel en aluminiumfolie og en plastikk.

Avleveringssystemet ifølge oppfinnelsen er tilpasset tetting av åpningen av den ytre ørekanal for å forhindre eller redusere fordampning av den flyktige substans fra den ytre ørekanal ut til omgivelsene, og følgelig å optimalisere diffusjonen av dampene av den flyktige substansen gjennom trommehinnen inn i mellomøret. En slik tetting kan være i form av omslagsveggen eller den kan ha formen til et dampugjennomtrengelig lag plassert på enden av omslaget som skal plasseres ved åpningen av ytre ørekanal. Tettingen kan være laget av et hvilket som helst dampugjennomtrengelig materiale, slik som en folie, for eksempel en aluminiumsfolie og en plastikk.

Omslaget er fortrinnsvis laget av gummi, plastikk, silikon eller beslektede forbindelser.

I en foretrukken utførelsesform av avleveringssystemet ifølge oppfinnelsen har omslaget en eller flere utspring tilpasset slik at det hjelper å holde avleveringssystemet på plass etter innsetting i den ytre ørekanal. Utspringet er fortrinnsvis et ringformet utspring.

I en annen foretrukken utførelsesform av avleveringssystemet ifølge oppfinnelsen har omslaget et kileformet hode i enden omfattende den damppermeable åpning. Et slikt kileformet hode både underletter innsetting av avleveringssystemet i øret og hjelper til å holde det på plass etter innsetting. Omslaget er fortrinnsvis avlangt, og den damppermeable åpning er fortrinnsvis plassert på en ende av omslaget. Det er foretrukket at omslaget har et sirkelformet tverrsnitt.

Fremgangsmåte for behandling

Innføring av en terapeutisk mengde av en flyktig substans til den ytre ørekanal utføres ved anvendelse av avleveringssystemet ifølge oppfinnelsen, eventuelt omfattende en bærer omfattende den flyktige substans der avleveringssystemet plasseres i den ytre ørekanal.

Avleveringssystemet kan etterlates i den ytre ørekanal fra 2 minutter til 24 timer, fortrinnsvis fra 5 minutter til 2 timer, helst fra 10 minutter til 60 minutter, og aller helst fra 20 til 40 minutter, for eksempel 30 minutter.

Når varigheten av behandlingen er mellom 20 og 40 minutter gjentas fortrinnsvis behandlingen fra hver 4. til hver 8. time i løpet av dagen, for eksempel fra 2-4 ganger om dagen. Behandlingen fortsetter inntil øreverken har forsvunnet, vanligvis 1-4 dager. En siste behandling gis fortrinnsvis etter øreverken er forsvunnet.

Flyktig substans med terapeutisk effekt på mellomørebetennelse

Den flyktige substans med terapeutisk effekt på mellomørebetennelse kan være en hvilken som helst kjent antimikrobiell substans, som er flyktig. Slike flyktige antimikrobielle substanser inkluderer essensielle oljer, alkoholer, ketoner slik som aceton og etere.

Den flyktige substans med terapeutisk effekt på mellomørebetennelse kan være en hvilken som helst essensiell olje med antimikrobielle egenskaper. Essensielle oljer fra blant annet de følgende kilder er vist å ha antimikrobielle egenskaper:

achillea fragrantissima (1) alaska nutkasypress (13), anis (7), angelica (7,18), basilikum (7,18), laubær (18), bergamott (18), cajeput (18), calamintha nepeta (9), kamfer (24, 18), kardemomme (2, 7, 18), cassia (18), selleri (7, 18), kamille (18), kanel (2, 8, 12, 18), cistus creticus (5), nellik (2, 8,17, 18), koriander (7, 17), karve (18), dill (18), dillgress (7), fenikkel (7), frankinsense (18), eucalyptus (18), geranium (15,16,17,18), ho-tre (18), hoslundia opposita (10), junipereiner (13), hoslundia opposita (10), junipereiner (13), ladano (6), lavendel (15, 18), sitron (16, 18), listerin (20,22), litsea (18), melisse (18), merian (18), myrra (18), myrt (18), nigella sativa (7), neroli (18), niaouli (18), oregano (7), appelsin (18,25), palmorosa (18), persille (7), patchouli (18), peppermynte (15, 18, 23), petitgrain (18), peumus boldusblader (26), spansk pepper (18), furunål (18), piper angustifolium (24), ravensera (18), rosmarinolje (8), rosmarin (2, 7, 18), rosentre (18), salvie (18, 23), schinus molle linn (11), senecio graveolens (compositae) (21), tanacetum parthenium (14), tetreolje (3,4, 8,18,23), timian (17,18), verbena (18), western rød seder (13) etc. Videre nevner encyclopedia av essensielle oljer (Julia Lawless, Element Bokks, Shaftesbury, 1992) at essensielle oljer fra de følgende kilder har antibakteriell effekt: ajowan, allehånde, amyris, angelica, anise star, anisfrø, stronmelisse, kanadisk balsam, kopivabalsam, perubalsam, tolubalsam, laubærtre benzoin, bergamott, bjørkesøte, bjørkehvitt, boldoblader, borneol, spansk bromm, buchu, cabreuva, cade, cajeput, calamintha, kalmus, kamfer, canaga, gulrotfrø, cassia, cassie, sedertre atlas, cedartre virginian, sellerifrø, tysk kamille, romersk kamille, kjørvel, kanel, sitronella, nellik, koriander, kostus, cubebs, karve, sypress, deertongue, dill, alantrot, elemi, eucalyptus sitron-duftende, fenikkel, sølvgedegran, frankincense, galangal, gummiharpiks, gardenia, hvitløk, geranium, ingefær, grapefrukt, helichrysum, pepperrot, hyacint, isop, jaborandi, jasmin, einer, labdanum, lavandin, lavendelskudd, sitrongress, lime, lilnalo, litsea cubeba, løpstikke, mandarin, ringblomst, meriansøte, mastik, mimosa, mynt, peppermynte, spearmynt, sennep, myrra, myrt, niaouli, muskatnøtt, eikemose, løk, opopanax, bitter appelsin, appelsinblomst, vanlig oregano, spansk oregano, palmarosa, persille, patchouli, rose, rosmarin, rosentre, rute, salvie clary, sandaltre, tetre, vanlig timian, terpentin, vendelrot, sitron verbena, vetiver, fiol, ryllik, og ylang ylang.

Foretrukne essensielle oljer er oljer oppnådd fra basilikum, lavendel, kamille, tetre og salvie, mest foretrukket er basilikumolje.

Den essensielle oljen egnet for anvendelse ifølge foreliggende oppfinnelse kan tilberedes ved ekstraksjon av plantemateriale inneholdende den essensielle oljen. Enhver egnet ekstraksjonsmetode kan anvendes, inkludert destillasjon, fortrinnsvis dampdestillasjon, ekspresjon, løsningsekstraksjon, enfleurage og maserasjon. Ekstraksjonen utføres fortrinnsvis ved dampdestillasjon. Det henvises til encyclopedia of Essentail Oils (Julia Lawless, Element Books, Shaftesbury, 1992), side 35-37.

Basilikumolje

Den essensielle oljen som anvendes som flyktig substans med terapeutisk effekt på mellomørebetennelse er fortrinnsvis basilikumolje ( Ocimum Basilicum).

En hvilken som helst kommersielt tilgjengelig basilikumolje er egnet for anvendelse ifølge foreliggende oppfinnelse.

Basilikumoljen egnet for anvendelse ifølge foreliggende oppfinnelse kan tilberedes ved ekstraksjon av plantemateriale inneholdende basilikumoljen. Fortrinnsvis utføres ekstraksjonen ved dampdestillasjon.

Basilikumoljen kan anvendes i umodifisert form, og den kan formuleres som en farmasøytisk sammensetning.

Farmasøytisk sammensetning

En farmasøytisk sammensetning kan formuleres som enhver egnet formulering kjent innen teknikken ved anvendelse av hvilke som helst farmasøytisk akseptable eksipienser. Formuleringene inkluderer kremer, salver, lotion, linimenter, geler, hydrogeler, løsninger, suspensjoner, sprayer, pasta og plastre.

De farmasøytisk akseptable eksipienser kan inkludere emulgatorer, antioksidanter, bufferstoffer, konserveringsmidler, fuktestoffer, gelateringsmidler, geldannende midler, salvebaser, parfyme og hudbeskyttende stoffer.

Eksempler på emulgatorer er naturlig forekommende gummier, for eksempel gummi arabikum eller tragantgummi, naturlig forekommende fosfatider, for eksempel soyabønnelecitin eller sorbitan monooleatderivater.

Eksempler på antioksidanter er butylert hydroksyanisol (BHA), askorbinsyre og derivater av denne, tokoferol og derivater av denne, butylert hydroksyanisol og cystein.

Eksempler på konserveringsmidler er parabener, slik som metyl- eller propyo- p-hydroksybenzoat og benzalkoniumklorid.

Eksempler på fuktemidler er glyserin, propylenglykol, sorbitol og urea.

Eksempler på gelatinerende midler er natrium-EDTA, sitronsyre og fosforsyre.

Eksempler på geldannende midler er karbopol, cellulosederivater, bentonitt, alginater, gelatin og polivinylpyrrolidon.

Eksempler på salvebaser er bivoks, paraffin, cetylpalmitat, vegetabilske oljer, sorbitanestere av fettsyrer (span), polyetylenglykoler, og kondenserte produkter mellom sorbitanestere av fettsyrer og etylenoksid, for eksempel

polyoksyetylensorbitanmonooleat (Tween).

Eksempler på hudbeskyttende midler inkluderer kortikosteroider.

Formuleringen kan inkludere to eller flere flyktige substanser med terapeutisk effekt mot mellomørebetennelse, for eksempel en hvilken som helst blanding av disse.

Definisjoner

Betegnelsen "basilikum" som brukt heri betyr krydderplanten "ocimum basilicum".

Betegnelsen "essensiell olje" som brukt heri betyr et hvilken som helst aromatisk produkt eller ekstrakt oppnådd fra naturlige kilder, slik som planter, inkludert sammenvoksninger, resinoider og absolutter, hvilket inneholder en blanding av flytige og ikke-flyktige komponenter, slik som en voks eller et resin.

I det følgende vil oppfinnelsen bli beskrevet i ytterligere detalj med henvisning til figurene.

FIGURER

Figur 1 viser en foretrukken utførelsesform av avleveringssystemet ifølge

oppfinnelsen.

Figur 2 viser en annen for foretrukken utførelsesform av avleveringssystemet

Ifølge oppfinnelsen.

Figur 3 viser plasseringen av et avleveringssystem ifølge oppfinnelsen i den ytre ørekanal til en person. Figur 4 er et diagram som viser effekten av behandling av mellomørebetennelse forårsaket av S. pneumonia uttrykt som forholdsvis forbedring versus tid etter behandlingsstart. Figur 5 er et diagram som viser effekten av behandling av mellomørebetennelse forårsaket av H. influensa uttrykt som forholdsvis bedring versus tid etter behandingsstart. Figur 1 viser et avleveringssystem 1 i form av en øreplugg som omfatter et omslag 2 laget av gummi eller plastikk med et kileformet hode 3 med et sirkulært utspring 4, som hjelper å holde avleveringssystemet på plass med en gang det er innføyet i den ytre ørekanal. Omslaget 2 er lukket i den proksimale enden 5 og åpen i den distale ende 6. Omslaget 2 inneholder et stykke bomull 7, som er dynket med for eksempel 2-4 dråper av flyktig terapeutisk flytende substans. Figur 2 viser et avleveringssystem 10 i form av en øreplugg omfattende et omslag 11 med et kileformet hode 12 med et sirkulært utspring 13 som hjelper til å holde avleveringssystemet på plass når det er innført i den ytre ørekanal. Omslaget 11 har et hult rom 14 i den distale delen. Det hule rommet 14 inneholder en flyktig terapeutisk væskeformet substans. Det hule rommet 14 er forseglet i den distale enden av omslaget 11 med en forseglende film 15, som er impermeabel for væske og gjennomtrengelig for damp. På den ytre siden av den forseglede film 15 er et dampugjennomtrengelig deksellag 16 plassert for å forhindre fordampning av den terapeutiske substans før anvendelse, der det dekkende laget 16 skal fjernes umiddelbart før anvendelse. Figur 3 viser plasseringen av et avleveringssystem 20 i den ytre ørekanal 21 til en person. Figur 3 viser også mellomøret 22, der den bakterielle infeksjonen som skal behandles er til stede, så vel som trommehinnen 23 som separerer den ytre ørekanal 21 og mellomøret 22. Den flytige terapeutiske væskeformede substans til stede i avleveringssystemet 20 vil fordampe fra den distale enden 20 av avleveringssystemet 20 og penetrere trommehinnen 23 for å nå mellomøret 22 og bakteriene som der er til stede der det vil utøvre sin funksjon som et antibakterielt middel.

I det følgende vil oppfinnelsen bli beskrevet i ytterligere detalj med hensvisning til eksempler.

Eksempel

Hensikt

Å sammenlikne effektiviteten til substans A og placebo påført i ytre ørekanal, ved behandling av eksperimentell mellomørebetennelse hos rotter ved anvendelse av eksperimentell mellomørebetennelse hos rotter indusert ved de mest vanlige patogenene S. pneumonia og H. influensa. Substans A er basilikumolje med varemerkenavnet Aqua Oleum fra Lower Warf, Wallbridge, Stroud, Glos., GL5 3JA

Materialer og metoder

Bakteriestammer:

Tre bakteriestammer som konsekvent forårsaker mellomørebetennelse hos rotte i tidligere eksperimenter ble utvalgt for studien. To stammer av S. pneumonia (type 3, fra Lund og type 6B (nr. 9606+06001) fra Island) og en H. influensa (ikke-innkapslet, nr. 3655 fra Lund). Bakteriene ble lagret ved -70°C, dyrket fra lagringsmediet (tryptisk soyanæringsløsning (oksoid) med 10% glyserol) på blodagar-(5'. pneumonia) og sjokolade b\ oési% ax-{ H. influensa) plater. Etter 18 timers inkubering (tilsatt CO2) ble S. pneumonia- stammene inokulert i Todd Hewitt-næringsløsning (oksoid), inkubert i 6 timer (frem til lettt grumset), høstet ved sentrifugering i 15 ved 3000 rpm og resuspendert i fersk Todd Hewitt næringsløsning til en optimal tetthet tilsvarende en konsentrasjon på 106-7 cfu/ml. H. influensa- stammen ble inokulert i hjerteinfusjonsnæringsløsning (Difco) med Fildes tilskudd (BBL), inkubert i 3 timer (frem til lett grumset), høstet ved sentrifugering i 15 minutter ved 3000 rpm og resuspendert i frisk hjerteinfusjonsnæringsløsning (med Fildes tilskudd) til en optisk tetthet tilsvarende en konsentrasjon på 10<8> cfu/ml. Telling av levedyktighet ble utført for å bekrefte bakterietettheten og suspensjonene ble oppbevart nedkjølt (4°C) frem til de ble anvendt for inokulering hos rottene.

Rottemellomørebetennelsemodell

Friske hann Spraquea-Dawley-rotter, vekt 250-300 g ble anvendt. Før alle arbeidsoperasjoner, undersøkelse ved et otomikroskop og innføring av substans A i ørekanalen, ble dyrene bedøvet med kloralhydrat administrert intrapeirtonealt. Omtrent 0,05 ml av bakteriesuspensjonen ble inokulert med en fin nål gjennom den benete veggen av bulla direkte i mellomørethulrommet i venstre øre som beskrevet tidligere.

(Prellner et al., Microb Drug resist 1999). Før inokuleringen ble trommehinnene inspisert for å bekrefte normalt utseende.

Diagnostisering av akutt mellomørebetennelse krever direkte visualisering av uskjennomskinnelig væske bak trommehinnen og fortykning av kar. Under inspeksjonene ble disse symptomer gradert i henhold til mengde væske i mellomøret som F(+) til F+++ og i henhold til dilatering av kar på trommehinnen som V(+) til V++ F=fluid, V=vessels)(kar)). Væsken selv ble karakterisert som enten purulent, klar eller både og (både purulent og klar væske synliggjort).

Behandlings- og inspeksjonsplan.

Eksperimentene ble utført ved to atskilte anledninger (del I og II). Alle rottene ble håndtert og inokulert med den hensiktsmessige bakteriesuspensjon ved dag 0. De ble inspisert på morgenen dag 2, og etter inspeksjonen ble behandlingen startet med enten substans A eller placebo. Behandling ble igjen gitt på ettermiddagen dag 2. Dag 3 var som dag 2 med inspeksjon og to behandlinger. Alle dyrene ble inspisert igjen dag 4, og de som ikke ble dyrket ved parasentese (tapping av væske fra kroppshulrom) ble også inspisert på dag 5 og dag 10. Behandlingen ble gitt ved å dynke en liten bomullsdott med enten substans A eller placebo (olivenolje). Rottene behandlet med placebo kalles alle kontroller. Bomullsdotten ble plassert i den ytre ørekanal i det høyre øret. Ørekanalen ble deretter forseglet med en plastikkplugg. Hver behandling varte frem til rottene våknet godt nok til å fjerne pluggen fra øret. Dette tok ca. en halv til en time. Ingen rotte hadde noen bomull eller propp igjen i øret ved den nesteinspeksjon. Etter to dagers behandling (dag 2 og 3) hadde alle dyrene behandlet med substans A utviklet ytre otitt og ble ikke behandlet videre.

Del I: En gruppe av tjuefem rotter ble inokulert med pneumococci (13 med type 6b og 12 med type 3) og en annen gruppe på 25 med H. influensa- stammcn. I hver gruppe fikk

17 dyr behandling med substans A og 8 placebo).

Del II: For å ekskludere muligheten for at ytre ørebetennelse spiller en rolle under forbedring av mellomørebetennelse og for å utvide pneumokokkeksperimentetene ble 58 rotter inokulert med pneumococci (28 med type 6B og 30 med type 3). Seksten rotter i hver gruppe fikk behandling med substans A og 9 rotter md placebo (olivenolje). Ytre ørebetennelse ble fremprovosert ved å irritere ørekanalen til tre rotter inokulert med type 6B og fem med type 3B.

Dyrking av aspirat fra mellomøret

Mellomørevæske ble innsamlet etter nåleparasyntese med en plastikk inokuleringsløkke og inokulert direkte på blodagar med gentamicin (5 ml/l) (pneumococci) eller sjokolade blodagar ( H. influensaé). Disse rottene ble avlivet samtidig og var ikke tilgjengelig for ytterligere inspeksjon.

Del I: På dag 4 ble væske fra høyre mellomøre hos 11 rotter (3 kontroller og 8 behandlede) infisert med penumococci og 12 rotter (4 kontroller og 8 behandlede) infisert med H. influensa utvalgt tilfeldig dyrket. De gjenværende rottene ble avlivet med sine indre og mellomører intakt for fiksering i glutaraldehyd.

Del II: Mellomørevæske fra alle dyrene ble dyrket ved ulike tidspunkt etter at behandlingen var avsluttet.

Statistikk

Kurerte rotter ble sammenliknet ifølge Fishers eksakte test.

Resultater

I løpet av del I utviklet 4 rotter (2 i type 6B penumococcigruppen og 2 i H. influensa-gruppen) hjertestans under anestesi og /eller operasjon og døde. Undersøkelsesgruppen i del I ble derfor redusert til 23 rotter.

Pneumococcinfeksjoner

Resultatene fra de direkte otomikroskopiske inspeksjoner vises i tabell IA. Alle dyr hadde utviklet akutt mellomørebetennelse i høyre øre på dag 2 vurdert ved direkte inspeksjon. Alle dyrene i del I hadde pussholdig væske og alle unntagen 6 i del II. Disse 6 rottene hadde væske som hadde begynnende pussdannelse men var fortsatt delvis klar (blandet). På den tredje dagen var ørebetennelsen fortsatt purulent i alle rottene i del I, og alle utenom ett av dyrene som hadde blandet utseendet på dag 2 hadde nå utviklet pussholdig væske. Etter behandling, på den fjerde dagen hadde 25 rotter i behandlingsgruppen blitt bedre, dvs. væsken var fullstandig klar eller begynte å bli klar, men var fortsatt delvis purulent (blandet).Bare 3 av rottene i kontrollgruppen viste tegn på slik bedring den fjerde dagen etter inokulering, dvs. dag 2 etter start av behandling (p=0,007) (figur 4). Etter den tredje behandlingen med substans A utviklet alle rotter ytre ørebetennelse. Inflammasjonen og utsondringen av væske forhindret adekvat undersøkelse av ørehinnen i noen av de andre dyrene på dag 5. Resultatene fra mellomørekulturene vises i tabell IA. Forskjellene i kulturmengde mellom behandlings-og kontrollgruppene er ikke signifikant (p=l).

Hem<q>filus influensainfeksjoner.

Resultatene fra den direkte otomikroskopiske inspeksjon vises i tabell IB. Alle dyrene hadde utviklet akutt pussholdig mellomørebetennelse i høyre øret på dag 2, vurdert ved direkte inspeksjon. Ørebetennelsen hadde allerede startet å bli klarere i den behandlede gruppen på dag 3, men det var ingen bedring i kontrollgruppen frem til dag 5. På dag 3, hadde fire av rottene behandlet med substans A klarnet væske med puss i mellomøret, men ingen av kontrolldyrene (p= 0,27). Denne forskjellen er ikke statistisk signifikant. Ved å se på forbedringen (dvs. pussdannelse fjernet eller begynt fjernet), 15 behandlede rotter var bedre men ingen av kontrollrottene (p<0,0001). På dag 4 etter inokulering (dag 2 etter behandlingsstart), hadde ingen bortsett fra 3 behandlede rotter lenger pussholdig mellomørebetennelse, men alle kontrollrottene (p=0,00005) (figur 5). Etter dag 4 var ytterligere evaluering ikke nødvendig, siden parasentese var utført på 11 av rottene dag 4. Som for behandling av pneumococcinfeksjoner utviklet alle rottene ytre ørebetennelse etter den tredje behandlingen med substans A. Imidlertid forhindret ikke inflammasjonen og væskedannelsen adekvat undersøkelse av trommehinnen hos disse dyrene. Kulturer fra mellomørevæsken fra 11 rotter på dag 4 viste vekst av H. influenza på 3 dyr alle i kontrollgrupen men ingen i behandlingsgruppen (se tabell IB) (p=0,02).

Diskusjon

Behandling med substans A, gitt eksternt i øregangen fører til betydelig bedre kurering og forbedring av eksperimentell mellomørebetennelse forårsaket av H. influensa enn placebo. I tillegg fører den til en forbedring i signifikant flere mellomørebetennelsestilfeller infisert med pneumococci, og viste en lydelig tendens på høyere kurering enn placebo. Bakteriologisk kureringsrate var ikke forskjellig mellom behandlede og kontrollgrupper infisert med penumococci, men behandling med substans A resulterte i betydelig høyere bakteriologisk kureringsrate enn placebo hos H. influensa- infisertc rotter. Dette er første gang at applikasjon av lokal ekstern behandling for mellomørebetennelse fører til betydelig bedre resultater enn placebo.

Uheldigvis var behandlingen med substans A, forbundet med utvikling av øregangsbetennelse etter den tredje behandling. Behandlingen ble derfor ikke fortsatt utover den andre behandlingsdag. Behandlingen med substans A kunne mulig ha resultert i ytterligere helbred dersom den hadde fortsatt. Muligheten for en kurerende effekt av ytre behandling av mellomørebetennelse kan ikke ekskluderes. Selv om dette ble vurdert som usannsynlig ytre ørebetennelse indusert hos 8 rotter infisert med pneumococi. Ytre ørebetennelse viste ikke noen effekt på mellomøreinfeksjonen.

Resultatene fra denne studien viste at ekstern behandling med substans A er betydelig mer effektivt ved forbedring og heling av mellomørebetennelse forårsaket av H. influensa og betydelig mer effektivt ved forbedring av mellomørebetennelse forårsaket av penumocci enn placebo. Denne behandlingstilnærming kan bli en viktig alternativ behandling for akutt mellomørebetennelse, siden den ikke krever systemisk anvendelse av antimikrobielle midler.

REFERANSELISTER

(1) Barel S, Segal R, Yashphe J. The antimicrobial activity of to essential oil from Achillea 5 fragrantissima. J Ethnopharmacol 1991;33:187-91. (2) Calcuttawalla A, Bhatt RM, Pandita N, Vaidya ADB. Potent antimicrobial activity of volatile oils from some spices. Abstract, 99th Annual Meeting, American Society 10 for Microbiology, Chicago, mai 1999. ASM, Washington, 1999. (3) Carson CF, Riley TV. Antimicrobial activity of the major components of the essential oil of Melaleuca 15 alternifolia. J Appl Bacteriol 1995;78:264-9. (4) Cox SD, Mann CM, Markham JL, Bell HC, Gustafson JE, Warmington JR, Wyllie SG. The mode of antimicrobial action of the essential oil of Melaleuca alternifolia 20 (tea tree oil). J Appl Microbiol 2000;88:170-5. (5) Demetzos C, Katerinopoulos H, Kouvarakis A, Stratigakis N, Loukis A, Ekonomakis C, Spiliotis V, Tsaknis J. Composition ant antimicrobial activity of the 25 essential oil of Cistus creticus subsp. eriocephalus [letter]. Planta Med 1997;63:477-9. (6) Demetzos C, Stahl B, Anastassaki T, Gazouli M, Tzouvelekis LS, Rallis M. Chemical analysis and 30 antimicrobial activity of the resin Ladano, of its essential oil and of the isolated compounds [letter]. Planta Med 1999;65:76-8. (7) Elgayyar M, Draughon FA, Golden DA, Mount JR. 35 Antimicrobial activity of essential oils from plants to selected pathogenic and saprophytic microorganisms. Abstract, 99th Annual Meeting, American Society for Microbiology, Chicago, mai 1999. ASM, Washington, 1999. (8) Favre-Bonte S, Kamel C, Joly B, Forestier C. 5 Antimicrobial properties of essential oils and spices extracts ageinst food pathogens. Abstract, 99th Annual Meeting, American Society for Microbiology, Chicago, mai 1999. ASM, Washington, 1999. (9) Flamini G, Cioni PL, Puleio R, Morelli I, Panizzi L. Antimicrobial activity of the essential oil of Calamintha nepeta and its constituent pulegone against bacteria and fungi. Phytother Res 1999; 13:349-51. (10) Gundidza GM, Deans SG, Svoboda KP, Mavi S. Antimicrobial activity of essential oil from Hoslundia opposita. Centr Afr J Med 1992;38:290-3. (11) Gunidza M. Antimicrobial activity of essential oil 20 from Schinus molle Linn.CentrAfr JMed 1993,39:231-4. (12) Hili P, Evans CS, Veness RG. Antimicrobial action of essential oils: the effect of dime thylsulphoxide on the activity of cinnamon oil. Lett Appl Microbiol 25 1997;24:269-75. (13) Johnston WH, Karchesy J, Craig AM. Antimicrobial activity of heartwood extracts and essential oils derived from several tree species against anaerobic bacteria and 30 yeast. Abstract, .99th Annual Meeting, American Society for Microbiology, Chicago, mai 1999. ASM, Washington, 1999. (14) Kalodera Z, Pepeljnjak S, Blazevic N, Petrak T. 35 Chemical composition and antimicrobial activity of Tanacetum parthenium essential oil. Pharmazie 1997;52:885-6. (15) Lis-Balchin M, Hart S. Studies on the mode of 5 action of the essential oil of lavender (Lavundula angustifolia, P. Miller). Phytother Res 1999;13:540-2. (16) Lis-Balchin M; Buchbauer G; Ribisch K; Wenger MT. Comparative antibacterial effects of novel Pelargonium 10 essential oils and solvent extracts. Lett Appl Microbiol 1998;27(3):135-41. (17) Lis-Balchin M, Buchbauer G, Hirtenlehner T, Resch M. Antimicrobial activity of Pelargoinium essential oils 15 added to a quiche filling as a model food system. Lett Appl Microbiol 1998;27:207-10. (18) Lis-Balchin M, Deans SG. Bioactivity of selected plant essential oils against Listeria monocytogenes. J 20- Appl Microbiol 1997;82(6):759-62. (19) Lis-Balchin M, Deans SG. Antimicrobial effects of hydrophilic extracts of Pelargonium species (Geraniaceae). Lett Appl Microbiol 1996;23(4):205-7 (20) Pan PH, Finnegan MB, Sturdivant L, Barnett ML. Comparative antimicrobial activity of an essential oil and an amine fluoride/stannous fluoride mouthrinse in vitro. J Clin Periodontol 1999;26:474-6. (21) Perez C, Agnese AM, Cabrera JL. The essential oil of Senecio gravedens (Compositae): chemical composition and antimicrobial activity tests. J Ethnopharmacol 1999;66:91-6. (22) Riep BG, Bernimoulin JP, Barnett ML. Comparative antiplaque effectiveness of an essential oil and an amine fluoride/stannous fluoride mouthrinse. J Clin Periodontol 1999;26:164-8. (23) Shapiro S, Meier A, Guggenheim B. The antimicrobial activity of essentaila oils and essential oil components towards oral bacteria. Oral Microbiol Immunol 1994;9:202-8. (24) Tirillini B, Velasquez ER, Pellegrino R. Chemical composition and antimicrobial activity of essential oil -of Piper angustifolium [letter]. Planta Med 1996;62:3723. (25) Vargas I, Sanz I, Moya P, Prima-Yufera E. Antimicrobial and antioxidant compounds in the nonvolatile fraction of expresed orange essential oil. J Food Prot 1999;62:929-32. (26) Vila R, Valenzuela L, Bello H, Canigueral S, Montes M, Adzet T. Composition and antimicrobial activity of the essential oil of Peumus boldus leaves [letter]. Planta Med 1999;65:178-9. (27) Inouye S, Takizawa T., Yamaguchi H. Antibacterial activity of essential oils and their major constituents against respiratory tract pathogens by gaseous contact. Journal of Antimicrobial Chemotherapy (2001) 47, 565-573.

Claims (14)

1. Avleveringssystem tilpasset innføring i den ytre øregangen, karakterisert ved at det omfatter et omslag av et dampimpermeabelt materiale inneholdende en flyktig substans med terapeutisk effekt på mellemørebetennelse, der omslaget har en damppermeabel åpning, der den damppermeable åpningen er forseglet med en væskeimpermeabel og damppermeabel film.

2. Avleveringssystem ifølge krav 1, karakterisert ved at det ytterligere omfatter et bærermateriale omfattende den flyktige substansen.

3. Avleveringssystem ifølge krav 2, karakterisert ved at bærermaterialet er laget av bomull.

4. Avleveringssystem ifølge et hvilket som helst av krav 1-3, karakterisert ved at den damppermeable åpningen er forseglet med en dampimpermeabel film som kan fjernes.

5. Avleveringssystem ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, karakterisert ved at omslaget har en eller flere utspring tilpasset for å holde avleveringssystemet på plass etter innføring i den ytre øregangen.

6. Avleveringssystem ifølge krav 5, karakterisert ved at utspringet er et sirkelformet utspring.

7. Avleveringssystem ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, karakterisert ved at omslaget har et kileformet hode på den enden som omfatter den damppermeable åpningen.

8. Avleveringssystem ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, karakterisert ved at omslaget er laget av et gummimateriale.

9. Avleveringssystem ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, karakterisert ved at omslaget er laget av et silikonmateriale.

10. Avleveringssystem ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, karakterisert ved at den flyktige substans er en essensiell olje.

11. Avleveringssystem ifølge krav 10, karakterisert ved at den essensielle oljen er basilikumolje (Ocimum Basilicum).

12. Avleveringssystem ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, karakterisert ved at omslaget er avlangt.

13. Avleveringssystem ifølge krav 12, karakterisert ved at den damppermeable åpningen befinner seg på den ene enden av omslaget.

14. Avleveringssystem ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, karakterisert ved at omslaget har et sirkulært tverrsnitt.