NO333259B1 - Peptider som inhiberer Casein Kinase II fosforyleringssete og som kan anvendes for fremstilling av medikamenter til inhibering av tumorcelle-proliferasjon, samt DNA ekspresjonsvektorer som koder for slike peptider - Google Patents
Peptider som inhiberer Casein Kinase II fosforyleringssete og som kan anvendes for fremstilling av medikamenter til inhibering av tumorcelle-proliferasjon, samt DNA ekspresjonsvektorer som koder for slike peptider Download PDFInfo
- Publication number
- NO333259B1 NO333259B1 NO20043112A NO20043112A NO333259B1 NO 333259 B1 NO333259 B1 NO 333259B1 NO 20043112 A NO20043112 A NO 20043112A NO 20043112 A NO20043112 A NO 20043112A NO 333259 B1 NO333259 B1 NO 333259B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- peptides
- hpv
- cells
- ifn
- ckii
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 82
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 70
- 102000052052 Casein Kinase II Human genes 0.000 title claims abstract description 40
- 108010010919 Casein Kinase II Proteins 0.000 title claims abstract description 40
- SLPJGDQJLTYWCI-UHFFFAOYSA-N dimethyl-(4,5,6,7-tetrabromo-1h-benzoimidazol-2-yl)-amine Chemical compound BrC1=C(Br)C(Br)=C2NC(N(C)C)=NC2=C1Br SLPJGDQJLTYWCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 38
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 title claims abstract description 32
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims description 7
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 title claims description 7
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 title claims description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 title claims description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 title description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 208000022361 Human papillomavirus infectious disease Diseases 0.000 claims description 37
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 11
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 11
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 claims description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000003902 lesion Effects 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims 1
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 abstract description 10
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 abstract description 10
- 241000341655 Human papillomavirus type 16 Species 0.000 abstract description 9
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 abstract description 4
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 abstract description 4
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 abstract description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 abstract description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 38
- 230000008696 hypoxemic pulmonary vasoconstriction Effects 0.000 description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 9
- 102000027450 oncoproteins Human genes 0.000 description 9
- 108091008819 oncoproteins Proteins 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 6
- 101000767631 Human papillomavirus type 16 Protein E7 Proteins 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 101100152433 Caenorhabditis elegans tat-1 gene Proteins 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 5
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 108010051109 Cell-Penetrating Peptides Proteins 0.000 description 4
- 102000020313 Cell-Penetrating Peptides Human genes 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 3
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 206010064912 Malignant transformation Diseases 0.000 description 3
- 208000009608 Papillomavirus Infections Diseases 0.000 description 3
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000010468 interferon response Effects 0.000 description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000036212 malign transformation Effects 0.000 description 3
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 206010059313 Anogenital warts Diseases 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 2
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 2
- 102000004374 Insulin-like growth factor binding protein 3 Human genes 0.000 description 2
- 108090000965 Insulin-like growth factor binding protein 3 Proteins 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 2
- 229960002566 papillomavirus vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000006490 viral transcription Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 1
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 206010008263 Cervical dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 1
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 101150013359 E7 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 108010077850 Nuclear Localization Signals Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 206010038707 Respiratory papilloma Diseases 0.000 description 1
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 101710192266 Tegument protein VP22 Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000030570 cellular localization Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 208000007951 cervical intraepithelial neoplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 231100000005 chromosome aberration Toxicity 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 description 1
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 239000000367 immunologic factor Substances 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 208000020082 intraepithelial neoplasia Diseases 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000004216 mammary stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100001222 nononcogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 1
- 208000029211 papillomatosis Diseases 0.000 description 1
- 108010043655 penetratin Proteins 0.000 description 1
- MCYTYTUNNNZWOK-LCLOTLQISA-N penetratin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 MCYTYTUNNNZWOK-LCLOTLQISA-N 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 108091005981 phosphorylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000029279 positive regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 201000010153 skin papilloma Diseases 0.000 description 1
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003153 stable transfection Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000013077 target material Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 108010062760 transportan Proteins 0.000 description 1
- PBKWZFANFUTEPS-CWUSWOHSSA-N transportan Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(N)=O)[C@@H](C)CC)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CN)[C@@H](C)O)C1=CC=C(O)C=C1 PBKWZFANFUTEPS-CWUSWOHSSA-N 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/10—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a tag for extracellular membrane crossing, e.g. TAT or VP22
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20032—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
S a m m e n d r a g Gjenstanden for søknaden er relatert til området molekylær farmakologi og spesielt til utviklingen av peptider som er anvendelige ved behandling av epiteliale tumorer og spesielt slike som er assosiert med onkogene typer av HPV. Hovedmålet for foreliggende søknadsgjenstand er å identifisere peptider hvis struktur tillater blokkering av kaseinkinase II (CKII) fosforyleringsdomenet ved direkte interaksjon med et slikt sete. Det er i foreliggende søknad vist elleve cykliske peptider med forskjellige aminosyresekvenser som inhiberer CKII fosforyleringssetet in vitro, oppviser cytotoksisitet på HPV-16-transformerte celler (CaSki) og som også øker sensitiviteten av disse celler overfor den cytostatiske effekt interferon (IFN). Videre angår gjenstanden for søknaden anvendelse av disse peptider konjugert eller kondensert til andre peptider og kjemiske forbindelser som penetrerer inn i celler så vel som anvendelsen av både peptider og kjemiske hermermolekyler.
Description
Foreliggende oppfinnelse er relatert til feltet molekylær farmakologi og spesielt til utviklingen av peptider som er egnet til behandling av HPV-assosierte, epiteliale tumorer ettersom disse tillater blokkering av kaseinkinase II (CKII) fosforyleringsdomenet ved direkte interaksjon med et slikt sete, hvor disse peptider har sekvensene som er angitt i krav 1.
CKII er et treonin-/serinenzym som er involvert i den cellulære proliferasjon, og dets inracellulære lokalisering er i hovedsak i kjernen under ondartede transformasjonsprosesser (Tawfic S, Yu S, Wang H, Faust R, Davis A, Ahmed K, 2001, Histol. Histopatol. 16: 573-582).
Basert på funnene som rapporterer høye CKII-nivåer i forskjellige faste, epiteliale tumorer, har det blitt antatt at fosforylering fremmet av dette enzym er en viktig hendelse i ondartet transformasjon samt er en tumorprogresjonsmarkør (Seldin DC, Leder P, 1995, Science 267: 894-897) (Faust RA, Gapany N, Tristani P, Davis A, Adams GL, Ahmed K, 1996, Cancer Letters 101: 31-35). Pa den annen side fører CKII overekspresjonen i mus til tumorigenese i brystkjertlene ved å øke Wnt/beta-katenin-signal transduksjonsveiene hos disse epiteliale brystceller (Landesman-Bollag E, Romien-Mourez R, Song DH, Sonenshein GE, Cardiff SD, Seldin DC, 2001, Oncogene 20: 3247-3257).
Blant epitel ia Itu morer utgjør dem som stammer fra HPV, en stor del. For eksempel er de fleste av genitouriar-tumorene assosiert med disse onkovirus og tilstedeværelsen av HPV DNA-sekvenser har blitt påvist i 99,7 % av tumorene som stammer fra skvamøse cervikalceller (Waalbormers JM, Jacobs MV, Manos MM, Bosch FX, Kummer JA, Shah KV, Snijders PJ, Peto J, Meijer CJ, Munos N, 1999, J. Pathol. 189: 12-19). Likeledes har WHO rapportert om 500 000 cervikale kreftpasienter årlig på verdensbasis (Parkin DM, Laara E, Muir CS, 1980, Int. J. Cancer 41: 184-1972). På Kuba dør 370 kvinner med cervikal kreft årlig grunnet denne sykdommen (Organizacion Panamericana de la Salud, 1999, Basic Country Health Profiles for the Amercas. Cuba, 206-219).
HPV blir klassifisert som onkogene og ikke-onkogene i henhold til hvorvidt lesjonene utvikler seg til å bli ondartede eller ikke (Lorincz AT, Temple GF, Kurman PJ, Jenson AB, Lancaster WD, 1987, J. Nati. Cancer Inst. 79: 671-677). HPV-16 og
-18 er assosiert med intraepitelial neoplasia som generelt utvikler seg til å bli ondartet og i tillegg er begge HPV-typer assosiert med mer enn 90 % av displasier
og cervikale karsinomer (Fujinaga Y, Shimada M, Okasawa K, Fukushima M, Kato I, Fujinaga K, 1991, J. Gen. Virol. 72: 1039-1044).
Siden ingen terapeutisk eller profylaktisk vaksine enda er tilgjengelig for bekjempelse av HPV-assosierte tumorer, blir anvendelse av inhibitorer som har som mål viral transkripsjon og virale onkoproteiner, mer attraktivt. Biomodulatorer, så som IFN har blitt benyttet med noe hell i visse HPV-assosierte sykdommer som kondyloma, plantare vorter og respiratorisk papillomatose (Koromilas AE, Li S, Matlashewsik G, 2001, Cytokine & Growth Factor Reviews 12: 157-170). I tidligere forsøk på HPV-transformerte celler (HeLa) har søker vist at kontinuerlig eksponering med IFN-alfa gir en reversering a den ondartede fenotype hos disse celler med en sammenfallende inhibering av HPV mRNA-ekspresjon (Lopez-Ocejo O, Perea SE, Reyes A, Vigoa L, Lopez-Saura P, 1993. J- IFN Res. 13, 369-375). I den samme cellemodell fant søker at IFN-alfa modulerer HPV mRNA via undertrykkelse av endogen viral transkripsjon (Perea SE, Lopez-Ocejo O, Garcia-Miliån R, Arana MJ, 1995, J. IFN & Cytokine Res. 15: 495-510). I samsvar med resultatene oppnådd i cellelinjer observerte søker at IFN-alfa-behandling modulerte mRNA-ekspresjon i et pilotforsøk i cervikale kreftpasienter (Gaarcia-Milian R, Rios MA, Diaz D, Silveira M, Guilar O, Amigo M, Arana MJ, Perea SE, 1996, J. IFN and Cytokine Res. 16: 709-713). Til tross for de lovende funn omkring anvendelsen av IFN som en regulator av HPV mRNA-ekspresjonen, indikerer stadig flere data en variabel IFN-respons, og et resistensfenomen overfor dette cytokin har blitt rapportert mellom 40 og 50 % av pasientene under kliniske forsøk (Arany I, Tyring SK, Stanley MA, Tomai MA, Miller RL, Smith MH, McDermott DJ, Slade HB, 1999, Antiviral Res. 43: 55-63). Enkelte molekylære og kliniske resultater indikerer at E7 onkoprotein spiller en sentral rolle i IFN resistensfenomenet. For eksempel har det blitt rapportert at E7 binder til den IFN-induserte transkripsjonsfaktor (p48) og påvirker således IFN-responsen ved å blokkere den transkripsjonene aktivering (Barnard P og McMillan NAJ, 1999, Virology 259: 305-313). Videre har endringen i IFN reguleringsfaktoren (IRF-1) ved nærvær av E7 også blitt rapportert (Park JS, Kim EJ, Kwon HJ, Hwang ES, Namkoong SE, Um SJ, 2000, J. Biol. Chem. 275: 6764-6769) (Pera SE, Massimi P, Banks L, 2000, J. Mol. Med. 5: 661-666). I kliniske forsøk har IFN-responsen blitt ansett å være avhengig av E7-ekspresjonen i de HPV-inneholdende lesjoner (Frazer IH, McMillan NAJ, 1997, Papillomatosis and condyloma acuminate, Clinical Applications of the Interferens (R Stuart Harris og RD Penny, eds.) s. 79-90, Chapman and Hall Medican, London). E7 onkoproteinet spiller en essensiell rolle i den ondartede transformasjon som fremskaffes av disse onkogene virus. Således har det blitt vist at den E7-induserte immortalisering av primære celler fører til mutasjoner og kromosomale avvik siden starten av immor-taliseringsprosessen (Mougin C, Humbey O, Gay C, Riethmuller D, 2000, J. Gynecol. Obstet. Biol. Reprod. 29: 13-20). Pa den annen side har søker vist at stabil trans-feksjon med E7-genet fører til utviklingen av en IFN-resistent fenotype hos sensitive tumorceller (Moro A, Calixto A, Suårez E, Arana MJ, Perea SE, 1998, Bioch. Bioph. Res. Comm. 245: 752-756). Likeledes har det blitt rapportert at E7 onkoprotein binder og blokkerer funksjonen av tumor suppressorganer lik Retinoblastoma (Rb) og det insuliniliknende vekstfaktorbindende protein-3" (IGFBP-3) via henholdsvis Cys 24 og det C-terminale domene (Nevins JR, 1992, Science 258: 424-429) (Zwerschke W og Jansen-Durr P, 2000, Advances in Cancer Res. 78: 1-29). Pa liknende måte har Ser 31/Ser 32-dublettene i E7-proteinet vist seg å være et substrat for CKII-enzymet (Hashida T, Yasumoto S, 1990, Biochem. Biophys. Res. Comm. 172: 958-964) og dette domene er essensielt for både den transformerende kapasitet av dette onkoprotein (Barbosa MS, Edmonds C, Fisher, C, Schiller JT, Lowy DR, Vousden K, 1990, EMBO J 9: 153-160) (Chien W-M, Parker JN, Schmidt-Grimminger D-C, Broker TR, Chow LT, 2000, Cell Growth & Differentiation 11: 425-435) og inhiberingen av IFN signaliseringskaskaden (Perea SE, Lopez-Ocejo O, Garcia Miliån R, Banks L, Arana MJ, 1996, Eur. Cytokine Net. 7: 503).
Basert på rollen av CKII fosforyleringssetet i HPV-resistensen til IFN- og kreftutvikling, kunne utviklingen av medikamenter som blokkerer et slikt domene, være nyttige verktøy for kreftbehandling. Molekyler som inhiberer CKII fosforyleringssetet enten på E7 eller i andre cellesubstrater har ikke tidligere blitt beskrevet.
Angående E7 onkoproteinet har kun peptider som blokkerer Rb bindingssetet (Cys 24) (Webster KR, Koleman KG, 1997, US5625031) (Oliff AI, Rieman MW, EP 0412762 A2 910213) og andre C-terminale områder (39-98) blitt beskrevet (Pidder J-D, Zwerschke W, 2000, EP0969013).
Enkelte vaksinekandidater fokusert på å utvikle HPV E7-spesifikk CTL-respons, har foreløpig blitt beskrevet i kliniske eller prekliniske forsøk (Chen C, Wang CC, Hung C, Pardoll DM, Wu T, 2000, Vaccine 18: 2015-2022) (Chen CH, Ji H, Suh KW, Choti MA, Pardoll DM, Wu TC, 1999, Gene Ther. 12: 1972-1981). Imidlertid står metodene fokusert på CTL-responsen, overfor forskjellige hindringer relatert til HPV-biologien. For eksempel nedregulerer HPV-onkogene subtyper MHC klasse I antigener som er essensielle for CTL-responsen (Connor ME, Stem PL, 1990, Int. J. Cancer 46, 1029-1034). Videre har E7-ekspresjon blitt assosiert med lokal immunsuppresjon ved svulstområdet og dette kunne også påvirke den korrekte utvikling av CTL-responsen (Le Buanec H, D'Anna R, Lachgar A, Zagury JF, Bernard J, Ittlele D, d'Alessio P, Hallez S, Giannouli C, Burny A, Bizzini B, Gallo RC, Zagury D, 1999, Biomed. Pharmacother. 53: 424-431) (Lee SJ, Cho YS, Shim JH, Lee KA, Ko KK, Choe YK, Park SN, Hoshino T, Kim S, Dinarello CA, Yoon DY, 2001, J. Immunol. 167: 497-504). I henhold til de ovennevnte elementer synes det å kombinere CTL-vaksiner og farmasøytika som har E7 som mål, kunne gi store perspektiver.
Likeledes står tilnærmingen med preventive HPV-vaksiner overfor store fordeler og kostnadsrisiko grunnet de forskjellige biologiske og sosiale aspekter innbefattende: 1) Lang latensperiode etter den primære HPV-infeksjon, 2) dårlig forståelse av HPV infeksjonsmekanismen, 3) ingen dyremodell for den mottatte HPV-formering, 4) artsspesifisitet og 5) vurderingen av de sosiale konsekvenser av en preventiv HPV-vaksine kunne ta svært lang tid. Følgelig kan anvendelsen av farmasøytika som spesifikt målretter virale onkoproteiner gi fordeler i forhold til de metoder som er fokusert på manipulering av immunsystemet.
HOVEDINNHOLD AV OPPFINNELSEN
Hovedinnholdet og nyheten av foreliggende oppfinnelse ligger i beskrivelsen for første gang av peptider med eventuelt cyklisk struktur med sekvenser som angitt i krav 1, og som tillater direkte inhibering av CKII fosforyleringssetet så vel som cytotoksisiteten dannet in vivo på HPV-16 cervikale karsinomaceller. Videre øker disse peptider sensitiviteten av cellene overfor den cytostatiske effekt av IFN.
DETALJERT BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN:
Oppfinnelsen angår i hovedsak peptider som er i stand til å binde CKII fosforyleringssetet og som oppviser de følgende sekvenser:
Oppfinnelsen innbefatter peptidene som er nevnt og som har blitt fremstilt på syntetisk eller rekombinant måte, så vel som ethvert fusjonspeptid som inneholder peptidene beskrevet i listen.
Et annet mål for oppfinnelsen er en farmasøytisk sammensetning som omfatter et eller flere av peptidene som er beskrevet i oppfinnelsen så vel som en passende bærer.
Likeledes omfatter oppfinnelsen anvendelsen av de nevnte peptider alene eller kombinert med et annet egnet molekyl som cytokiner eller interferoner for: 1) å inhibere proliferasjonen av tumorceller, 2) behandle både HPV-assosiert og ikke-assosiert kreft og 3) behandle HPV-assosierte lesjoner ved de pre-maligne stadier.
Videre kan peptidene ifølge oppfinnelsen bli benyttet til å behandle HPV-infiserte pasienter som er resistente overfor interferonbehandling.
I andre aspekter av oppfinnelsen omfatter den en ekspresjonsvektor for pattedyrceller som inneholder en DNA-sekvens som koder for ethvert av peptidene som er nevnt ovenfor.
Peptidene ifølge oppfinnelsen kan ha en syklisk struktur og de er i hovedsak karakterisert ved egenskapen å binde CKII fosforyleringssetet og fjerne slike biokjemiske hendelser. Peptidene er beskrevet i den medfølgende liste. På den annen side er in wVo-effektene dannet av peptidene på HPV-16-transformerte celler også vist.
Peptidene som er beskrevet, ble definert ved deres egenskap både å inhibere fosforyleringen av sekvensen RRREEETEEE tidligere rapportert som det optimale konsensusdomene for CKII-fosforyleringen (Promega Cat: V5661) og fosforyleringssetet inneholdt i området 28-38 av HPV-16 E7-onkoproteinet.
For å definere peptidene beskrevet i oppfinnelsen ble et 11 aminosyrers cyklisk peptidbibliotek konstruert og uttrykt på P8-området fra filamentøse fager. Undersøkelsen av biblioteket ble utført ved å bruke det syntetiske 28-38 området av E7 som målmateriale, og som også var konjugert til biotin for å fiksere det til en fast overflate. Utvelgelse av de fager som bandt til 28-38-området av E7, ble utført ved immunodeteksjon under anvendelse av et spesifikt antistoff mot P8-området i fagen. Til slutt ble DNA som tilsvarer de elleve fager med høy kapasitet til å binde til 28-38-området av E7 sekvensert, og de respektive peptider ble syntetisert kjemisk ved fastfasemetoden. De syntetiske peptider ble videre renset med HPLC, analysert med massespektrometri og til slutt vurdert med hensyn til in vitro og in vivo effektivitet.
I henhold til oppfinnelsen, til tross for de forskjellige aminosyresekvenser blant de cykliske peptider som er beskrevet her, inhiberer de like godt CKII fosforyle-ringshendelsen. Dette faktum indikerer at interaksjonen av disse peptider med CKII fosforyleringssetet i hovedsak er basert på deres struktur heller enn sekvensen i seg selv.
I foreliggende oppfinnelse er det også vist at lineære peptider oppviser en lavere kapasitet for inhibering av CKII fosforyleringssetet. Dette funn forsterker viktigheten av struktur i bindingskapasiteten av disse peptider til et slikt domene.
For å oppnå den intracellulære virkning på de CKII endogene substrater, kan de beskrevne peptider bli kjemisk konjugert eller genetisk kondensert til de cellepenetrerende peptider som tilhører proteiner som blant andre det humane immunsviktvirus (HIV-1) Tat 1 (Schwarze SR, Dowdy SF, 2000, Trends Pharmacol. 21: 45-48) transkripsjonsfaktoren kodet av Drosophyla Antenapedita-genet (Derossi D. Et al., 1996, J. Biol. Chem. 271: 18188-18193), Herpes simplex-virus (HSV) VP22-proteinet (Lindgreen ; et al., 2000, Trends Pharmacol. Sei. 21: 99-103), penetratinet og transportanet (Gariepy J, Kawamura K, 2001, Trends Biotech 19: 21-28). For å undersøke in vivo hypotesen i foreliggende oppfinnelse, ble de cykliske peptider syntetisert kondensert til det cellepenetrerende peptid som er rapportert for HIV-1 Tat 1 proteinet (GRKKRRQRRRPPQC) og et kjernelokaliserings-signal tilhørende SV 40 stort antigen (KKKRKVE).
Data som er vist i foreliggende oppfinnelse indikerer tydelig at cykliske peptider oppviser cytotoksisitet på en doseavhengig måte på cervikale karsinomceller transformert av HPV-16 (CaSki). Disse resultater antyder anvendelse av disse peptider som et terapeutisk verktøy for å behandle svulster fra samme histologiske opphav så vel som fra premaligne stadier lik den cervikale intraepiteliale neoplasia. Likeledes viste de in vivo eksperimentelle data at cykliske peptider var mer effektive enn sine respektive lineære former noe som forsterker viktigheten av struktur på effekten i seg selv.
Likeledes er de cykliske peptider som er beskrevet i foreliggende oppfinnelse, effektive på HeLa-celler inneholdende HPV-18 så vel som på H-82-celler avledet fra ikke-små lungecellekreft som er negativ for HPV. Disse resultater stemmer godt overens med dem oppnådd in vitro i foreliggende oppfinnelse hvor peptider blokkerer ikke bare CKII fosforyleringssetet på HPV-16 E7, men de blokkerer også dette i andre proteiner som inneholder et slikt sete. Det faktum at peptidene beskrevet her er effektive på HPV-negative tumorceller gir et argument for deres potensielle anvendelse i andre epiteliale tumorer. Andre resultater i foreliggende oppfinnelsen indikerer at behandling av CaSKi-celler med de cykliske peptider som er beskrevet her, øker cellesensitiviteten for den cytostatiske effekt av IFN alfa. I betraktning av tidligere bevis som viser at CKII fosforyleringssetet på HPV-16 E7 er nødvendig for blokkering av IFN signaliseringskaskaden (Perea SE, Lopez-Ocejo 0, Garcia Miliån R, Banks L, Arana MJ, 1996, Eur. Cytokine Net 7: 503), kan peptidene beskrevet her være anvendelige til å forbipassere den vanlige IFN-resistens som er observert ved HPV-infeksjon.
Målet for foreliggende oppfinnelse kan også relateres til DNA som koder for hvert peptid beskrevet her. Dette DNA kan bli innført i en pattedyr ekspresjonsvektor og videre bli transfektert i både HPV-16-transformerte og ikke-transformerte celler. Vektoren inneholdende oligonukleotidet som koder for hvert peptid kan også bli brukt som et alternativ for genterapi i HPV-assosiert kreft.
I prinsippet kan peptidene beskrevet her bli brukt i HPV-assosierte sykdommer sammen med andre midler så vel so med terapeutisk vaksinebasert cellulærrespons mot HPV.
Foreliggende oppfinnelse er illustrert ved de følgende eksempler:
Eksempel 1: Effekt av peptidene på CKII fosforyleringssetet: Dette assay er basert på en in vitro fosforyleringsreaksjon som bruker substratsekvensen RRREEETEEE som representerer det optimale konsensusdomene for CKII fosforyleringen. Reaksjonen utføres i 50 ^1 av Tris:Hel 25 mM pH 7,5, 1 ^Ci <32>P-yATP, 100 nM ATP, 2 mg/ml av substratpeptidet, 0,2 M NaCI, 10 mM MgCI og 1 enhet av CKII-enzymet (Promega). Reaksjonsblandingen inkuberes ved 37°C i løpet av 10 minutter. Etterfølgende ble 5 ^1 av reaksjonsblandingen satt ut i punkter på PE-81 kromatografipapir (Whatmann) og fire vasker med 10 mM H3P04 ble foretatt. Endelig ble radioaktiviteten assosiert til filtrene målt, og cpm-nivåene viser den CKII enzymatiske aktivitet i hver prøve. Samtidig blir en spesifikk CKII-inhibitor lik heparin inkludert i assayet som en intern kontroll. Dataene vist i Figur 1 viste at cykliske peptider inhiberer CKII fosforyleringen med 80 %. I tillegg inhiberer lineære peptider CKII fosforyleringen av 28-38-området på E7, selv om i en mindre grad enn den cykliske form. Disse resultater indikerer at peptidene beskrevet her inhiberer CKII fosforyleringssetet og antyder at struktur spiller en vesentlig rolle i deres interaksjon med målsekvensen.
Eksempel 2: Effekt av peptidene på HPV- 16 E7 fosforyleringen: Dette assay er basert på in vitro fosforyleringsreaksjonen av HPV-16 E7 onkoproteinet uttrykt i E. coli som et fusjonsprotein til Glutation S Transferase (GST). Før den enzymatiske reaksjon ble E7-GST-fusjonsproteinet renset med affinitetskromatografi ved å bruke Glutation Sepharose-kuler (Pharmacia). Den blandede reaksjon utføres i 50 ^1 av buffer Tris:HCI 25 mM pH 7,5, 1 ^Ci av <32>P-yATP, 100 ^M ATP, 40 ul av kulene inneholdende E7-GST, 0,2 M NaCI, 10 mM MgCI og 1 enhet CKII (Promega). Reaksjonsblandingen inkuberes ved 37°C i løpet av 40 minutter. Etterfølgende blir kulene vasket bort tre ganger med 0,5 ml av bufferen og til slutt blir fosforyleringsnivået av E7-GST analysert med 10 % SDS-PAGE-elektroforese. Visualiseringen av de fosforylerte proteiner ble utført ved å fremkalle røntgenstrålefilmer på forhånd eksponert til de tørkede geler. Mengde-bestemmelsen av E7-fosforyleringen ble foretatt med densiometri. Data i Figur 2 indikerer at peptidene beskrevet her er like effektive med hensyn på inhibering av CKII fosforyleringssetet på HPV-16 E7.
Eksempel 3: Effekt av peptidene på proliferasionen av HPV- 16 og HPV- 18-transformerte celler ( henholdsvis CaSki og HeLa) : I dette assay ble CaSki-eller HeLa-celler sådd ut ved 2 x 10" celler/ml i 96-brønners plater (Costar) ved å bruke DMEM tilsatt 10% føtalt kalveserum (FCS) (Gibco). Etter 24 timer ble peptider tilsatt til dyrkningsmediet ved doser som omfatter et område mellom 15 nM og 500^iM. Inkuberingen ble utført i løpet av 96 timer i 5 % C02 og til slutt ble 200 |xl av en MTS-oppløsning (1,90 mg/ml) Promega tilsatt til hver brønn. Platene ble deretter oppbevart i en time ved samme inkuberingsbetingelser og absorbansen ved 490 nm ble til slutt analysert. Resultater uttrykkes som en prosentdel av vekst med hensyn til kontrollen uten peptider. For dette formål ble både cykliske og lineære peptider syntetisert kjemisk kondensert til HIV-1 Tat-1 cellepenetrerende peptid som er i stand til å trenge inn i cytoplasma og kjernen (Schwarze SR, Dowdy SF, 2000, Trends Pharmacol. 21: 45-48). Data oppnådd fra dette forsøk viste at peptider som er beskrevet her, danner en doseavhengig effekt både på CaSki-(HPV-16) og HeLa- (HPV-18) celler (Figur 3A og 3B). Dette eksempel viser at peptider ifølge foreliggende oppfinnelse er effektive ikke bare for HPV-16, men også for HPV-18.
Eksempel 4: Effekt av peptidene på proliferasionen av HPV- neqative tumorceller: I dette assay ble H-82 (lungekreft småceller) sådd ut ved 2 x 10" celler/ml i 96-brønners plater (Costar) ved å bruke DMEM tilsatt 10% føtalt kalveserum (FCS) (Gibco). Etter 24 timer ble peptider tilsatt til dyrkningsmediet ved doser som omfatter et område mellom 15 |xM og 500 |xM. Inkuberingen ble utført i løpet av 96 timer i 5 % C02 og til slutt ble 20 ^1 av en MTS-oppløsning (1,90 mg/ml) Promega tilsatt til hver brønn. Platene ble derpå oppbevart i en time ved samme inkuberingsbetingelser og absorbansen ved 490 nm ble til slutt analysert. Resultater er uttrykt som prosentdel av vekst med hensyn på kontrollen uten peptider. For dette assay ble de cykliske peptider beskrevet i oppfinnelsen, kondensert til HIV-1 Tat-1 cellepenetrerende peptid benyttet som beskrevet ovenfor. Resultater oppnådd fea disse forsøk viste at peptider fra foreliggende oppfinnelse danner en doseavhengig effekt på celleproliferasjonen av H-82-celler. I figur 4 er det vist at peptider ifølge oppfinnelsen er effektive ikke bare for HPV-transformerte celler, men også for tumorceller fra andre områder og histologiske typer lik småcellet lungekreft.
Eksempel 5: Effekt av peptider på HPV- 16- respons overfor IFN- behandlinq i CaSki- celler: I dette assay ble CaSki-celler sådd ut ved 2 x 10" celler/ml i 96-brønners plater (Costar) ved å bruke DMEM tilsatt 10 % FCS (Gibco). Etter 24 timer ble 120 \ iM av hvert peptid tilsatt til dyrkningsmediet. Fireogtyve timer senere ble alfa IFN tilsatt i et område mellom 1000 og 31,5 U/ml. Inkuberingen ble utført i løpet av 96 timer i 5 % C02 og 20 ul MTS 1,90 mg/ml ble deretter tilsatt. Videre ble plater oppbevart i en time ved samme betingelser og absorbansen ved 490 nm ble til slutt avlest. Data er vist som prosentdel vekst med hensyn på kontrollen. I disse forsøk ble peptidene beskrevet i oppfinnelsen brukt i sin cykliske variant kondensert til det cellepenetrerende som tilhører HIV Tat-1-protein, som nevnt ovenfor. Resultater observert i figur 5 viser at tidligere inkubering av CaSki-celler med peptidene beskrevet i oppfinnelsen gjør disse celle sensitive overfor den antiproliferative effekt alfa IFN. Disse data antyder anvendbarheten av peptidene beskrevet i oppfinnelsen for å behandle HPV-infiserte pasienter som ikke reagerer på IFN-tera pi.
Eksempel 6: Antitumor- effekt av CKII forsforvlerinqsinhiberende peptid i humane tumorer implantert i nakenmus- modeller: For disse forsøk ble 6-8 uker gamle BalbC nakne hunnmus brukt. Svulstimplanteringen ble utført ved å bruke H-125-celler (Ikke-små lungekreftceller) som ble resuspendert i salin-oppløsning (PBS) ved 1.000.000 celler/ml. Cellesuspensjonen ble innokulert subkutant i buken. Peptidadministrasjon (sekvens 1 på listen) ble foretatt sammen med cellene og fortsatt annenhver dag inntil avslutning av en måneds behandling.
I dette assay ble doser i området mellom 1 og 10 mg/kg kroppsvekt vurdert. For å undersøke antitumor-effekten, parameterprogresjon. Disse data viser antitumor-effektiviteten av CKII fosforyleringsinhiberende peptid i en modell av human tumor implantert i forsøksdyr.
Fordeler ved oppfinnelsen:
1. Gir farmasøytiske substanser med et bredt applikasjonsspektrum som ikke bare er anvendelige i HPV-assosierte sykdommer, men også i faste svulster med høye nivåer av endogen CKII-aktiviet. 2. Det faktum at 28-38-området er konservert blant HPV gir mulighet for å bruke disse farmasøytika i sykdommer assosiert med forskjellige HPV-typer. 3. Peptider som terapeutiske molekyler, oppviser lav antigenisitet når administrert til mennesker.
4. Er et farmasøytikum med lett fremstilling og lave kostnader.
Kort beskrivelse av figurene:
Figur 1: Effekt av peptider på CKII-fosforylering
Figur 2: Effekt av peptider på HPVE7 CKII fosforylering
Figur 3A: Effekt av peptider på proliferasjonen av CaSki-celler
Figur 3B: Effekt av peptider på proliferasjonen av HeLa-celler
Figur 4: Effekt av peptider på proliferasjonen av lungekreftceller
Figur 5: Effekt av peptider på reaksjonen av HPV-16-trqnsformerte celler overfor IFN-virkning Figur 6: Antitumoreffekt av det CKII fosforyleringsinhiberende peptid i humane tumorer implantert i nakne mus.
Claims (13)
1. Peptid som binder og inhiberer kaseinkinase II (CKII) fosforyleringssetet hvor peptidene oppviser en av de følgende sekvenser:
2. Peptid ifølge krav 1, som oppviser en cyklisk struktur.
3. Peptid ifølge krav 1 og 2, som er inneholdt i et fusjonspolypeptid.
4. Farmasøytisk sammensetning som omfatter et eller forskjellige peptider ifølge krav 1-3 så vel som en egnet bærer.
5. Farmasøytisk sammensetning ifølge krav 4, som i tillegg inneholder et cytokin.
6. Farmasøytisk sammensetning ifølge krav 5, hvilket cytokin er et interferon (IFN).
7. Anvendelse av peptidene ifølge krav 1-3 ved fremstilling av et medikament som er egnet for inhibering av tumorcelleproliferasjon.
8. Anvendelse ifølge krav 7 hvor medikamentet er egnet for behandling av både HPV-assosierte og ikke-assosierte tumorer.
9. Anvendelse av peptidene ifølge krav 1-3 til fremstilling av et medikament som er egnet for behandling av HPV-assosierte lesjoner ved premaligne stadier.
10. Anvendelse ifølge krav 7-9 hvilke peptider anvendes i medikamentet sammen med cytokiner.
11. Anvendelse ifølge krav 10, hvor det benyttede cytokin er et IFN.
12. Anvendelse ifølge krav 7-9 hvor de aktuelle peptider er egnet for fremstilling av medikamenter som kan benyttes til behandling av HPV-pasienter som er resistente overfor IFN-behandling.
13. Pattedyr-ekspresjonsvektor som inneholder DNA-sekvensene som koder for ethvert av peptidene vist i krav 1-3.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CU20010309A CU23225A1 (es) | 2001-12-20 | 2001-12-20 | PéPTIDOS PARA EL TRATAMIENTO DEL CáNCER ASOCIADO AL VIRUS PAPILOMA HUMANO (VPH) Y DE OTROS TUMORES EPITELIALES |
| PCT/CU2002/000010 WO2003054002A1 (es) | 2001-12-20 | 2002-12-04 | Péptidos para el tratamiento del cáncer asociado al virus papiloma humano (vph) y de otros tumores epiteliales |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20043112L NO20043112L (no) | 2004-07-20 |
| NO333259B1 true NO333259B1 (no) | 2013-04-22 |
Family
ID=40091679
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20043112A NO333259B1 (no) | 2001-12-20 | 2004-07-20 | Peptider som inhiberer Casein Kinase II fosforyleringssete og som kan anvendes for fremstilling av medikamenter til inhibering av tumorcelle-proliferasjon, samt DNA ekspresjonsvektorer som koder for slike peptider |
Country Status (34)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7374767B2 (no) |
| EP (2) | EP2383282A1 (no) |
| JP (1) | JP4056476B2 (no) |
| KR (1) | KR100642437B1 (no) |
| CN (1) | CN100368431C (no) |
| AR (1) | AR037825A1 (no) |
| AT (1) | ATE520704T1 (no) |
| AU (1) | AU2002361922B2 (no) |
| BR (1) | BRPI0215213C1 (no) |
| CA (1) | CA2471110C (no) |
| CR (1) | CR7361A (no) |
| CU (1) | CU23225A1 (no) |
| DK (1) | DK1491553T3 (no) |
| DO (1) | DOP2002000548A (no) |
| ES (1) | ES2371239T3 (no) |
| HK (1) | HK1068901A1 (no) |
| HN (1) | HN2002000377A (no) |
| HR (1) | HRP20040663B1 (no) |
| IL (2) | IL162633A0 (no) |
| IS (1) | IS2906B (no) |
| MA (1) | MA27868A1 (no) |
| MX (1) | MXPA04005832A (no) |
| MY (1) | MY133530A (no) |
| NO (1) | NO333259B1 (no) |
| NZ (1) | NZ534170A (no) |
| PE (1) | PE20030861A1 (no) |
| PT (1) | PT1491553E (no) |
| RU (1) | RU2290410C2 (no) |
| SI (1) | SI1491553T1 (no) |
| TN (1) | TNSN04114A1 (no) |
| UA (1) | UA81403C2 (no) |
| UY (1) | UY27602A1 (no) |
| WO (1) | WO2003054002A1 (no) |
| ZA (1) | ZA200405514B (no) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CU23225A1 (es) * | 2001-12-20 | 2007-08-30 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | PéPTIDOS PARA EL TRATAMIENTO DEL CáNCER ASOCIADO AL VIRUS PAPILOMA HUMANO (VPH) Y DE OTROS TUMORES EPITELIALES |
| CU23431B6 (es) * | 2005-05-12 | 2009-10-16 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | Método para la inhibición de la proliferación de células tumorales y el tratamiento del cáncer |
| GB2433740A (en) | 2005-12-23 | 2007-07-04 | Rapid Biosensor Systems Ltd | Detection of tuberculosis infection |
| CU23511B6 (es) * | 2006-02-28 | 2010-04-13 | Biorec B V | Combinación farmacéutica para el tratamiento y/o quimiosensibilización de tumores refractarios a drogas anticancerígenas |
| GB2441131A (en) * | 2006-08-24 | 2008-02-27 | Univ Dundee | Modulation of binding of CK2a to NDPK |
| CN100522992C (zh) * | 2007-02-12 | 2009-08-05 | 中国科学院昆明动物研究所 | 一种环状小肽ba |
| EP2133083A4 (en) * | 2007-03-27 | 2012-02-15 | Taiko Pharmaceutical Co Ltd | THERAPEUTIC FOR SKIN OR MOLECULE INFECTIONS |
| US20110305706A1 (en) | 2009-02-23 | 2011-12-15 | Scott Thomas Brady | Compositions and Methods for Treating a Disease Mediated by Soluble Oligomeric Amyloid Beta |
| JP2012520085A (ja) * | 2009-03-13 | 2012-09-06 | エーゲン、インコーポレイテッド | 生物活性ｒｎａの送達のための組成物及び方法 |
| AU2016381964B2 (en) | 2015-12-30 | 2024-02-15 | Kodiak Sciences Inc. | Antibodies and conjugates thereof |
| CU20200103A7 (es) * | 2020-12-18 | 2022-07-08 | Ct Ingenieria Genetica Biotecnologia | Péptido sintético para la inducción de inmunidad antitumoral y antiviral |
| CU20210058A7 (es) | 2021-07-09 | 2023-02-13 | Ct Ingenieria Genetica Biotecnologia | Péptidos lineales que inhiben la fosforilación mediada por ck2 y composiciones que los comprenden |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IE902820A1 (en) * | 1989-08-07 | 1991-02-27 | Merck & Co Inc | Peptide inhibitors of human papilloma virus protein binding¹to retinoblastoma gene proteins |
| CA2077322A1 (en) | 1991-09-04 | 1993-03-05 | Allen I. Oliff | Peptide inhibitors of human papilloma virus protein binding to retinoblastoma gene proteins |
| GB9313556D0 (en) * | 1993-07-01 | 1993-08-18 | British Tech Group | Synthetic peptides of human papillomavirus |
| US5625031A (en) | 1994-02-08 | 1997-04-29 | Bristol-Myers Squibb Company | Peptide inhibitors of the p33cdk2 and p34cdc2 cell cycle regulatory kinases and human papillomavirus E7 oncoprotein |
| ATE235509T1 (de) * | 1998-06-30 | 2003-04-15 | Deutsches Krebsforsch | Peptide zur inhibition von hpv e7 proteinen |
| WO2001064835A2 (en) * | 2000-02-28 | 2001-09-07 | Hyseq, Inc. | Novel nucleic acids and polypeptides |
| US6641994B2 (en) * | 1999-08-25 | 2003-11-04 | Pharmacia & Upjohn Company | Methods of identifying anti-viral agents |
| CU23225A1 (es) * | 2001-12-20 | 2007-08-30 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | PéPTIDOS PARA EL TRATAMIENTO DEL CáNCER ASOCIADO AL VIRUS PAPILOMA HUMANO (VPH) Y DE OTROS TUMORES EPITELIALES |
-
2001
- 2001-12-20 CU CU20010309A patent/CU23225A1/es unknown
-
2002
- 2002-04-12 UA UA20040705927A patent/UA81403C2/uk unknown
- 2002-12-04 SI SI200230967T patent/SI1491553T1/sl unknown
- 2002-12-04 AU AU2002361922A patent/AU2002361922B2/en not_active Ceased
- 2002-12-04 JP JP2003554718A patent/JP4056476B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2002-12-04 EP EP11168526A patent/EP2383282A1/en not_active Ceased
- 2002-12-04 DK DK02796490.7T patent/DK1491553T3/da active
- 2002-12-04 ES ES02796490T patent/ES2371239T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-12-04 CN CNB028282698A patent/CN100368431C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2002-12-04 EP EP02796490A patent/EP1491553B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-12-04 US US10/499,458 patent/US7374767B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-12-04 PT PT02796490T patent/PT1491553E/pt unknown
- 2002-12-04 WO PCT/CU2002/000010 patent/WO2003054002A1/es active IP Right Grant
- 2002-12-04 MX MXPA04005832A patent/MXPA04005832A/es active IP Right Grant
- 2002-12-04 KR KR1020047009771A patent/KR100642437B1/ko active IP Right Grant
- 2002-12-04 RU RU2004122084/13A patent/RU2290410C2/ru active
- 2002-12-04 IL IL16263302A patent/IL162633A0/xx active IP Right Grant
- 2002-12-04 NZ NZ534170A patent/NZ534170A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-12-04 BR BRPI0215213A patent/BRPI0215213C1/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-12-04 AT AT02796490T patent/ATE520704T1/de active
- 2002-12-04 CA CA2471110A patent/CA2471110C/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-12-11 MY MYPI20024638A patent/MY133530A/en unknown
- 2002-12-13 AR ARP020104844A patent/AR037825A1/es not_active Application Discontinuation
- 2002-12-17 DO DO2002000548A patent/DOP2002000548A/es unknown
- 2002-12-19 HN HN2002000377A patent/HN2002000377A/es unknown
- 2002-12-20 UY UY27602A patent/UY27602A1/es active IP Right Grant
-
2003
- 2003-01-06 PE PE2003000006A patent/PE20030861A1/es not_active Application Discontinuation
-
2004
- 2004-06-04 CR CR7361A patent/CR7361A/es unknown
- 2004-06-15 MA MA27740A patent/MA27868A1/fr unknown
- 2004-06-16 IS IS7320A patent/IS2906B/is unknown
- 2004-06-17 TN TNP2004000114A patent/TNSN04114A1/en unknown
- 2004-06-20 IL IL162633A patent/IL162633A/en not_active IP Right Cessation
- 2004-07-12 ZA ZA2004/05514A patent/ZA200405514B/en unknown
- 2004-07-19 HR HRP20040663AA patent/HRP20040663B1/hr not_active IP Right Cessation
- 2004-07-20 NO NO20043112A patent/NO333259B1/no not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-02-24 HK HK05101552.3A patent/HK1068901A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-04-08 US US12/099,646 patent/US7947287B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7947287B2 (en) | Peptides for the treatment of cancer associated with the human papilloma virus (HPV) and other epithelial tumors | |
| McMurray et al. | Biology of human papillomaviruses | |
| Pappa et al. | Novel structural approaches concerning HPV proteins: Insight into targeted therapies for cervical cancer | |
| Xue et al. | Disordered interactome of human papillomavirus | |
| Motevalli et al. | Supercharged green fluorescent protein delivers HPV16E7 DNA and protein into mammalian cells in vitro and in vivo | |
| Dymalla et al. | A novel peptide motif binding to and blocking the intracellular activity of the human papillomavirus E6 oncoprotein | |
| US8598126B2 (en) | Peptides for inhibiting the HPV-E6 oncoprotein | |
| Klucevsek et al. | Nuclear import strategies of high-risk HPV18 L2 minor capsid protein | |
| KR20130142104A (ko) | 인간 파필로마바이러스 e7 항원 조성물 및 이의 용도 | |
| Wilson et al. | Molecular targets for papillomavirus therapy | |
| Green et al. | Development of a topical protein therapeutic for human papillomavirus and associated cancers | |
| JP7333538B2 (ja) | 抗ウイルス性ペプチドおよびその利用 | |
| Hoppe‐Seyler et al. | Peptide Aptamers Targeting the Viral E6 Oncoprotein Induce Apoptosis in HPV‐positive Cancer Cells | |
| JP2002519357A (ja) | Ｈｐｖｅ７タンパク質を阻害するペプチド | |
| Berezutskaya | Identification and characterization of novel cellular targets for human papillomavirus 16 oncoprotein E7 | |
| Zou | Structure and function of the human papillomavirus E1 and E2 replication proteins | |
| Schlosser | Characterization of the E1-E4 protein of human papillomavirus type 11 in experimental and clinical papillomas | |
| Massimi | Functional Studies of the Human Papillomavirus E7 Protein | |
| Finley | Structural studies of two viral targets for structure-based drug design |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |