NO332995B1 - Polymert adsorpsjonsmiddel og fremgangsmate til fremstilling av samme - Google Patents

Polymert adsorpsjonsmiddel og fremgangsmate til fremstilling av samme

Info

Publication number
NO332995B1
NO332995B1 NO20013803A NO20013803A NO332995B1 NO 332995 B1 NO332995 B1 NO 332995B1 NO 20013803 A NO20013803 A NO 20013803A NO 20013803 A NO20013803 A NO 20013803A NO 332995 B1 NO332995 B1 NO 332995B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
polymer
porogen
insulin
macroporous
pressure
Prior art date
Application number
NO20013803A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20013803L (no
NO20013803D0 (no
Inventor
Karl Chaplin Deissler
Marlin Kenneth Kinzey
John Joseph Maikner
Robert E Rosen
Original Assignee
Rohm & Haas
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22840394&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO332995(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Rohm & Haas filed Critical Rohm & Haas
Publication of NO20013803D0 publication Critical patent/NO20013803D0/no
Publication of NO20013803L publication Critical patent/NO20013803L/no
Publication of NO332995B1 publication Critical patent/NO332995B1/no

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/282—Porous sorbents
    • B01J20/285—Porous sorbents based on polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
    • B01D15/20—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to the conditioning of the sorbent material
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/32—Bonded phase chromatography
    • B01D15/325—Reversed phase
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B01J20/261—Synthetic macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon to carbon unsaturated bonds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28002—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their physical properties
    • B01J20/28004—Sorbent size or size distribution, e.g. particle size
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28014—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their form
    • B01J20/28016—Particle form
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
    • B01J20/28057—Surface area, e.g. B.E.T specific surface area
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
    • B01J20/28069—Pore volume, e.g. total pore volume, mesopore volume, micropore volume
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
    • B01J20/28069—Pore volume, e.g. total pore volume, mesopore volume, micropore volume
    • B01J20/28073—Pore volume, e.g. total pore volume, mesopore volume, micropore volume being in the range 0.5-1.0 ml/g
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
    • B01J20/28069—Pore volume, e.g. total pore volume, mesopore volume, micropore volume
    • B01J20/28076—Pore volume, e.g. total pore volume, mesopore volume, micropore volume being more than 1.0 ml/g
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
    • B01J20/28078—Pore diameter
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
    • B01J20/28078—Pore diameter
    • B01J20/28083—Pore diameter being in the range 2-50 nm, i.e. mesopores
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
    • B01J20/28078—Pore diameter
    • B01J20/28085—Pore diameter being more than 50 nm, i.e. macropores
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
    • B01J20/28095—Shape or type of pores, voids, channels, ducts
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
    • B01J20/287—Non-polar phases; Reversed phases
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/305—Addition of material, later completely removed, e.g. as result of heat treatment, leaching or washing, e.g. for forming pores
    • B01J20/3064—Addition of pore forming agents, e.g. pore inducing or porogenic agents
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/32—Bonded phase chromatography
    • B01D15/325—Reversed phase
    • B01D15/327—Reversed phase with hydrophobic interaction
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/34—Size selective separation, e.g. size exclusion chromatography, gel filtration, permeation
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/52—Sorbents specially adapted for preparative chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/54—Sorbents specially adapted for analytical or investigative chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/89—Inverse chromatography
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
    • Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
    • Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Thermal Sciences (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Polymerisation Methods In General (AREA)

Abstract

Makroporøse polymerer som har utvalgte porøsitets- og permeabilitetskarakteristika som danner faste polymer- matrikser som er egnet for anvendelse i væskekromatografi med revers fase (RPC) og ved middels og høye trykk er beskrevet. En fremgangsmåte til fremstilling av polymerene ved anvendelse av utvalgte blandete porogener i utvalgt mengder i forhold til monomerfasen er også beskrevet. Polymerene er særlig anvendelige som stasjonære faser i stor skala-kromatografisøyler uten utvikling av økte trykk ved langvarig bruk mens god kromatografisk ytelse for målbiomolekyler, såsom insulin, biholdes.

Description

Den foreliggende oppfinnelse vedrører makroporøse polymerer som omfatter polymeriserte enheter av (a) 50-100 vekt% av én eller flere polyvinylaromatiske monomerer og (b) 0-50 vekt% av én eller flere monoumettede vinylaromatiske monomerer, samt en fremgangsmåte for fremstilling av slike polymerer og en fremgangsmåte for rensing av vandige løsninger av blandete biomolekyler. Polymerene har utvalgte porøsitets- og permeabilitetskarakteristika som gir stive polymermatrikser som er egnet for anvendelse i væskekromatografi med revers fase ved middels og høye trykk (RPC). Polymerene er særlig anvendelige som stasjonære faser i kromatografisøyler i stor skala uten utvikling av økte trykk ved langvarig anvendelse.
Stasjonære faser som er anvendelige i væskekromatografi med revers fase, særlig i høyytelsepreprativ modus (såsom det kreves i separering og rensing av biomolekyler), må være mekanisk faste for å motstå de høye driftstrykk som dannes inne i kromatografisøyler. Silikamatrikser, som har vært vanlig benyttet til disse anvendelser tidligere, har tilfredsstillende mekanisk fasthet. Silikamatrikser kan imidlertid ikke drives under betingelser med høy pH, noe som begrenser deres anvendelse i en lang rekke biomolekyl-separasjoner sterkt. Denne faktor begrenser rensemulig-hetene som er tilgjengelige for prosesskromatografi-operatøren og påvirker negativt produksjonslevetiden til silikamedia (de forringes hurtigere på grunn av at de ikke kan rengjøres under aggressive betingelser), noe som resulterer i dårligere totaløkonomi for kommersielle fremstillingsprosesser.
Stasjonære faser basert på organiske polymerer kan på den annen side drives typisk i et meget bredt område av pH-betingelser, noe som gir større anvendelighet i biomolekyl-separasjoner. Kromatografioperatøren har muligheten til å utvikle en høy-pH-prosess, som kan gi slike fordeler som forbedrede løslighets-, selektivitets- og kapasitets-
karakteristika til separasjonsmediene for visse molekyler.
I tillegg kan polymere harpikser rengjøres aggressivt under betingelser med høy pH og derved bedre søylens levetid og følgelig prosessøkonomien. Men kjente polymere, stasjonere faser er imidlertid litt komprimerbare ved de betingelser med middels og høye trykk som benyttes i høyytelses-separasjoner av biomolekyler. Denne komprimerbarhet er skadelig for separasjonsprosesser på grunn av at den begrenser området for strømningshastigheter som det kan arbeides ved, og den kan forringe polymersjiktets inte-gritet i søylen. F.eks. beskrives det i følgende publikasjoner polymerer som anvendes ved søylebetingelser som er representative for analytiske høytrykksoperasjoner (mindre enn 0,5 cm innvendig søylediameter) hvor "veggeffekter" er kjent for å minimalisere polymerkomprimerbarhet. Men i disse publikasjoner beskrives ikke prosesser i stor skala, kommersielle høytrykkskromatografisøyler hvor man ville forvente ytterligere trykkoppbygging fra polymert komprimerbarhet som følge av fravær av veggeffekter: L.L. Loyd og F.P. Warner," Preparative High Performance Liquid Chromatography on a Unique High-speed Macroporous Resin", J. Chromatography, Vol 512, 1990, p 365-376, og L.L. Loyd, "Rigid Macroporous Copolymers as Stationary Phases in High Performance Liquid Chromatography, Review", J. Chromatography, Vol 544, 1991, p 201-217.
Konvensjonelle makroporøse kopolymerer fremstilt ved suspensjonspolymerisasjon av divinylbenzen (DVB)-holdige monomerblandinger i nærvær av et ikke-løsemiddel representerer polymerer som har et bredt område av porestørrelses-fordelinger og overflatearealer. F.eks. beskrives det i US-patentskrift 4.686.269 en fremgangsmåte til fremstilling av polymerer som er anvendelige for analytisk skala av væske-kromatografisøyler (innvendig diameter på 0,8 cm) som har gjennomsnittlige partikkeldiametre på fra 0,5 til 50 ym og som inneholder minst 60% polyvinylaromatisk monomer, ved å polymerisere monomerene i fra 50 til 300% organiske koløse-midler, regnet av den totale vekt av monomer. Det beskrives i publikasjonen ikke en fremgangsmåte til fremstilling av polymerer som har utvalgte porøsitets- og permeabilitetskarakteristika som frembringer faste polymermatrikser som ikke komprimeres under de høytrykksanvendelsesbetingelser som er vanlige i produksjonsskala av kromatografisøyler, dvs. de søyler som har innvendige diametere på fra 2 til 100 cm, typisk fra 5 til 80 cm.
Polymer-kompressibilitet overføres til begrenset strømning gjennom separasjonsmediene, noe som danner ytterligere mottrykk i kromatografisystemet og i siste instans tilfører lengre syklustider. Der er behov for en polymer, stasjonær fase som uten vesentlig kompresjon kan motstå de middels til høye driftstrykk som dannes under typiske RPC-prosessbetingelser. I tillegg er det vesentlig at den stasjonære fase også har tilfredsstillende masseover-førings- og kapasitetskarakteristika for visse målrettede klasser av biomolekyler for å oppnå den ønskede kromatografiske ytelse.
Formålet med den foreliggende oppfinnelse er å frembringe en makroporøs polymer, stasjonær fase som er egnet for biomolekylseparering og rensing mens det samtidig opp-nås tilfredsstillende trykk- og strømningskarakteristika under RPC.
Ifølge den foreliggende oppfinnelse er der frembrakt en makroporøs polymer som omfatter polymeriserte enheter av (a) 50-100 vekt% av én eller flere polyvinylaromatiske monomerer og (b) 0-50 vekt% av én eller flere monoumettede vinylaromatiske monomerer. Polymeren er kjennetegnet ved at den har
(i) en total porøsitet på 0,7-2 cm^ pr. g,
(ii) en driftsmesoporøsitet på 0,7-1,9 cm^ pr. g, (iii) en gjennomsnittlig partikkelstørrelsesdiameter på 2-600 ym,
(iv) et overflateareal på 200-1.500 m 2 pr. g,
(v) en strømningsmotstandsverdi på fra 700 til mindre enn 1800 ved et trykk på 10 bar og fra 1.500 til mindre enn 7.000 ved et trykk på 60 bar, og (vi) en total insulinkapasitet på 75-150 g insulin/ liter polymer og en dynamisk insulinkapasitet på 60-150 g insulin/liter polymer.
Ytterligere utførelser er angitt i kravene 2-6.
I en foretrukket utførelsesform har den ovennevnte makroporøse polymer (a) et overflateareal på 400-1.000 m 2
pr. g, (b) en driftsmesoporøsitet på 0,9-1,4 cm^ pr. g, (c) en gjennomsnittlig partikkelstørrelsesdiameter på 10-75 ym, (d) en strømningsmotstandsverdi på fra 700 til mindre enn 1500 ved et trykk på 10 bar og fra 1.500 til mindre enn 5.000 ved et trykk på 60 bar, og (e) en total insulinkapasitet på 90-150 g insulin/liter polymer og en dynamisk insulinkapasitet på 75-150 g insulin/liter polymer.
Ifølge oppfinnelsen er det også frembrakt en fremgangsmåte til fremstilling av en makroporøs polymer som angitt i krav 1, hvor fremgangsmåten kjennetegnes ved polymerisering av 0-50% monovinylaromatisk monomer og 50-100% polyvinylaromatisk monomer i nærvær av 100-170% av en porogenblanding som inneholder en hydrofob porogen og en hydrofil porogen, og 0,5-10% friradikal polymerisasjonsinitiator i en vandig suspensjon, hvorved alle %-mengder er regnet av total vekt av monomer og hvorved (a) den hydrofile porogen foreligger i et vektforhold på over 1,2:1 opptil til 3:1 i forhold til den hydrofobe porogen, og (b) den hydrofile porogen velges blant én eller flere (C4-C-L0)-alkanoler og den hydrofobe porogen velges fra én eller flere ( C- j- Ciq) aromatiske hydrokarboner og (Cg-C]^) mettede hydrokarboner.
Ytterligere utførelser av fremgangsmåten er angitt i kravene 8-9.
Videre er det ifølge oppfinnelsen frembrakt en fremgangsmåte til rensing av vandige løsninger av blandete biomolekyler, hvor fremgangsmåten kjennetegnes ved at den vandige løsning bringes i kontakt med den ovennevnte makro-porøse polymer i en væskekromatografisøyle som har en innvendig diameter på 2-100 cm og som drives ved et trykk på 10-100 bar.
Det har vist seg at nye makroporøse polymerer som er anvendelige for separering og rensing av biomolekyler i stor skala ved høytrykksvæskekromatografi med revers fase kan fremstilles med utvalgte porøsitets- og permeabilitetskarakteristika. Spesielt har det vist seg at anvendelse av spesifikke porogenløsemidler i spesifikke mengder i forhold til monomerfasen under spesifikke polymerisasjonsbetingelser uventet gir de faste polymermatrikser ifølge oppfinnelsen. De makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen kan anvendes i høytrykks-RPC uten vesentlig kompressibilitet og trykkoppbygning, mens god gjennomstrømning og gode kapasiteter opprettholdes (dynamisk og likevekts) for målrettede biomolekyler.
Slik de benyttes i beskrivelsen skal de etterfølgende betegnelser ha følgende betydninger med mindre sammenhengen klart indikerer noe annet.
Betegnelsen "alkyl(met)akrylat" henviser til enten den tilsvarende akrylat- eller metakrylatester. Tilsvarende henviser betegnelsen "(met)akryl" til enten akryl- eller metakrylsyre og de tilsvarende derivater, såsom estere og amider. Alle prosentangivelser vil bli uttrykt i vekt%, regnet av involvert polymer eller materiale med mindre annet er angitt. Betegnelsen "kopolymer" henviser til polymermaterialer som inneholder enheter av to eller flere forskjellige monomerer, inklusive stillingsisomerer. Følg-ende forkortelse benyttes her: ppm = deler pr. million etter vekt/volum. Med mindre annet er angitt skal angitte områder ansees for å være inkluderende og kombinerbare.
De makroporøse polymerer som er anvendelige som stasjonære faser ved RPC har økt strukturell fasthet sammenlignet med eksisterende materialer, noe som gjør polymerene egnet for anvendelse i fremstillingsprosesser i kommersiell skala. Økt strukturell fasthet er blitt oppnådd ved modifisering av polymermatriksens struktur ved å benytte utvalgt polymerisasjonsbetingelser.
Modifisering av polymermatriksens porøsitet er viktig ved fremstilling av de makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen. For å være effektive ved separering av store biomolekyler har en stasjonær fase fortrinnsvis en åpen, porøs struktur som muliggjør hurtig diffusjon av molekyler inn i og ut av matriksen. I tillegg gir et høyt nivå av porøsitet et stort overflateareal, noe som i sin tur gir en høy kapasitet hos matriksen for målmolekylet. De mest moderne, kommersielle polymere RPC-stasjonære faser synes å være utformet rundt disse kriterier og anvendes under betingelser med lavere trykk (typisk fra 1 bar opptil mindre enn 10 bar og fortrinnsvis fra 1 til 5 bar - Et trykk på 1 bar=10^ Pascal eller 10^ Pa). Men under høytrykksbetingelser (typisk fra 10 bar til 100 bar) er disse matrikser komprimerbare. De makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen har økt polymerfasthet og har samtidig bibeholdt høy kapasitet og hurtig intrapartikkeldiffusjon for målmolekyler.
De makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen er anvendelige til rensing av biomolekylblandinger løst i vandige løsninger ved å bringe løsningen i kontakt med den makroporøse polymer i en væskekromatografisøyle, som har innvendige diametere på fra 2 til 100, fortrinnsvis fra 50 til 80 og mer foretrukket fra 10 til 50 cm, hvor søylen drives ved et trykk på fra 10 til 100 og fortrinnsvis fra 20 til 80 bar. Typisk utføres preparativ væskekromatografi med revers fase i kromatografisøyler på fra 10 til 50 cm ved trykk på fra 20 til 80 bar.
Utvalgte polymerisasjonsbetingelser representerer en viktig faktor ved fremstilling av makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen. Utvalgte forhold av blandet porogen i forhold til monomerfasen og forholdet mellom hydrofil porogen i forhold til hydrofob porogen er de nøkkel-parametre som antas å frembringe de makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen.
Uten å ønske å være bundet til teori antas det at når det gjelder den foreliggende oppfinnelse forandres polymermatriksens densitet, slik at det muliggjøres mer fast polymer pr. enhetsvolum totalt polymer, hvorved matriksens fasthet øker med følgende økt kapasitet for målmolekyler. Det spesielle valg av mengden porogen i forhold til monomer og balansen mellom hydrofobe og hydrofile porogentyper antas å påvirke porestørrelsesfordelingen på en måte som er gunstig for binding av målmolekyler (i dette tilfelle biomolekyler) , mens det samtidig tilveiebringes forbedret matriksfasthet.
Fornettede, makroporøse kopolymerer ifølge den foreliggende oppfinnelse er typisk kuleformete kopolymerperler som har gjennomsnittlige partikkelstørrelsesdiametere på fra 2 til 600 um. Polymerer som er anvendelige til separering og rensing av biomolekyler via væskekromatografi med revers fase og høy ytelse (såsom i søyler fra 2 til 100 cm i diameter) har typisk gjennomsnittlige partikkelstør-relsesdiametere på fra 2 til 150, fortrinnsvis fra 50 til 100 og mer foretrukket fra 100 til 75 og mest foretrukket fra 10 til 30 um. Polymerer som er anvendelige til separeringen og isoleringen av biomolekyler via adsorpsjons-prosesser i stor skala (såsom søyler opptil atskillige meter i diameter i fermenteringsbuljonger) har typisk gjennomsnittlige partikkelstørrelsesdiametere på fra mer enn 150 opptil 600, fortrinnsvis fra 200 til 500 og mer foretrukket fra 250 til 400 um.
De makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen fremstilles typisk ved suspensjonspolymerisasjon og har overflatearealer på fra 200 til 1500, fortrinnsvis fra 300 til 1200 og mer foretrukket fra 400 til 1000 m<2>/g. De makro-porøse polymerer er fortrinnsvis av den type som f.eks. er beskrevet i US-patentskrift 4.382.124, hvor porøsitet inn-føres i kopolymerperlene ved suspensjonspolymerisasjon i nærvær av en porogen (også kjent som "fase-ekstender" eller "utfellingsmiddel"), dvs. et løsemiddel for monomeren, men et ikke-løsemiddel for kopolymeren. Konvensjonelle makro-porøse polymerer, såsom de som fremstilles ifølge ovennevnte US-patentskrift 4.382.124, omfatter typisk anvendelse av en lang rekke porogentyper, porogenkonsentrasjoner i forhold til monomerfasen, monomertyper, tverrbindings-monomertyper, tverrbindingsmiddelnivåer, polymerisasjonsinitiatorer samt initiatorkonsentrasjoner. Den foreliggende oppfinnelse er imidlertid basert på iakttakelsen at makroporøse polymerer fremstilt under anvendelse av visse utvalgte porogentyper som anvendes i spesifikke konsentrasjoner i forhold til monomerfasen, med spesifikke monomerer og utvalgte nivåer av fornetning, sammen med utvalgte polymerisasjonsinitiator-konsentrasjoner, har uventet faste polymerstrukturer som svarer til bedre ytelse ved separeringen og rensingen av biomolekyler via høyytel-sesvæskekromatografi med revers fase.
Egnete polyvinylaromatiske monomerer som kan anvendes ved fremstillingen av de makroporøse polymerer som er anvendelige i den foreliggende oppfinnelse omfatter f.eks. én eller flere monomerer valgt blant divinylbenzen, tri-vinylbenzen, divinyltoluen, divinylnaftalen, divinylantracen og divinylxylen. Det er underforstått at enhver av de forskjellige mulige isomerer av hver av de ovennevnte tverrbindingsmidler er egnet. Fortrinnsvis er den polyvinylaromatiske monomer divinylbenzen. Typisk inneholder den makroporøse polymer fra 50 til 100%, fortrinnsvis fra 65 til 100% og mer foretrukket fra 75 til 100% polyvinylaromatiske monomerenheter.
Eventuelt kan også alifatiske tverrbindingsmonomerer, såsom etylenglykoldiakrylat, etylenglykoldimetakrylat, trimetylolpropantriakrylat, trimetylolpropantrimetakrylat, glysidylmetakrylat, dietylenglykoldivinyleter og trivinyl-cykloheksan, anvendes i tillegg til det polyvinylaromatiske tverrbindingsmiddel. Dersom de anvendes utgjør de alifatiske tverrbindingsmonomerer som polymeriserte enheter typisk fra 0 til 20%, fortrinnsvis fra 0 til 10% og mer foretrukket fra 0 til 5% av den makroporøse polymer, regnet av den totale monomervekt som anvendes for å fremstille den makroporøse kopolymer.
Egnete monoumettede vinylaromatiske monomerer som kan anvendes ved fremstillingen av de makroporøse kopolymerer som er anvendelige i den foreliggende oppfinnelse omfatter f.eks. styren, a-metylstyren, (C-L-C4) alkyl-substituerte styrener, halogen-substituerte styrener (såsom dibromstyren og tribromstyren), vinylnaftalen og vinylantracen. Fortrinnsvis velges den monoumettede vinylaromatiske monomer blant én eller flere av styren og ( C-^- C^) alkyl-substituerte styrener. Inkludert i de egnete ( C-^- C^) alkyl-substituerte styrener er f.eks. etylvinylbenzener, vinyltoluener, dietylstyrener, etylmetylstyrener og dimetylstyrener. Det er underforstått at enhver av de forskjellige posisjons-isomerer av hver av de ovennevnte vinylaromatiske monomerer er egnet. Fortrinnsvis er den monoumettede vinylaromatiske monomer etylvinylbenzen. Typisk inneholder den makroporøse polymer fra 0 til 50%, fortrinnsvis fra 0 til 35% og mer foretrukket fra 0 til 25% monoumettede vinylaromatiske monomerenheter.
Eventuelt kan det også anvendes ikke-aromatiske vinylmonomerer, såsom alifatiske umettede monomerer, f.eks. vinylklorid, akrylnitril, (met)akrylsyrer og alkylestere av (met)akrylsyrer (alkyl(met)akrylater) også anvendes i til legg til den vinylaromatiske monomer. Ved anvendelse utgjør de ikke-aromatiske vinylmonomerer som polymeriserte enheter typisk fra 0 til 20%, fortrinnsvis fra 0 til 10% og mer foretrukket fra 0 til 5% av den makroporøse kopolymer, regnet av den totale monomervekt som anvendes for å fremstille den makroporøse kopolymer.
Foretrukne makroporøse polymerer velges blant én eller flere av divinylbenzenkopolymer, styren-divinylbenzen-kopolymer, divinylbenzen-etylvinylbenzen-kopolymer og styren-etylvinylbenzen-divinylbenzen-kopolymer. Mer foretrukne er divinylbenzen-etylvinylbenzen- og styren-etylvinylbenzen-divinylbenzen-polymerer.
Porogener som er anvendelige for fremstilling av de makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen omfatter hydrofobe porogener, såsom ( C- j- C^ q ) aromatiske hydrokarboner og (Cg-C-L2) mettede hydrokarboner, samt hydrofile porogener, såsom (C4-<C>1q)alkanoler og polyalkylenglykoler. Egnete (C7-C-lo ) aromatiske hydrokarboner omfatter f.eks. én eller flere av toluen, etylbenzen, o-xylen, m-xylen og p-xylen. Det er underforstått at enhver av de forskjellige posisjons-isomerer av hver av de ovennevnte hydrokarboner er egnet. Fortrinnsvis er det aromatiske hydrokarbon toluen eller xylen eller en blanding av xylener eller en blanding av toluen og xylen. Egnete (Cg-C-j^) mettede hydrokarboner omfatter f.eks. én eller flere av heksan, heptan og isooktan. Fortrinnsvis er det mettede hydrokarbon isooktan. Egnete (C4-C]_q) alkanoler omfatter f.eks. én eller flere av isobutylalkohol, tert-amylalkohol, n-amylalkohol, isoamyl-alkohol, metylisobutylkarbinol (4-metyl-2-pentanol), heksa-noler og oktanoler. Fortrinnsvis velges alkanolen blant én eller flere (C^-Cg)alkanoler, såsom metylisobutylkarbinol og oktanol. Fortrinnsvis omfatter porogenblandingen en hydrofil porogen valgt blant én eller flere (C^-Cgjalka- noler og en hydrofob porogen valgt blant én eller flere (C7-C-L0) aromatiske hydrokarboner.
Typisk er den totale mengde porogen som anvendes for å fremstille polymeren ifølge oppfinnelsen fra 100 til 170%, fortrinnsvis fra 110 til 160%, mer foretrukket fra 115 til 150% og mest foretrukket fra 120 til 140%, regnet av vekten av monomerene. På porogennivåer over 170% har polymerene dårlige strømningsmotstandsverdier (høy kompressibilitet) under høytrykksbetingelser i pakkete søyler. På porogennivåer under 100% har polymerene dårlige kromatografiske egenskaper (målt ved insulinkapasitet i søylegjennomstrøm-ningstester). I tillegg er porogenene som anvendes for å fremstille polymerene ifølge oppfinnelsen basert på et blandet løsemiddelsystem som omfatter et hydrofobt løse-middel ("hydrofob" porogen) og et mindre hydrofobt løse-middel ("hydrofil" porogen). Det er underforstått at den hydrofile porogen har noe begrenset vannløselighet (f.eks. fra 0,5 til 5%) og er mer vannløselig enn den hydrofobe porogen (typisk vannløselighet på fra 10 til 100 ppm eller mindre).
Typisk er forholdet mellom hydrofil porogen og hydrofob porogen fra over 1,2/1 opptil 3/1, fortrinnsvis fra 1,3/1 til 2,7/1, mer foretrukket fra 1,4/1 til 2,5/1 og mest foretrukket fra 1,6/1 til 2,4/1. Ved forhold hydrofil/ hydrofob porogen på over 1,2/1 og lavere har polymerene som har akseptabel strømningsmotstandsbetende også nedsatt kromatografisk ytelse (målt ved begrenset masseoverførings-tilgjengelighet i insulinkapasitetstesten). Ved forhold hydrofil/hydrofob porogen på over 3/1 vil polymerene ha nedsatt total kapasitetsytelse (målt ved minskende mengder insulin sorbert i søylestrømningstesten). Typisk inneholder de blandete porogener et (C-y-C^ø) aromatisk hydrokarbon og en (C4-C10)alkanol. Fortrinnsvis inneholder de blandete porogener xylener og metylisobutylkarbinol.
Polymerisasjonsinitiatorer som er anvendelige ved fremstilling av polymerer ifølge oppfinnelsen omfatter monomerløselige initiatorer, såsom peroksider, hydroperok-sider og beslektede initiatorer, f.eks. benzoylperoksid, tert-butylhydroperoksid, kumenperoksid, tetralinperoksid, acetylperoksid, kaproylperoksid, tert-butylperoktoat (også kjent som tert-butylperoksy-2-etylheksanoat), tert-amyl-peroktoat, tert-butylperbenzoat, tert-butyldiperftalat, dicykloheksylperoksydikarbonat, di(4-tert-butylcyklo-heksyl)peroksydikarbonat og metyletylketonperoksid. Anvendelige er også azoinitiatorer, såsom azodiisobutyro-nitril, azodiisobutyramid, 2,2'-azo-bis(2,4-dimetylvalero-nitril), azo-bis(a-metylbutyronitril), samt dimetyl-, dietyl- eller dibutyl-azo-bis-(metylvalerat). Foretrukne peroksidinitiatorer er diacylperoksider, såsom benzoylperoksid, og peroksyestere, såsom tert-butylperoktoat og tert-butylperbenzoat. Mer foretrukket er initiatoren benzoylperoksid. Egnede nivåer av peroksidinitiator er fra 0,5 til 10%, fortrinnsvis fra 1 til 9%, mer foretrukket fra 2 til 7% og mest foretrukket fra 3 til 5%, regnet av den totale vekt av vinylmonomerer. Mest foretrukket foreligger friradikal-initiatoren i fra 2 til 7%, regnet av den totale vekt av monomer, og velges blant diacylperoksid og/eller peroksyester.
Dispergeringsmidler og suspenderingsmidler som er anvendelige for fremstilling av de makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen er nonioniske overflateaktive stoffer som har en hydroksyalkylcellulose-hovedkjede, en hydrofob alkylsidekjede som inneholder fra 1 til 24 karbonatomer og et gjennomsnitt på fra 1 til 8, fortrinnsvis fra 1 til 5, etylenoksidgrupper som substituenter for hver repeterende enhet i hydroksyalkylcellulose-hovedkjeden, mens alkylside-kjedene foreligger i et nivå på fra 0,1 til 10 alkylgrupper pr. 100 repeterende enheter i hydroksyalkylcellulose-hovedkjeden. Alkylgruppen i hydroksyalkylcellulosen kan inneholde fra 1 til 24 karbonatomer og være uforgrenet, forgrenet eller syklisk. Mer foretrukket er en hydroksy-cellulose som inneholder fra 0,1 til 10 (C]_g) alkylside-kjeder pr. 100 anhydroglukoseenheter og fra ca. 2,5 til 4 etylenoksidgrupper som substituerer hver anhydroglukose-enhet. Typiske anvendelsesnivåer av dispergeringsmidler er fra ca. 0,01 til ca. 4% regnet av den totale vandige fases vekt.
Andre dispergeringsmidler og suspenderingsmidler som er anvendelige for fremstilling av de makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen er polymerer som inneholder hydrofile hovedkjeder, som kan orientere sine lipofile deler mot monomerfasen og sine hydrofile deler mot den vandige fase på grenseflaten mellom de to faser. Disse polymere dispergeringsmidler inkluderer celluloser, polyvinylpyrrolidoner, polyvinylalkoholer, stivelser og lignende. Blandinger av dispergeringsmidler kan også anvendes. Disse andre dispergeringsmidler er tilbøyelige til å være mindre foretrukne enn det de er tilbøyelige til å være mindre foretrukne enn det de er tilbøyelig til å danne en litt større mengde agglomerert eller på annen måte uønsket materiale.
En typisk fremstillings av makroporøs kopolymer kan f.eks. omfatte fremstilling av en kontinuerlig vandig faseløsning som inneholder suspensjonshjelpemidler (såsom dispergeringsmidler, beskyttelseskolloider og buffere) etterfulgt av blanding med en monomerblanding som inneholder fra 50 til 100% polyvinylaromatisk polymer, friradikalinitiator og fra 1 til 1,7 deler blandet porogen (hydrofob og hydrofil porogen) pr. en del monomerblanding. Kombinasjonen av monomer og blandet porogen polymeriseres deretter ved høyere temperatur (typisk ved fra 40 til 120°C, fortrinnsvis fra 60 til 100°C, f.eks. i fra 1 til 20 timer, fortrinnsvis fra 3 til 15 timer), og porogenene fjernes deretter fra de resulterende polymerperler på forskjellige måter. F.eks. kan toluen, xylen og (C4- C-lq) alkoholer fjernes ved destillasjon eller løsemiddel-vasking og polyalkylenglykoler ved vannvasking. Den resulterende makroporøse kopolymer isoleres deretter på konvensjonell måte, såsom avvanning etterfulgt av tørking.
Eventuelt kan fremstillingen av de makroporøse polymerer omfatte en enzymbehandling for å rense polymer-overflaten for rester av dispergeringsmidler og suspenderingsmidler som er blitt anvendt under polymerisasjonen. Enzymbehandlingen omfatter typisk at den makroporøse polymer bringes i kontakt med det enzymatiske materiale (valgt blant cellulose-dekomponerende enzym og/eller proteolytisk enzym) under polymerisasjon, etter polymeri-sas jon eller etter isolasjon av polymeren. Japanske patent-søknader 61-141704 og 57-98504 kan konsulteres for ytterligere generelle og spesifikke detaljer om anvendelsen av enzymer under fremstillingen av polymerharpikser. Egnete enzymer omfatter f.eks. cellulose-dekomponerende enzymer, såsom 15-1, 4-glukan-4-glukanohydrase, 15-1, 4-glukan-4-glukan-hydrolase, 15-1, 4-glukan-4-glukohydrase og 15-1, 4-glukan-4-cellobiohydrase, for cellulosebaserte dispergeringsmiddel-systemer, og proteolytiske enzymer, såsom urokinase, ela-stase og enterokinase, for gelantinbaserte dispergerings-middelsysterner. Typisk er mengden enzym som anvendes i forhold til polymeren fra 2 til 35%, fortrinnsvis fra 5 til 25% og mer foretrukket fra 10 til 20% regnet av total vekt av polymer.
De makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen er særlig anvendelige i anvendelser med pakkede kromatografisøyler hvor polymerens porøsitet og mekaniske fasthet muliggjør høyytelsesseparering og -rensing av biomolekyler ved høye gjennomstrømningshastigheter uten trykkoppbygning ved langvarig bruk.
Eventuelt kan de makroporøse polymerer belegges eller etterfunksjonaliseres med forskjellige konvensjonelle, ioniserbare, funksjonelle grupper (svakt sur funksjonell gruppe, såsom en karboksylsyregruppe, svakt basisk funksjonell gruppe, såsom en primær, sekundær eller tertiær aminfunksjonell gruppe, sterkt sur funksjonell gruppe, såsom sulfonsyregruppe, sterkt basisk funksjonell gruppe, såsom kvaternær ammoniumklorid- eller -hydroksidgruppe) ved kjente metoder, såsom konvensjonell sulfonering, klormetyl-ering og aminering.
De makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen er kjennetegnet ved særlig god permeabilitet (lav strømnings-motstand) som er resultatet av den meget faste polymer-struktur og den utvalgte porøsitet som er innført i polymeren under polymerisasjon. Permeabiliteten (K) er knyttet til mottrykket som dannes i en søyle ved Darcys lov (ligning 1):
hvor u = viskositet (milliPascal-sekund eller cP)
V = lineær hastighet (cm/h)
AP = trykkfall (bar)
dp = polymerens gjennomsnittlige partikkel-størrelse (um)
Enhetene i variablene ovenfor uttrykkes i deres vanlige form. Det er underforstått at omdanning av enheter er nødvendig for å gjøre ligning 1 dimensjonsløs. Jo fastere (dvs. mindre komprimerbar) polymeren er desto større er polymerens polymer, noe som medfører lavere mottrykk for enhver gitt kombinasjon av løsemiddel-viskositet, lineær hastighet og partikkelstørrelse. Under laminære strømingsbetingelser, som er typiske for kromatografisk separering og rensing, kan mottrykket i en søyle uttrykkes ved hjelp av Carman-Kozenys ligning (ligning 2):
hvor6= hulromsvolum mellom partikler (cm^/cm^)
Publikasjoner, såsom "Fundamentals of Preparative and Nonlinear Chromatography", G. Guiochon, S. Goshan Shirazi og A. Katti, Academic Press (1994) og "Unit Operations in Chemical Engineering", W.L. McCabe, J.C. Smith og
P. Harriott, McGraw Hill (1985), kan konsulteres for ytterligere generelle og spesifikke detaljer vedrørende Darcys lov og Carman-Kozenys ligning (ligningene 1 og 2).
Ved å kombinere ligningene 1 og 2, vil man se at permeabilitet (eller strømningsmotstand) i kromatografi-søylen er knyttet til hulromsvolumet mellom partiklene i polymerharpikssjiktet (dvs. volumet mellom polymerpartiklene).6uttrykkes som volum hulrom pr. enhetsvolum av polymersjiktet. Dette forhold uttrykkes ved hjelp av ligning 3:
For formålene til den foreliggende oppfinnelse defineres den karakteristiske "strømningsmotstands"-verdi for en polymer til å være invers av permeabiliteten. Den karakteristiske "strømningsmotstands"-verdi er en indikasjon på hvor godt polymeren vil oppføre seg under betingelser med middels til høyt trykk. Lave strømningsmotstandsverdier representerer lav kompressibilitet og høye strømnings-motstandsverdier representerer dårlig kompressibilitet.
I tillegg omfatter ifølge Darcys lov uttrykk for enten permeabiliteten eller strømningsmotstanden vanlig partik-kelstørrelseseffekt (dp i ligning 1). Et formål med den foreliggende oppfinnelse er å oppnå forbedret strømnings-motstand via økt polymerfasthet, uavhengig av effekter av partikkelstørrelse. Det vil forstås at minsket partikkel-størrelse alene vil for en gitt polymer forårsake høyere mottrykk ifølge ligningene 1 og 2.
Typisk har makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen strømningsmotstandsverdier (dvs. l/K) på fra 700 til mindre en 1.800, fortrinnsvis fra 700 til mindre enn 1.500 og mer foretrukket mindre enn 1.300 ved driftstrykk på 10 bar (middels trykk). Ved drift ved høyere trykk (representert ved 60 bar) har de makroporøse polymerer strømningsmot-standsverdier på fra 1.500 til mindre enn 7.000, fortrinnsvis fra 1.500 til mindre enn 5.000 og mer foretrukket mindre enn 4.500. Makroporøse polymerer som er egnet for anvendelse i RPC har strømningsmotstandsverdier på (i) mindre enn 1.800 ved et trykk på 10 bar og (ii) mindre enn 7.000 ved et trykk på 60 bar. Polymerer som har strømnings-motstandsverdier på over de ovenfor angitt grenser gir ikke tilstrekkelig motstand mot kompresjon ved de middels til høye trykk som finnes i kommersielle RPC-søyler og lider følgelig av nedsatt gjennomstrømning og trykkoppbygning i søylen under drift.
De makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen er kjennetegnet ved utvalgte porøsiteter og porestørrelses-fordelinger frembrakt av porogentypene og -forholdene som anvendes for å fremstille polymerene. Porøsiteter ble bestemt ved anvendelse av et "Micromeretics" ASAP-2400 nitrogenporøsimeter. Porøsiteter ifølge IUPAC-nomenklaturen er som følger: Mikroporøsitet = porer mindre enn 20 Ångstrøm-enheter Mesoporøsitet = porer mellom 20 og 500 Ångstrøm-enheter Makroporøsitet = porer større enn 500 Ångstrøm-enheter For formålene ifølge oppfinnelsen defineres "driftsmessig" mikroporøsitet som porer som har en diameter på mindre enn 50 Ångstrøm-enheter, og "driftsmessig" meso-porøsitet defineres som porer som har diametere på mellom 50 og 500 Ångstrøm-enheter. Den lille forskjell mellom "driftsmessig" porøsitet, slik den benyttes her, og porøsi-teten definert ifølge IUPAC-nomenklaturen skyldes det faktum at 50 Ångstrøm-enheter er et mer egnet og passende avskjæringspunkt (sammenlignet med 20 Ångstrøm-enheter) for å tilpasses til sorpsjonen av interesserende biomolekyler i de makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen.
De makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen har typisk en total porøsitet på fra 0,7 til 2, fortrinnsvis fra 0,9 til 1,8 og mer foretrukket fra 1,0 til 1,7 cm^/g. Typisk har de makroporøse polymerer en driftsmesoporøsitet på fra 0,7 til 1,9, fortrinnsvis fra 0,8 til 1,7 og mer foretrukket fra 0,9 til 1,4 cm^/g. Typisk har de makro-porøse polymerer en driftsmikroporøsitet på fra 0 til 0,5, fortrinnsvis fra 0 til 0,3, mer foretrukket fra 0 til 0,2 og mest foretrukket fra 0 til mindre enn 0,1 cm^/g. De makroporøse polymerer har typisk en makroporøsitet på fra 0 til 0,6, fortrinnsvis fra 0 til 0,5 og mer foretrukket fra 0 til 0,3 cm^/g. Makroporøsitetsverdier på over ca. 0,6 cm^/g minsker polymerens arbeidskapasitet for biomolekyler med den målrettede molekylstørrelse og -form, uttrykt som total kapasitet.
Insulinkapasitet benyttes som en indikator på en poly-mermatriks sin evne som et egnet medium for separering og rensing i stor skala av biomolekyler av lignende størrelse og molekylkonfigurasjon. De makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen har typisk en dynamisk insulinkapasitet på fra 60 til 150 g/l, fortrinnsvis fra 70 til 150 g/l og mer foretrukket fra 75 til 150 g/l. De makroporøse polymerer har typisk en total insulinkapasitet på fra 75 til 150 g/l, fortrinnsvis fra 80 til 150 g/l og mer foretrukket fra 90 til 150 g/l. Dynamisk kapasitet er et mål på hvor hurtig polymermatriksen er i stand til å oppta biomolekylet og defineres som insulinkapasiteten på gjennombruddspunktet hvor 1% lekkasje (i forhold til total insulin sorbert på polymeren) inntreffer. Insulinkapasitet defineres i g/l, dvs. i gram insulin pr. liter polymerharpiks. Makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen som er egnet for anvendelse i preparativ kromatografi med høy ytelse og i stor skala av biomolekyler har typisk en kombinasjon av verdier for dynamisk og total insulinkapasitet på fra henholdsvis 60 og 75 g/l, fortrinnsvis 70 og 80 g/l og mer foretrukket 75 og
90 g/l.
Polymerharpiksens totale kapasitet for et gitt bio-molekyl (f.eks. insulin) er vesentlig på grunn av at den er forbundet med massen til det spesielle molekyl som kan lastes på søylen under renseprosessen. De primære økonom-iske faktorer som er viktige for renseprosessen (søyle-gjennomstrømning, løsemiddelanvendelse, arbeids- eller tidssyklus) er direkte knyttet til det kvantum masse som lastes på søylen.
Polymerharpiksens dynamiske kapasitet er viktig idet den er knyttet til polymerens massetransport-effektivitet for det spesielle molekyl, og den dikterer tidsskalaen som rensingen kan foregå under. En lav dynamisk kapasitet indikerer at polymermatriksen ikke er egnet for hurtige renseprosesser.
Noen utførelsesformer av oppfinnelsen vil bli beskrevet i detalj i de etterfølgende eksempler. Alle forhold, deler og prosentangivelser er uttrykt etter vekt med mindre annet er angitt, og alle reaktanter som anvendes er av god kommersiell kvalitet med mindre annet er angitt. Forkortelser som benyttes i eksemplene og tabellene er opplistet nedenfor med de tilsvarende beskrivelser:
MIBC = metylisobutylkarbinol(4-metyl-2-pantanol)
DVB = divinylbenzen (blanding av meta/paraisomerer) EVB = etylvinylbenzen (blanding av meta/paraisomerer) BPO = benzoylperoksid
rpm = omdr./min.
v/v = volum/volum
w/v = vekt/volum
<y>m = mikrometer
nm=nanometer
g/l = gram/liter
cm^/g = kubikkcentimeter per gram
yl=mikroliter
NA = ikke analysert
Eksempel 1.
Dette eksempel belyser fremstilling av en makroporøs polymer ifølge oppfinnelsen.
En organisk monomerfase ble fremstilt i et 1-liters beger ved å blande følgende bestanddeler: 180 g divinyl-benzenblanding (80% DVB/20% EVB), 73 g o-xylen, 147 g MIBC, og 10,6 g BPO (75% renhet, 25% vann). Disse mengder til-svarer 122% blandet porogen (regnet av total monomer) et forhold hydrofilporogen/hydrofobporogen på 2,0, og 4,5% friradikalinitiator, BPO (regnet av total monomer). Denne blanding ble omrørt i 20 minutter under en nitrogen-atmosfære.
I en 2-liter 4-hals reaksjonskolbe utstyrt med en kjøler, mekanisk rører, termoelement og nitrogeninnløp ble en vandig løsning fremstilt ved å blande sammen følgende: 783 g avionisert vann, 5,0 g "Culminal" MHEC-8000 (metyl-hydroksyetylcellulose, tilgjengelig fra Hercules Chemical Company, viskositet 8.000 milliPascal-sekund (mPa -s=centipoise, cP) for en 2%ig, vandig løsning ved 20°C), 0,158 g natriumlaurylsulfat, 2,94 g 50%ig, vandig natriumhydroksid og 3,13 g borsyre. Løsningen ble omrørt ved 250 omdr./min. mens temperaturen ble økt hurtig til 80°C hvor den ble holdt i 1 time. Løsningen ble deretter i løpet av 30 minutter avkjølt til omgivelsestemperatur ved luftkjøling av reaksjonsbeholderen. Etter fullstendig oppløsning av de faste reaktanter ble omrøringen stoppet, og en organisk fase (fremstilt ovenfor) ble tilsatt til reaksj onskolben.
Reaksjonsblandingen (kombinerte organiske og vandige faser) ble omrørt ved 300 omdr./min. ved romtemperatur i 20 minutter og deretter oppvarmet til 80°C i løpet av 4 7 minutter. Reaksjonsblandingen ble holdt på 80°C i 12 timer for å polymerisere reaktantene. Reaksjonsblandingen ble deretter overført til en trykkbeholder utstyrt for omrøring og oppvarmet ved 100°C i 5 timer for å omdanne resterende reaktanter og avslutte polymerisasjonen.
Etter at polymerisasjonsreaksjonen var fullført ble reaksjonsblandingens temperatur justert til 50°C under omrøring. pH i den vandige fase av blandingen vandig/ polymer ble justert til 5,0 ved tilsetning av ca. 3 g borsyre etterfulgt av langsom tilsetning av 10%ig svovel-syre (vandig) inntil den endelige pH var oppnådd. Totalt 25,0 g av 15-1,4-glukan-4-glukanhydrolase ("Cellulase" 4000, tilgjengelig fra Valley Research, Inc.) ble tilsatt til blandingen vandig/polymer ved å drysse enzympulveret inn i reaktoren i fire like store vektsatser i løpet av 24 timer. Temperaturen ble holdt på 50°C gjennom enzymbehandlingen. pH i den vandige fase av vandig/polymerblandingen ble deretter justert til 12,0 med 50%ig natriumhydroksid (vandig), og temperaturen ble økt til 90°C hvor den ble holdt i 2 timer. Blandingen vandig/polymer ble avkjølt til romtemperatur, fjernet fra kolben og anbrakt i en 1-liter kromatografisøyle. Den vandige fase ble filtrert fra polymeren, og deretter ble det pakkete sjikt av polymer vasket med 2 1 avionisert vann etterfulgt av 3,5 1 aceton og til slutt med 7 1 avionisert vann. Polymeren som var våt av vann ble deretter tørket ved en temperatur på 100°C i et vakuum på 2,5 mm Hg i et tidsrom på 16 timer.
Polymerer 1-4 til 1-11 ble fremstilt ifølge beskrivelsen ovenfor med unntakelse av at prosent porogen, forhold
MIBC/xylen og % BPO ble variert slik som oppsummert i tabell 1. Polymerprøve 1-6 svarer til beskrivelsen ovenfor. Alle polymerer som er identifisert i tabell 1 med endelsen "C" anses for å være sammenlignende for formålene ifølge oppfinnelsen. Polymerprøven 1-5 til 1-9 anses for å være representative polymakroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen. Polymerprøven 1-12C, 1-13C og 1-14C er kommersielt tilgjengelige polyvinylaromatiske polymerer av kromatografisk kvalitet som ble evaluert sammen med polymerprøvene som ble fremstilt ifølge beskrivelsen ovenfor.
Kommersiell polymer 1-12C er et poly(styren-divinylbenzen)materiale med partikkelstørrelse 30 ym tilgjengelig som harpiks "Source" 30RPC fra Amersham-Pharmacia Company, Uppsala, Little Chalfon, Storbritannia. Kommersiell polymer 1-13C er et poly(styren-divinylbenzen)materiale med partikkelstørrelse 15 ym tilgjengelig som "Source" 15RPC fra Amersham-Pharmacia Company, Uppsala, Little Chalfon, Storbritannia. Kommersiell polymer 1-14C er et poly(styren-divinylbenzen) materiale med partikkelstørrelse 15 ym tilgjengelig som en harpiks "PLRP-S 300" fra Polymer Labs Ltd., Shropshire, Storbritannia.
Eksempel 2.
I dette eksempel beskrives evaluering av de makro-porøse polymerer ifølge oppfinnelsen for insulinbindende kapasitet. Prøver på ca. 5 ml volum ble pakket i testsøyler (1,0 cm innvendig diameter x 6,3 cm lengde) for liten skala og evaluert for frontal adsorpsjon av bovininsulin fra vandig løsning. Denne test ble utformet for å bestemme om polymermatriksen muliggjorde hurtig, effektiv massetransport og høy kapasitet for et målprobemolekyl (f.eks. insulin) under typiske anvendelsesbetingelser. I tillegg ble prøver på ca. 20 ml pakket i storskala testsøyler (1,0 cm innvendig diameter x 25 cm lengde), og det ble utført en fraksjonering/separering av insulin. Denne test ble benyttet for å bekrefte at polymermatriksen ga tilfredsstillende ytelse under typiske prosessbetingelser. 5 g av den tørkede polymerharpiks (fremstilt ifølge eksempel 1 med mindre annet er angitt) ble blandet med 35 ml 20%ig etanol/vann (v/v), og hensatt ved omgivelsestemperatur i minst 2 timer. Polymeroppslemmingen ble deretter pakket i en "Omnifit" glassøyle (dimensjoner: 6,3 cm lengde x 10 mm innvendig diameter, tilgjengelig fra Millipore Corp.) ved strømningspakking i 20%ig v/v etanol/ vannløsning ved en lineær hastighet på 150 cm/h. Kvaliteten av søylepakkingen ble bekreftet ved injisering av en 50 yl puls av l%ig natriumkloridløsning i avionisert vann inn i søylen mens 20%ig v/v etanol/vann som elueringsmiddel strømmet ved en lineær hastighet på 40 cm/h. Effektiviteten (plater/meter) og asymmetri for søylen ble evaluert under anvendelse av "Chemstation" programvare fra Hewlett Packard. Målverdier for akseptable søylepakkingsparametere var et minimum av 5.000 plater/meter effektivitet ved asymmetri på fra 0,8 til 1,8.
En løsning av bovininsulin (tilgjengelig fra Sigma Chemical Co.) i en konsentrasjon på 5 g pr. 1 vann ble fremstilt. Totalt 200 ml av denne løsning ble pumpet inn i søylen med en lineær hastighet på 150 cm/h, og en UV-spektrofotometrisk detektor ("Spectraflow" 783, tilgjengelig fra ABI Analytical, Kratos Division) innstilt på en bølgelengde av 291 nm ble anvendt for å spore bovin-insulinet i avløpet.
Polymerharpiksens dynamiske kapasitet (g/l) ble oppnådd ved å registrere mengden insulin som ble sorbert på polymerharpiksen ved punktet 1% insulingjennombrudd (i forhold til den totale mengde insulin som ble sorbert på polymerharpiksen) i UV-responskurven. Harpiksens totale kapasitet (g/l) ble bestemt ved måling av insulinkonsentra-sjonene i innstrømmende og utstrømmende løsninger ved UV-spektrofotometri og deretter gjennomføring av en masse- balanse. Resultatene er oppsummert i diskusjonen i eksempel 3.
Eksempel 3.
I dette eksempel beskrives hvordan de makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen ble evaluert for deres permeabilitetskarakteristika, dvs. motstand mot komprimering. Polymerene karakteriseres ved deres "strømnings-motstands"- eller 1/K-verdier (se ligning 3).
I industriell høytrykksvæskekromatografi er det vanlig å anvende søyler som er utstyrt med et stempel som utøver en kraft (trykk) direkte på harpiksen. Det foretrekkes å holde stempelet slik at det aktivt komprimerer sjiktet ved et trykk som er likt eller større enn det største for-ventede strømningstrykk gjennom den kromatografiske syklus. For å teste permeabilitetskarakteristikkene til polymerene ifølge oppfinnelsen ble polymerharpiks pakket i en "ProChrom" søyle for dynamisk aksial komprimering (modell LC.50) og komprimert med stempelet innstilt på først 10 og deretter 60 bar kompresjonstrykk. Formålet med denne test var å karakterisere hver prøves permeabilitetskarakteristika. En detaljert beskrivelse følger: Ca. 100 g tørr polymerharpiks (tilsvarende ca. 500 ml våt harpiks) ble tilsatt til 700 ml av en løsning av 20% etanol/vann (v/v) og hensatt ved omgivelsestemperatur i minst 2 timer. Denne polymerprøve ble omrørt i oppslemm-ingsform og helt i en 5 cm (innvendig diameter) x 54 cm (lengde) "ProChrom" søyle av rustfritt stål (modell L.C.50 316 L) for dynamisk aksial komprimering (fremstilt av ProChrom S.A., Frankrike). En stempelenhet (drevet ved hjelp av ytre lufttrykk omdannet til hydraulisk oljetrykk) ble aktivert for å utøve et variabelt trykk på polymerharpikssjiktet. Stempelet ble først innstilt for å utøve ca. 10 bar hydraulisk trykk. Harpikssjiktet ble ansett for å være pakket når stempelet ikke lenger beveget seg. Sjiktets høyde ble deretter målt. En strømning på 10 ml av en løsning av 20% etanol/vann (v/v) ble ledet gjennom harpikssjiktet i 30 minutter for å likevektsinnstille sj iktet.
Generelt må for å bestemme hulromsvolumet mellom partiklene (eller permeabiliteten) for det polyvinylaromatiske polymersjikt, de mobile faser velges for forenlighet med probemolekylet, slik at de eliminerer eller minsker vekselvirkning mellom probemolekylet og den polyvinylaromatiske polymers hydrofobe overflate. Konvensjonelle probemolekyler, såsom lineær polystyren, blå dekstran og polyetylenglykol kan anvendes, men gjør det nødvendig å anvende upolare mobile faser (såsom tetrahydrofuran og toluen). Probemolekylene som anvendes i metoden som beskrives nedenfor nødvendiggjør imidlertid ikke anvendelse av upolare løsemidler og kan anvendes i ethvert vandig-organisk løsemiddelsystem, f.eks. 20% etanol.
For å bestemme det totale volum av hulrom i søylen (både inni partiklene og mellom partiklene) ble 2 ml av en l%ig natrimkloridløsning (vekt/volum i 20%ig vandig etanol) innført i systemet. Saltet ble detektert ved hjelp av en ledningsevnedetektor. For å bestemme bare hulromsvolumet mellom partiklene ble en løsning av 20% etanol (vandig) inneholdende 1% (vekt/volum) av en 0,1-0,9 ym ionisk ladet emulsjonspolymer eller findelt ionisk ladet polymer (f.eks. fornettet polystyren med ioniserbare, funksjonelle grupper, såsom svakt sur funksjonell gruppe (karboksylatgruppe), sterkt sur funksjonell gruppe (sulfonat) eller kvaternær ammoniumkloridgruppe) innført i en strøm av 20% etanol (vandig) som strømmer gjennom sjiktet. Partiklene ble påvist ved hjelp av UV-detektor innstilt på 280 nm. Som følge av størrelsen på de ionisk ladete polymerpore-partikler trengte ikke partiklene gjennom porene i polymerharpiksen ifølge oppfinnelsen. Som følge av overflate-naturen til de ionisk ladete polymerprobepartikler (disse partikler hadde aromatisk struktur og en høy konsentrasjon av ionogeniske grupper fordelt på overflaten) ble hydrofob tiltrekning/tilbakeholdelse til polymerharpiksen ifølge oppfinnelsen hindret.
Totalt hulromsvolum av polymersjiktet (saltprobe elueringsvolum) bestemt og kombinert med hulromsvolumet utenfor polymerpartiklene (ionisk ladet emulsjon eller oppmalt polymerelueringsvolum). Disse verdier ble sammen med det målte sjiktvolum anvendt for å beregne6i ligningene 2 og 3. Etter testing ved 10 bar ble samme evaluering utført ved 60 bar.
I tabell 1 oppsummeres strømningsmotstands- og insulinkapasitetskarakteristika for de makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen (polymerer 1-5 til 1-9) og forskjellige sammenligningspolymerer (polymerer med endelse C). Se diskusjon i eksempel 1 vedrørende detaljert beskrivelse av polymerene og deres tilsvarende identifisering i tabellene. Innføringer i tabell 1 omfatter % porogen (regnet av total monomer), forhold hydrofil p porogen/ hydrofob porogen (MIBC/xylen) og % anvendt friradikal initiator (regnet av total monomer) for å fremstille polymerene, insulinkapasiteter i g/l og strømningsmotstands-verdier ved middels og høyt trykk, innføringer i parentes etter de individuelle verdier for insulinkapasitet og strømningsmotstand for en gitt polymerprøve angir antallet forskjellige polymerer fremstilt ved samme fremgangsmåte (samme % porogen, forhold hydrofil porogen/ hydrofob porogen og % BPO) som ble testet og tatt gjennomsnittet av for å frembringe insulinkapasitets- og strømningsmotstands-verdiene som er vist i tabell 1. I tabell 2 er ytterligere polymeregenskaper (overflateareal, porøsitet) for valgte prøver angitt.
Sammenligningspolymer 1-lC viser at et for høyt porogennivå gir tilfredsstillende kompressibilitet ved høyt trykk, mens polymerer 1-lOC og 1-llC viser at et for lavt porogennivå, selv om det gir tilfredsstillende kompres sibilitet (lav strømningsmotstand) gir ekstremt lave insulinkapasiteter. Sammenligningspolymerer 1-lC, 1-2C og 1-3C viser at nedsettelse av % porogennivå er tilbøyelig til å bedre strømningsmotstandsegenskapene, strømnings-motstanden blir imidlertid utilfredsstillende for drift ved høyt trykk. I tillegg blir den dynamiske insulinkapasitet utilfredsstillende med kombinasjonen av lav % porogen og lavt forhold MIBC/xylen (sammenligningspolymer 1-4C).
Polymerer 1-5 til 1-9 er representative for den uvent-ede kombinasjon av høy insulinkapasitet og lav strømnings-motstand (ved høyt trykk) frembrakt ved å balansere para-meterne % porogen og forhold hydrofil porogen/hydrofob porogen som anvendes for å fremstille polymerene ifølge den foreliggende oppfinnelse.
Kommersielle polymerprøver 1-12C og 1-13C oppviser begge uakseptable kompressibilitetskarakteristika selv om polymer 1-12C gir adekvat insulinkapasitetsbetende. Selv om kommersiell polymer 1-14C gir marginalt akseptabel kompressibilitetsytelse er insulinkapasitet godt under akseptable verdier.
Eksempel 4 .
I dette eksempel beskrives virkningen av fremstilling av de makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen med og uten enzymbehandling. Enzymbehandlingen minimaliserer ut klumpdannelse eller agglomerering av polymerharpikser, noe som av og til opptrer ved anvendelse som følge av uønskede til-trekningskrefter mellom perlene på grunn av overflate-forurensning (f.eks. ionisk eller ladete materialer) av polymeren. En spesiell fordel ved anvendelse av enzymbehandling er at de resulterende kuleformete polymerpar-tikler ikke agglomererer, dvs. at partiklene ikke klebe til hverandre og danner klumper. Enzymbehandling antas å rense og fjerne spor av dispergeringsmidler og suspenderingsmidler (anvendt i polymerisasjonsprosessen) fra overflaten av polymerperlene og danner derved polymerperler som flyter fritt og pakkes jevnt i søyler, noe som fører til minimum sjiktvolumer og lave trykkfallskarakteristika i bruk.
Fem forskjellige prøver av en makroporøs polymer fremstilt tilsvarende til det som er beskrevet i eksempel 1 ble behandlet som følger: 4 deler (4A-4D) ble behandlet med cellulase (beskrevet nedenfor), og 1 prøve (4E) ble ikke behandlet med cellulase. Prøvene ble evaluert for sine bunnfellingsegenskaper. Prøver av hver polymerharpiks (3,5 g tørr, tilsvarende ca. 25 ml våt dispergert volum) ble veiet inn i 25 ml graduerte sylindre. Til hver sylinder ble det tilsatt 20 ml 20%ig vandig etanol. Sylinderne ble deretter omrørt med en glasstav for å frembringe en oppslemm-ing, og blandingene fikk bunnfelle i ca. 16 timer eller natten over. Prøvene ble deretter omrørt igjen med en glasstav inntil de var helt blandet. Etter blanding av prøven ble glasstaven fjernet og vasket med 20%ig vandig etanol, og det totale volum i sylinderne ble justert til 25,0 ml (ca. 0,5 ml 20%ig etanol ble anvendt for å vaske og justere hver prøve). Prøvene ble deretter observert i 4 dager, og de bunnfelte sjiktvolumer (harpiks) ble registrert som en funksjon av tid. Resultatene er oppsummert i tabell 3.
Enzymbehandling av polymer 4A (før høytemperaturbehand-ling): Ca. 250 ml oppslemmet harpiks (inneholdende 150 ml harpiks) ble tilsatt til en 2-liter 4-hals kolbe utstyrt med en kjøler, mekanisk rører, termoelement og nitrogen-innløp. Til oppslemmingen ble det tilsatt 100 ml avionisert vann, pH-verdien ble justert til 5,0 med borsyre, og 28 g "Cellulase" 4000 (19% av polymer) ble deretter tilsatt til oppslemmingen. Blandingen ble oppvarmet til 37°C og omrørt i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter overført til en trykkbeholder utstyrt for omrøring og oppvarmet ved 100°C i 5 timer. Den vandige/polymerblanding ble avkjølt til romtemperatur, fjernet fra kolben og anbrakt i en 1-liter kromatografisøyle. Den vandige fase ble filtrert fra polymeren, og det pakkete sjikt av polymer ble vasket med 7 1 avionisert vann etterfulgt av 3,5 1 aceton og til slutt med 7 1 avionisert vann. Den vannvåte polymer ble deretter tørket ved en temperatur på 100°C i et vakuum på 2,5 mm Hg i et tidsrom på 16 timer.
Enzymbehandling av polymer 4B (etter høytemperaturbehand-ling, før vasking med løsemiddel): Ca. 250 ml oppslemmet harpiks (inneholdende 150 ml harpiks) ble overført til en trykkbeholder utstyrt for omrøring og oppvarmet ved 100°C i 5 timer. Den vandig/ polymerblanding ble avkjølt til romtemperatur og overført til en 2-liter 4-hals kolbe utstyrt med en kjøler, mekanisk rører, termoelement og nitrogeninnløp. Til oppslemmingen ble det tilsatt 100 ml avionisert vann, pH-verdien ble justert til 5,0 med borsyre, og 28 g "Cellulase" 4000 (19% av polymer) ble deretter tilsatt til oppslemmingen. Blandingen ble oppvarmet til 37°C og omrørt i 3 timer, fjernet fra kolben og anbrakt i en 1-liter kromatografisøyle. Den vandige fase ble filtrert fra polymeren, og det pakkete sjikt av polymer ble vasket med 7 1 avionisert vann etterfulgt av 3,5 1 aceton og til slutt med 3 1 avionisert vann. Den vannvåte polymer ble deretter tørket ved en temperatur på 100°C i et vakuum på 2,5 mm Hg i et tidsrom på 16 timer.
Enzymbehandling av polymer C (etter høytemperaturbehand-ling, etter vasking med løsemiddel, før fornyet vasking med løsemiddel): Ca. 250 ml oppslemmet harpiks (inneholdende 150 ml harpiks) ble overført til en trykkbeholder utstyrt for omrøring og oppvarmet ved 100°C i 5 timer. Den vandig/ polymerblanding ble avkjølt til romtemperatur, fjernet fra kolben og anbrakt i en 2-liter kromatografisøyle. Den vandige fase ble filtrert fra polymeren, og det pakkete sjikt av polymer ble vasket med 7 1 avionisert vann etterfulgt av 3,5 1 aceton og til slutt med 7 1 avionisert vann. Blandingen ble overført til en 2-liter 4-hals kolbe utstyrt med en kjøler, mekanisk rører, termoelement og nitrogen-innløp. Til oppslemmingen ble det tilsatt 100 ml avionisert vann, pH ble justert til 5,0 med borsyre, og 28 g "Cellulase" 4000 (19% av polymer) ble deretter tilsatt til oppslemmingen. Blandingen ble oppvarmet til 37°C og omrørt i 3 timer, fjernet fra kolben og anbrakt i en 1-liter kromatografisøyle. Den vandige fase ble filtrert fra polymeren, og det pakkete sjikt av polymer ble vasket med 7 1 avionisert vann etterfulgt av 3,5 1 aceton og til slutt med 7 1 avionisert vann. Den vannvåte polymer ble deretter tørket ved en temperatur på 100°C i et vakuum på 2,5 mm Hg i et tidsrom på 16 timer.
Enzymbehandling av polymer 4D (etter høytemperatur-behandling, etter løsemiddel vasking, etter tørking av polymer, før fornyet vasking med løsemiddel): Ca. 250 ml oppslemmet harpiks (inneholdende 150 ml harpiks) ble overført til en trykkbeholder utstyrt for omrøring og oppvarmet ved 100°C i 5 timer. Den vandig/ polymerblanding ble avkjølt til romtemperatur, fjernet fra kolben og anbrakt i en 1-liter kromatografisøyle. Den vandige fase ble filtrert fra polymeren, og det pakkete sjikt av polymer ble vasket med 7 1 avionisert vann, etterfulgt av 3,5 1 aceton og til slutt med 7 1 avionisert vann. Den vannvåte polymer ble deretter tørket ved en temperatur på 100°C i et vakuum på 2,5 ml Hg i tidsrom på 16 timer. Den tørkede prøve ble overført til en 2-liter 4-hals kolbe utstyrt med en kjøler, mekanisk rører, termoelement og nitrogeninnløp. Til oppslemmingen ble det tilsatt 100 ml avionisert vann, pH ble justert til 5,0 med borsyre, og 28 g "Cellulase" 4000 (19% av polymer) ble deretter tilsatt til oppslemmingen. Blandingen ble oppvarmet til 37°C og omrørt i 3 timer, fjernet fra kolben og anbrakt i en 1-liter kromatografisøyle. Den vandige fase ble filtrert fra polymeren, og det pakkete sjikt av polymer ble vasket med 7 1 avionisert vann, etterfulgt av 3,5 1 aceton og til slutt med 3 1 avionisert vann. Den vannvåte polymer ble deretter tørket ved en temperatur på 100°C i et vakuum på 2,5 mm Hg i et tidsrom på 16 timer.
Behandling av polymer 4E (uten enzym):
Ca. 250 ml oppslemmet harpiks (inneholdende 150 ml harpiks) ble overført til en trykkbeholder utstyrt for omrøring og oppvarmet ved 100°C i 5 timer. Den vandig/ polymerblanding ble avkjølt til romtemperatur, fjernet fra kolben og anbrakt i en 1-liter kromatografisøyle. Den vandige fase ble filtrert fra polymeren, og det pakkete sjikt av polymer ble vasket med 7 1 avionisert vann, etterfulgt av 3,5 1 aceton og til slutt med 7 1 avionisert vann. Den vannvåte polymer ble deretter tørket ved en temperatur på 100°C i et vakuum på 2,5 mm Hg i et tidsrom på 16 timer.
Resultatene i tabell 3 viser at de makroporøse polymerer ifølge oppfinnelsen kan enzymbehandles på forskjellige måter for å minimalisere klumpdannelse eller agglomerering av polymerpartiklene. Dette vises av det komprimerte volum av de behandlede polymerer (4A-4D) etter bare 18 timers bunnfelling, noe som representerer 60% av det opprinnelige dispergerte volum av hver prøve, i forhold til den ubehandlede polymer ved 94% av dens opprinnelig dispergerte volum.
Tilsvarende ble prøver av enzymbehandlet og ikke-enzymbehandlet polymerharpiks fremstilt og evaluert for trykkfallskarakteristika ved anvendelse i behandlinger i søyler. Ca. 1200 ml av hver harpiksoppslemming (inneholdende ca. 550 ml polymerharpiks) ble anbrakt i en 6,2 cm "Amicon" Vantage-søyle. Et 545 ml harpikssjikt ble dannet og vasket med 3 sjiktvolumer vann av USP-kvalitet (United States Pharmacopoeia) med 50 ml/min. (178 cm/h) under anvendelse av en "Rainin" HPLX-pumpe, etterfulgt av en blanding av 65% aceton og 35% vann av USP-kvalitet, og deretter til slutt vasket med 99,5% aceton med 50 ml/min. Trykket ble målt ved hjelp av en "Ashcroft" trykkprøvemåler med et område på fra 0 til 6,9 x 10^ Pa. Prøvene som var behandlet med cellulase hadde nedsatt trykkfall gjennom søylen (1,4 x 10^ Pa) i forhold til den ubehandlede prøve (1,4 x IO<6>Pa).

Claims (10)

1. Makroporøs polymer som omfatter polymeriserte enheter av (a) 50-100 vekt% av én eller flere polyvinylaromatiske monomerer og (b) 0-50 vekt% av én eller flere monoumettede vinylaromatiske monomerer,karakterisertved at polymeren har (i) en total porøsitet på 0,7-2 cm^ pr. g, (ii) en driftsmesoporøsitet på 0,7-1,9 cm^ pr. g, (iii) en gjennomsnittlig partikkelstørrelsesdiameter på 2-600 ym, (iv) et overflateareal på 200-1.500 m<2>pr. g, (v) en strømningsmotstandsverdi på fra 700 til mindre enn 1800 ved et trykk på 10 bar og fra 1.500 til mindre enn 7.000 ved et trykk på 60 bar, og (vi) en total insulinkapasitet på 75-150 g insulin/ liter polymer og en dynamisk insulinkapasitet på 60-150 g insulin/liter polymer.
2. Polymer i samsvar med krav 1,karakterisert vedat den polyvinylaromatiske monomer er valgt blant én eller flere av divinylbenzen, trivinyl-benzen, divinyltoluen, divinylnaftalen, divinylantracen og divinylxylen.
3. Polymer i samsvar med krav 1,karakterisert vedat den monoumettede vinylaromatiske monomer er valgt blant én eller flere av styren og (C-^-C4)alkyl-substituerte styrener.
4. Makroporøs polymer i samsvar med krav 1,karakterisert vedat den har (a) et overflateareal på 400-1.000 m<2>pr. g, (b) en driftsmesoporøsitet på 0,9-1,4 cm^ pr. g, (c) en gjennomsnittlig partikkelstørrelsesdiameter på 10-75 ym, (d) en strømningsmotstandsverdi på fra 700 til mindre enn 1500 ved et trykk på 10 bar og fra 1.500 til mindre enn 5.000 ved et trykk på 60 bar, og (e) en total insulinkapasitet på 90-150 g insulin/liter polymer og en dynamisk insulinkapasitet på 75-150 g insulin/liter polymer.
5. Polymer i samsvar med krav 1,karakterisert vedat den inneholder polymeriserte enheter av a) 75-100 vekt% av én eller flere polyvinylaromatiske monomerer, og (b) 0-25 vekt% av én eller flere monoumettede vinylaromatiske monomerer.
6. Polymer i samsvar med krav 1,karakterisert vedat polymeren er valgt blant én eller flere av divinylbenzenkopolymer, styren-divinylbenzen-kopolymer, divinylbenzen-etylvinylbenzenkopolymer og styren-etylvinylbenzen-divinylbenzenkopolymer.
7. Fremgangsmåte til fremstilling av en makroporøs polymer ifølge krav 1,karakterisert vedpolymerisering av 0-50% monovinylaromatisk monomer og 50-100% polyvinylaromatisk monomer i nærvær av 100-170% av en porogenblanding som inneholder en hydrofob porogen og en hydrofil porogen, og 0,5-10% friradikal polymerisasjonsinitiator i en vandig suspensjon, hvorved alle %-mengder er regnet av total vekt av monomer, hvorved (a) den hydrofile porogen foreligger i et vektforhold på over 1,2:1 opptil til 3:1 i forhold til den hydrofobe porogen, og (b) den hydrofile porogen velges blant én eller flere (C4-C-L0) alkanoler og den hydrofobe porogen velges fra én eller flere (C7-C-L0) aromatiske hydrokarboner og (Cg-C-L2) mettede hydrokarboner.
8. Fremgangsmåte i samsvar med krav 7,karakterisert vedat den hydrofile porogen velges blant én eller flere (C5~Cg)alkanoler, og at den hydrofobe porogen velges blant én eller flere (C-j-C^q) aromatiske hydrokarboner.
9. Fremgangsmåte i samsvar med krav 7,karakterisert vedat den makroporøse polymer videre behandles med et enzym valgt blant ett eller flere av cellulose-dekomponerende enzym og proteolytisk enzym, hvorved enzymet bringes i kontakt med den makroporøse polymer under polymerisasjon, etter polymerisasjon eller etter isolering av polymeren.
10. Fremgangsmåte til rensing av vandige løsninger av blandete biomolekyler,karakterisert vedat den vandige løsning bringes i kontakt med den makro-porøse polymer ifølge krav 1 i en væskekromatografisøyle som har en innvendig diameter på fra 2 til 100 cm, hvorved søylen drives ved et trykk på 10-100 bar.
NO20013803A 2000-08-11 2001-08-03 Polymert adsorpsjonsmiddel og fremgangsmate til fremstilling av samme NO332995B1 (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US22437300P 2000-08-11 2000-08-11

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO20013803D0 NO20013803D0 (no) 2001-08-03
NO20013803L NO20013803L (no) 2002-02-12
NO332995B1 true NO332995B1 (no) 2013-02-11

Family

ID=22840394

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20013803A NO332995B1 (no) 2000-08-11 2001-08-03 Polymert adsorpsjonsmiddel og fremgangsmate til fremstilling av samme

Country Status (7)

Country Link
US (1) US6387974B1 (no)
EP (1) EP1179732B2 (no)
JP (2) JP5226918B2 (no)
CN (1) CN1205239C (no)
CZ (1) CZ20012922A3 (no)
DE (1) DE60102327T3 (no)
NO (1) NO332995B1 (no)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GR1002662B (el) * 1996-06-05 1997-04-07 ������� ���������� ����������� ��� �������� ������� ... Μεθοδος παραγωγης προιοντων που προσροφουν πετρελαιο και οργανικους διαλυτες.
SE0201623D0 (sv) 2002-05-30 2002-05-30 Amersham Biosciences Ab Macroporous cross-linked polymer particles
EP1394196A1 (en) * 2002-08-16 2004-03-03 Rohm And Haas Company Resin for solid phase synthesis
DE60322000D1 (de) * 2002-08-16 2008-08-21 Rohm & Haas Harze mit niedrigem Leerraum und Verfahren zu deren Herstellung
US20040063856A1 (en) * 2002-09-30 2004-04-01 Bohling James Charles Resin for solid phase synthesis
US6884829B2 (en) * 2002-10-18 2005-04-26 Robert L. Albright Hemocompatible coated polymer and related one-step methods
WO2004047981A1 (en) * 2002-11-25 2004-06-10 Varian, Inc. Irregularly-shaped macroporous copolymer particles and methods of using same
US6921703B2 (en) * 2003-05-13 2005-07-26 Texas Instruments Incorporated System and method for mitigating oxide growth in a gate dielectric
DK1589045T3 (da) * 2004-04-20 2007-07-23 Rohm & Haas Polymeradsorbent og fremgangsmåde til fremstilling og anvendelse heraf
US20060247361A1 (en) * 2005-05-02 2006-11-02 Varian, Inc. Polar functionalized polymer modified porous substrate for solid phase extraction
US7311825B2 (en) * 2005-05-02 2007-12-25 Varian, Inc. Polymer modified porous substrate for solid phase extraction
US20060266707A1 (en) * 2005-05-26 2006-11-30 Fisher Jon R Drying method for macroporous polymers, and method of preparation and use of macroporous polymers made using the method
EP1907089B1 (en) * 2005-07-28 2011-11-23 Bio-Rad Laboratories, Inc. Separation of proteins based on isoelectric point using solid-phase buffers
CA2617645C (en) 2005-08-03 2014-09-09 Merck Patent Gesellschaft Mit Beschraenkter Haftung Hydrophilic crosslinked polymer
CN101875005A (zh) * 2010-07-15 2010-11-03 上海市安全生产科学研究所 苯吸附材料及其制备方法
MY178616A (en) 2012-09-17 2020-10-19 Grace W R & Co Chromatography media and devices
KR20160087859A (ko) * 2013-11-17 2016-07-22 뉴 프로테인테크 인크. 크로마토그래픽 물질을 제조하는 방법
JP6853670B2 (ja) 2014-01-16 2021-04-07 ダブリュー・アール・グレース・アンド・カンパニー−コーンＷ Ｒ Ｇｒａｃｅ ＆ Ｃｏ−Ｃｏｎｎ 親和性クロマトグラフィー媒体及びクロマトグラフィーデバイス
SG11201607341SA (en) 2014-03-04 2016-10-28 Merck Patent Gmbh Robust antibody purification
CN107847907A (zh) 2014-05-02 2018-03-27 格雷斯公司 官能化载体材料以及制备和使用官能化载体材料的方法
CA2970732C (en) 2014-12-15 2023-05-16 Merck Patent Gmbh Target molecule capture from crude solutions
EP3302784B1 (en) 2015-06-05 2021-10-06 W.R. Grace & Co.-Conn. Adsorbent bioprocessing clarification agents and methods of making and using the same
US11040061B2 (en) * 2015-10-22 2021-06-22 Cytosorbents Corporation Multi-functional hemocompatible porous polymer bead sorbent for removing protein based toxins and potassium from biological fluids
CN109154604B (zh) * 2016-04-24 2023-07-21 沃特世科技公司 用于对用两亲强碱性部分改性的聚糖进行分析的带电表面反相色谱材料方法
CN105854826B (zh) * 2016-05-05 2018-02-09 济南大学 一种乙烯基苄基三甲基氯化铵改性芦苇杆吸附剂的制备
CN105749868B (zh) * 2016-05-05 2018-01-23 济南大学 一种乙烯基苄基三甲基氯化铵改性碳纤维吸附剂的制备

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4382124B1 (en) * 1958-07-18 1994-10-04 Rohm & Haas Process for preparing macroreticular resins, copolymers and products of said process
JPS5798504A (en) 1980-12-11 1982-06-18 Mitsubishi Monsanto Chem Co Production of vinyl polymer
JP2534979B2 (ja) * 1984-12-27 1996-09-18 東ソー株式会社 液体クロマトグラフイ−用充てん剤
JPS61141704A (ja) * 1985-11-11 1986-06-28 Mitsubishi Kasei Vinyl Co ビニル系重合体の製造方法
JPH0224303A (ja) * 1988-07-12 1990-01-26 Sanken Kako Kk 多孔性交又共重合体の製造方法
JPH02126155A (ja) * 1988-11-07 1990-05-15 Hitachi Ltd 分離カラム
JPH03168203A (ja) * 1989-11-29 1991-07-22 Tokyo Organ Chem Ind Ltd 多孔性架橋共重合体の製造方法
JPH03217201A (ja) * 1990-01-23 1991-09-25 Tokyo Organ Chem Ind Ltd 多孔性樹脂に依る吸着分離方法
US5416124A (en) * 1994-06-21 1995-05-16 The Dow Chemical Company Polymeric adsorbents with enhanced adsorption capacity and kinetics and a process for their manufacture
US5460725A (en) * 1994-06-21 1995-10-24 The Dow Chemical Company Polymeric adsorbents with enhanced adsorption capacity and kinetics and a process for their manufacture
JPH11158230A (ja) * 1997-11-27 1999-06-15 Arakawa Chem Ind Co Ltd 水酸基含有多孔質樹脂の製造方法
JPH11183460A (ja) * 1997-12-17 1999-07-09 Tosoh Corp 液体クロマトグラフィー用充填剤及びその製造方法及び使用法
JPH11193310A (ja) * 1997-12-27 1999-07-21 Arakawa Chem Ind Co Ltd アルキル基含有多孔質ポリマー、その製造方法及びその用途
US6147127A (en) * 1999-01-07 2000-11-14 Rohm And Haas Company High surface area adsorbents and methods of preparation

Also Published As

Publication number Publication date
CZ20012922A3 (cs) 2002-03-13
US20020042487A1 (en) 2002-04-11
EP1179732B1 (en) 2004-03-17
EP1179732A3 (en) 2003-06-18
DE60102327D1 (de) 2004-04-22
JP5226918B2 (ja) 2013-07-03
NO20013803L (no) 2002-02-12
JP5580379B2 (ja) 2014-08-27
EP1179732B2 (en) 2012-02-29
US6387974B1 (en) 2002-05-14
CN1338480A (zh) 2002-03-06
JP2012247437A (ja) 2012-12-13
DE60102327T2 (de) 2005-03-17
CN1205239C (zh) 2005-06-08
EP1179732A2 (en) 2002-02-13
NO20013803D0 (no) 2001-08-03
DE60102327T3 (de) 2012-07-05
JP2002145951A (ja) 2002-05-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO332995B1 (no) Polymert adsorpsjonsmiddel og fremgangsmate til fremstilling av samme
JP4335168B2 (ja) ポリマー吸着剤、ならびに調製および使用方法
Zhang et al. Poly (glycidyl methacrylate–divinylbenzene–triallylisocyanurate) continuous-bed protein chromatography
Zhou et al. Macroporous polymeric ion exchanger of high capacity for protein adsorption
JPS6361618B2 (no)
US20060237367A1 (en) Polymeric adsorbent, and method of preparation and use
CA2970732C (en) Target molecule capture from crude solutions
Suárez et al. Functionalized glycidyl methacrylate based polymers as stationary phases for protein retention
US20060266707A1 (en) Drying method for macroporous polymers, and method of preparation and use of macroporous polymers made using the method
KR100699442B1 (ko) 거대다공성 중합체의 건조방법, 제조방법 및 그 방법을이용하여 제조된 거대다공성 중합체의 용도
JP6676975B2 (ja) 分離材及びカラム
JP6746919B2 (ja) 分離材及びカラム
JP6676976B2 (ja) 分離材及びカラム
WO2001096556A1 (en) The use of polymer adsorbent particles in dna separation
JPWO2018174022A1 (ja) 分離材
Zhou et al. A new method for the synthesis of gigaporous polymer beads
CZ2014394A3 (cs) Styrenický polymer a způsob jeho přípravy
JP2017122653A (ja) 分離材及びカラム
JP2017125797A (ja) 分離材及びカラム
JP2017127853A (ja) 分離材及びカラム

Legal Events

Date Code Title Description
MK1K Patent expired