NO303452B1 - Fosfoinositolglykan-peptid med insulinlignende virkning, fremgangsmÕte for fremstilling, legemiddel og anvendelse av forbindelsen for fremstilling av et legemiddel - Google Patents
Fosfoinositolglykan-peptid med insulinlignende virkning, fremgangsmÕte for fremstilling, legemiddel og anvendelse av forbindelsen for fremstilling av et legemiddel Download PDFInfo
- Publication number
- NO303452B1 NO303452B1 NO923252A NO923252A NO303452B1 NO 303452 B1 NO303452 B1 NO 303452B1 NO 923252 A NO923252 A NO 923252A NO 923252 A NO923252 A NO 923252A NO 303452 B1 NO303452 B1 NO 303452B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- insulin
- peptide
- phosphoinositol glycan
- phosphoinositol
- glycan
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 62
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims description 58
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 19
- 230000002608 insulinlike Effects 0.000 title claims description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 claims abstract description 8
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims abstract description 7
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims abstract description 7
- CZIXHXIJJZLYRJ-SRVKXCTJSA-N Asn-Cys-Tyr Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CZIXHXIJJZLYRJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims abstract description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims abstract description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims abstract description 5
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 4
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 claims abstract 4
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 47
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 23
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 23
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 22
- 108010051815 Glutamyl endopeptidase Proteins 0.000 claims description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 8
- IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N Cyclic adenosine monophosphate Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 6
- IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N UNPD107823 Natural products O1C2COP(O)(=O)OC2C(O)C1N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 5
- 150000001982 diacylglycerols Chemical class 0.000 claims description 5
- 229930004094 glycosylphosphatidylinositol Natural products 0.000 claims description 5
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 claims description 5
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 claims description 4
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims description 4
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims description 4
- 244000309466 calf Species 0.000 claims description 4
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 claims description 4
- 108020001775 protein parts Proteins 0.000 claims description 4
- 102000014384 Type C Phospholipases Human genes 0.000 claims description 3
- 108010079194 Type C Phospholipases Proteins 0.000 claims description 3
- 150000002759 monoacylglycerols Chemical class 0.000 claims description 3
- 102100037611 Lysophospholipase Human genes 0.000 claims description 2
- 101000993800 Sus scrofa Insulin Proteins 0.000 claims description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000002337 glycosamines Chemical group 0.000 claims 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 17
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 abstract description 13
- 230000007017 scission Effects 0.000 abstract description 12
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 abstract description 6
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 abstract description 6
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 16
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 15
- 102000036109 cAMP binding proteins Human genes 0.000 description 15
- 108091010966 cAMP binding proteins Proteins 0.000 description 15
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 11
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 11
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 11
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 9
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 8
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 8
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 7
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 6
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 6
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 6
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 description 6
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000006377 glucose transport Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 108700022737 rat Fat1 Proteins 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 5
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 4
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 4
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 4
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 4
- 230000004132 lipogenesis Effects 0.000 description 4
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 4
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 4
- APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 3 Isobutyl 1 methylxanthine Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(CC(C)C)C2=C1N=CN2 APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N D-Glucose 6-phosphate Chemical compound OC1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N Glc6P Natural products OP(=O)(O)OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010001483 Glycogen Synthase Proteins 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010030544 Peptidyl-Lys metalloendopeptidase Proteins 0.000 description 3
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 3
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 3
- -1 p-hydroxybenzoic acid ester Chemical class 0.000 description 3
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 2
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 2
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100035189 GPI ethanolamine phosphate transferase 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710120219 GPI ethanolamine phosphate transferase 1 Proteins 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000863030 Lysobacter enzymogenes Species 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 239000000306 component Substances 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 238000005188 flotation Methods 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000011539 homogenization buffer Substances 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 2
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 2
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 2
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 210000001589 microsome Anatomy 0.000 description 2
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 2
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 2
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 125000001095 phosphatidyl group Chemical group 0.000 description 2
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 108010082737 zymolyase Proteins 0.000 description 2
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940090248 4-hydroxybenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- BDDLHHRCDSJVKV-UHFFFAOYSA-N 7028-40-2 Chemical compound CC(O)=O.CC(O)=O.CC(O)=O.CC(O)=O BDDLHHRCDSJVKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 241000699662 Cricetomys gambianus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 102000012195 Fructose-1,6-bisphosphatases Human genes 0.000 description 1
- 108010017464 Fructose-Bisphosphatase Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- 101001018085 Lysobacter enzymogenes Lysyl endopeptidase Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N O-phosphoethanolamine Chemical group NCCOP(O)(O)=O SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 102000001105 Phosphofructokinases Human genes 0.000 description 1
- 108010069341 Phosphofructokinases Proteins 0.000 description 1
- 102000006486 Phosphoinositide Phospholipase C Human genes 0.000 description 1
- 108010044302 Phosphoinositide phospholipase C Proteins 0.000 description 1
- 102000011420 Phospholipase D Human genes 0.000 description 1
- 108090000553 Phospholipase D Proteins 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010053763 Pyruvate Carboxylase Proteins 0.000 description 1
- 102000053067 Pyruvate Dehydrogenase Acetyl-Transferring Kinase Human genes 0.000 description 1
- 102100039895 Pyruvate carboxylase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 241000187392 Streptomyces griseus Species 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- HSCJRCZFDFQWRP-JZMIEXBBSA-N UDP-alpha-D-glucose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 HSCJRCZFDFQWRP-JZMIEXBBSA-N 0.000 description 1
- HSCJRCZFDFQWRP-UHFFFAOYSA-N Uridindiphosphoglukose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC1C(O)C(O)C(N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 HSCJRCZFDFQWRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710159466 [Pyruvate dehydrogenase (acetyl-transferring)] kinase, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005852 acetolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012501 ammonium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000002026 chloroform extract Substances 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 1
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 230000004136 fatty acid synthesis Effects 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 229960003082 galactose Drugs 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000004110 gluconeogenesis Effects 0.000 description 1
- 150000002302 glucosamines Chemical class 0.000 description 1
- 230000004121 glycogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000004130 lipolysis Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 150000002681 magnesium compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 229940041290 mannose Drugs 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 239000012533 medium component Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229910000069 nitrogen hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000002644 phorbol ester Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical group [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229940057838 polyethylene glycol 4000 Drugs 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005258 radioactive decay Effects 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-O trimethylammonium Chemical compound C[NH+](C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002525 ultrasonication Methods 0.000 description 1
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 1
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0827—Tripeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1027—Tetrapeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K9/001—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence having less than 12 amino acids and not being part of a ring structure
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Description
Oppfinnelsen angår fosfoinositolglykan-peptider med insulin-lignende virkning, fremgangsmåte for deres fremstilling og anvendelse, for fremstilling av et legemiddel for behandling av diabetes mellitus eller ikke insulinavhengig diabetes.
Insulin utøver en lang rekke virkninger på insulinsensitivt vev. En fremtredende effekt er den raske reduksjon av glukosenivået i pattedyr, når insulin blir anvendt. Dette blir bevirket ved et raskt opptak av glukose fra blod gjennom muskel- og fettceller. Insulin aktiverer videre glykogen-syntetase og hemmer lipolysen. Insulin fremmer proteinsyntese av aminosyrer og forsterker induksjon av pyruvatdehydrogenase og fosfofruktokinase og hemmer dannelse av bestemte enzymer i glukoneogenesen, som pyruvatkarboksylase og fruktose 1,6-bifosfatase.
Diabetes type II, ikke insulinavhengig diabetes, innledes med en insulinresistens i perifert vev som muskel- eller fettvev. Den derigjenom reduserte glukoseutnyttelsen blir forårsaket av manglende insulinstimulering av glukosetransport og etterfølgende metabolske prosesser (glukogenese, lipogenese). Denne multiple resistensen viser tydelig en effekt som ligger på reseptor- eller post-reseptor-planet, dvs. før oppnåelse av "second messenger", (Garvey, Diabetes/Metabolism Reviews, 5, (1989), 727-742).
Inntil nå er det ikke kjent noen virkestoffer, som omgår insulinreseptoren og til tross for det viser en insulin-lignende virkning.
Det er nå funnet at fosfoinositolglykanpeptider, som kan bli utvunnet fra adenosin-3',5'-cyklisk-monofosfat (cAMP)-bindeprotein, viser in vitro insulinlignende virkning og viser også insulinlignende virkning på insulin-resistent vev.
Oppfinnelsen angår således fosfoinositolglykan-peptider
med insulin-lignende virkning, kjennetegnet ved at det inneholder en aminosyrerest eller en tripeptidrest som er kovalent bundet til fosfoinositolglykan eller etanolamin og/eller fysiologisk godtagbare salter av fosfoinositol-glykan-peptid.
Under begrepet insulin-resistent vev forstår man f.eks. rotte-fettceller, som ikke lenger besitter noen insulin-reseptor. cAMP-bindeprotein er proteinet, som besitter den egenskapen at den kan binde adenosin-3',5'-cyklisk monofos-fat.
De til nå kjente strukturdata på fosfoinositolglykanpeptider ifølge oppfinnelsen oppviser en fosfoinositol med en glykandel, som inneholder galaktose, glukosamin og mannose, som er koplet over en f osf oryletanolaminrest med en amidbinding på karboksylenden til et peptid. Dette finnes igjen på den som membrananker tjenende kovalent bundede glykolipi-det i lignende struktur i plasmamembranprotein i høyere eukaryoter (Roberts et al., J. Biol. Chem, 263, (1983), 18776-18784). Glykanresten inneholder glukosamin, galaktose, mannose og minst to fosfatrester/mol. Peptidet besitter en sekvens -Asn-Cys-Tyr- og er med karboksylenden i asparaginsyre bundet over en amidbinding til aminogruppen i f os-foinositolglykan. Fosfoinositolglykandelen er nødvendig for aktivitet. Peptidet forsterker den insulinlignende virk-ningen. Videre viser det seg at ikke bare det fullstendig fosfoinositolglykanpeptidet viser insulinlignende virkning, men også delstrukturer, f.eks. vist ved forkortede peptid-sekvenser, som er bundet på fosfoinositolglykan har insulin-lignende virkning eller bare fosfoinositolglykan uten peptid.
Egnede fysiologisk godtagbare salter av fosfoinositolglykan-peptid ifølge oppfinnelsen er f.eks. alkali-, jordalkali-eller ammoniumsalter, så vel som slike fysiologisk godtagbare, organiske ammonium- eller trietylaminbaser.
Fremstilling av fosfoinositolglykanpeptidene ifølge oppfinnelsen foregår ved at man
a) anvender gjærceller, som inneholder adenosin-3',5'-cyklisk-monofosfat-bindende protein, b) isolerer adenosin-3',5'-cyklisk-monofosfat-bindende protein, c) avspalter proteindelen fra adenosin-3',5'-cyklisk-monofos-fat-bindende protein og eventuelt renser det dannede
glykosyl-fosfatidylinositolpeptid
d) avspalter fra det i fremgangsmåtetrinn c) dannede produkt et mono- eller diacylglyserin og e) isolerer det i fremgangsmåtetrinn d) dannede fosfoinositolglykan-peptid og omdanner eventuelt til tilsvarende
fysiologisk godtagbare salter.
cAMP-bindeproteiner kan bli utvunnet fra tallrike organismer, f.eks. av mikroorganisme, planter, sopp eller dyreorganer. Det er f.eks. også egnet med gjæren Saccharomyces cerevisiae, særlig DSM 6649.
Fremstilling av cAMP-bindeprotein ved Saccharomyces cerevisiae foregår ved fermentering i en næringsoppløsning, som inneholder en .karbon- og en nitrogenkilde, så vel som vanlige uorganiske salter. cAMP-bindeprotein blir fortrinnsvis anriket i plasmamembran i gjær.
I f remgangsmåtetrinn a) går man på beste måte frem som følger. Dannelse av cAMP-bindeprotein i Saccharomyces cerevisiae forløper godt i vanlige næringsoppløsninger for Saccharomyces cerevisiae. Dyrkingen foregår aerobt, f.eks. under risting eller omrøring i ristekolber eller fermentorer, eventuelt under innføring av luft eller oksygen. Den kan bli gjennomført i et temperaturområde fra ca. 18 til 35° C, fortrinnsvis ved ca. 25 til 30°C, særlig 28 til 30°C. pH-området bør ligge mellom 2 og 8, fortrinnsvis mellom 3 og 7. Man dyrker gjær under disse betingelsene generelt inntil ca. IO<7>celler/ml næringsoppløsning.
I fremgangsmåtet r inn b) går man frem på beste måte ved at gjærcellene for isolering av cAMP-bindeprotein blir adskilt fra næringsmedium og vasket med buffer. Isoleringen foregår f.eks. som beskrevet av Muller og Bandlow (Biochemistry, 28,
(1989), 9957-9967). Her blir gjærcellene enzymatisk (zymolyase) omdannet i sferoplaster og oppdelt med en homogenisa-tor i nærvær av proteasehemmere under avkjøling (0-4°C). Gjærlysatet blir sentrifugert og cellebunnfallet blir vasket med buffer og sentrifugert på nytt. Supernatantene blir blandet og renset i en percoll-gradient (28% percoll) og sakkarosegradienter (15 til 28% sakkarose). Gjennom dette sentrifugeringstrinnet blir cytoplasma, plasmamembran, mikrosomer og mitokondrier adskilt fra hverandre.
Fra plasmamembranfraksjonen blir cAMP-bindeprotein bundet f.eks. ved en N^-(2-aminoetyl)-cAMP-sefarose-søyle og cAMP-bindeprotein blir eluert og avsaltet med cAMP fra søylen.
I fremgangsmåtet r inn c) går man frem på beste måten ved at proteindelen i cAMP-bindeprotein blir enzymatisk avspaltet. Til enzymatisk, spalting anvender man f.eks proteaser, som pronase, endoprotease Lys-C (Lysobacter enzymogenes) eller V8 protease (Staphylococcus aureus). Dermed oppnår man nedbryting av proteindelene. Med protease V8 oppnår man en glykosyl-fosfatidylinositol med peptidsekvensen Asn-Cys-Tyr; inkubasjon med proteasen pronase gir et glykosyl-fosfatidylinositol-peptid, der peptiddelen bare består av aminosyren Asn.
Proteasen blir f.eks. utfelt med syrer som trikloreddiksyre. Glyosyl-fosfatidylinositol-peptider blir renset ved sentrifugering fra protease, konsentrert ved hjelp av en fenylse-farose-søyle og renset ved tynnsjiktkromatografi.
I fremgangsmåtetrinn d) går man på beste måten frem ved at den på glykosylfosfatidylinositol-peptidet hengende mono-eller dlacylglyserlnrest enzymatisk spaltes av og på den måten frisetter fosfolnositolglykan-peptidet. For enzymatisk avspalting anvender man f.eks. fosfolipaser som fofatidylino-sitol spesifikk fosfolipase C (Bacillus cereus). Således oppnår man avspalting av mono- eller diacylglyserinrester, som over fosfatgruppen er bundet til myo-inositol. Den glyserinholdige resten blir ved proteasebehandling i fremgangsmåtetrinn c) ikke avspaltet. Fremgangsmåtetrinnene c) og d) kan også bli gjennomført i en omvendt rekkefølge.
Den enzymatiske reaksjonen i fremgangsmåtetrinnene c) og d)
blir gjennomført under betingelser som er gunstig for den enzymatiske reaksjonen. På grunn av de kjente reaksjonsbetingelsene for de nevnte enzymene, vil det ikke være vanskelig for en person innenfor fagområdet å finne de optimale reaksjonsbetingelsene.
I f remgangsmåtetrinn e) går man frem på beste måten ved at fosfolipaser blir utfelt med syrer som trikloreddiksyre. Fosfoinositolglykan-peptid blir adskilt gjennom sentrifugering av fosfolipase, renset med en biogel P-4 søyle og konsentrert gjennom tynnsjiktkromatografi.
Fosfoinositolglykan-peptidene ifølge oppfinnelsen og deres fysiologisk godtagbare salter tjener i første rekke som virkestoffer for farmasøytiske tilberedninger for behandling av diabetes mellitus eller ikke-insulinavhengig diabetes.
Oppfinnelsen angår derfor også et legemiddel, som er kjennetegnet ved et virksomt innhold av fosfoinositolglykan-peptid .
Legemidlet er fortrinnsvis en oppløsning eller suspensjon til injeksjonsf ormål med en pH-verdi mellom ca. 3,0 og 9,0, fortrinnsvis mellom 5,0 og 8,5 og inneholder et egnet isotonisk middel, et egnet konserveringsmiddel og eventuelt en egnet buffer, så vel som eventuelt også et depotprinsipp, alle i steril vandig oppløsning eller suspensjon. Samtlige tilberedningsbestanddeler foruten virkestoffet danner tilberedningsbaereren.
Oppfinnelsen er også rettet mot en anvendelse av fosfoinositolglykan-peptid for fremstilling av et legemiddel for behandling av diabetes mellitus eller ikke-insulinav-hengige diabetes.
Egnede isotoniske midler er f.eks. glycerin, glukose, mannit, NaCl, kalisum- eller magnesium-forbindelser som f.eks. CaClg eller MgCl2.
Egnede konserveringsmidler er f.eks. fenol, m-cresol, benzylalkohol og/eller p-hydroksybenzosyreester.
Når det gjelder buffersubstanser, særlig til innstilling av en pH-verdi mellom ca. 5,0 og 8,5 kan det f.eks. bli anvendt natriumacetat, natriumcitrat eller natriumfosfat. Ellers er det til innstilling av pH-verdi også egnet med fysiologisk godtagbare fortynnede syrer (typisk HC1) hhv. lut (typisk NaOH).
Når formålet er variasjon av virkningsprofilen til legemidlet ifølge oppfinnelsen kan også modifiserte (sml. EP-B 132 769 og EP-B 132 770) og/eller umodifiserte insuliner, fortrinnsvis kalv-, svin- eller humaninsulin, særlig humaninsulin blir blandet til.
Legemidlet blir fremstilt ved at man bringer fosfoinositol-glykan-peptidet og/eller minst en av dens fysiologisk godtagbare salter, eventuelt sammen med modifiserte og/eller umodifiserte insulin(derivat)er, med en fysiologisk godtagbar bærer så vel som eventuelt med egnede tilsats- og hjelpe-stoffer i egnet administreringsform.
Oppfinnelsen blir i de følgende eksemplene nærmere forklart.
Eksempel 1
Fermentering av Saccharomyces cerevisiae DSM 6649
Saccharomyces cerevisiae DSM blir dyrket aerobt i en fermentor. Følgende mediumsbestanddeler er inneholdt i en liter vann:
pH blir innstilt med KOH til 5,5. Luftingen foregår med luft 1 1/1 fermentorvolum. Cellene blir dyrket til en celletett-het på 1 x 10^ celler/ml dyrkingsoppløsning; utbytte ca. 3 g fuktvekt pr. 1. dyrkingsoppløsning. Cellene blir samlet ved sentrifugering (5 min 3000 x g) og vasket med f osf atbuf fer, pH 6.
Eksempel 2
Isolering av cAMP-bindeprotein
Cellene fra eksempel 2 blir enzymatisk omdannet (zymolyase, 2000, Seikagaku Kogyolo, Tokio) i sferoplaster, og oppdelt med en glasshomogenisator (Arthur H. Thomas og Co.) ved 0°C. Følgende isolasjonstrinn foregår i nærvær av proteasehemmere (fenylmetansulfonylfluorid (PMSF), leupeptin, aprotinin, makroglobulin, trypsin-hemmer; Boehringer Mannheim). Cellelysatet blir sentrifugert (1000 x g, 3 min, 4°C), cellesedimentet blir vasket med SEM-buffer (0,25 M sakkarose, 0,5 mM etylendiamintetraeddiksyre (EDTA), 20 mM 3-[N-morfolino]-propansulfonsyre (M0PS)/K0H, pH 7,4) og sentrifugert på nytt. Supernatantene blir blandet og sentrifugert i en percoll-gradient (Pharmacia, Freiburg; 28% percoll, SEM-buffer, 0,5 mg protein/ml) (18000 x g, 15 min, 4<0>C). I denne gradienten blir cytoplasma, plasmamembran, mikrosomer og mitokondrier adskilt fra hverandre. Plasmamembranen floterer i den øvre tredjedelen av gradienten. De blir tatt ut av gradienten med en sprøyte, fortynnet med fem gangers volum til SEM-buffer og sentrifugert (48000 x g, 30 min, 4°C). Sedimentet blir suspendert i MPOS-buffer (5 mg protein/ml) og inkubert med N-[<3>H]acetyl-konkanavalin A (Amersham Buchler, Braunschweig; 1 mg protein med 55 pCi, i 500 jjI MOPS-buffer (Boehringer Mannheim), 20 mM, pH 7,4, 0,5 mM EDTA, 50 mM KC1, 5 mM CaClg. 200 jjg kalveserumalbumin; Behring Werke, Marburg) i ultralydbad i 60 minutter, 4°C. Binding av konkanavalin A tjener som markør. Suspensjonen blir pipitert på en sakka-rosegradient (15 til 28% sakkarose i MOPS-buffer) og sentrifugert (25000 omdreininger pr. minutt, 90 min, 4°C, Beckmann SW 27 Rotor). Sakkarosegradienten blir fraksjonert og de radioaktive fraksjonene (ca. 23% sakkarose) blir blandet sammen, fortynnet tre ganger med en MOPS-buffer (50 mM konkanavalin A; Sigma Deisenhofen, 250 mM KC1) og sentrifugert (200000 x g, 60 min, 4°C, Beckmann TL-100-rotor). Sedimentet blir vasket med SEM-buffer (250 mM KC1), sentrifugert og suspendert på nytt i SEM-buffer uten KC1 (2,5 mg protein/ml).
Ca. 500 jjg av plasmamembranproteinet blir gjort oppløselig i buffer (25 mM MOPS/KOH, pH 7,0, 150 mM NaCl, 4 mM MgCl2, 0,4 mM EGTA (etylenglykol-bis-(p-aminoetyleter)tetraeddiksyre), 0,5 mM DTT (dit iotrei tol), 0,5% desoksycholat, 0,1 mM IBMX (isobutylmetylxantin), 0,1 mM PMSF, 50 jjM leupeptin, 0,1 mM aprotinin (2 mg/ml). Oppløsningen blir påført en 2 ml N<6->(2-aminoetyl)-cAMP-Sepharose-søyle (Pharmacia, Freiburg) ved 4°C, og blir ekvilibriert med samme buffer. Søylen blir vasket fem ganger med 2 ml buffer hver gang (25 mM MOPS/KOH, pH 7,2, 100 mM Na-citrat, 5 mM DTT, 5 mM MgCl2, 150 mM NaCl, 250 mM sakkarose, 7,5% etylenglykol (Merck, Darmstadt), 10% glycerln, 1 mg/ml kalveserumalbumin, 1 mM IBMX). Det blir eluert ved 4°C med 2 ml av samme buffer som inneholder ytterligere 100 jjM cAMP. De første 250 pl av eluatet blir avsaltet ved sentrifugering i en 1 ml Sephadex G-25-søyle, som var blitt ekvilibriert med en buffer (25 mM MOPS/KOH, pH 7,0, 50 mM KC1, 5 mM MgCl2, 10 mM DTT, 50 jjM EDTA, 50 jjM PMSF, 0,1% desoksycholat, 5% glyserin). Det avsaltede materialet blir inkubert med samme volum 8% polyetylenglykol 4000 (Pharmacia, Freiburg) i buffer (10 mM MOPS/KOH, pH 7,2, 1 mM EDTA) i 30 minutter ved 4°C. Etter 15 minutters sentrifugering blir sedimentet oppløst i en buffer (20 mM MOPS/KOH, pH 7,2, 1 mM EDTA, 100 jjM PMSF, 0,5% desoksycholat)
(2 mg protein/ml).
Eksempel 3
Fremstilling av fosfolykan-peptider
a) Spalting med pronase (Streptomyces griseus; Boehringer Mannheim): 100 pg cAMP-bindeprotein blir inkubert i 10
timer ved 50°C i 1 ml 0,1 M N-2-hydroksyetylpiperazin-N-2-etansulfonsyre .(HEPES)/K0H (pH 8,0), 15 mM CaCl2, 1% triton X-100 (Boehringer Mannheim) med 450 pg/ml pronase. Etter tilsetning av 1% SDS (natriumdodecylsulfat) blir inkubasjonen fortsatt med en annen prøve pronase i 7 timer ved 50° C. Automatisert Edmann-nedbryting viser at proteasenedbrytingen fører til fosfoinositolglykan med amidlignende bundet asparagin til aminoenden i etanolamin. Dette fosfoinositol-glykan-peptidet blir i det følgende betegnet med PIG-N.
b) Spalting med endoproteinase Glu-C, EC 3.4.21.19, (V8 protease) (Stafylococcus aureus; Boehringer Mannheim): 100
jjg cAMP-bindeprotein blir i 18 timer ved 37°C inkubert i 1 ml 20 mM (NH4)2C03(pH 7,8), 0,5% oktylglykosid (Boehringer Mannheim) med 300 jjg V8 protease.
Automatisert Edmann-nedbryting viser at V8 protease-spalting fører til fosfoinositolglykan med peptidet Asn-Cys-Tyr. Aminosyren asparaginsyre er med karboksyterminalen bundet til fosfoinositolglykan. Forbindelsen fosfoinositolglykan med tripeptid Asn-Cys-Tyr blir i det følgende betegnet med PIG-NCY.
c) Spalting med endoprotease Lys-C (Lysobacter enzymogenes; Boehringer Mannheim): 100 jjg cAMP-bindeprotein blir i18timer ved 37°C inkubert i 0,5 ml 50 mM (NH4)2C03(pH 8,2), 0,5% oktylglykosid med 55 pg endoprotease Lys-C.
Automatisert Edmann-nedbryting viser at endopoteasen Lys-C fører til fosfoinositolglykan med peptidet Asn-Cys-Tyr-Glu. Bindingen av peptidet til fosfoinositolglykan foregår over karboksyenden til asparagin. Den blir i det følgende betegnet med PIG-NCYE.
d) Fjerning av karboksy-terminal aminosyre: pronase-spaltet cAMP-bindeprotein (se a) blir underkastet en manuell
Edmann-nedbryting. Det dannede aminosyre-frie fosfoinositol-glykan blir i det følgende betegnet med PIG.
Etter proteolytisk spalting blir proteasen fjernet ved utfelling med 5% trikloreddiksyre (TCA). Etter sentrifugering (15 min, 10000 x g) blir de i supernatanten inneholdende fosfoinositolglykan-peptidderivatene og også fosfoinositol-glykan fra Edmann-nedbrytingen konsentrert og renset ved binding til en fenylsepharose-søyle. Etter eluering med 2% oktylfenol(etylenglykoleter) (TX-100) blir fosfoinositol-glykan-peptidderivatene renset ved tynnsjiktkromatografi med to forskjellige oppløsningsmiddelsystemer. Etter det første forløp i et surt system (kloroform/aceton/metanol/iseddik/- vann 10 : 4 : 2 : 2 : 1) blir fosfoinositolglykan-peptidene nær påføringsstedet eluert med metanol på en silikagelplate (type 60) og deretter kromatograf ert på nytt i et annet forløp i et basisk system (kloroform/metanol/ammoniakk/vann 45 : 45 : 3,5 : 10). Fosfoinositolglykan-peptidderivatene blir eluert på nytt fra platen (Rf = 0,45) og ekstrahert med kloroform/metanol (2 : 1). Den organiske fasen blir vasket og inndampet og materialet blir suspendert i fosfatbuffer med 0,5% TX-100.
e) De i a) til d) oppnådde fosfoinositolglykanene eller fosfoinositolglykan-peptidene blir inkubert med 10 enheter
fosfatidylinositol-spesifikk fosfolipase C, EC 3.1.1.5, (Bacillus cereus; Sigma, Deisenhofen) i 0,2 ml 0,2 M kaliumfosfat (pH 7,2), 2 mM DTT, 10 mM MgCl2, 50 mM NaCl, 0,05% TX-100 i 2 timer ved 37°C. Etter tilsetning av 10 mM EDTA blir spaltningsproduktet ved tynnsjiktkromatografi skilt fra hverandre i basis løpemiddelsystem (se d). Materialet i umiddelbar nærhet av påføringsstedet blir eluert fra platen og blandet med 2% poly(etylenglykol)g-mono-(oktylfenyleter)
(TX-114). Ved oppvarming og sentrifugering blir det innledet en faseadskillelse. Den vandige fasen blir konsentrert i Speedvac konsentrator.
f) For standardisering av fosfoglykan-peptidene blir nitrogenet i de frie glukosaminene fra materialet fra
fremgangsmåtetrinn a) til d) overført ved permetylering i et radioaktivt markert trimetylammonium-kation. Videre blir prøven tørket i vakuum og blandet med 100 pl dimetylsulfok-sid. Etter ultralydbehandling (1 min) blir 10 mg NaOH og 40 pl [<125>J]metyljodid (0,2 pCi; NEN-Dupont, Dreieich) tilsatt. Etter omrøring i 45 minutter ved 25°C blir oppløsningsmidlet fjernet i Speedvac og 400 pl H20 blir tilført. Prøven blir vasket tre ganger med kloroform og kloroform-ekstraktet tre ganger med H20. Kloroformen blir avdampet under N2. Permety-leringen foregår lineært og kvantitativt over et vidt konsentrasjonsområde. I testene på insulinaktig virkning blir ekvivalente volumer (lik dpm-verdi) anvendt til fosfoinositolglykan-peptider (1-100 "arbitrary units"). g) Inkubering av det oppnådde materialet fra a) til d) med salpetersyre fører til spalting av fosfoinositolglykaner.
Eksempel 4
Strukturtrekk ved fosfoinositolglykan-peptider
a) Gjærceller blir påvist som i eksempel 1 i nærvær av radioaktivt markerte substrater (Firma NEN-Dupont, Dreieich):
stearinsyre
myo-inositol
glucosamin eller
mannose.
De samlede plasmamembranfunksjonene eller det rensede cAMP-bindeprotein ved affinitetskromatografi (se eksempel 2) blir underkastet en SDS-polyakrylmidgelelektroforese. Farging med coomassi blå eller ved autoradiografi av komponentene viser at alle ovenfornevnte radioaktive komponenter blir bygget inn i fosfoinositolglykan-peptidet. b) Det oppnådde fosfoinositolglykan-peptidet fra eksempel 3a) blir videre spaltet kjemisk og enzymatisk. Spaltingsproduktet blir analysert ved tynnsjiktkromatografi og måling av .radioaktivitetsfordeling ([<3>H]stearinsyre og [<14>c]myo-inositol). Den blivende radioaktive markerte strukturen blir eluert fra platen og underkastet den neste spaltingsreaksjonen. Fra den oppstående struktur etter pronase-spalting blir det ved deaminering med salpetersyre frisatt fosfatidylinositol (PI). Dette blir omdannet ved fosfolipase D til fosfatidylsyre eller ved fosfolipase C til diacylglyserol. Med dette går myo-inositol-markeringen tapt, men den radioaktive markeringen ved stearinsyre blir imidlertid beholdt. Fosfatidylsyre blir deretter overført ved acetolyse i diglyseridacetat. Fra denne struktur og også fra diacylglycerol blir stearinsyre endelig frisatt ved alkalisk hydrolyse.
c) Den etter eksempel 3a) og 3e) oppnådde struktur blir tørket og behandlet med HF (60% 1 vann, 16 timer, 0°C) og de
oppnådde oligosakkaridene blir hydrolysert med 2M trifluor-eddiksyre (4 timer, 100°C). Deretter blir reaksjonsoppløs-ningen tørket og det foreliggende sukkeret redusert (1% NaBH4, i 0,1 M ammoniumhydroksid, 1 time, 37°C) og deretter acetylert (1:1 blanding av pyridin og eddiksyreanhydrid, 1 time, 60°C). Gasskromatografi foregår med en gasskromatograf fra firma Packard, modell 428; søyle 100/120 supelcoport (Supelco, Bellefonte, USA) ved 60°C. Det ga den følgende kvalitative sammensetningen:
Mannose, galaktose, myo-inositol og glukosamin.
d) Den etter eksempel 3a) og 3e) oppnådde struktur ble som i c) hydrolysert med HF (60° C i vann) og 4 M HCL i 16
timer ved 100°C. En adskillelse i en aminosyreanalysator (Biotronic, LC 6001) ga følgende bestanddeler:
Asparginsyre, NH3, etanolamin og glukosamin.
Med henblikk på hydrolysebetingelsene, er forholdet av asparaginsyre og NH3, så vel som resultatene etter eksempel 3a) som den i nativ fosfoinositolglykan-peptid foreliggende aminosyre.
Eksempel 5
Biologisk aktivitet til fosfoinositolglykan-peptidene (PGP) ifølge oppfinnelsen blir bestemt ved hjelp av preparativ isolerte fettceller og difragma-stykker fra rotte.
Begrepet "PIG" betyr fosfoinositolglykan uten peptid, oppnådd fra eksempel 3d) og 3e); "PIG-N" betyr fosfoinositolglykan med asparagin, oppnådd fra eksempel 3a) og 3e); "PIG-NCY" betyr fosfoinositolglykan med peptidet Asn-Cys-Tyr, oppnådd etter eksempel 3b) og 3e); "PIG-NCYE" betyr fosfoinositolgly kan med peptidet Asn-Cys-Tyr-Glu, oppnådd fra eksempel 3c) og 3e); "PIG-NCY (na)" betyr materialet som blir oppnådd fra eksempel 3b) og 3e), og som blir spaltet med salpetersyre (se eksempel 3g). Begrepet "basal" står for aktivitet uten stimulering, insulin står for humaninsulin og dpm står for radioaktiv spalting pr. minutt.
Prepareringen av fettceller fra rotte foregår som følger: Fettvev fra bitekstiklene (Wistar-rotte, 160-180 g, ingen forinnskrenkning) blir spaltet med kollagenase og de enkelte fettcellene blir vasket flere ganger ved flotasjon.
Preparering av diafragma-stykker fra rotte:
Fra flere ganger vaskede hemi-diafragma (Wistar-rotte, 60-70 g, ingen forinnskrenkning) blir det stanset ut små vevstykker (5 mm diameter).
For inaktivering av insulinreseptorer fra rotte-fettceller blir cellene behandlet med 10 til 40 pg/ml trypsin. Etter tilsetning av proteasehemmere blir cellene vasket tre ganger ved flotasjon og inkubering fortsatt i 15 minutter ved 37°C. Disse cellene blir deretter benyttet for test av stimulering av lipogenese med fosfoinositolglykan-peptider. En kontroll-inkubering med insulin viser at de trypsin-behandlede cellene bare oppviser en mindre insulin-stimulerbar lipogenese og dermed bare et begrenset antall funksjonelle insulinreseptorer .
For inaktivering av insulinreseptoren fra rottediafragma blir vevsstykkene under jevn gassbehandling med Og inkubert i KRH-buffer (0,1 mM glukose i nærvær av 50 jig/ml forbolester tetradekanoylforbolacetat) i 90 minutter ved 25 "C. Deretter blir vevsstykkene vasket to ganger med KRH-buffer og anvendt for de aktuelle testene.
I de etterfølgende forsøkene blir forsøksresultater som er målt med vev eller celler, der insulinreseptoren er blitt inaktivert, angitt i parantes. Ved ingen av de etterfølgende testene viste PIG-NCYE noen virkning.
a) Glykogenese
Denne testen bestemmer insulin-stimulerbar glykogensyntese i
muskelceller, som omfatter glukosetransport over plasmamembran og omdannelse av glukose til glykogen inkludert den funksjonelle insulin-signaloverføringskaskaden.
Diafragmastykker blir inkubert i KRH-buffer med 50 jjM D-[U-<14>C]glukose i nærvær eller fravær av insulin og PGP i 15 minutter ved 37°C. Etter avsuging av medium blir vevsstykkene vasket intensivt, innfrosset ved -70°C og deretter homogenisert ved 2°C i polytron-spalter. Homogenatet blir sentrifugert (2000 g) og supernatanten blir pipettert på filterpapir. For bestemmelse av dannede glykogener blir filteret overført i TCA (5%), vasket med etanol og aceton, tørket og radioaktivitet blir bestemt over scintillasjonsmåling ([<14>C]glykogen [dpm<*>10-<3>]). Enhetene for fosfoinositolglykan-peptider er arbitary units, definert som i eksempel 3f).
b) Glykogensyntese
Testen bestemmer insulin-stimulerbar omdannelse av aktiv
glukose (UPD-glukose) i glykogen (glykogensyntase-aktivitet) inkludert en funksjonell insulin-signaloverføringskaskade. Glukose-transport og aktivering av glukose blir omgått (til forskjell fra måling av glykogensyntese, se a).
Diafragmastykker blir inkubert med D-glukose (0,1 mM) i nærvær eller fravær av insulin og PGP i 30 minutter ved 37°C. Et homogenat blir fremstilt og sentrifugert (20000 x g). Supernatanten blir inkubert med U-[<14>C]UDP-glukose (0,3 mM) i nærvær av enten 0,1 mM eller 10 mM glukose-6-fosfat i 60 minutter ved 37°C. Blandingen blir overført på filterpapir og filteret blir behandlet som over. Glykogensyntase-aktiviteten blir beregnet som fraksjonell hastighet mellom l-form av enzym (uavhengig av glukose-6-fosfat, defosforylert, tilsvarer mengden av aktivert enzym i homogenat) og D-form av enzym (avhengig av glukose-6-fosfat, fosforylert, tilsvarer samme mengde av aktiverbart enzym i homogenat) ([<14>C]glykogen [dpm*10-3] ).
c) Lipogenese
Denne testen bestemmer insulin-stimulerbar omdannelse av
glukose i toluol-oppløselige produkter (triglyserider, fosfolipider, fettsyrer), som krever glukose-transport og triglyserid (glyserin-3-P-syntese, forestring)-/fosfolipid-/fettsyre-syntese inkludert insulin-signaloverføringskaskade.
Rotte-fettceller i KRH-buffer blir inkubert med D-[3-<3>H]glukose (0,2 mM eller 1 mM konsentrasjon) i nærvær eller fravær av insulin og PGP i 90 minutter ved 37 °C. Ved tilsetning av en toluol-oppløselig scintillasjonsblanding blir cellene utelukket og lipidene av vannoppløselige produkter og inkubasjonsmedium adskilt. Etter faseskillelse blir den i lipid inkorporerte radioaktivitet bestemt ved scintillasjonsmåling direkte uten fjerning av vandig fase ([<3>H]lipid [dpm<*>10-<3>]).
d) Intrinsisk glukosetransportaktivitet
Isolerte plasmamembranvesikler blir utvunnet fra rottefett-celler (se eksempel 5), der fettcellene blir vasket to ganger i homogen!seringsbuffer (20 mM trihydroksyaminometan (tris)/HCl, pH 7,4, 1 mM, EDTA, 0,25 M sakkarose) og deretter homogenisert ved 4°C i 20 ml med samme buffer (glasshomogenisator med teflon-stempel).
Homogenisatet blir sentrifugert (16000 x g, 15 min), sedimentet blir suspendert i den samme bufferen og sentrifugert på nytt. Sedimentet blir suspendert i 5 ml homogeni-ser ingsbuf f er og lagt på en sakkarose-pute (1,12 M sakkarose, 20 mM tris/HCl, pH 7,4, 1 mM EDTA), etter sentrifugering (100000 x g, 70 min) blir interfasen tatt ut med plasmamembranvesikler med en sprøyte, fortynnet med 45 ml buffer og sentrifugert på nytt (48000 x g, 45 min). Sedimentet blir suspendert i 10 ml buffer, sentrifugert på nytt og suspendert på nytt i 3 ml buffer.
Isolerte plasmamembranvesikler blir inkubert i nærvær eller fravær av insulin/PGP i 30 min. ved 25° C. Deretter blir vesiklene inkubert med 50 pM D-[3-<3>H]-glukose og L-[l-<14>C]glukose med samme spesifikke radioaktivitet i 90 sekunder ved 25°C. Blandingen blir raskt suget av over nitrocellulose-filter. Filteret blir grundig vasket og tørket. Radio-aktiviteten blir bestemt ved væskescintillasjonsmåling. Spesifikk transport (D-[<3>H]glukose/L-<14>C]glukose [dpm*10~<3>] blir beregnet som differanse mellom [<3>H]- og [<14>C]-radioak-tiviteten .
e) Proteinsyntese
Til forskjell fra den foregående bestemmelsen av den målte
metabolske insulinvirkningen hører stimulering av proteinsyntese til langtidsvirkning av insulin (som veksthor-mon). Analysen inkluderer insulin-signalkaskaden.
Rotte-fettceller blir inkubert i "Dulbecco's modified essential medium" (DMEM), fattig på leusin, i primærkultur med 50 pM L-[<3>H]-leusin i nærvær av insulin og PGP i 4 timer ved 37"C. Cellene blir adskilt ved oljesentrifugerings-teknikken fra omgivende medium og blandet med vannforlikelig scintillasjonsblanding. Etter sentrifugering blir protein-bunnfallet vasket i aceton, suspendert i 1% SDS og blandet med scintillasjonsblanding. Celleassosiert radioaktivitet, bestemt ved scintillasjonsmåling tjener som et mål på proteinsyntese og aminosyretransport gjennom plasmamembranen ([<3>H]leucin [dpm^lO-<4>]).
Claims (9)
1.
Fosfoinositolglykan-peptid med insulin-lignende virkning,karakterisert vedat det inneholder en aminosyrerest eller en tripeptidrest som er kovalent bundet til fosfoinositolglykan eller etanolamin og/eller fysiologisk godtagbare salter av fosfoinositol-glykan-peptid.
2.
Fosfoinositolglykan-peptid ifølge krav 1,karakterisert vedat det inneholder minst en glykosamin-, galaktose-, mannose-, myoinositol-, fosforsyre—, etanolamin-rest og peptidrest med sekvensen Asn-Cys-Tyr.
3.
Fosfoinositolglykan-peptid ifølge krav 1 eller 2,karakterisert vedat det minst inneholder fosfoinositolglykan eller fosfoinositolglykan og asparagin som peptidrest.
4.
Fremgangsmåte for fremstilling av fosfoinositolglykanpeptid ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 3,karakterisert vedat den omfatter at man a) anvender gjærceller, som inneholder adenosin-35'-cyklisk-monofosfat-bindende protein, b) isolerer adenosin-3',5'-cyklisk-monofosfat-bindende protein, c) avspalter proteindelen fra adenosin-3',5'-cyklisk-monofos-fat-bindende protein og eventuelt renser det dannede glykosyl-fosfatidylinositolpeptid d) avspalter fra det i fremgangsmåtetrinn c) dannede produkt et mono- eller diacylglyserin og e) isolerer det i fremgangsmåtetrinn d) dannede fosfoino sitolglykan-peptid og omdanner eventuelt til tilsvarende fysiologisk godtagbare salter.
5.
Fremgangsmåte ifølge krav 4,karakterisertved at rekkefølgen i fremgangsmåtetrinn c) og d) blir ombyttet.
6.
Fremgangsmåte ifølge et eller flere av kravene 4 til 5,karakterisert vedat det blir anvendt Sacharromyces cerevisae DSM 6649, endoproteinase Glu-C, EC 3.4.21.19 og/eller fosfolipase C, EC 3.1.1.5.
7.
Legemiddel.karakterisert vedat det har et virksomt innhold av fosfoinositolglykan-peptid ifølge et eller flere av kravene 1 til 3.
8.
Legemiddel ifølge krav 7,karakterisertved at det inneholder et insulin, fortrinnsvis kalv-, svin- eller humaninsulin.
9.
Anvendelse av fosfoinositolglykan-peptid ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 3 for fremstilling av et legemiddel for behandling av diabetes mellitus eller ikke-insulinav-hengige diabetes.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4127495 | 1991-08-20 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO923252D0 NO923252D0 (no) | 1992-08-19 |
| NO923252L NO923252L (no) | 1993-02-22 |
| NO303452B1 true NO303452B1 (no) | 1998-07-13 |
Family
ID=6438668
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO923252A NO303452B1 (no) | 1991-08-20 | 1992-08-19 | Fosfoinositolglykan-peptid med insulinlignende virkning, fremgangsmÕte for fremstilling, legemiddel og anvendelse av forbindelsen for fremstilling av et legemiddel |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5624903A (no) |
| EP (1) | EP0532915B1 (no) |
| JP (1) | JP3361126B2 (no) |
| KR (2) | KR100264623B1 (no) |
| AT (1) | ATE147407T1 (no) |
| AU (1) | AU656396B2 (no) |
| CA (1) | CA2076424C (no) |
| CZ (1) | CZ290341B6 (no) |
| DE (1) | DE59207835D1 (no) |
| DK (1) | DK0532915T3 (no) |
| ES (1) | ES2096686T3 (no) |
| FI (1) | FI102842B (no) |
| GR (1) | GR3022895T3 (no) |
| HR (1) | HRP940834B1 (no) |
| HU (1) | HU210431B (no) |
| IL (1) | IL102859A (no) |
| NO (1) | NO303452B1 (no) |
| SG (1) | SG46639A1 (no) |
| SK (1) | SK281333B6 (no) |
| TW (1) | TW224104B (no) |
| YU (1) | YU66892A (no) |
| ZA (1) | ZA926232B (no) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE184611T1 (de) * | 1991-11-29 | 1999-10-15 | Hoechst Ag | Peptide mit insulinartiger wirkung |
| ES2159283T3 (es) * | 1992-02-29 | 2001-10-01 | Aventis Res & Tech Gmbh & Co | Complejos que contienen glicosil-fosfatidilinositol-proteinas y derivados de acido colanico, procedimiento para su preparacion y su utilizacion. |
| US5652221A (en) * | 1994-11-07 | 1997-07-29 | The University Of Virginia Patent Foundation | Method of treating defective glucose metabolism using synthetic insulin substances |
| GB9618929D0 (en) | 1996-09-11 | 1996-10-23 | Univ London | Metal containing carbohydrates from human tissue which regulate glycogen metabolism |
| GB9618934D0 (en) * | 1996-09-11 | 1996-10-23 | Univ London | Inositol phosphoglycans for therapeutic use in the treatment of diabetes and obesity |
| GB9618930D0 (en) | 1996-09-11 | 1996-10-23 | Univ London | Metal containing carbohydrates from human tissue which regulate lipogenic activity |
| DE19649350A1 (de) * | 1996-11-28 | 1998-06-04 | Hoechst Ag | Inositolglykane mit insulinartiger Wirkung |
| KR100481746B1 (ko) * | 1996-11-28 | 2005-08-10 | 훽스트 악티엔게젤샤프트 | 인슐린-유사작용을갖는이노시톨글리칸및이를포함하는약제학적제제 |
| EP2158923B1 (en) | 1998-08-06 | 2013-02-27 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Peg-urate oxidase conjugates and use thereof |
| CH697081A5 (de) * | 2002-01-22 | 2008-04-30 | Andreas F Dr Schaub | Zusammensetzung für die Unterstützung der Geburt eines menschlichen Föten. |
| EP1378517A1 (en) * | 2002-07-05 | 2004-01-07 | Aventis Pharma Deutschland GmbH | Phosphoinositolglycan (PIG) binding protein from adipocytes |
| CA2491555C (en) * | 2002-07-10 | 2012-09-11 | Massachusetts Institute Of Technology | Solid-phase and solution-phase synthesis of glycosylphosphatidylinositol glycans |
| ITMI20030237A1 (it) * | 2003-02-11 | 2004-08-12 | Indena Spa | Uso della conglutina di lupino per il trattamento del |
| DE102004054552A1 (de) * | 2004-11-11 | 2006-05-18 | Hcb Happy Child Birth Holding Ag | Neue Zusammensetzung zur Erleichterung der Humangeburt |
| RU2435847C2 (ru) | 2005-04-11 | 2011-12-10 | Савиент Фармасьютикалз, Инк. | Вариантная форма урат-оксидазы и ее использование |
| PL3321359T3 (pl) | 2005-04-11 | 2021-06-28 | Horizon Pharma Rheumatology Llc | Wariantowe postacie oksydazy moczanowej i ich zastosowanie |
| US8148123B2 (en) | 2005-04-11 | 2012-04-03 | Savient Pharmaceuticals, Inc. | Methods for lowering elevated uric acid levels using intravenous injections of PEG-uricase |
| KR101861547B1 (ko) | 2009-06-25 | 2018-07-02 | 크레알타 파마슈티칼스 엘엘씨 | 페길화된 유리카아제 치료 중에 혈청 요산을 모니터링하여 주입 반응의 위험성 및 반응의 항체매개 상실을 예측하는 방법 및 키트 |
| CN102270762B (zh) * | 2010-06-03 | 2014-08-20 | 清华大学 | 锂离子电池电极浆料及应用该电极浆料制备的电极片 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3326473A1 (de) * | 1983-07-22 | 1985-01-31 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Pharmazeutisches mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3326472A1 (de) * | 1983-07-22 | 1985-02-14 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Neue insulin-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung sowie pharmazeutische mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
| US4906468A (en) * | 1986-04-11 | 1990-03-06 | The Rockefeller University | Insulin activity messengers, their antibodies, and thereof |
| US4839466A (en) * | 1986-04-11 | 1989-06-13 | The Rockefeller University | Insulin activity messengers |
-
1992
- 1992-07-02 YU YU66892A patent/YU66892A/sh unknown
- 1992-08-04 TW TW081106143A patent/TW224104B/zh not_active IP Right Cessation
- 1992-08-14 DK DK92113897.0T patent/DK0532915T3/da active
- 1992-08-14 EP EP92113897A patent/EP0532915B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-14 SG SG1996006943A patent/SG46639A1/en unknown
- 1992-08-14 ES ES92113897T patent/ES2096686T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-14 AT AT92113897T patent/ATE147407T1/de active
- 1992-08-14 DE DE59207835T patent/DE59207835D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-18 FI FI923702A patent/FI102842B/fi not_active IP Right Cessation
- 1992-08-18 IL IL10285992A patent/IL102859A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-08-19 KR KR1019920014893A patent/KR100264623B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-08-19 CZ CS19922553A patent/CZ290341B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-08-19 ZA ZA926232A patent/ZA926232B/xx unknown
- 1992-08-19 NO NO923252A patent/NO303452B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-08-19 CA CA002076424A patent/CA2076424C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-19 AU AU21109/92A patent/AU656396B2/en not_active Expired
- 1992-08-19 SK SK2553-92A patent/SK281333B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1992-08-19 HU HU9202701A patent/HU210431B/hu unknown
- 1992-08-19 JP JP21994692A patent/JP3361126B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-10-26 HR HR940834A patent/HRP940834B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1994-12-23 US US08/364,398 patent/US5624903A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-03-24 GR GR970400577T patent/GR3022895T3/el unknown
-
2000
- 2000-01-20 KR KR1020000002579A patent/KR100318706B1/ko not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO303452B1 (no) | Fosfoinositolglykan-peptid med insulinlignende virkning, fremgangsmÕte for fremstilling, legemiddel og anvendelse av forbindelsen for fremstilling av et legemiddel | |
| CA1172978A (en) | .alpha.-AMYLASE INACTIVATOR, A PROCESS FOR ITS PREPARATION, AN AGENT BASED ON THIS INACTIVATOR AND ITS USE | |
| Cordella-Miele et al. | Transglutaminase-catalyzed incorporation of polyamines into phospholipase A2 | |
| AU638701B2 (en) | Glycosylated insulins | |
| JPS60152500A (ja) | α−アミラ−ゼ抑制作用を有する新規ポリペプチドおよびそれらの製法 | |
| EP0119650A2 (en) | Galactosyl-insulin conjugates useful in treating diabetics | |
| Visser et al. | Peptide substrates for chymosin (rennin). Interaction sites in κ-casein-related sequences located outside the (103-108)-hexapeptide region that fits into the enzyme's active-site cleft | |
| Geschwind et al. | The guanidination of some biologically active proteins | |
| Fiat et al. | The Amino‐Acid and Carbohydrate Sequences of a Short Glycopeptide Isolated from Bovine κ‐Casein | |
| Gould et al. | Participation of Aminoacyl Transfer Ribonucleic Acid in Aminoacyl Phosphatidylglycerol Synthesis: II. Specificity of Alanyl Phosphatidylglycerol Synthetase | |
| EP0017938B1 (en) | Process for preparing a b30-threonine insulin | |
| US4401757A (en) | Semi-synthesis of human insulin | |
| Welch et al. | Uptake of glycine from L-alanylglycine into renal brush border vesicles | |
| Tsuru et al. | Studies on Bacterial Protease: Part XVIII. Proteolytic Specificity of Neutral Protease of Bacillus subtilis var. amylosacchariticu s | |
| Buston et al. | Synthesis of β-linked glucosaccharides by extracts of Chaetomium globosum | |
| Haneda et al. | Chemo-enzymatic synthesis and structure-activity study of artificially N-glycosylated eel calcitonin derivatives with a complex type oligosaccharide | |
| Jacquemin | Glycosyl phosphatidylinositol in thyroid: cell signalling or protein anchor? | |
| JP2891023B2 (ja) | ランチオニン含有物の製造方法 | |
| JP2842613B2 (ja) | フォスフォリパーゼａ▲下２▼阻害物質 | |
| Brdiczka et al. | Mitochondrial matrix granules in soft tissues: II. Isolation and initial characterization of a calcium-precipitable, soluble lipoprotein subfraction from brown fat and liver mitochondria | |
| Lew et al. | Incorporation of carbohydrate residues into peroxidase isoenzymes in horseradish roots | |
| OGATA et al. | Chemical identification of lipid components in the membranous form of rat liver alkaline phosphatase | |
| Jonczyk et al. | Preparation and biological properties of [LeuB24, LeuB25] human insulin | |
| Chin et al. | Studies on Nα-acylated proteins: The N-terminal sequences of two muscle enolases | |
| DD141323A1 (de) | Verfahren zur herstellung eines prolylpeptidspaltenden enzyms |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |