NO20120337L - Rekombinant adenovirus, isolert vertscelle inneholdende denne, sammensetning som omfatter det rekombinante adenoviruset og en anvendelse - Google Patents
Rekombinant adenovirus, isolert vertscelle inneholdende denne, sammensetning som omfatter det rekombinante adenoviruset og en anvendelseInfo
- Publication number
- NO20120337L NO20120337L NO20120337A NO20120337A NO20120337L NO 20120337 L NO20120337 L NO 20120337L NO 20120337 A NO20120337 A NO 20120337A NO 20120337 A NO20120337 A NO 20120337A NO 20120337 L NO20120337 L NO 20120337L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- adenovirus
- protein
- sequences
- recombinant
- seq
- Prior art date
Links
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 title claims description 127
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 196
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 172
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 104
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 54
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 50
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 47
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 47
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 47
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 35
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 28
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 claims description 25
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 25
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 22
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 claims description 21
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 claims description 21
- 101710145505 Fiber protein Proteins 0.000 claims description 20
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 20
- 101710094396 Hexon protein Proteins 0.000 claims description 19
- 101710173835 Penton protein Proteins 0.000 claims description 15
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 15
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 14
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims description 12
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 7
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 claims 2
- 241001135569 Human adenovirus 5 Species 0.000 claims 1
- 241000193096 Human adenovirus B3 Species 0.000 claims 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 abstract description 209
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 54
- 241000990167 unclassified Simian adenoviruses Species 0.000 abstract description 33
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 12
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 95
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 76
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 59
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 54
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 52
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 48
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 48
- 239000000047 product Substances 0.000 description 48
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 38
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 34
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 34
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 29
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 28
- 201000011001 Ebola Hemorrhagic Fever Diseases 0.000 description 27
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 27
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 25
- 241001217856 Chimpanzee adenovirus Species 0.000 description 24
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 24
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 24
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 24
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 22
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 22
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 20
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 18
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 18
- 230000006870 function Effects 0.000 description 17
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 17
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 17
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 17
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 16
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 16
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 16
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 15
- -1 subunit Proteins 0.000 description 15
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 14
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 14
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 14
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 14
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 14
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 13
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 13
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 13
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 13
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 description 12
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 12
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 11
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 11
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 10
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 10
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 10
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 9
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 9
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 9
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 9
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 9
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 9
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 7
- 241000713311 Simian immunodeficiency virus Species 0.000 description 7
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 7
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- 101001040800 Homo sapiens Integral membrane protein GPR180 Proteins 0.000 description 6
- 102100021244 Integral membrane protein GPR180 Human genes 0.000 description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 6
- 101710087110 ORF6 protein Proteins 0.000 description 6
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 6
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 6
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 6
- 108010030074 endodeoxyribonuclease MluI Proteins 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 6
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 6
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 6
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 6
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 6
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- CXURGFRDGROIKG-UHFFFAOYSA-N 3,3-bis(chloromethyl)oxetane Chemical compound ClCC1(CCl)COC1 CXURGFRDGROIKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 5
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 5
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 5
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 101710095001 Uncharacterized protein in nifU 5'region Proteins 0.000 description 5
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 5
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 5
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 4
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 4
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 4
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 4
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 4
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 4
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 4
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 4
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 101150066038 E4 gene Proteins 0.000 description 4
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 description 4
- 102100033295 Glial cell line-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 4
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 4
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 4
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101710149951 Protein Tat Proteins 0.000 description 4
- 101710185720 Putative ethidium bromide resistance protein Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 4
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 4
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 4
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 4
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 4
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 4
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- 239000013607 AAV vector Substances 0.000 description 3
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 3
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 3
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 3
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 3
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 3
- 102400000058 Neuregulin-1 Human genes 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 3
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 3
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 3
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 3
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 3
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 3
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 102000015395 alpha 1-Antitrypsin Human genes 0.000 description 3
- 108010050122 alpha 1-Antitrypsin Proteins 0.000 description 3
- 229940024142 alpha 1-antitrypsin Drugs 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 3
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 3
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 3
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 3
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 3
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 3
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 230000009258 tissue cross reactivity Effects 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 3
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 2
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 2
- UJFBVNPYHVIYBF-UHFFFAOYSA-N 5-o-(2-bromoethyl) 3-o-methyl 2,6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl)-1,4-dihydropyridine-3,5-dicarboxylate Chemical compound COC(=O)C1=C(C)NC(C)=C(C(=O)OCCBr)C1C1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1 UJFBVNPYHVIYBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 2
- 101100165660 Alternaria brassicicola bsc6 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000712891 Arenavirus Species 0.000 description 2
- 101100499295 Bacillus subtilis (strain 168) disA gene Proteins 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 208000003508 Botulism Diseases 0.000 description 2
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 2
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 2
- 102100031168 CCN family member 2 Human genes 0.000 description 2
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 206010061041 Chlamydial infection Diseases 0.000 description 2
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 2
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 2
- 108010005939 Ciliary Neurotrophic Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100031614 Ciliary neurotrophic factor Human genes 0.000 description 2
- 108010039419 Connective Tissue Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 108010069091 Dystrophin Proteins 0.000 description 2
- 102000001039 Dystrophin Human genes 0.000 description 2
- 101150029662 E1 gene Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 208000006825 Eastern Equine Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 201000005804 Eastern equine encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 241001115402 Ebolavirus Species 0.000 description 2
- 206010014587 Encephalitis eastern equine Diseases 0.000 description 2
- 206010014611 Encephalitis venezuelan equine Diseases 0.000 description 2
- 206010014614 Encephalitis western equine Diseases 0.000 description 2
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 2
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 2
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 2
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 2
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 2
- 241000713800 Feline immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 102000003971 Fibroblast Growth Factor 1 Human genes 0.000 description 2
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 2
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 2
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 2
- 241000711950 Filoviridae Species 0.000 description 2
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 2
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 2
- 108091010837 Glial cell line-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 206010018693 Granuloma inguinale Diseases 0.000 description 2
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 2
- 239000000095 Growth Hormone-Releasing Hormone Substances 0.000 description 2
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 102000003745 Hepatocyte Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 108090000100 Hepatocyte Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 2
- 108091054729 IRF family Proteins 0.000 description 2
- 101150032643 IVa2 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000016854 Interferon Regulatory Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 2
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 2
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 2
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 2
- 101150078498 MYB gene Proteins 0.000 description 2
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 2
- 102000050019 Membrane Cofactor Human genes 0.000 description 2
- 101710146216 Membrane cofactor protein Proteins 0.000 description 2
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 2
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 2
- 101710081079 Minor spike protein H Proteins 0.000 description 2
- 102100040604 Myotubularin-related protein 5 Human genes 0.000 description 2
- 108050003253 Myotubularin-related protein 5 Proteins 0.000 description 2
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 2
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 108090000556 Neuregulin-1 Proteins 0.000 description 2
- 101150007210 ORF6 gene Proteins 0.000 description 2
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 2
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 2
- 241000713112 Orthobunyavirus Species 0.000 description 2
- 241000150452 Orthohantavirus Species 0.000 description 2
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 2
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 description 2
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 2
- 101100226894 Phomopsis amygdali PaGT gene Proteins 0.000 description 2
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 2
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 2
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 2
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 2
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 description 2
- 101710149136 Protein Vpr Proteins 0.000 description 2
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 2
- 206010037688 Q fever Diseases 0.000 description 2
- 241000702263 Reovirus sp. Species 0.000 description 2
- 241000606651 Rickettsiales Species 0.000 description 2
- 101100368917 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) taz1 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000004446 Serum Response Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010042291 Serum Response Factor Proteins 0.000 description 2
- 208000001203 Smallpox Diseases 0.000 description 2
- 102100022831 Somatoliberin Human genes 0.000 description 2
- 101710142969 Somatoliberin Proteins 0.000 description 2
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- 102000036693 Thrombopoietin Human genes 0.000 description 2
- 108010041111 Thrombopoietin Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 208000034784 Tularaemia Diseases 0.000 description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 2
- 108010062497 VLDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 208000002687 Venezuelan Equine Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 201000009145 Venezuelan equine encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 101710201961 Virion infectivity factor Proteins 0.000 description 2
- 208000005466 Western Equine Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 201000005806 Western equine encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 229940077737 brain-derived neurotrophic factor Drugs 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 2
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 108010078428 env Gene Products Proteins 0.000 description 2
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 2
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 2
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 210000004898 n-terminal fragment Anatomy 0.000 description 2
- 201000009240 nasopharyngitis Diseases 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 description 2
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 108010079892 phosphoglycerol kinase Proteins 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035408 type 1 diabetes mellitus 1 Diseases 0.000 description 2
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 2
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 2
- UBWXUGDQUBIEIZ-UHFFFAOYSA-N (13-methyl-3-oxo-2,6,7,8,9,10,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl) 3-phenylpropanoate Chemical compound CC12CCC(C3CCC(=O)C=C3CC3)C3C1CCC2OC(=O)CCC1=CC=CC=C1 UBWXUGDQUBIEIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- XKZQKPRCPNGNFR-UHFFFAOYSA-N 2-(3-hydroxyphenyl)phenol Chemical compound OC1=CC=CC(C=2C(=CC=CC=2)O)=C1 XKZQKPRCPNGNFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 1
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 1
- 101150079978 AGRN gene Proteins 0.000 description 1
- 108010059616 Activins Proteins 0.000 description 1
- 102000005606 Activins Human genes 0.000 description 1
- 108010057360 Adenovirus E1 Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700026758 Adenovirus hexon capsid Proteins 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 102100040026 Agrin Human genes 0.000 description 1
- 108700019743 Agrin Proteins 0.000 description 1
- 108010080691 Alcohol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 1
- 208000004881 Amebiasis Diseases 0.000 description 1
- 206010001980 Amoebiasis Diseases 0.000 description 1
- 102000009840 Angiopoietins Human genes 0.000 description 1
- 108010009906 Angiopoietins Proteins 0.000 description 1
- 102400000068 Angiostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010079709 Angiostatins Proteins 0.000 description 1
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000004452 Arginase Human genes 0.000 description 1
- 108700024123 Arginases Proteins 0.000 description 1
- 206010003267 Arthritis reactive Diseases 0.000 description 1
- 201000002909 Aspergillosis Diseases 0.000 description 1
- 208000036641 Aspergillus infections Diseases 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000700663 Avipoxvirus Species 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010044583 Bartonella Infections Diseases 0.000 description 1
- 206010005098 Blastomycosis Diseases 0.000 description 1
- 241000712005 Bovine respirovirus 3 Species 0.000 description 1
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 1
- 206010006500 Brucellosis Diseases 0.000 description 1
- 206010069748 Burkholderia pseudomallei infection Diseases 0.000 description 1
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 208000027312 Bursal disease Diseases 0.000 description 1
- 101710186200 CCAAT/enhancer-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 108010063916 CD40 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102100022002 CD59 glycoprotein Human genes 0.000 description 1
- 208000008889 California Encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 description 1
- 241000712083 Canine morbillivirus Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000700664 Capripoxvirus Species 0.000 description 1
- 108090000489 Carboxy-Lyases Proteins 0.000 description 1
- 102000004031 Carboxy-Lyases Human genes 0.000 description 1
- 241000242722 Cestoda Species 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 206010008803 Chromoblastomycosis Diseases 0.000 description 1
- 208000015116 Chromomycosis Diseases 0.000 description 1
- 241001112696 Clostridia Species 0.000 description 1
- 241000193155 Clostridium botulinum Species 0.000 description 1
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 1
- 241000223205 Coccidioides immitis Species 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 208000009802 Colorado tick fever Diseases 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 101710139375 Corneodesmosin Proteins 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 241001445332 Coxiella <snail> Species 0.000 description 1
- 241000709687 Coxsackievirus Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 201000007336 Cryptococcosis Diseases 0.000 description 1
- 241000221204 Cryptococcus neoformans Species 0.000 description 1
- 102000005636 Cyclic AMP Response Element-Binding Protein Human genes 0.000 description 1
- 108010045171 Cyclic AMP Response Element-Binding Protein Proteins 0.000 description 1
- 102100023580 Cyclic AMP-dependent transcription factor ATF-4 Human genes 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 description 1
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 1
- 241000710829 Dengue virus group Species 0.000 description 1
- 206010012504 Dermatophytosis Diseases 0.000 description 1
- 208000000655 Distemper Diseases 0.000 description 1
- 101100118093 Drosophila melanogaster eEF1alpha2 gene Proteins 0.000 description 1
- UPEZCKBFRMILAV-JNEQICEOSA-N Ecdysone Natural products O=C1[C@H]2[C@@](C)([C@@H]3C([C@@]4(O)[C@@](C)([C@H]([C@H]([C@@H](O)CCC(O)(C)C)C)CC4)CC3)=C1)C[C@H](O)[C@H](O)C2 UPEZCKBFRMILAV-JNEQICEOSA-N 0.000 description 1
- 241001466953 Echovirus Species 0.000 description 1
- 241000588877 Eikenella Species 0.000 description 1
- 206010014596 Encephalitis Japanese B Diseases 0.000 description 1
- 206010014584 Encephalitis california Diseases 0.000 description 1
- 206010014612 Encephalitis viral Diseases 0.000 description 1
- 206010053025 Endemic syphilis Diseases 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 241000700572 Entomopoxvirinae Species 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 206010066919 Epidemic polyarthritis Diseases 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000710803 Equine arteritis virus Species 0.000 description 1
- 241000713730 Equine infectious anemia virus Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000186810 Erysipelothrix rhusiopathiae Species 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 241000725579 Feline coronavirus Species 0.000 description 1
- 241000711475 Feline infectious peritonitis virus Species 0.000 description 1
- 241000714165 Feline leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241000701915 Feline panleukopenia virus Species 0.000 description 1
- 241000701925 Feline parvovirus Species 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- 201000006353 Filariasis Diseases 0.000 description 1
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 description 1
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 1
- 241000589602 Francisella tularensis Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 1
- 101710177291 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000701047 Gallid alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 101001066288 Gallus gallus GATA-binding factor 3 Proteins 0.000 description 1
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- 102000003676 Glucocorticoid Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000079 Glucocorticoid Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 102000003638 Glucose-6-Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010086800 Glucose-6-Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108010015451 Glutaryl-CoA Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102100028603 Glutaryl-CoA dehydrogenase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 206010072579 Granulomatosis with polyangiitis Diseases 0.000 description 1
- 229940033330 HIV vaccine Drugs 0.000 description 1
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 description 1
- 206010061192 Haemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 108090000031 Hedgehog Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003693 Hedgehog Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 206010019851 Hepatotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 description 1
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 description 1
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 description 1
- 101710155188 Hexon-interlacing protein Proteins 0.000 description 1
- 201000002563 Histoplasmosis Diseases 0.000 description 1
- 101150068639 Hnf4a gene Proteins 0.000 description 1
- 101000897400 Homo sapiens CD59 glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 101000974934 Homo sapiens Cyclic AMP-dependent transcription factor ATF-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000905743 Homo sapiens Cyclic AMP-dependent transcription factor ATF-4 Proteins 0.000 description 1
- 101000997829 Homo sapiens Glial cell line-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- 101000979333 Homo sapiens Neurofilament light polypeptide Proteins 0.000 description 1
- 101000837845 Homo sapiens Transcription factor E3 Proteins 0.000 description 1
- 101000837829 Homo sapiens Transcription factor IIIA Proteins 0.000 description 1
- 101001049954 Human adenovirus C serotype 2 Early 4 ORF6 protein Proteins 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- 241001207270 Human enterovirus Species 0.000 description 1
- 241000726041 Human respirovirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000712003 Human respirovirus 3 Species 0.000 description 1
- 241001559187 Human rubulavirus 2 Species 0.000 description 1
- 241001559186 Human rubulavirus 4 Species 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 108010056651 Hydroxymethylbilane synthase Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 241000711450 Infectious bronchitis virus Species 0.000 description 1
- 108010004250 Inhibins Proteins 0.000 description 1
- 102000002746 Inhibins Human genes 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 1
- 108090001117 Insulin-Like Growth Factor II Proteins 0.000 description 1
- 102000048143 Insulin-Like Growth Factor II Human genes 0.000 description 1
- 102100034353 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010013792 Isovaleryl-CoA Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102100025392 Isovaleryl-CoA dehydrogenase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 201000005807 Japanese encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 241000710843 Japanese encephalitis virus group Species 0.000 description 1
- 201000009908 La Crosse encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 206010023927 Lassa fever Diseases 0.000 description 1
- 101710192606 Latent membrane protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 208000004554 Leishmaniasis Diseases 0.000 description 1
- 241000700563 Leporipoxvirus Species 0.000 description 1
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 1
- 206010024238 Leptospirosis Diseases 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 102000004058 Leukemia inhibitory factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000581 Leukemia inhibitory factor Proteins 0.000 description 1
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 1
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 1
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 description 1
- 102000004317 Lyases Human genes 0.000 description 1
- 241000701043 Lymphocryptovirus Species 0.000 description 1
- 241000711828 Lyssavirus Species 0.000 description 1
- 108010059343 MM Form Creatine Kinase Proteins 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 241001115401 Marburgvirus Species 0.000 description 1
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 101710127721 Membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 108010085747 Methylmalonyl-CoA Decarboxylase Proteins 0.000 description 1
- 102000019010 Methylmalonyl-CoA Mutase Human genes 0.000 description 1
- 108010051862 Methylmalonyl-CoA mutase Proteins 0.000 description 1
- 241001460074 Microsporum distortum Species 0.000 description 1
- 101710169105 Minor spike protein Proteins 0.000 description 1
- 102000014962 Monocyte Chemoattractant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010064136 Monocyte Chemoattractant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000588621 Moraxella Species 0.000 description 1
- 241000712045 Morbillivirus Species 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 241000711386 Mumps virus Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000701034 Muromegalovirus Species 0.000 description 1
- 101100335081 Mus musculus Flt3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100365003 Mus musculus Scel gene Proteins 0.000 description 1
- 241000041810 Mycetoma Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 206010028470 Mycoplasma infections Diseases 0.000 description 1
- 241000202934 Mycoplasma pneumoniae Species 0.000 description 1
- 102100032970 Myogenin Human genes 0.000 description 1
- 108010056785 Myogenin Proteins 0.000 description 1
- 102100026057 Myosin regulatory light chain 2, atrial isoform Human genes 0.000 description 1
- 101710098224 Myosin regulatory light chain 2, atrial isoform Proteins 0.000 description 1
- 208000006007 Nairobi Sheep Disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 102000014413 Neuregulin Human genes 0.000 description 1
- 108050003475 Neuregulin Proteins 0.000 description 1
- 102100029268 Neurotrophin-3 Human genes 0.000 description 1
- 102100033857 Neurotrophin-4 Human genes 0.000 description 1
- 102100021584 Neurturin Human genes 0.000 description 1
- 108010015406 Neurturin Proteins 0.000 description 1
- 206010029443 Nocardia Infections Diseases 0.000 description 1
- 206010029444 Nocardiosis Diseases 0.000 description 1
- 102000019040 Nuclear Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010051791 Nuclear Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000007999 Nuclear Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010089610 Nuclear Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007399 Nuclear hormone receptor Human genes 0.000 description 1
- 108020005497 Nuclear hormone receptor Proteins 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000702259 Orbivirus Species 0.000 description 1
- 102000007981 Ornithine carbamoyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 101710198224 Ornithine carbamoyltransferase, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 241000150218 Orthonairovirus Species 0.000 description 1
- 241000700629 Orthopoxvirus Species 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 241001504519 Papio ursinus Species 0.000 description 1
- 241000700639 Parapoxvirus Species 0.000 description 1
- 241000606860 Pasteurella Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 108010069013 Phenylalanine Hydroxylase Proteins 0.000 description 1
- 102100038223 Phenylalanine-4-hydroxylase Human genes 0.000 description 1
- 241000713137 Phlebovirus Species 0.000 description 1
- 102000014750 Phosphorylase Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010064071 Phosphorylase Kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000009097 Phosphorylases Human genes 0.000 description 1
- 108010073135 Phosphorylases Proteins 0.000 description 1
- 206010035039 Piloerection Diseases 0.000 description 1
- 208000004842 Pinta Diseases 0.000 description 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 1
- 241000233872 Pneumocystis carinii Species 0.000 description 1
- 241000711902 Pneumovirus Species 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 1
- 241000156302 Porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus Species 0.000 description 1
- 241000702619 Porcine parvovirus Species 0.000 description 1
- 241001135989 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Species 0.000 description 1
- 102100034391 Porphobilinogen deaminase Human genes 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 101710192141 Protein Nef Proteins 0.000 description 1
- 101710150344 Protein Rev Proteins 0.000 description 1
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 101000918244 Pseudoalteromonas phage PM2 Peptidoglycan hydrolase P7 Proteins 0.000 description 1
- 101000584831 Pseudoalteromonas phage PM2 Protein P6 Proteins 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 206010037151 Psittacosis Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108091081062 Repeated sequence (DNA) Proteins 0.000 description 1
- 241001068263 Replication competent viruses Species 0.000 description 1
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 1
- 241000701037 Rhadinovirus Species 0.000 description 1
- 206010051497 Rhinotracheitis Diseases 0.000 description 1
- 208000000705 Rift Valley Fever Diseases 0.000 description 1
- 208000006257 Rinderpest Diseases 0.000 description 1
- 206010039207 Rocky Mountain Spotted Fever Diseases 0.000 description 1
- 241000710942 Ross River virus Species 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 description 1
- 241000710801 Rubivirus Species 0.000 description 1
- 241001533467 Rubulavirus Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 108050003978 Semaphorin Proteins 0.000 description 1
- 102000014105 Semaphorin Human genes 0.000 description 1
- 102000013008 Semaphorin-3A Human genes 0.000 description 1
- 108010090319 Semaphorin-3A Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 241000710960 Sindbis virus Species 0.000 description 1
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 101710198474 Spike protein Proteins 0.000 description 1
- 241000605008 Spirillum Species 0.000 description 1
- 206010041736 Sporotrichosis Diseases 0.000 description 1
- 206010041896 St. Louis Encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 241000710888 St. Louis encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 241001478880 Streptobacillus moniliformis Species 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 241000700568 Suipoxvirus Species 0.000 description 1
- 101001062859 Sus scrofa Fatty acid-binding protein, adipocyte Proteins 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101710109576 Terminal protein Proteins 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 208000002474 Tinea Diseases 0.000 description 1
- 241000223997 Toxoplasma gondii Species 0.000 description 1
- 101001023030 Toxoplasma gondii Myosin-D Proteins 0.000 description 1
- 201000005485 Toxoplasmosis Diseases 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102100028507 Transcription factor E3 Human genes 0.000 description 1
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 1
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 1
- 241000242541 Trematoda Species 0.000 description 1
- 241000869417 Trematodes Species 0.000 description 1
- 206010044608 Trichiniasis Diseases 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100031988 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Human genes 0.000 description 1
- 108050002568 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Proteins 0.000 description 1
- 108091000117 Tyrosine 3-Monooxygenase Proteins 0.000 description 1
- 102000048218 Tyrosine 3-monooxygenases Human genes 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 101710135104 Uncharacterized protein p6 Proteins 0.000 description 1
- 101150004676 VGF gene Proteins 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 241000701067 Varicellovirus Species 0.000 description 1
- 241000870995 Variola Species 0.000 description 1
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 1
- 241000711970 Vesiculovirus Species 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000028227 Viral hemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 241000710951 Western equine encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 description 1
- 241001492404 Woodchuck hepatitis virus Species 0.000 description 1
- 208000003152 Yellow Fever Diseases 0.000 description 1
- 241000120645 Yellow fever virus group Species 0.000 description 1
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 1
- 206010061418 Zygomycosis Diseases 0.000 description 1
- 241000606834 [Haemophilus] ducreyi Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 201000007691 actinomycosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000000488 activin Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 208000012873 acute gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 108700025771 adenovirus penton Proteins 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- UPEZCKBFRMILAV-UHFFFAOYSA-N alpha-Ecdysone Natural products C1C(O)C(O)CC2(C)C(CCC3(C(C(C(O)CCC(C)(C)O)C)CCC33O)C)C3=CC(=O)C21 UPEZCKBFRMILAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- FZCSTZYAHCUGEM-UHFFFAOYSA-N aspergillomarasmine B Natural products OC(=O)CNC(C(O)=O)CNC(C(O)=O)CC(O)=O FZCSTZYAHCUGEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150036080 at gene Proteins 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000008680 babesiosis Diseases 0.000 description 1
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 description 1
- 206010004145 bartonellosis Diseases 0.000 description 1
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 101150049515 bla gene Proteins 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 208000003836 bluetongue Diseases 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 238000012410 cDNA cloning technique Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 description 1
- 208000014058 canine distemper Diseases 0.000 description 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 201000000902 chlamydia Diseases 0.000 description 1
- 208000012538 chlamydia trachomatis infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 1
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 1
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 1
- 201000003486 coccidioidomycosis Diseases 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 201000003740 cowpox Diseases 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 description 1
- 201000001981 dermatomyositis Diseases 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- UPEZCKBFRMILAV-JMZLNJERSA-N ecdysone Chemical compound C1[C@@H](O)[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@@H]([C@H](O)CCC(C)(C)O)C)CC[C@]33O)C)C3=CC(=O)[C@@H]21 UPEZCKBFRMILAV-JMZLNJERSA-N 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 239000012645 endogenous antigen Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009585 enzyme analysis Methods 0.000 description 1
- 102000012803 ephrin Human genes 0.000 description 1
- 108060002566 ephrin Proteins 0.000 description 1
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 108700014844 flt3 ligand Proteins 0.000 description 1
- 229940014144 folate Drugs 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 229940118764 francisella tularensis Drugs 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 1
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000007274 generation of a signal involved in cell-cell signaling Effects 0.000 description 1
- 230000009395 genetic defect Effects 0.000 description 1
- 201000006592 giardiasis Diseases 0.000 description 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 1
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 244000000013 helminth Species 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000304 hepatotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007686 hepatotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 239000000852 hydrogen donor Substances 0.000 description 1
- 238000010820 immunofluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000003960 inflammatory cascade Effects 0.000 description 1
- 239000000893 inhibin Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 150000004715 keto acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 238000007449 liver function test Methods 0.000 description 1
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 208000001581 lymphogranuloma venereum Diseases 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 201000004015 melioidosis Diseases 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- 230000000921 morphogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 201000007524 mucormycosis Diseases 0.000 description 1
- 238000002887 multiple sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 1
- 108010081726 netrin-2 Proteins 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 108700007229 noggin Proteins 0.000 description 1
- 102000045246 noggin Human genes 0.000 description 1
- NJPPVKZQTLUDBO-UHFFFAOYSA-N novaluron Chemical compound C1=C(Cl)C(OC(F)(F)C(OC(F)(F)F)F)=CC=C1NC(=O)NC(=O)C1=C(F)C=CC=C1F NJPPVKZQTLUDBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004017 nuclear receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 201000000901 ornithosis Diseases 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009984 peri-natal effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000005371 pilomotor reflex Effects 0.000 description 1
- 208000011079 pinta disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 238000000164 protein isolation Methods 0.000 description 1
- 208000009305 pseudorabies Diseases 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002574 reactive arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000014493 regulation of gene expression Effects 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000001718 repressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 1
- 108010078070 scavenger receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000014452 scavenger receptors Human genes 0.000 description 1
- 201000004409 schistosomiasis Diseases 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 1
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-N sodium;5-ethyl-5-pentan-2-yl-1,3-diazinane-2,4,6-trione Chemical compound [Na+].CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 108020003113 steroid hormone receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005969 steroid hormone receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 241001147422 tick-borne encephalitis virus group Species 0.000 description 1
- 231100000583 toxicological profile Toxicity 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 208000003982 trichinellosis Diseases 0.000 description 1
- 201000007588 trichinosis Diseases 0.000 description 1
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 1
- 201000002311 trypanosomiasis Diseases 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 241000724775 unclassified viruses Species 0.000 description 1
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 201000006266 variola major Diseases 0.000 description 1
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 201000002498 viral encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 102000009310 vitamin D receptors Human genes 0.000 description 1
- 108050000156 vitamin D receptors Proteins 0.000 description 1
- 101150040614 vpx gene Proteins 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 201000009482 yaws Diseases 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/235—Adenoviridae
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10321—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10361—Methods of inactivation or attenuation
- C12N2710/10362—Methods of inactivation or attenuation by genetic engineering
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/17011—Spumavirus, e.g. chimpanzee foamy virus
- C12N2740/17022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/14011—Filoviridae
- C12N2760/14111—Ebolavirus, e.g. Zaire ebolavirus
- C12N2760/14134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/20011—Rhabdoviridae
- C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
- C12N2760/20122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/001—Vector systems having a special element relevant for transcription controllable enhancer/promoter combination
- C12N2830/002—Vector systems having a special element relevant for transcription controllable enhancer/promoter combination inducible enhancer/promoter combination, e.g. hypoxia, iron, transcription factor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/55—Vector systems having a special element relevant for transcription from bacteria
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Det beskrives en rekombinant vektor omfattende simianadenovirussekvenser og heterologt gen under kontroll av regulatoriske sekvenser. Det beskrives videre en cellelinje som uttrykker ett eller flere simianadenovirusgener. Det beskrives fremgangsmåter for anvendelse av vektorene og cellelinjene.
Description
OPPFINNELSENS BAKGRUNN
Adenovirus er et dobbeltrådet DNA-virus med genomstørrelse på rundt 36 kilobaser (kb), som har funnet utstrakt anvendelse for genoverføringsapplikasjoner pga. dets evne til å oppnå meget effektiv genoverføring i en varietet av målvev, og har stor transgenkapasitet. Konvensjonelt blir El-gener av adenovirus deletert og erstattet med en transgenkassett bestående av den valgte promoter, cDNA-sekvensen fra genet av interesse og et poly-A-signal, som resulterer i et replikasjonsdefekt, rekombinant virus. Adenovirus har en karakteristisk morfologi med et icosahedralkapsid bestående av tre hovedproteiner, hexon (II), pentonbaser (III) og en knoppet (knobbed) fiber (IV), sammen med et antall andre mindre proteiner, VI, VIII, IX, Illa og IVa2 [W. C. Russel,
J. Gen. Virol, F81: 2573-2604 (Nov. 2000)]. Virusgenomet er et lineært, dobbeltrådet DNA med et terminalprotein festet kovalent ved 5' ende, som har inverterte terminal-repetisjoner (ITR). Virus-DNA er intimt assosiert med det sterkt basiske protein-VII og et lite peptid kalt mu. Et annet protein, V, er pakket med dette DNA-proteinkompleks og gir en strukturell forbindelse til kapsidet via protein-VI. Viruset inneholder også en viruskodet protease, som er nødvendig for prosessering av noen av de strukturelle proteiner for å gi modent, infeksiøst virus.
Rekombinante adenovirus er beskrevet for avlevering til molekyler hos vertsceller. Se U.S. patent nr. 6 083 716, som beskriver genomet av to sjimpanse-adenovirus.
Hva som behøves i teknikken, er mer effektive vektorer som unngår effekten av foreksisterende immunitet mot valgte adenovirusserotyper i populasjonen, og/eller som er brukbare for gjentatt administrering og for titerforsterkning ved den andre vaksinasjonen, om dette er nødvendig.
Oppsummering av oppfinnelsen
Foreliggende oppfinnelse omfatter rekombinante adenovirus, isolert vertscelle som omfatter nevnte rekombinante andenovirus, sammensetning omfattende det rekombinante adenovirus samt en anvendelse.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer de isolerte nukleinsyresekvenser og aminosyresekvenser av seks simianadenovirus, vektorer som inneholder disse sekvenser og cellelinjer som uttrykker simian-adenovirusgener. Tilveiebrakt er også et antall fremgangsmåter for anvendelse av disse vektorene og celler ifølge foreliggende oppfinnelse.
Fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen involverer avlevering av ett eller flere utvalgte heterologe gener til en pattedyrpasient ved tilførsel av en vektor ifølge oppfinnelsen. Fordi de forskjellige vektorkonstruksjoner er avledet fra simian-adenovirus og ikke fra humant adenovirus, blir immunsystemet hos den ikke-simian humane- eller veterinærpasient ikke primet til å respondere umiddelbart på vektoren som et fremmed antigen. Anvendelsen av preparatene ifølge oppfinnelsen tillater således mer stabil ekspresjon av det valgte transgen, når dette tilføres til en ikke-simian pasient. Ifølge oppfinnelsen tillater anvendelsen av preparatene for vaksinasjon, presentasjon av et utvalgt antigen for å frembringe beskyttende immunresponser. Uten ønske om å være bundet av noen teori, er adenovirusenes evner ifølge oppfinnelsen til å transdusere humandendrittiske celler i det minste delvis ansvarlig for evnen hos de rekombinante konstruksjoner ifølge oppfinnelsen til å indusere en immunrespons. De rekombinante simianadenovirus ifølge oppfinnelsen kan også anvendes for produksjon av heterologe genprodukter in vitro. Slike genprodukter er i seg selv anvendelige i et antall formål, som beskrevet her.
Disse og andre utførelsesformer og fordeler ved oppfinnelsen er beskrevet mer detaljert nedenfor.
Kort beskrivelse av figurene
Figur 1 viser en oppstilling av aminosyresekvensene av LI- og en del av L2-løkkene i kapsidproteinhexon av sjimpanseadenovirus Cl [SEKV. ID nr. 13], sjimpanseadenovirus C68 (Pan9) [SEKV. ID nr. 14], og de nye Pan5 [SEKV. ID nr. 15], Pan6 [SEKV. ID nr. 16] og Pan7 [SEKV. ID nr. 17] sjimpanseadenovirus-sekvensene ifølge oppfinnelsen. Det intervenerende bevarte området er en del av pidestall-doménet som er bevart mellom adenovirusserotypene. Figur 2 viser en oppstilling av aminosyresekvensene av fiberknoppdoménene av sjimpanse-C68 (Pan-9) [SEKV. ID nr. 18], Pan6 [SEKV. ID nr. 19], Pan7 [SEKV. ID nr. 20] og Pan5 [SEKV. ID nr. 21], og de humane adenovirusserotypene 2 [SEKV. ID nr. 22] og 5 [SEKV. ID nr. 23].
DETALJERT BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN
Oppfinnelsen tilveiebringer nye nukleinsyre- og aminosyresekvenser fra Ad-Pan5 [SEKV. ID nr. 1-4, 15 og 21], Ad-Pan6 [SEKV. ID nr. 5-8, 16, 19], og Ad-serotype Pan7 [SEKV. ID nr. 9-12,17, 20], som opprinnelig ble isolert fra sjimpanse-lymfeknuter. I flere tilfeller gjennom beskrivelsen er disse adenovirus alternativt angitt som C5, C6 henholdsvis C7. Det tilveiebringes videre sekvenser fra adenovirus SV-1 [SEKV. ID nr. 24-28], som opprinnelig ble isolert fra cynomolgusapenyreceller. Oppfinnelsen tilveiebringer også sekvenser fra adenovirus SV-25 [SEKV. ID nr. 29-33] og SV-39 [SEKV. ID nr. 34-37], som opprinnelig ble isolert fra rhesusapenyreceller.
Den foreliggende oppfinnelse tilveiebringer nye adenovirusvektorer og pakking av cellelinjer for tilveiebringelse av disse vektorer for anvendelse ved in vi/ro-produksjon av rekombinante proteiner, eller fragmenter eller andre reagenser. Oppfinnelsen tilveiebringer videre preparater for anvendelse ved avlevering av et heterologt molekyl for terapeutisk- eller vaksineformål. Slike terapeutiske eller vaksinepreparater inneholder de adenovirale vektorer som bærer et innskutt, heterologt molekyl. I tillegg er de nye sekvensene ifølge oppfinnelsen anvendelige ved tilveiebringelse av de essensielle hjelperfunksjoner nødvendige for fremstilling av rekombinante adenoassosierte virale (AAV) vektorer. Oppfinnelsen tilveiebringer således hjelperkonstruksjoner, fremgangsmåter og cellelinjer som anvender disse sekvenser i slike produksj onsfremgangsmåter.
Uttrykket "vesentlig homologi" eller "vesentlig likhet" anvendt under henvisning til en nukleinsyre eller et fragment derav, indikerer at det er nukleotidsekvensidentitet i det minste i omkring 95 % til 99 % av de oppstilte sekvensene, når optimalt oppstilt med egnete nukleotidinnskudd eller -delesjoner med en annen nukleinsyre (eller dens komplementære tråd).
Uttrykket "vesentlig homologi" eller "vesentlig likhet" under henvisning til aminosyrer eller fragmenter derav, indikerer at det er nukleotidsekvensidentitet i det minste i omkring 95 % til 99 % av de oppstilte sekvensene, når optimalt oppstilt med egnete aminosyreinnskudd eller -delesjoner med en annen aminosyre (eller dens komplementære tråd). Fortrinnsvis er homologien over fullengdesekvens eller et protein derav, eller et fragment derav som minst er 8 aminosyrer, eller mer ønskelig minst 15 aminosyrer i lengde. Eksempler på egnete fragmenter er beskrevet heri.
Uttrykket "prosent sekvensidentitet" eller "identisk" innenfor konteksten nukleinsyresekvenser, henviser til restene i de to sekvensene som er de samme når de oppstilles for maksimal overensstemmelse. Sekvenslengdeidentitetsammenlikning kan være over hele genomets lengde (for eksempel omkring 36 kbp), hele lengden av en åpen leseramme av et gen, protein, subenhet eller enzym (se for eksempel tabellene som viser de adenovirale kodende regioner), eller et fragment på minst 500 til 5000 nukleotider, om ønskelig. Imidlertid kan identitet blant mindre fragmenter, for eksempel på minst omkring 9 nukleotider, vanligvis på minst omkring 20 til 24 nukleotider, minst omkring 28 til 32 nukleotider, minst omkring 36 eller flere nukleotider, kan også være ønskelig. På tilsvarende måte kan "prosent sekvensidentitet" lett bestemmes for aminosyresekvenser over hele proteinlengden eller et fragment derav. Hensiktsmessig er et fragment minst omkring 8 aminosyrer i lengde og kan være opptil omkring 700 aminosyrer. Eksempler på egnete fragmenter er beskrevet heri.
Identitet bestemmes enkelt ved anvendelse av slike algoritmer og dataprogrammer som er definert heri ved standard parameterinnstillinger. Fortrinnsvis er en slik identitet over hele lengden av proteinet, enzymet, subenheten eller over et fragment på minst 8 aminosyrer i lengde. Imidlertid kan identiteten være basert på kortere områder, der dette er hensiktsmessig for anvendelsen av de identiske genprodukter.
Som beskrevet heri, gjennomføres oppstillinger ved anvendelse av et antall offentlige eller kommersielt tilgjengelige "Multiple Sequence Alignment Programs", som "Clustal W", tilgjengelig via web-servere på internett. Alternativt benyttes også vektor NTI-elementer. Det foreligger også et antall algoritmer som er kjente i teknikken og som kan anvendes for måling av nukleotidsekvensidentitet, inkludert de som er som finnes i programmene beskrevet ovenfor. Som et annet eksempel kan polynukleotidsekvenser sammenliknes ved anvendelse av FASTA, et program i GCG-versjon 6.1. FASTA tilveiebringer oppstillinger og prosentidentitet for områdene som gir best overlapping mellom sekvensene som finnes og de sekvenser som ønskes bestemt. For eksempel kan prosent sekvensidentitet mellom nukleinsyresekvens bestemmes ved anvendelse av FASTA med dennes standard parametre (en ordstørrelse på 6 og NOPAM-faktoren for bedømmelsesmatrisen) som er tilveiebrakt i GCG-versjon 6.1, herved inkorporert ved referanse. Tilsvarende programmer er tilgjengelige for gjennomføring aminosyre-oppstillinger. Generelt er disse programmene benyttet ved standardinnstillinger, selv om fagmannen på området kan endre disse etter behov. Alternativt kan fagmannen på området benytte en annen algoritme, eller et annet dataprogram som gir i det minste det nivå av identitet eller oppstilling som tilveiebringes heri ved de nevnte algoritmer eller programmer.
Som benyttet ifølge foreliggende oppfinnelses beskrivelse og krav, skal uttrykket "omfatte" og varianten "omfatter" og "omfattende", blant andre varianter inkludere andre komponenter, elementer, integere, trinn og liknende. Uttrykket "består av" eller "bestående av" utelukker andre komponenter, elementer, integere, trinn og liknende.
I. Simian- adenovirussekvenser
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer nukleinsyresekvenser og aminosyresekvenser av Pan5, Pan6, Pan7, SVI, SV25 og SV39, som er isolerte fra det andre virale materialet de er assosiert med i naturen.
A. Nukleinsyresekvenser
Pan5 nukleinsyresekvensene ifølge oppfinnelsen inkluderer nukleotidene 1 til 36462 av SEKV. ID nr. 1. Pan6 nukleinsyresekvensene ifølge oppfinnelsen inkluderer nukleotidene 1 til 36604 av SEKV. ID nr. 5. Pan7 nukleinsyresekvensene ifølge oppfinnelsen inkluderer nukleotidene 1 til 36535 av SEKV. ID nr. 9. SV1-nukleinsyresekvensene ifølge oppfinnelsen inkluderer nukleotidene 1 til 34264 av SEKV. ID nr. 24. SV25-nukleinsyresekvensene ifølge oppfinnelsen inkluderer nukleotidene 1 til 31044 av SEKV. ID nr. 29. SV39-nukleinsyresekvensene ifølge oppfinnelsen inkluderer nukleotidene 1 til 34115 av SEKV. ID nr. 34. Se sekvensopplistingen, som er inkorporert ved referanse heri.
Nukleinsyresekvensene ifølge oppfinnelsen omfatter videre tråden som er komplementær til sekvensene i SEKV. ID nr. 5, 9, 24, 29 og 34, så vel som de korresponderende RNA- og cDNA-sekvensene til sekvensene av disse sekvenstall og deres komplementære tråder. Videre inkludert i foreliggende oppfinnelse er nukleinsyresekvenser som er mer enn 95 % til 98 %, og mer foretrukket omkring 99 % til 99,9 % homologe eller identiske til sekvensopplistingen. Også inkludert i nukleinsyresekvensene ifølge oppfinnelsen er naturlige varianter og konstruerte modifikasjoner av sekvensene tilveiebrakt i SEKV. ID nr. 5, 9,24,29 og 34, og deres komplementære tråder. Slike modifikasjoner inkluderer for eksempel merkelapper kjent innen teknikken, metylering og substituering av én eller flere av de naturlig forekommende nukleotider med et degenerert nukleotid.
Oppfinnelsen omfatter videre sekvensfragmenter av Pan5, Pan6, Pan7, SVI, SV25 og SV39, deres komplementære tråd, cDNA og RNA som er komplementære dertil. Egnete fragmenter har en lengde på minst 15 nukleotider og omfatter tradisjonelle fragmenter, dvs. fragmenter som er av biologisk interesse. For eksempel kan et funksjonelt fragment uttrykke et ønsket, adenoviralt produkt eller kan være anvendelig i fremstilling av rekombinante, virale vektorer. Slike fragmenter inkluderer gensekvensene og fragmentene som er opplistet i tabellen nedenfor.
De påfølgende tabellene gir transkriptområdene og åpne leserammer i simian-adenovirussekvensene ifølge oppfinnelsen. For visse gener er transkriptene og de åpne leserammene (ORFer) lokalisert på tråden som er komplementær til den presentert i SEKV. ID nr. 5, 9,24,29 og 34. Se for eksempel E2b, E4 og E2a. De kalkulerte molekylvektene for de kodete proteiner er også vist. Merk at den åpne leserammen Ela Pan5 [nt 576-1436 av SEKV. ID nr. 1], pan6 [nt 576 til 1437 av SEKV. ID nr. 5] og Pan7 [nt 576 til 1437 av SEKV. ID nr. 9] inneholder interne spleiseseter. Disse spleisesetene er angitt i de påfølgende tabellene.
Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- og SV39-adenovirale nukleinsyresekvenser er nyttige som terapeutiske midler og ved konstruksjon av et antall vektorsystemer og vertsceller. Som anvendt heri inkluderer en vektor ethvert egnet nukleinsyremolekyl, inkluderende nakent DNA, et plasmid, et virus, et kosmid eller en episom. Disse sekvenser og produkter kan anvendes alene eller i kombinasjon med andre adenovirale sekvenser eller fragmenter, eller i kombinasjon med elementer fra andre adenovirale eller ikke-adenovirale sekvenser. De adenovirale sekvenser ifølge oppfinnelsen er også nyttige som antisens-avleveringsvektorer, genterapivektorer eller vaksinevektorer. Oppfinnelsen tilveiebringer således i tillegg nukleinsyremolekyler, genavleveringsvektorer og vertsceller inneholdende Ad-sekvensene ifølge oppfinnelsen.
For eksempel omfatter oppfinnelsen et nukleinsyremolekyl inneholdende simian-Ad-ITR-sekvenser ifølge oppfinnelsen. I et annet eksempel tilveiebringer oppfinnelsen et nukleinsyremolekyl inneholdende simian-Ad-sekvenser ifølge oppfinnelsen, som koder et ønsket Ad-genprodukt. Ytterligere andre nukleinsyremolekyler som konstrueres ved anvendelse av sekvensene ifølge oppfinnelsen, vil være åpenbare for fagmannen i lys av de her gitte informasjoner.
I en utførelsesform kan simian-Ad-genområdene som identifiseres her, benyttes i et antall vektorer for avlevering av et heterologt molekyl til en celle. For eksempel genereres det vektorer for ekspresjon av et adenoviralt kapsidprotein (eller et fragment derav) for generering av en viralvektor i en pakket vertscelle. Slike vektorer kan konstrueres for ekspresjon in trans. Alternativt konstrueres slike vektorer for å gi celler som stabilt inneholder sekvenser som uttrykker ønskete adenovirale funksjoner, for eksempel én eller flere av Ela, Elb, de terminalrepeterende sekvenser, E2a, E2b, E4, E40RF6-området.
I tillegg er de adenovirale gensekvenser og fragmenter derav nyttige for å tilveiebringe de hjelperfunksjoner nødvendige for fremstilling av hjelperavhengige virus (for eksempel adenovirale vektorer der vesentlige funksjoner eller adenoassosierte virus (AAV)) er fjernet. For slike produksjonsfremgangsmåter benyttes simian-adenovirale sekvenser ifølge oppfinnelsen med en fremgangsmåte tilsvarende det som er beskrevet for humant Ad. På grunn av forskjeller i sekvensene mellom de simian-adenovirale sekvensene ifølge oppfinnelsen og de av humant Ad, eliminerer imidlertid bruken av sekvensene ifølge oppfinnelsen den vesentlige muligheten for homolog rekombinering med hjelperfunksjoner i vertscelle som bærer humant Ad El-funksjoner, for eksempel 293-celler, som kan produsere infeksiøs, adenoviral forurensing under rAAV-produksjon.
Fremgangsmåter for produksjon av rAAV ved anvendelse av adenovirale hjelperfunksjoner er utstrakt beskrevet i litteraturen med humane adenovirale serotyper. Se for eksempel U.S. patent nr. 6 258 595 og referansene sitert deri. Se også U.S. patent nr. 5 871 982; WO 99/14354; WO 99/15685; WO 99/47691. Disse fremgangsmåtene kan også anvendes ved fremstilling av ikke-humant AAV, inkludert ikke-humane primat AAV-serotyper. Simian-adenovirale gensekvenser- ifølge oppfinnelsen som tilveiebringer de nødvendige hjelperfunksjoner (for eksempel Ela, Elb, E2a og/eller E40RF6) kan være særlig nyttig for å gi den nødvendige adenovirale funksjon, mens muligheten for rekombinasjon med et hvilket som helst annet adenovirus til stede i rAAV-pakkende celle, som typisk er av human opprinnelse, minimaliseres eller elimineres. Valgte gener eller åpne leserammer av de adenovirale sekvenser ifølge oppfinnelsen kan således benyttes i disse rAAV-produksj onsfremgangsmåter.
Alternativt kan rekombinante adenovirale simian-vektorer ifølge oppfinnelsen anvendes i disse fremgangsmåtene. Slike rekombinante adenovirale simian-vektorer kan for eksempel inkludere et hybrid sjimp Ad/AAV der sjimp Ad-sekvensene flankerer en rAAV-ekspresjonskassett bestående for eksempel av AAV 3' og/eller 5' ITRer og et transgen under kontroll av regulatoriske sekvenser som kontrollerer dens ekspresjon. Fagmannen på området vil erkjenne at også andre simian-adenovirale vektorer og/eller gensekvenser ifølge oppfinnelsen vil være nyttige for fremstilling av rAAV og andre virus, avhengig av adenoviral hjelper.
I nok en annen utførelsesform konstrueres nukleinsyremolekyler for avlevering og ekspresjon av valgte adenovirale genprodukter i en vertscelle for å oppnå en ønsket fysiologisk effekt. For eksempel kan et nukleinsyremolekyl inneholdende sekvenser som koder et adenovirus Ela-protein ifølge oppfinnelsen, avleveres til et individ for anvendelse som cancerterapeutikum. Eventuelt formuleres et slikt molekyl i en lipidbasebærer og har fortrinnsvis cancerceller som mål. En slik formulering kan kombineres med andre cancerterapeutika (for eksempel cisplatin, taxol eller liknende). Ytterligere andre anvendelser for adenovirale sekvenser som er gitt her, vil være åpenbare for fagmannen.
I tillegg vil fagmannen lett forstå at Ad-sekvensene ifølge oppfinnelsen lett kan tilpasses for anvendelse i et antall virale og ikke-virale vektorsystemer for in vitro-, ex vivo- eller in vivo-avlevering av terapeutiske og immunogene molekyler. For eksempel kan Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- og/eller SV39-simian-Ad-genomene ifølge oppfinnelsen kan anvendes i et antall rAd- og ikke-rAd-vektorsystemer. Slike vektorsystemer kan for eksempel inkludere plasmider, lentivirus, retrovirus, poxvirus, vaksinevirus og adenoassosierte virale systemer, blant andre. Valg av disse vektorsystemene er ingen begrensning for foreliggende oppfinnelse.
Oppfinnelsen tilveiebringer videre molekyler nyttige for produksjon av simian-proteiner og simian-avledete proteiner ifølge oppfinnelsen. Slike molekyler som bærer polynukleotider som inkluderer simian-Ad-DNA-sekvensene ifølge oppfinnelsen, kan foreligge i form av nakent DNA, et plasmid, et virus eller et hvilket som helst annet genetisk element.
B. Simian-adenovirale proteiner ifølge foreliggende oppfinnelse
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer videre genprodukter av de ovenfor beskrevne adenovirus som proteiner, enzymer og fragmenter derav, og som kodes av de adenovirale nukleinsyrer ifølge oppfinnelsen. Oppfinnelsen omfatter videre Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- og/eller SV39-proteiner, enzymer og fragmenter derav, med den aminosyresekvens som kodes av disse nukleinsyresekvenser som er generert ved andre fremgangsmåter. Slike proteiner inkluderer de som er kodet av den åpne leseramme som er identifisert i tabellene ovenfor, i figurene 1 og 2, og fragmentene derav.
I et aspekt tilveiebringer oppfinnelsen således unike simian-adenovirale proteiner som i det vesentlige er rene, dvs. frie for andre virale eller proteinøse proteiner. Fortrinnsvis er disse proteiner minst 10 % homogene, mer foretrukket 60 % homogene, og mest foretrukket 95 % homogene.
I en utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen unike simian-avledete kapsidproteiner. Som anvendt heri inkluderer et simian-avledet kapsidprotein et hvilket som helst adenoviralt kapsidprotein inneholdende et Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- eller SV39-kapsidprotein eller et fragment derav, som definert ovenfor, uten begrensning omfattende kimære kapsidproteiner, fusjonsproteiner, kunstige kapsidproteiner, syntetiske kapsidproteiner og rekombinerte kapsidproteiner, uten begrensning av midler for å generere disse produktene.
Hensiktsmessig inneholder disse simian-avledete kapsidproteiner ett eller flere Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- eller SV39-områder eller fragmenter derav (for eksempel hexon, penton, fiber eller et fragment derav) i kombinasjon med kapsidområder eller fragmenter derav av forskjellige adenovirale serotyper, eller modifiserte simian-kapsidproteiner eller fragmenter, som beskrevet heri. En "modifikasjon av et kapsidprotein forbundet med endret tropisme" som anvendt heri, inkluderer et endret kapsidprotein, for eksempel et penton, et hexon eller et fiberproteinområde, eller et fragment derav som knoppdoméne av fiberområdet, eller et polynukleotid som koder dette, slik at spesifisiteten endres. Det simian-avledete kapsidet kan konstrueres med én eller flere simian-Ad'ene ifølge oppfinnelsen, eller andre Ad-serotyper som kan være av human eller ikke-human opprinnelse. Slik Ad kan oppnås fra et antall kilder inkludert ATCC, kommersielle og akademiske kilder, eller Ad-sekvensene kan oppnås fra GenBank eller andre hensiktsmessige kilder.
Aminosyresekvensene av simian-adenoviruspentonproteinene ifølge oppfinnelsen tilveiebringes også. AdPan5-pentonproteinet tilveiebringes i SEKV. ID nr. 2. AdPan7-pentonproteinet tilveiebringes i SEKV. ID nr. 6. AdPan6-pentonproteinet tilveiebringes i SEKV. ID nr. 10. SVl-pentonproteinet tilveiebringes i SEKV. ID nr. 23. SV25-pentonproteinet tilveiebringes i SEKV. ID nr. 30. SV39-pentonproteinet tilveiebringes i SEKV. ID nr. 35. Ethvert av disse pentonproteinene eller unike fragmenter derav, kan hensiktsmessig anvendes for et antall formål. Eksempler på egnete fragmenter inkluderer pentonet som har N-terminal- og/eller C-terminalavkortninger på omkring 50,100,150 eller 200 aminosyrer, basert på aminosyrenummereringen tilveiebrakt ovenfor, og i SEKV. ID nr. 2, SEKV. ID nr. 6, SEKV. ID nr. 25, SEKV. ID nr. 30 eller SEKV. ID nr. 35. Andre hensiktsmessige fragmenter inkluderer kortere indre C- eller N-terminale fragmenter. Pentonproteinet kan videre modifiseres for en rekke forskjellige formål kjent for dem øvet i faget.
Oppfinnelsen tilveiebringer videre aminosyresekvenser av hexonproteinet av Pan5 [SEKV. ID nr. 3], Pan6 [SEKV. ID nr. 7], Pan7 [SEKV. ID nr. 11], SVI [SEKV. ID nr. 26], SV25 [SEKV. ID nr. 31] og/eller SV39 [SEKV. ID nr. 36]. Dette hexonprotein, eller unike fragmenter derav, kan hensiktsmessig anvendes for en rekke forskjellige formål. Eksempler på egnete fragmenter inkluderer hexoner med N-terminale og/eller C-terminale avkortninger på omkring 50, 100,150, 200, 300, 400 eller 500 aminosyrer, basert på aminosyrenummereringen tilveiebrakt ovenfor, og i SEKV. ID nr. 3, 7, 11, 26, 31 og 36. Andre hensiktsmessige fragmenter inkluderer kortere indre C- eller N-terminale fragmenter. For eksempel er et egnet fragment løkkeområdet (doménet) av hexonproteinet, angitt som DEI og FG1 eller et hypervariabelt område derav. Slike fragmenter inkluderer områdene som overspenner aminosyrerestene omkring 125 til 443; omkring 138 til 441, eller mindre fragmenter, slik som de som spenner over restene 138 til rest 163; omkring 170 til omkring 176; omkring 195 til omkring 203; omkring 233 til omkring 246; omkring 253 til omkring 264; omkring 287 til omkring 297; og omkring 404 til omkring 430 av simian-hexonproteinene, under henvisning til SEKV. ID nr. 3, 7,11,26, 31 eller 36. Andre egnete fragmenter kan lett identifiseres av fagmannen. Hexonproteinet kan videre være modifisert for et antall formål, som velkjent for fagmannen. På grunn av at hexonproteinet er determinant for en adenovirusserotype, vil slike kunstige hexonproteiner resultere i adenovirus med kunstige serotyper. Andre kunstige kapsidproteiner kan også konstrueres ved anvendelse av sjimp-Ad-pentonsekvenser og/eller fibersekvenser ifølge oppfinnelsen og/eller fragmenter derav.
I et eksempel kan det være ønskelig å generere et adenovirus med endret hexonprotein ved anvendelse av en hexonproteinsekvens ifølge oppfinnelsen. En egnet fremgangsmåte for å endre hexonproteiner er beskrevet i U.S. patent nr. 5 922 315, som det henvises til vedrørende detaljer. I denne fremgangsmåten blir minst ett adenovirushexonløkkeområde byttet ut med minst ett løkkeområde av en annen adenovirusserotype. Ved minst ett løkkeområde av et slikt endret adenovirus, er således hexonproteinet et simian-Ad-hexonløkkeområde ifølge oppfinnelsen (for eksempel Pan7). I en utførelsesform erstattes et løkkeområde av Pan7 hexonproteinet med et løkkeområde fra en annen adenovirusserotype. I nok en utførelsesform benyttes løkkeområdet av Pan7-hexoner til å erstatte et løkkeområde fra en annen adenovirusserotype. Egnete adenovirusserotyper kan lett velges blant humane og ikke- humane serotyper, som beskrevet her. Pan7 velges kun som illustrasjon; andre simian-Ad-hexonproteiner ifølge oppfinnelsen kan endres på tilsvarende måte eller benyttes for å endre et annet Ad-hexon. Valget av en egnet serotype er ingen begrensning for oppfinnelsen. Ytterligere andre anvendelser for hexonproteinsekvensene ifølge oppfinnelsen vil lett fremgå for fagmannen.
Oppfinnelsen omfatter videre fiberproteinene av simian-adenovirus ifølge oppfinnelsen. Fiberproteinet av Ad-Pan5 har aminosyresekvens SEKV. ID nr. 4. Fiberproteinet Ad-Pan6 har aminosyresekvens SEKV. ID nr. 8. Fiberproteinet Ad-Pan7 har aminosyresekvens SEKV. ID nr. 12. SV-1 har to fiberproteiner; fiber 2 har aminosyresekvens SEKV. ID nr. 27 og fiber 1 har aminosyresekvens SEKV. ID nr. 28. SV-25 har også to fiberproteiner; fiber 2 har aminosyresekvens SEKV. ID nr. 32, og fiber 1 har aminosyresekvens SEKV. ID nr. 33. Fiberproteinet av SV-39 har aminosyresekvens SEKV. ID nr. 37.
Dette fiberproteinet, eller unike fragmenter derav, kan hensiktsmessig anvendes for en rekke forskjellige formål. Et egnet fragment er fiberknoppen som spenner over aminosyrene 247 til 425 av SEKV. ID nr. 4, 8, 12, 28, 32, 33 og 37. Se figur 2. Eksempler på andre egnete fragmenter inkluderer fiberen med N-terminale og/eller C-terminale avkortninger på omkring 50, 100,150 eller 200 aminosyrer, basert på aminosyrenummereringen tilveiebrakt ovenfor, og i SEKV. ID nr. 4, 8,12,28, 32, 33 og 37. Andre hensiktsmessige fragmenter inkluderer indre fragmenter. Fiberproteinet kan være modifisert ved anvendelse av et antall teknikker velkjente for fagmannen.
Oppfinnelsen omfatter videre unike fragmenter av proteinene ifølge oppfinnelsen, som er minst 8 aminosyrer lange. Fragmenter med andre ønskete lengder kan imidlertid lett benyttes. I tillegg omfatter oppfinnelsen slike modifikasjoner som kan innføres for å øke utbyttet og/eller ekspresjonen av et Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- eller SV39-genprodukt, for eksempel konstruksjon av et fusjonsmolekyl der hele eller et fragment av Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- eller SV39-genproduktet er fusert (enten direkte eller via en linker) til en fusjonspartner for å øke utbyttet. Andre egnete modifikasjoner inkluderer, uten begrensning, avkortning av et kodende område (for eksempel et protein eller enzym) for å eliminere et pre- eller pro-protein som vanligvis spaltes, og for å gi det modne protein eller enzym og/eller mutasjon av et kodende område for å gi et utskillbart genprodukt. Ytterligere andre modifikasjoner vil lett fremgå for fagmannen. Oppfinnelsen omfatter videre proteiner med minst 95 % til 99 % identitet med de her tilveiebrakte Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- eller SV39-proteiner.
Som beskrevet heri, er vektorer ifølge oppfinnelsen inneholdende de adenovirale kapsidproteiner ifølge oppfinnelsen, spesielt godt egnet for anvendelse der de nøytraliserende antistoffer reduserer effektiviteten for andre Ad-serotypebaserte vektorer, så vel som andre virale vektorer. rAd-vektorene ifølge oppfinnelsen er spesielt fordelaktige ved readministrering for gjentatt genterapi eller for forsterking av immunresponsen (vaksinetitere).
Under visse omstendigheter kan det være ønskelig å benytte ett eller flere av Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- og/eller SV39-genproduktene (for eksempel et kapsidprotein eller et fragment derav) for å generere et antistoff. Uttrykket "antistoff slik det benyttes her, henviser til et immunglobulinmolekyl som spesifikt er stand til å binde til en epitop. Antistoffene ifølge oppfinnelsen binder således fortrinnsvis spesifikt og uten kryssreaktivitet til en Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- og/eller SV39-epitop. Antistoffene ifølge oppfinnelsen foreligger i et antall former inkludert for eksempel høyaffinitetspolyklonale antistoffer, monoklonale antistoffer, syntetiske antistoffer, kimære antistoffer, rekombinante antistoffer og humaniserte antistoffer. Slike antistoffer stammer fra immunglobulinklassene IgG, IgM, IgA, IgD og IgE.
Slike antistoffer kan genereres ved anvendelse av et antall fremgangsmåter som er velkjente i teknikken. Egnete antistoffer kan genereres ved velkjente, konvensjonelle teknikker, for eksempel ved Kohler og Milstein, og mange kjente modifikasjoner derav. Tilsvarende ønskelige høytiterantistoffer genereres ved anvendelse av kjente rekombinante teknikker på de monoklonale eller polyklonale antistoffer som er avledet fra disse antigener (se for eksempel PCT patent søknad nr. PCT/GB85/00392; britisk patentsøknadspublikasjon nr. GB2188638A; Amit et al, 1986 Science, 233:747-753; Queen et al, 1989 Proe. Nati. Acad. Sei. USA, 86:10029-10033; WO 90/07861; og Riechmann et al. Nature, 332:323-327 (1988); Huse et al, 1988a Science, 246:1275-1281). Alternativt kan antistoffer fremstilles ved å manipulere de komplementaritetsbestemmende områder av animalske eller humane antistoffer mot antigenet ifølge oppfinnelsen. (Se for eksempel E. Mark og Padlin, Humanization of Monoclonal Antibodies, kapitel 4, The Handbook of Experimental Pharmacology, bind 113, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Springer-Verlag (juni 1994); Harlow et al, 1999, Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY; Harlow et al, 1989, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York; Houston et al, 1988, Proe. Nati. Acad. Sei. USA 85:5879-5883; og Bird et al, 1988, Science 242:423-426. Videre tilveiebringer foreliggende oppfinnelse anti-idiotype antistoffer (Ab2) og anti-anti-idiotype antistoffer (Ab3). Se for eksempel M. Wettendorff et al., Modulation of anti-tumor immunity by anti-idiotypic antibodies. In Idiotypic Network and Diseases, red. ved J. Cerny og J. Hiernaux, 1990 J. Am. Soc. Microbioi, Washington DC: s. 203-229). Disse anti-idiotype- og anti-anti-idiotype-antistoffer fremstilles ved bruk av teknikker velkjente for fagmannen. Disse antistoffer kan benyttes for et antall formål, inkludert diagnostiske og kliniske fremgangsmåter og sett. Under visse omstendigheter kan det være ønskelig å innføre en påvisbar merkelapp eller en tag på et Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- eller SV39-genprodukt, -antistoff eller en annen konstruksjon ifølge oppfinnelsen. Som benyttet heri er en påvisbar merkelapp et molekyl i stand til, alene eller i interaksjon med andre molekyler, å gi et påvisbart signal. Helst er merkelappen visuelt påvisbar, for eksempel ved fluorescens, for lett anvendelse i immunohistokjemisk analyse eller immunfluorescensmikroskopi. For eksempel inkluderer hensiktsmessige merkelapper fluorescein isotiocyanat (FITC), fycoerytrin (PE), allofycocyanin (APC), corifosfin-0
(CPO) eller tandemfargestoffer, PE-cyanin-5 (PC5), og PE-Texasrødt (ECD). Alle disse fluorescente fargestoffer er kommersielt tilgjengelige, og deres anvendelser er velkjente i teknikken. Andre nyttige merkelapper inkluderer en kolloid gullmerkelapp. Ytterligere andre nyttige merkelapper inkluderer radioaktive forbindelser eller elementer. I tillegg inkluderer merkelapper et antall enzymsystemer som virker ved frigivelse av et kollorimetrisk signal i en analyse, for eksempel glukoseoksidase (som benytter glukose som substrat) frigir peroksid som et produkt som i nærvær av peroksidase og en hydrogendonor som tetrametylbenzidin (TMB), gir et oksidert TMB som ses som blå farge. Andre eksempler inkluderer pepperotperoksidase (HRP) eller alkalisk fosfatase (AP), og hexokinase i forbindelse med glukose-6-fosfatdehydrogenase som reagerer med ATP, glukose og NAD<+>, og gir blant andre produkter, NADH som påvises som øket absorbans ved 340 nm bølgelengde.
Andre merkelappsystemer som anvendes i fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen, kan påvises på annen måte, ved for eksempel farget lateks mikropartikler (Bang Laboratories, Indiana) hvori et innleiret fargestoff benyttes i stedet for enzymer for å gi konjugater med målsekvensen, og gir et visuelt signal som indikerer nærvær av det resulterende kompleks i anvendelige analyser.
Fremgangsmåter for kobling eller assosiering av merkelappen med et ønsket molekyl er også konvensjonelle, og velkjente for fagmannen. Kjente fremgangsmåter for merkelappfesting er beskrevet. (Se for eksempel Handbook of Fluorescent probes and Research Chemicals, 6. utg., R. P. M. Haugland, Molecular Probes, Inc., Eugene, OR, 1996; Pierce Catalog and Handbook, Life Science and Analytical Research Products, Pierce Chemicals Company, Rockford, IL, 1994/1995). Valget av merkelapp og koblingsfremgangsmåte er således ingen begrensning for foreliggende oppfinnelse.
Sekvensene, proteinene og fragmentene ifølge oppfinnelsen kan fremstilles på en hvilken som helst hensiktsmessig måte, inkludert rekombinant produksjon, kjemisk syntese eller andre syntetiske midler. Egnete produksjonsteknikker er velkjente for fagmannen. Se for eksempel Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY. Alternativt kan peptider også syntetiseres ved den velkjente fastfasepeptidsyntesefremgangsmåten, (Merrifield, J. Am. Chem. Soc, 85:2149 (1969), s. 27-62). Disse og andre hensiktsmessige produksjonsfremgangsmåter ligger innenfor fagmannens kunnskapsområde, og er ingen begrensning for oppfinnelsen.
I tillegg vil fagmannen på området lett forstå at Ad-sekvensene ifølge oppfinnelsen lett kan tilpasses for bruk i et antall virale eller ikke-virale vektorsystemer for in vitro-, ex vivo- eller in vivo-avlevering av terapeutiske og immunogene molekyler. I en utførelsesform benyttes for eksempel simian-Ad-kapsidproteinene og andre simian-adenovirusproteiner, som beskrevet heri, til ikke-viral, proteinbasert avlevering av gener, proteiner og andre ønskelige diagnostiske, terapeutiske og immunogene molekyler. I en slik utførelsesform er et protein ifølge oppfinnelsen direkte eller indirekte forbundet med et molekyl målrettet for celler med en reseptor for adenovirus. For slik målretting velges fortrinnsvis et kapsidprotein, slik som et hexon, penton, en fiber eller et fragment derav ved en ligand for celleoverftatereseptorer. Egnete molekyler for avlevering velges blant terapeutiske molekyler og deres genprodukter, som beskrevet heri. Et utvalg av linkere inkludert lipid, polyLys og liknende kan benyttes som linkere. For eksempel kan simian-pentonprotein lett benyttes for et slikt formål ved fremstilling av et fusjonsprotein ved anvendelse av simian-pentonsekvensen på en måte analog til det som er beskrevet av Medina-Kauwe LK, et al., Gene Ther., des. 2001; 8(23):1753-1761. Alternativt kan aminosyresekvensene av simian-Ad-protein-IX benyttes for målrettete vektorer på en celleflatereseptor, som beskrevet i U.S. søknadsnummer 20 010 047 081. Egnete Ugandere inkluderer et CD40-antigen, en RGD-inneholdende eller polylysininneholdende sekvens, og liknende. Ytterligere andre simian-Ad-proteiner inkluderer for eksempel hexonproteinet og/eller fiberproteinet, kan anvendes for disse og tilsvarende formål.
Ytterligere andre adenovirale proteiner ifølge oppfinnelsen kan benyttes alene eller i kombinasjon med andre adenovirale proteiner for et antall formål som lett vil være åpenbare for fagmannen. I tillegg kan ytterligere andre anvendelser for de adenovirale proteiner ifølge oppfinnelsen lett være åpenbare for fagmannen.
II. Rekombinante adenoviralvektorer
Sammensetningene ifølge foreliggende oppfinnelse inkluderer vektorer som avgir et heterologt molekyl til celler, enten for terapeutiske eller for vaksineformål. Som anvendt heri, kan en vektor inkludere et hvilket som helst genetisk element inkludert, uten begrensning, nakent DNA, en phag, et transposon, et kosmid, et episom, et plasmid eller et virus. Slike vektorer inneholder simian-adenovirus-DNA av Pan5, Pan6, Pan7, SVI, SV25 og/eller SV39 og et minigen. Med "minigen" menes kombinasjonen av et valgt, heterologt gen og de andre regulatoriske elementer nødvendige for å drive translasjonen, transkripsjonen og/eller ekspresjonen av genproduktet i en vertscelle.
Typisk blir en adenoviral vektor ifølge oppfinnelsen konstruert slik at minigenet er lokalisert i et nukleinsyremolekyl inneholdende andre adenovirale sekvenser i området nativt til et valgt adenoviralt gen. Minigenet kan skytes inn i et foreliggende genområde for å bryte opp funksjonen i dette området, dersom dette er ønskelig. Alternativt kan minigenet innføres på setet for et partielt eller fullt deletert, adenoviralt gen. For eksempel kan minigenet være lokalisert på setet for et slikt, som setet for en funksjonell El-delesjon eller funksjonell E3-delesjon, blant andre som kan velges. Uttrykkes "funksjonelt deletert" eller "funksjonell delesjon" betyr at en tilstrekkelig mengde av genområdet er fjernet eller på annen måte skadet, for eksempel ved mutasjon eller modifikasjon, slik at genområdet ikke lenger er i stand til å gi funksjonelle produkter av genekspresjon. Dersom ønskelig kan hele genområdet fjernes. Andre egnete seter for genoppbryting eller delesjon er diskutert på annet sted i foreliggende beskrivelse.
For eksempel kan en produksjonsvektor som er nyttig for generering av et rekombinant virus, inneholde minigenet og enten den 5' og 3' ende av det adenovirale genomet, eller både 5' og 3' ende av dette adenovirale genom. Det adenovirale genomets 5' ende inneholder de 5' cis-elementene som er nødvendige for pakking og replikering; dvs. de 5' inverterte repetisjonsterminal (ITR) sekvensene (som virker som replikasjonsopprinnelser) og de native 5' pakkingsforbedringsdoméner (som inneholder sekvensene nødvendige for pakking av lineære Ad-genomer og enhancerelementene for El-promoteren). Den 3' ende av det adenovirale genom inkluderer de 3' cis-elementene (inkludert ITRene) som er nødvendige for pakking og enkapsidering. Hensiktsmessig er et rekombinant adenovirus inneholdende både de 5'- og 3'-adenovirale cis-elementene og minigenet, lokalisert mellom de 5'- og 3'-adenovirale sekvensene. En hvilken som helst adenoviral vektor ifølge oppfinnelsen kan også inneholde ytterligere adenovirale sekvenser.
Hensiktsmessig inneholder disse adenovirale vektorer ifølge oppfinnelsen ett eller flere adenovirale elementer avledet fra et adenoviralt genom ifølge oppfinnelsen. I en utførelsesform inneholder vektorene adenovirale ITRer fra Pan5, Pan6, Pan7, SVI, SV25 eller SV39 og ytterligere adenovirale sekvenser fra den samme adenovirale serotype. I en annen utførelsesform inneholder vektorene adenovirale sekvenser avledet fra en annen adenoviral serotype enn den som gir ITRene. Som definert heri, henviser en pseudotypet adenovirus til en adenovirus der kapsidproteinet av adenoviruset er fra en annen serotype enn den serotype som gir ITRene. Valget av serotype for ITRene og serotypen for en hvilken som helst annen adenoviral sekvens som er til stede i vektoren, er ingen begrensning for oppfinnelsen. Et antall adenovirusstammer er tilgjengelige fra "American Type Culture Collection", Manassas, Virginia, eller tilgjengelig på forespørsel fra et antall kommersielle og institusjonelle kilder. Videre er sekvensene for mange slike stammer tilgjengelige fra et antall databaser, inkludert for eksempel PubMed og GenBank. Homologe adenovirusvektorer fremstilt fra andre simian- eller fra humant adenovirus er beskrevet i publisert litteratur. Se for eksempel U.S. patent nr. 5 240 846. DNA-sekvensene for et antall adenovirustyper er tilgjengelige fra GenBank inkludert type Ad5 (GenBank tilgangsnr. M73260). Adenovirussekvensene kan være oppnådd fra en hvilken som helst kjent adenovirusserotype, som serotypene 2, 3,4, 7, 12 og 40, og videre inkludert en hvilken som helst av de i dag identifiserte humane typer. Tilsvarende adenovirus kjent for å infektere ikke-humane dyr (for eksempel aper), kan også benyttes i vektorkonstruksjonene ifølge foreliggende oppfinnelse. Se for eksempel U.S. patent nr. 6 083 716.
De virale sekvensene, hjelpervirus, hvis nødvendig, og rekombinante virale partikler, og andre vektorkomponenter og sekvenser anvendt i vektorkonstruksjonen beskrevet heri, oppnås som beskrevet ovenfor. DNA-sekvensene for Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25-og/eller SV39-simian-adenovirussekvensene ifølge oppfinnelsen anvendes for vektorkonstruksjoner og cellelinjer nyttige i fremstillingen av slike vektorer.
Modifikasjoner av nukleinsyresekvenser som danner vektorene ifølge oppfinnelsen inkludert sekvensdelesjoner, innskudd eller andre mutasjoner, kan genereres ved anvendelse av standard molekylbiologiteknikker og ligger innenfor oppfinnelsens ramme.
A. " Minigenet"
Fremgangsmåtene som benyttes for valg av transgenet, kloningen og konstruksjonen av "minigenet" og dets innføring i den virale vektor, ligger innenfor teknikkens kunnskapsområder gitt den heri beskrevne lære.
1. Transgenet
Transgenet er en nukleinsyresekvens, heterolog til vektorsekvensen som flankerer transgenet, som koder et polypeptid, protein eller et annet produkt av interesse. Nukleinsyrekodingssekvensen er operativt forbundet til regulatoriske komponenter på en måte som tillater transgen transkripsjon, translasjon og/eller ekspresjon i en vertscelle.
Sammensetningen av transgensekvensen vil avhenge av den tilsiktete anvendelse for den resulterende vektor. For eksempel inkluderer én type transgensekvens en rapportørsekvens som ved ekspresjon gir et påvisbart signal. En slik rapportørsekvens inkluderer, uten begrensning, DNA-sekvenser som koder pMactamase, P-galactosidase (LacZ), alkalisk fosfatase, tymidinkinase, grønn fluorescent protein (GFP), kloramfenikolacetyltransferase (CAT), luciferase, membranbundne proteiner som inkluderer for eksempel CD2, CD4, CD8, influensahemagglutininproteinet og andre velkjente i teknikken, mot hvilke det eksisterer høyaffinitetsantistoffer rettet mot disse, eller slike kan fremstilles ved konvensjonelle midler, og fusjonsproteiner omfattende et membranbundet protein, hensiktsmessig fusert til et antigen tag-doméne fra blant annet hemagglutinin eller Mye. Når disse kodende sekvensene er assosiert med regulatoriske elementer som driver deres ekspresjon, gir påvisbare signaler ved konvensjonelle midler, inkludert enzymatisk, radiografisk, kollorimetrisk, fluorescens eller andre spektrografiske analyser, fluorescentaktiverende celler sorterende analyser og immunologiske analyser, inkludert enzymforbundet immunosorbentanalyse (ELISA), radioimmunoanalyse (RIA) og immunohistokjemi. Der for eksempel markørsekvensene er LacZ-genet, blir nærværet av vektoren som bærer signalet påvist ved analyse på P-galaktosidaseaktivitet. Der transgenet er GFP eller luciferase, kan vektoren som bærer signalet måles visuelt ved farge- eller lysproduksjon i et luminometer.
Transgenet er imidlertid ønskelig en ikke-markørsekvens som koder et produkt som er nyttig i biologi og medisin, slik som proteiner, peptider, RNA, enzymer eller katalytiske RNAer. Ønskelige RNA-molekyler inkluderer tRNA, dsRNA, ribosomalt RNA, katalytiske RNAer og antisens RNAer. Ett eksempel på nyttig RNA-sekvens er en sekvens som utvisker ekspresjonen av en målrettet nukleinsyresekvens i det behandlete dyret.
Transgenet kan benyttes for behandling, for eksempel for genetiske defekter, som et cancerterapeutikum eller en vaksine, for induksjon av en immunrespons, og/eller for profylaktiske vaksineformål. Som anvendt heri, henviser induksjon av en immunrespons til et molekyls evne (for eksempel et genprodukt) til å indusere en T-celle- og/eller en humoral immunrespons til molekylet. Oppfinnelsen inkluderer videre anvendelse av flere transgener, for eksempel for å korrigere eller forbedre en tilstand forårsaket av et multisubenhetsprotein. I visse situasjoner kan forskjellige transgener benyttes for å kode hver proteinsubenhet eller å kode forskjellige peptider eller proteiner. Det er ønskelig når størrelsen av det DNA som koder proteinsubenheten er stor, for eksempel for et immunglobulin, den plateavledete vekstfaktoren eller et dystrofinprotein. For at cellen skal kunne produsere multisubenhetproteinet blir en celle infisert med det rekombinante virus inneholdende alle de forskjellige subenheter. Alternativt kan forskjellige subenheter av et protein kodes ved det samme transgen. I dette tilfellet inkluderer et enkelt transgen det DNA som koder hver av subenhetene, der DNA for hver subenhet er separert av et internt ribozyminngangssete (IRES). Dette er ønskelig når størrelsen av det DNA som koder hver av subenheten er lite, for eksempel den totale størrelsen av det DNA som koder subenheten og IRES er mindre enn 5 kilobaser. Som et alternativ til en IRES kan det angjeldende DNA være separert ved sekvenser som koder et 2A-peptid, som spalter seg selv i en posttranslasjonal hendelse. Se for eksempel M. L. Donnelly et al., J. Gen. Virol. 78(Pt 1): 13-21 (jan. 1997); Furier, S., et al, Gene Ther., 8(11):864-873 Guni 2001); Klump, H., et al, Gene Ther. 8(10):811-817 (mai 2001). Dette 2A-peptidet er betydelig mindre enn et IRES, som gjør det velegnet for anvendelse når rommet er en begrensende faktor. Imidlertid kan det valgte transgen kode et hvilket som helst biologisk aktivt produkt eller annet produkt, for eksempel et produkt som er ønskelig for studie.
Egnete transgener kan lett velges av fagmannen. Valget av transgenet anses ikke som begrensende for oppfinnelsen.
2. Regulatoriske elementer
I tillegg til hovedelementene som er definert ovenfor for minigenet, inkluderer vektoren også konvensjonelle kontrollelementer nødvendige, og som er operativt forbundet med transgenet på en måte som tillater dets transkripsjon, translasjon og/eller ekspresjon i en celle transfektert med plasmid vektoren eller infektert med det virus som produseres ifølge oppfinnelsen. Som anvendt heri inkluderer "operativt forbundet" sekvenser, både ekspresjonskontrollsekvenser som er sammenfallende med genet av interesse og ekspresjonskontrollsekvenser som virker i trans eller på en avstand for å kontrollere genet av interesse.
Ekspresjonskontrollsekvenser inkluderer egnete transkripsjonsoppstart, terminering, promoter og enhancersekvenser; effektiv RNA-prosesseringssignaler som spleise- og polyadenylerings (polyA)signaler; sekvenser som stabiliserer cytoplasmisk mRNA; sekvenser som forbedrer translasjonseffektiviteten (dvs. Kozak konsensussekvens); sekvenser som forbedrer proteinstabilitet; og hvis ønskelig sekvenser som forbedrer sekresjon av det kodete produktet. Et stort antall ekspresjonskontrollsekvenser inkludert native promotere, konstitutive, induserbare og/eller vevsspesifikke, er velkjente i teknikken og kan anvendes.
Eksempler på konstitutive promotere inkluderer uten begrensning det retrovirale Rous sarkomvirus (RSV) LTR-promoteren (eventuelt med RSV-enhanceren), cytomegalovirus (CMV) promoteren (eventuelt med CMV-enhanceren), (se for eksempel Boshart et al., Cell, 41:521-530 (1985)), SV40-promoteren, dihydrofolatreduktasepromoteren, P-aktin-promoteren, fosfoglyserolkinase (PGK) promoteren og EFla-promoteren (Invitrogen).
Induserbare promotere tillater regulering av genekspresjon og kan reguleres ved eksogent tilførte forbindelser, omgivelsesfaktorer som temperatur eller nærvær av en spesifikk, fysiologisk tilstand, for eksempel en akutt fase, en spesiell differensieringstilstand for cellen, eller kun ved replikering av celler. Induserbare promotere og systemer er tilgjengelige fra et antall kommersielle kilder som uten begrensning inkluderer Invitrogen, Clontech og Ariad. Mange andre systemer er beskrevet og kan lett velges av fagmannen. For eksempel inkluderer induserbare promotere den sink-induserbare saue-metalltionin (MT) promoter og det deksametason (Dex) induserbare musebrysttumorvirus (MMTV) promoter. Andre induserbare systemer inkluderer T7-polymerasepromotersystemet (WO 98/10088); ecdyson-insektpromoteren (No et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA, 93:3346-3351 (1996)), det tetrasyklinrepressive systemet (Gossen et al, Proe. Nati. Acad. Sei. USA, 89:5547-5551
(1992)), det tetrasyklininduserbare systemet (Gossen et al., Science, 268:1766-1769
(1995)), se også Harvey et al, Curr. Opin. Chem. Biol, 2:512-518 (1998)). Andre systemer inkluderer FK506-dimeren, VP 16 eller p65 som benytter castradiol, difenol. murisleron, det RU486-induserbare systemet (Wang et al, Nat. Biotech., 15:239-243
(1997) og Wang et al, Gene Ther., 4:432-441 (1997)), og det rapamycininduserbare systemet (Magari et al, J. Clin. Invest., 100:2865-2872 (1997)). Noen induserbare promotere øker sin effektivitet med tiden. I slike tilfeller kan effektiviteten forbedres i slike systemer ved innføring av flere repressorer i tandem, for eksempel TetR forbundet med en TetR via en IRES. Alternativt kan man vente minst tre dager før man avsøker det hele for den ønskete funksjon. Ekspresjon av ønskete proteiner kan forbedres ved kjente midler for å bedre effektiviteten av dette systemet. For eksempel ved anvendelse av Woodchuck Hepatitis Virus Posttranscriptional Regulatory Element (WPRE).
I en annen utførelsesform kan den native promoter for transgenet benyttes. Den native promoter kan være foretrukket når det er ønskelig at ekspresjonen av transgenet etterlikner den native ekspresjonen. Den native promoteren kan benyttes når ekspresjonen av transgenet må reguleres midlertidig eller utviklingsmessig, eller på en vevsspesifikk måte, eller som respons på spesifikk transkripsjonsstimulering. I en ytterligere utførelsesform kan andre native ekspresjonskontrollelementer som enhancerelementer, polyadenyleringsseter eller Kozaks konsensussekvenser også anvendes for å etterlikne den native ekspresjonen.
Andre utførelsesformer av transgenet inkluderer et transgen, operativt forbundet med en vevsspesifikk promoter. Hvis ekspresjon i skjelettmuskelen er ønskelig, bør det for
eksempel benyttes en promoter som er aktiv i muskelen. Disse inkluderer promotere fra gener som koder skjelett P-aktin, myosin lettkjede 2A, dystrofin, muskelkreatinkinase så vel som syntetiske muskelpromotere, som aktiverer høyere enn naturlig forekommende promotere (se Li et al, Nat. Biotech., 17:241-245 (1999)). Eksempler på promotere som virker vevs-spesifikt er kjent for lever (albumin, Miyatake et al., J. Virol., 71:5124-32
(1997); hepatitt-B viruskjernepromoter, Sandig et al., Gene Ther., 3:1002-9 (1996); a-fetoprotein (AFP), Arbuthnot et al, Hum. Gene Ther., 7:1503-14 (1996)), benosteokalsin (Stein et al, Mol. Biol. Rep., 24:185-96 (1997)); bensialoprotein (Chen et al, J. Bone Miner. Res., 11:654-65 (1996)), lymfocytter (CD2, Hansal et al, J. Immunol, 161:1063-8 (1998)); immunoglobulin tungkjede; T-celle reseptorkjede), neuronal som neuronspesifikk enolase (NSE) promoteren (Andersen et al, Cell Mol. NeurobioL, 13:503-15 (1993)), neurofilament lettkjedegen (Piccioli et al, Proe. Nati. Acad. Sei. USA, 88:5611-5 (1991)), og det neuronspesifikke vgf-genet (Piccioli et al, Neuron, 15:373-84 (1995)), blant andre.
Eventuelt kan vektorer som bærer transgener som koder terapeutisk nyttige eller immunogene produkter også inkludere valgbare markører eller rapportørgener som kan inkludere sekvenser som koder geneticin, hygromicin- eller purimycinresistens, blant andre. Slike valgbare rapportører eller markørgener (fortrinnsvis lokalisert utenfor det virale genom som skal pakkes til en viral pakke), kan anvendes for å signalisere nærvær av plasmidet i bakterieceller, som ampicillinresistens. Andre vektorkomponenter kan inkludere replikasjonsopprinnelse. Valg av disse og andre promotere og vektorelementer er konvensjonelle og mange slike sekvenser er tilgjengelige (se for eksempel Sambrook et al., og referanser sitert deri).
Disse vektorer genereres ved anvendelse av teknikker og sekvenser som gis her, i forbindelse med teknikker som er velkjente for fagfolk på området. Slike teknikker inkluderer konvensjonelle kloningsteknikker av cDNA, som de som er beskrevet i litteraturen (Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY), ved anvendelse av overlappende oligonukleotidsekvenser av adenovirusgenomene, polymerasekjedereaksjon, og enhver egnet fremgangsmåte som gir den ønskete nukleotidsekvens.
III. Fremstilling av den rekombinante viralpartikkel
I en utførelsesform anvendes simian-adenoviralplasmidene (eller andre vektorer) for fremstilling av rekombinante adenovirale partikler. I en utførelsesform er de rekombinante adenovirus funksjonelt deletert i Ela- eller Elb-genene og bærer eventuelt andre mutasjoner, for eksempel temperaturfølsomme mutasjoner eller delesjoner i andre gener. I andre utførelsesformer er det ønskelig å beholde et intakt Ela- og/eller El b-område i de rekombinante adenovirus. Et slikt intakt El-område kan være lokalisert i sin native plassering i det adenovirale genom, eller plassert på setet for en delesjon i det native adenovirale genom (for eksempel i E3-regionen).
Ved konstruksjon av nyttige simian-adenovirusvektorer for avlevering av et gen til den humane (eller annet pattedyr) celle, kan et spektrum av adenovirusnukleinsyresekvenser anvendes i vektorene. For eksempel kan hele eller en del av det adenovirusforsinkete tidlige gen E3 være eliminert fra simian-adenovirussekvensene som utgjør en del av det rekombinante virus. Funksjonen av simian-E3 antas å være irrelevant for funksjonen og fremstillingen av den rekombinante viruspartikkelen. Simian-adenovirusvektorer kan også konstrueres til å ha en delesjon av minst ORF6-området av E4-genet, og mer ønskelig på grunn av funksjonsoverskuddet i dette området: hele E4-området. Ytterligere en annen vektor ifølge oppfinnelsen inneholder en delesjon i det forsinkete tidlig-gen E2a. Delesjoner kan også foretas i et hvilket som helst av de sene gener LI til og med L5 i simian-adenovirusgenomet. Tilsvarende kan delesjoner i de mellomliggende gener IX og IVa2være nyttige for visse formål. Andre delesjoner kan foretas i andre strukturelle eller ikke-strukturelle adenovirusgener. De ovenfor diskuterte delesjoner kan anvendes individuelt, dvs. at en adenovirussekvens for anvendelse ifølge oppfinnelsen kan inneholde delesjoner i kun ett enkelt område. Alternativt kan delesjonen av hele gener eller deler derav, effektive for å ødelegge deres biologiske aktivitet, anvendes i en hvilken som helst kombinasjon. For eksempel kan i ett eksempel på en vektor, adenovirussekvensen ha delesjoner av El-genene og E4-genet, eller El-, E2a- og E3-genene, eller El - og E3-genene, eller El-, E2a- og E4-genene, med eller uten delesjon av E3, osv. Som diskutert ovenfor, kan slike delesjoner anvendes i kombinasjon med andre mutasjoner som temperaturfølsomme mutasjoner for å oppnå et ønsket resultat.
En adenoviral vektor som mangler en hvilken som helst vesentlig adenoviral sekvens (for eksempel Ela, Elb, E2a, E2b, E4 ORF6, LI, L2, L3. L4 og L5) kan dyrkes i nærvær av de manglende adenovirale genprodukter som kreves for viral infektivitet og propagering av en adenoviral partikkel. Disse hjelperfunksjoner kan tilveiebringes ved å dyrke den adenovirale vektor i nærvær av én eller flere hjelperkonstruksjoner (for eksempel et plasmid eller et virus) eller en pakkende vertscelle. Se for eksempel teknikkene beskrevet for fremstilling av en "minimal" human Ad-vektor i W096/13597, publisert 9. mai 1996, hvortil det vises for detaljer.
1. Hjelpervirus
Avhengig av simian-adenovirusgeninneholdet i de virale vektorer som anvendes for å bære minigenet, kan et hjelperadenovirus eller et ikke-replikerende virusfragment være nødvendig for å gi tilstrekkelige simian-adenovirusgensekvenser som er nødvendige for å gi en infeksiøs, rekombinant viral partikkel inneholdende minigenet. Nyttige hjelpervirus inneholder utvalgte adenovirusgensekvenser som ikke er til stede i adenovirusvektorkonstruksjonen og/eller ikke uttrykkes av den pakkende cellelinjen hvori vektoren er transfektert. I en utførelsesform er hjelpervirusene replikasjonsdefekte og inneholder et antall adenovirusgener i tillegg til sekvensene beskrevet ovenfor. Et slikt hjelpervirus benyttes helst i kombinasjon med en El-uttrykkende cellelinje.
Hjelpervirus kan også tilformes til polykationkonjugater som beskrevet av Wu et al., J. Biol. Chem., 264:16985-16987 (1989); K. J. Fisher og J. M Wilson, Biochem. J., 299:49 (1. april 1994). Hjelpervirus kan evt. inneholde et andre rapportør-minigen. Et antall slike rapportørgener er kjente i teknikken. Nærvær av et rapportørgen på et hjelpervirus som er forskjellig fra transgenene på adenovirusvektorene, tillater både Ad- vektoren og hjelperviruset uavhengig kan overvåkes. Dette andre rapportørgenet benyttes for å muliggjøre separering mellom det resulterende rekombinante virus og hjelperviruset ved rensing.
2. Kompletteringscellelinjer
For å generere rekombinante simian-adenovirus (Ad) som er deletert i et hvilket som helst av genene som beskrevet ovenfor, må funksjonen av det deleterte genområdet, hvis det er vesentlig for replikasjonen og infektiviteten for viruset, tilføres det rekombinante virus via et hjelpervirus eller en cellelinje, dvs. en kompletterings- eller pakkings-cellelinje. I mange tilfeller kan en cellelinje som uttrykker den humane El benyttes for å transkomplettere sjimp-Ad-vektoren. Dette er spesielt fordelaktig fordi, pga. forskjellen mellom sjimp-Ad-sekvensene ifølge oppfinnelsen og de humane AdEl-sekvensene funnet i dagens tilgjengelige pakkingsceller, forhindrer bruk av de vanlige humane El-inneholdende celler generering av replikasjonskompetente adenovirus under replikerings- og fremstillingsprosessen. Imidlertid vil det under visse omstendigheter være ønskelig å benytte en cellelinje som uttrykker El-genproduktene som kan benyttes for fremstilling av et El-deletert simian-adenovirus. Slike cellelinjer er beskrevet. Se for eksempel U.S. patent nr. 6 083 716.
Hvis ønskelig kan sekvensene som er gitt her anvendes for å generere en pakkende celle eller cellelinje som i det minste uttrykker adenovirus-El-genet fra Pan5, Pan6, Pan7, SVI, SV25 eller SV39 under den transkripsjonale kontroll av en promoter for ekspresjonen i en utvalgt opphavscellelinje. Induserbare eller konstitutive promotere kan anvendes til dette formål. Eksempler på slike promotere er beskrevet i detalj annet sted i foreliggende beskrivelse. En opphavscelle velges for generering av en ny cellelinje som uttrykker et hvilket som helst ønsket AdPan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- eller SV39-gen. Uten begrensning kan en slik opphavscellelinje være HeLa (ATCC aksessnr. CCL2), A549 (ATCC aksessnr. CCL 185), HEK 293, KB (CCL 17), Detroit (for eksempel Detroit 510, CCL 72) og WI-38 (CCL 75) celler, blant andre. Disse cellelinjer er alle tilgjengelige fra "American Type Culture Collection", Manassas, Virginia 20110-2209. Andre egnete opphavscellelinjer kan oppnås fra andre kilder.
Slike El-uttrykkende cellelinjer er nyttige ved generering av rekombinante simian-adenovirus-El-deleterte vektorer. I tillegg, eller alternativt tilveiebringer oppfinnelsen cellelinjer som uttrykker ett eller flere simian-adenovirale genprodukter, for eksempel kan Ela, Elb, E2a og/eller E4 ORF6 konstrueres ved anvendelse av i det vesentligste de samme prosedyrer for anvendelse ved generering av rekombinante simian-virale vektorer. Slike cellelinjer kan anvendes for transkomplettering av adenovirusvektorer som er deleterte i de essensielle gener som koder disse produkter, eller for å tilveiebringe hjelperfunksjoner nødvendige for pakking av et hjelperavhengig virus (for eksempel adenoassosiert virus). Fremstillingen av en vertscelle ifølge oppfinnelsen involverer teknikker som sammensetning av valgte DNA-sekvenser. Denne sammensetningen kan gjennomføres ved anvendelse av konvensjonelle teknikker. Slike teknikker inkluderer cDNA- og genomisk kloning, alt velkjent og beskrevet av Sambrook et al., supra, ved bruk av overlappende oligonukleotidsekvenser fra adenovirale genomer kombinert med polymerasekjedereaksjon, syntetiske fremgangsmåter og hvilke som helst andre egnete fremgangsmåter som vil gi den ønskete nukleotidsekvens.
I nok et annet alternativ tilveiebringes de essensielle adenovirale genprodukter intrans ved adenovirale vektor og/eller hjelpervirus. I et slikt tilfelle kan en egnet vertscelle velges fra en hvilken som helst biologisk organisme inkludert prokaryote (for eksempel bakterielle) celler, og eukaryote celler inkludert insektceller, gjærceller og pattedyrceller. Spesielt ønskelige vertsceller er valgt blant hvilke som helst pattedyrearter, inkludert, men uten begrensning, celler som A549, WEHI, 3T3, 10T1/2, HEK293-celler eller PERC6 (av hvilke begge uttrykker funksjonelt adenoviralt El)
(Fallaux, F. J. et al, (1998), Hum. Gene Ther., 9:1909-1917), Saos, C2C12, L-celler, HT1080, HepG2 og primære fibroblast-, hepatocyt- og myoblastceller avledet fra pattedyr, inkludert menneske, ape, mus, rotte, kanin og hamster. Valget av pattedyrspesier for å tilveiebringe cellene er ingen begrensning ved oppfinnelsen; ei heller pattedyrcelletype, dvs. fibroblast-, hepatocyt-, tumorcelle, osv.
3. Sammensetning av viralpartikkel og transfeksjon av en cellelinje Ved avlevering av vektoren som omfatter minigenet ved transfeksjon blir vektoren generelt avlevert i mengde på fra omkring 5 ug til 100 (ig DNA, og fortrinnsvis omkring 10 til 50 u.g DNA til omkring lxlO<4>celler til omkring
1x10 celler, og fortrinnsvis omkring 10 celler. Imidlertid kan disse relative mengder av vektor-DNA til vertscellen justeres, tatt i betraktning faktorer som den valgte vektor, avleveringsmetoder og de valgte vertsceller.
Vektoren kan være en hvilken som helst vektor som er kjent i teknikken eller beskrevet ovenfor, inkludert nakent DNA, et plasmid, en phag, et transposon, kosmider, episomer, virus, osv. Innføring i vektorens vertscelle kan oppnås på enhver måte som kjent i teknikken, eller som beskrevet ovenfor inkludert transfeksjon og infeksjon. Ett eller flere av de adenovirale gener kan stabilt integreres i vertscellens genom, stabilt uttrykkes som episomer eller uttrykkes transient. Genproduktene kan alle uttrykkes transgent, på et episom eller integreres stabilt, eller noen av genproduktene kan uttrykkes stabilt, mens andre uttrykkes transient. Videre kan promoterne for hvert av de virale gener velges uavhengig fra en konstitutiv promoter, en induserbar promoter eller en nativ, adenoviral promoter. Disse promoterne kan reguleres ved en spesifikk fysiologisk tilstand for organismen eller cellen (dvs. ved differensieringstilstander eller i replikerende eller hvilende celler) eller ved for eksempel eksogent tilsatte faktorer.
Innføring av molekylene (som plasmider eller virus) i vertscellen kan også gjennomføres ved anvendelse av teknikker som er kjent av fagmannen, og som diskutert her i beskrivelsen. I en foretrukket utførelsesform benyttes standard transfeksjonsteknikker, for eksempel CaPCvtransfeksjon eller elektroporering.
Sammensetning av de valgte adenovirus-DNA-sekvenser (så vel som transgenet) og andre vektorelementer til forskjellige mellomplasmider, og anvendelse av plasmidene og vektorene for fremstilling av en rekombinant, viral partikkel, oppnås ved anvendelse av konvensjonelle teknikker. Slike teknikker inkluderer konvensjonelle kloningsteknikker og cDNA, slik som dem som er beskrevet i litteraturen (Sambrook et al., supra), bruk av overlappende oligonukleotidsekvenser av adenovirusgenomene, polymerasekjedereaksjon, og en hvilken som helst egnet fremgangsmåte som gir den ønskete nukleotidsekvens. Standard transfeksjons- og kotransfeksjonsteknikker benyttes, for eksempel CaP04-presipiteirngsteknikker. Andre konvensjonelle metoder som benyttes inkluderer homolog rekombinering av de virale genomer, plakkdannelse av virus i agaroversjikt, fremgangsmåter for måling av signalgenerering, og liknende.
Etter konstruksjon og sammensetning av den ønskete minigenholdige, virale vektor, transfekteres for eksempel vektoren in vi tro i nærvær av et hjelpervirus inn i den pakkende cellelinjen. Homolog rekombinasjon inntrer mellom hjelper- og vektorsekvensene, noe som tillater at adenovirus-transgen-sekvensene i vektorene replikeres og pakkes til virionkapsider, noe som resulterer i de rekombinante, virale vektorpartikler. Den gjengse metode for fremstilling av slike viruspartikler er transfeksjonsbasert. Imidlertid er oppfinnelsen ikke begrenset til slike metoder.
De resulterende rekombinante simianadenovirus er nyttige ved overføring av et valgt transgen til en valgt celle. I in vivo-forsøk med de rekombinante virus dyrket i de pakkende cellelinjer demonstrerer de El-deleterte, rekombinante simianadenovirale vektorer ifølge oppfinnelsen anvendelighet ved overføring av et transgen til en ikke-simian og fortrinnsvis en human celle.
IV. Anvendelse av de rekombinante adenovirusvektorene
De rekombinante simianadenovirusvektorer ifølge oppfinnelsen er nyttige for genoverføring til en human eller ikke-simian veterinærpasient in vitro, ex vivo og in vivo.
De rekombinante adenovirusvektorer som er beskrevet her, kan anvendes som ekspresjonsvektorer for fremstilling av produktene som kodes av de heterologe gener in vitro. For eksempel kan de rekombinante adenovirus som inneholder et gen innskutt i plasseringen av en El-delesjon, transfekteres inn i en El-uttrykkende cellelinje, som beskrevet ovenfor. Alternativt kan replikasjonskompetente adenovirus benyttes i en annen valgt cellelinje. De transfekterte celler dyrkes så på konvensjonell måte og tillater det rekombinante adenovirus å uttrykke genproduktet fra promotere. Genproduktet kan så gjenvinnes fra kulturmediet ved kjente, konvensjonelle fremgangsmåter som proteinisolering og gjenvinning fra kultur.
En Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- eller SV39-avledet rekombinant simianadenoviral vektor ifølge oppfinnelsen gir en effektiv genoverføringsvehikkel som kan avlevere et valgt transgen til en valgt vertscelle in vivo eller ex vivo, selv når organismen har nøytraliserende antistoffer mot én eller flere AAV-serotyper. I en utførelsesform blandes rAAV og cellene ex vivo; de infekterte celler dyrkes ved konvensjonelle fremgangsmåter; og de transduserte celler reinfuseres i pasienten. Disse sammensetningene er spesielt egnet for genavlevering for terapeutiske formål og for immunisering inkludert indusering av beskyttende immunitet.
Mer vanlig vil Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- eller SV39-rekombinante adenovirale vektorer ifølge oppfinnelsen anvendes for avlevering av terapeutiske eller immunogene molekyler, som beskrevet ovenfor. Det vil lett forstås for begge anvendelse at de rekombinante, adenovirale vektorer ifølge oppfinnelsen er spesielt godt egnet for anvendelse i regimer som involverer gjentatt avlevering av de rekombinante, adenovirale vektorer. Slike regimer involverer karakteristisk avlevering av en serie virale vektorer hvori de virale kapsider er endret. De virale kapsider kan forandres for hver etterfølgende tilførsel, om det på forhånd er valgt et antall tilførsler av et spesielt serotypekapsid (for eksempel en, to, tre, fire eller flere). Således kan et regime involvere avlevering av en rAd med et første simiankapsid, avlevering av en rAd med et andre simiankapsid, og avlevering med et tredje simiankapsid. Et antall andre regimer som benytter Ad-kapsider ifølge oppfinnelsen alene, i kombinasjon med et annet, eller i kombinasjon med andre Ad-serotyper, vil være åpenbart for fagmannen. Eventuelt kan et slikt regime involvere tilførsel av rAd med kapsider av andre, ikke-humane primatadenovirus, humant adenovirus eller kunstige serotyper, som beskrevet her. Hver fase av regimet kan involvere tilførsel av en serie injeksjoner (eller andre avleveringsruter) med et enkelt Ad-serotypekapsid, fulgt av en serie med et annet Ad-serotypekapsid. Alternativt kan de rekombinante Ad-vektorer ifølge oppfinnelsen benyttes i regimer som involverer andre ikke-adenoviralmedierte avleveringssystemer, inkludert andre virale systemer, ikke-virale avleveringssystemer, protein, peptider og andre biologisk aktive molekyler.
De påfølgende avsnitt vil fokusere på eksempler på molekyler som kan avleveres via de adenovirale vektorer ifølge oppfinnelsen.
A. Ad-mediert avlevering av terapeutiske molekyler
I en utførelsesform tilføres de ovenfor beskrevne rekombinante vektorer til mennesker i henhold til publiserte fremgangsmåter for genterapi. En simianviral vektor som bærer det valgte transgen, kan tilføres til en pasient, fortrinnsvis suspendert i en biologisk kompatibel oppløsning, eller en farmasøytisk akseptabel avleveringsbærer. En egnet bærer inkluderer steril saltoppløsning. Andre vandige eller ikke-vandige isotoniske, sterile injeksjonsoppløsninger og vandige og ikke-vandige sterile suspensjoner som er kjent for å være farmasøytisk akseptable bærere, og som er velkjente for fagmannen, kan anvendes for dette formål. De simianadenovirale vektorer tilføres i tilstrekkelige mengder til å transdusere målcellen, og å gi tilstrekkelig nivå for genoverføring og ekspresjon for å tilveiebringe en terapeutisk fordel uten urimelige, ugunstige elementer, eller med medisinsk akseptable, fysiologiske effekter, som lett kan bestemmes av fagmannen på området. Konvensjonelle og farmasøytisk akseptable tilførselsruter inkluderer, men er ikke begrenset til direkte avlevering til retina og andre intraokkulære avleveringsmetoder, direkte avlevering til lever, inhalering, intranasal, intravenøs, intramuskulær, intratrakeal, subkutan, intradermal, rektal, oral eller andre parenterale veier for tilførsel. Tilførselsveier kan kombineres dersom ønskelig, eller justeres avhengig av transgenet eller betingelsene. Tilførselsveien vil primært avhenge av tilstanden som behandles.
Doseringene av den virale vektor vil avhenge av faktorer som tilstanden som behandles, alder, vekt og pasientens helse, og kan således variere blant pasienter. For eksempel er en terapeutisk effektiv voksen, human- eller veterinærdose av den virale vektor, generelt i området omkring 100 ul til omkring 100 ml bærer inneholdende konsentrasjoner fra omkring lxlO<6>til omkring lxlO<15>partikler, omkring lxlO<11>til lxlO13 partikler eller omkring lxl0<9>til lxl012 partikkelvirus. Doseringer vil avhenge av dyrets størrelse og administreirngsmodus. For eksempel vil en egnet human- eller veterinærdose (for et dyr på omkring 80 kg) for intramuskulær injeksjon ligge i området omkring lxlO<9>til 5xl012 partikler/ml for et enkelt sete. Eventuelt kan flere administreirngsseter anvendes. I et annet eksempel kan en egnet human- eller veterinærdose ligge i området omkring lxlO<11>til omkring lxlO<15>partikler for oral formulering. Fagmannen på området kan justere disse doser avhengig av administreringsvei, og den terapeutiske eller vaksinesammensetningen der den rekombinante vektor benyttes. Ekspresjonsnivåene for transgenet, eller for et immunogen, nivået for sirkulerende antistoff kan overvåkes for bestemmelse av frekvensen av doseadministrering. Ytterligere andre fremgangsmåter for bestemmelse av tidsforløpet for administreringsfrekvens, vil være lett å se for fagmannen.
En eventuell fremgangsmåte involverer samtidig tilførsel til pasienten, enten samtidig med, før eller etter tilførsel av den virale vektor av en egnet mengde av en kortvirkende immunmodulator. Den valgte immunmodulator defineres her som et middel i stand til å inhibere dannelse av nøytraliserende antistoffer rettet mot den rekombinante vektor ifølge oppfinnelsen, eller som er i stand til å inhibere cytolytisk T-lymfocytt (CTL) eliminering av vektoren. Immunmodulatoren kan interferere med interaksjonene mellom T-hjelper sub-settene (Tm eller Trø) og B-celler for å inhibere nøytralisering av antistoffdannelse. Alternativt kan immunmodulatorer inhibere interaksjoner mellom Th i-celler og CTLer for å redusere opptreden av CTL-eliminering av vektoren. Et antall nyttige immunmodulatorer og doseringer for anvendelse av disse, er for eksempel beskrevet av Yang et al, J. Virol, 70(9) (september 1996); WO96/12406, publisert 2. mai 1996; samt PCT/US96/03035, idet det vises til alle disse vedrørende detaljer.
1. Terapeutiske transgener
Nyttige terapeutiske produkter som kodes av transgenet, inkluderer hormoner og vekst-og differensieirngsfaktorer som uten begrensning inkluderer insulin, glukagon, veksthormon (GH), paratyroid hormon (PTH), veksthormonfrigivende faktor (GRF), follikkelstimulerende hormon (FSH), luteiniserende hormon (LH), humant korionisk gonadotropin (hCG), vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF), angiopoietiner, angiostatin, granulocyt kolonistimulerende faktor (GCSF), erytropoietin (EPO), konnektiv vev-vekstfaktor (CTGF), basisk fibroblast vekstfaktor (bFGF), sur fibroblast vekstfaktor (aFGF), epidermal vekstfaktor (EGF), transformerende vekstfaktor (TGF), plateavledet vekstfaktor (PDGF), insulin vekstfaktor I og II (IGF-I og IGF-II), enhver av den transformerende vekstfaktor superfamilie, inkludert TGF, aktiviner, inhibiner, eller ethvert av de benmorfogene proteiner (BMP) BMP ene 1-15, enhver av heregluin/neuregulin/ARIA/neu differensierings faktor (NDF) familie av vekstfaktorer, nervevekstfaktor (NGF), hjerneavledet neurotrofisk faktor (BDNF), neurotrofiner NT-3 og NT-4/5, siliær neurotrofisk faktor (CNTF), glialcellelinjeavledet neurotrofisk faktor (GDNF), neurturin, agrin, enhver fra familien av semaforiner/collapsiner, netrin-I og netrin-2, hepatocytt vekstfaktor (HOF), efriner, noggin, sonisk hedgehog og tyrosinhydroksylase.
Andre nyttige transgene produkter inkluderer proteiner som regulerer immunsystemet og inkluderer uten begrensning cytokiner og lymfokiner som trombopoietin (TPO), interleukiner (IL) IL-1 til IL-25 (inkludert for eksempel IL-2, IL-4, IL-12 og IL-18), monocytkemoattrakterende protein, leukemiinhibitonsk faktor, granulocytmakrofag-kolonistimulerende faktor, Fas-ligand, tumornekrosefaktorer og interferoner, og stamcellefaktor, flk-2/flt3-ligand. Genprodukter som fremstilles ved immunsystemet er også nyttige ifølge oppfinnelsen. Disse inkluderer uten begrensning immunglobuliner IgG, IgM, IgA, IgD og IgE, kimære immunglobuliner, humaniserte antistoffer, enkelkjedeantistoffer, T-celle reseptorer, kimære T-celle reseptorer, enkelkjede T-celle reseptorer, klasse I- og klasse II-MHC-molekyler, så vel som konstruerte immunglobuliner og MHC-molekyler. Nyttige genprodukter inkluderer også komplementregulatoriske proteiner som komplementregulatoriske proteiner, membran-kofaktorprotein (MCP), nedbrytningsakselererende faktor (DAF), CR1, CR2 og CD59.
Ytterligere andre nyttige genprodukter inkluderer enhver reseptor for hormoner, vekstfaktorer, cytokiner, lymfokiner, regulatoriske proteiner og immunsystemproteiner. Oppfinnelsen omfatter reseptorer for kolesterolregulering, inkludert lavtetthets lipoprotein (LDL) reseptor, høytetthets lipoprotein (HDL)reseptor, meget lavtetthets lipoprotein (VLDL) reseptor, og scavenger reseptoren. Oppfinnelsen omfatter også genprodukter som medlemmer av steroid hormonreseptorsuperfamilien inkludert glukokortikoidreseptorer og østrogenreseptorer, Vitamin D reseptorer og andre nukleære reseptorer. I tillegg inkluderer nyttige genprodukter transkripsjonsfaktorer som jun, fos, max, mad, serumresponsfaktor (SRF), API, AP2, myb, MyoD og myogenin, ETS-boksinneholdende proteiner, TFE3, E2F, ATF1, ATF2, ATF3, ATF4, ZF5, NFAT, CREB, HNF-4, C/EBP, SP1, CCAAT-boksbindende proteiner, interferonreguleringsfaktor (IRF-1), Wilms tumorprotein, ETS-bindende protein, STAT, GATA-boksbindende proteiner, for eksempel GATA-3 og gaffelhodefamilien av vingete heliksproteiner.
Andre nyttige genprodukter inkluderer karbamoyl syntetase I, ornitintranskarbamylase, arginosuksinatsyntetase, arginosuksinatlyase, arginase, fumarylacetacetathydrolase, fenylalaninhydroksylase, a-1 antitrypsin, glukose-6fosfatase, porfobilinogen deaminase, faktor-VIII, faktor-IX, cystation P-syntase, forgrenet kjedeketosyredekarboksylase, albumin, isovaleryl-coA dehydrogenase, propionyl CoA karboksylase, metylmalonyl CoA mutase, glutaryl CoA dehydrogenase, insulin, P-glukosidase, pyruvatkarboksylat, hepatisk fosforylase, fosforylase kinase, glysindekarboksylase, H-protein, T-protein, en cystisk fibrose transmembranregulator (CFTR) sekvens og en dystrofm cDNA-sekvens.
Andre nyttige genprodukter inkluderer ikke-naturlig forekommende polypeptider som kimære eller hybride polypeptider med en ikke-naturlig opptredende aminosyresekvens inneholdende innskudd, delesjoner eller aminosyresubstitusjoner. For eksempel kunne enkelkjedekonstruerte immunglobuliner være nyttige hos visse immunkompromitterte pasienter. Andre typer ikke-naturlig forekommende gensekvenser inkluderer antisensmolekyler og katalytiske nukleinsyrer som ribozymer, som ville kunne benyttes for å redusere overekspresjon av et mål.
Reduksjon og/eller modulering av en genekspresjon er spesielt ønskelig for behandling av hyperproliferative tilstander som karakteriseres ved hyperprolifererende celler, slik som cancere og psoriasis er. Målpolypeptider inkluderer disse polypeptider som fremstilles utelukkende eller ved høyere nivåer i hyperproliferative celler, sammenliknet med normale celler. Målantigener inkluderer polypeptider kodet av onkogener som myb, mye, fyn og translokasjongenet bcr/abl, ras, src, P53, neu, trk og EGRF. I tillegg til onkogenprodukter som målantigener, inkluderer målpolypeptider for anticancerbehandling og beskyttende regimer variable områder av antistoffer dannet av B-cellelymfomer og variable områder av T-cellereseptorer av T-cellelymfomer, som i visse utførelsesformer også benyttes som målantigener for autoimmune sykdommer. Andre tumorassosierte polypeptider kan benyttes som målpolypeptider, for eksempel polypeptider som finnes i høyere nivåer i tumorceller inkludert polypeptider som gjenkjennes av monoklonalt antistoff 17-IA og folatbindingspolypeptider.
Andre egnete terapeutiske polypeptider og proteiner inkluderer dem som kan være nyttige for behandling av individer som lider av autoimmune sykdommer og lidelser ved å tilveiebringe en bred basert, beskyttende immunrespons mot mål assosiert med autoimmunitet, inkludert cellereseptorer og celler som gir cellerettete antistoffer. T-cellemedierte autoimmune sykdommer inkluderer reumatoid artritt (RA), multippel sklerose (MS), Sjogrens syndrom, sarkoidose, insulinavhengig diabetes mellitus (IDDM), autoimmun tyroiditt, reaktiv artritt, ankyloserende spondylitt, skleroderma, polymyositt, dermatomyositt, psoriasis, vaskulitt, Wegeners granulomatose, Crohns sykdom og ulserativ kolitt. Hver av disse sykdommer karakteriseres ved T-cellereseptorer (TCR) som binder til endogene antigener og starter den inflammatoriske kaskade som assosieres med autoimmune sykdommer.
Simianadenoviralvektorene ifølge oppfinnelsen er spesielt velegnet for terapeutiske regimer hvori flere adenoviralmedierte avleveringer av transgener er ønskelig, for eksempel i regimer som involverer ny avlevering av det samme transgen, eller i kombinasjonsregimer som involverer avlevering av andre transgener. Slike regimer kan involvere administrering av en Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- eller SV39-simianadenoviral vektor, fulgt av readministrering med en vektor fra det samme serotypeadenovirus. Spesielt egnete regimer involverer administrering av en Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- eller SV39-simianadenoviral vektor ifølge oppfinnelsen, hvori serotypen av den virale vektor som avleveres ved den første tilførselen, skiller seg fra serotypen av den virale vektor som anvendes i én eller flere av de påfølgende tilførsler. For eksempel involverer et terapeutisk regime administrering av en Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- eller SV39-vektor og gjentatt tilførsel med én eller flere adenovirale vektorer av den samme eller ulike serotyper. I et annet eksempel involverer et terapeutisk regime tilførsel av en adenoviral vektor, etterfulgt av gjentatt tilførsel med en Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- eller SV39-vektor ifølge oppfinnelsen, som skiller seg fra serotypen av den først avleverte adenovirale vektor, og eventuell ytterligere tilførsel med en annen vektor som er den samme, eller fortrinnsvis skiller seg når det gjelder serotype fra vektoren i de forutgående administreirngstrinn. Disse regimer er ikke begrenset til avlevering av adenovirale vektorer konstruert ved anvendelse av Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- eller SV39-simianserotypene ifølge oppfinnelsen. Tvert imot kan disse regimer lett benytte vektorer av andre adenovirale serotyper, inkludert uten begrensning, andre simianadenovirale serotyper, for eksempel Pan9 eller C68, Cl, osv.), eller ikke-human primatadenovirale serotyper, eller humane adenovirale serotyper, i kombinasjon med én eller flere av Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- eller SV3 9-vektorene ifølge oppfinnelsen. Eksempler på slike simian-, andre ikke-humane primat- og humanadenovirale serotyper er diskutert annet sted i denne beskrivelsen. Videre kan disse terapeutiske regimer involvere enten samtidig eller sekvensielt, avlevering av Pan5-, Pan6-, Pan7-, SVI-, SV25- og/eller SV39-adenovirale vektorer ifølge oppfinnelsen, i kombinasjon med ikke-adenovirale vektorer, ikke-virale vektorer, og/eller et antall andre terapeutisk nyttige forbindelser eller molekyler. Oppfinnelsen er ikke begrenset til disse terapeutiske regimer, et spektrum av slike vil lett være åpenbart for fagmannen på området.
B. Ad-formidlet avlevering av immunogene transgener
De rekombinante simianadenovirus kan også anvendes som immunogene preparater. Som anvendt heri er et immunogent preparat et preparat der et humoralt (for eksempel antistoff) eller cellulært (for eksempel en cytotoksisk T-celle) respons er reist mot et transgenprodukt avlevert av det immunogene preparat etter avlevering til et pattedyr, og fortrinnsvis en primat. Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer et rekombinant simian-Ad som i enhver av sine adenovirussekvensdelesjoner kan inneholde et gen som koder et ønsket immunogen. Simianadenovirus vil sannsynligvis være bedre egnet for anvendelse som levende, rekombinant virus vaksine i forskjellige animalske arter, sammenliknet med adenovirus av human opprinnelse, men er ikke begrenset til en sådan'anvendelse. De rekombinante adenovirus kan anvendes som profylaktiske eller terapeutiske vaksiner mot ethvert patogen, for hvilke antigenet eller antigenene er identifisert(e), som er avgjørende for induksjon av en immunrespons og i stand til å begrense spredning av patogenet, og for hvilken den angjeldende cDNA er tilgjengelig.
Slike vaksine- (eller immunogene) sammensetninger formuleres i en egnet avleveringsbærer som beskrevet ovenfor. Generelt ligger dosene for de immunogene preparatene i de områder definert ovenfor for terapeutiske preparater. Immunitetsnivå for det valgte gen kan overvåkes for bestemmelse av behov for forsterkere, om dette er nødvendig. Etter bedømmelse av antistofftitere i serum, kan det evt. være ønskelig ned forsterket immunisering.
Eventuelt kan et vaksinepreparat ifølge oppfinnelsen formuleres til å inneholde andre komponenter, inkludert for eksempel adjuvanser, stabilisatorer, pH-justerere, preserveirngsmidler og liknende. Slike komponenter er velkjente på vaksineområdet. Eksempler på egnete adjuvanser inkluderer uten begrensning, liposomer, alum, monofosforyl lipid A og enhver biologisk aktiv faktor som cytokin, interleukin, kemokin, ligander og evt. kombinasjoner derav. Visse av disse biologisk aktive faktorer kan uttrykkes in vivo, for eksempel via et plasmid eller en viral vektor. En slik adjuvans kan for eksempel administreres med en primer DNA-vaksine som koder et antigen for å øke den antigenspesifikke immunrespons sammenliknet med den immunrespons som genereres ved priming med en DNA-vaksine som kun koder antigenet.
De rekombinante adenovirus kan administreres i en "immunogenisk mengde", dvs. en mengde rekombinant adenovirus som er effektiv i en administreringsvei for å transfektere de ønskete celler og gi tilstrekkelige nivåer av ekspresjon av det valgte gen for å indusere en immunrespons. Der beskyttende immunitet er til stede, blir de rekombinante adenovirus betraktet som vaksinepreparater nyttige for prevensjon av infeksjon og/eller gjenopptredende sykdom.
Alternativt eller i tillegg kan vektorene ifølge oppfinnelsen inneholde et transgen som koder et peptid, polypeptid eller protein som induserer en immunrespons mot et valgt immunogen. De rekombinante adenovirus ifølge oppfinnelsen er ventet å være meget effektive i indusering av cytolytiske T-celler og antistoffer mot det innførte, heterologe antigeniske protein som uttrykkes av vektoren.
For eksempel kan immunogener være valgt fra et antall virale familier. Eksempler på ønskelige, virale familier mot hvilke en immunrespons ville være ønskelig, inkluderer picornavirusfamilien, som inkluderer genera rhinovirus som er ansvarlige for omkring 50 % av tilfellene av vanlig forkjølelse; genera enterovirus som inkluderer poliovirus, coxsackievirus, echovirus, og humant enterovirus som hepatitt-A-virus; og genera aptovirus, som er ansvarlige for munn- og klovsyke, primært i ikke-humane dyr. Innen picornavirusfamilien av virus inkluderer målantigenene VP1, VP2, VP3, VP4 og VPG. En annen viral familie inkluderer calsivirusfamilien, som omfatter Norwalk-gruppen av virus som er et viktig kausativt middel ved epidemisk gastroenteritt. Ytterligere en viralfamilie som er ønskelig for anvendelse ved målrettete antigener for indusering av immunresponer hos mennesker og ikke-humane dyr er togavirusfamilien, som inkluderer genera alfavirus, som inkluderer Sindbisvirus, RossRiver virus, og venezuelisk, østlig og vestlig Equine encefalitt, og rubivirus, inkludert Rubellavirus. Flaviviridae-familien inkluderer denguefeber, gulfeber, japansk encefalitt, St. Louis encefalitt og flåttbåret encefalittvirus. Andre målantigener kan genereres fra hepatitt-C eller coronavirus-familien som inkluderer et antall ikke-humane virus som infeksiøst bronkittvirus (fjærfe), porcin transmitterbar gastooenterisk virus (gris), porcin hemagglutinerende encefalomyelittvirus (gris), felin infeksiøs peritonittvirus (katter), felin enterisk koronavirus (katter), valpekoronavirus (hunder), og humant respiratorisk koronavirus, som kan forårsake vanlig forkjølelse og/eller ikke-A-, B- eller C-hepatitt. Innen koronavirusfamilien inkluderer målantigenene El (også benevnt M- eller matriksprotein), E2 (også benevnt S- eller Spikeprotein), E3 (også benevnt HE- eller hemagglutinelterose) glykoprotein (ikke til stede i alle koronavirus) eller N (nukleokapsid). Ytterligere andre antigener kan målrettes mot rabdovirusfamilien, som inkluderer genera vesiculovirus (for eksempel vesiculært stomatittvirus), og den generelle lyssavirus (for eksempel rabies). Innen rabdovirusfamilien kan egnete antigener avledes fra G-proteinet eller N-proteinet. Familien filoviridae som inkluderer hemorragisk febervirus, slik som Marburg- og Ebolavirus, kan være en egnet kilde for antigener. Paramyxovirusfamilien inkluderer parainfluensavirus type-1, parainfluensavirus type-3, bovint parainfluensavirus type-3, rubulavirus (kusmavirus), parainfluensavirus type-2, parainfluensavirus type-4, Newcastle sykdomsvirus (kylling), kvegpest, morbillivirus som inkluderer meslinger og canine distemper, og pneumovirus som inkluderer respiratorisk syncytialvirus. Influensaviruset er klassifisert innen familien ortomyxovirus og er en egnet kilde for antigener (for eksempel HA-proteinet, Nl-proteinet). Bunyavirusfamilien inkluderer genera bunyavirus (California encefalitt, La Crosse), flebovirus (Rift Valley feber), hantavirus (puremala er et hemahagin-febervirus), nairovirus (Nairobi sauesykdom) og forskjellige ikke-betegnete bungavirus. Arenavirusfamilien tilveiebringer en kilde for antigener mot LCM og Lassa febervirus. Reovirusfamilien inkluderer genera reovirus, rotavirus (som forårsaker akutt gastroenteritt hos barn), orbivirus, og cultivirus (Colorado flåttfeber, Lebombo (mennesker), ekvin encefalose, blåtunge).
Retrovirusfamilien inkluderer subfamilien oncorivirinal som omfatter slike human- og veterinærsykdommer som felin leukemivirus, HTL-VI og HTL-VII, lentivirinal (som inkluderer humant immunodefektvirus (HIV), simian immunodefektvirus (SIV), felin immunodefektvirus (FIV), ekvin infeksiøst anemivirus og spumavirinal). Blant lentivirus er mange egnete antigener beskrevet og kan lett velges. Eksempler på egnete HIV- og SrV-antigener inkluderer uten begrensning gag-, pol-, Vif-, Vpx-, VPR-, Env-, Tat-, Nef- og Rev-proteiner, så vel som forskjellige fragmenter derav. For eksempel kan egnete fragmenter av Env-proteinet inkludere enhver av dets subenheter som gpl20, gpl60, gp41 eller mindre fragmenter derav, for eksempel med en lengde på minst omkring 8 aminosyrer. Tilsvarende kan fragmenter av tat-proteinet velges. (Se for eksempel U.S. patent nr. 5 891 994 og U.S. patent nr. 6 193 981). Se også HIV- og SIV-proteinene som beskrevet av D. H. Barouch et al, J. Virol, 75(5):2462-2467 (mars 2001), og R. R. Amara et al, Science, 292:69-7'4 (6. april 2001). I et annet eksempel kan HIV- og/eller SIV-immunogene proteiner eller peptider benyttes for å danne fusjonsproteiner eller andre immunogene molekyler. Se for eksempel HIV-1 Tat- og/eller -Nef fusjonsproteiner og immuniseringsregimene beskrevet i WO 01/54719, publisert 2. august 2001, samt WO 99/16884, publisert 8. april 1999. Oppfinnelsen er ikke begrenset til de HIV- og/eller SIV-immunogene proteiner eller -peptider som er beskrevet heri. I tillegg er en varietet av modifikasjoner av disse proteiner beskrevet eller kan lett oppnås av fagmannen. Se for eksempel det modifiserte gag-protein beskrevet i U.S. patent nr. 5 972 596. Videre kan ethvert HIV- og/eller SIV-immunogen avleveres alene eller i kombinasjon. Slike kombinasjoner kan inkludere ekspresjon fra en eller flere vektorer. Eventuelt kan andre kombinasjoner involvere avlevering av ett eller flere uttrykte immunogener ved avlevering av ett eller flere av immunogenene i proteinform. Slike kombinasjoner er diskutert i større detalj nedenfor.
Papovavirusfamilien inkluderer subfamilien polyomavirus (BKU- og JCU-virus), og subfamilien papillomavirus (assosiert med cancere eller malign progresjon av papilloma). Adenovirusfamilien inkluderer virus (EX, AD7, ARD, O.B.) som forårsaker respiratorisk sykdom og/eller enteritt. Parvovirusfamilien inkluderer felint parvovirus (felint enteritt), felint panleucopeniavirus, valpeparvovirus og porcint parvovirus. Herpesvirusfamilien inkluderer subfamilien a-herpesvirinae, som omfatter genera simpleksvirus (HSV-I, HSV-II), varicellovirus (pseudorabies, varicella zoster) og subfamilien P-herpesvirinae, som inkluderer genera cytomegalovirus (HCMV, muromegalovirus) og subfamilien y-herpesvirinae, som inkluderer genera lymphocryptovirus, EBV (Burkitts lymfom), infeksiøs rhinotracheitis, Mareks sykdomsvirus og radinovirus. Poxvirusfamilien inkluderer subfamilien kordopoxvirinae, som omfatter genera ortopoxvirus (Variola (småkopper) og vaccinia (kukopper)), parapoxvirus, avipoxvirus, capripoxvirus, leporipoxvirus, suipoxvirus og subfamilien entomopoxvirinae. Hepadnavirusfamilien inkluderer Hepatitt-B-virus. Et ikke-klassifisert virus som kan være en egnet kilde for antigener er hepatitt 8-virus. Ytterligere andre virale kilder kan inkludere avianinfeksiøst, bursalt sykdomsvirus og porcin respiratorisk- og reproduktivt syndromvirus. A-virusfamilien inkluderer ekvin arteritt virus og forskjellige encefalittvirus.
Foreliggende oppfinnelse omfatter også immunogener nyttige for immunisering av et menneske eller ikke-humant dyr mot andre patogener, inkludert bakterier, sopp, parasittmikroorganismer eller multicellulære parasitter som infiserer human- og ikke-human vertebrater, eller fra en cancercelle eller tumorcelle. Eksempler på bakterielle patogener inkluderer patogeniske grampositive cocci, inkludert pneumokokker; stafylokokker; og streptokokker. Patogene gramnegative cocci inkluderer meningokokker; gonokokker. Patogene enteriske gramnegative bacilli inkluderer enterobacteriaceae; pseudomonas, acinetobacteria og eikenella; melioidosis; salmonella; shigella; haemophilus; moraxella; H. ducreyi (som forårsaker sjanker); brucella; Franisella tularensis (som forårsaker tularemi); yersinia (pasteurella); streptobacillus moniliformis and spirillum; grampositive bacilli inkluderer listeria monocytogener; erysipelothrix rhusiopathiae; Corynebacterium diphtheria (difteri); cholera; B. anthracis (antrax); donovanosis (granuloma inguinale); og bartonellose. Sykdommer forårsaket av patogene anaerobe bakterier inkluderer tetanus; botulisme; andre klostridia; tuberkulose; lepra; og andre mycobakterier. Patogene spirochetale sykdommer inkluderer syfilis; treponematoser; yaws, pinta og endemisk syfilis; og leptospirose. Andre infeksjoner som forårsakes av høyere patogene bakterier og patogenisk sopp inkluderer actinomycosis; nocardiosis; cryptococcosis, blastomycosis, histoplasmosis og coccidioidomycosis; candidiasis, aspergillosis og mucormycosis; sporotrichosis; paracoccidiodomycosis, petriellidiosis, torulopsosis, mycetoma og chromomycosis; og dermatophytosis. Rickettsiale infeksjoner inkluderer tyfusfeber, Rocky Mountain flekkfeber, Q-feber og rickettsiale kopper. Eksempler på mykoplasma og klamydisk infeksjon inkluderer: mykoplasma pneumoniae; lymphogranuloma venereum; psittacosis; og perinatalklamydial infeksjoner. Patogene eukaryoter omfatter patogene protozoer og helminter og infeksjoner dannet av disse inkluderer: amebiasis; malaria; leishmaniasis; trypanosomiasis; toxoplasmosis; Pneumocystis carinii; Trichans; toxoplasma gondii; babesiosis; giardiasis; trichinosis; filariasis; schistosomiasis; nematodes; trematodes eller flukes; og cestode (bendelorm) infeksjoner.
Mange av disse organismer og/eller toksiner som fremstilles av disse er identifisert av "Centers for Disease Control" [(CDC), Department of Health and Human Services, USA], som midler som har et potensiale for anvendelse ved biologiske angrep. For eksempel inkluderer noen av disse biologiske midler Bacillus anthracis (antrax), Clostridium botulinum og dettes toksin (botulisme), Yersinia pestis (pest), variola major (småkopper), Francisella tularensis (tularemi), og viral hemorrhagisk feber [filovirus (for eksempel Ebola, Marburg], og arenavirus [for eksempel Lassa, Machupo]), der alle i dag er klassifisert som midler kategori A; Coxiella burnetti (Q-feber); Brucella specier (brucellose), Burkholderia mallei (snive), Burkholderia pseudomallei (meloidosis), xicinus communis og dennes toksin (ricintoksin), Clostridium perfringens og dennes toksin (epsilontoksin), Staphylococcus species og deres toksiner (enterotoksin B), Chlamydia psittaci (psittacosis), vannsikkerhetstrusler (for eksempel Vibrio cholerae, Crytosporidium parvum), tyfusfeber ( Richettsia powozehl), og viral encefalitt (a-virus, for eksempel Venezuelansk ekvin encefalitt; østlig ekvin encefalitt; vestlig ekvin encefalitt); alle i dag klassifisert som midler kategori B; og nipanvirus og hantavirus som i dag er klassifisert som midler kategori C. I tillegg kan andre organismer som er klassifisert slik eller på annen måte identifiseres og/eller benyttes for et slikt formål i fremtiden. Det vil være lett forståelig at de virale vektorer og andre konstruksjoner som er beskrevet her er nyttige for å avgi antigener fra disse organismer, virus, deres toksiner eller andre biprodukter, som vil forhindre og/eller behandle infeksjoner eller andre ugunstige reaksjoner med disse biologiske midler.
Tilførsel av vektorene ifølge oppfinnelsen for avlevering av immunogener mot det variable området av T-cellene, utløser en immunrespons inkludert CTL for å eliminere disse T-celler. I RA er flere spesifikt variable områder av TCR som er involvert i sykdommen,karakterisert. Disse TCR inkluderer V-3, V-14, V-17 og Va-17. Avlevering av en nukleinsyresekvens vil således som koder minst ett av disse polypeptider, utløse en immunrespons målrettet mot T-celler involvert i RA. Ved MS er flere spesifikt variable områder av TCR som er involvert i sykdommenkarakterisert. Disse TCR inkluderer V-7 og Va-10. Avlevering av en nukleinsyresekvens som koder minst ett av disse polypeptider, vil således utløse en immunrespons målrettet mot T-celler involvert i MS. I skleroderma er detkarakterisertflere spesifikt variable områder av TCR involvert i sykdommen. Disse TCR inkluderer V-6, V-8, V-14 og Va-16, Va-3C, Va-7, Va-14, Va-15, Va-16, Va28 og Va-12. Avlevering av en rekombinant simianadenovirus som koder minst ett av disse polypeptider vil således utløse en immunrespons målrettet mot T-celler involvert i skleroderma.
C. Ad-formidlete avleveringsfremgangsmåter
De terapeutiske nivå eller immunitetsnivå for det valgte gen kan overvåkes for bestemmelse av behov for forsterkere om nødvendig. Etter en bedømmelse av CD8<+>T-cellerespons eller eventuelt antistofftitrene i serum, kan eventuelle forsterker-immuniseringer være ønskelig. De rekombinante simianadenovirale vektorer ifølge oppfinnelsen kan eventuelt avleveres i en enkelt tilførsel eller i forskjellige kombinasjonsregimer, for eksempel i kombinasjon med et regime eller et behandlingsforløp som involverer andre aktive bestanddeler, eller i et prime-boost regime. Et antall slike regimer er beskrevet i teknikken og kan lett velges.
For eksempel kan prime-boost regimer involvere tilførsel av en DNA (for eksempel plasmid) basert vektor for å prime immunsystemet for en andre boostertilførsel med et tradisjonelt antigen, for eksempel et protein eller et rekombinant virus som bærer sekvensene som koder et slikt antigen. Se for eksempel WO 00/11140, publisert 2. mars 2000 for detaljer. Alternativt kan et immuniseringsregime involvere tilførsel av en rekombinant simianadenoviralvektor ifølge oppfinnelsen for å forsterke immunresponsen mot en vektor (enten viral eller DNA-basert) som bærer et antigen eller et protein. I nok et alternativ involverer et immuniseringsregime tilførsel av et protein, fulgt av forsterkning med en vektor som koder antigenet.
I en utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen en fremgangsmåte for priming og forsterkning av en immunrespons mot et valgt antigen ved å avlevere en plasmid-DNA-vektor som bærer nevnte antigen, fulgt av forsterkning med en simianadenoviral vektor ifølge oppfinnelsen. I en utførelsesform involverer prime-boost regimet ekspresjon av flere proteiner fra prime- og/eller boost-bæreren. Se for eksempel R. R. Amara, Science, 292:69- 1A (6. april 2001) som beskriver et multiproteinregime for å uttrykke proteinsubenhetene som kan anvendes for å generere en immunrespons mot HIV og SIV. For eksempel kan en DNA-prime avgi Gag, Pol, Vif, VPX, Vpr, Env, Tat og Rev fra et enkelt transkript. Alternativt blir SIV Gag, Pol og HIV-1 Env avgitt i en rekombinant adenoviruskonstruksjon ifølge oppfinnelsen. Ytterligere andre regimer er beskrevet i WO 99/16884 og WO 01/54719.
Prime-boost regimer er imidlertid ikke begrenset til immunisering mot HIV eller avlevering av disse antigener. For eksempel kan priming involvere avlevering med en første sjimpvektor ifølge oppfinnelsen, fulgt av forsterkning med en andre sjimpvektor, eller med et preparat inneholdende antigenet selv i proteinform. I et eksempel kan prime-boost regimet tilveiebringe en beskyttende immunrespons mot viruset, bakterien eller andre organismer, hvorfra antigenet er avledet. I en annen ønskelig utførelsesform tilveiebringer prime-boost regimet en terapeutisk effekt som kan måles ved anvendelse av konvensjonelle analyser for påvisning av nærværet av tilstanden, mot hvilken terapi administreres.
Primingpreparatet kan administreres ved forskjellige seter i kroppen på doseavhengig måte, som avhenger av antigenet, som den ønskete immunresponsen målrettes mot. Oppfinnelsen er ikke begrenset til mengde eller sete for en eller flere injeksjoner eller den farmasøytiske bærer. Tvert imot kan regimet involvere et priming- og/eller forsterkertrinn, der hvert trinn kan inkludere en enkelt dose eller en dosering som administreres hver time, daglig, ukentlig, månedlig eller årlig. Som et eksempel kan pattedyr motta en eller flere doser inneholdende mellom omkring 10 (o.g til omkring 50 ug plasmid i bærer. En ønskelig mengde av et DNA-preparat ligger mellom omkring 1 jig til 10000 ug av DNA-vektoren. Doser kan variere fra omkring 1 ug til 1000 p.g DNA/kg individkroppsvekt. Mengde eller sete for avlevering velges helst basert på pattedyrets identitet og tilstand.
Vektorens doseringsenhet som er egnet for avlevering av antigenet til pattedyret, er beskrevet heri. Vektoren tilpasses for tilførsel ved suspendering eller oppløsning i en farmasøytisk eller fysiologisk akseptabel bærer som isotonisk saltoppløsning, oppløsning av isotoniske salter eller andre formuleringer som vil være åpenbare for fagmannen. Den egnete bærer vil være åpenbar for fagmannen, og vil i stor del avhenge av tilførselsvei. Preparatene ifølge oppfinnelsen kan administreres til et pattedyr i henhold til de veier beskrevet ovenfor, i en formulering med opprettholdt frigivelse ved anvendelse av en bionedbrytbar, biokompatibel polymer, eller ved på-stedet-avlevering ved anvendelse av misceller, géler og liposomer. Eventuelt inkluderer primingstrinnet ifølge oppfinnelsen også tilførsel med primingspreparat av en egnet adjuvansmengde, som definert heri.
Fortrinnsvis blir forsterkerpreparatet tilført omkring 2 til 27 uker etter tilførsel av primingspreparatet til pattedyrindividet. Administreringen av forsterkerpreparatet gjennomføres ved anvendelse av en effektiv mengde av et forsterkerpreparat, inneholdende eller i stand til å avlevere det samme antigen som ble tilført ved priming DNA-vaksinen. Forsterkingspreparatet kan bestå av en rekombinant viral vektor, avledet fra den samme virale kilde (for eksempel adenovirale sekvenser ifølge oppfinnelsen) eller fra en annen kilde. Alternativt kan "forsterkerpreparatet" være et preparat inneholdende det samme antigen som kodet i priming-DNA-vaksinen, men i form av et protein eller peptid, der preparatet induserer en immunrespons hos verten. I en annen utførelsesform inneholder forsterkerpreparatet en DNA-sekvens som koder antigenet under kontroll av en regulatorisk sekvens som styrer ekspresjonen i en pattedyrcelle, for eksempel vektorer som velkjente bakterievektorer eller virale vektorer. Primærkravene for forsterkerpreparatet er at preparatets antigen er det samme antigen, eller et kryssreaktivt antigen som det som kodes av primingpreparatet.
I en annen utførelsesform er simianadenoviralvektorene ifølge oppfinnelsen også velegnete for anvendelse i et antall andre immuniseringer og terapeutiske regimer. Slike regimer kan involvere avlevering av simianadenovirale vektorer ifølge oppfinnelsen, samtidig eller sekvensielt med Ad-vektorer eller forskjellige serotypekapsider, regimer der de adenovirale vektorer ifølge oppfinnelsen avgis samtidig eller sekvensielt med ikke Ad-vektorer, regimer der de adenovirale vektorene ifølge oppfinnelsen avgis samtidig eller sekvensielt med proteiner, peptider og/eller andre biologisk nyttige terapeutiske eller immunogene forbindelser. Slike anvendelser vil være åpenbare for fagmannen.
De følgende eksempler illustrerer kloning av simianadenovirus og konstruksjonen av eksempler på rekombinante adenovirusvektorer ifølge oppfinnelsen. Disse eksemplene er kun illustrerende og skal ikke på noen måte begrense oppfinnelsens ramme.
Eksempel 1 - Viral propagering
Pan5 (ATCC aksessnr. VR-591)-, Pan6 (ATCC aksessnr. VR-592)- og Pan7 (ATCC aksessnr. VR-593)-virus, opprinnelig isolert fra sjimpanse lymfeknuter, ble propagert i 293-celler (ATCC CRL1573). Typisk ble disse celler dyrket i Dulbeccos modifiserte Eagles medium (DMEM; Sigma, St. Louis, MO), supplert med 10 % føtalt kalveserum (FCS) (Sigma eller Hyclone, Logan, UT) og 1 % penicillin-streptomycin (Sigma). Infeksjon av 293-celler gjennomføres i DMEM supplert med 2 % FCS de første 24 timer, hvoretter FCS tilsettes for å bringe sluttkonsentrasjonen til 10 %. Infiserte celler høstet når 100 % av cellene viser virusindusert, cytopatisk effekt (CPE), og de samles deretter og konsentreres ved sentrifugering. Cellepelletts resuspenderes i 10 mM Tris
(pH 8,0) og lyseres ved tre sykluser av frysing/tining. Virusprepareringen oppnås etter to ultrasentrifugeringstrinn på cesiumkloridtetthetsgradienter, og virusforråd fortynnes til 1 til 5xl012 partikler/ml i 10 mM Tris/100 mM NaCl/50 % glyserol og lagres ved -70
°C.
293-cellenes evne til å propagere disse adenovirus overskred forventningene som var basert på kunnskap om andre ikke-humane adenovirusserotyper.
Eksempel 2 - Karakterisering av viralgenomisk- DNA
Genomisk DNA ble isolert fra rensete viruspreparater fra eksempel 1 og fordøyd med Hindlll- eller ifømHl-restriksjonsenzymer i henhold til produsentenes anbefalinger. Resultatene (ikke vist) viste at Pan5-, Pan6-, Pan7-genomene ifølge oppfinnelsen og det publiserte Pan9 (C68) genomet viste forskjellige restriksjonsmønstre og derfor er distinkte fra hverandre.
Nukleotidsekvensene for Pan5, Pan6 og Pan7 ble bestemt. Nukleotidsekvensen for topptråden av Pan5 DNA er angitt i SEKV. ID nr. 1. Nukleotidsekvensen for topptråden av Pan6 DNA er angitt i SEKV. ID nr. 5. Nukleotidsekvensen for topptråden av Pan7 DNA er angitt i SEKV. ID nr. 9.
Regulatoriske, kodende områder i de virale DNA-sekvenser ble identifisert ved homologi til kjente adenovirale sekvenser ved anvendelse av "Clustal W"-programmet som beskrevet ovenfor ved konvensjonelle innstillinger. Se tabellene ovenfor som gir de adenovirale sekvenser. Åpne leserammer ble translaterte og de predikterte aminosyresekvenser undersøkt for homologi med tidligere beskrevne adenovirale proteinsekvenser, Ad4, Ad5, Ad7, Adl2 og Ad40.
Analyse av sekvensen viste en genomorganisering tilsvarende den til stede i humant adenovirus med den største likhet overfor humant Ad4. Imidlertid ble vesentlige forskjeller i de hexonhypervariable områder registrert mellom sjimpanseadenovirus og andre kjente adenovirus inkludert AdHu4. Disse forskjeller passer godt inn i de serologiske kryssreaktivitetsdata som er oppnådd (se nedenfor).
En oppstilling av en del av hexonsekvensene er vist i figur 1. Delen som vises er fra området av hexon som tilsvarer de utover anordnete forlengete løkker DEI og FG1, der den største variabiliteten mellom serotypene observeres.
En intervenerende del som bidrar til hexonbasen (tilsvarende residier 308-368 av den publiserte AdC68-sekvens; U.S. patent nr. 6 083 716), og er høyt bevart mellom serotypene, er også til stede. Den påfølgende tabell oppsummerer parvise sammenlikninger av aminosyrene i hexonproteinene. Analyse av fiberknoppdoménet (som er ansvarlig for reseptorbindingen) i sjimpanseadenovirus, viser en total likhet i struktur (figur 2).
Graden av sekvenslikhet mellom El-proteinene av HuAd5 og C68 (se tabellene nedenfor) er lik dem mellom HuAd5 og Pan5, Pan6 og Pan7.
Replikasjonsdefekte versjoner av AdC5, AdC6 og AdC7 ble skapt ved molekylære kloningsmetoder som beskrives i de påfølgende eksempler, hvori minigenkassetter ble innskutt i stedet for Ela- og Elb-genene. De molekylære kloner av de rekombinante virus ble ivaretatt og dyrket i 293-celler for storskalarensing ved anvendelse av den publiserte cesiumklorid (CsCl) sedimenteringsmetode (K. Fisher et al, J. Virol., 70:520
(1996)). Vektorutbyttene var basert på 50 plate (150 mm) preps hvor omkring
lxlO<9>293-celler ble infisert med de tilsvarende virus. Utbytter ble bestemt ved å måle viralpartikkelkonsentrasjonene spektrofotometrisk. Etter å ha konstruert El-deleterte vektorer, ble det bestemt at HEK293-celler (som uttrykker humant adenovirusserotype 5E1-funksjoner) transkompletterer El -delesjonene av de nye virale vektorer og tillater produksjon av høytiterforråd. Eksempler på virusutbytter for noen av disse rekombinante virus er vist i tabellen nedenfor.
Transgenene for disse vektorene, p-galaktosidase (LacZ), grønt fluorescentprotein (GFP), a-l-antitrypsin (Al AT), ebola glykoprotein (ebo), et løselig ebola-glykoproteinvariant som mangler transmembrane og cytoplasmiske doméner (sEbo), og tre delesjonsmutanter av ebola glykoproteinet (EboA2, EboA3 og EboA4), ble uttrykt av cytomegaloviruspromoteren (CMV).
Evnen hos humant adenovirus El til å transkomplettere de El-deleterte sjimpansevirus ifølge oppfinnelsen, er meget fordelaktig da dette tillater produksjon av El-deleterte sjimpanseadenovirale vektorer ifølge oppfinnelsen, mens risikoen for homolog rekombinering pga. sekvensforskjellene mellom humant Ad og det her beskrevne sjimpanseadenovirus reduseres eller elimineres.
Eksempel 3 - Serologiske studier av Pan5-, Pan6- og Pan7- virus
På grunn av forskjellene i det hexonhypervariable området, ble det antatt C5-, C6- og C7-virus ville være serologisk distinkte fra humant adenovirus inkludert AdHu4.
1. Kryssreaktivitet av villtypevirus
Replikasjonskompetente virus ble anvendt for avsøking av villtypevirus for å bestemmelse av antistoff kryssreaktivitet, og inhibering av cytopatiske defekter (CPE) ble målt. Kort sagt ble preparater av adenovirus (AdHu5, Pan5, Pan6, Pan7 og AdC68) lagret ved 5x10<12>partikler/ml, fortynnet 1/600 for analysene. Denne konsentrasjonen av virus ble valgt fordi den resulterte i 100 % CPE innen 48 timer i fravær av nøytralisering. Før tilsetting av virus til 293-celler (4x10<4>celler/brønn i en 96 brønners plate) ble det tilsatt 1:20 fortynninger av serum. Analysene avleses som nærvær eller fravær av CPE; full nøytralisering avleses som ingen cytopatisk effekt. Resultatene er oppsummert i tabellen nedenfor. Det faktum at 9/36 humant serum nøytralisert AdHu5 induserte CPE, er konsistent med tidligere beregninger for nøytraliserende antistoffer i den humane populasjon. Tallene antyder det totale antall individer som viser nøytralisering (numerator) versus det totale antall avsøkt (denominator). ND = ikke bestemt.
Av alle avsøkte humane sera var 35/36 negative for nøytralisering mot AdC68, mens 36/36 var negative for nøytralisering mot Pan5, Pan6 og Pan7. Av 52 rhesusaper som ble avsøkt, viste ingen nøytralisering mot noe sjimpanseadenovirus; rhesusapen er den foretrukne prekliniske modell for evaluering av HIV-vaksine. Mellom 9 og 12 av 20 sjimpanser hadde vesentlig nøytralisering mot én eller en annen av sjimpanseadenoviruser, er konsistent med det faktum at disse i realiteten er endemisk sjimpansespesifikke patogener. Interessant er at det er sjimpanser med nøytraliserende antistoffer kun mot Pan5, Pan6 eller AdC68, noe som støtter hypotesen at flere av disse sjimpanseadenovirale vektorer ikke vil kryssnøytralisere hverandre, og er distinkte serotyper.
Den samme analyse ble gjennomført for 20 sjimpanseserumprøver. Femti prosent (50 %) av prøvene reagerte serologt, i forskjellig grad mot Pan5; 40 % mot Pan6; 55 % mot
Pan7 og 60 % mot C68. Blant de positive serumprøver hadde én av dem sterk nøytraliserende aktivitet mot alle fire sjimpvirus.
2. Kryssnøytralisering med rekombinante virus
Høytiterpolyklonale antistoffer ble oppnådd mot hver av simianadenovirusene for mer nøyaktig måling av graden av kryssnøytralisering blant de forskjellige serotyper. Dette ble gjort ved intramuskulær immunisering av kaniner ved anvendelse av rekombinant virus inneholdende GFP basert på det tidligere beskrevne C68-sjimpanseadenovirus som en adjuvans. Dette serum ble så anvendt for å analysere på nøytraliserende aktivitet mot hver av de tre sjimpanseadenoviruser ifølge oppfinnelsen, AdC5, AdC6 og AdC7. En kanin ble injisert med 5x10<12>viralpartikler pr. kg med C68CMVGFP-vektor intramuskulært og forsterket fem uker senere ved anvendelse av den samme dosen. En blodtapping samlet den niende uke viste ekstremt potent nøytraliserende aktivitet mot C68 så vel som Pan5 og Pan7, men ikke mot Pan6 (se tabellen nedenfor), noe som antyder at administreringen av en C68 (eller Pan5- eller Pan7-) basert vaksine kunne være effektiv, etterfulgt av anvendelse av en vektorbasert forsterkning på Pan6. Imidlertid er det funnet at dette nivå av inter-sammenheng ikke nødvendigvis er forhindrende for readministrering i en innstilling der antivirale antistofftitere ikke var så høye som det ble oppnådd i denne kaninen. I den påfølgende tabellen indikerer + 33 % CPE; ++ 66 % CPE; +++ 100 % CPE.
3. Kvantitativ analyse for påvisning av nøytraliserende antistoff Resultatene ble vurdert ved en mer kvantitativt basert analyse for å påvise nøytraliserende antistoff, og som er basert på transduksjon av en GFP-vektor. Kort sagt ble grupper av C57BL76-mus immunisert intramuskulært eller intravenøst med 5,0xl0<10>partikler/ml Pan5, Pan6, Pan7 eller C68. Sera fra tappinger på dag 28 ble testet på kryssnøytraliserende aktivitet mot C68CMVEGFP ved fortynninger på 1:20 og 1:80. Som en oppsummering og når et farmasøytisk preparat av human immunglobulin ble testet på serologiske reaksjoner mot Pan5, Pan6, Pan7 og C68, ble det påvist noen lave nivå av nøytraliserende aktiviteter mot Pan7 og C68. Det ble ikke påvist noen nøytraliserende aktivitet mot Pan5 eller Pan6. Serumprøver fra 36 humane individer ble kjørt gjennom den samme analyse. Serumprøvene ble testet i en fortynning på 1:20. Resultatene antydet at kun ett individ hadde klar nøytraliserende aktivitet mot C68. Det ble ikke påvist nøytraliserende aktivitet for Pan5, Pan6 eller Pan7.
4. In vitro kryssnøytralisering
Kryssnøytralisering av simianadenovirusene ved høytiterkaninpolyklonale antistoff mot hver av adenovirusene Pan5, Pan6, Pan7 og C68, ble undersøkt.
Kaninene ble immunisert med intramuskulære injeksjoner av IO<13>partikler av hver av sjimpanseadenovirusene og forsterket 40 dager senere med den samme dose med ufullstendig Freunds adjuvans. Sera ble analysert på nærvær av nøytraliserende antistoff ved inkubering av to ganger seriefotrynninger med IO<9>genomkopier av hver av de egnete sjimpanseadenovirusvektorer som uttrykte GFP og testet på forminskning av GFP-ekspresjon anvendt på 293-celler. Serumfortynningen som produserte en 50 % reduksjon av GFP-ekspresjon, ble bedømt som den nøytraliserende antistofftiter mot det spesielle virus.
Resultatene er oppsummert i tabellen. Disse data er konsistente med forventningen fra sekvensanalyse av hexonaminosyresekvensene som antydet at Ad-Pan6 sannsynligvis ville være den mest serologt distinkte, sammenliknet med de andre sj impanseadeno virus.
For bestemmelse av hvorvidt antistoffer som kryssreagerer med simianadenovirus sannsynlig ville være av lav prevalens i mennesker, ble simianadenovirus SVI, SV39 og SV25 testet for evnen til å motstå nøytralisering når de var inkubert med kommersielt tilgjengelige sammenslåtte immunglobuliner (lg). Den samme analyse ble også gjennomført med AdHu5 og sjimpanseadenovirus Pan5, Pan6, Pan7 og C68.1 en videre studie ble sera fra mus immunisert med en av sjimpansevirusene C5, C6, C7 og C68, og deres evne til å kryssnøytralisere simianadenovirusene SV15, SV23, SA17 og bavianadenovirus ble testet. Det ble ikke observert noen kryssreaktivitet i noen av disse tilfeller.
Eksempel 4 - Generering av rekombinant El- deletert Pan5- vektor
Et modifisert pX-plasmid ble fremstilt ved å ødelegge Fspl-setet i bla-genområdet av pX (Clontech) ved seterettet mutagenese. Det resulterende modifiserte plasmid, benevnt pX', er et sirkulært plasmid på 3000 bp inneholdende et fl-ori og et ampicillinresistensgen (AmpR-cds).
A. Fremstilling av Pan5 adenovirusplasmid
En polylinker for sekvensiell kloning av Pan5-DNA-fragmenter i pX' skapes. Polylinkeren innsettes i stedet for den eksisterende pX'-polylinkeren etter fordøying
med Mlul og EcoRI. Det butte Fse/-fragmentet av Pan5 innføres i Smal- og FseT-setene av polylinkeren. Fragmentet inneholder den 5' ende av det adenovirale genomet (bp 1 til 3606, SEKV. ID nr. 1). SnaBI- FspI- tra& nentet av Pan5 (bp 455 til 3484, SEKV. ID nr.
1) erstattes med en kort sekvens flankert av I- Ceu- og Pi-Sce-setene fra pShuttle (Clontech), for å eliminere El-området av det adenovirale genomet. Det butte EcoRI-fragmentet av Pan5 (bp 28658 til 36462, SEKV. ID nr. 1), innføres i EcoRI- og EcoRV-setene av polylinkeren (for å gi den 3' ende av det adenovirale genomet); Fsel- Mlul-fragment (bp 3606 til 15135, SEKV. ID nr. 1) innføres i polylinkeren; og MluI- EcoRI-fragmentet innføres i polylinkeren (bp 15135 til 28568, SEKV. ID nr. 1). Eventuelt innføres et ønsket transgen i I- Ceul- og Pl- Scel- setene i den nylig skapte pX'Pan5AEl-vektoren.
B. Alternativ fremgangsmåte for generering av pX' Pan5AEl
Det opprinneølige plasmid pX er avledet fra pAdX-adenovirusplasmid tilgjengelig fra Clontech, som beskrevet ovenfor. Deretter ble et PacI- XhoI- område av pX' deletert og den butt-endete Pan5-polylinkeren ble innsatt i Fspl- setet for å generere pX'PLNK (2994 bp). Det 5' ende Fsei-området av Pan5 (bp 1-3607, SEKV. ID nr. 1), ble innsatt i Smal- og Fsel- setene av pX'LNK for å generere pX'Pan5-5' plasmid (6591 bp). SnaBi-Ndel- området av pX'Pan5-5' ble utskåret og erstattet med Cew/Sce-kassetten, som var PCR-amplifisert fra pRCS for å skape pX'Pan5-5'AEl (4374 bp). I korthet ble en sekvens inneholdende I- Ceul- og Pl- Scel "sjeldne" kutterseter PCR-forsterket fra pRCS (3113 bp). Den 3' PCR-primeren ble innført ved et Ndel- sete i PCR-produktet.
For å forlenge Pan5-DNA i pX'Pan5-5'AEl (4374 bp), ble Fsel- MluI- området av Pan5 (bp 3607-15135, SEKV. ID nr. 1) tilsatt for å skape pX'Pan5-5'Mlu (15900 bp). Den gjenværende MluI-3' ende av Pan5-sekvensen (bp 15135-36462, SEKV. ID nr. 1), ble tilsatt til vektoren mellom Mlul- og EcoRV-setene av vektorpolylinkeren for å danne pX'Pan5AEl, som inneholder fullengde Pan5-sekvensen inneholdende en delesjon i El-området.
C. Generering av rekombinante virus
For å generere de rekombinante adenovirus fra pX'Pan5AEl, ble plasmidet transfektert med en hjelper som uttrykker El, eller fra en El-uttrykkende pakkende cellelinje, slik som 293-cellelinjen eller en cellelinje fremstilt som beskrevet heri. Ekspresjonen av El i den pakkende cellene tillater replikering og pakking av Pan5AEl i et virionkapsid. I en annen utførelsesform blir den pakkende cellen som er transfektert med pX'Pan5AEl transfektert med en adenovirusvektor, som beskrevet ovenfor, som bærer transgenet av interesse. Homolog rekombinering inntrer mellom hjelperen og plasmidet, noe som tillater adenovirustransgensekvensene i vektoren replikeres og pakkes i virionkapsider, noe som resulterer i det rekombinante adenovirus.
Transfeksjon etterfølges av et agaroverlegg i to uker, hvoretter virusene plakkes, ekspanderes og avsøkes for ekspresjon av transgenet. Flere ytterligere runder av plakkrensing etterfølges av ytterligere kulturekspansjon. Til slutt høstes cellene, en virusekstrakt fremstilles og det rekombinante sjimpanseadenovirus inneholdende det ønskete transgen renses ved utstrakt tetthetsultrasentrifugering i en CsCi-gradient eller ved alternative midler, velkjente for fagmannen.
Eksempel 5 - Generering av rekombinant El- deletert Pan6- vektor
A. Strategi for konstruksjon av Pan6-adenoviralt plasmid
1. Kloning av terminalfragmenter
Pan6-virus deproteineres ved pronase- og proteanase K-behandling og fenolekstrahering. Syntetiske 12 bp Pme-I-linkere ligeres på det virale DNA, som beskrevet av Berkner og Sharp i Nucleic Acids Research, 11:6003 (1983). Det virale DNA fordøyes så med Xbal for å isolere et 5' terminalfragment (6043 bp). Ad6 Xbal 5' fragmentet ligeres så inn i pX-linken ved Smal- og ^Æal-setene for å danne pX-AdPan6-0-16.5. Det virale DNA med Pmel-linkerne fordøyes også med PacI for å isolere 6475 bp 3' terminalfragmentet og klones inn i pX-linken ved PacI- og Smal-setene, noe som resulterer i pXAdPan6-82-100.
2. Delesjon av El fra den 5' klonen
For å deletere El (m.u.1.2-9), ble BsiWi-Aftal-fragmentet i pX-AdPan6-0-16.5 erstattet med et PCR-fragment som spenner over m.u.9-16.7-fragmentet behandlet med BsiWi og Xbal, noe som fører til pX-Ad-Pan6 m.u.0-1, 9-16.5. 3. Fusjon av 5'- og 3 '- klonene og dannelse av et ankersete for å akseptere det midtre Hindlll- fragmentet
Først blir 5' klonen pX-Ad-Pan6 m.u.0-1, 9-16.5 ytterligere ekspandert ved innføring av det andre JÆal-fragment (4350 bp, m.u. 16.5-28) fra Pan6-genomet inn i Xbal- setet i pXAd-Pan6 m.u.0-1, 9-16.5. Denne konstruksjonen kalles pXAd-Pan6-mu 0-1, 9-28.
Deretter blir 3'-klonen også ekspandert ved innføring av 15026 bp Mlul/Pacl-fragmentet som dekker m.u.41-82 fra Pan6-genomet i MluI/PacI-setene av pXAdPan6-82-100, for å generere pXAdPan6-m.u.41-l 00.
Så blir et 8167 bp Hindlll/ Eco 47III Pan6-fragment isolert fra pXAd-Pan6-mu 01, 9-28 og subklonet inn i pXAdPan6-m.u.41-100 ved HinsIII- ogvtt>aI-butt-setene. Denne 5'-og 3'-fusjonsklonen kalles pXAdPan6mu0-l, 9-19.5, 64-100.
4. Dropping av det midtre genomfragmentet inn i fusjonsklonen
Et 16335 bp /ftnÆII-fragment (m.u. 19.5-64) fra Pan6 innføres i ///w^III-setet av pXAdPan6muO-l, 9-19.5,64-100 for å danne pXAdPan6-0-l, 9-100. 5. Innføring av en PKGFP- selektiv markør i det endelige konstrukt for direkte kloning av genet av interesse og grønn/ hvit seleksjon av rekombinante transformanter En minigenkassett som uttrykker GFP under en lac-promoter og som er flankert med gjenkjenningsseter for "sjeldne" intronkodende restriksjonsenzymer, PI-Sce I og I-Ceu I, ble isolert fra pShuttle-pkGFP (bare) ved Sap I- og Dra III-fordøying fulgt av innfyllingsreaksjon. pShuttle-pkGFP (bare) plasmidet er 4126 bp langt, og inneholder et ColEl-Ori, et kanamycinresistensgen, plac, en LacZ-promoter-GFPmut3-l eds (Clontech), og et GFPmut3-l eds (Clontech). Denne kassetten subklones inn i Srf I kuttet og avstumpet pXAdPan6-0-l, 9-100. Dette siste konstrukt kalles pX-Pan6-pkGFP m.u.0-1, 9-100, som er nyttig for generering av rekombinante El-deleterte Pan6-molekylære kloner som bærer gener av interesse ved direkte ligering og grønn/hvit seleksjon i kombinasjon med de generiske pShuttlepkGFP-vektorene.
B. Alternativ strategi for generering av Pan6-plasmid
1. Kloning av 5' terminalfragment
Pan6-viruset deproteineres ved pronase- og proteanase K-behandling og ved fenolekstrahering, som beskrevet ovenfor, og syntetiske 12 bp Pmel-linkere ligeres på det virale DNA, som beskrevet. AdPan6 5' Aftal-fragmentet isoleres og ligeres inn i pX for å danne pX-AdPan6-0-16.5 (9022 bp), som beskrevet i del A ovenfor.
2. Delesjon av El fra den 5' klon
For å deletere El (m.u. 1.2.-9), ble pX-AdPan6-0-16.5 fordøyd med SnaBI ogNdel for å fjerne områdene som koder Ela- og Elb-proteinene (3442-6310 bp). Denne vektor fordøyes deretter med BsiWI for å forberede avstumping med minigenkassetten som bærer en selektiv markør.
3 Innføring av en selektiv markør
En minigenkassett som uttrykker GFP under en lac-promoter og som er flankert med
gjenkjenningsseter for "sjeldne" intronkodende restriksjonsenzymer, PI-XceI og I-Ceul, ble isolert fra pShuttle-pkGFP, som beskrevet ovenfor. DRAIII-SapI-fragmentet ligeres så med den fordøyde pX-AdPan6-0-l 6.5 for å danne pX-AdPan6 MU 0-16.5AE1 (7749 bp).
4. Forlengelse av Pan6- adenovirale sekvenser
pX-AdPan6 MU 0-16.5AE1 ble underkastet ^Y&al-fordøying for å tillate innføring av en .Aftal-Rsrll-linker. Et XbaURscll fordøyingsfragment fra AdPan6-genomet ble isolert (mn 28-100, 26240 bp) og ligert inn i den Xba/Rsrll-fordøyde pX-AdPan6 MU 0-16.5AE1 for å gi pX-AdPan6 MU 0-1, 9-16.5, 28-100. Et andre ^al-fragment fra Pan6-genomet (mu 16.5-28,4350 bp) ble så legert inn i dette plasmid for å danne pX-AdPan6 MU 0-1,9-100 (38551 bp).
C. Generering av rekombinante adenovirus
For å generere de rekombinante adenovirus fra et El-deletert Pan6-plasmid, fremstilt som beskrevet i del A eller b, ble plasmidet kotransfektert med en hjelper som uttrykker El, eller fra en El-uttrykkende pakkende cellelinje som en 293-cellelilnje eller en linje fremstilt som beskrevet her. Ekspresjonen av El i den pakkende cellen tillater replikering og pakking av Pan6-pkGFP mu.0-1, 9-100 inn i et virionkapsid. Alternativt blir den pakkende celle som er transfektert med px-Pan6-pkGFP mu.0-1, 9-100, transfektert med en adenovirusvektor, som beskrevet ovenfor og som bærer et annet transgen av interesse.
Eksempel 6 - Generering av rekombinant El- deletert Pan7- vektor
A. Generering av Pan 7- plasmider
En syntetisk linker inneholdende restriksjonssetene PåcI-Smal-Fsel-MluI-EcoRV-PacI ble klonet inn i pBR322 som var kuttet med EcoRI og Ndel. Den venstre ende (bpl til 3618) av AdPan7 ble klonet inn i linkeren mellom Smal- og Fsel-setene. Adenoviruset El ble så skåret ut fra den klonete, venstre ende ved kutting med SnaBI og Ndel og innføring av en I-CeuI-GFP-PI-Scel-kassett fra pShuttle (Clontech) i stedet. Det resulterende plasmid ble kuttet med Fsel og Mlul og et AdPan7-fragment Fsel (bp 3618) til Mlul (bp 155114) ble innført for å forlenge den venstre ende. Konstruktet (pPan7pGFP) ble fullført ved innføring av det 21421 bp AdPan7-høyre ende fragment fra Mlul-setet (bp 15114) inn i plasmidet ovenfor mellom Mlul og EcoRV for å generere en fullstendig molekylær klon av El-deletert adenovirus Pan7, egnet for generering av rekombinant adenovirus. Eventuelt innføres et ønsket transgen i I-Ceul-og PI-SceI-setene av det nydannete Pan7-vektorplasmidet.
B. Konstruering av El - deletert Pan 7- viralvektorer
For å generere rekombinante adenovirus fra pPan7AEl, ble plasmidet kotransfektert med en hjelper som uttrykker El, eller fra en El-uttrykkende pakkende cellelinje som en 293-cellelinje eller en cellelinje fremstilt som beskrevet her. Ekspresjonen av El iden pakkende celle tillater replikering og pakking av Pan7AEl inn i et virionkapsid. I andre utførelsesformer blir den pakkende celle som er transfektert med px'-Pan7AEl, transfektert med en adenovirusvektor, som beskrevet ovenfor og som bærer transgenet av interesse. Homolog rekombinering inntrer mellom hjelperen og plasmidet, noe som tillater at adenovirustransgensekvensen i vektoren kan replikeres og pakkes i virionkapsider og derved resultere i det rekombinante adenovirus. Transfeksjon og rensing gjennomføres som beskrevet ovenfor.
Eksempel 7 - Generering av plasmidvektorer som uttrykker El- genene Plasmidvektorer som koder Pan5-El-området konstrueres, og disse plasmider anvendes for å generere stabile cellelinjer som uttrykker virale El-proteiner.
Pan5-El-området klones inn i pX', i det vesentlige som beskrevet i eksempel 4 ovenfor, før erstatning av dette området med fragmentet fra pShuttle (Clontech). Ekspresjonsplasmidet inneholdende den Pan5-adenovirale genomsekvens spenner over minst bp 1 til 3959 i den Pan5-genomiske sekvens. Ekspresjonsplasmidet inneholder således sekvensen som koder Ela og Elb av sjimpanse-Ad-Pan5 under kontroll av en heterolog promoter. Tilsvarende ekspresjonsplasmider kan genereres ved anvendelse av Ad-Pan6- og Ad-Pan7-El-områdene, identifisert i tabellene ovenfor.
Eksempel 8 - Generering av cellelinjer uttr<y>kkende siimpanseadenovirus- E 1 - proteiner Cellelinjer uttrykkende virale El-proteiner genereres ved å transfektere HeLa (ATCC aksess nr. CCL2) med plasmidet fra eksempel 6. Disse cellelinjer er nyttige for fremstilling av El-deleterte, rekombinante sjimpanseadenovirus ved ko-transfeksjon av genomisk viralt DNA og ekspresjonsplasmidene beskrevet ovenfor. Transfeksjon av disse cellelinjer så vel som isolering og rensing av rekombinant sjimpanseadenovirus fra disse utføres ved fremgangsmåter konvensjonelle for adenovirus, dvs. humane adenovirus (se for eksempel Horwitz, supra, og annen standard litteratur).
A. Cellelinjer uttrykkende Pan5- El- proteiner
HeLa-celler i 10 cm skåler transfekteres med 10 ug pX-Pan51-El-DNA ved anvendelse av et "Cellphect" sett (Pharmacia, Uppsala, Sverige) og ved å følge produsentens protokoll. 22 timer etter transfeksjon ble cellene underkastet et treminutters glyserolsjokk (15 % glyserol i Hepes-bufret saltoppløsning, pH 7,5), vasket en gang i DMEM (HeLa) eller Fl2K (A549; Life Technologies, Inc., Grand Island, NY) mediasupplert med 10 % FCS, 1 % Pen-Strep, også inkubert i seks timer ved 37 °C i det ovenfor beskrevne media. De transfekterte cellene splittes så til duplikat 15 cm plater i forhold på 1:20,1:40,1:80,1:160 og 1:320. Etter inkubering ved 37 °C over natten ble disse media supplert med G418 (Life Technologies) i en konsentrasjon på 1 ug/ml. Disse media erstattes hver femte dag og kloner isoleres 20 dager etter transfeksjon.
HeLa-El-cellekloner isoleres og analyseres for evne til å forbedre adenoassosiert virus (AAV) infeksjon og ekspresjon av rekombinant LacZ-protein, som beskrevet nedenfor.
B. AA V- forbedringsanalyse for å avsøke El- uttrykkende cellelinjer
AAV krever adenoviruskodete proteiner for å fullføre sin livssyklus. De adenovirale El-proteiner så vel som det E4-områdekodete ORF6-protein er nødvendig for forbedring av AAV-infeksjonen. En analyse for El-ekspresjon basert på AAV-forbedring anvendes. I korthet omfatter fremgangsmåten for å identifisere adenovirale El-uttrykkende celler trinnene å infektere i separate kulturer av en putativ adenovirus El-uttrykkende celle, og en celle ikke inneholdende noen adenovirussekvens, med både et adenovirusassosiert virus (AAV) som uttrykker et markørgen, og en AAV som uttrykker ORF6 av E4-genet av humant adenovirus i et egnet tidsrom. Markørgenaktiviteten i de resulterende celler måles og cellene med betydelig større målbar markøraktivitet enn kontrollcellene velges som bekreftete El-uttrykkende celler. I det påfølgende forsøk er markørgenet et lacZ-gen og markøraktiviteten er opptreden av blå farge.
For eksempel infekteres cellelinjene beskrevet ovenfor, så vel som ikke-transfekterte kontrollceller (HeLa), med 100 genomer pr. celle av en AAV-vektor som bærer et markørgen, for eksempel AV.LacZ [Fisher et al., J. Viroi, 70:520 (1996)], og en AAV-vektor som uttrykker ORF6-området av humant 5 (AV.orf6). Plasmid-DNA-sekvensen genererer en ny, rekombinant adenoassosiert virus (rAAV) inneholdende LacZ-transgenet og Ad-E4-ORF6, som er en åpen leseramme hvis ekspresjonsprodukter letter enkeltrådet (ss) til dobbeltrådet (ds) konvertering av rAAV-genomisk-DNA. Disse vektorene inkuberes i medium inneholdende 2 % FCS og 1 % Pen-Strep ved 37 °C i fire timer, på hvilket tidspunkt et likt mediumvolum inneholdende 10 % FCS tilsettes. Det skal være klart for fagmannen på området at ethvert markørgen (eller rapportørgen) kan anvendes i den første AAV-vektoren i denne analysen, for eksempel alkalisk fosfatase, luciferase og andre. En antistoffenzymanalyse kan også anvendes for mengde-bestemmelse av antigennivåene, der markøren uttrykker et antigen. Analysen er ikke begrenset av identiteten av markørgenet. 20 til 24 timer etter infeksjon farges cellene for LacZ-aktivitet ved anvendelse av standard fremgangsmåter. Etter 4 timer observeres cellene mikroskopisk og cellelinjer med betydelig flere blå celler enn De A549- eller HeLa-cellekontrollene anføres som positive.
Eksempel 9 - Avlevering av transgen til vertscelle
Det resulterende, rekombinante sjimpanseadenovirus, som beskrevet i eksempel 4, 5 eller 6 ovenfor, benyttes så for avlevering av transgenet til en mammalsk- og fortrinnsvis human celle. For eksempel, etter rensing av det rekombinante virus, infekteres humane, embryonale nyre-293-celler ved en MOI på 50 partikler/celle. GFP-ekspresjonen ble dokumentert 24 timer etter infeksjon.
A. Genoverføring i musemodeller via Pan6-, Pan7- og Pan9- vektorer Genoverføringseffektiviteter og toksikologiske profiler for rekombinante sjimpanseadenovirus ble sammenliknet ved museleverstyrt genoverføring, muselunge styrt genoverføring og musemuskelstyrt genoverføring.
El-deleterte adenovirale vektorer inneholdende LacZ under kontroll av CMV-promoteren, ble konstruert ved anvendelse av teknikkene her for humant Ad5, sjimpansePan6, sjimpansePan7 og sjimpansePan9 (C68). Vektorene ble avlevert til nakne immunmanglende NCR-mus (80 pr. studie) som følger. For leverstudien ble 100 ul (lxlO<11>partikler) injisert i halevenen. For lungestudien ble 50 ul (5xl0<10>partikler) avlevert intratrakealt. For muskelstudien ble 25 ul (5x10<10>partikler) injisert i den bakre tibialis. Mus ble avlivet på dag 3, 7,14 og 28 etter vektorinjeksjon (5 dyr pr. gruppe på hvert tidspunkt). Ved hver nekropsi ble lever/lunge/muskelvev samlet og tilberedt for kryoblokker og parafininnleiring. Kryoblokkene ble oppskåret for X-gal farging og parafinsnittene ble H&E-farget for histopatisk analyse. På hvert tidspunkt ble det gjennomført terminalblødning. Serumprøver ble underkastet leverfunksjonstester.
I dette forsøk ble det observert at sjimpanseadenovirusene Pan6, Pan7 og Pan9 var mindre effektive enn huAd5 ved genoverføring til lever og lunge. Det kan imidlertid være ønskelig under visse omstendigheter for derved å redusere levertoksisiteten som ble observert for huAd5. Genoverføringseffektiviteten i muskel varierte mindre mellom serotypene.
B. Musestudie på gjennomførbarheten av readministrering av adenovirusvektorer vedserotypeskifting mellom AdHu5-, Pan6-, Pan7- og Pan9- vektorer
Mus ble tilført (C57/B16; 4/gruppe) LacZ-vektorer basert på huAd5, Pan6, Pan7 og Pan9 (H5.040CMVLacZ, Pan6.000CMVLacZ, Pan7.000CMVLacZ, Pan9.000CMVLacZ; IO<11>partikler/injeksjon) via halevenen. 30 dager senere ble musene igjen tilført adenovirusvektorer uttrykkende al-antitrypsin (H5.040CMVhAlAT, Pan6.000CMVhAlAT, lxlO<11>partikler, Pan7.000CMVhAlAT, Pan9.000CMVhAlAT, IO<11>partikler/injeksjon). Vellykket transduksjon ved den readministrerte vektor ble overvåket ved måling av serum al-antitrypsin på dagene 3 og 7 etter readministrering.
Adenovirusvektorers evne til å transdusere leveren hos mus i nærvær av nøytraliserende antistoffer mot de andre serotyper, basert på henholdsvis huAd5, Pan6, Pan7 og Pan9, ble bestemt. Resultatene er vist i tabellen her.
Vektorers evne til å transdusere murin lever i nærvær av nøytraliserende antistoffer til andre serotyper.
Immunisering med huAdS forhindret således ikke readministrering med noen av sjimpanseadenovirusvektorene Pan6, Pan7 eller Pan9 (C68). Dette forsøket synes også å indikere at Pan7 ligger mellom Pan6 og Pan9 i spekteret for antigenisk sammenheng og kryssreagerer med begge; Pan6 og Pan9 nøytraliserer imidlertid ikke hverandre. Dette er et overraskende resultat basert på homologisammenlikninger, som antyder at Pan6 er heller forskjellig fra Pan7 og Pan9. Evaluering av antisera generert mot Pan9 antydet ingen kryssnøytralisering mot Pan6, men en viss nøytralisering mot Pan9, noe som skulle argumentere for at Pan6 er distinkt fra de andre.
Eksempel 10 - Generering av rekombinant El- deletert SV25- vektor
Et plasmid ble konstruert som inneholdt det fullstendige SV25-genomet bortsett fra en konstruert El-delesjon. Ved setet for El-delesjonen ble det innført gjenkjenningsseter for restriksjonsenzymene I-Ceul og Pi-Scel som ville tillate innføring av et transgen fra et shuttleplasmid der transgenekspresjonskassetten er flankert med disse to enzymgj enkj enningsseter.
En syntetisk linker inneholdende restriksjonssetene Swal-SnaBI-Spel-Aflll-EcoRV-Swal ble klonet inn i pBR322 som ble kuttet med EcoRI og Ndel. Dette ble utført ved å annile to syntetiske oligomerer SV25T (5'-AAT TTA AAT ACG TAG CGC ACT AGT CGC GCT AAG CGC GGA TAT CAT TTA AA-3\ SEKV. TD nr. 38) og SV25B (5'-TAT TTA AAT GAT ATC CGC GCT TAA GCG CGA CTA GTG CGC TAC GTA TTT A-3', SEKV. ID nr. 39) og innføring derav i pBR322 fordøyd med EcoRI og Ndel. Den venstre ende (bp 1 til 1057, SEKV. ID nr. 29) av AdSV25 ble kolonet inn i linkeren ovenfor mellom SnaBI- og Spel-setene. Den høyre ende (bp 28059 til 31042, SEKV. ID nr. 29) av AdSV25 ble klonet inn i linkeren mellom Aflll- og EcoRV-setene. Adenovirus El ble så utskåret mellom £coRI-setet (bp 547) til Xhol (bp 2031) fra den klonete venstre ende som følger. En PCR-generert I-CeuI-PI Scel-kassett fra pShuttle (Clontech) ble innsatt mellom £coRI- og Spel-setene. 10154 bp Xhol-fragmentet fra AdSV25 (bp 2031 til 12185, SEKV. ID nr. 29) ble så innført i Spel-setet. Det resulterende plasmid ble fordøyd med HindlU og konstruktet (SV25) ble komplettert ved innføring av 18344 bp Ad SV25 tfiwÆII-fragmentet (bp 11984 til 30328, SEKV. ID nr. 29) for å generere en fullstendig molekylær klon av El-deletert adenovirus SV25, egnet for generering av rekombinante adenovirus. Eventuelt innføres et ønsket transgen i I-Ceul- og PI-SceI-setene av det nydannete pSV25-vektorplasmid.
For å generere et AdSV25 som bærer et markørgen, ble en GFP (grønn fluorescent protein) ekspresjonskassett tidligere klonet inn plasmidet pShuttle (Clontech) utskåret med restriksjonsenzymene I-Ceul og ligert inn i pSV25 (eller et annet av Ad sjimp-plasmidene beskrevet heri) fordøyd med de samme enzymer. Det resulterende plasmid
(pSV25GFP) ble fordøyd med Swal for å separere det bakterielle plasmidskjelett, og transfektert inn i den El-kompleterende HEK293-cellelinjen. Omkring 10 dager senere ble en cytopatisk effekt observert, noe som antyder nærvær av replikative virus. Den vellykkete generering av en AdSV25-basert adenoviral vektor som uttrykker GFP, ble bekreftet ved å påføre supernatanten fra den transfekterte kultur på friske cellekulturer. Nærværet av sekundærtinfekterte celler ble bestemt ved observasjon av grønn fluorescens i en populasjon av cellene.
Eksempel 11 - Konstruksjon av E3- deleterte Pan5-, Pan6-, Pan7- og C68- vektorer Forbedring av kloningsegenskapene til de adenovirale vektorene, kan skje ved at E3-området tas ut fordi dette området koder gener som ikke er nødvendige for propageringen av virus i kultur. For dette formål ble det laget E3-deleterte versjoner av Pan5, Pan6, Pan7 og C68 (et 3,5 kb Nru-Avrll-fragment inneholdende E31-9 er deletert).
A. E3- deletert Pan5- basert vektor
El-deletert pPan5-pkGFP-plasmid ble behandlet med Avrll-endonuklease for å isolere et 5,8 kb-fragment inneholdende E3-området og resirkulere pPan5-pkGFP med Avrll-delesjon for å danne konstruktet pPan5-pkGFP-E3-AvrII. Deretter ble 5,8 kb-Avrll-fragmentet subklonet inn i pSL-Pan5-E3-AvrII for en ytterligere delesjon av E3-området ved Nrul-fordøying. Dette førte til en plasmid pSL-Pan5-E3-delesjon. Det endelige konstruktet pPan5-E3-pkGFP ble fremstilt ved fjerning av et 4,3 kb Avrll/Spel-fragment fra pSL-Pan5-E3-delesjonsplasmidet og innføring i pPan5-pkGFP-E3-AvrII-setet. I dette endelige konstrukt var det gjennomført en 3,1 kb-delesjon i E3-området.
B. E3- delesjon i Pan6- basert vektor
El-deletert pPan6-pkGFP-molekylær klon ble fordøyd med Sbfi og Noti for å isolere et 19,3 kb-fragment, og ligert tilbake ved Sbfl-setet. Det resulterende konstruktet pPan6-Sbfl-E3 ble behandlet med Eco47III og Swal, for å generere pPan6-E3. Til slutt ble 21 kb Sbfl-fragmentet fra Sbfl-fordøying av pPan6-pkGFP subklonet inn i pPan6-E3 for å danne pPan6-E3-pkGFP med en 4 kb-delesjon i E3.
C. E3- deletert Pan 7- og Pa9- vektorer
Den samme strategi ble anvendt for å oppnå E3-delesjoner i begge vektorer. Først ble et 5,8 kb Avrll-fragment som spente over E3-området subklonet til pSL-1180, fulgt av delesjon av E3 ved Nrul-fordøying. De resulterende plasmider ble behandlet med Spel og Avrll for å oppnå 4,4 kb-fragmenter, og klonet inn i pPan7-pkGFP og pPan9-pkGFP ved Avrll-setene for å erstatte de opprinnelige E3-holdige Avrll-fragmenter. De endelige pPan7-E3-pkGFP- og pPan9-E3-pkGFP-konstruktene har 3,5 kb E3-delesjoner.
Eksempel 12 - Konstruksjon av E3- og E4- deletert Pan7- vektor
Selv om delesjonen av El-området av adenovirus (første generasjon adenovirusvektorer) gjør dem replikasjonsinkompetente, er ekspresjonen av de adenovirale vektor skjelettgener ikke fullt avskaffet. Delesjon av E4-området forminsker denne gjenværende genekspresjonen betydelig, og kan gi en sikkerhetsfordel. En E4-deletert Pan7-vektor inneholdende en 2,5 kb delesjon (et PvuII-Agel-fragment inneholdende E40RF1-ORF7 er deletert) ble konstruert. Høytiter-forråd av dette virus ble generert ved anvendelse av en HEK 293-basert cellelinje, som i tillegg til El uttrykker et essensielt E4-gen (orf6).
1. E4- delesjon i den molekylære Pan7- klon
Et 19 kb Aføl-fragment ble deletert fra pPan7-pkGFP for å danne ipPan7- Xbal hvorfra
et 2,5 kb E4-fragment ble deletert ved partiell Agel- og PvuII-fordøying, noe som resulterte i at pPan7-^fcaI-E4.pPan7-E4-pkGFP-plasmid ble generert fra \ jPml- Xba\- E4
i to sekvensielle kloningstrinn, tilsetting av 19 kb Xbal og 15 kb I-Ceul/Mlul-fragmenter, der begge kom fra pPan7-pkGFP-konstruktet.
2. Innføring av E3- og E4- delesjoner i Pan9- vektor
Et 11 kb-plasmid, pPan9-2?coRI inneholdende E4-området, ble dannet ved å hente 11 kb ÆcoRI-fragmentet fra pPan9-pkGFP etter ÆcoRI-fordøying og selvligering. E4-området ble deletert fra dette konstrukt ved Agel-fordøying/innfylt og PvuII-partial fordøying og selvligering for å generere pPan9-£coRI-E4. Et 23 kb £coRI-fragment ble isolert fra pPan9-pkGFP og innført i pPan9-£coRI-E4 ved £coRI-setet, fulgt av tilsetting av 5,8
kb Avrll-fragment fra pPan9-pkGFP, for å danne det endelige produkt pPan9-E3-E4-pkGF. Sammenliknet med genomstørrelse av villtype pPan9, kan denne E1-E3-E4-deleterte vektoren ha en transgen kapasitet opp til 8 kb.
3. Innføring av minigenkassetter med gener av interesse, inkludert r apportør gener, glyko- og nukleære proteiner av Ebo inn i molekylære kloner av Pan- vektorer
En meget effektiv, direkte kloning og grønn/hvit seleksjonsprosedyre ble anvendt for å skape molekylære kloner av rekombinante virus. I korthet ble genene av interesse klonet inn pShuttlepkGFP ved avsøking av hvite kolonier for rekombinanter. Deretter ble minigenkassettene overført til sjimpanseadenovirusskjelettplasmider, pPanXpkGFP med forskjellige delesjoner, enkelt ved å bytte med pkGFP-kassett på I-Ceul- og PI-Scel-setene og avsøking av noen få, hvite kolonier for korrekte kombinanter.
4 Gjenvinning av molekylære kloner av Pan- vektorer med flere delesjoner i tidlige områder og viruspropagering
For gjenvinning av El-E3-deleterte molekylære koner av sjimpanseadenovirusvektorer, ble klonene lineariserte med egnete restriksjonsenzymer og transfektert inn i regulære 293-celler. Når først en full cytopatisk effekt (CPE) var observert i de transfekterte celler, ble rålysat høstet og ekspandert i 293-celler til storskala infeksjoner. Virusene ble renset ved CsCl-sedimenteringsfremgangsmåten.
For E1-E4- og El-E3-E4-deleterte Pan-vektorer, ble 10-3 celler, en 293-basert E1-E4-kompleterende cellelinje anvendt for gjenvinning og propagering av vektorer. E4-ORF6-genekspresjon i 10-3 celler ble indusert ved tilsetting av 150 uM ZnS04til kulturmediet.
Eksempel 13 - Vaksinering med adenovirusvektorer som uttrykker villtvpe- og variant-EboZ GP
AdHu5- eller AdC7-vektorer som uttrykker Ebola konvoluttkimærer ble produsert for in vivo immuniseirngsforsøk i C57BL/6-mus. Rekombinante virus med forskjellige viralskjeletter, ble skapt ved molekylære kloningsmetoder hvori minigenkassettene ble innført i stedet for El-delesjonen. De molekylære kloner av alle rekombinante virus ble gjenvunnet og dyrket opp i 293-celler for storskalarensing ved anvendelse av CsCl-sedimenteringsfremgangsmåten.
Fem EboZ-varianter kodet av AdHu5 eller AdPan7 (C7), ble selektert og produsert for å evaluere deres relative immunogenisitet etter en intramuskulær Ad-injeksjon. wt-Ebo, en oppløselig Ebo-variant, EboAl, EboA2, EboA3, EboA4, EboA5S, EboA6S, EboA7S og EboA8S ble evaluert i de første vaksinestudier. For de data som er oppsummert i den påfølgende tabell, ble antall virale partikler (pr. ml eller totalt) som var produsert og forsterket fra infekterte 293-celler fastslått ved spektrofotometriavlesninger.
Vektor ble administrert intramuskulært (IO11 genomkopier/celle) i C57BL76-mus og nærværet av virusnøytraliserende antistoff (VNAO) ble evaluert 28 dager senere som et første mål på en immunrespons generert mot Ebola-konvoluttglykoproteinet. VNA er definert som serumantistoff i stand til å inhibere transduksjon av HeLa-celler formidlet av HIV-basert vektor, pseudotypet med villtype Ebola konvolutten.
VNA til EboZ pseudotypene ble påvist med AdPan7 (C7), som ga høyere titere enn AdHu5. EboZA3 utløste den høyeste VNA uttrykt ved de transgene mål. For de data som er oppsummert i den påfølgende tabell, er nøytraliserende antistofftitere mot HIV-EboZ-GFP-pseudotypene (resiprok fortynning) anført (N = 5 dyr/gruppe).
Eksempel 14 - Pan7 formidlet ekspresjon av Ebolaproteiner
For å evaluere Pan7-vektorer som uttrykker Ebola konvoluttproteiner og det nukleære Ebola antigenet, har det blitt foretatt studier på mus. Disse er rettet mot evaluering av nøytraliserende antistoffer i C57BL/6-mus, injisert intramuskulært (IM) med AdHu5
eller Pan7 som uttrykker hver av fire Ebola env-konstrukter.
A. Evaluering av CTL fra C5 7BL/ 6- mus injisert IM med AdHu5 eller Pan 7 som uttrykker Ebola env- konstruktene
1. Utfordringsforsøk i mus med Ebola virus
Nøytraliserende antistoff (NAB) responser på Ebola konvolutten ble analysert ved å se på immunisert museserumformidlet nøytralisering av en lentiviral (HIV) vektor pseudotypet med de forskjellige konstruktene (eEbo, NTD2, NTD3, NTD4) av Ebola konvoluttglykoproteinet. C57BL/6- eller BALB/c-mus mottok en enkelt intramuskulær injeksjon på 5x1010 partikler/mus "av C7 (AdPan7) som koder Ebola konvoluttvarianten. Nøytraliserende antistoff ble bedømt 30 dager etter vaksinering. I korthet ble Ebola Zaire pseudotypet HIV-vektor, som koder for P-galaktosidase (EboZ-HIV-LacZ), inkubert i to timer ved 37 °C med forskjellige fortynninger av varmeinaktivert museserum. Etter inkuberingen med serum, ble EboZ-HIV-LacZ så benyttet for å infektere HeLa-celler i 16 timer ved 37 °C. Infekti vi teten ble fastslått ved X-gal farging av transduserte HeLa-celler som var positive for P-galaktosidase. Nøytraliserende titer representerer den serumresiproke fortynning der en 50 % reduksjon i antall P-galaktosidasepositive blå celler ble observert. Sera ble samlet 30 dager etter immunisering, som besto av en enkelt intramuskulær (IM) administrasjon av 5x10<10>partikler/dyr. Nøytraliserende antistoff mot Ebola pseudotypet HIV kunne påvises fra alle grupper med antistofftitere fra 20 for Ad-EboZ (AdHu5 uttrykkende EboZ), Ad-NTD3 (AdHu5 uttrykkende NTD3) og C7-sEbo (AdPan7 uttrykkende oppløselig EboZ) til over 130 for C7-NTD3 (AdPan7 uttrykkende oppløselig NTD3) og C7-NTD4 (AdPan7 uttrykkende oppløselig NTD3). Den samme immuniseringsstrategi i BALB/c-mus resulterte i lavere nøytraliserende antistofftitere for Ad- og C7-NTD2, og NTD4.
B. Cellulær immunrespons
Den cellulære immunrespons på Ebola konvolutten i C57BL/6-mus ble evaluert 8 dager etter en enkelt IM administrering av 5x10<10>partikler av C7-LacZ- eller C7-Ebola-konvoluttvariant pr. dyr. Mus ble vaksinert IM med 5x10<10>partikler C7, som koder LacZ eller Ebola konvoluttvariant. Spleniske lymfocytter fra immuniserte mus ble samlet 8 dager etter vaksinering og stimulert in vitro med materceller (spleniske lymfocytter fra ikke-behandlete mus infektert med human adenovirusserotype 5 som koder for villtype Ebola konvolutten og så bestrålt). Standard 5-hr CTL-analyser ble utført ved anvendelse av<51>Cr-merket, syngeniske C57-celler transfektert med en ekspressor av EboZ.
En positiv MHC-begrenset cytotoksisk T-lymfocytt (CTL) ble observert fra alle Pan7 som koder for Ebola konvoluttvarianter med en høyere respons fra NTD2-, NTD3- eller NTD4-immuniserte mus. Effektorceller fra C7 kodende Ebola konvoluttvariant-immuniserte mus gjenkjente EboZ-transfekterte målceller og ga gjentatte CTL-responser opptil 30 % spesifikk lysering. Mindre enn 5 % lysering ble observert med effektorceller fra naive eller LacZ-immuniserte kontrollmus, som bekrefter at lysering var spesifikk for Ebola konvoluttantigener.
C. Beskyttelsesstudier
De mest direkte midler for å bedømme C7 (AdPan7) som koder for EboZ-variantene som en vellykket vaksine i mus, var å bedømme beskyttelsen mot vekttap og død etter letal utfordring med museadaptert Ebola Zaire-virus. BALB/c-mus ble immunisert med en enkelt dose av 5x10<10>partikler/dyr, som gjennomført tidligere og vaksinerte dyr ble utfordret med 200 LD50museadapterte Ebola Zaire 21 dager senere. Alle kontrollmus (bærer og C7-LacZ) døde mellom dag 5 og dag 9 etter utfordring. Derimot overlevde alle musene unntatt én (fra C7-sEbo gruppen), utfordringen med Ebola Zaire.
Vekttap ble observert fra mus vaksinert med C7-sEbo fra dag 4 til dag 7. Sykdomstegn som pilo-ereksjon og fra lett til alvorlig letargi ble også observert hos mus vaksinert med C7-sEbo, NTD2 og NTD3 mellom dag 4 og dag 7. Mus immunisert med C7-EboZ og C7-NTD4 viste ingen tegn på sykdom. Totalt sett beskyttet en enkelt dose av C7-EboZ og C7-NTD4 immuniserte mus fullstendig mot sykdom og død, muligens pga. en signifikant T-celle formidlet immunitet.
Alle dokumenter nevnt i beskrivelsen er inkorporert heri ved referanse. Tallrike modifikasjoner og varianter av den foreliggende oppfinnelse ligger innenfor dens ramme og er ansett å være åpenbare for fagmannen. Slike modifikasjoner og endringer av preparater og prosesser ifølge oppfinnelsen, som valg av forskjellige minigen eller valg eller doseringer av vektorene eller immunmodulatorene, anses å ligge innenfor rammen av de vedlagte krav.
Claims (12)
1.
Rekombinant adenovirus, karakterisert ved at den har et kapsid som omfatter et AdPan 6 hexon protein som har aminosyresekvensen til SEQ ID NO:7, et fiber protein og et penton protein, der nevnte fiber og penton protein er henholdsvis avledet fra human eller simian opprinnelse, adenoviruset omfatter ytterligere adenovirus sekvenser funksjonelt deletert i Ela og/eller Elb genene, 5' og 3' adenovirus cis-elementer nødvendig for replikasjon og "encapsidiation" og en transgen heterolog til adenoviruset og operativt koplet til sekvensene som dirigerer ekspresjon av nevnte gen i en vertscelle.
2.
Rekombinant adenovirus i følge krav 1, karakterisert v e d at fiberproteinet er AdPan6 fiberproteinfragmentet fra SEQ ID NO: 19.
3.
Rekombinant adenovirus i følge krav 1, karakterisert v e d at fiberproteinet er AdPan6 fiberproteinfragmentet fra SEQ ID NO: 8.
4.
Rekombinant adenovirus i følge et hvilket som helst av kravene 1 til 3, karakterisert ved at penton proteinet er et AdPan6 penton protein.
5.
Rekombinant adenovirus i følge et hvilket som helst av kravene 1 til 4, karakterisert ved at kapsidet er et AdPan6 kapsid.
6.
Rekombinant adenovirus i følge et hvilket som helst av kravene 1 til 5, karakterisert ved at nevnte rekombinante adenovirus er et pseudotype adenovirus som omfatter 5' og 3 'adenovirus cis-elementer nødvendig for replikasjon og "encapsidation", hvor nevnte cis-elementer omfatter en adenovirus 5' invertert terminal repetisjon og en adenovirus 3' invertert terminal repetisjon fra en adenovirus heterolog til AdPan 6.
7.
Rekombinant adenovirus, karakterisert ved at den har et kapsid som omfatter et hexon inneholdende et fragment av AdPan6 hexon proteinet, et fiber protein og et penton protein, der nevnte fiber og penton protein er avledet fra human eller simian opprinnelse, adenoviruset omfatter ytterligere adenovirus sekvenser funksjonelt deletert i Ela og/eller Elb genene og en nukleinsyresekvens heterolog til AdPan6, hvori fragmentet til AdPan6 hexon proteinet er en N-terminal eller C-terminal trunkering på omtrent 50 aminosyrers lengde av AdPan6 hexon proteinsekvensen til SEQ ID NO:7.
8.
Rekombinant adenovirus i følge et hvilket som helst av kravene 1 til 7, karakterisert ved at adenovirusets cis elementer omfatter 5' inverterte terminal repetisjons (ITR) sekvenser og 3' ITR fra Pan6 SEQ ID NO:5 eller en sekvens som er komplementær til denne.
9.
Adenovirus i følge krav 7, karakterisert ved at minst ett simiankapsid protein er valgt fra:
penton proteinet fra Pan6 SEQ ID NO: 10 og
fiber proteinet fra Pan6 SEQ ID NO:8.
10.
Isolert vertscelle, karakterisert ved at den omfatter et rekombinant adenovirus i følge et hvilket som helst av kravene 1 til 9.
11.
Sammensetning, karakterisert ved at den omfatter et rekombinant adenovirus i følge et hvilket som helst av kravene 1 til 9 og en farmasøytisk akseptabel bærer.
12.
Anvendelse av et rekombinant adenovirus i følge et hvilket som helst av kravene 1 til 9, for fremstilling av et medikament formulert for å reise immunrespons mot et infeksiøst agens i en pattedyrsvert, hvori nevnte transgene eller heterologe sekvens koder for et antigen fra det infeksiøse agenset.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US33195101P | 2001-11-21 | 2001-11-21 | |
US36679802P | 2002-03-22 | 2002-03-22 | |
PCT/US2002/033645 WO2003046124A2 (en) | 2001-11-21 | 2002-11-20 | Simian adenovirus nucleic acid and amino acid sequences, vectors containing same, and methods of use |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO20120337L true NO20120337L (no) | 2004-05-26 |
NO334512B1 NO334512B1 (no) | 2014-03-24 |
Family
ID=26987985
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO20042191A NO332692B1 (no) | 2001-11-21 | 2004-05-26 | Rekombinant adenovirus, sammensetning inneholdende denne, isolert vertscelle samt anvendelse for fremstilling av et medikament |
NO20120337A NO334512B1 (no) | 2001-11-21 | 2012-03-21 | Rekombinant adenovirus, isolert vertscelle inneholdende denne, sammensetning som omfatter det rekombinante adenoviruset og en anvendelse |
NO20130590A NO335438B1 (no) | 2001-11-21 | 2013-04-30 | Rekombinant adenovirus, isolert vertscelle inneholdende denne, sammensetning som omfatter det rekombinante adenoviruset og avendelse. |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO20042191A NO332692B1 (no) | 2001-11-21 | 2004-05-26 | Rekombinant adenovirus, sammensetning inneholdende denne, isolert vertscelle samt anvendelse for fremstilling av et medikament |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO20130590A NO335438B1 (no) | 2001-11-21 | 2013-04-30 | Rekombinant adenovirus, isolert vertscelle inneholdende denne, sammensetning som omfatter det rekombinante adenoviruset og avendelse. |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US7247472B2 (no) |
EP (4) | EP2301582B1 (no) |
JP (9) | JP2005511035A (no) |
KR (1) | KR100987360B1 (no) |
CN (1) | CN1578678B (no) |
AU (1) | AU2002365366B2 (no) |
BR (1) | BR0214350A (no) |
CA (3) | CA2990322A1 (no) |
CO (1) | CO5590973A2 (no) |
HU (3) | HU230365B1 (no) |
IL (5) | IL161584A0 (no) |
MX (2) | MX351516B (no) |
NO (3) | NO332692B1 (no) |
NZ (3) | NZ532383A (no) |
PH (1) | PH12016500338A1 (no) |
PL (1) | PL209133B1 (no) |
SG (2) | SG165153A1 (no) |
WO (1) | WO2003046124A2 (no) |
ZA (1) | ZA200403117B (no) |
Families Citing this family (113)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7344872B2 (en) | 2001-06-22 | 2008-03-18 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method for rapid screening of bacterial transformants and novel simian adenovirus proteins |
US20040136963A1 (en) * | 2001-06-22 | 2004-07-15 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Simian adenovirus vectors and methods of use |
NZ532383A (en) | 2001-11-21 | 2007-03-30 | Univ Pennsylvania | Pan-7 simian adenovirus nucleic acid and amino acid sequences, vectors containing same, and methods of use |
PL376792A1 (pl) | 2002-10-23 | 2006-01-09 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Sposoby szczepienia przeciwko malarii |
US7291498B2 (en) | 2003-06-20 | 2007-11-06 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods of generating chimeric adenoviruses and uses for such chimeric adenoviruses |
EP1636370B1 (en) * | 2003-06-20 | 2014-04-16 | The Trustees of The University of Pennsylvania | Methods of generating chimeric adenoviruses and uses for such chimeric adenoviruses |
CA2880061C (en) | 2004-01-23 | 2018-03-13 | Agostino Cirillo | Chimpanzee adenovirus vaccine carriers |
CA2563500C (en) * | 2004-04-28 | 2016-06-28 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Immunization regimen with e4-deleted adenovirus prime and e1-deleted adenovirus boost |
DE602005026269D1 (de) * | 2004-04-28 | 2011-03-24 | Univ Pennsylvania | Sequenzielle freisetzung immunogener moleküle über adenoviren und adeno-assoziierte viren vermittelte abgaben |
CA2567741A1 (en) * | 2004-05-25 | 2006-03-30 | Chimeracore, Inc. | Self-assembling nanoparticle drug delivery system |
GB0417494D0 (en) | 2004-08-05 | 2004-09-08 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
KR101255870B1 (ko) | 2004-11-16 | 2013-04-17 | 아에라스 글로벌 티비 백신 파운데이션 | 재조합 바이러스 벡터를 포함하는 다가 백신 |
ES2533970T3 (es) * | 2005-03-08 | 2015-04-16 | Aptose Biosciences Inc. | Uso de interleucina 17E para el tratamiento de cáncer |
GB0513421D0 (en) | 2005-06-30 | 2005-08-03 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccines |
ATE460922T1 (de) * | 2006-04-07 | 2010-04-15 | Chimeros Inc | Zusammensetzungen und verfahren zur behandlung von b-zellen-malignomen |
DE602007004470D1 (de) * | 2006-04-28 | 2010-03-11 | Univ Pennsylvania | Modifiziertes adenovirus-hexon-protein und anwendungen davon |
WO2008027394A2 (en) | 2006-08-28 | 2008-03-06 | The Wistar Institute Of Anatomy And Biology | Constructs for enhancing immune responses |
PL2137210T3 (pl) | 2007-03-02 | 2017-06-30 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Nowy sposób i kompozycje |
US20090226525A1 (en) * | 2007-04-09 | 2009-09-10 | Chimeros Inc. | Self-assembling nanoparticle drug delivery system |
DK2220241T3 (en) * | 2007-11-28 | 2017-01-09 | Univ Pennsylvania | Adenovirus comprising a simian adenovirus E-SAdV-39-capsidhexonprotein and uses thereof |
HUE031636T2 (en) * | 2007-11-28 | 2017-07-28 | Univ Pennsylvania | SAdV-28,27, -29, -32, -33, and -34 simian B subgenus adenoviruses |
AU2014203073B2 (en) * | 2007-11-28 | 2016-07-07 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Simian E adenovirus SAdV-30 |
BRPI0819774A2 (pt) * | 2007-11-28 | 2014-10-14 | Univ Pennsylvania | Subfamília c de adenovírus sadv-40, -31 e -34 de símio e seus usos |
JP5661476B2 (ja) * | 2008-03-04 | 2015-01-28 | ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア | サルアデノウイルスSAdV−36、−42.1、−42.2および−44ならびにそれらの用途 |
US9217155B2 (en) * | 2008-05-28 | 2015-12-22 | University Of Massachusetts | Isolation of novel AAV'S and uses thereof |
EP2350269B1 (en) | 2008-10-31 | 2015-09-09 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Simian adenoviruses with sadv-46 hexon capsid proteins and uses thereof |
WO2010085984A1 (en) * | 2009-02-02 | 2010-08-05 | Okairos Ag | Simian adenovirus nucleic acid- and amino acid-sequences, vectors containing same, and uses thereof |
RU2604815C2 (ru) * | 2009-02-02 | 2016-12-10 | ГлаксоСмитКлайн Байолоджикалз с.а. | Нуклеинокислотные и аминокислотные последовательности аденовируса обезьян, векторы, содержащие указанные последовательности, и их применение |
ES2687294T3 (es) * | 2009-02-02 | 2018-10-24 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Secuencias de aminoácidos y de ácidos nucleicos de adenovirus de simio, vectores que las contienen, y sus usos |
MX2011009597A (es) | 2009-03-17 | 2012-05-29 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Deteccion mejorada de la expresion del gen. |
WO2010120874A2 (en) | 2009-04-14 | 2010-10-21 | Chimeros, Inc. | Chimeric therapeutics, compositions, and methods for using same |
US8734809B2 (en) | 2009-05-28 | 2014-05-27 | University Of Massachusetts | AAV's and uses thereof |
US8846031B2 (en) | 2009-05-29 | 2014-09-30 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Simian adenovirus 41 and uses thereof |
WO2011057248A2 (en) * | 2009-11-09 | 2011-05-12 | Genvec, Inc. | Simian adenovirus and methods of use |
WO2011057254A2 (en) | 2009-11-09 | 2011-05-12 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Simian adenoviral vector-based vaccines |
US20130058897A1 (en) * | 2010-04-14 | 2013-03-07 | Mogam Biotechnology Research Institute | Hexon isolated from simian adenovirus serotype 19, hypervariable region thereof and chimeric adenovirus using the same |
WO2011133901A2 (en) | 2010-04-23 | 2011-10-27 | University Of Massachusetts | Aav-based treatment of cholesterol-related disorders |
CA3050894C (en) | 2010-04-23 | 2022-10-18 | University Of Massachusetts | Multicistronic expression constructs |
EP2826860B1 (en) | 2010-04-23 | 2018-08-22 | University of Massachusetts | CNS targeting AAV vectors and methods of use thereof |
LT2569436T (lt) * | 2010-05-14 | 2018-03-12 | Oregon Health & Science University | Rekombinantiniai žcmv ir hcmv vektoriai ir jų panaudojimas |
WO2012021730A2 (en) * | 2010-08-11 | 2012-02-16 | Genvec, Inc. | Respiratory syncytial virus (rsv) vaccine |
CA2808556A1 (en) | 2010-09-20 | 2012-03-29 | Crucell Holland B.V. | Therapeutic vaccination against active tuberculosis |
EP2643465B1 (en) | 2010-11-23 | 2016-05-11 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Subfamily e simian adenovirus a1321 and uses thereof |
AU2011350066A1 (en) | 2010-12-27 | 2013-07-11 | Alexion Pharma International Sarl | Compositions comprising natriuretic peptides and methods of use thereof |
WO2012089231A1 (en) * | 2010-12-30 | 2012-07-05 | Okairòs Ag | Paramyxovirus vaccines |
US10221218B2 (en) | 2011-05-10 | 2019-03-05 | The Regents Of The University Of California | Adenovirus isolated from titi monkeys |
WO2012154994A2 (en) * | 2011-05-10 | 2012-11-15 | The Regents Of The University Of Californa | A novel adenovirus isolated from titi monkeys |
GB201108879D0 (en) | 2011-05-25 | 2011-07-06 | Isis Innovation | Vector |
TWI575070B (zh) | 2011-07-12 | 2017-03-21 | 傳斯堅公司 | Hbv聚合酶突變體 |
WO2013036791A2 (en) * | 2011-09-09 | 2013-03-14 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Modified adenoviral vectors and methods of treatment using same |
CA2847888A1 (en) | 2011-09-09 | 2013-03-14 | Biomed Realty, L.P. | Methods and compositions for controlling assembly of viral proteins |
TW201318637A (zh) | 2011-09-29 | 2013-05-16 | Transgene Sa | 免疫療法組成物及用於治療c型肝炎病毒感染之療程(一) |
TW201321016A (zh) | 2011-09-29 | 2013-06-01 | Transgene Sa | 免疫療法組成物及用於治療c型肝炎病毒感染之療程(二) |
IN2014DN03061A (no) * | 2011-10-05 | 2015-05-15 | Genvec Inc | |
CA2852874A1 (en) | 2011-10-19 | 2013-04-25 | Alexion Pharma Holding | Compositions comprising alkaline phosphatase and/or natriuretic peptide and methods of use thereof |
WO2013063019A1 (en) | 2011-10-28 | 2013-05-02 | The Wistar Institute Of Anatomy And Biology | Methods and compositions for enhancing the therapeutic effect of anti-tumor t cells |
WO2013082268A1 (en) | 2011-11-30 | 2013-06-06 | The Wistar Institute Of Anatomy And Biology | Methods and compositions for regulation of cell aging, carcinogenesis, and reprogramming |
BR112014028684A2 (pt) | 2012-05-18 | 2017-07-25 | Univ Pennsylvania | subfamília e adenovírus de símio a1302, a1320, a1331 e a1337 e usos dos mesmos |
WO2014039746A1 (en) | 2012-09-07 | 2014-03-13 | Emory University | Hiv immune stimulating compositions comprising recombinantly expressed pili on bacteria and methods related thereto |
WO2014047261A1 (en) * | 2012-09-19 | 2014-03-27 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Viruses associated with immunodeficiency and enteropathy and methods using same |
SG11201503864TA (en) | 2012-11-16 | 2015-06-29 | Beth Israel Hospital | Recombinant adenoviruses and use thereof |
JP2016505267A (ja) * | 2013-01-15 | 2016-02-25 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | アデノウイルスおよびその使用 |
US9624510B2 (en) | 2013-03-01 | 2017-04-18 | The Wistar Institute | Adenoviral vectors comprising partial deletions of E3 |
WO2014153204A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Salk Institute For Biological Studies | Oncolytic adenovirus compositions |
US9402888B2 (en) | 2013-03-14 | 2016-08-02 | The Wistar Institute Of Anatomy And Biology | Methods and compositions for treating cancer |
KR102196884B1 (ko) * | 2013-11-01 | 2020-12-30 | 화이자 인코포레이티드 | 전립선-연관 항원의 발현을 위한 벡터 |
WO2015191508A1 (en) | 2014-06-09 | 2015-12-17 | Voyager Therapeutics, Inc. | Chimeric capsids |
RS61929B1 (sr) | 2014-10-02 | 2021-06-30 | Wistar Inst | Postupci i sastavi za tretman raka |
US10941452B2 (en) | 2014-10-06 | 2021-03-09 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for isolation of circulating tumor cells (CTC) |
BR112017007737A2 (pt) | 2014-10-21 | 2018-01-30 | Univ Massachusetts | variantes de aav recombinantes e usos das mesmas |
CN107106689A (zh) | 2014-11-05 | 2017-08-29 | 沃雅戈治疗公司 | 用于治疗帕金森病的aadc多核苷酸 |
SG11201703419UA (en) | 2014-11-14 | 2017-05-30 | Voyager Therapeutics Inc | Modulatory polynucleotides |
MX2017006216A (es) | 2014-11-14 | 2018-08-29 | Voyager Therapeutics Inc | Composiciones y métodos para tratar la esclerosis lateral amiotrófica (ela). |
EP3230441A4 (en) | 2014-12-12 | 2018-10-03 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the production of scaav |
WO2016131945A1 (en) | 2015-02-20 | 2016-08-25 | Transgene Sa | Combination product with autophagy modulator |
CN108025058B (zh) * | 2015-06-12 | 2022-12-16 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 腺病毒多核苷酸和多肽 |
EP3384035A4 (en) | 2015-12-02 | 2019-08-07 | Voyager Therapeutics, Inc. | ASSAYS FOR DETECTION OF NEUTRALIZING ANTIBODIES OF VAA |
EP3416668A4 (en) | 2016-02-18 | 2020-02-19 | The Wistar Institute Of Anatomy And Biology | METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF MELANOMA |
KR20180112024A (ko) | 2016-02-23 | 2018-10-11 | 더 솔크 인스티튜트 포 바이올로지칼 스터디즈 | 바이러스 동역학에 미치는 영향 최소화를 위한 치료용 아데노바이러스의 외인성 유전자 발현 |
JP7054527B2 (ja) | 2016-02-23 | 2022-04-14 | ソーク インスティテュート フォー バイオロジカル スタディーズ | アデノウイルスの複製動態を測定するための高スループットアッセイ |
US11326182B2 (en) | 2016-04-29 | 2022-05-10 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions for the treatment of disease |
US11299751B2 (en) | 2016-04-29 | 2022-04-12 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions for the treatment of disease |
CA3023022A1 (en) | 2016-05-04 | 2017-11-09 | Transgene Sa | Combination therapy with cpg tlr9 ligand |
KR102392236B1 (ko) | 2016-05-18 | 2022-05-03 | 보이저 테라퓨틱스, 인크. | 조절성 폴리뉴클레오티드 |
SG11201809643UA (en) | 2016-05-18 | 2018-12-28 | Voyager Therapeutics Inc | Compositions and methods of treating huntington's disease |
EP3490610A4 (en) * | 2016-08-01 | 2020-05-20 | The Wistar Institute Of Anatomy And Biology | DEFICIENTLY REPLICABLE ADENOVIRAL VECTOR COMPOSITIONS AND METHODS FOR VACCINE APPLICATIONS |
AU2017313917B2 (en) | 2016-08-18 | 2023-12-21 | The Regents Of The University Of California | CRISPR-Cas genome engineering via a modular AAV delivery system |
EP3831281A1 (en) | 2016-08-30 | 2021-06-09 | The Regents of The University of California | Methods for biomedical targeting and delivery and devices and systems for practicing the same |
WO2018069316A2 (en) | 2016-10-10 | 2018-04-19 | Transgene Sa | Immunotherapeutic product and mdsc modulator combination therapy |
KR20190075964A (ko) | 2016-10-13 | 2019-07-01 | 유니버시티 오브 매사추세츠 | Aav 캡시드 설계 |
CN110062630A (zh) | 2016-12-12 | 2019-07-26 | 萨克生物研究学院 | 肿瘤靶向合成腺病毒及其用途 |
CA3061652A1 (en) | 2017-05-05 | 2018-11-08 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (als) |
EP3619308A4 (en) | 2017-05-05 | 2021-01-27 | Voyager Therapeutics, Inc. | COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATMENT FOR HUNTINGTON'S MORBUS |
JOP20190269A1 (ar) | 2017-06-15 | 2019-11-20 | Voyager Therapeutics Inc | بولي نوكليوتيدات aadc لعلاج مرض باركنسون |
JP7229989B2 (ja) | 2017-07-17 | 2023-02-28 | ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッド | 軌道アレイガイドシステム |
KR20200044793A (ko) | 2017-08-03 | 2020-04-29 | 보이저 테라퓨틱스, 인크. | Aav의 전달을 위한 조성물 및 방법 |
JP7502991B2 (ja) | 2017-10-16 | 2024-06-19 | ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッド | 筋萎縮性側索硬化症(als)の治療 |
WO2019079242A1 (en) | 2017-10-16 | 2019-04-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | TREATMENT OF AMYOTROPHIC LATERAL SCLEROSIS (ALS) |
EP3723771A4 (en) * | 2017-12-11 | 2022-04-06 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | RECOMBINANT ADENOVIRUS AND THEIR USES |
WO2019241486A1 (en) | 2018-06-13 | 2019-12-19 | Voyager Therapeutics, Inc. | Engineered 5' untranslated regions (5' utr) for aav production |
JP7413629B2 (ja) | 2018-07-17 | 2024-01-16 | ヘリックスミス カンパニー, リミテッド | Igf-1異型体を発現させるdnaコンストラクトを用いた神経病症の治療 |
CA3107462A1 (en) | 2018-07-24 | 2020-01-30 | Voyager Therapeutics, Inc. | Systems and methods for producing gene therapy formulations |
EP3861113A1 (en) | 2018-10-04 | 2021-08-11 | Voyager Therapeutics, Inc. | Methods for measuring the titer and potency of viral vector particles |
SG11202103425YA (en) | 2018-10-05 | 2021-05-28 | Voyager Therapeutics Inc | Engineered nucleic acid constructs encoding aav production proteins |
EP3867389A1 (en) | 2018-10-15 | 2021-08-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | Expression vectors for large-scale production of raav in the baculovirus/sf9 system |
US20230193315A1 (en) | 2019-01-31 | 2023-06-22 | Oregon Health & Science University | Methods for using transcription-dependent directed evolution of aav capsids |
US20220211835A1 (en) * | 2019-04-17 | 2022-07-07 | The Wistar Institute | Replication Deficient Adenoviral Vectors for HIV Vaccine Applications |
CA3189238A1 (en) | 2020-07-13 | 2022-01-20 | Transgene | Treatment of immune depression |
AU2022214429A1 (en) | 2021-02-01 | 2023-09-14 | Regenxbio Inc. | Gene therapy for neuronal ceroid lipofuscinoses |
CN112831524B (zh) * | 2021-02-20 | 2023-06-13 | 苏州相奕生物技术有限公司 | 人工改造的重组腺病毒载体、由其包装的病毒及其应用 |
AU2022250521A1 (en) | 2021-03-29 | 2023-09-28 | Genematrix Inc. | Recombinant chimeric adenoviral vector substituted by knob gene of chimpanzee adenovirus serotype 6, and application thereof |
WO2022218997A1 (en) | 2021-04-12 | 2022-10-20 | Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) | Novel universal vaccine presenting system |
WO2023213764A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-09 | Transgene | Fusion polypeptide comprising an anti-pd-l1 sdab and a member of the tnfsf |
Family Cites Families (40)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB8607679D0 (en) | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Winter G P | Recombinant dna product |
IL162181A (en) | 1988-12-28 | 2006-04-10 | Pdl Biopharma Inc | A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same |
US5240846A (en) | 1989-08-22 | 1993-08-31 | The Regents Of The University Of Michigan | Gene therapy vector for cystic fibrosis |
US6174666B1 (en) | 1992-03-27 | 2001-01-16 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Method of eliminating inhibitory/instability regions from mRNA |
EP0804076A4 (en) | 1994-10-19 | 1998-10-21 | Genetic Therapy Inc | GENTHERAPY THROUGH SIMULTANEOUS AND REPEATED ADMINISTRATION OF ADENOVIRUS AND IMMUNE SUPPRESSIVES |
US5856152A (en) | 1994-10-28 | 1999-01-05 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Hybrid adenovirus-AAV vector and methods of use therefor |
DE69534166T2 (de) * | 1994-10-28 | 2006-03-09 | Trustees Of The University Of Pennsylvania | Rekombinanter adenovirus und methoden zu dessen verwendung |
US5770442A (en) * | 1995-02-21 | 1998-06-23 | Cornell Research Foundation, Inc. | Chimeric adenoviral fiber protein and methods of using same |
US6127525A (en) * | 1995-02-21 | 2000-10-03 | Cornell Research Foundation, Inc. | Chimeric adenoviral coat protein and methods of using same |
AU6261696A (en) * | 1995-06-05 | 1996-12-24 | Trustees Of The University Of Pennsylvania, The | A replication-defective adenovirus human type 5 recombinant as a vaccine carrier |
US5698202A (en) * | 1995-06-05 | 1997-12-16 | The Wistar Institute Of Anatomy & Biology | Replication-defective adenovirus human type 5 recombinant as a rabies vaccine carrier |
EP0931158A1 (en) | 1996-09-06 | 1999-07-28 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | An inducible method for production of recombinant adeno-associated viruses utilizing t7 polymerase |
US6083716A (en) | 1996-09-06 | 2000-07-04 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Chimpanzee adenovirus vectors |
US5922315A (en) * | 1997-01-24 | 1999-07-13 | Genetic Therapy, Inc. | Adenoviruses having altered hexon proteins |
US5891994A (en) | 1997-07-11 | 1999-04-06 | Thymon L.L.C. | Methods and compositions for impairing multiplication of HIV-1 |
CA2303768C (en) | 1997-09-19 | 2009-11-24 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods and vector constructs useful for production of recombinant aav |
CA2304168A1 (en) | 1997-09-19 | 1999-04-01 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods and cell line useful for production of recombinant adeno-associated viruses |
GB9720585D0 (en) | 1997-09-26 | 1997-11-26 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
DE69922934T2 (de) | 1998-03-20 | 2005-12-08 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Zusammensetzungen und Verfahren zur helfer-freien Herstellung von rekombinanten Adeno-assoziierten Viren |
US20030017138A1 (en) * | 1998-07-08 | 2003-01-23 | Menzo Havenga | Chimeric adenoviruses |
AU5677399A (en) * | 1998-08-20 | 2000-03-14 | Wistar Institute Of Anatomy And Biology, The | Methods of augmenting mucosal immunity through systemic priming and mucosal boosting |
US6258595B1 (en) | 1999-03-18 | 2001-07-10 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for helper-free production of recombinant adeno-associated viruses |
WO2001002607A1 (en) | 1999-07-06 | 2001-01-11 | Merck & Co., Inc. | Adenovirus carrying gag gene hiv vaccine |
PL211762B1 (pl) | 2000-01-31 | 2012-06-29 | Smithkline Beecham Biolog | Zastosowanie białka fuzyjnego zawierającego białka HIV Tat i HIV Nef lub polinukleotyd kodujący takie białko, białka lub polinukleotydu HIV gp120, białka lub polinukleotydu SIV Nef, adiuwanta indukującego TH1 zawierającego monofosforylolipid A lub jego pochodną i adiuwanta saponinowego oraz kompozycja szczepionki |
US6740525B2 (en) | 2000-02-09 | 2004-05-25 | Genvec, Inc. | Adenoviral capsid containing chimeric protein IX |
US7344872B2 (en) * | 2001-06-22 | 2008-03-18 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method for rapid screening of bacterial transformants and novel simian adenovirus proteins |
KR20040043129A (ko) * | 2001-06-22 | 2004-05-22 | 더 위스타 인스티튜트 오브 아나토미 앤드 바이올로지 | 세포독성 면역 반응을 유도하는 방법과 그에 유용한재조합체 원숭이 아데노바이러스 조성물 |
US20040136963A1 (en) | 2001-06-22 | 2004-07-15 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Simian adenovirus vectors and methods of use |
NZ532383A (en) | 2001-11-21 | 2007-03-30 | Univ Pennsylvania | Pan-7 simian adenovirus nucleic acid and amino acid sequences, vectors containing same, and methods of use |
PL376792A1 (pl) | 2002-10-23 | 2006-01-09 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Sposoby szczepienia przeciwko malarii |
EP1636370B1 (en) | 2003-06-20 | 2014-04-16 | The Trustees of The University of Pennsylvania | Methods of generating chimeric adenoviruses and uses for such chimeric adenoviruses |
US7291498B2 (en) | 2003-06-20 | 2007-11-06 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods of generating chimeric adenoviruses and uses for such chimeric adenoviruses |
DE602005026269D1 (de) * | 2004-04-28 | 2011-03-24 | Univ Pennsylvania | Sequenzielle freisetzung immunogener moleküle über adenoviren und adeno-assoziierte viren vermittelte abgaben |
SG152267A1 (en) * | 2004-04-28 | 2009-05-29 | Univ Pennsylvania | Polyvalent viral vectors and a system for production thereof |
CA2563500C (en) * | 2004-04-28 | 2016-06-28 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Immunization regimen with e4-deleted adenovirus prime and e1-deleted adenovirus boost |
TW200716750A (en) | 2005-05-12 | 2007-05-01 | Glaxo Group Ltd | Vaccine composition |
DE602007004470D1 (de) * | 2006-04-28 | 2010-03-11 | Univ Pennsylvania | Modifiziertes adenovirus-hexon-protein und anwendungen davon |
SG173377A1 (en) | 2006-07-18 | 2011-08-29 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccines for malaria |
PL2137210T3 (pl) | 2007-03-02 | 2017-06-30 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Nowy sposób i kompozycje |
US9603035B2 (en) | 2011-10-13 | 2017-03-21 | Telefonaktiebolaget L M Ericsson | Method and node related to channel estimation |
-
2002
- 2002-11-20 NZ NZ532383A patent/NZ532383A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-11-20 CA CA2990322A patent/CA2990322A1/en not_active Abandoned
- 2002-11-20 AU AU2002365366A patent/AU2002365366B2/en not_active Ceased
- 2002-11-20 IL IL16158402A patent/IL161584A0/xx unknown
- 2002-11-20 PL PL373602A patent/PL209133B1/pl unknown
- 2002-11-20 WO PCT/US2002/033645 patent/WO2003046124A2/en active Application Filing
- 2002-11-20 BR BR0214350-0A patent/BR0214350A/pt not_active Application Discontinuation
- 2002-11-20 EP EP10178464.3A patent/EP2301582B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-20 CA CA2852277A patent/CA2852277C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-11-20 EP EP20100178483 patent/EP2286841A1/en not_active Withdrawn
- 2002-11-20 CA CA2466431A patent/CA2466431C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-11-20 CN CN02823023XA patent/CN1578678B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-11-20 HU HU1300578A patent/HU230365B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2002-11-20 SG SG200605559-4A patent/SG165153A1/en unknown
- 2002-11-20 NZ NZ564586A patent/NZ564586A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-11-20 NZ NZ550416A patent/NZ550416A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-11-20 SG SG2013034475A patent/SG2013034475A/en unknown
- 2002-11-20 EP EP02803963.4A patent/EP1453543B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-20 HU HU0500987A patent/HU230364B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2002-11-20 EP EP16181533.7A patent/EP3108899A1/en not_active Withdrawn
- 2002-11-20 KR KR1020047007792A patent/KR100987360B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2002-11-20 MX MX2012000696A patent/MX351516B/es unknown
- 2002-11-20 MX MXPA04004876A patent/MXPA04004876A/es active IP Right Grant
- 2002-11-20 US US10/494,364 patent/US7247472B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-11-20 JP JP2003547559A patent/JP2005511035A/ja not_active Withdrawn
- 2002-11-20 HU HU1400619A patent/HU230488B1/hu not_active IP Right Cessation
-
2004
- 2004-04-22 IL IL161584A patent/IL161584A/en active IP Right Grant
- 2004-04-23 ZA ZA2004/03117A patent/ZA200403117B/en unknown
- 2004-05-26 NO NO20042191A patent/NO332692B1/no not_active IP Right Cessation
- 2004-06-17 CO CO04056841A patent/CO5590973A2/es active IP Right Grant
-
2007
- 2007-06-19 US US11/820,439 patent/US8105574B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-01-29 JP JP2009018231A patent/JP5715749B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-10-04 JP JP2010225018A patent/JP2011055835A/ja active Pending
-
2011
- 2011-12-27 US US13/337,608 patent/US8603459B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2012
- 2012-03-21 NO NO20120337A patent/NO334512B1/no not_active IP Right Cessation
- 2012-11-29 IL IL223344A patent/IL223344A/en active IP Right Grant
-
2013
- 2013-04-30 NO NO20130590A patent/NO335438B1/no not_active IP Right Cessation
- 2013-08-09 JP JP2013167091A patent/JP2013252144A/ja active Pending
- 2013-11-07 US US14/073,979 patent/US9133483B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-01-02 IL IL230292A patent/IL230292A/en active IP Right Grant
- 2014-03-13 IL IL231502A patent/IL231502A/en not_active IP Right Cessation
- 2014-09-10 JP JP2014184006A patent/JP2015057052A/ja not_active Ceased
- 2014-09-10 JP JP2014184003A patent/JP2015057051A/ja not_active Withdrawn
-
2015
- 2015-08-12 US US14/824,336 patent/US20170119873A9/en not_active Abandoned
-
2016
- 2016-02-19 PH PH12016500338A patent/PH12016500338A1/en unknown
- 2016-11-11 JP JP2016220443A patent/JP2017070292A/ja active Pending
- 2016-11-11 JP JP2016220440A patent/JP2017035110A/ja active Pending
- 2016-11-11 JP JP2016220444A patent/JP2017035111A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US9133483B2 (en) | Simian adenovirus nucleic acid and amino acid sequences, vectors containing same, and methods of use | |
JP5661476B2 (ja) | サルアデノウイルスSAdV−36、−42.1、−42.2および−44ならびにそれらの用途 | |
EP1944043A1 (en) | Simian adenovirus nucleic acid and amino acid sequences, vectors containing same, and methods of use | |
AU2006204656B2 (en) | Simian adenovirus nucleic acid and amino acid sequences, vectors containing same, and methods of use | |
AU2010202004B2 (en) | Simian adenovirus nucleic acid and amino acid sequences, vectors containing same, and methods of use |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |