NO327550B1

NO327550B1 - Indolinonderivater,fremgangsmate for fremstilling derav, farmasoytiske preparater samt anvendelse av forbindelsene

Info

Publication number: NO327550B1
Application number: NO20042926A
Authority: NO
Inventors: John H Griffin; Roger Briesewitz; Jonathan W Wray
Original assignee: Theravance Inc
Priority date: 2001-12-27
Filing date: 2004-07-08
Publication date: 2009-08-10
Also published as: HUP0500111A2; DE60205776D1; KR20040070283A; US20060142281A1; HUP0500111A3; CN1290844C; RU2004122918A; CA2470480A1; US20040198804A1; RU2316554C2; US7060703B2; MXPA04006271A; KR100965519B1; CA2470480C; EP1458713B1; US20030171378A1; DK1458713T3; HK1068886A1; ES2247411T3; PL208283B1

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører nye indolinonderivater som er nyttige som farmasøy-tiske midler, fremgangsmåter for fremstilling av forbindelsene, farmasøytiske preparater omfattende forbindelsene og anvendelsen av forbindelsene for fremstilling av farmasøy-tiske midler.

WO 96/40116 beskriver at visse pyrrolsubstituerte 2-indolinonderivater er reseptortyrosinkinaseinhibitorer som er nyttige ved behandlingen av tilstander som viser respons på reseptortyrosinkinaseinhibitorer, f.eks. proliferative lidelser så som kreft. En foretrukket forbindelse, beskrevet på side 17, er 3-(2,3-dimetylpyrrol-5-yl)metylen]2-indolinon, også kjent som SU5416. Uheldigvis er denne forbindelsen funnet å vise dårlig oppløse-lighet i vann og lav biotilgjengelighet ved oral og intravenøs administrering.

WO 99/61422 beskriver videre pyrrolsubstituerte 2-indolinonderivater som reseptortyrosinkinaseinhibitorer. En foretrukket forbindelse, beskrevet som forbindelse 5 på side 214 er 3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydroindol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]propionsyre, også kjent som SU6668. Denne forbindelsen er funnet å ha overlegen oral aktivitet sammenlignet med SU5416, men er rapportert å mangle evne av forbindelsen til å inhibere reseptortyrosinkinase Flt-3 (Abstract 497, Anne-Marie 0'Farrel et al., America Society of Hematology Meeting, Orlando, Florida, USA, 7.-11. desember, 2001). Flt-3 er et viktig mål for en tyrosinkinaseinhibitor, spesielt for behandlingen av akutt myeloid leukemi (AML), fordi ca. 30% av AML-pasienter er funnet å ha mutante former av Flt-3 som fører til konstitutiv tyrosinfosforylering av Flt-3 (Levis et al., Blood, 1. august 2001, bind 98, nr. 3, s. 885-887).

WO 01/60814 beskriver pyrrolsubstituerte 2-indolinonderivater som bærer visse amido-substituenter direkte festet til pyrrolringen som reseptortyrosinkinaseinhibitorer.

WO 02/055517 beskriver indolinoner substituert med arylsubstituenter ved 4-stillingen som viser proteinkinasemodulerende evne.

WO 01/42243 beskriver at visse forbindelser som inneholder to eller flere pyrrolsubstituerte 2-indolinongrupper kovalent bundet sammen gjennom 3-stillingen på hver pyrrol ved en eller flere linkergrupper også er nyttige som reseptortyrosinkinaseinhibitorer.

Deke desto mindre, på grunn av alvorligheten av lidelser som viser respons på reseptortyrosinkinaseinhibitorer og den nylige identifikasjonen av spesifikke kinaseinhibitor-mål, foreligger det et behov for nye reseptortyrosinkinaseinhibitorer med diverse egenskaper.

Pyrrolsubstituerte 2-indolinonderivater som bærer visse karboksamidoetylgrupper ved 4-stillingen på pyrrol er nå funnet å være inhibitorer av reseptortyrosinkinase med spesielt ønskelige egenskaper.

Følgelig tilveiebringer foreliggende oppfinnelse en forbindelse av formel (I):

hvori:

(i) R<1> betyr et hydrogenatom eller en (l-4C)alkylgruppe; og R<2> betyr en gruppe av formelen -A'-NR<s>R<6> hvori hver av R5 og R<6> uavhengig representerer et hydrogenatom eller en (l-4C)alkylgruppe og A<1> betyr (CH2)m, (CH2)n-A<2->(CH2)p eller (CH2CH20)qCH2CH2, hvori m er et heltall på fra 2 til 10, hver av n og/? er et heltall på fra 1 til 6, A er CH=CH, fenylen, bifenylen, cykloheksylen eller piperazinylen og q er 1,2 eller 3; (ii) R<1> og R<2> betyr sammen -A<3>NR<7->A<4-> hvori hver av A<3> og A<4> uavhengig av hverandre betyr (CH2)r eller (CH2CH20)sCH2CH2 hvori r er et heltall på fra 2 til 6, s er 1,2 eller 3, og R betyr et hydrogenatom eller en (l-4C)alkylgruppe; (iii) R og R sammen med nitrogenatomet som de er knyttet til betyr en piperidinylgruppe, hvilken piperidinylgruppe bærer en substituent av formel -A5-R8 ved 4-stillingen, hvori A<5> representerer (l-4C)alkylen og R8 betyr piperidin-4-yl; eller (iv) R' og R<2> sammen med nitrogenatomet som de er knyttet til betyr en pyrrolidinyl, piperidinyl eller morfolinogruppe; og

R3 og R<4> betyr hver et hydrogenatom,

eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

Forbindelser av formel (I) er funnet å være virkesterke og selektive inhibitor av en eller flere av reseptortyrosinkinasene PDGFR (plateavledet vekstfaktor), c-Kit, VEGFR (vaskulær endotelisk vekstfaktor) og Flt-3 i helcelleanalyser.

Oppfinnelsen tilveiebringer videre forbindelser av formel (Ia):

hvor R er hydrogen, metyl eller etyl;

eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

Oppfinnelsen tilveiebringer også farmasøytiske preparater omfattende en forbindelse ifølge oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav og en farmasøytisk akseptabel bærer.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan anvendes i en fremgangsmåte for behandling av en lidelse som viser respons på en tyrosinkinaseinhibitor, hvor fremgangsmåten omfatter administrering til en pasient som har behov for behandling av en effektiv mengde av en forbindelse ifølge oppfinnelsen.

Foreliggende oppfinnelse omfatter videre anvendelse av en forbindelse som omtalt ovenfor for fremstilling av et medikament for behandling av en lidelse valgt fra akutt myeloid leukemi, småcelle-lungekreft, prostatakreft, gastrointestinalkreft, brystkreft, hjernekreft og restenose.

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer nye pyrrolsubstituerte 2-indolinderivater som er substituert ved 4-stillingen av pyrrolringen med karboksamidoetylsubstituenter.

Slik betegnelsen her benyttes refererer alkyl og alkenyl til en forgrenet eller uforgrenet gruppe. Imidlertid, betyr navnene av spesifikke grupper, så som etyl, etylen, propyl, propylen, butyl eller butylen, uforgrenede grupper eller rester, med mindre annet er angitt, så som prop-2-yl. Eksempler på alkylgrupper er metyl, etyl, propyl, prop-2-yl og butyl. Eksempler på alkylengrupper er metylen, etylen, propylen og butylen.

Betegnelsen halogenatom omfatter fluor, klor og brom.

Betegnelsen "terapeutisk effektiv mengde" refererer til en mengde som er tilstrekkelig for å bevirke behandling når den administreres til en pasient som har behov for behandling.

Betegnelsen "behandling" slik den her anvendes, refererer til behandlingen av en syk-dom eller medisinsk tilstand i en pasient, så som et pattedyr (spesielt et menneske) og omfatter: (a) forebyggelse av at sykdommen eller den medisinske tilstanden finner sted, dvs.

profylaktisk behandling av en pasient;

(b) lettelse av sykdommen eller den medisinske tilstanden, dvs. eliminering eller

regresjon av sykdommen eller den medisinske tilstanden i en pasient;

(c) undertrykkelse av sykdommen eller den medisinske tilstanden, dvs. retardering eller stopping av utviklingen av sykdommen eller den medisinske tilstanden i en

pasient; eller

(d) letting av symptomene på sykdommen eller den medisinske tilstanden i en pasient.

Betegnelsen "farmasøytisk akseptabelt salt" refererer til et salt fremstilt fra en base eller syre som er akseptabel for administrering til en pasient, så som et pattedyr. Slike salter kan avledes fra farmasøytisk akseptable uorganiske eller organiske syrer.

Salter avledet fra farmasøytisk akseptable syrer omfatter eddiksyre, benzensulfonsyre, benzosyre, kamfersulfonsyre, sitronsyre, etansulfonsyre, fumarsyre, glukonsyre, gluta-minsyre, hydrobromsyre, hydroklorsyre, melkesyre, maleinsyre, eplesyre, mandelsyre, metansulfonsyre, mucinsyre, salpetersyre, pantotensyre, fosforsyre, ravsyre, svovelsyre, vinsyre, p-toluensulfonsyre, xinafoin (l-hydroksy-2-naftoinsyre) og lignende. Spesielt foretrukne salter er avledet fra fumarsyre, hydrobromsyre, hydroklorsyre, eddiksyre, svovelsyre, fosforsyre, metansulfonsyre, p-toluensulfonsyre, xinafoinsyre, vinsyre, sitronsyre, eplesyre, maleinsyre, ravsyre og benzosyre.

En foretrukket undergruppe av forbindelser av formel (I) er den hvori:

(i) R<1> betyr en metylgruppe og R<2> betyr en gruppe av formelen -A'-NR<5>R6 hvori R<5> betyr et hydrogenatom, R<6> betyr en metylgruppe og A<1> betyr (CH2)m, hvori m er 2, 3,4, 5, 6,7, 8,9 eller 10, (CH2)n-A<2->(CH2)p hvori hver av n og p er 1, og A<2> er CH=CH, fenyl-1,3-en, fenyl-l,4-en, bifenyl-2,2'-en eller cykloheks-1,3-ylen; (CH2)n-A -(CH2)P hvori n og p hver er 2 og A<2> er piperazin-l,4-ylen; eller (CH2CH20)qCH2CH2 hvori q er 2 eller 3; (ii) R1 og R<2> betyr sammen -(CH2)2-NH-(CH2)2-, -(CH2)2-N(CH3)-(CH2)2-, -(CH2)2-N(CH2CH3)-(CH2)2-, -(CH2)2-NH-(CH2)3- eller -(CH2CH20)2CH2CH2-NH-(CH2CH20)CH2CH2-; eller (iii) R<1> og R<2> betyr sammen med nitrogenatomet som de er festet til en piperidinylgruppe, hvilken piperidinylgruppe bærer en substituent av formel -A5-R8 ved 4-stillingen, hvori A<5> betyr propylen og R<8> betyr piperidin-4-yl.

Forbindelser som tilhører den ovenfor nevnte foretrukne undergruppen er funnet å vise god oppløselighet og god absorpsjon under oral administrering.

I denne undergruppen av forbindelser, betyr fortrinnsvis

(i) R<1> betyr en metylgruppe og R<2> betyr en gruppe av formelen -A^NHCHb hvori A<1 >betyr (CH2)m, CH2CH=CHCH2, CH2-fenylen-CH2 eller CH2-cykloheksylen-CH2, hvori m er et heltall på fra 2 til 8; eller (ii) R<1> og R<2> betyr sammen -(CH2)2-NH-(CH2)2-, -(CH2)2-N(CH3)-(CH2)2-, -(CH2)2-N(CH2CH3)-(CH2)2- eller -(CH2)2-NH-(CH2)3-; og

R<3> og R<4> er uavhengig av hverandre hydrogen.

Fortrinnsvis betyr

1 9 11 (i) R betyr en metylgruppe og R betyr en gruppe av formelen -A -NHCH3 hvori A betyr (CH2)m, CH2CH=CHCH2, eller CH2-(l,4-fenylen)-CH2, hvori m er 2 eller 3; eller (ii) R<1> og R<2> betyr sammen -(CH2)2-NH-(CH2)2-, -(CH2)2-N(CH3)-(CH2)2-,

-(CH2)2-N(CH2CH3)-(CH2)2- eller -(CH2)2-NH-(CH2)3.

Foretrukket er forbindelsene: 3 - [3,5-dimetyl-4-(3 -okso-3 -piperazin-1 -ylpropyl)-1 H-pyrrol-2-ylmetylen] -1,3-dihydroindol-2-on; 3-[3,5-dimetyl-4-[3-okso-3-(4-etyl)piperazin-l-ylpropyl]-lH-pyrrol-2-ylmetylen]-l,3-dihydroindol-2-on; 3 -[3,5-dimetyl-4-(3 -okso-3 -homopiperazin-1 -ylpropyl)-1 H-pyrrol-2-ylmetylen] -1,3-dihydroindol-2-on;

og farmasøytisk akseptable salter derav.

Foretrukket betyr A<1> (CH2)2, (CH2)3 eller CH2-CH=CH-CH2.

Spesielt foretrukket er forbindelser, hvori A<1> betyr (CH2)2.

En annen foretrukket undergruppe av forbindelser er den hvori R og R sammen betyr -A<3->NR<7->A<4> hvori hver av A3 og A<4> uavhengig av hverandre betyr (CH2)r eller (CH2CH20)sCH2CH2 hvori r er et heltall på fra 2 til 6, og s er 1,2 eller 3, og R7 betyr et hydrogenatom eller en (l-4C)alkylgruppe.

Forbindelser som tilhører denne undergruppen er også funnet å vise spesielt god virke-styrke.

I denne undergruppen betyr R<1> og R<2> sammen fortrinnsvis -(CH2)2-NR<7->(CH2)2- eller

-(CH2)2-NR<7>-(CH2)3-, spesielt -(CH2)2-NR<7->(CH2)2-.

Eksempler på spesielle verdier for R7 er hydrogen, metyl, etyl, propyl, prop-2-yl og butyl.

Forbindelser hvori R7 betyr hydrogen er spesielt foretrukket.

En spesielt foretrukket undergruppe av forbindelser av formel (I) er forbindelser av formel (Ia):

hvori R er hydrogen, metyl eller etyl, og farmasøytisk akseptable salter derav.

Forbindelser av formel (Ia) som spesielt kan nevnes er: 3-[3,5-dimetyl-4-(3 -okso-3-piperazin-1 -ylpropyl)-1 H-pyrrol-2-ylmetylen]-1,3 - dihydroindol-2-on og

3-[3,5-dimetyl-4-[3 -okso-3-(4-etyl)piperazin-1 -ylpropyl]-1 H-pyrrol-2-ylmetylen]-1,3-dihydroindol-2-on.

Spesielt foretrukket er forbindelsen 3-[3,5-dimetyl-4-(3-okso-3-piperazin-l-ylpropyl)-lH-pyrrol-2-ylmetylen]-l,3-dihydroindol-2-on og farmasøytisk akseptable salter derav. Denne forbindelsen er funnet å være meget virkesterk og selektiv inhibitor for PDGRF, c-Kit, VEGFR og Flt-3. Den er også funnet å ha høy oppløselighet i vann og ha utmer-ket absorpsjon når den administreres oralt til rotter.

En annen forbindelse av formel (I) som spesielt kan nevnes er 3-[3,5-dimetyl-4-(3-okso-3 -homopiperazin-1 -ylpropyl)-1 H-pyrrol-2-ylmetylen] -1,3 -dihydroindol-2-on.

Forbindelsene av formel (I) er nyttige som reseptortyrosinkinaseinhibitorer for behandlingen av proliferative lidelser, så som former for kreft som omfatter akutt myeloid leukemi, småcellelungekreft, prostatakreft, gastrointestinalkreft, brystkreft og hjernekreft og andre proliferative lidelser, så som restenose. Forbindelsene kan også anvendes for å begrense veksten av faste tumorer.

Ifølge et annet trekk tilveiebringer foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse av formel (I), som omfatter

(a) omsetning av en forbindelse av formel (II)

eller et reaktivt derivat derav, med en forbindelse av formel (III)

HNR/R<2> (III)

eller et salt derav, hvori R<1>, R<2>, R<3> og R<4> er som definert ovenfor, eller (b) for en forbindelse av formel (I), hvori R<5> eller R7 betyr et hydrogenatom, avbeskytt-else av en forbindelse av formel (IV)

hvori R<l>a og R2<a> er som definert ovenfor for R1 og R<2>, bortsett fra at R<5> eller R7 er erstat-tet med en gruppe hhv. R<5a> eller R<7a>, hvori R<5a> og R<7a> hver betyr en aminbeskyttende gruppe, og R<3> og R<4> er som definert ovenfor;

etterfulgt, dersom et farmasøytisk akseptabelt salt er påkrevet, av dannelsen av et farma-søytisk akseptabelt salt.

I fremgangsmåte (a), kan reaksjonen mellom en forbindelse av formel (II) og en forbindelse av formel (III) hensiktsmessig utføres ved å anvende en konvensjonell amidkob-lingsfremgangsmåte. For eksempel kan en syre av formel (II) behandles med et kob-lingsmiddel, så som benzotriazol-l-yl-oksy-trispyrrolidinofosfonium heksafluorfosfat (PyBOP) eller o-(7-azabenzotriazol-l-yl)-N,N,N,,N'-tetrametyluronium heksafluorfosfat (HATU), i nærvær av en base, så som N,N-diisopropyletylamin og l-hydroksy-7-azabenzotriazol (HOAt), etterfulgt av tilsetning av forbindelsen av formel (III). Konvensjonelle oppløsningsmidler omfatter polare, aprotiske, organiske oppløsningsmidler, så som dimetylformamid. Temperaturen er hensiktsmessig i området på fra 0 til 50°C. Alternativt kan forbindelsen av formel (II) omdannes til et syrehalogenid, så som klori-det, og deretter omsettes med forbindelsen av formel (III).

I fremgangsmåte (b) kan aminbeskyttelsesgruppen representert ved R<5a> eller R<7a> være en konvensjonell aminbeskyttelsesgruppe. Eksempler på aminbeskyttende grupper er beskrevet i Greene og Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, 2. utgave, John Wi-ley & Sons, NY, 1991 og McOmie, Protecting Groups in Organic Chemistry, Plenum

Press, NY, 1973. Eksempler på aminbeskyttende grupper omfatter acylgrupper, f.eks.

(l-6C)alkanoylgrupper, så som acetyl; (l-6C)alkoksykarbonylgrupper, så som t-butoksykarbonyl; og arylmetoksykarbonylgrupper, så som benzyloksykarbonyl og arylmetylgrupper, så som benzyl.

En acylaminbeskyttende gruppe kan hensiktsmessig fjernes ved behandling med en sy-re, så som trifluoreddiksyre.

Forbindelser av formel (IV) kan fremstilles ved å omsette en forbindelse av formel (II) med et amin av formel (V)

hvori R<l>a og R2<a> er som definert ovenfor, ved å følge fremgangsmåten av prosesstrinn (a). Forbindelser av formel (II) er kjente, f.eks. fra WO 99/61422. De kan også fremstilles ved å omsette en forbindelse av formel (VI) med en forbindelse av formel (VII)

Reaksjonen gjennomføres hensiktsmessig i nærvær av en base, så som piperidin, i et organisk oppløsningsmiddel, så som etanol og under tilbakeløp.

Forbindelser av formel (VII) er kjente, f.eks. fra WO 99/61422.

Forbindelser av formel (VI) kan fremstilles ved å omsette en forbindelse av formel

(VIII)

hvori R<8a> betyr en karboksylbeskyttende gruppe, f.eks. en (l-6C)alkylgruppe så som metyl, med fosforoksyklorid og dimetylformamid, etterfulgt av fjernelse av den beskyt-tende gruppen R<8a>, f.eks. ved alkalihydrolyse.

Forbindelser av formel (VIII) kan fremstilles via den tilsvarende karboksylsyren (R<8a> er hydrogen) ved å følge fremgangsmåter som beskrevet i de etterfølgende eksemplene.

Visse av mellomproduktene som her er beskrevet antas å være nye, f.eks. forbindelsene av formel (IV).

Farmasøytiske preparater

Når de anvendes som farmasøytiske preparater vil forbindelsene ifølge oppfinnelsen vanligvis bli administrert i et farmasøytisk preparat. Preparatene omfatter en forbindelse ifølge oppfinnelsen som den aktive bestanddelen, sammen med et farmasøytisk akseptabelt fortynningsmiddel eller en bærer. Preparatene kan formuleres for en hvilken som helst administrasjonsmåle, spesielt for oral, rektal, transdermal, subkutan, intravenøs, intramuskulær eller intranasal administrering. Preparatene kan formuleres i en hvilken som helst konvensjonell form, f.eks. som tabletter, kapsler, oppløsninger, suspensjoner, dispersjoner, siruper, sprayer, geler, suppositorier, plastere og emulsjoner.

Fremstillingen av et egnet farmasøytisk preparat for en spesiell administrasjonsmåte er innenfor fagmannens kunnskapsområde. I tillegg er bestanddelene for slike preparater

kommersielt tilgjengelige fra f.eks. Sigma (St. Louis, MO). Som ytterligere illustrasjon er konvensjonelle formuleringsteknikker beskrevet i Remington: The Science and Prac-tice of Pharmacy, 20. utgave, Lippincott Williams & White, Baltimore, MD (2000); og H.C. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7. utgave, Lippincott Williams & White, Baltimore, MD (1999).

Ifølge andre trekk tilveiebringer foreliggende oppfinnelse som nevnt et farmasøytisk preparat, som omfatter en terapeutisk effektiv mengde av en forbindelse av formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, sammen med et farmasøytisk akseptabelt fortynningsmiddel eller en bærer.

I en foretrukket utførelsesform, er de farmasøytiske preparatene ifølge oppfinnelsen egnede for oral administrering. Egnede farmasøytiske preparater for oral administrering kan foreligge i form av kapsler, tablett, pille, pastill, drops, drageer, pulvere, korn eller som en oppløsning eller suspensjon i en væske og lignende; hver inneholdende en på forhånd bestemt mengde av en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse som en aktiv bestanddel. Et preparat i form av en tablett kan fremstilles ved å anvende en hvilken som helst egnet farmasøytisk bærer som rutinemessig anvendes for fremstilling av faste preparater. Eksempler på slike bærere omfatter magnesiumstearat, stivelse, laktose, su-krose, mikrokrystallinsk cellulose og bindemidler, f.eks. polyvinylpyrrolidon. I tillegg kan den aktive forbindelsen formuleres i en doseringsform med kontrollert frigivelse som en tablett omfattende en hydrofil eller hydrofob matriks.

Et preparat i form av en kapsel kan fremstilles ved å anvende rutinemessige innkaps-lingsfremgangsmåter, f.eks. ved inkorporering av aktiv forbindelse og hjelpestoffer i en hårdgelatinkapsel. Alternativt kan en halvfast matrisk av aktiv forbindelse og polyetylenglykol av høy molekylvekt fremstilles og fylles i en hårdgelatinkapsel; eller en opp-løsning av aktiv forbindelse i polyetylenglykol eller en suspensjon i spiselig olje kan fremstilles og fylles i en myk gelatinkapsel.

I en annen foretrukket utførelsesform kan forbindelsen ifølge oppfinnelsen formuleres for injeksjon, f.eks. for intravenøs injeksjon. Et typisk preparat for intravenøs injeksjon består av en steril isotonisk vandig oppløsning inneholdende f.eks., aktiv forbindelse og dekstrose eller natriumklorid, eller en blanding av dekstrose og natriumklorid. Andre eksempler på egnede hjelpestoffer omfatter laktert Ringers injeksjon, laktert Ringers pluss dekstroseinjeksjon, Normosol-M og dekstrose, Isolyt E, acylert Ringers injeksjon og lignende. Eventuelt kan et ko-oppløsningsmiddel, f.eks. polyetylenglykol, et gelate-ringsmiddel, f.eks. etylendiamintetraeddiksyre, et stabiliseirngsmiddel, f.eks. en cyklo-dekstrin, og en anti-oksidant, f.eks. natriummetabisulfitt, innbefattes i formuleringen.

Ifølge et annet trekk tilveiebringer foreliggende oppfinnelse en forbindelse av formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav for anvendelse innenfor terapi.

Forbindelsene av formel (I) er nyttige som reseptortyrosinkinaseinhibitorer.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan også anvendes i en fremgangsmåte for behandling av en lidelse som viser respons på en tyrosinkinaseinhibitor, som omfatter administrering til en pasient som har behov for dette av en effektiv mengde av en forbindelse av formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

Pasienten kan f.eks. være et pattedyr, så som et kjæledyr, og er fortrinnsvis et menneske.

Dosen (eller effektiv mengde) av forbindelsen administrert til en pasient vil avhenge av mange faktorer, innbefattende den spesielle forbindelsen som anvendes, naturen og gra-den av lidelsen som behandles, spesies av pasienten, pasientens vekt og administra-sjonsmåten. Generelt administreres en dose i området på fra 0,01 til 100 |iM/kg kroppsvekt.

De følgende eksemplene illustrerer representative farmasøytiske preparater ifølge oppfinnelsen.

Formulerin<g>seksempel A

Hårdgelatinkapsler for oral administrering fremstilles som følger:

Representativ frem<g>an<g>småte: Bestanddelen blandes grundig og fylles deretter i en hårdgelatinkapsel (460 mg sammensetning pr. kapsel).

Formuleringseksempel B

Hårdgelatinkapsler for oral administrering fremstilles som følger:

Representativ fremgangsmåte: Bestanddelene blandes grundig og føres deretter gjennom en 45 mesh U.S. sikt og fylles i en hårdgelatinkapsel (200 mg sammensetning pr. kapsel).

Formuleringseksempel C

Kapsler for oral administrering fremstilles som følger:

Representativ frem<g>an<g>småte: Bestanddelene blandes grundig og fylles deretter i en hårdgelatinkapsel (300 mg sammensetning pr. kapsel).

Formuleringseksempel D

Tabletter for oral administrering fremstilles som følger:

Representativ fremgangsmåte: Bestanddelene blandes grundig og fylles deretter i en hårdgelatinkapsel (460 mg sammensetning pr. kapsel).

Formuleringseksempel E

Et injiserbart preparat fremstilles som følger:

Representativ fremgangsmåte: Bestanddelene ovenfor blandes og pH justeres til 4 ± 0,5 ved anvendelse av 0,5N HC1 eller 0,5N NaOH.

Svnteseeksempler

De følgende synteseeksemplene er fremsatt for å illustrere oppfinnelsen.

Generelt

Reagenser og oppløsningsmidler ble anvendt som mottatt fra kommersielle leverandører med mindre annet er angitt. Alle reaksjoner ble utført ved romtemperatur og uten om-hyggelig utelukkelse av omgivende atmosfære med mindre annet er angitt. Ionespray-massespektere (IS-MS) ble oppnådd ved å anvende et PE Sciex API 150EX-massespektrometer. Kjernemagnetisk resonans (NMR) spektra ble registrert ved 300 MHz. Kjemiske forskyvninger (8) er rapportert i deler pr. million nedfelt for tetrametyl-silan. Analytisk revers-fase HPLC (RP-HPLC) ble utført på et HP1100-instrument ved anvendelse av en 2,1 mm x 50 mm, 3,5 um Cis Zorbax Plus Bonus-RP-kolonne. For de analyttiske separasjonene, ble en 0,5 minutters isokratisk periode etterfulgt av en 4,5 minutters gradient av 0,1% trifluoreddiksyre/acetonitril (ACN) i 0,1% vann ved en strømningsrate på 0,5 ml/minutt. Preparativ RP-HPLC ble utført ved å anvende trifluoreddiksyre (TFA) bufrede ACN/vanngradienter på et Varian ProStar-system ved å anvende 2,5- eller 10 cm x 25 cm, 8 um Qg Rainin Dynamax-kolonner og strømningsrater på hhv. 10- eller 50 ml/minutt.

Fremstilling av mellomprodukter

Mellomprodukt 1

2-karboksyetyl-3,5-dimetyl-lH-pyrrol-4-karboksylsyre

3,5-dimetyl-2,4-pyrroldikarboksylsyre, dietylester (200 g, 836 mmol) ble plassert i et 1 liters begerglass og behandlet med 400 ml konsentrert svovelsyre (H2SO4). Blandingen ble omrørt, oppvarmet til 45°C ved hjelp av en varmepistol og deretter holdt ved 36-42°C i 25 minutter. Reaksjonsblandingen ble helt i 3 liter knust is og omrørt i 30 minutter. Det gule faste stoffet ble utvunnet ved filtrering og vasket med 200 ml vann. Det faste stoffet ble overført til en 4 liters Erlenmeyer-kolbe og behandlet med 2 liter IN natriumhydroksidoppløsning (NaOH) etterfulgt av 100 ml 10N NaOH. Den basiske blandingen ble filtrert, og det gule faste stoffet ble avhendet. Filtratet ble surgjort med H2SO4. Det resulterende faste stoffet ble utvunnet ved filtrering under sug og vasket med 2 x 500 ml vann. Etter avsugningstørking ble materialet overført til en 6 liter Erlenmeyer-kolbe og omsatt kort i 4 liter aceton. Etter henstand over natten ved romtem-

peratur (RT), ble det faste stoffet samlet ved filtrering og tørket i en vakuumtørker for å gi 139 g, 659 mmol, 79% av forbindelsen i overskriften.

'H NMR (DMSO-d6) 8 4,22 (q, 2H), 2,44 (s, 3H), 2,38 (s, 3H), 1,27 (t, 3H).

Mellomprodukt 2

2-karboksyetyl-3,5-dimetyl-lH-pyrrol

Mellomprodukt 1 (137 g, 650 mmol) ble plassert i en 500 ml Erlenmeyer-kolbe og behandlet med etanolamin (80 g, 1,3 mol). Blandingen ble deretter oppvarmet til 220°C i en varmemantel, idet det ble fremstilt en brun oppløsning i løpet av ca. 30 minutter, ved hvilket tidspunkt gassutvikling i det vesentlige hadde opphørt. Reaksjonen ble oppvarmet i ytterligere 30 minutter og deretter helt i 2 liter isvann. Det rå produktet ble samlet ved avsugningsfiltrering og deretter omsatt i 700 ml 95% etanol (EtOH). Blandingen ble filtrert i varm tilstand og deretter ble filtratet langsomt avkjølt til RT og deretter til -20°C. De resulterende krystallene ble samlet ved sugefiltrering og tørket i en vakuum-dessikator for å gi 75,6 g, 453 mmol, 70% av forbindelsen i overskriften.

<*>H NMR (DMSO-d6) 8 5,72 (s, 1H), 4,17 (q, 2H), 2,18 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 1,25 (t, 3H). ;Mellomprodukt 3 ;2-karboksetyI-3,5-dimetyl-lH-pyrrol-4-karboksaldehyd ;Mellomprodukt 2 (75,6 g, 453 mmol) ble plassert i en tørr 1 liters, 3-halset rundbunnet kolbe. Det faste stoffet ble behandlet med vannfritt N,N-dimetylformamid (DMF, 43,8 ml, 566 mmol). Kolben ble ristet for å fordele DMF gjennom det faste stoffet. Kolben ble avkjølt i et isbad og til blandingen ble det tilsatt fosforoksyklorid (POCU, 52,7 ml, 566 mmol) i løpet av 30 minutter ved hjelp av en tilsatstrakt. Kolben ble ristet for jevnt å fordele reagensene. Kolben ble deretter neddykket i et 100°C oljebad og oppvarmet med magnetisk omrøring i 6 timer. Den resulterende dyprøde blandingen ble avkjølt i et isvannbad og behandlet med 200 ml isvann, hvilket resulterte i en kraftig, eksoterm re-aksjon. Etter tilsetning av 200 ml ytterligere isvann, ble blandingen justert til pH 5 med en mettet oppløsning av natriumacetat (NaOAc). Råproduktet ble isolert ved avsugningsfiltrering og rekrystallisert fra 700 ml varm 1:1 EtOH:vann for å gi 65,8 g, 337 mmol, 74% av forbindelsen i overskriften som mørke nåler. ;'H NMR (DMSO-de) 5 9,88 (s, 1H), 4,23 (q, 2H), 2,46 (s, 3H), 2,43 (s, 3H), 1,28 (t, 3H). ;Mellomprodukt 4 ;3-(5-karboksyetyl-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-yl)propensyre ;Mellomprodukt 3 (65,8 g, 337 mmol) og malonsyre (39,0 g, 375 mmol) ble kombinert i en 500 ml, 1-halset rundbunnet kolbe, behandlet med 350 ml absolutt EtOH, og bragt til tilbakeløp i 30 minutter. Til den resulterende mørke oppløsningen ble det tilsatt anilin (34,0 ml, 375 mmol) og blandingen ble oppvarmet til tilbakeløp i ytterligere 5 timer. Oppløsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk og resten ble behandlet med 400 ml 2,5M saltsyre (HC1), oppvarmet og deretter tillatt å avkjøles til RT. Det purpurfargede faste stoffet ble samlet ved avsugningsfiltrering, overført til et 1 liters begerglass og behandlet med 250 ml 2N NaOH under omrøring. Den resulterende oppslemmingen ble filtrert og de faste stoffene ble vasket med 100 ml fortynnet base. Den purpurfargede resten ble kastet. Det røde filtratet ble avkjølt i et isbad, omrørt og surgjort med ca. 70 ml 6M HC1. Den resulterende tykke, hvite pastaen ble samlet ved sugefiltrering, vasket med vann og tørket i luft for å gi forbindelsen i overskriften. ;'H NMR (DMSO-de) 8 7,52 (d, 1H), 5,93 (d, 1H), 4,22 (q, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 1,28 (t, 3H). ;Mellomprodukt 5 ;3-(2-karboksyetyl-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-yl)propionsyre ;Mellomprodukt 4 ble oppløst i 220 ml 2N NaOH og kombinert med 3,5 g 10% palladi-um på aktivert karbon. Blandingen ble hydrogenert ved 50 psi (344,7 kPa) i 28 timer, ;deretter avsugningsfiltrert over celitt. Celitten ble vasket med 50 ml vann. En porsjon av filtratet ble inndampet til tørrhet og fullstendig reduksjon til forbindelsen i overskriften ble bekreftet ved <!>H NMR (D20) 8 4,07 (q, 2H), 2,46 (t, 2H), 2,06 (s, 3H), 2,05 (t, 2H), 2,00 (s, 3H), 1,13 (t, 3H). Det gjenværende filtratet ble bragt frem til neste trinn uten ytterligere manipulering. ;Mellomprodukt 6 ;3-(2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-yl)propionsyre ;Filtratet fra det forutgående trinnet inneholdende mellomprodukt 6 ble behandlet med 30 ml 10N NaOH og oppvarmet ved tilbakeløp i 20 timer. En porsjon av reaksjonsblandingen ble surgjort og inndampet til tørrhet. Fullstendig hydrolyse/dekarboksylering til forbindelsen i overskriften ble bekreftet ved <*>H NMR (DMSO-d6) 8 9,86 (s, 1H), 6,18 (2, 2H), 2,42 (m, 2H), 2,03 (s, 3H), 1,93 (m, 2H), 1,87 (s, 3H). Reaksjonsblandingen ble bragt videre til det neste trinnet uten ytterligere manipulering.

Mellomprodukt 7

Metyl 3-(2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-yl)propionat

Oppløsningen av mellomprodukt 6 fra det forutgående trinnet ble konsentrert ved 60°C under redusert trykk til ca. 200 ml, avkjølt i et isvannbad og surgjort til pH 2 ved anvendelse av ca. 50 ml 50% H2SO4. Den resulterende blandingen ble filtrert gjennom en glassfritte. Filtratet ble ekstrahert med 2x100 ml dietyleter (Et20) og resten ble ekstrahert med 3 x 100 ml Et20. De kombinerte røde organiske ekstraktene ble vasket med 2 x 100 ml vann, overført til en 2 liters Erlenmeyer-kolbe og under omrøring behandlet med 680 ml av en eterformig oppløsning av diazometan. Etter omrøring i 30 minutter ved RT ble overskudd diazometan stoppet med iseddiksyre (HOAc). Reaksjonsblandingen ble ekstrahert med 2 x 200 ml mettet vandig natriumbikarbonat (NaHCOa), tør-ket og vannfritt magnesiumsulfat (MgS04), filtrert og inndampet for å gi 52,6 g rå, rød olje. Denne ble renset ved "bulb-to-bulb" destillasjon ved 145°C og 0,2 mm Hg trykk for å gi forbindelsen i overskriften (38,4 g, 211 mmol, 63% totalt fra mellomprodukt 3). <!>H NMR (DMSO-d6) 8 9,92 (s, 1H), 6,22 (s, 1H), 3,54 (s, 3H), 2,52 (t, 2H), 2,32 (t, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,87 (s, 3H).

Mellomprodukt 8

3-(5-formyl-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-yl)propionsyre

Til en tørr 250 ml 3-halset, rundbunnet kolbe ble det tilsatt vannfritt DMF (13,8 ml, 189 mmol). Dette ble avkjølt i et isbad og behandlet med POCI3 (15,0 ml, 160 mmol) dråpevis i løpet av 10 minutter. Blandingen ble fortynnet med 120 ml vannfritt 1,2-dikloretan (DCE) og oppvarmet til RT, hvilket ga en blek oransje oppløsning. Blandingen ble av-kjølt til -10°C i et is-saltvannsbad, ved hvilket punkt en utfelling ble dannet. Mellomprodukt 7 (14,5 g, 80,0 mmol) oppløst i 30 ml DCE ble tilsatt dråpevis i løpet av 10 minutter. Reaksjonsblandingen ble fjernet fra kjølebadet, omrørt ved RT i 10 minutter og deretter inndampet under redusert trykk ved 30°C. Resten ble overført til 2 liters begerglass ved anvendelse av ca. 100 ml metanol (MeOH), behandlet med 800 ml 2N NaOH, oppvarmet til 90°C og deretter tillatt å avkjøles til RT. Den oransje oppløsning-en ble ekstrahert med 2 x 200 ml Et20, oppvarmet til 50°C, behandlet med aktivert tre-kull, avkjølt til RT og filtrert gjennom en pute av celitt. Filtratet ble avkjølt i et isvannbad og surgjort til pH 3 ved anvendelse av ca. 120 ml 6N HC1. Det resulterende faste stoffet ble samlet ved avsugningsifltrering, vasket med 3 x 40 ml vann og tørket i luft for å gi 11,2 g, 57,0 mmol, 72% av forbindelsen i overskriften som et brunaktig pulver.

'H NMR (DMSO-d6) 8 9,40 (s, 1H), 2,52 (t, 2H), 2,29 (t, 2H), 2,19 (s, 3H), 2,14 (s, 3H).

Mellomprodukt 9

3- [2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydroindol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]propionsyre

Mellomprodukt 8 (11 g, 57 mmol) og oksindol (7,6 g, 57 mmol) ble kombinert i en 200 ml rundbunnet kolbe, oppslemmet i 150 ml EtOH, behandlet med piperidin (8,5 ml, 86 mmol) og oppvarmet til tilbakeløp i 4 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til RT, behandlet med HO Ac (14,4 ml, 250 mmol), kort returnert til tilbakeløp, igjen avkjølt og filtrert. Det oransje faste stoffet ble samlet ved avsugningsifltrering, vasket med 100 ml varm 1:1 HOAc:EtOH etterfulgt av 100 ml varm EtOH, og tørket i luft for å gi 15 g, 50 mmol, 87% av forbindelsen i overskriften.

<l>H NMR (DMSO-de) 8 10,8 (s, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,07 (t, 1H), 6,95 (t, 1H), 6,96 (d, 1H), 2,63 (t, 2H), 2,33 (t, 2H), 2,28 (s, 3H), 2,25 (s, 3H).

Mellomprodukt 10

4- {3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydroindol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]-propionyl}-piperazin-l-karboksylsyre tert-butylester

Mellomprodukt 9 (6,2 g, 20 mmol), mono- Boc piperazin (4,1 g, 22 mmol) og 1-hydroksy-7-azabenzotriazol (HOAT, 3,0 g, 22 mmol) ble oppløst i 50 ml vannfri DMF og behandlet med N,N-diisopropyletylamin (DIEA, 3,5 ml, 20 mmol) etterfulgt av benzotriazol-l-yl-oksy-trispyrrolidino-fosfoniumheksafluorfosfat (PyBOP, 11,4 g, 22 mmol). Den resulterende blandingen ble omrørt over natten ved RT, idet det ble avsatt et gult fast stoff. Det faste stoffet ble samlet ved avsugningsfiltrering, vasket med DMF og ACN og tørket for å gi 1,3 g av mellomprodukt 10. Filtratet ble inndampet og fraksjonert ved kromatografi på 700 cm3 silikagel ved anvendelse av 5% MeOH i diklorme-tan (DCM) elueringsmiddel. Produktholdige fraksjoner ble kombinert og inndampet, deretter nedbrutt i 100 ml ACN. Etter avkjøling til RT, ble det fine gule faste stoffet samlet ved avsugningsfiltrering, vasket med 2 x 20 ml ACN og tørket for å gi ytterligere 5,7 g av forbindelsen i overskriften. Samlet ble 7,0 g, 15 mmol, 75% produkt oppnådd. <!>H NMR (DMSO-da) 8 10,7 (s, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,07 (t, 1H), 6,95 (t, 1H), 6,84 (d, 1H), 3,41-3,19 (m, 8H), 2,62 (t, 2H), 2,43 (t, 2H), 2,28 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 1,35 (s, 9H).

IS-MS, beregnet m/z for C27H34N4O4 [M]<+>: 478; observert 478,2.

Eksempel 1

3-[3,5-dimetyl-4-(3-okso-3-piperazin-l-yl-propyl)-lH-pyrrol-2-ylmetylen]-l^-dihydroindol-2-on, trifluoracetat

Mellomprodukt 10 (4,78 g, 10,0 mmol) ble oppslemmet i 20 ml DCM og behandlet ved romtemperatur med 20 ml TF A. Etter 30 minutter ble reaksjonsblandingen inndampet under redusert trykk, deretter oppløst i 20 ml kloroform og gjeninndampet to ganger. Resten ble gjenoppløst i 20 ml kloroform og tilsatt dråpevis til 200 ml Et20. Det resulterende gule faste stoffet ble samlet ved avsugningsfiltrering, vasket med 3 x 20 ml Et20 og tørket for å gi 4,8 g, 9,7 mmol, 97% av forbindelsen i overskriften.

'H NMR (DMSO-d6) 8 10,8 (s, 1H), 8,74 (br s, 2H), 7,71 (d, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,07 (t, 1H), 6,96 (t, 1H), 6,85 (d, 1H), 3,62 (br s, 4H), 3,02 (br s, 4H), 2,62 (t, 2H), 2,5 (t, 2H), 2,28 (s, 3H), 2,25 (s, 3H).

IS-MS, beregnet m/z for CÆeN^ [M+H<+>]<+>: 379,2; observert 379,0.

Eksempel la (Alternativ fremstilling)

3-[3,5-dimetyl-4-(3-okso-3-piperazin-l-yl-propyl)-lH-pyrrol-2-ylmetylen]-13-dihydroindol-2-on, trifluoracetat

Mellomprodukt 9 (0,31 g, 1,0 mmol) ble oppløst i 3 ml vannfritt DMF og behandlet med HOAT (0,14 g, 1,0 mmol) etterfulgt av 0-(7-azabenzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'-tetrametyluroniumheksafluorfosfat (HATU, 0,38 g, 1,0 mmol). Etter omrøring i 10 minutter ved RT ble reaksjonsblandingen tilsatt til en oppløsning av piperazin (0,17 g, 2,0 mmol) og omrørt i 2 dager. Reaksjonsblandingen ble deretter fraksjonert ved preparativ reversfase HPLC. De egnede fraksjonene ble kombinert og lyofilisert for å gi 0,16 g, 0,34 mmol, 34% av forbindelsen i overskriften.

Eksempel 2

3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]-N-metyl-N-(2-metylaminoetyl)-propionamid, trifluoracetat

Mellomprodukt 10 (0,062 g, 0,20 mmol) ble oppløst i 0,67 ml vannfritt DMF og behandlet med HOAT (0,030 g, 0,22 mmol) og HATU (0,084 g, 0,22 mmol). Etter omrø-ring ved RT i 15 minutter, ble den aktiverte syren tilsatt til en flaske innholdende en oppløsning av N,N'-dimetyletylendiamin (0,043 ml, 0,40 mmol) i 0,50 ml vannfritt DMF. Reaksjonsblandingen ble omrørt over natten på en orbiterende rister, deretter fortynnet med 0,50 ml 30% vandig TF A, filtrert og fraksjonert ved preparativ reversfase HPLC. De egnede fraksjonene ble kombinert og lyofilisert for å gi 0,005 g, 0,010 mmol, 5% av forbindelsen i overskriften.

IS-MS, beregnet m/z for C22H28N4O2 [M+H<+>]<+>: 381,2; observert 381,0.

Eksempler 3 til 24

Ved en fremgangsmåte tilsvarende den beskrevet i eksempel la og 2, ga kobling av mellomprodukt 10 med andre aminert forbindelsene ifølge eksempler 3 til 24.

Eksempel 3

3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]-N-metyl-N-(3-metylaminopropyl)-propionamid, trifluoracetat IS-MS, beregn, m/z for C23H30N4O2 [M+H<+>]<+>: 395,2; observ. 395,0.

Eksempel 4

3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]-N-metyl-N-(4-metylaminobutyl)-propionamid, trifluoracetat IS-MS, beregn, m/z for C24H32N4O2 [M+H<+>]<+>: 409,3; observ. 409,0.

Eksempel 5

3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]-N-metyl-N-(S-metylaminopentyl)-propionamid, trifluoracetat IS-MS, beregn, m/z for C25H34N402 [M+H<+>]<+>: 423,3; observ. 423,2.

Eksempel 6

3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]-N-metyl-N-(6-metylaminoheksyl)-propionamid, trifluoracetat IS-MS, beregn, m/z for C26H36N4O2 [M+H<+>]<+>: 437,3; observ. 437,2.

Eksempel 7

3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]-N-metyl-N-(7-metylaminoheptyl)-propionamid, trifluoracetat IS-MS, beregn, m/z for C27H38N4O2 [M+H<+>]<+>: 451,3; observ. 451,2.

Eksempel 8

3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]-N-metyl-N-(8-metylaminooktyl)-propionamid, trifluoracetat IS-MS, beregn, m/z for C28H40N4O2 [M+H<+>]<+>: 465,3; observ. 465,2.

Eksempel 9

3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]-N-metyl-N-(9-metylaminononyl)-propionamid, trifluoracetat IS-MS, beregn, m/z for C29H42N4O2 [M+H<+>]<+>: 479,3; observ. 479,2.

Eksempel 10

3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]-N-metyl-N-(10-metylaminodecyl)-propionamid, trifluoracetat IS-MS, beregn, m/z for C30H44N4O2 [M+H<+>]<+>: 493,4; observ. 492,8.

Eksempel 11

3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yI]-N-meryI-N-(12-metylaminododecyl)-propionamid, trifluoracetat IS-MS, beregn, m/z for C32H48N4O2 [M+H<+>]<+>: 521,4; observ. 520,8.

Eksempel 12

3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]-N-metyl-N-(4-metylaminobut-2-enyl)-propionamid, trifluoracetat IS-MS, beregn, m/z for C24H30N4O2 [M+H<+>]<+>: 407,2; observ. 407,0.

Eksempel 13

3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]-N-metyl-N-(8-metylamino-3,6-dioksaoktyl)-propionamid, trifluoracetat IS-MS, beregn, m/z for C26H36N4O4 [M+H<+>]<+>: 469,3; observ. 469,0.

Eksempel 14

3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]-N-metyl-N-(ll-metylamino-3,6,9-trioksaundecyl)propionamid, trifluoracetat IS-MS, beregn, m/z for C28H4oN405[M+H<+>]<+>: 513,3; observ. 512,8.

Eksempel 15

3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l»2-dihydro-indol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]-N-metyl-N-(3-metylaminometylfenyl-metyl)propionamid, trifluoracetat IS-MS, beregn, m/z for C28H32N4O2 [M+H<+>]<+>: 457,3; observ. 457,0.

Eksempel 16

3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l^-dihydro-indol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]-N-metyl-N-(4-metylaminometylfenyl-metyl)propionamid, trifluoracetat IS-MS, beregn, m/z for C28H32N4O2 [M+H<+>]<+>: 457,3; observ. 457,2.

Eksempel 17

3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]-N-metyl-N-(3-metylaminometylcykloheksyl-metyl)propionamid, trifluoracetat IS-MS, beregn, m/z for C28H38N402 [M+H<+>]<+>: 463,3; observ. 463,0.

Eksempel 18

3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]-N-metyl-N-[2'-metylaminometylbifen-2-ylmetyl]propionamid, trifluoracetat IS-MS, beregn, m/z for C34H36N402 [M+H<+>]<+>: 533,3; observ. 533,2.

Eksempel 19

3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydro-indol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]-N-metyl-N-(3-[4-(3-metylaminopropyl)-piperazin-l-yl]propyl)propionamid, trifluoracetat

IS-MS, beregn, m/z for C30H44N6O2 [M+Ff1"]4": 521,4; observ. 521,2.

Eksempel 20

3-[3,5-dimetyl-4-(3-okso-3-piperidin-l-ylpropyl)-lH-pyrrol-2-ylmetylen]-l,3-dihydroindol-2-on, trifluoracetat

IS-MS, beregn, m/z for C23H27N3O2 [M+H<+>]<+>: 378,2; observ. 378,0.

Eksempel 21

3-[3,5-dimetyl-4-[3-okso-3-(piperidin-4-ylpropyl)piperidin-l-ylpropyl]-lH-pyrrol-2- y lmety len] -1,3-dihy droindol-2-on, trifluoracetat

IS-MS, beregn, m/z for C3iH42N402 [M+H<+>]<+>: 503,3; observ. 503,2.

Eksempel 22

3- [3,5-dimetyl-4-[3-okso-3-(4-etyl)piperazin-l-ylpropyl]-lH-pyrrol-2-ylmetylen]-13-dihydroindol-2-on, trifluoracetat

IS-MS, beregn, m/z for C24H30N4O2 [M+H<+>]<+>: 407,2; observ. 407,0.

Eksempel 23

3-[3,5-dimetyl-4-(3-okso-3-homopiperazin-l-ylpropyl)-lH-pyrrol-2-ylmetylen]-13-dihydroindol-2-on, trifluoracetat

IS-MS, beregn, m/z for C23H28N4O2 [M+H<+>]<+>: 393,2; observ. 393,0.

Eksempel 24

3-[3,5-dimetyl-4-[3-okso-3-(l,4,10-trioksa-7,13-diazacyklopentadekan-l-yl)-lH-pyrrol-2-ylmetylen]-13-dihydroindol-2-on, trifluoracetat

IS-MS, beregn, m/z for C28H38N4O5 [M+H<+>]<+>: 511,3; observ. 511,0.

Ved å følge fremgangsmåten fra eksempler la og 2, fremstilles også følgende forbindelser: 5-brom-3 - [3,5-dimetyl-4- [3 -okso-3 -(4-prop-2-yl)piperazin-1 -ylpropyl] -1 H-pyrrol-2-ylmetylen]-l,3-dihydroindol-2-on, trifluoracetat og

5-brom-3-[3,5-dimetyl-4-(3-okso-3-[4-prop-2-yl]homopiperazin-l-ylpropyl)-lH-pyrrol-2-ylmetylen]-l ,3-dihydroindol-2-on, trifluoracetat.

Biologiske analyser

Forsøksforbindelsenes evne til å inhibere reseptortyrosinkinaser demonstreres i følgen-de analyser.

Forkortelser

HEPES 4-(2-hydroksyetyl)-1 -piperazinetansulfonsyre

EDTA Etylendiamintetraeddiksyre

PDGF Plateavledet vekstfaktor

PDGFR Plateavledet vekstfaktorreseptor

VEGF Vaskulær endotelisk vekstfaktor

VEGFR Vaskulær endotelisk vekstfaktorreseptor

HEK-celler Humane embryoniske nyreceller

Flt-3 fms-avledet tyrosinkinase 3

BSA Bovint serumalbumin

AML Akutt myeloid leukemi

ITD Intern tandemduplisering

MTT 3-(4,5-dimetyltiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazoliumbromid

HUVEC Human navlesnorveneepiteliske celler

Ca2+-frigivelsesanalyse (FLIPR-analyse)

Bindingen av vekstfaktorer til deres respektive reseptorer fører til autofosforyleringen av reseptoren. Dette er det første trinnet i en signalkaskade som resulterer i frigivelsen av Ca<2+> fra indre lågere og influks av ekstracellulært Ca<2+>.

Økningen av intracellulært Ca<2+> kvantifiseres ved fylling av celler med et fluorescerende fargestoff før stimulering med vekstfaktoren og ved etterfølgende bedømmelse av det fluorescerende signalet i en fluorometrisk billedplateleser (FLIPR). En kinaseinhibitor som kan penetrere cellemembranen inhiberer reseptorautofosforylering, følgelig reduse-res eller fjernes Ca<2+->frigivelsen.

For å bestemme IC50 av forsøksforbindelsene mot VEGFR i FLIPR-analysen, ble det anvendt HUVECer (Walkersville, MD). For bestemmelsen av IC5o'er mot PDGFR, ble det anvendt en HEK-cellelinje som uttrykker det humane PDGFR. 40-50000 celler pr. brønn ble utplassert i en 96 brønns plate. Cellene ble inkubert i 3-4 timer for å adhere til platen. Deretter ble cellene vasket to ganger i FLIPR-buffer (1 x HBS, 2 mM CaCl, 10 mM HEPES, pH 7,4,2,5mM Probenecid, 0,1% BSA). Etter den andre vaskingen ble 50 fil av det Ca<2+->sensitive fargestoffet FLUO-3 (FLUO-3 (AM) TEF Labs, 50 jig i 10 ml FLIPR-buffer) tilsatt til den gjenværende 50 ul bufferen i hver brønn. Etter belegging av cellene i 1 time, ble cellene vasket to ganger og forsøksforbindelsene ble tilsatt i 50 ul som en 2x oppløsning til 50 ul av buffer i hver brønn. Cellene ble inkubert med forbindelsene i 30 minutter og deretter ble det tilsatt VEGR (40 ng/ml, BioSource International) for VEGFR eller PDGF (40 ng/ml, BioSource International) for PDGFR. Endring-en i fluorescensintensitet ble målt i en fluorometrisk billedplatelester (FLIPR) (Molecular Devices).

Proliferasjon og levedyktighetsanalyse (MTT)

Inhiberingen av mutant Flt-3 ITD ventes å påvirke proliferasjonen og levedyktigheten av AML-celler med denne mutasjonen. For å bedømme aktiviteten av forsøksforbindel-ser, ble det utført en MTT-proliferasjons- og levedyktighetsanalyse (Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, IN) med en AML-cellelinje kalt MV4-11. MV4-11-celler uttrykker Flt-3 ITD. 50 000 celler pr. brønn i 100 ul medie ble plassert i en 96 brønns plate og ble inkubert med økende konsentrasjoner av forbindelse i 48 timer. Etter denne inkuberingsperioden, ble 10 ul av MTT-merkereaksjonen tilsatt i 4 timer. MTT-merkereagensen ble metabolisert ved hjelp av levedyktige celler til formazan, et uopplø-selig blått salt. For å oppløseliggjøre formazansaltet, ble 100 ul av solubiliserings-oppløsningen tilsatt. Platen ble inkubert ved 37°C i 24 timer og deretter ble den optiske densiteten av brønnene bestemt spektrofotometrisk ved 550 nm. Den optiske densiteten av oppløsningene i brønnene gjenspeiler effekten forbindelsen har på levedyktigheten av cellene.

Immunoutfelling/W estern (IPAVestern)

Bindingen av vekstfaktorer til reseptortyrosinkinase som Flt-3 eller PDGFR fører til autofosforyleringen av reseptorene. Inhiberingen av autofosforylering er formålet som ettersøkes med kinaseinhibitorer. Ved å utføre et IP/Western-forsøk kan nivået av reseptorautofosforylering bestemmes direkte.

5xl0<6> celler (HEK PDGFR-cellelinje for PDGFR, HEK c-Kit for c-Kit, og THP-1, HL-60 eller MV4-11 for Flt-3) ble inkubert i 30 minutter i 2,5 ml kulturmedium med en definert konsentrasjon av forsøksforbindelse. For å stimulere reseptorautofosforylering, ble det tilsatt vekstfaktor (hhv. PDGF, SCF, eller Flt-3 ligand, 50 ng/ml, Biosource International, Camarillo, CA) i 5 minutter. Cellene ble deretter sentrifugert og lysert i 500 ul lyseringsbuffer (50 mM Tris pH 7,4,1% NP-40, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM Na3V04). Lysatet sentrifugeres og 10 ul av antistoff mot den respektive reseptoren ble tilsatt til supernatanten (anti-PDGFR (P20), anti-c-Kit (C-19) og anti-Flt-3 (Sl8), Santa Cruz Biotechnology, Inc.). hnmunokompleksene ble isolert med protein G-perler (Sigma, St. Louis, MO) og P AGE ble utført. Et Western blot ble utført ved anvendelse av et antistoff mot fosfotyrosinrester (4G10, Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY). Inten-siteten av fosfotyrosinsignalet som tilsvarer forskjellige legemiddelkonsentrasjoner tilveiebringer en måte for å bestemme IC50 av forsøksforbindelsen for inhiberingen av autofosforylering.

Generelt er forbindelsene eksemplifisert heri funnet å vise en IC50 på mindre enn 10 uM i en eller flere av de ovenfor angitte analysene.

Farmakokinetikkk

For å vurdere farmakokinetikk, ble Sprague Dawley hannrotter (CD-stamme, Charles River Laboratories, Wilmington, MA) dosert med forsøksforbindelser ved intravenøs (IV) administrering, ved 1 mg/kg konsentrasjon, og oral (PO) administrering ved 10 mg/kg konsentrasjon. Blodprøver ble samlet fra dyr som var fordoserte, og ved 2, 5,15 og 30 minutter, og ved 1, 2,4, 6, 8 og 24 timer etter dosering. Plasmakonsentrasjoner ble bestemt ved væskekromatografi-massespektrometeri (LC-MS) (MDS SCIEX API 4000, Applied Biosystems, Foster City, CA). Standard farmakokinetiske parametere ble bedømt ved ikke-kompartementelle metoder ved anvendelse av WinNonlin versjon 3.2 softwarepakken (Pharsight, Mountain View, CA). Oral biotilgjengelighet ble bestemt som forholdet av areal under kurven (AUC) i grafen for plasmakonsentrasjon som funk-sjon av tid for pH-administrering til den tilsvarende mengden for IV-administrering. Den orale biotilgjengeligheten i rotter, f.eks. av 3-[3,5-dimetyl-4-(3-okso-3-piperazin-l-ylpropyl)-lH-pyrrol-2-ylmetylen]-l,3-dihydroindol-2-on, bestemt ved denne metoden, var 50,6%.

Komparative analyseresultater

Tabell 1 angir analyseresultater for to forbindelser ifølge oppfinnelsen, forbindelsen ifølge eksempel 1, 3-[3,5-dimetyl-4-(3-okso-3-piperazin-l-yl-propyl)-lH-pyrrol-2-yl-metylen]-l,3-dihydroindol-2-on, trifluoracetat, og forbindelsen ifølge eksempel 22, 3-[3,5-dimetyl-4-[3-okso-3-(4-etyl)piperazin-l-ylpropyl]-lH-pyrrol-2-ylmetylen]-l,3-dihydroindol-2-on, trifluoracetat. Som sammenligning angir tabell 1 også analyseresultater for to tidligere kjente forbindelser, 3-[2,4-dimetyl-5-(2-okso-l,2-dihydroindol-3-ylidenmetyl)-lH-pyrrol-3-yl]propionsyre, identifisert som SU6668, og 3-(2,3-dimetyl-pyrrol-5-yl)metylen]-2-indolinon, identifisert som SU5416. Fremstillingen av førsnevn-te tidligere kjente forbindelse er beskrevet ovenfor som mellomprodukt 9. Sistnevnte forbindelse ble fremstilt som beskrevet i Sun et al., J. Med. Chem. 1998, bind 41, nr. 14, s. 2588-2603. Evnen av forsøksforbindelsene til å inhibere mutant Flt-3 ITD ble testet i cytotoksisitetsanalysen. Inhibering av VEGFR- og PDGFR-kinasene ble testet i Ca FLIPR-analysen, bortsett fra som angitt. Som vist nedenfor, viste begge forbindelsene ifølge eksempler 1 og 22, submikromolar aktivitet i Flt-3, VEGFR og PDGRF-analysene.

Claims

1. Forbindelse, karakterisert ved formel (I) hvori: (i) R betyr et hydrogenatom eller en (l-4C)alkylgruppe; og R betyr en gruppe av formelen -A,-NR<5>R<6> hvori hver av R<5> og R<6> uavhengig representerer et hydrogenatom eller en (l-4C)alkylgruppe og A<1> betyr (CH2)m, (CH2)„-A<2->(CH2)p eller (CH2CH20)qCH2CH2, hvori m er et heltall på fra 2 til 10, hver av n og p er et heltall på fra 1 til 6, A2 er CH=CH, fenylen, bifenylen, cykloheksylen eller piperazinylen og q er 1,2 eller 3; (ii) R<1> og R2 betyr sammen -A3NR<7->A<4-> hvori hver av A3 og A<4> uavhengig av hverandre betyr (CH2)r eller (CH2CH20)sCH2CH2 hvori r er et heltall på fra 2 til 6, s er 1,2 eller 3, og R betyr et hydrogenatom eller en (l-4C)alkylgruppe; (iii) R<1> og R<2> sammen med nitrogenatomet som de er knyttet til betyr en piperidinylgruppe, hvilken piperidinylgruppe bærer en substituent av formel -A c -R o ved 4-stillingen, hvori A e representerer (l-4C)alkylen og R o betyr piperidin-4-yl; eller (iv) R og R sammen med nitrogenatomet som de er knyttet til betyr en pyrrolidinyl, piperidinyl eller morfolinogruppe; og R<3> og R<4> betyr hver et hydrogenatom, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

2. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at (i) R<1> betyr en metylgruppe og R<2> betyr en gruppe av formelen -A'-NR5R6 hvori R<5> betyr et hydrogenatom, R<6> betyr en metylgruppe og A<1> betyr (CH2)m, hvori m er 2, 3,4, 5, 6, 7, 8,9 eller 10, (CH2)n-A<2->(CH2)p hvori hver av n og p er 1, og A2 er CH=CH, fenyl-1,3-en, fenyl-l,4-en, bifenyl-2,2'-en eller cykloheks-1,3-ylen; (CH2)n-A fy-(CH2)P hvori n og p hver er 2 og A<2> er piperazin-l,4-ylen; eller (CH2CH20)qCH2CH2 hvori q er 2 eller 3; (ii) R1 og R<2> betyr sammen -(CH2)2-NH-(CH2)2-, -(CH2)2-N(CH3)-(CH2)2-, -(CH2)2-N(CH2CH3)-(CH2)2-, -(CH2)2-NH-(CH2)3- eller -(CH2CH20)2CH2CH2-NH-(CH2CH20)CH2CH2-; eller (iii) R 1 og R 9 betyr sammen med nitrogenatomet som de er festet til en piperidinylgruppe, hvilken piperidinylgruppe bærer en substituent av formel -A c -R o ved 4-stillingen, hvori A<5> betyr propylen og R<8> betyr piperidin-4-yl.

3. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at (i) R<1> betyr en metylgruppe og R<2> betyr en gruppe av formelen -A^NHCFk hvori A<1 >betyr (CH2)m, CH2CH=CHCH2, CH2-fenylen-CH2 eller CH2-cykloheksylen-CH2, hvori m er et heltall på fra 2 til 8; eller (ii) R1 og R<2> betyr sammen -(CH2)2-NH-(CH2)2-, -(CH2)2-N(CH3)-(CH2)2-, -(CH2)2-N(CH2CH3)-(CH2)2- eller -(CH2)2-NH-(CH2)3-; og R og R er uavhengig av hverandre hydrogen.

4. Forbindelse ifølge krav 3, karakterisert ved at (i) R<1> betyr en metylgruppe og R<2> betyr en gruppe av formelen -A^NHCHs hvori A<1 >betyr (CH2)m, CH2CH=CHCH2, eller CH2-(l,4-fenylen)-CH2, hvori m er 2 eller 3; eller (ii) R<1> og R<2> betyr sammen -(CH2)2-NH-(CH2)2-, -(CH2)2-N(CH3)-(CH2)2-, -(CH2)2-N(CH2CH3)-(CH2)2- eller -(CH2)2-NH-(CH2)3.

5. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den er valgt fra: 3-[3,5-dimetyl-4-(3-okso-3-piperazin-l-ylpropyl)-lH-pyrrol-2-ylmetylen]-l,3-dihydroindol-2-on;

3 - [3,5-dimetyl-4-[3 -okso-3 -(4-etyl)piperazin-1 -ylpropyl] -1 H-pyrrol-2-ylmetylen] -1,3-dihydroindol-2-on; 3-[3,5-dimetyl-4-(3-okso-3-homopiperazin-1 -ylpropyl)-1 H-pyrrol-2-ylmetylen]-1,3-dihydroindol-2-on; og farmasøytisk akseptable salter derav.

6. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den er en forbindelse av formel (Ia): hvor R er hydrogen, metyl eller etyl; eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

7. Forbindelse ifølge krav 6, karakterisert ved at den er valgt fra:

3 - [3,5-dimetyl-4-(3 -okso-3 -piperazin-1 -ylpropyl)-1 H-pyrrol-2-ylmetylen]-1,3 - dihydroindol-2-on;

3 -[3,5-dimetyl-4-[3 -okso-3 -(4-etyl)piperazin-1 -ylpropyl] -1 H-pyrrol-2-ylmetylen] -1,3-dihydroindol-2-on; og farmasøytisk akseptable salter derav.

8. Forbindelse ifølge krav 7, karakterisert ved at den er 3-[3,5-dimetyl-4-(3-okso-3-piperazin-l-ylpropyl)-lH-pyrrol-2-ylmetylen]-l,3-dihydroindol-2-on, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

9. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge hvilke som helst av krav 1 til 8, karakterisert ved at den omfatter: (a) omsetning av en forbindelse av formel (II) eller et reaktivt derivat derav, med en forbindelse av formel (III) eller et salt derav, hvori R<1>, R<2>, R<3> og R<4> er som definert ovenfor, eller (b) for en forbindelse av formel (I), hvori R eller R betyr et hydrogenatom, avbeskytt-else av en forbindelse av formel (IV) hvori R<l>a og R2<a> er som definert i krav 1 for R<1> og R<2>, bortsett fra at R<5> eller R<7> er erstat-tet med en gruppe hhv. R<5a> eller R<7a>, hvori R<5a> og R7a hver betyr en aminbeskyttende gruppe, og R<3> og R<4> er som definert i krav 1; etterfulgt, dersom et farmasøytisk akseptabelt salt er påkrevet, av dannelsen av et farma-søytisk akseptabelt salt.

10. Farmasøytisk preparat, karakterisert ved at det omfatter en terapeutisk effektiv mengde av en forbindelse ifølge hvilke som helst av krav 1 til 8, sammen med et farmasøytisk akseptabelt fortynningsmiddel eller en bærer.

11. Forbindelse ifølge hvilket som helst av krav 1 til 8, for anvendelse i terapi.

12. Anvendelse av en forbindelse ifølge hvilket som helst av krav 1 til 8 for fremstilling av et medikament for behandling av en lidelse valgt fra akutt myeloid leukemi, småcelle-lungekreft, prostatakreft, gastrointestinalkreft, brystkreft, hjernekreft og restenose.