NO174207B - Analogifremgangsm}te for fremstilling av terapeutisk aktivt konjugat av membrananker-virksomt stoff - Google Patents
Analogifremgangsm}te for fremstilling av terapeutisk aktivt konjugat av membrananker-virksomt stoff Download PDFInfo
- Publication number
- NO174207B NO174207B NO862511A NO862511A NO174207B NO 174207 B NO174207 B NO 174207B NO 862511 A NO862511 A NO 862511A NO 862511 A NO862511 A NO 862511A NO 174207 B NO174207 B NO 174207B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- ala
- mmol
- aib
- peptide
- membrane anchor
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 14
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 37
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 34
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims abstract description 6
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract description 5
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 claims abstract description 4
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 claims description 25
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 23
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 22
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 10
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 6
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 2-heptylcyclohex-2-en-1-one Chemical compound CCCCCCCC1=CCCCC1=O HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920001367 Merrifield resin Polymers 0.000 claims description 2
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 claims description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 10
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 abstract description 5
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 abstract description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 abstract 4
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 abstract 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 abstract 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 abstract 1
- 125000004043 oxo group Chemical group O=* 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 126
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 80
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 59
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 24
- 229910001868 water Inorganic materials 0.000 description 24
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 22
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 22
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical group CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 18
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 18
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical group OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 17
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 16
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 16
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 16
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 16
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 16
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 15
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 13
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 13
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 13
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 13
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 12
- RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N Trifluoroethanol Chemical compound OCC(F)(F)F RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 12
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 12
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 11
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 11
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 10
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 10
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 10
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 10
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- DEXMLDCINRCPNE-VHJYOLMMSA-N (2s)-2-[[(2r)-3-[2,3-di(hexadecanoyloxy)propylsulfanyl]-2-(hexadecanoylamino)propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CSCC(OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC DEXMLDCINRCPNE-VHJYOLMMSA-N 0.000 description 8
- 108010041642 2,3-bis-(palmitoyloxy)-2-propyl-N-palmitoyl-cysteinylserine Proteins 0.000 description 8
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- -1 dancyl Chemical compound 0.000 description 8
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010084333 N-palmitoyl-S-(2,3-bis(palmitoyloxy)propyl)cysteinyl-seryl-lysyl-lysyl-lysyl-lysine Proteins 0.000 description 6
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 6
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 6
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 5
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 5
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 5
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical compound CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 3
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- YVSWPCCVTYEEHG-UHFFFAOYSA-N rhodamine B 5-isothiocyanate Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=C(N=C=S)C=C1C(O)=O YVSWPCCVTYEEHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- YIRDNLVWIWSLLT-HTIIIDOHSA-N tert-butyl (2R)-2-[(3-oxo-2-tetradecyloctadecanoyl)amino]-3-sulfanylpropanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)C(C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)OC(C)(C)C)CCCCCCCCCCCCCC YIRDNLVWIWSLLT-HTIIIDOHSA-N 0.000 description 3
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 3
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 3
- PZFZLRNAOHUQPH-GOOVXGPGSA-N (2r)-3-[2,3-di(hexadecanoyloxy)propylsulfanyl]-2-(hexadecanoylamino)propanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CSCC(OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZFZLRNAOHUQPH-GOOVXGPGSA-N 0.000 description 2
- UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical group C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010002375 2,3-bis(palmitoyloxy)-2-propyl-1-palmitoylcysteine Proteins 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N Deuterated methanol Chemical compound [2H]OC([2H])([2H])[2H] OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- KPKZJLCSROULON-QKGLWVMZSA-N Phalloidin Chemical compound N1C(=O)[C@@H]([C@@H](O)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C[C@@](C)(O)CO)NC(=O)[C@H](C2)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]3C[C@H](O)CN3C(=O)[C@@H]1CSC1=C2C2=CC=CC=C2N1 KPKZJLCSROULON-QKGLWVMZSA-N 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 2
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 2
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 2
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- XHSDDKAGJYJAQM-KXYMVQBMSA-N dioctadecyl (z)-but-2-enedioate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCOC(=O)\C=C/C(=O)OCCCCCCCCCCCCCCCCCC XHSDDKAGJYJAQM-KXYMVQBMSA-N 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002434 immunopotentiative effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 2
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 2
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 2
- 229920003053 polystyrene-divinylbenzene Polymers 0.000 description 2
- CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M potassium bisulfate Chemical compound [K+].OS([O-])(=O)=O CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 229940126577 synthetic vaccine Drugs 0.000 description 2
- GKHQFLVUTPUMQK-DHUJRADRSA-N tert-butyl (2r)-2-(hexadecanoylamino)-3-hexadecanoylsulfanylpropanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H](C(=O)OC(C)(C)C)CSC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC GKHQFLVUTPUMQK-DHUJRADRSA-N 0.000 description 2
- MKFMOGQALBFRCS-FQEVSTJZSA-N tert-butyl (2r)-2-(hexadecanoylamino)-3-sulfanylpropanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)OC(C)(C)C MKFMOGQALBFRCS-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RGVMLGPDHXVWSZ-AKGZTFGVSA-N (2r)-2-(2,3-dihydroxypropylamino)-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound OCC(O)CN[C@@H](CS)C(O)=O RGVMLGPDHXVWSZ-AKGZTFGVSA-N 0.000 description 1
- DCEAGNIBFYVWJW-YTTGMZPUSA-N (2r)-2-(hexadecanoylamino)-3-hexadecanoylsulfanylpropanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CSC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC DCEAGNIBFYVWJW-YTTGMZPUSA-N 0.000 description 1
- GPWYBXDQHZIBPR-AKGZTFGVSA-N (2r)-2-amino-3-(2,3-dihydroxypropylsulfanyl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CSCC(O)CO GPWYBXDQHZIBPR-AKGZTFGVSA-N 0.000 description 1
- XESAFIZXKJQZEK-DQCJDYNUSA-N (2r)-3-(1,4-dioctadecoxy-1,4-dioxobutan-2-yl)sulfanyl-2-(hexadecanoylamino)propanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCOC(=O)CC(SC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(O)=O)C(=O)OCCCCCCCCCCCCCCCCCC XESAFIZXKJQZEK-DQCJDYNUSA-N 0.000 description 1
- PZFZLRNAOHUQPH-DJBVYZKNSA-N (2r)-3-[(2r)-2,3-di(hexadecanoyloxy)propyl]sulfanyl-2-(hexadecanoylamino)propanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CSC[C@H](OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZFZLRNAOHUQPH-DJBVYZKNSA-N 0.000 description 1
- VVNYDCGZZSTUBC-LURJTMIESA-N (2s)-5-amino-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O VVNYDCGZZSTUBC-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- MFNXWZGIFWJHMI-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NC(C)(C)C(O)=O MFNXWZGIFWJHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JNRLEMMIVRBKJE-UHFFFAOYSA-N 4,4'-Methylenebis(N,N-dimethylaniline) Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1CC1=CC=C(N(C)C)C=C1 JNRLEMMIVRBKJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OEBIVOHKFYSBPE-UHFFFAOYSA-N 4-Benzyloxybenzyl alcohol Chemical group C1=CC(CO)=CC=C1OCC1=CC=CC=C1 OEBIVOHKFYSBPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 101150041968 CDC13 gene Proteins 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000000028 D-cysteine group Chemical class [H]N([H])[C@@]([H])(C(=O)[*])C(S[H])([H])[H] 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N Digoxin Natural products O([C@H]1[C@H](C)O[C@H](O[C@@H]2C[C@@H]3[C@@](C)([C@@H]4[C@H]([C@]5(O)[C@](C)([C@H](O)C4)[C@H](C4=CC(=O)OC4)CC5)CC3)CC2)C[C@@H]1O)[C@H]1O[C@H](C)[C@@H](O[C@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)C2)[C@@H](O)C1 LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N 0.000 description 1
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YYHOQQKJSHXDEN-KRWDZBQOSA-N N-palmitoyl-L-cysteine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O YYHOQQKJSHXDEN-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000007832 Na2SO4 Substances 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102100029251 Phagocytosis-stimulating peptide Human genes 0.000 description 1
- 108010009711 Phalloidine Proteins 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 241001079625 Proteides Species 0.000 description 1
- 239000012032 Sakaguchi's reagent Substances 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010084754 Tuftsin Proteins 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 235000019728 animal nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000000823 artificial membrane Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N benzoyl chloride Chemical compound ClC(=O)C1=CC=CC=C1 PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000035 biogenic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 238000001142 circular dichroism spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 description 1
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 1
- 229920006037 cross link polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 150000001944 cysteine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001295 dansyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(N(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=C2C([H])=C([H])C([H])=C(C2=C1[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N di-tert-butyl ether Chemical compound CC(C)(C)OC(C)(C)C AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000001990 dicarboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N digoxin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@@H]3C[C@@H]4[C@]([C@@H]5[C@H]([C@]6(CC[C@@H]([C@@]6(C)[C@H](O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)C[C@@H]2O)C)C[C@@H]1O LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N 0.000 description 1
- 229960005156 digoxin Drugs 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N digoxine Natural products C1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(C)OC(OC2C(OC(OC3CC4C(C5C(C6(CCC(C6(C)C(O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)CC2O)C)CC1O LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 1
- 238000005868 electrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940125532 enzyme inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000000434 field desorption mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- GAPJZAHIPBLCCF-UHFFFAOYSA-N hexadec-1-en-1-one Chemical class CCCCCCCCCCCCCCC=C=O GAPJZAHIPBLCCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ARBOVOVUTSQWSS-UHFFFAOYSA-N hexadecanoyl chloride Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(Cl)=O ARBOVOVUTSQWSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 150000002688 maleic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N methane;palladium Chemical compound C.[Pd] UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 1
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229910000343 potassium bisulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001120 potassium sulphate Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- LCZVKKUAUWQDPX-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2-[(2-acetyloxyphenyl)methyl-[2-[(2-acetyloxyphenyl)methyl-[2-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-2-oxoethyl]amino]ethyl]amino]acetate Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1CN(CC(=O)OC(C)(C)C)CCN(CC(=O)OC(C)(C)C)CC1=CC=CC=C1OC(C)=O LCZVKKUAUWQDPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CFMYXEVWODSLAX-QOZOJKKESA-N tetrodotoxin Chemical compound O([C@@]([C@H]1O)(O)O[C@H]2[C@@]3(O)CO)[C@H]3[C@@H](O)[C@]11[C@H]2[C@@H](O)N=C(N)N1 CFMYXEVWODSLAX-QOZOJKKESA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ILWRPSCZWQJDMK-UHFFFAOYSA-N triethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN(CC)CC ILWRPSCZWQJDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940035670 tuftsin Drugs 0.000 description 1
- IESDGNYHXIOKRW-LEOABGAYSA-N tuftsin Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O IESDGNYHXIOKRW-LEOABGAYSA-N 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
- A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6018—Lipids, e.g. in lipopeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6068—Other bacterial proteins, e.g. OMP
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Konjugater av mentorananker-virksctnt stoff er beskrevet, hvor det virksomme stoffet er kovalent bundet til membranankeret som er en av forbindelsene av formlene:. hvori A kan være svovel, oksygen, disulfid (-S-S-J, metylen (-CH) eller -NH-; n = 0 til 5; m = 1 eller 2; C= asymmetrisk karbon-ater! med R eller S konfigurasjon, R, R'," er like eller forskjellige og er en alkyl-, alkenyl-eller alkenylgruppe med 7-25 karbonatomer eller hydrogen, san eventuelt kan være substi-tuert med hydroksy-, amino-, okso-, acyl-, alkyl-, eller cykloalkylgrupper og og R 2 er like eller ulike og er definert som R, R' eller R" henholdsvis kan være -OR, -OCOR, -COOR, -NHCOR, -CONHR og X er virksomt stoff eller en avstan dsgivende virksomt stoff-gruppe.Konjugatet av membrananker-virksomt stoff aker antistoffdannelsen.
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører en analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktivt konjugat av membrananker-virksomt stoff, hvor et virksomt stoff er kovalent bundet til en membrananker-forbindelse.
Membrananker-forbindelser er forbindelser som kan innføres i biologiske og kunstige membraner.
Eksempelvis kan slike membrananker-forbindelser være naturlige membran-lipoproteiner, slik de allerede er isolert fra ytter-membranen fra Escherichia coli og i mellomtiden også syntetisert. E. coli membrananker-forbindelsen består i det N-terminale området av tre fettsyrer som er bundet til S-glyceryl-L-cystein (G. Jung et al. i "Peptides, Structure and Function", V.J. Hruby og D.H. Rich, side 179-182, Pierce Chem. Co. Rockford, Illinois, 1983).
Ved modellmessig undersøkelse av biologiske membraner er også allerede konformasjonsstabiliserte alfa-heliks-polypeptider beskrevet, se bl.a. alameticin, et alfa-helikalt amfifilt eicosapeptid-antibiotikum, som danner spenningsavhengige ioneledende systemer i lipidmembraner (Boheim, G. , Hanke W. , Jung G., Biphys. Struct. Mech. 9, side 181-191 (1983); Schmitt, E. og Jung, G., Liebigs Ann. Chem., side 321 til 344 og 345 til 364 (1985).
I EP-A1-330 er det beskrevet at lipopeptider, som er analogene av de allerede siden 1973 kjente 1ipoproteinene fra E. coli, virker immunpotenserende. En ytterligere europeisk patentpublikasjon, EP-A2-114787, vedrører slike lipopeptiders evne til å aktiveres rotte- og muse-alveolar makrofager in vitro, slik at disse etter 24 timers inkubering med stoffet kan eliminere tumorcellene og spesielt i betydelig grad øke antistoffproduksjonen, f.eks. mot svineserumalbumin.
I EP-A2-114787 foreslås det å anvende disse lipoprotein-etterkommerne som adjuvanser ved immuniseringen, dvs. å anvende lipoprotein-etterkommerne av E. coli membranproteinet i blanding med antigener til forbedring av immunresponsen.
Det foreligger et stort behov for stoffer som stimulerer og forsterker immunresponsen, spesielt idet rensede gener ofte bare foreligger i svært små mengder; videre finnes ved anvendelse av nye porsjoner av antigener alltid muligheten for nye forurensninger, henholdsvis dekomponeringsprodukter.
Videre foreligger et ønske om ikke å måtte vaksinere et forsøksdyr ofte, men derimot fortrinnsvis ved en enkelt tilførsel av det immunogene materialet å kunne oppnå den ønskede immunresponsen.
Til grunn for foreliggende oppfinnelse ligger følgelig den oppgaven å øke antistoffdannelsen mot antigener henholdsvis haptener for dermed å oppnå en spesifikk immunpotenserende virkning.
Ifølge foreliggende oppfinnelse fremstilles et terapeutisk aktiv konjugat av membrananker-virksomt stoff hvor membrananker-forbindelsen er en forbindelse av følgende generelle formel:
hvori A kan være svovel, oksygen, disulfid (-S-S-), metylen (-CH2-) eller -NH-;
n = 0-5; m = 1 eller 2; C<*> = asymmetrisk karbonatom med R— eller S-konflgurasjon; R, R', R" er like eller forskjellige og står for en alkyl-, alkenyl- eller alkinylgruppe med 7-25
karbonatomer eller hydrogen, som eventuelt kan være sub-stituert med hydroksygrupper og X er et virksomt stoff eller en avstandsgivende virksom stoffgruppe.
Ifølge oppfinnelsen fremstilles det terapeutisk aktive konjugatet av membrananker-virksomt stoff ved en fremgangsmåte som innbefatter at det beskyttede peptidet som er beskyttet med beskyttelsesgrupper på i og for seg kjent måte ved de funksjoner hvor det ikke skal finne sted noen reaksjon, syntetiseres ved hjelp av kjente koblingsfremgangsmåter til en fast eller oppløselig bærer, som en polymer, (f.eks. Merrifield-harpiks), på en slik måte at det syntetiserte, til bæreren bundne peptidet, er kovalent bundet til membrananker-forbindelsen over N-terminalene eller sidefunksjonene av peptidet; slik at det fremstilte peptidkonjugatet kan isoleres ved at beskyttelsesgruppene samt bindingen peptid/bærer spaltes på i og for seg kjent måte, slik at membrananker-peptidet eller konjugatet av membrananker-virksomt stoff utvinnes.
Forbindelsene kan anvendes til fremstilling av konvensjonelle og monoklonale antistoffer in vitro; fortrinnsvis kan også forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen anvendes innenfor genteknologien for å lette cellesammensmeltningen, til fremstilling av syntetiske vaksiner, til fremstilling av cellemarkører med fluorescensmerker, "spin"-merker, radioaktive merker o.l., for affinitetskromatografi, spesielt for affinitetssøyler; for liposompreparater; som tilsats til næringsmidler eller forstoffer innenfor human- og dyreernær-ing, samt som tilsats til kulturmedier for mikroorganismer og generelt for cellekulturer. Herved kan forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen eventuelt anvendes sammen med i og for seg kjente bærere i oppløsning, som salver, absorbert til faste bærere, i emulsjoner eller sprayer for human- eller veterinærmedisinske formål.
Forbindelsen peptid/membrananker-forbindelse kan fremstilles ved kondensasjon, addisjon, substitusjon, oksydasjon (eksempelvis disulfid-dannelse). Fortrinnsvis kan det som membrananker anvendes konformasjonsstabiliserende alfa-alkylaminosyre-helikser med alternerende aminosyresekvens, hvor alfa-heliksen ikke må kunne destabiliseres av andre aminosyrer, som av typen X-(Ala-Aib-Ala-Aib-Ala)n-Y, hvori n = 2 henholdsvis 4, og X, Y er i og for seg kjente beskyttelsesgrupper eller -H, -0H eller -NH2.
Det kan være fordelaktig at det virksomme stoffet er kovalent bundet til to eventuelle forskjellige membrananker-forbindelser .
I tillegg kan det virksomme stoffet også være kovalent bundet til en i og for seg kjent adjuvans for immuniseringsformål, som f.eks. muramylpeptid og/eller et lipopolysakkarid.
Som virksomme stoffer foreslås eksempelvis: et antigen, som eksempelvis en lavmolekylær delsekvens av et protein eller proteid, eksempelvis et glykoprotein, et virusomhyllingspro-tein, et bakterie-celleveggprotein eller proteiner av protozooer (antigen determinanter, epitop), et intakt protein, et antibiotikum, bakteriemembranbestanddeler, som muramyldipeptid, lipopolysakkarid, et naturlig eller syntetisk hapten, et antibiotikum, hormoner, som f.eks. steroider, et nukleosid, et nukleotid, en nukleinsyre, et enzym, enzymsubstrat, en enzyminhibitor, blotin, avidin, polyetylenglykol, et peptidvirksomt stoff, som eksempelvis tuftsin, polylysin, en fluorescensmarkør (f.eks. FITC, RITC, dancyl, luminol eller cumarin), en bioluminiscensmarkør, et "spin"-merke, et alkanoid, et steroid, biogent amin, vitamin eller også et toksin som f.eks. digoksin, falloidin, amantin, tetrodoksin e.l., en kompleksdanner eller et farmakon.
Alt etter typen av det virksomme stoffet oppstår fullstendig nye anvendelsesområder for stoffene fremstilt ifølge oppfinnelsen.
Det kan også være nyttig når flere membrananker-virksomt stoffkonjugatforbindelser er tverrbundet med hverandre i lipid- og/eller virksomt stoffdelen.
Membrananker-forbindelsene og det virksomme stoffet kan også være bundet med hverandre over en tverrbinder, dette har til følge at det virksomme stoffet fjernet seg mer fra membranen hvortil det er festet med membranankeret. Som tverrbinder egner seg eksempelvis en dikarboksylsyre eller et dikarboksy-syrederivat, dioler, diaminer, polyetylenglykol, epoksyder, maleinsyrederivater o.l.
Ifølge oppfinnelsen fremstilles altså et entydig definert lavmolekylært konjugat som bl.a. egner seg til immunisering, som forbinder prinsippene bærer-antigen-adjuvans kovalent med hverandre. Bærer og adjuvans kan være både et mitogent virksomt lipopeptid, som f.eks. tripalmitoyl-S-glycerylcystein (Pam3Cys) og analoger derav, men også lipofile, konformasjonsstabiliserende alfahelikser samt kombinasjoner av slike, som Pam3Cys-antigen-heliks, alfa-heliks-antigen-hellks, eller også bare Pam3Cys-antlgen henholdsvis antigen-Pam3Cys (N- eller C-terminal tilkobling), samt antigen-heliks eller heliks-antigen (N- eller C-terminal), eller ved sidekjeder av Glu, Lys e.l. innebygget i heliksen). Dermed adskiller de nye forbindelsene seg på vesentlige punkter fra alle hittil anvendte høymolekylære konjugater av antigener med høymolekylære bærestoffer, eksempelvis proteiner som serumalbuminer, globuliner eller polylycin eller generelt høymolekylære, lineære eller tverrbundne polymerer.
Spesielt adskiller de nye forbindelsene seg imidlertid også fra alle hittil kjente adjuvanser, som eventuelt tilsettes og følgelig ikke muliggjør noen målrettet presentasjon av antigenet på celleoverflaten. De hittil kjente adjuvansene krever ofte flere immuniseringer og fører også til betennel-sesreaksjoner ved dyreforsøk. En spesiell fordel ved oppfinnelsen er den reproduserbare fremstillbarheten av pyrogenfrie, rene, kjemisk entydig definerte forbindelser, som - i motsetning til konvensjonelle forbindelser henholdsvis blandinger av forskjellige stoffer - også fører til forbedret reproduserbarhet for antistoffdannelsen. Dermed blir et spesielt anvendelsesområde for forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen området knyttet til antistoff-utvinning, genteknologi, fremstillingen av syntetiske vaksiner, diagnostikk og terapi innenfor veterinær- og humanmedisin, idet de nye konjugatene først og fremst har en spesifikk stimulerende virkning på immunresponsen, mens de hittil anvendte adjuvansene ofte har hatt en uspesifikk stimulerende virkning på immunresponsen. Overraskende kan man ved hjelp av forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen også omvandle svakt immunogene forbindelser til sterkt immunogene forbindelser. Dermed ligger en spesiell betydning av oppfinnelsen i muligheten for å spare inn dyreforsøk samt kostnader for fremstilling av antistoffene, idet de nye immunogenene også er høyaktive in vitro. På grunn av den ikke-betennelsesfremmende immuniseringsfremgangsmåten kan også et dyr anvendes flere ganger for forskjellige antistoff-utvinninger.
Endelig kan det med de nye immunogenene også fremstilles flerverdige vaksinasjonsstoffer, dvs. eksempelvis et membrananker til hvis sidekjede det er knyttet flere antigener eller haptener, slik at ved hjelp av en immunisering, flere forskjellige aktive antistoffer kan fremstilles.
En vannoppløselig, mitogen lipidanker-gruppe er eksempelvis PamsCys-Ser(Lys)n-0H, som spesielt egner seg til fremstilling av de nye immunogenene, men også til fremstilling av fluorescerende, radioaktive og biologisk aktive cellemarkø-rer. En spesielt ønsket egenskap for membrananker-virksomt stoffkonjugatene fremstilt ifølge oppfinnelsen er deres ampifili, dvs. en delvis vannoppløselighet, idet biologiske forsøk på dyr og undersøkelser med levende celler derved kan gjennomføres vesentlig enklere. Også de kunstige lipid-dobbeltsjikt membranene, liposomene og vesiklene som er påkrevet for mange forsøk, er også bare fremstillbare og stabile i vandig medium.
Et egnet ampifilt, biologisk aktivt membrananker er f.eks. Pam3Cys-Ser(Lys)n-0H. Den til Pan^Cys koblede serinresten fremmer immunogene egenskaper, mens de polare, protonerte epsilon-aminogruppene av lysinresten utgjør den hydrofile delen av molekylet. På grunn av de mange ladningene oppviser denne forbindelsestypen andre interessante egenskaper. Den kan ved induksjon av cellevekselvirkning anvendes som fusjonsaktivator ved fremstillingen av hybridom-celler, spesielt ved lengre lycinkjeder, ved kobling til polyetylenglykol eller ved kovalent inkorporering av biotin/avidin-systemet.
Videre kan forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen med fordel anvendes til fremstilling av nye liposomer ved tverrbinding, som enten kan finne sted i fettsyre- eller i peptidelen.
Membranankeret (Pam3Cys og analoger, samt heliksene) egner seg videre til forsterkning av celle/cellelvekselvirkningen, når de eksempelvis kombineres kovalent med biotin/avidinsys-temet. Ytterligere fordelaktige egenskaper ved forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen er at de kan lette cellesammensmeltningen, dette er eksempelvis påkrevet for genteknologiske arbeider. Herved kan de nye Immunogenene også anvendes ved ELISA, RIA og Bioluminescensanalyser.
Forskjellige Pam3Cys-derivater er lipid- og vannoppløselige, og er sterkt mitogent virksomme in vivo og in vitro. De egner seg også meget godt til merking av celler med FITC og andre markører som RITC, dansyl og cumarln. Spesielt kan de også anvendes ved fluorescensmikroskopi og "Fluorescence Activated Cell Sorting" (FACS).
Et prisgunstig membrananker med analog virkning som Pam3Cys er S-(1,2-dioktadecyloksykarbonylmetyl)-cystein, hvis fremstilling beskrives nøyaktig i den eksperimentelle delen.
Spesifikke koblinger av det mitogent virksomme lipidankeret til antigener kan også foregå over tverrbindere, som eksempelvis med dikarboksylsyre monohydrazinderivatene av den generelle formelen: eller også
hvori A, B = aminosyre eller (CH2)n og X, Y er i og for seg kjente beskyttelsesgrupper.
Det kan imidlertid også anvendes enhver annen tverrbinder eller avstandsgiver til fremstilling av de nye stoffene, hvorved alltid prinsippet (lavmolekylær bærer og adjuvans)-(antigen) utgjør en spesielt foretrukket utførelse av oppfinnelsen, så lenge de inneholder lipopeptidstrukturer med lipidmembrananker-funksjon og/eller konformasjonsstabiliserte helikser.
Spesielle fordelaktige virkninger kan finnes ved anvendelse av forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen innenfor affinitetskromatografi, for dette formålet egner seg spesielt lipopeptid-antigen-(hapten)-konjugater. Disse egner seg fremragende til belegging av vanlig reversert fase-HPLC-søyler (eller også preparative RP-søyler), hvorved eksempelvis en i organisk vandige systemer påført tripalmitoylforbin-delse, er festet i det apolare alkylsjiktet. Antigenet presenteres f.eks. på celleoverflatene for den mobile vandige fasen og innbyr dermed antistoffene til adsorbsjon. Dermed kan antistoffer, som reagerer spesifikt med det aktuelle antigenet, anrikes henholdsvis isoleres direkte på en slik affinitetssøyle. Elueringen av antistoffene foregår som ved andre affinitetssøyler, f.eks. ved innstilling av pH-verdien.
I det følgende skal oppfinnelsen beskrives nærmere ved hjelp av eksempler, hvorved først de anvendte forkortelsene skal gjennomgås:
Aib = 2-metyl-alanin
TFE = trifluoreddiksyre
EGF R = reseptor for epidermisk vekstfaktor
Pam = palmitoylrest
DCC = dicykloheksylkarbodiimid
DMF = dimetylformamid
FITC = fluoresceinisotiocyanat
Fmoc = fluorenylmetoksykarbonyl
But = tert.butylrest
PS-DVB = styren - divinylbenzen-kopolymerer med 4-(hydroksymetyl)fenoksymetyl-ankergrupper
HOBt = 1-hydroksybenzotriazol
RITC = rodaminisotiocyanat
Hu IFN-(Ly) 11-20 = antigendeterminanter av humant
interferon
DCH = N,N'-dicykloheksylurinstoff
EE = etylacetat
De vedlagte figurene, som skal tjene til å belyse oppfinnelsen, viser: Fig. 1 - fremstillingsskjema for Pam-Cys(C^g)2-Ser-Ser-Asn-Ala-OH
Fig. 2 - tabellene for <13>C-NMR-spektrene
Fig. 3 - <13>C-NMR-spekteret for Pam3Cys-Ser-(Lys)4-0H x 3
TFA i CDC13
Fig. 4 - <13->NMR-spekteret for Pam-CysCPanO-OBu<t> i CDCI3 Fig. 5 - <13>C-NMR-spekteret for Pam-Cys(Pam)-OH i
CDCI3/CD3OD 1:1
Fig. 6 - <13>C-NMR-spekteret (J-modulert spin-ekko-spektrum) for Pam(alfa-Pam)Cys-OBu<t>
Fig. 7 - <13>C-NMR (100 MHz) for alfa-heliks
Fig. 8 - CD-spekteret for a-heliks av HuIFN-(alfa-Ly)-ll-20 Fig. 9 - antistoffutvinningen med Pam3Cys-Ser-EGF-R (516
til 529)
Fig. 10 - et in vivo immuniseringsforsøk
Fig. 11 - en sammenligning av in vivo/in vitro immunise-
ringsforsøk, og Fig. 12 - den mitogene aktiveringen av Balb/c-mus-miltceller med Pam3Cys-Ser-(Lys^FITC.
I det følgende skal det først beskrives noen fremstil-lingsfremgangsmåter for stoffer som omtalt ovenfor, samt deres forstadier.
I. Fremstilling av Pam3Cys-EGF-R(516-529)
Etter vanlig trinnvis oppbygning (Merrifield-syntese under N alfa-Fmoc/(Bu<t>)-beskyttelse, DCC/EOBt og symmetriske anhydrider av EGF-R segmentet (516-529) ble det til sist aminosyren Fmoc-Ser(Bu<t>)-0H påbygget. Etter avspaltning av Fmoc-gruppen med piperidin/DMF (1:1, 15 min.), ble det harpiksbundne pentadekapeptidet av EGF-RE:Ser(Bu<*>)-Asn-Leu-Leu-Glu- ( OBu* ) -Gly-Glu( OBu* )-Pro-Arg(H+)-Glu(OBu*)-Phe-Val-Glu(0But )-Asn-Ser-(Bu* )-0-p-alkoksy-benzyl-kopoly(dlvinyl-benzen-styren) (1 g, belegging 0,5 mmol/g) koblet sammen med Pam-Cys (CH2-CH(0Pam(CE2(0Pam) (2 mmol, i DMF/CE2C12 (1:1)) og DCC/EOBt (2 mmol, foraktivert ved 0"C, 20 minutter) (16 timer), deretter ble det utført en etterkobling (4 timer). Lipoheksadekapeptidet ble avspaltet med trifluoreddiksyre (5 ml) under tilsats av tioanisol (0,25 ml) i løpet av 2 timer.
Utbytte:
960 mg = (76*) Pam.Cys (CH2-CH(0PAM)CH2(0Pam))Ser-Asn-Leu-Leu-Glu-Gly-Glu-Pro-Arg-Glu-Phe-Val-Glu-Asn-Ser-OH X CF3C00H (korrekt aminosyreanalyse, ingen racemisering).
II. Fremstilling av S-(12,2-dioktadecyloksykarbonyletyl-N-palmitoyl-L(eller D)cystein-tert-butylester
Maleinsyre-di-oktadecylester er tilgjengelig ifølge den generelle fremgangsmåten for forestring av maleinsyre (H. Klostergaard, J. Org. Chem. 23 (1958), 108).
13 C -NMR- spek t rum:
Se fig. 2.
1,2 mmol (500 mg) N-palmitoyl-L-cystein-tert.-butylester og 1,2 mmol (745 mg) maleinsyre-di-oktadecylester oppløses i 20 ml THF. Etter tilsats av 20 mmol (3 ml) N,N,N',N'-tetrametyl-etylendiamin omrøres det under nitrogen ved tilbakeløpskjøler i 12 timer. Etter tilsats av 100 ml metanol og 5 ml vann, frasuges det fargeløse bunnfallet, vaskes med vann og metanol og tørkes i vakuum over P2n5.
Utbytte: 1 g (83*).
Smeltepunkt: 51°C.
Tynnsj iktkromatografi:
Rf = 0,80 (elueringsmiddel; CHCl3/eddikester = 14,1).
13C-NMR: Se fig. 2.
Molekylvekt: C63H121N07S (1035,7).
III. Fremstilling av S-(1,2-dioktadecyloksykarbonyletyl)-N-palmitoyl-cystein
0,48 mmol (500 mg) av den under II omtalte t-butylesteren omrøres i 65,3 mmol (7,45 g, 5 ml) trifluoreddiksyre i 1 time ved romtemperatur i en lukket beholder. Det inndampes på rotasjonsfordamper i høyvakuum, resten opptas I 1 ml kloroform, utfelles med 50 ml petroleumseter ved -20°C og tørkes i vakuum over P2°5•
Utbytte: 420 mg (89*).
Smeltepunkt: 64°C.
Tynnsjiktkromatografi på silikagelplater:
Rf = 0,73; elueringsmiddel; CHCl3/MeOH/H20 65:25:4)
<13>C-NMR: Se tabell 1.
Molekylvekt: C5gH113N07S (980,6)
Elementæranalyse:
Det nye cysteinderivatet og dets t-butylester lar seg adskille til diastereoisomerene på kieselgel og ved RP-fasekromatografi. Begge diastereomerparene av L- og D-cysteinderivatet kan fremstilles.
IV. Fremstilling av S-(1,2-dioktadecyloksykarbonyletyl)-N-palmitoyl-Cys-SertBu*)-Ser(But J-Asn-Ala-OBu*
0,2 mmol (196 mg) S-(1,2-dioktadecyloksykarbonyletyl-N-palmitoyl-cystein oppløses i 5 ml diklormetan og foraktiveres med 0,2 mmol (27 mg) HOBt i 0,5 ml DMF samt 0,2 mmol (41 mg) DCC i 30 minutter ved 0°C under omrøring. Etter tilsats av 0,2 mmol (109 mg) H-Ser(But )-Ser (Bu* J-Asn-Ala-OBu* I 3 ml diklormetan omrøres det i 12 timer ved romtemperatur. Uten ytterligere opparbeidelse tilsettes 40 ml metanol til
reaksjonsblandingen. Etter 3 timer kan et fargeløst produkt frasuges. Det opptas I litt diklormetan og utfelles på nytt med metanol. Etter vasking med metanol tørkes i vakuum over <P>2°5-
Utbytte: 260 mg (86*).
Smeltepunkt: 194°C.
Tynnsj iktkromatografi:
Rf - 0,95; (elueringsmiddel: CHCl3/MeOH/H20 = 65:25:4)
Rf = 0,70; (elueringsmiddel: CHCl3/MeOH/iseddik = 90:10:1)
13C-NMR: Se fig. 2
Molekylvekt: Cq^ E^58N6°14S (1508,3)
Elementæranalyse:
V. Fremstilling av S-(l,2-dioktadecyloksykarbonyletyl)-N-palmitoyl-Cys-Ser-Ser-Asn-Ala
53 pmol (80 mg) beskyttet lipopeptid (IV) omrøres med 13 mmol (1,5 g; 1 ml) trifluoreddiksyre i 1 time ved romtemperatur i lukket beholder. Etter avdamping i høyvakuum opptas 2 ganger med 10 ml diklormetan og det avdampes på rotasjonsfordamper hver gang. Resten opptas i 3 ml kloroform og utfelles med 5 ml metanol ved 4°C i løpet av 12 timer. Etter frasuging vaskes med metanol og tørkes i eksikator på P2°5'
Utbytte: 64 mg (87*)
Smeltepunkt: 208°C (dekomponering)
Tynnsj iktkromatografi:
Rf = 0,63; (elueringsmiddel: CHCl3/MeOH/iseddik/H20 64:25:3:4)
Rf = 0,55; (elueringsmiddel: CHCl3/MeOH/H20 = 64:25:4)
Rf = 0,06; (elueringsmiddel: CHCl3/MeOH/iseddik = 90:10:1).
Aminosyreanalyse:
Cysteinsyre 0,6; asparaginsyre 0,93; serin 1,8; alanin 1,0.
Molekylvekt: C72<H>134<N>6014S (1340)
IV. Fremstilling av Pam3Cys-Ser-(Lys)4~0H Pam3Cys-Ser(Lys)4-0H ble oppbygget ifølge fast-fase fremgangsmåten (Merrifield) på en p-alkoksybenzylalkohol-PS-DVB(15)-kopolymer med N-Fmoc-aminosyrer og syrelabil sidekjedebeskyttelse (tBu for serin og Boe for lysin). De symmetriske anhydridene av Fmoc-aminosyrene ble anvendt. Koblingen til Pam3Cys-0H ble gjennomført ifølge DCC/HOBt-fremgangsmåten og ble gjentatt for å oppnå en mest mulig kvantitativ omsetning. For å avspalte lipopeptidet fra bærerharpiksen og å fjerne sidekjedebeskyttelsen, ble harpiksen behandlet 2 ganger i 1,5 timer med trifluoreddiksyre, som deretter ble fjernet på rotasjonsfordamper 1 høyvakuum. Produktet ble omkrystallisert fra aceton.
Elementæranalysen tyder på samme måte som <13>C-spekteret på at lipopeptidet foreligger som trifluoracetat. Under antagelsen at Pam3Cys-Ser-(Lys)4-0H foreligger som dobbeltion, forblir fremdeles 3 epsilon-aminogrupper til overs, disse kan protoneres av tre trifluoreddiksyremolekyler.
<13>C-NMR-spekteret for Pam3-Cys-Ser-(Lys)4-0H x 3 TFE, viser at forbindelsen foreligger som trifluoracetat. (Kvartett for CF3~gruppen ved 110-120 ppm, samt karbonylsignaler ved 161-162 ppm). Ved aggregering av den polare molekyldelen utbres linjene for Lys- og Ser-C-atomene sterkt. Karbonylsignalet ved 206,9 stammer fra fremdeles tilstedeværende aceton som ble anvendt til omkrystallisasjonen.
Molekylvekt: 1510,4
Elementæranalyse:
Aminosyreanalyse: Aminosyreanalysen ga et forhold mellom serin og lysin på 1:4,2. De karakteristiske dekomponeringsproduktene av S-glyseryl-cystein som oppstår ved hydrolysen (6N HC1, 110°C, 18 timer) var tilstede (sammenligning med kjente standarder). Peptidandelen ble beregnet til 83*. 3 TFE-molekyler pr. lipopeptid tilsvarer en peptidandel på 80,2*, i god over-ensstemmelse med analysen.
VII. Fremstilling av Pam3Cys-Ser-(Lys>4-0H x 3 TFE
VII. l. Kobling av Fmoc- Lvs( Boc )- 0H til baererharpiksen Fmoc-Lys(Boc)-0H (4,5 g, 9,6 mmol) blandes i 15-20 ml DMF/CH2C12 1:1 (volum/volum) ved 0' C med DCC (0,99 g, 4,8 mmol). Etter 30 minutters frafUtreres det utfelte urinstoffet direkte i en ristetrakt hvori det befinner seg p-benzyloksy-benzylalkoholharpiks (2,5 g, 1,6 mmol OH-grupper). Etter tilsats av pyridin (0,39 ml, 4,8 mmol) ristes det i 18 timer ved romtemperatur. Oppløsningsmidlet frasuges og harpiksen vaskes 3 ganger, hver gang med 20 ml DMF/CH2C12 og DMF. Harpiksen blandes i 20 ml CH2C12 først med pyridin (28,8 mmol, 6 ekvivalenter) og deretter med benzoylklorid (28,8 mmol, 6 ekvivalenter). Det ristes I 1 time ved romtemperatur. Oppløsningsmidlet frasuges og harpiksen vaskes 3 ganger, hver gang med 20 ml CH2C12, DMF, isopropanol og PE-30/50.
VII. 2. Symmetrisk Fmoc- aminosyreanhydrld
Fmoc-Lys(Boc)-0H (4,5 g, 9,6 mmol, 3 ekvivalenter) oppløses i 15 ml CH2C12/DMF og blandes ved CC med DCC (4,8 mmol, 1,5 ekvivalenter). Etter 30 minutter ved 0°C frafUtreres urinstoffet direkte i reaktoren og det bearbeides videre som angitt i den etterfølgende tabellen.
Følgende fremgangsmåte gjelder for 1/5 av den innledningsvis anvendte harpiksmengden (0,5 g, 0,3 mmol OH-grupper).
Fmoc-O-butyl-serin (0,74 g, 1,92 mmol) oppløses i 4 ml CH2C12/D]VIF og blandes ved 0°C med DCC (0,96 mmol).
Etter 30 minutters frafiltreres urinstoffet direkte i reaktoren ved 0°C, og opparbeides på vanlig måte.
VII.3. Kobling til Pam3Cys-0H
Pam3Cys-0H (0,58 g, 0,64 mmol) oppløses i 5 ml CH2C12/DMF 1:1 (volum/volum) og blandes ved 0"C med HOBt (0,93 mg, 0,64 mmol) og DCC (0,64 mmol). Etter 30 minutter ved 0°C fylles blandingen direkte i reaktoren. Etter 16 timers risting etterkobles i 4 timer med molforholdet angitt ovenfor. Oppløsningsmidlet frasuges og harpiksen vaskes 3 ganger, hver gang med 20 ml DMF/CH2C12 og DMF.
VI1. 4. Avspaltnlng av heksapeptldet fra polymeren
Den Boc-beskyttede peptid-polymerharpiks-forbindelsen (ca. 1 g) fra VII.3 vaskes godt med CH2C12 og ristes i 2 x 1,5 timer med en blanding av 5 ml TFE og 0,5 ml anisol. Filtratet Inndampes i vakuum og resten opptas i 5 ml CHC13. Pam3Cys-Ser-(Lys)4-0H x 3 TFE utkrystalliseres etter tilsats av 50 ml aceton ved -20"C, det frasentrifugeres og tørkes i høyvakuum.
Utbytte: 0,41 g (85*)
Smeltepunkt: 205"C (dekomponering)
Tynnsjiktkromatografi på silikagelplater:
Rf = 0,42; (elueringsmiddel: n-BuOH/pyridin/H20/iseddik = 4:1:1:2).
Rf = 0,82; (elueringsmiddel: n-Bu0H/Me0H/H20/lseddik = 10:4:10:6).
Aminosyreanalyse:
Ser 0,95 (1); Lys 4 (4).
Molekylvekt: CgyHjLs<gN>jgOigSFg (1852,6).
Elementæranalyse: VIII. Fremstilling av Pam3Cys-Ser-(Lys)4-OH-FITC x 2 TFE Fluoresceinisotiocyanat (3,9 mg, 10 jjmol) oppløses i 2 ml kloroform og tilsettes til en oppløsning av Pam3Cys-Ser-(Lys)4-0H x 3 TFE (18,5 mg, 10 >imol) i 2 ml kloroform. Etter tilsats av 4-metylmorfolin (10 pl, 10 pmol) omrøres i 1 time og oppløsningsmidlet fjernes deretter i rotasjonsfordamper. Resten oppløses i 10 ml kloroform/aceton 1:1. Det gule produktet utfelles voluminøst ved -20°C og frasentrifugeres og tørkes i høyvakuum.
Utbytte:
16 mg etter rensing på "Sephadex LH20".
Produktet foreligger som trifluoracetat og fluorescerer meget sterkt ved aktivering med UV-lys av bølgelengde 366 nm. Sammenlignet med utgangsproduktet er en epsilon-aminogruppe kovalent bundet til FITC. Herav resulterer summeformelen Pam3Cys-Ser-(Lys)4-0H-FITC x 2 TFE, forutsatt at den dobbeltioniske strukturen bevares.
Molekylvekt: C106<H>16g<N>11<0>22S2F6 (2127,68)
Kromatografi på silikagelplater:
Rf = 0,72 (elueringsmiddel: n-butanol/pyridin/vann/iseddik = 4:1:1:2)
Rf = 0,73 (elueringsmiddel: n-butanol/maursyre/vann = 7:4:2).
Aminosyreanalyse:
Ser 1,11 (1,00), Lys 4,00 (4,00)
Hydrolyseproduktene av glycerylcystein er tilstede.
IX. Fremstilling av Pam3Cys-Ser-(Lys )4-OH x 3 HC1 Pani3Cys-Ser-(Lys )4-0H x 3 TFE (185,2 mg, 0,1 mmol) oppløses akkurat i litt kloroform, og tilnærmet det samme volumet av eterisk HCl-oppløsning tilsettes. Det ristes godt, hvorved en del utfelles, den største delen forblir imidlertid I oppløsning. Det inndampes til tørrhet på rotasjonsfordamper og tilsettes på nytt eter/HCl. Etter flere gangers gjentag-else av denne fremgangsmåten løses resten i litt kloroform og aceton tilsettes til oppløsningen inntil uklarhet. Produktet utkrystalliseres som fargeløst pulver ved -20"C og frasuges og tørkes i høyvakuum.
Utbytte: 153 mg.
Molekylvekt: C18H15g<N>1o<O>i3SCl3 (1619,63)
Elementæranalyse:
I produktet finnes fremdeles overskytende HC1.
Feltdesorbsjons-massespektrometri:
M<+->toppen kommer til syne ved m/e 1510, samt M<+>+l og M<+>+2. Karakteristiske er de protonerte fragmentene Pam3Cys-NH (908,5) ved m/e 909, 910, 911 og 912.
X. N,S-dipalmitoyl-cystein-tert.-butylester
Palmitinsyre (2,5 g, 9,6 mmol), dimetylaminopyridin (130 ml, 0,9 mmol) og dicykloheksylkarbodiimid (9,6 mmol) oppløses i 100 ml kloroform. Oppløsningen omrøres i 1/2 time og N-palmitoyl-cystein-tert.butylester (2 g, 4,8 mmol), som på forhånd er oppløst i 50 ml kloroform, tilsettes dråpevis til den andre oppløsningen. Etter 1,5 timer fjernes oppløsnings-midlet på rotasjonsfordamper, og resten opptas i 100 ml kloroform/metanol 1:5. Produktet utfelles voluminøst ved-20°C. Det frasuges og tørkes i høyvakuum.
Utbytte: 2,3 g (73*).
Molekylvekt (massespektrometri ): C3gH75N04S (655,20)
Elementæranalyse:
Tynnsjiktkromatografi på silikagelplater:
Rf = 0,67 (elueringsmiddel: kloroform/eddikester 95:5).
Rf = 0,73 (elueringsmiddel: kloroform/cykloheksan/MeOH 10:7:1).
13C-NMR: Se fig. 4.
XI. N-(a-tetradecyl-p<->hydroksy-oktadekanoyl)-cystein-tert.butylester
N-(a-palmitoyl-palmitoyl)-cystein-tert.butylester (1,5 g, 2,3 mmol) oppløses i 10 ml i-propanol og 1,5 ganger den molare mengden natriumborhydrid tilsettes. Det omrøres i 2 timer, og etter avsluttet reaksjon tilsettes nitrogenmettet N saltsyre inntil ingen hydrogenutvikling lenger foregår. Derved utfelles produktet voluminøst. Det frasuges, vaskes flere ganger med nitrogenmettet vann og tørkes i høyvakuum.
Utbytte: 1,4 g (93*).
Molekylvekt: (bestemt fra massespektrum): C39H77NO4S = 656,11
Tynnsjiktkromatografi på silikagelplater:
Rf = 0,84 (elueringsmiddel: kloroform/eddikester 95:5).
Elementæranalyse:
XII. N-(a-tetradecyl-p<->nydroksy-oktadekanoyl)-cystein
N-(cx-tet radecyl-3-hydroksy-oktadekanoyl)-cystein-tert.butylester (1 g, 1,5 mmol) behandles i 1/2 time med vannfri trifluoreddiksyre og denne fjernes deretter i høyvakuum på rotasjonsfordamper. Resten løses 1 tert.butanol og lyofiliseres.
Utbytte: 0,7 g (78*).
Molekylvekt: (bestemt fra massespektrum) C35H69NO4S (600,0)
Elementæranalyse:
Tynnsjiktkromatografi på silikagelplater:
Rf = 0,43 (elueringsmiddel: kloroform/metanol/vann 65:25:4)
XIII. N,S-dipalmitoyl-cystein
N,S-dipalmitoyl-cystein-tert.butylester (1 g, 1,5 mmol) behandles i 1 time med vannfri trifluoreddiksyre. Deretter fjernes denne på rotasjonsfordamper i høyvakuum, resten opptas i tert.butanol og lyofiliseres.
Utbytte: 0,8 g (89*).
Molekylvekt: (bestemt fra massespektrum) C35H57NO4S (598,00)
Elementæranalyse:
Tynnsj iktkromatografi:
Rf = 0,30 (elueringsmiddel: kloroform/metanol/iseddik 90:10:4 )
Rf = 0,75 (elueringsmiddel: kloroform/metanol/vann 65:24:4) Rf = 0,81 (elueringsmiddel: kloroform/metanol/ammoniakk (25*)/vann 65:25:3:4)
13C-NMR: Se fig. 5.
XIV. N-(a-palmitoyl-palmitoyl )-N' -palmitoyl-cystein-di-tert.butylester
Palmitoylklorid (8 g, 30 mmol) oppløses 1 40 ml nitrogenmettet dimetylformamld og trietylamin (60 ml, 60 mmol) tilsettes. Blandingen kokes i 3 timer i nitrogenstrøm under tilbakestrømning, hvorved det trietylammoniumkloridet som oppstår ved dannelsen av tetradecylketendimeren utfelles som fargeløst salt. Tilbakeløpskjøleren erstattes deretter av en dråpetrakt og en oppløsning av cystein-di-tert.butylester (4,9 g, 15 mmol) i 20 ml dimetylformamld tilsettes langsomt og dråpevis. Etter 6 timer fjernes oppløsningsmidlet på rotasjonsfordamper, resten opptas i kloroform og vaskes 2 ganger med 100 ml 5* kaliumhydrogensulfatoppløsning og 1 gang med 1200 ml vann. Den organiske fasen tørkes over vannfritt natriumsulfat og oppløsningsmidlet fjernes på nytt. Ved -20°C utkrystalliseres en blanding av N-(a-palmitoyl-palmitoyl)-N'-palmitoyl-cystein-tert.butylester og N,N'-dipalmitoyl-cystein-di-tert.butylester, som adskilles ved gelfiltrering på "Sephadex LH-20" i kloroform/metanol 1:1.
Utbytte: 6,4 g (40*).
Molekylvekt: (massespektrum)
Tynnsjiktkromatografi på silikagelplater:
Rf = 0,69 (elueringsmiddel: kloroform/eddikester (91:5)).
XV. N-(a-palmitoyl-palmitoyl)-cystein-tert.butylester N-(a-palmitoyl-palmitoyl)-N'-palmitoyl-cystein-di-tert.butyl-eter (3,2 g, 3 mmol) oppløses i litt metylenklorid og 100 ml 9,1 N metanolisk saltsyre tilsettes. Oppløsningen overføres i en elektrolysecelle med en sølvelektrode som anode og kvikksølv som katode, og reduseres med en konstant spenning på -1,1V. Strømstyrken avtar ved avslutningen av den elektrokjemiske reduksjonen fra ca. 200 mA til tilnærmet 0. Oppløsningsmidlet fjernes deretter på rotasjonsfordamper og produktblandingen av N-(a-palmitoyl-palmitoyl)-cystein-tert.butylester og N-palmitoyl-cystein-tert.butylester utfelles fra metanol ved -20°C. Forbindelsene adskilles ved gelfiltrering på "Sephadex LH-20" i kloroform/metanol 1:1.
Utbytte: 1,5 g (76*).
Molekylvekt: (bestemt ved massespektrum) €39117511048 (654 ,09).
Tynnsjiktkromatografi på silikagelplater:
Rf = 0,75 (elueringsmiddel: kloroform/eddikester 95:5).
Elementæranalyse:
XVI. Fremstilling av et antigenkonjugat med et konforma-sjonsstabilisert a-helikalsk membrananker
Syntese av HuIFN-a(Ly)(ll-20)-(L-Ala-Aib-Ala-Aib-Ala)2-OMe, et 20-peptid som N-terminalt bærer en antigen determinant fra menneskelig interferon (ot(LY)).
Syntesen av det lipofile membranankeret med funksjonell amino-hodegruppe H-(Ala-Aib-Ala-Aib-Ala)2-0Me kan overføres på andre konjugater. Alfa-heliksen kan også være forlenget en eller to ganger med enheten Ala-Aib-Ala-Aib-Ala. Det utgås herved fortrinnsvis fra pentapeptid Boc-Ala-Aib-L-Ala-Aib-L-Ala-OMe. (R. Oekonomopulos, G. Jung, Liebigs Ann. Chem. 1979, 1151; H. Schmitt, W. Winter, R. Bosch, G. Jung, Liebigs Ann. Chem. 1982, 1304).
XVII. Fremstilling av Boc-Asn-Arg(N02)-Arg(N02)-0H
XVII.l. Boc-Arg(N02)-0Me
Boc-Arg(N02)-0Me (15,97 g, 50 mmol) og EOBt (6,67 g, 50 mmol) i DMF (100 ml) ble innrørt ved -10° C i HC1 x H.Arg(N02 )-0Me (13,49 g, 50 mmol) og NMM (5,5 ml, 50 mmol) i CH2C12 (12 ml) i 30 minutter ved -10°C, 1 time ved 0°C og 3 timer ved romtemperatur. Det utfelte DCH ble frafUtrert og oppløs-ningsmidlet avdampet i høyvakuum. Den oljeformige resten ble oppløst I iseddik under tilsats av noe n-butanol. Etter vasking med 5* KHSO4-, 5* KECO3- og mettet NaCl-oppløsning ble den organiske fasen tørket over Na2S04, blandet med petroleumseter (30-50) og utfelt under avkjøling.
Utbytte: 20,30 g (76*).
Smeltepunkt: 130°C (dekomponering).
Tynnsj iktkromatografi:
Rf (I) = 0,69
Rf (II) = 0,87
Rf (III) = 0,81
Rf (IV) = 0,32
Rf (V) = 0,42.
Molekylvekt: C18H54<N>10°9 (534,5)
Elementæranalyse:
XVII.2. EC1 x H-Arg(N02)-Arg(N02)-0Me
Boc-Arg-(N02)-Arg(N02)-0Me (20,00 g, 37,42 mmol) ble blandet med 1,2 N HCl/eddiksyre (110 ml) og etter 30 minutter heilt i omrørt eter (600 ml). Derved ble det utfelt tynnsjikt-kromatograf isk ren HC1 x H-Arg(N02)-Arg(N02)-0Me.
Utbytte: 17,3 g (98*).
Tynnsjiktkromatografi på silikagelplater:
Rf (I) = 0,37
Rf (II) = 0,29
Rf (III) = 0,44
Rf (IV) = 0,07
Rf (V) = 0,10.
XVII.3. Boc-Asn-Arg(N02)-Arg(N02)-OMe
Boc-Asn-OE (8,39 g, 36,10 mmol) og EOBt (4,89 g, 36,10 mmol) i DMF (75 ml) ble ved -10° C tilsatt til EC1 x E-Arg(N02 )-Arg(N02)-OMe (1,700 g, 36,10 mmol) og NMM (3,98 mmol) i DMF (75 ml). Etter tilsats av DCC (7,53 g, 36,50 mmol) i CE2C12 (10 ml) ble det omrørt 30 minutter ved -10°C, 1 time ved CC og 3 timer ved romtemperatur. Etter avbrudd av reaksjonen med noen dråper iseddik, fordampes oppløsningsmidlet I vakuum og resten opptas i litt metanol. Denne oppløsningen tilsettes dråpevis under omrøring til tørr eter. Resten frafUtreres og opptas i metanol. Rent produkt utfelles under avkjøling.
Utbytte: 18,25 g (78*)
Smeltepunkt: 170°C
Tynnsj iktkromatografi:
Rf (I) = 0,59
Rf (II) = 0,67
Rf (III) = 0,66
Rf (IV) = 0,45
Rf (V) = 0,65
Aminosyreanalyse:
Asx 1,00 (1), Arg 1,85 (2).
Molekylvektbestemmelse: C22E4o<N>i2On (648,6)
Elementæranalyse:
XVII.4. Boc-Asn-Arg(N02)-Arg(N02)-0E
Boc-Asn-Arg(N02)-Arg(N02)-0Me (18,00 g, 27,75 mmol) ble forsåpet i metanol (180 ml) med IN NaOE (80 ml). Etter 2 timer ble den nøytralisert med fortynnet EC1 og metanolen ble avdampet i vakuum. Ved pH 3 ble det ekstrahert grundig med eddikester. Den organiske fasen ble vasket med litt mettet NaCl-oppløsning, tørket over Na2S04 og utkrystallisert fra en metanolisk oppløsning ved -20"C.
Utbytte: 15,84 g (90*)
Smeltepunkt: 228"C (dekomponering)
Tynnsj iktkromatografi:
Rf (I) = 0,49
Rf (II) = 0,21
Rf (III) - 0,26
Rf (IV) = 0,05
Rf (V) = 0,21
XVIII. Boc-Ala-Leu-Ile-Leu-Leu-Ala-Gln-(Ala-Aib-Ala-Aib-Ala^OMe.
XVIII. 1. Boc- Ala- Aib- Ala- Aib- Ala- OH
Boc-Ala-Aib-Ala-Aib-Ala-OMe (10,03 g, 20 mmol) ble forsåpet i MeOH (150 ml) med IN NaOH (40 ml, 40 mmol). Etter 2,5 timer ble det nøytralisert med IN HC1, inndampet i vakuum og fordelt mellom EE/5* KHC03 (1:1; 1000 ml). Den vandige fasen ble surgjort med 5* KHSO4 til pH 4 og ekstrahert 5 ganger med EE/l-butanol (5:1). Den organiske fasen ble tørket over Na2SC"4, blandet med PE (30-50) og pentapeptidsyren ble utfelt under avkjøling.
Utbytte: 6,54 g (65*)
Smeltepunkt: 195<0>C (dekomponering)
Tynnsj iktkromatografi:
Rf (I) = 0,72
Rf (II) = 0,80
Rf (III) = 0,87
Rf (IV) = 0,95
Rf (V) = 0,80
Aminosyreanalyse:
Ala 3,08 (3), Aib 1,98 (2).
Molekylvekt: 022<2>39^<0>3 (501,6)
Elementæranalyse:
XVIII.2. Boc-(Ala-Aib-Ala-Aib-Ala)2-0Me
Boc-Ala-Alb-Ala-Aib-Ala-OH (1,75 g, 3,48 mmol) og HOBt (470 mg, 3,48 mmol) i DMF (10 ml) ble ved -10°C tilsatt til HC1 x H-Ala-Aib-ala-Aib-Ala-OMe (1,57 g, 3,48 mmol) og NMM (384 pl, 3,48 mmol) i DMF (8 ml). Etter tilsats av DCC (825 mg, 4,00 mmol) i CH2CI2 (3 ml) ved -ICC, ble det langsomt under selvstendig oppvarming omrørt i 15 timer. Etter at reaksjonen var stoppet med noen dråper iseddik, ble det utfelte DCH frasentrifugert, resten ble vasket 2 ganger med kald DMF og oppløsningsmidlet ble avdampet i vakuum. Resten ble opptatt i 10 ml CHCl3/MeOH 1:1 og kromatografert på "Sephadex LH 20" i CHCl3/MeOH 1:1.
Utbytte: 2,246 g (72*)
Smeltepunkt: 160°C
Tynnsjiktkromatografi:
Rf (I) = 0,61
Rf (II) = 0,76
Rf (III ) = 0,83
Rf (IV) = 0,95
Rf (V) = 0,81
Molekylvektbestemmelse: C40H70N10<O>13 (899,1)
Elementæranalyse:
XVIII .3. HC1 x H-(Ala-AIb-Ala-Ail)-Ala)2-0Me
Boc-Ala-Aib-ala-Aib-Ala2-0Me (2,046 g, 2,276 mmol) ble blandet med 1,2 N ECl/AcOH (10 ml). Etter 30 minutters omrøring ble hydroklorldet utfelt med eter, frafUtrert og i oljepumpevakuum tørket over KOH.
Utbytte: 1,805 g (95*)
Tynnsj iktkromatografi:
Rf (I) = 0,50
Rf (II) = 0,38
Rf (III) = 0,71
Rf (IV) = 0,48
Rf (V) = 0,53
XVIII.4. Boc-Gln-(Ala-Aib-Ala-Aib-Ala)2-OMe
Boc-Gln-OH (997 mg, 4,05 mmol) og HOBt (547 mg, 4,05 mmol) i DMF (10 ml) ble ved -10° C tilsatt til HC1 x H-(Ala-Aib-Ala-Aib-Ala)2-OMe (2,250 g, 2,70 mmol) og NMM (298 pl, 2,70 mmol) i DMF (13 ml). Etter tilsats av DCC (846 mg, 4,10 mmol) i CH2C12 (2 ml) ved -10°C ble det under langsom, selvstendig oppvarming omrørt i 15 timer. Etter avbrudd av reaksjonen med noen dråper iseddik, ble det utfelte DCH frasentrifugert, resten ble vasket 2 ganger med litt kald DMF og oppløsnings-midlet ble fjernet i oljepumpevakuum. Resten ble opptatt i 10 ml CHCl3/MeOH 1:1 og kromatografert på "Sephadex LH 20" i CHCl3/MeOE (1:1).
Utbytte: 2,60 (94*)
Smeltepunkt: 223°C (dekomponering)
Tynnsj iktkromatografi:
Rf (I) = 0,66
Rf (II) = 0,73
Rf (III) = 0,79
Rf (IV) - 0,94
Rf (V) = 0,80.
Molekylvektbestemmelse: C45H7g<N>i2°i5 (1027,2)
Elementæranalyse:
XVIII.5. HC1 x H-Gln-(Ala-Aib-Ala-Aib-Ala)2-0Me
Boc-Gln-(Ala-Aib-Ala-Aib-Ala)2-OMe (2,60 g," 2,701 mmol) ble tørket med 1,2 N HCl/AcOH (15 ml). Etter 40 minutter ble hydrokloridet utfelt med eter under omrøring, frafUtrert og tørket i oljepumpevakuum over K0H.
Utbytte: 2,209 g (85*)
Tynnsj iktkromatograf i:
Rf (I) = 0,48
Rf (II) = 0,25
Rf (III) = 0,54
Rf (IV) = 0,24
Rf (V) = 0,35
XVIII.6. Boc-Ala-Leu-Ile-Leu-Ala-Gln-(Ala-Aib-Ala-Aib-Ala)2-OMe
Boc-Ala-Leu-Ile-Leu-Leu-Ala-OH (760 mg, 1,07 mmol) og HOBt (145 mg, 1,07 mmol) i DMF (12 ml) ble ved romtemperatur tilsatt til HC1 x H-Gln-(Ala-Aib-Ala-Aib-Ala)2-OMe (818 mg, 0,85 mmol) og NMM (94 pl, 0,85 mmol) i DMF (10 ml). Etter tilsats av DCC (227 mg, 1,10 mmol) i CH2C12 (1,5 ml) ble det omrørt i 64 timer. Etter avbrudd av reaksjonen med noen dråper iseddlk, ble det utfelte DCH frasentrifugert, resten ble vasket 2 ganger med litt kald DMF og oppløsningsmidlet ble fjernet i oljepumpevakuum. Resten ble opptatt i 8 ml CHCl3/MeOH (1:1) og kromatografert på "Sephadex LH 20" CHCl3/MeOH (1:1).
Utbytte: 774 mg (57*)
Smeltepunkt: 260°C (dekomponering)
Tynnsj iktkromatografi:
Rf (I) = 0,80
Rf (II) = 0,86
Rf (III) = 0,91
Rf (IV) = 0,77
Rf (V) = 0,78
Aminosyreanalyse:
Glx 1,00 (1), Ile 0,89 (1), Leu 3,10 (3), Aib 4,08 (4), Ala 7,95 (8).
Molekylvektbestemmelse: C75Hi32<N>i8°21 (1622,0)
Elementæranalyse:
XIX. Fremstilling av Boc-Asn-Arg(N02 )-Arg(N02 )-Ala-Leu-Ile-Leu-Ala-Gln-(Ala-Aib-Ala-Aib-Ala)2-0Me
XIX.l. HC1 x H-Ala-Leu-Ile-Leu-Leu-Ala-Gln-(Ala-Aib-Ala-Aib-Ala)2-0Me
Boc-Ala-Leu-Ile-Leu-Leu-Ala-Gln - (Ala-Aib-Ala-Aib-Ala)2-0Me (754 mg, 0,465 mmol) ble blandet med 1,2 N HCl/AcOE (10 ml). Etter 50 minutter ble det inndampet noe i oljepumpevakuum, og etter tilsats av vann (10 ml) ble det lyofilisert.
Utbytte: 690 mg (95*)
Tynnsj iktkromatografi:
Rf (I) = 0,71
Rf (II) = 0,52
Rf (III) = 0,78
Rf (IV) = 0,56
Rf (V) = 0,54
XIX.2. Boc-Asn-Arg(N02)-Arg(N02)-Ala-Leu-Ile-Leu-Leu-Ala-Gln-(Ala-Aib-Ala-Aib-Ala)2-0Me
Boc-Asn-Arg(N02)-Arg(N02)-OH (634 mg, 0,995 mmol) og HOBt (135 mg, 1,13 mmol) i DMF (5 ml) ble ved -5°c tilsatt til HC1 x A-Ala-Leu-Ile-Leu-Leu-Ala-Gln-(Ala-Aib-Ala-Aib-Ala)2-0Me (20 mg, 0,398 mmol) og NMM (44 pl, 400 pmol) i DMF (7 ml). Etter tilsats av DCC (217 mg, 1,05 mmol) 1 CH2C12 (1,5 ml) ved -5°C, ble det under selvstendig oppvarming omrørt i 48 timer. Etter avbrudd av reaksjonen med 3 dråper iseddik, ble det utfelte DCH frasentrifugert. Opparbeidelsen og rensingen ved kromatografi foregår som beskrevet tidligere.
Utbytte: 630 mg (74*)
Smeltepunkt: 195°C (dekomponering)
Tynnsj iktkromatografi:
Rf (I) = 0,70
Rf (II) =0,51
Rf (III) = 0,56
Rf (IV) = 0,45
Rf (V) - 0,68
Aminosyreanalyse:
Asx 0,94 (1), Glx 1,00 (1), Ile 0,89 (1), Leu 3,16 (3), Arg 1,95 (2).
Molekylvektbestemmelse: Cgi<H>i6ø<N>3o<0>2g (2138,5) Elementæranalyse:
XX. Fremstilling av det frie eicosapeptidet
XX.1. Boc-Asn-Arg-Årg-Ala-Leu-Ile-Leu-Åla-Gln-(Ala-Aib-Ala-Aib-Ala )2-0Me x 2 HC1
Boc-Asn-Arg(N02 )-Arg(N02 )-Ala-Leu-Ile-Leu-Leu-Ala-Gln-(Ala-Aib-Ala-Aib-Ala)2-0Me (350 mg, 0,164 mmol) ble i 3 ml vannfri metanol blandet med 35 mg Pd/aktivt kull samt 12 pl (0,075 mmol) 6 N HC1. Under omrøring ledes ved romtemperatur hydrogen gjennom oppløsningen. Etter 20 minutter ble 8 pl (49 pmol) og etter 35 minutter 7 pl (42 pmol) 6 N BX1 tilsatt. Etter en hydrering i ca. 50 minutter var avspaltningen kvantitativ ifølge DC-kontroll. Katalysatoren ble frafUtrert og vasket flere ganger med litt metanol. Oppløsningsmidlet ble raskt avdestillert på rotasjonsfordamper (oljepumpevakuum, badtemperatur 25°C), resten ble opptatt i litt vann og lyofilisert.
Utbytte: 332 mg (95*)
Tynnsj iktkromatografi:
Rf (I) =0,16
Rf (II) = 0,11
Rf (III) = 0,21
Rf (IV) = 0,10
XX.2. H-Asn-Arg-Arg-Ala-Leu-Ile-1le-Leu-Leu-Ala-Gln-(Ala-Aib-Ala-Aib-Ala )2-0Me x 3 HC1
Boe-Asn-Arg-Arg-Ala-Leu-Ile-Leu-Leu-Ala-Gln-(Ala-Aib-Ala-Aib-Ala)2-0Me x 2 HC1 (600 mg, 0,283 mmol) ble blandet med 1,2 N HCl/AcOH (5 ml). Etter 30 minutter ble det inndampet noe på rotasjonsfordamper, blandet med vann (10 ml) og lyofilisert.
Utbytte: 564 mg (97*)
Smeltepunkt: 45°C (dekomponering)
Tynnsjiktkromatografi:
Rf (I) - 0,11
Molekylvektbestemmelse: Cg6Hi57N2gC>23Cl3 (2057,7)
Elementæranalyse:
Materialer og fremgangsmåter ved forsøkene.
Kjemikalier
Oppløsningsmiddel p.a. ble tilveiebragt fra Fa. Merck, forøvrig tørket etter vanlige fremgangsmåter og destillert. N-metylmorfolin (Merck) ble for fjernelse av sekundære aminer destillert over ninhydrin. 1-hydroksybenzotriazol og dicykloheksylkarbodiimid kom også fra Merck. Alle L-amino-syrederivatene kom fra Fa. Bachem. Boc-Aib-OH og H-Aib-OMe x HC1 ble syntetisert ved fremgangsmåter angitt i litteraturen.
Tvnns. 1 iktkromatograf i
Det ble anvendt ferdigplater "Kieselgel 60 F254" (Fa. Merck) og følgende elueringsmidler:
(I) 1-butanol/iseddik/vann 3:1:1
(II) kloroform/metanol/iseddik/vann 65:25:3:4
(III) kloroform/metanol/konsentrert ammoniakk/vann 65:35:3:4
(IV) kloroform/metanol/vann 65:25:4
(V) kloroform/metanol 1:1
Som spylereagenser ble det anvendt: ninhydrinreagens, klor/4,4'-bis(dimetylamino)difenylmetan (TDM-reagens ) og Sakaguchi-reagens. Som referanse tjente dicykloheksyl-urea med følgende verdier: Rf (I) 0,91, Rf (II) 0,82, Rf (III) 0,92, Rf (IV) 0,81, Rf (V) 0,83.
Amlnosvreanalvser
For å bestemme identiteten av mellomtrinnene ble 20 pg prøver av de beskyttede peptidene hydrolysert i 6 N HC1 i 24 timer ved 110°C. Mellomtrinn og målsekvensen av heptapeptidsegmen-tet, som inneholder Leu-Leu-bindingen, ble under ellers like betingelser hydrolysert i 72 timer. Åminosyreanalysene ble gjennomført ved hjelp av en Biotronik-aminosyreanalysator "LC 6000 E" under anvendelse av standard programmering.
Racematbestemmelse
De hydrolyserte aminosyrene ble avledet som pentafluorpropio-nylaminosyre-n-propylester og enantiomerene ble adskilt gasskromatografisk på glasskaplllarsøyler med "Chirasil-Val". De angitte prosentandelene av D-aminosyrer er ikke korrigert for hydrolysebetinget racemisering.
Elementæranal<y>se
Det ble gjennomført C,E,N-enkeltbestemmelser på en "Elemental Analyzer Modell 1104" (Carlo Erba, Milano).
Smeltepunkter
Smeltepunktene ble bestemt ifølge Tottoli og er ikke korrigerte.
Opptak av spektrene
<13>C-NMR spekteret: 30 mg av det beskyttede eicosapeptidet ble oppløst i 400 pl 12C2HC13/12C2H0<2>H (1:1) (Fa. Merck) og målt i NMR-spektrometeret "WM 400" (Fa. Bruker) i 12 timer ved 30°C. "Circulardichroismus"-spekteret: oppløsninger av det frie eicosapeptidet (c = 1-1,7 mg/ml) i etanol, trlfluoreta-nol, metanol, 1,1,1,3,3,3-heksafluorpropanol-(2 ), vann samt etanol/vann-blandlnger ble målt med "Dichrograph II" (Fa. Jouhan-Roussel).
Kromatografisk rensing
De beskyttede peptid-mellomtrinnene ble etter avslutning av koblingsreaksjonen og fjernelse av oppløsningsmidlet i oljepumpevakuum oppløst ved tilsats av et like stort volum av CHCl3/MeOH 1:1, frasentrifugert fra dicykloheksylurinstoff og kromatograf ert på "Sephadex LH 20": søyle 3 x 115 cm; elueringsmiddel CHCls/MeOH 1:1; påføringsmengde 35 ml; flythastighet 8,40 ml/10 min. De 3 ml fraksjonene ble undersøkt tynnsjiktkromatografisk i system II (TDM-reagens). Peptidene kommer til syne i eluerlngsvolumene 165-190 ml. Fraksjonene ble samlet, oppløsningsmidlet fjernet i vakuum, og resten tørket over ?2®5' Aminosyreanalysen gir de forventede verdiene og et peptidinnhold på 92-96*.
Immuniseringsforsøk
Først ble et B-cellemitogen, som samtidig er en utmerket bærer og en sterkt virksom adjuvans, forbundet kovalent med syntetiske antigendeterminanter. For dette formål ble det bl. a. anvendt det syntetiske lipopeptidet S-(2,3-bis(pal-mitoyloksy )propyl)-N-palmitoylcystelnyl-serin (Pam3Cys-Ser), som utgjør N-terminalen av lipoproteinet fra den ytre membranen av Escherichia coli. De i kovalent forbindelse med et antigen spesielt utpregede ampifile egenskapene sikrer på den ene siden en stabil forankring av S-glyceryl-forbindelsen som bærer de 3 fettsyrerestene, i lipidsjiktet av celle-membranen. På den andre siden presenteres derved også det mest polare antigenet (henholdsvis haptenet) i det ytterste hydrofile sjiktet av membranen. Idet den aktiverende virkningen av lipoproteinet alene er bestemt av denne N-terminale delen, finnes denne immunstimulerende virkningen i alle konjugatene som bærer Pan^Cys-Ser eller analoger derav.
Som eksempel anføres anvendelsen av konseptet til oppnåelse av spesifikke antistoffer mot den epidermiske vekstfaktor-reseptoren (EGF-R) fig. 9. For dette formål ble det ved hjelp av datamaskinunderstøttet epitop-søk, det ekstra cytoplas-matiske området 516-529 valgt, oppbygget ved Merrifield-syntese og til sist ble Fmoc-Ser(Bu<*>)-0H og deretter Pan^Cys-OH påbygget. Etter avspaltning av harpiksen ble det analytisk enhetlige konjugatet uten ytterligere tilsatser tilført i en engangsdose til mus i.p. Ved hjelp av ELISA analyser ble det allerede etter 2 uker fastslått høye titere av spesifikke antistoffer mot tetradekapeptidet. Vesentlig er at det ved kontrollforsøk med det alene åpenbart svakt immunogene tetradekapeptidet ikke ble oppnådd antistofftitere.
Idet Pam3Cys-konjugater også i cellekulturer er sterkt Immunogene kan det ved in vitro immunisering på en rask og elegant måte oppnås konvensjonelle og monoklonale antistoffer også mot svakt immunogene forbindelser.
Fordelene ved foreliggende konsept i forbindelse med cellekulturer er: enkel fremstilling av et kjemisk entydig definert antigen-adjuvans-konjugat i en hvilken som helst mengde, i motsetning til andre konjugater ved engangstilfør-sel eller flere "forsterkninger", med høy effektivitet in vivo og in vitro. En betydelig innsparing av forsøksdyr, ofte kan man også gi fullstendig avkall på in vivo immuniseringer og en drastisk tidsbesparelse, spesielt innenfor genteknologiske arbeider, oppnås også. Forsøk kan også gjennomføres med humancellekultursystemer.
Eksempel på en ln vivo immunisering
6 til 10 uker gamle Balb/c-mus immuniseres ved enkelt i.p. tilførsel av 50 pg og 500 jjg (0,2 ml av en 10"<1> til IO"<2 >molar oppløsning av adjuvans kovalent koblet til antigen). Pam3Cys-Ser-(EGF-R 515-529). Som kontroller tjente antigen, adjuvans og en blanding av antigen og adjuvans i sammen-lignbare molare mengder, samt medium. To uker etter in-jeksjonen ble det tatt blod fra musene ved det retroorbltale venepleksus for utvinning av serum, og antistofftiteren ble bestemt ved hjelp av ELISA.
Analoge immuniseringer kan også oppnås ved andre tilførsels-måter f.eks. i.v., oral, rektal, i.m., s.c.
Dannelsen av spesifikke antistoffer uten Freund's adjuvans mot tetradekapeptidet EGF-R 516-529 etter in vivo immunisering ble undersøkt.
Balb/c-mus ble, som vist i fig. 10, immunisert en gang i.p. med
I. Konjugat Pam3Cys-Ser (EGF-R 516-526)
II. Fritt tetradekapeptid EGF-R 516-529, alene
III. Pam3Cys-Ser alene
IV. Fritt tetradekapeptid (EGF-R 516-529) i blanding med
Pam3Cys-Ser,
med 0,2 pmol av konjugatet. Antistofftiteren ble bestemt ved hjelp av ELISA analyse. (Ordinat OD ved 405 nm) (Fig. 10). 14 dager etter immuniseringen ble det tatt blodprøver fra musene ved øyevenen og det utvunnede serumet ble anvendt 1 ELISA. Verdiene angis fra middelverdien (3-5 mus) av forskjellen mellom ELISA-verdiene av PEP 14 - BSA konjugat og BSA (Fig. 10).
Det viste seg at bare ved anvendelse av membrananker-virksomt stoff konjugatet fremstilt ifølge oppfinnelsen ble det funnet drastisk forhøyede antistoffkonsentrasjoner som langt overgår virksomheten ved hittil kjente fremgangsmåter.
Eksempel på en ln vitro Immunisering
Miltceller fra mus ble i nærvær av konjugat Pam3Cys-Ser-(EGF-R 515-529), av adjuvans Pan^Cys-Ser, av tetradekapeptid EGF-R 516-529, en blanding av antigen og adjuvans og medium, kultivert i 5 dager.
Lymfocyttene ble ved en celletetthet på 2,5 x 10^/ml 1 48 timer kultivert i 0,2 ml porsjoner i TPMI-1640 medium, anriket med 10* varmeinaktivert FCS, glutamin (2 mM), penicillin (100 U/ml), streptomycin (100 jig/ml) og 2-merkaptoetanol (5 x IO-<5> M).
Overvæskene ble utvunnet for undersøkelse av spesifikke antistoffer ved ELISA analyse.
Mitogen aktivering av mus- miltceller
Den mitogene aktiveringen av Balb/c-miltceller ved Pam3Cys-Ser-(Lys)4-FITC (sirkler), Pam3Cys-Ser-(Lys)4-0H x 3 HC1 (trekanter) og Pam3Cys-Ser-(Lys)4-0H x 2 TFE (firkanter) fremgår av fig. 12. Betingelsene for cellekultiveringen er beskrevet. (Z. Immunforsch. 153, 1977, s. 11 og Eur. J. Biochem. 115, 1981). I tegningen er på ordinaten stimule-ringsindeksen for innbygning av <3>H-thymidin i DNA (cpm-verdier for inkorporering/cpm-verdier for kontrollen uten mitogen) avsatt som funksjon av konsentrasjonen av det anvendte virksomme stoffet.
Sammenligning av in vivo/ ln vitro
I fig. 11 er det ovenfor angitte forsøket stilt overfor et in vitro forsøk: In vitro forsøk i mikrotiterplater: celletetthet: 2,5 x 10^ celler/ml; stoffkonsentrasjon: 5 x IO"<7> mmolar; inkuberings-betingelser: 37°C, 5* CO2, 5 dager.
Konj.: Konjugat Pam3Cys-Ser-(EGF-R 515-529)
Pep.: Tetradekapeptid EGF-R 516-529)
Adj.: Pam3Cys-Ser
Bland.: Blanding av fritt tetradekapeptid EGF-R 516-529 og
Pam3Cys-Ser.
Også in vitro finnes en drastisk økning av antistoffkon-sentrasjonen, hvorved anvendeligheten av cellekulturene, spesielt for fremstilling av antistoffer, utvides betydelig.
Claims (1)
- Analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktivt konjugat av membrananker-virksomt stoff hvor membrananker-forbindelsen er en forbindelse av følgende generelle formel:hvori A kan være svovel, oksygen, disulfid"(—S—S—), metylen (-CH2-) eller -NE-;n = 0-5; m = 1 eller 2; C<*> = asymmetrisk karbonatom med R— eller S—konfigurasjon; R, R', R" er like eller forskjellige og står for en alkyl—, alkenyl— eller alkinylgruppe med 7-25 karbonatomer eller hydrogen, som eventuelt kan være sub-stituert med hydroksygrupper og X er et virksomt stoff eller en avstandsgivende virksom stoffgruppe, karakterisert ved at den innbefatterat det beskyttede peptidet som er beskyttet med beskyttelsesgrupper på i og for seg kjent måte ved de funksjoner hvor det ikke skal finne sted noen reaksjon, syntetiseres ved hjelp av kjente koblingsfremgangsmåter til en fast eller oppløselig bærer, som en polymer, (f.eks. Merrifield-harpiks), på en slik måte at det syntetiserte, til bæreren bundne peptidet, er kovalent bundet til membrananker-forbindelsen over N-terminalene eller sidefunksjonene av peptidet; slik at det fremstilte peptidkonjugatet kan isoleres ved at beskyttelsesgruppene samt bindingen peptid/bærer spaltes på i og for seg kjent måte, slik at membrananker-peptidet eller konjugatet av membrananker-virksomt stoff utvinnes.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
NO920356A NO920356D0 (no) | 1985-06-24 | 1992-01-27 | Analogifremgangsmaate for fremstilling av et konjugat av et membrananker-virksomt stoff |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE3522512 | 1985-06-24 | ||
DE19853546150 DE3546150A1 (de) | 1985-06-24 | 1985-12-27 | Membrananker-wirkstoffkonjugat, seine herstellung sowie seine verwendung |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO862511D0 NO862511D0 (no) | 1986-06-23 |
NO862511L NO862511L (no) | 1986-12-29 |
NO174207B true NO174207B (no) | 1993-12-20 |
NO174207C NO174207C (no) | 1994-03-30 |
Family
ID=25833375
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO862511A NO174207C (no) | 1985-06-24 | 1986-06-23 | Analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktivt konjugat av membrananker-virksomt stoff |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0210412B1 (no) |
JP (1) | JP2594259B2 (no) |
KR (1) | KR930008091B1 (no) |
AT (1) | ATE131491T1 (no) |
AU (1) | AU611385B2 (no) |
CA (1) | CA1340656C (no) |
DE (2) | DE3546150A1 (no) |
DK (1) | DK172399B1 (no) |
ES (1) | ES8801677A1 (no) |
FI (1) | FI94419C (no) |
NO (1) | NO174207C (no) |
PT (1) | PT82826B (no) |
Families Citing this family (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6074650A (en) * | 1985-06-24 | 2000-06-13 | Hoechst Aktiengesellschaft | Membrane anchor/active compound conjugate, its preparation and its uses |
DE3937412A1 (de) * | 1989-11-10 | 1991-05-16 | Hoechst Ag | Synthetische vakzine zur spezifischen induktion zytotoxischer t-lymphozyten |
DE3813821A1 (de) * | 1988-04-22 | 1989-11-02 | Hoechst Ag | Synthetische vakzine gegen die maul- und klauenseuche und verfahren zu deren herstellung |
US6024964A (en) * | 1985-06-24 | 2000-02-15 | Hoechst Aktiengesellschaft | Membrane anchor/active compound conjugate, its preparation and its uses |
CA1331355C (en) * | 1986-04-21 | 1994-08-09 | Bioenterprises Pty. Ltd | Immunopotentation |
AU619443B2 (en) * | 1986-04-21 | 1992-01-30 | Bioenterprises Pty. Ltd. | Immunopotentiation |
JPS63107742A (ja) * | 1986-05-20 | 1988-05-12 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 新規な機能性リポソ−ム及びその製造法 |
DE3700173A1 (de) * | 1987-01-05 | 1988-07-14 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung von lipophilen aminosaeurederivaten sowie lipophile aminosaeurederivate |
US5976839A (en) * | 1987-03-13 | 1999-11-02 | Bioenterprises Pty Limited | Immunopotentiation through covalent linkage between immunogen and immunopotentiating molecules |
GB2217319A (en) * | 1988-04-19 | 1989-10-25 | Synpharm Ltd | Racemic and optically active fatty amino acids, their homo- abd hetero-oligomers and conjugates, the process of their production, their pharmaceutical composi |
US5120829A (en) * | 1989-03-20 | 1992-06-09 | La Jolla Cancer Research Foundation | Hydrophobic attachment site for adhesion peptides |
EP0485563B1 (de) * | 1990-05-30 | 1994-12-21 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Polyethersubstituierte tumormittel |
DE4119856A1 (de) * | 1991-06-17 | 1992-12-24 | Hoechst Ag | N-acyl-s-(2-hydroxyalkyl)-cysteine, deren herstellung sowie deren verwendung als zwischenprodukte zur herstellung von synthetischen immunadjuvantien und synthetischen impfstoffen |
EP0604945A1 (en) * | 1992-12-28 | 1994-07-06 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | TAN-1511, its derivatives, production and use thereof |
AU666789B2 (en) * | 1992-12-28 | 1996-02-22 | Takeda Chemical Industries Ltd. | 2-amino-6,7-dihydroxy-4-thiaheptanoic acid derivatives, production and use thereof |
DE4325317C2 (de) * | 1993-07-29 | 1998-05-20 | Univ Dresden Tech | Verfahren zur radioaktiven Markierung von Immunglobulinen |
DE4329309A1 (de) * | 1993-08-31 | 1995-03-09 | Rapp Polymere Gmbh | Lipopeptid-Verbindungen |
EP0641776A3 (en) * | 1993-09-08 | 1997-05-02 | Takeda Chemical Industries Ltd | Thioglycerol derivatives. |
FR2727117A1 (fr) * | 1994-11-18 | 1996-05-24 | Geffard Michel | Utilisation de conjugues de la polylysine pour la preparation de medicaments utiles dans le traitement des maladies neurodegeneratives et des affections degeneratives a caractere autoimmun |
US6117940A (en) * | 1997-10-17 | 2000-09-12 | Mjalli; Adnan M. M. | Amino-ketone solid support templates |
IL131266A0 (en) * | 1999-08-05 | 2001-01-28 | N S T Neurosurvival Technologi | Peptides and pharmaceutical compositions comprising same |
IL125908A (en) * | 1998-08-24 | 2005-05-17 | Nst Neurosurvival Technologies | Peptides and pharmaceutical compositions comprising same |
GB9915074D0 (en) * | 1999-06-28 | 1999-08-25 | Cortecs Plc | Ligand-binding composition |
DE102009034779A1 (de) | 2009-07-25 | 2011-02-03 | Emc Microcollections Gmbh | Synthetische Analoga bakterieller Lipopeptide und ihre Anwendung zur Therapie und Prophylaxe allergischer Erkrankungen |
WO2011119759A1 (en) * | 2010-03-23 | 2011-09-29 | Irm Llc | Compounds (cystein based lipopeptides) and compositions as tlr2 agonists used for treating infections, inflammations, respiratory diseases etc. |
DE102011018499A1 (de) | 2011-04-23 | 2012-10-25 | Emc Microcollections Gmbh | Topische Nanopartikel-Vakzine zur Immunstimulation der dendritischen Zellen in der Haut |
US10766928B2 (en) | 2012-10-05 | 2020-09-08 | The University Of Kansas | Targeted conformationally-constrained kinked endosomal disrupting peptides |
US9701715B2 (en) * | 2012-10-05 | 2017-07-11 | The University Of Kansas | Conformationally-constrained kinked endosomal-disrupting peptides |
KR20160147960A (ko) | 2014-04-25 | 2016-12-23 | 아지노모토 가부시키가이샤 | 면역자극제 |
DE102016005550A1 (de) | 2016-05-09 | 2017-11-09 | Emc Microcollections Gmbh | Adjuvans zur lnduzierung einer zellulären lmmunantwort |
AU2018321157B2 (en) | 2017-08-24 | 2024-03-28 | Novo Nordisk A/S | GLP-1 compositions and uses thereof |
IL294521A (en) | 2020-02-18 | 2022-09-01 | Novo Nordisk As | glp-1 compounds and their uses |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2860893D1 (en) * | 1977-06-20 | 1981-11-05 | Ciba Geigy Ag | Lipopeptides, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them |
US4125569A (en) | 1977-08-25 | 1978-11-14 | Mobil Oil Corporation | Process for increasing hydrogenation rate of polymerized n-alphaolefins |
EP0014815A3 (de) * | 1978-12-20 | 1980-10-29 | Ciba-Geigy Ag | Peptidderivate, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte sowie pharmazeutische Präparate mit einer dieser Verbindungen |
EP0114787B1 (de) | 1983-01-25 | 1991-09-25 | Ciba-Geigy Ag | Neue Peptidderivate |
-
1985
- 1985-12-27 DE DE19853546150 patent/DE3546150A1/de not_active Withdrawn
-
1986
- 1986-06-19 EP EP86108324A patent/EP0210412B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-06-19 AT AT86108324T patent/ATE131491T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-06-19 DE DE3650448T patent/DE3650448D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-06-19 FI FI862631A patent/FI94419C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-06-23 ES ES556417A patent/ES8801677A1/es not_active Expired
- 1986-06-23 DK DK294086A patent/DK172399B1/da not_active IP Right Cessation
- 1986-06-23 CA CA000512181A patent/CA1340656C/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-06-23 AU AU58943/86A patent/AU611385B2/en not_active Expired
- 1986-06-23 NO NO862511A patent/NO174207C/no not_active IP Right Cessation
- 1986-06-23 JP JP61145031A patent/JP2594259B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1986-06-23 PT PT82826A patent/PT82826B/pt unknown
- 1986-06-24 KR KR8605055A patent/KR930008091B1/ko not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FI862631A (fi) | 1986-12-25 |
DK172399B1 (da) | 1998-05-18 |
NO174207C (no) | 1994-03-30 |
ATE131491T1 (de) | 1995-12-15 |
JPS6263600A (ja) | 1987-03-20 |
NO862511D0 (no) | 1986-06-23 |
CA1340656C (en) | 1999-07-20 |
EP0210412A2 (de) | 1987-02-04 |
AU5894386A (en) | 1987-01-08 |
JP2594259B2 (ja) | 1997-03-26 |
KR930008091B1 (en) | 1993-08-25 |
FI862631A0 (fi) | 1986-06-19 |
EP0210412A3 (en) | 1990-02-07 |
KR870000359A (ko) | 1987-02-18 |
DK294086A (da) | 1986-12-25 |
PT82826B (pt) | 1989-01-17 |
EP0210412B1 (de) | 1995-12-13 |
ES8801677A1 (es) | 1988-02-16 |
PT82826A (de) | 1986-07-01 |
NO862511L (no) | 1986-12-29 |
ES556417A0 (es) | 1988-02-16 |
FI94419C (fi) | 1995-09-11 |
FI94419B (fi) | 1995-05-31 |
DE3650448D1 (de) | 1996-01-25 |
DE3546150A1 (de) | 1987-01-22 |
AU611385B2 (en) | 1991-06-13 |
DK294086D0 (da) | 1986-06-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NO174207B (no) | Analogifremgangsm}te for fremstilling av terapeutisk aktivt konjugat av membrananker-virksomt stoff | |
US4493795A (en) | Synthetic peptide sequences useful in biological and pharmaceutical applications and methods of manufacture | |
JPH03504013A (ja) | T細胞ヘルパー活性を有するペプチド | |
US6074650A (en) | Membrane anchor/active compound conjugate, its preparation and its uses | |
US4859765A (en) | Synthetic peptide sequences useful in biological and pharmaceutical applications and methods of manufacture | |
US6024964A (en) | Membrane anchor/active compound conjugate, its preparation and its uses | |
JPH0689029B2 (ja) | 効力のあるサイモペンチン類似体 | |
CA1340096C (en) | Analogs of atrial natriuretic peptides | |
AU664855B2 (en) | Lanthionine bridged peptides | |
JPH0684400B2 (ja) | 新規な生長ホルモン遊離ペプチド | |
US6346601B1 (en) | Procedure for obtaining the somatostatin analog, octreotide | |
Raymond et al. | Studies on the specificity of chymosin (rennin): I-Kinetic parameters of the hydrolysis of synthetic oligopeptide substrates | |
Shenbagamurthi et al. | Structure-activity relationships in the dodecapeptide. alpha. factor of Saccharomyces cerevisiae | |
JPH05178757A (ja) | トロンボスポンジン−様活性を有するペプチド及びその治療のための使用 | |
JP2009544638A (ja) | タンパク質結合メトトレキサート誘導体、及びそれを含有する薬剤 | |
EP0138616A2 (en) | Nona- and dodecapeptides for augmenting natural killer cell activity, processes for making them and pharmaceutical compositions comprising them | |
US6028168A (en) | Lanthionine bridged peptides | |
JP4568842B2 (ja) | 熱帯熱マラリア原虫のエノラーゼ蛋白質の部分ペプチドの製造方法 | |
JPH051798B2 (no) | ||
US4058512A (en) | Synthetic peptides having growth promoting activity | |
NO830241L (no) | Antigenisk lineaere peptidforbindelser. | |
Boyer et al. | Functional degeneracy of residues in a T cell peptide epitope contributes to its recognition by different T cell hybridomas | |
Moroder et al. | Total Synthesis of PHI | |
RU1823876C (ru) | Способ получени мембраносв занных соединений | |
JPS59138958A (ja) | 抗血清 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MK1K | Patent expired |