NO301843B1 - Renset gallesyresulfatsulfatase, fremgangsmåte for fremstilling derav og fremgangsmåte for å måle gallesyre - Google Patents
Renset gallesyresulfatsulfatase, fremgangsmåte for fremstilling derav og fremgangsmåte for å måle gallesyre Download PDFInfo
- Publication number
- NO301843B1 NO301843B1 NO903342A NO903342A NO301843B1 NO 301843 B1 NO301843 B1 NO 301843B1 NO 903342 A NO903342 A NO 903342A NO 903342 A NO903342 A NO 903342A NO 301843 B1 NO301843 B1 NO 301843B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- bile acid
- bile
- sulfates
- acids
- bile acids
- Prior art date
Links
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 title claims description 72
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 title claims description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 28
- 108010030048 bile salt sulfatase Proteins 0.000 title claims description 23
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 3
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 27
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 13
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 claims description 13
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims description 13
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 13
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 11
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 10
- 241000589518 Comamonas testosteroni Species 0.000 claims description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 6
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 3
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 40
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 40
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 6
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 5
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 101710172561 3alpha-hydroxysteroid dehydrogenase Proteins 0.000 description 3
- 102100024089 Aldo-keto reductase family 1 member C2 Human genes 0.000 description 3
- SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N Lithocholsaeure Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 3
- SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N lithocholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N 0.000 description 3
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000003858 bile acid conjugate Substances 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 2
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 description 2
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 description 2
- 229940099607 manganese chloride Drugs 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N (3beta,5beta,7alpha)-3,7-Dihydroxycholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUPXYSSGJWIURR-UHFFFAOYSA-N 3-octoxypropane-1,2-diol Chemical compound CCCCCCCCOCC(O)CO GUPXYSSGJWIURR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 1
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010007843 NADH oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N [1,10]phenanthroline Chemical compound C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1 DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N ammonium dihydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].OP(O)([O-])=O LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000387 ammonium dihydrogen phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229960001091 chenodeoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N chenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 1
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 229910000388 diammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019838 diammonium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N iodoacetic acid Chemical compound OC(=O)CI JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 235000011147 magnesium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019837 monoammonium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N nitro blue tetrazolium(2+) Chemical compound COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 229950008679 protamine sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000003797 solvolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 1
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003774 sulfhydryl reagent Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/902—Oxidoreductases (1.)
- G01N2333/904—Oxidoreductases (1.) acting on CHOH groups as donors, e.g. glucose oxidase, lactate dehydrogenase (1.1)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
Den foreliggende oppfinnelse vedrører renset gallesyresulfatsulfatase, dens fremstilling og fremgangsmåter for kvantitativt å bestemme gallesyre.
Enzymet ifølge oppfinnelsen er et anvendbart nytt enzym for kliniske undersøkelser, og kan anvendes for bestemmelse av sulfaterte gallesyrer, såsom gallesyrer hvori OH-gruppen i 3-stilling er sulfatert (heretter referert til som gallesyre-3a-sulfat), og for bestemmelse av gallesyre i blod eller urin.
Det er vel kjent at gallesyre i blod eller urin øker markert p.g.a. hepatobiliære sykdommer. Det er derfor en viktig sak å bestemme gallesyren i blod eller urin for å vurdere lever-funksjonen ved kliniske undersøkelser. Den konvensjonelle metoden for bestemmelse av gallesyre anvender den enzymatiske analyse-metoden hvori 3a-hydroksysteroid-dehydrogenase blir anvendt. Nevnte dehydrogenase oksyderer gallesyrer hvori OH-gruppen i 3-stilling er i a-konfigurasjonen (3a-hydroksy-gallesyre) til 3-oksogallesyrer, og reduserer på samme tid koenzymet /3-NAD til NADH. Ved bestemmelse av NADH blir 3a-hydroksygallesyrene bestemt. Ved den konvensjonelle kliniske undersøkelsen blir mengden av 3a-hydroksygallesyrer betraktet som den totale mengden av gallesyrer.
Gallesyrer i blod er imidlertid tilstede delvis som sulfaterte gallesyrer som er blitt sulfatert, og den hydrofile egenskapen blir forsterket ved sulfateringen, og utskillingen derav blir gjort lettere, slik at forholdet av sulfaterte gallesyrer i urin, spesielt 3a-sulfat-gallesyrer, blir øket ekstremt. Dehydrogenasen i metoden ifølge tidligere teknologi virker bare på 3a-hydroksygallesyrene, og det er derfor umulig, etter metoden ifølge tidligere teknologi å bestemme 3a-sulfat-gallesyrene hvori 3a-hydroksylgruppen er blitt sulfatert. Ved kliniske undersøkelser er det nødvendig å bestemme de totale gallesyre-3a-sulfåtene eller de totale gallesyrene innbefattet disse i urin eller blod, men gallesyresulfatase som er i stand til spesifikt å hydrolysere sulfatestergruppen i 3a-sulfat-gallesyrene, er enda ikke kjent.
Under disse omstendigheter, for å bestemme gallesyre-3a-sulfåtene, må derfor en prøve underkastes kolonnekromatografi for å adskille gallesyre-3a-sulfater, og deretter må sulfatgruppen i gallesyre-3a-sulfåtene hydrolyseres kjemisk ved solvolyse. En slik fremgangsmåte er imidlertid svært omstendelig og kan ikke lett anvendes ved de daglige kliniske undersøkelser.
Det er et formål ifølge oppfinnelsen å tilveiebringe en ny gallesyresulfatsulfatase som er i stand til spesifikt å hydrolysere sulfatestergruppen i gallesyre-3a-sulfater.
Det er et annet formål ifølge oppfinnelsen å tilveiebringe en fremgangsmåte for fremstilling av slik gallesyresulfatsulfatase.
Det er et annet formål ifølge oppfinnelsen å tilveiebringe en fremgangsmåte som er i stand til lett å bestemme de samlede gallesyre-3a-sulfåtene i blod eller urin, som det var umulig å måle ved den konvensjonelle enzymatiske fremgangsmåten.
Det er et ytterligere formål ifølge oppfinnelsen å tilveiebringe en fremgangsmåte som er i stand til lett å bestemme de totale gallesyrene, innbefattet gallesyre-3a-sulfåtene, i blod eller urin.
Andre formål og trekk ifølge oppfinnelsen vil fremkomme fra følgende beskrivelse.
Den foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en renset galle-syresulf atsulfatase , dens fremstilling, og fremgangsmåter for bestemmelse av gallesyrer, som definert i 1 til 4 nedenfor. 1. En renset gallesyresulfatsulfatase som har følgende egenskaper: (a) Virkning: Virker på 3a-sulfater av 5/3-gallesyrer slik at den hydrolyserer sulfatestergruppen i disse, og slik at den forandrer bindingskonfigurasjonen for den resulterende OH-gruppen fra a-konfigurasjon til ^-konfigurasjon, og derved frembringer 3/3-hydroksygallesyrer; (b) Substratspesifisitet: Den virker på 3a-sulfater av ikke-konjugerte 5/3-gallesyrer, og på 3a-sulfater av både glycin-konjugerte og taurin-konjugerte 5/3-gallesyrer; og (c) Optimalt pH-område: pH 8,5 + 0,5 og
(d) er aktivt i nærvær av luft.
2. Fremgangsmåte for fremstilling av en renset gallesyresulfatsulfatase omfattende dyrking av Pseudomonas testosteroni i et kulturmedium som inneholder gallesyre, og utvinning av galle-syresulf atsulfatase ifølge krav 1 fra den resulterende
kulturen.
3. Fremgangsmåte for bestemmelse av 3a-sulfater av 5/3-gallesyrer, som går ut på å bringe en gallesyresulfatsulfatase ifølge krav 1 og/3-hydroksysteroid-dehydrogenase til å virke på en prøve som inneholder 3a-sulfater av 5/3-gallesyrer i
nærvær av/3-NAD, og bestemmelse av den produserte NADH.
4. Fremgangsmåte for bestemmelse av total gallesyre som går ut på å bringe en gallesyresulfatsulfatase ifølge krav 1,/3-hydroksysteroid-dehydrogenase og 3a-hydroksysteroid-dehydrogenase til å virke på en prøve som inneholder 3a-sulfater av 5/3-gallesyrer og andre gallesyrer i nærvær av /3-NAD, og bestemmelse av den produserte NADH.
Som et resultat av intensiv forskning lyktes det de her-værende oppfinnere å oppnå en ny gallesyresulfatsulfatase som er i stand til spesifikt å hydrolysere sulfatestergruppen i gallesyre-3a-sulfater, og å oppdage at totale gallesyre-3a-sulfater i blod eller urin som ikke kunne måles ved den konvensjonelle enzymatiske fremgangsmåten, lett kan bestemmes ved kobling av nevnte enzym og /3-hydroksysteroid-dehydrogenase i nærvær av/3-NAD, og også å finne at totale gallesyrer omfattende gallesyre-3a-sulfater i blod eller urin lett kan bestemmes ved kobling av nevnte enzym, /3-hydroksysteroid-dehydrogenase og 3a-hydroksysteroid-dehydrogenase i nærvær av /3-NAD, og derved å fullføre oppfinnelsen.
Gallesyresulfatsulfatase ifølge oppfinnelsen (heretter referert til som det foreliggende enzym) er et enzym som produseres av Pseudomonas testosteroni.
De fysikalsk-kjemiske egenskapene for det foreliggende enzym blir ytterligere beskrevet i det følgende. Aktiviteten av det foreliggende enzym blir målt som følger. D.v.s. av det i en kvarts-celle blir plassert 0,1 ml av 2,5 mM vandig løsning av litocholinsyre-3a-sulfat (Sigma), 0,2 ml av 15 mM vandig løsning av/3-NAD (Oriental Yeast) , 1,0 ml av 0,1 M tris-saltsyre-bufferløsning (pH 8,0) og 1,55 ml destillert vann, og etter ekvilibrering ved 30°C, blir det dertil tilsatt i rekkefølge 0,05 ml av/3-hydroksysteroid-dehydrogenaseløsning (Sigma) (10 U/ml) og 0,1 ml av en løsning av det foreliggende enzym, og omsetningen blir gjennomført ved 30°C, og økningen av absorbansen ved 340 nm i omsetningens begynnelsestrinn blir bestemt. Under disse betingelsene blir den enzymaktiviteten som frembringer 1 uraol NADH/minutt definert som 1 enhet.
(a) Virkning: Virker på 3a-sulfater av gallesyrer slik at det hydrolyserer sulfatestergruppen og inverterer bindingskonfigurasjonen for den resulterende OH-gruppen fra a-konf igurasj on til /3-konf igurasj on, og derved frembringer
3/?-hydroksygallesyrer.
(b) Substratspesifisitet: Virker på 3a-sulfater av ikke-konjugerte gallesyrer, og 3a-sulfater både av glycin-konjugerte og taurin-konjugerte gallesyrer. Detaljene er vist i Tabell 1. (c) Optimal pH: PH 8,5 + 0,5 (Fig. 1). Fig. 1 er et diagram som viser forholdet mellom den relative aktiviteten av det foreliggende enzym og pH. (d) pH-stabilitet: pH 5,6 - 7,6 (Fig. 2). Fig. 2 er et diagram som viser forholdet mellom den relative aktiviteten av det foreliggende enzym og pH, når det foreliggende enzym får stå
ved 30°C i 16 timer.
(e) Optimal temperatur: 35°C + 5°C (Fig. 3). Fig. 3 er et diagram som viser forholdet mellom den relative aktiviteten av det foreliggende enzym og temperaturen. (f) Termisk stabilitet: Når det foreliggende enzym får stå ved pH 7,2 i 10 minutter, forblir aktiviteten på 100% ved en temperatur på 32°C eller lavere, men ved høyere temperaturer synker aktiviteten raskt, og blir 0% ved 50°C (Fig. 4).
Fig. 4 er et diagram som viser den termiske stabiliteten for
det foreliggende enzym.
(g) Molekylvekt: Som et resultat av måling ved høytrykksvæske-kromatografi ved anvendelse av gelfiltreringskolonne Shim-pack Diol-300 (Shimadzu), blir molekylvekten beregnet til å
være ca. 100.000.
(h) Km-verdi: Km-verdien for litocholinsyre-3a-sulfat:
6 x 10'<6>M. (i) Inhibering og aktivering: Aktivert av Mn<++>og inhibert av stoffer som virker på metallioner, såsom EDTA og o-fenan-trolin, etc. Knapt inhibert av SH-reagenser såsom p-klor-kvikksølvbenzoat og monojodeddiksyre. Detaljene er vist i Tabell 2.
Det foreliggende enzym er oppsamlet fra kulturen av Pseudomonas testosteroni. Pseudomonas testosteroni (heretter kalt denne organismen) er ikke spesielt begrenset, og en hvilken som helst kjent stamme kan anvendes. Fremfor alt foretrekkes Pseudomonas testosteroni ATCC 11996 registrert i American Type Culture Collection katalog over "Bacteria Phages rDNA vectors, 16th Ed., 1985, eller lignende.
Kulturmediet for anvendelse til kultivering av denne organismen er ikke spesielt begrenset, og et hvilket som helst kulturmedium kan anvendes så lenge som bakteriene av slekten Pseudomonas kan vokse deri, og eksempler på disse omfatter de som inneholder gjærekstrakt, pepton, kjøttekstrakt eller lignende som den organiske næringskilden, ammoniumfosfat, ammoniumnitrat, kaliumfosfat, natriumfosfat, magnesiumklorid og manganklorid som de uorganiske næringskildene. Dessuten er det essensielt for å frembringe det foreliggende enzym å tilsette en gallesyre til kulturmediet. Anvendbare gallesyrer innbefatter f.eks. cholin-syre, deoksycholinsyre, kenodeoksycholinsyre, litocholinsyresulfat og deres salter, og disse kan anvendes enkeltvis eller i det minste to av dem kan anvendes i kombinasjon. Mengden gallesyre som skal anvendes er ikke spesielt begrenset, men er vanligvis ca. 0,01 til 2,0 vekt-%, fortrinnsvis ca. 0,05 til 1,0 vekt-%.
Dyrkingen utføres fortrinnsvis under aerobe betingelser. Dyrkingstiden og temperaturen er ikke spesielt begrenset, men dyrkingstemperaturen er vanligvis ca. 22 til 35°C, fortrinnsvis ca. 26 til 30°C, og dyrkingstiden er vanligvis ca. 8 til 30 timer, fortrinnsvis ca. 12 til 24 timer. Ved dyrking i ca. 12 til 24 timer oppnår enzymaktiviteten sitt maksimum.
Fra bakteriecellene høstet etter dyrkingen kan det foreliggende enzymet oppnås ved f.eks. ekstraksjon. Ekstraksjonen gjøres ifølge konvensjonelle ekstraksjonsmetoder av enzymer i bakterieceller. F.eks. blir bakteriecellene ødelagt ved ultralyd-behandling, forskjellig mekanisk bearbeiding eller enzym-behandling, og deretter sentrifugert for å fraskille det uløselige stoffet, hvorved det oppnås en supernatant som inneholder det foreliggende enzym (rå enzymløsning). Ved rensing av denne rå enzymløsningen ved passende valg og kombinasjon av vanlig anvendte enzymrensemetoder, såsom behandling for å fjerne nukleinsyrer, ammoniumsulfatutsalting, ionebyttekromatografi, hydrofob kromatografi og gelfiltrering, kan det foreliggende enzym isoleres.
Det foreliggende enzym oppnådd på denne måten og/3-hydroksysteroid-dehydrogenase bringes til å virke på en prøve som inneholder gallesyre-3a-sulfater i nærvær av /3-NAD, og derved bestemmes gallesyre-3a-sulfåtene. D.v.s. at det foreliggende enzym omdanner gallesyre-3a-sulfåtene til 3/3-hydroksygallesyrer, og deretter omdanner/3-hydroksysteroid-dehydrogenasen 3/3-hydroksygallesyrene til 3-oksogallesyrer og reduserer samtidig NAD som er koenzymet for nevnte dehydrogenase til NADH. Når derfor den mengde NAD som er omdannet til NADH er bestemt, er gallesyre-3a-sulfatene bestemt.
/3-Hydroksysteroid-dehydrogenasen er ikke spesielt begrenset, og hvilke som helst kjente kan anvendes.
Mengdene av enzymene som skal anvendes, er ikke spesielt begrenset, men vanligvis blir det foreliggende enzym anvendt i en mengde på ca. 0,04 til 2,0 enheter, fortrinnsvis 0,1 til 1,0 enheter, og /3-hydroksysteroid-dehydrogenasen blir vanligvis anvendt i en mengde på ca. 0,05 til 2,0 enheter, fortrinnsvis 0,1 til 1,0 enheter. Mengden av/3-NAD som skal anvendes, er heller ikke spesielt begrenset, men den kan tilsettes slik at/3-NAD-konsentrasjonen i omsetningssystemet vanligvis er ca. 0,1 til 10 mM, fortrinnsvis ca. 0,5 til 5 mM. Enzymomsetningen blir vanligvis utført ved en temperatur på ca. 2 0 til 40°C, fortrinnsvis ca. 25 til 37°C, og i ca. 5 til 60 minutter, fortrinnsvis ca. 10 til 3 0 minutter.
NADH kan bestemmes ved en kjent fremgangsmåte såsom UV-
(340 nm) absorpsjonsmåling, fluorescensintensitetsmåling, reduktiv fargekolorimetri, eller den kolorimetriske fremgangsmåten hvor NADH-oksidase bringes til å virke på NADH, slik at det fra NADH kvantitativt utvikles hydrogenperoksyd som i sin tur bestemmes kolorimetrisk ved oksydativ farging.
I denne oppfinnelsen kan dessuten totale gallesyrer innbefattet gallesyre-3a-sulfat bestemmes ved å bringe 3a-hydroksysteroid-dehydrogenase, i tillegg til det foreliggende enzym og/3-hydroksysteroid-dehydrogenase, til å virke i nærvær av /3-NAD på en prøve inneholdende gallesyre-3a-sulfater og andre gallesyrer. Når urin eller blod anvendes som prøven som inneholder gallesyre-3a-sulfater og andre gallesyrer, bestemmes de totale gallesyrene i blod eller urin.
3a-hydroksysteroid-dehydrogenasen er ikke spesielt begrenset, og hvilke som helst kjente kan anvendes. Mengden av dehydrogenasen som skal anvendes, er ikke spesielt begrenset, men den er vanligvis ca. 0,04 til 2,0 enheter, fortrinnsvis ca. 0,1 til 1,0 enhet. Mengdene av andre enzymer (det foreliggende enzym og /3-hydroksysteroid-dehydrogenase) og/3-NAD, omsetningsbetingelser, og fremgangsmåten ved bestemmelse av det produserte NADH kan være de samme som når det gjelder bestemmelse av gallesyre-3a-sulfater.
EKSEMPEL
Eksempler er gitt nedenfor, i eksemplene skal "%" bety "vekt-%".
Eksempel 1
En 3 00 ml mengde av et kulturmedium (pH 6,9) omfattende 0,1% ammoniumdihydrogenfosfat, 0,1% diammoniumhydrogenfosfat, 0,2% kaliumdihydrogenfosfat, 0,01% magnesiumklorid, 0,01% manganklorid og 1,0% gjærekstrakt ble plassert i en 2-liter Erlenmeyer-flaske, og sterilisert i autoklav. Pseudomonas testosteroni ATCC 11996 ble inokulert, og ble dyrket i 24 timer ved 28°C under omrysting. Denne utsæd-kulturen ble inokulert i 30 liter sterilisert kulturmedium av samme sammensetning som ovenfor i en 50 liters krukke-fermentor, og på samme tid ble aseptisk tilsatt dertil 1,2 liter av 10% natriumcholat vandig løsning separat sterilisert, og dyrkingen ble fortsatt i 15 timer ved 28°C under omlufting og omrøring.
Kulturvellingen ble sentrifugert, og de oppnådde bakteriecellene ble oppslemmet i 30 mM fosfatbufferløsning (pH 7,2), og denne oppslemmingen ble tilført til en DYNO-laboratoriemølle (Willy A. Bachofen Machienenfabrik) for å rive cellene istykker. De resulterende sedimentene ble fjernet ved sentrifugering, og rå enzymløsning ble oppnådd. Den rå enzymløsningen ble behandlet med protaminsulfat for å fjerne nukleinsyre, etterfulgt av utsalting ved anvendelse av ammoniumsulfat. Fraksjonen utfelt under ammoniumsulfatfraksjoneringen ved 3 5 til 7 0% metning ble oppsamlet, og dialysert mot 10 mM fosfatbufferløsning (pH 7,2). Dialysatet ble ledet gjennom en kolonne av DEAE-cellulose (Whatman) ekvilibrert med 10 mM fosfatbufferløsning (pH 7,2).
De oppnådde ikke-adsorberte fraksjonene ble ledet gjennom en kolonne av DEAE-sefarose CL-6B (Pharmacia) ekvilibrert med 5 mM tris-saltsyrebufferløsning (pH 8,0). De oppnådde ikke-adsorberte fraksjonene ble konsentrert ved utsaltingsbehandling ved anvendelse av ammoniumsulfat, og ble adsorbert på oktylsefarose CL-4B- (Pharmacia) kolonne. Gjennom denne kolonnen ble ledet 50 mM fosfatbufferløsning, og de eluerende aktive fraksjonene ble konsentrert ved ultrafiltrering, etterfulgt av gelfiltrering ved å ledes gjennom en kolonne av sefakryl S-2 00 (Pharmacia) ekvilibrert med 50 mM fosfatbufferløsning inneholdende 0,15 M natriumklorid. De aktive fraksjonene ble avsaltet og konsentrert ved ultrafiltrering, og ga derved 480 enheter av gallesyresulfatsulfatase. Det rensede produktet ga et enkelt bånd i slab-gelelektroforese ved anvendelse av 7,5% akrylamid (pH 8,9).
Eksempel 2
Ved anvendelse av gallesyresulfatsulfatasen fremstilt i Eksempel 1, ble gallesyre-3a-sulfat bestemt.
Hver av de vandige løsningene (0,1 ml hver) av litocholin-syre-3a-sulfat, natriumsalt (Sigma) eller glykolitocholinsyre-3a-sulfat, natriumsalt (Sigma) med forskjellige konsentrasjoner ble tilsatt som substrat til 2,9 ml av 35 mM tris-saltsyrebuffer-løsning (pH 8,0) inneholdende 3 jitmol av/3-NAD (Oriental Yeast) , 0,5 enheter av/?-hydroksysteroid-dehydrogenase (Sigma) og 0,2 enheter av gallesyresulfatsulfatase, og blandingen fikk omsette seg i 10 minutter ved 30°C, og deretter ble målt absorbansen ved 340 nm. Resultatene er vist i Fig. 5, hvorifra det kan sees at konsentrasjonen av substratet og absorbansen er i positiv korrelasjon, hvilket viser at gallesyre-3a-sulfåtene kan bestemmes.
Eksempel 3
Reagens (1): 25,2 mg av /3-NAD (Oriental Yeast) , 7,6 mg av nitro-blå-tetrazolium (Dojin Kagaku Kenkyusho), og 10 enheter av diaforase (Sigma) ble løst i 25 ml av 50 mM tris-saltsyrebuffer-løsning (pH 8,0) inneholdende 0,3% NOIGEN ET-189 (ikke-ionisk overflateaktivt middel, fremstilt av Daiichi Kogyo Seiyaku).
Reagens (2): 0,4N saltsyre.
Måling: En 1,2 5 ml mengde av reagens (1) ble tilsatt til hver av de vandige løsningene (0,35 ml hver) av litocholinsyre-3a-sulfat, natriumsalt (Sigma) som hadde forskjellige konsentrasjoner, og holdt ved 37 °C i 5 minutter. Til denne blandingen ble tilsatt 0,05 ml av/S-hydroksysteroid-dehydrogenase (Sigma) løsning (10 enheter/ml) og 0,1 ml av gallesyresulfatsulfatase (2 enheter/ml) i den nevnte rekkefølgen og blandet sammen. Den resulterende blandingen ble holdt ved 37°C i 10 minutter for å utvikle farge. Deretter ble tilsatt 1,25 ml av Reagens (2) for å stoppe omsetningen, og absorbansen ved 560 nm ble målt. Utmerkede resultater som vist i Fig. 6 ble oppnådd.
Eksempel 4
Serumet med tilsetning av glykolitocholinsyre-3a-sulfat (GLCA-S) ble fortynnet med tilsetningsfritt serum til forskjellige konsentrasjoner, hvilket ga testsera.
Til 0,2 ml av testserumet ble tilsatt 0,15 ml destillert vann og 1,25 ml Reagens (1) anvendt i Eksempel 3, og GLCA-S ble bestemt på samme måten som i Eksempel 3. Resultatene er vist i Tabell 3.
Eksempel 5
Serumet med tilsetning av GLCA-S og glykolitocholinsyre (GLCA) ble fortynnet til forskjellige konsentrasjoner med tilsetningsfritt serum, hvilket ga testsera.
Til 0,2 ml av testserum ble tilsatt 0,15 ml destillert vann og 1,25 ml av Reagens (1) fra Eksempel 3. Deretter ble GLCA-S og GLCA bestemt på samme måten som i Eksempel 3, unntatt at en blanding av /?-hydroksysteroid-dehydrogenase og 3a-hydroksteroid-dehydrogenase (Sigma) (10 enheter/ml hver) ble anvendt istedenfor /3-hydroksysteroid-dehydrogenaseløsning. Resultatene er vist i Tabell 4.
Kort beskrivelse av tegningene
Fig. 1 er et diagram som viser den optimale pH for det foreliggende enzym. Fig. 2 er et diagram som viser pH-stabiliteten for det foreliggende enzym. Fig. 3 er et diagram som viser den optimale temperaturen for det foreliggende enzym. Fig. 4 er et diagram som viser den termiske stabiliteten for det foreliggende enzym. Fig. 5 og Fig. 6 er diagrammer som viser forholdet mellom konsentrasjonen av substratet (gallesyre-3a-sulfat) og absorbansen oppnådd ved utførelse av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen.
Claims (12)
1. Renset gallesyresulfatsulfatase,
karakterisert vedfølgende egenskaper: (a) Virkning: Virker på 3a-sulfater av 5/3-gallesyrer slik at den hydrolyserer sulfatestergruppen i disse og slik at den forandrer bindingskonfigurasjonen for den resulterende OH-gruppen fra a-konf igurasj onen til /3-konf igurasj onen, og derved frembringer 3/3-hydroksygallesyrer; (b) Substratspesifisitet: Virker på 3a-sulfater av ikke-konjugerte 5/3-gallesyrer, og på 3a-sulfater av både glycin-konjugerte og taurinkonjugerte 5/3-gallesyrer; (c) Optimalt pH-område: pH 8,5 ± 0,5 og (d) er aktivt i nærvær av luft.
2. Fremgangsmåte ved fremstilling av renset gallesyresulfatsulfatase ifølge krav1,karakterisert veddyrking av Pseudomonas testosteroni i et dyrkingsmedium inneholdende gallesyre, og utvinning av gallesyresulfatsulfatasen fra den resulterende kulturen.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 2,
karakterisert vedat Pseudomonas testosteroni er Pesudomonas testosteroni ATCC 11996.
4. Fremgangsmåte ved bestemmelse av 3a-sulfater av 5/3-gallesyrer,karakterisert vedå bringe en gallesyre-sulf atsulfatase ifølge krav 1, og /?-hydroksysteroid-dehydrogenase til å virke på en prøve inneholdende 3a-sulfater av 5/3-gallesyrer i nærvær av /3-NAD, og bestemmelse av den produserte NADH.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 4,
karakterisert vedat prøven inneholdende 3a-sulfater av 5/3-gallesyrer er blod eller urin.
6. Fremgangsmåte ifølge krav 4,
karakterisert vedat mengden av gallesyre-sulf atsulfatasen som skal anvendes, er 0,04 til 2,0 enheter/ml.
7. Fremgangsmåte ifølge krav 4,
karakterisert vedat mengden av /3-hydroksysteroid-dehydrogenasen som skal anvendes, er 0,05 til 2,0 enheter/ml.
8. Fremgangsmåte ved bestemmelse av total gallesyre,karakterisert vedtrinn for å bringe en gallesyre-sulf atsulfatase ifølge krav 1, /3-hydroksysteroid-dehydrogenase og 3a-hydroksystéroid-dehydrogenase til å virke på en prøve som inneholder 3a-sulfater av 5/3-gallesyrer og andre gallesyrer i nærvær av /3-NAD, og bestemmelse av det produserte NADH.
9. Fremgangsmåte ifølge krav 8,
karakterisert vedat prøven som inneholder 3a-sulfater av 5/3-gallesyrer og andre gallesyrer, er blod eller urin.
10. Fremgangsmåte ifølge krav 8,
karakterisert vedat mengden av gallesyre-sulf atsulfatase som skal anvendes, er 0,04 til 2,0 enheter/ml.
11. Fremgangsmåte ifølge krav 8,
karakterisert vedat mengden av /3-hydroksysteroid-dehydrogenase som skal anvendes, er 0,05 til 2,0 enheter/ml.
12. Fremgangsmåte ifølge krav 8,
karakterisert vedat mengden av 3a-hydroksysteroid-dehydrogenase som skal anvendes, er 0,04 til 2,0 enheter/ml.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63301415A JP2719709B2 (ja) | 1988-11-28 | 1988-11-28 | 胆汁酸硫酸サルファターゼ、その製造法及び胆汁酸の定量法 |
| PCT/JP1989/001186 WO1990006360A1 (en) | 1988-11-28 | 1989-11-21 | Bile acid sulfate sulfatase, process for its preparation and method for assaying bile acid |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO903342D0 NO903342D0 (no) | 1990-07-27 |
| NO903342L NO903342L (no) | 1990-09-21 |
| NO301843B1 true NO301843B1 (no) | 1997-12-15 |
Family
ID=17896604
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO903342A NO301843B1 (no) | 1988-11-28 | 1990-07-27 | Renset gallesyresulfatsulfatase, fremgangsmåte for fremstilling derav og fremgangsmåte for å måle gallesyre |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5091305A (no) |
| JP (1) | JP2719709B2 (no) |
| DE (1) | DE3991428C2 (no) |
| NO (1) | NO301843B1 (no) |
| WO (1) | WO1990006360A1 (no) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0564598A (ja) * | 1991-09-06 | 1993-03-19 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd | Ｎａｄｈ及びｎａｄｐｈの測定法 |
| JP3113947B2 (ja) * | 1992-02-28 | 2000-12-04 | マルキン忠勇株式会社 | 胆汁酸硫酸サルファターゼ遺伝子、新規な組み換え体ｄｎａ及び胆汁酸硫酸サルファターゼの製造法 |
| JP3864191B2 (ja) * | 1994-09-13 | 2006-12-27 | アークレイ株式会社 | 硫酸抱合型胆汁酸測定一体型多層分析用具 |
| JP3760250B2 (ja) * | 1995-12-21 | 2006-03-29 | マルキンバイオ株式会社 | 硫酸抱合型胆汁酸の定量法及びそのキット |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0687777B2 (ja) * | 1986-07-08 | 1994-11-09 | 第一化学薬品株式会社 | ３α―ヒドロキシステロイドオキシダーゼ組成物及びこれを用いる３α―ヒドロキシステロイドの定量法 |
-
1988
- 1988-11-28 JP JP63301415A patent/JP2719709B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1989
- 1989-11-21 US US07/548,932 patent/US5091305A/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-21 WO PCT/JP1989/001186 patent/WO1990006360A1/ja active Application Filing
- 1989-11-21 DE DE3991428A patent/DE3991428C2/de not_active Expired - Fee Related
-
1990
- 1990-07-27 NO NO903342A patent/NO301843B1/no not_active IP Right Cessation
-
1991
- 1991-04-15 US US07/684,799 patent/US5100795A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2719709B2 (ja) | 1998-02-25 |
| US5100795A (en) | 1992-03-31 |
| JPH02145183A (ja) | 1990-06-04 |
| DE3991428C2 (de) | 1996-10-10 |
| NO903342L (no) | 1990-09-21 |
| WO1990006360A1 (en) | 1990-06-14 |
| US5091305A (en) | 1992-02-25 |
| NO903342D0 (no) | 1990-07-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0204283B1 (en) | Uricase and a method for the preparation thereof | |
| EP0012446A1 (en) | Acidic uricase, its production and its use for the determination of uric acid | |
| Lillis et al. | Initiation of activation of a preemergent herbicide by a novel alkylsulfatase of Pseudomonas putida FLA | |
| JPH0364105B2 (no) | ||
| KR960015263B1 (ko) | 신규의 모노글리세라이드 리파제를 이용한 모노글리세라이드의 분석방법 | |
| US5068190A (en) | N-acetylhexosamine-dehydrogenase, process for producing same, method for the quantitative analysis of N-acetylglucosamine or N-acetylgalactosamine using same and kit for use in the quantitative analysis | |
| NO301843B1 (no) | Renset gallesyresulfatsulfatase, fremgangsmåte for fremstilling derav og fremgangsmåte for å måle gallesyre | |
| JP3041840B2 (ja) | 新規なグリセロールデヒドロゲナーゼ、その製法及びその用途 | |
| JP4511655B2 (ja) | ソルビトール脱水素酵素、それを産生する微生物およびその製造方法 | |
| JPH07170979A (ja) | 新規なクレアチンアミジノハイドロラーゼ及びその製造法 | |
| JP2647684B2 (ja) | トリグリセリドの分析用試薬および分析方法 | |
| US5385829A (en) | Method of assaying for acyl-L-carnitines and short-chain acyl-carnitines | |
| JP5470906B2 (ja) | カタラーゼ | |
| JP2017158441A (ja) | カタラーゼ | |
| JPH0284177A (ja) | Ｌ―フコースデヒドロゲナーゼ | |
| JP3152855B2 (ja) | 新規なソルビトールデヒドロゲナーゼ、その製造方法並びに該酵素を用いたソルビトールの定量のための試薬及び方法 | |
| NO171458B (no) | 3alfa-hydroksysteroid-oksydase, kvantitativ analyse av 3alfa-hydroksysteroid ved bruk derav, og et reagens for denne kvantitative analyse | |
| JP3031517B2 (ja) | 新規アスコルビン酸オキシダーゼ、その製法およびその用途 | |
| JP2827002B2 (ja) | アシルカルニチンの測定法 | |
| JP3035685B2 (ja) | ステロイドβ−硫酸サルファターゼ、その製造法及び胆汁酸３β−硫酸エステルの定量法 | |
| JP2929100B2 (ja) | アシルカルニチンの高感度測定法 | |
| JP2508828B2 (ja) | アシルポリアミンアミドヒドロラ―ゼおよびその製造法 | |
| JPH07265074A (ja) | 新規なクレアチンアミジノハイドロラーゼおよびその用途 | |
| JPH0556798A (ja) | α−アミラーゼ測定方法 | |
| JPH0775542B2 (ja) | 新規なアシルポリアミンアミドヒドロラーゼ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |