NO148380B - Diagnosetestsystem for paavisning av bakterier som frembringer beta-galaktosidase - Google Patents
Diagnosetestsystem for paavisning av bakterier som frembringer beta-galaktosidaseInfo
- Publication number
- NO148380B NO148380B NO752544A NO752544A NO148380B NO 148380 B NO148380 B NO 148380B NO 752544 A NO752544 A NO 752544A NO 752544 A NO752544 A NO 752544A NO 148380 B NO148380 B NO 148380B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- zone
- substrate
- solution
- buffer
- test
- Prior art date
Links
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims description 43
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title description 2
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 title 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 title 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 37
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 36
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 claims description 16
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 16
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 claims description 16
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 15
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 12
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 3
- -1 o-nitrophenyl- Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000014670 detection of bacterium Effects 0.000 claims description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 2
- 125000001209 o-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C(C([H])=C1[H])[N+]([O-])=O 0.000 claims 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 18
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- KUWPCJHYPSUOFW-YBXAARCKSA-N 2-nitrophenyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O KUWPCJHYPSUOFW-YBXAARCKSA-N 0.000 description 14
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 7
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940061607 dibasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 5
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 229940111688 monobasic potassium phosphate Drugs 0.000 description 5
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 229960000796 barbital sodium Drugs 0.000 description 3
- FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N barbitone sodium Natural products CCC1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- RGHFKWPGWBFQLN-UHFFFAOYSA-M sodium;5,5-diethylpyrimidin-3-ide-2,4,6-trione Chemical compound [Na+].CCC1(CC)C([O-])=NC(=O)NC1=O RGHFKWPGWBFQLN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WLDHEUZGFKACJH-ZRUFZDNISA-K Amaranth Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].C12=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(O)=C1\N=N\C1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C2=CC=CC=C12 WLDHEUZGFKACJH-ZRUFZDNISA-K 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000012735 amaranth Nutrition 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CVVIJWRCGSYCMB-UHFFFAOYSA-N hydron;piperazine;dichloride Chemical compound Cl.Cl.C1CNCCN1 CVVIJWRCGSYCMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- KHLVKKOJDHCJMG-QDBORUFSSA-L indigo carmine Chemical compound [Na+].[Na+].N/1C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C(=O)C\1=C1/NC2=CC=C(S(=O)(=O)[O-])C=C2C1=O KHLVKKOJDHCJMG-QDBORUFSSA-L 0.000 description 2
- 235000012738 indigotine Nutrition 0.000 description 2
- 239000004179 indigotine Substances 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- IQUPABOKLQSFBK-UHFFFAOYSA-N 2-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O IQUPABOKLQSFBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589513 Burkholderia cepacia Species 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588923 Citrobacter Species 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 1
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000122973 Stenotrophomonas maltophilia Species 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010338 boric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002645 boric acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 1
- 239000008199 coating composition Substances 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 239000004922 lacquer Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 description 1
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 238000004383 yellowing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/924—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/805—Test papers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Selv om det finnes mange tester for identifisering av mikroorganismer i familien Enterobakteriaceae, har det alltid vært vanskelig å differensiere organismer som f.eks. Arizona eller Citrobacter fra Salmonella og Pseudomonas cepacia eller P. maltophilia fra andre pseudomonader. Nylig har en o-nitrofenyl-[3-D-galaktopyranosidtest vist seg brukbar for å skille ovennevnte organismer. Denne testen påviser (3-galaktosidase-produserende organismer ved bakteriell hydrolyse av substratet, o-nitrofenyl-3-D-galaktopyranosid. Dette sistnevnte o-nitrofenyl-|3-D-galaktopyranosid, vanligvis kjent som "ONPG" , er et kunstig substrat som opprinnelig er fargeløst i løsning. Hydrolyse av substratet med bakterielt fremstilt |3-galaktosidase-enzym frigjør fri o-nitrofenol som er gul under alkaliske be-tingelser. Det er således skaffet en hensiktsmessig metode for påvisning av [3-galaktosidase-aktivitet og mikroorganismene som frembringer dette enzymet.
ONPG-testen er underkastet en rekke undersøkelser: Lederberg, J., J. Bact. 60, 381-392 (1950), Lowe, G.H., J. Med. Technol. 19, 21-25 (1962), Pickett, M.J. et al., Appl. Microbiol. 14, 178-182 (1966) og Sonnenwirth, A.C., Kapitel 62, Gradwohl's Clinical Laboratory Methods and Diagnosis, 7de utg., sidene 1111-1112. I alle disse undersøkelser fremstilles ONPG-substratet i en buffer-løsning på den tiden testen med en ukjent organisme skal utføres. Forhåndsfremstilte substratløsninger med passende følsomhet og stabilitet er ikke omtalt. Sammen-lignende undersøkelser av bruken av en ONPG-diagnosetest-strimmel er angitt av Rosner, R. i Appl. Microbiol. 26, 890-
893 (desember 1973). Resultater med ONPG-teststrimmel var fordelaktige ifølge Rosner-undersøkelsene, men hverken sammen-setning, form eller fremgangsmåte for fremstilling av strimmel-en er angitt i dette arbeide. Den ONPG-strimmel som ble brukt i Rosner-undersøkelsene er i virkeligheten et tidlig forsøk av oppfinnerne av diagnosetestsystemet i foreliggende oppfinnelse på å fremstille et stabilt, følsomt produkt som nøyaktig ville påvise (3-galaktosidase-produserende organismer. Uheldigvis var stabiliteten for ONPG-teststrimmelen som ble undersøkt av Rosner, så dårlig at hverken følsomheten for testproduktet
eller nøyaktigheten av resultatene kunne garanteres dersom kommersiell utvikling skulle bli igangsatt. Et forhåndsfrem-
stilt diagnosetestsystem må kunne motstå de fabrikasjons-, transport- og lagringsbetingelser som vanligvis forekommer, for å bli ansett som egnet for markedsføring. Et slikt produkt må skaffe pålitelige, reproduserbare testresultater. Mens det således er oppnådd en viss fremgang, er det fortsatt behov for et forhåndsfremstilt, stabilt, følsomt ONPG-testsystem som kan anvendes for rask påvisning av mikroorganismer som produserer [3-galaktosidaseenzymer.
Ifølge oppfinnelsen skaffes det således et diagnosetestsystem for påvisning av bakterier som frembringer (3-galaktosidase ved bakteriell hydrolyse av et o-nitrofenyl-(3-D-galakto-pyranosidsubstrat anbrakt på et porøst materiale eventuelt avgrenset av en sperresone og eventuelt forsynt med en identifi-seringsfargesone. Testsystemet karakteriseres ved at substratet er impregnert som en eluerbar, vandig acetonoppløsning inneholdende fra 0,05 til 3,0 mg tørt o-nitrofenyl-g-D-galakto-pyranosid i en sone A som grenser opp til en sone B impregnert med 0,01 til 0,1 mmol av et tørt buffersystem som ved eluering vil holde en pH på en verdi fra 6,5-8,5.
Det anvendes fortrinnsvis en enbasisk kalium- og to-basisk natriumfosfatbuffer. Eventuelt kan det være en vanntett barrieresone i tilslutning til den ytre reagensimpregnerte sonen. Ved bruk innføres det impregnerte porøse bærermaterialet i en saltsuspensjon av en ukjent organisme og inkuberes i fire timer. Utviklingen av en gulfarge angir at det er til stede en 3-galaktosidase-produserende organisme. Diagnosetestsystemet ifølge oppfinnelsen er stabil i ett år ved 4°C, ved romtemperatur og ved 3 7°C.
Det nye testesystem er således velegnet for påvisning av (3-galaktosidaseproduserende bakterier og representerer et stabilt, følsomt testsystem som kan brukes for rask identifi-kasjon av slike mikroorganismer. For fremstilling av testsystemet ifølge oppfinnelsen oppløses et o-nitrofenyl-|3-D-galaktopyranosid-substratmateriale i en spesiell konsentrasjon av aceton og vann og påføres på en sone av et porøst bærermateriale. O-nitrofenyl-g-D-galaktopyranosidet er et kunstig substratmateriale som er vanlig kjent som "ONPG". Løsningen som brukes for påføring av ONPG-substratet på det porøse bærermaterialet fremstilles ved å løse 0,5 til 5,0 % vekt/volum av ONPG basert på volumet av total-1 øsningen i en løsning inneholdende fra 25 til 75 volum% av aceton i vann. Den vandige substratløsningen inneholder fortrinnsvis 5,0 % vekt/volum ONPG og 70 volum% aceton. Substratl øsningen påføres på en ende av det porøse bærermaterialet og inndampes til tørrhet slik at det oppnås fra 0,05 til 3,0 mg tørt ONPG på en testenhet av det porøse bærermaterialet. Substratløsningen kan påføres det porøse bærermaterialet på enhver passende måte på en eller begge sidene av en substratsone for å oppnå den ovennevnte mengde tørr ONPG-substratavsetning i substratsonen. ONPG-substratløsningen påføres fortrinnsvis tre ganger på hver side av det porøse materialet for å oppnå i alt ca. 1,5 mg tørt substrat på en testenhet.
Et mikrobiologisk inert buffersystem som har evnen til å bibeholde pH på fra 6,5 til 8,5, fortrinnsvis 7,2 til 7,6,
mest foretrukket 7,4, påføres på en adskilt men tilstøtende del av det porøse bærermaterialet og fordampes til tørrhet. Egnede buffersysterner som har den ovenfor beskrevne evne omfatter: barbitalnatrium/saltsyre; natriumacetat og barbital-natrium/saltsyre; boraks/enbasisk kaliumfosfat; sitronsyre, fosforsyre, ortoborsyre og natriumhydroksyd/saltsyre; sitronsyre og tobasisk natriumfosfat; enbasisk kaliumfosfat/tobasisk natriumfosfat; piperazindihydroklorid/natriumhydroksyd; piper-azindihydroklorid i glycylglycin/natriumhydroksyd; tris[hydroksy-mstyl] aminometan/saltsyre og tris[hydroksymetyl] aminometan og maleinsyre eller maleinsyreanhydrid/natriumhydroksyd. Blant de egnede buffersysterner er følgende foretrukket: enbasisk kaliumfosfat/tobasisk natriumfosfat; tris[hydroksymetyl] aminometan/saltsyre og barbitalnatrium/saltsyre. Av disse er enbasisk kaliumfosfat/tobasisk natriumfosfatbuffer et spesielt foretrukket system.-.
Ved fremstilling av bufferløsningen for påføring på det porøse bærermaterialet er det funnet at en bufferløsning med en konsentrasjon på fra 0,5 til 1 molar er passende. Slike løsninger anvendes for å avsette den krevede 0,01 til 0,1
• millimol buffer på en testenhet av porøst bærermateriale i en sone som er adskilt fra men tilstøtende den substratimpregnerte sonen. I den foretrukne utførelsesform av oppfinnelsen på-føres en 1 molar enbasisk kaliumfosfat og tobasisk' natrium-
fosfat bufferløsning på det porøse bærermaterialet i en sone som er tilstøtende til substratsonen, slik at det avsettes 0,02 millimol på en testenhet av det porøse materialet. Som når det gjaldt påføringen av substratløsningen ovenfor, kan enhver egnet måte for påføring av bufferløsningen på det porøse bærermaterialet anvendes forutsatt at den ovenfor nevnte mengde tørr buffer avsettes på den bestemte sone av det porøse bærermaterialet. Fortrinnsvis påføres buffer-løsningen to ganger på hver side av den bestemte sonen på det porøse bærermaterialet med tørking mellom hver påføring.
De ovenfor angitte mengder tørt substrat og tørr buffer som er impregnert på adskilte men tilstøtende soner på en testenhet av det porøse materialet er beregnet på inkubering med ca. 0,3 ml saltsuspensjon av testorganismene i fire timer ved 35-37°C. For å oppnå optimalt resultat innenfor den anbefalte inkuberingstid bør det være til stede en tilstrekke-lig mengde testorganismer slik at suspensjonen blir synlig uklar. En tynnere suspensjon kan brukes, men ville kreve øket inkuberingstid. En tykkere suspensjon som inneholder en større konsentrasjon av organismer, kan brukes med diagnosetestsystemet ifølge oppfinnelsen uten vanskelighet. Skulle mengden testorganisme eller inkuberingstid eller temperatur varieres, ville det kreves tilsvarende justeringer av mengdene buffer og substrat for å sikre at det hadde funnet sted til-strekkelig kontakt mellom testreagensene og testorganismene for å hindre feilaktige negative resultater. De mengder som brukes i diagnosetestsystemet ifølge oppfinnelsen er funnet å gi nøyaktige, følsomme resultater så raskt som mulig. Varia-sjoner i mengder av reagenser, mengder av testorganismer eller inkuberingstider eller temperaturer kan naturligvis anvendes, men testsystemet vil da ikke være like følsomt eller nøyaktig og resultatene vil ikke oppnås på så kort tid.
Diagnosetestsystemet ifølge oppfinnelsen kan omfatte et porøst bærermateriale med bare to soner som er helt impregnert med substrat og buffer. Hvor det imidlertid er ytterligere uimpregnert porøst materiale, er det nødvendig med påføring av en vanntett eller hydrofob barriereløsning for å hindre vandring av testreagenser og sluttprodukter til de uimpregnerte områider av det porøse materialet under inkubering med suspensjonen av testorganismer. Dersom testreagensene blir dispergert over de uimpregnerte områder av det porøse bærermaterialet, minkes de konsentrasjoner som kommer i kontakt med testorganismene og resultatene kan bli unøyaktige. Et positivt testresultat kan dersom det er lysegult, dessuten bli meget vanskelig å fastslå. Derfor er en vanntett eller hydrofob barrieresone nødvendig for å hindre vandring av reagensene.
Den barriereblanding som skal påføres på det porøse bærermaterialet må være kjemisk inert i det biologiske testsystemet ifølge oppfinnelsen. Enhver inert substans som vil danne en vanntett barriere av denne type kan anvendes. Egnede materialer omfatter voks, lakk og plast. Et slikt materiale er det fargeløse, polymeriserte metylmetakrylat-beleggpreparatet som markedsføres under varemerket "Krylon 150 Crystal Clear", som selges oppbevart toluen og sem kan fortynnes med mere toluen eller, med fortynningsmidler som f.eks. metyl-, etyl-
og propylalkohol. En annen egnet barriereblanding er et kromkompleks markedsført under varemerket "Quilon" og som fåes i isopropanol-løsning som kan fortynnes. En spesielt foretrukket vanntett barriere oppnås ved først å påføre "Quilon"-belegget på det porøse bærermaterialet og så påføre "Krylon 150 Crystal Clear"-belegget over "Quilon"-belegget, med eller uten tørking slik som beskrevet i US-patent 3 846 247.
De ovenfor nevnte barrierebelegg-blandinger påføres på begge sider av det porøse materialet for å sikre fullstendig inntrengning i det porøse materialet.
Eventuelt kan det forefinnes en identifikasjonssone for håndtering av diagnosetestmaterialet på den motsatte ende av de reagensimpregnerte soner på det porøse bærermaterialet. Enhver egnet markering eller farge som vil identifisere eller farge det porøse materialet og således utskille "håndterings-sonen" fra de reagensimpregnerte soner kan anvendes. Det er eksempelvis funnet at 0,40 til 0,60 gram av et fargestoff opp-løst i et egnet løsningsmiddel og justert til 100 ml kan på-føres på det porøse materiale. Den foretrukne fargeløsning inneholder 0,50 gram "FD & C Blue no. 2", 0,10 gram "FD & C Red no. 2" og 0,10 gram vannløselig "Nigrosin". Andre fargeløs-ninger kan imidlertid anvendes med like stor effekt.
Porøse bærermaterialer som er egnet for anvendelse ved utførelsen av oppfinnelsen, er de materialer som ved hjelp av kapillærvirkning er funnet å suge opp væsker. Slike materialer omfatter filtrerpapir, filt, porøse keramiske strimler, vevede eller sammenfiltrede fibre og liknende. Et spesielt foretrukket porøst materiale er tungt filtrerpapir.
Ved fremstilling av diagnosetestsystemet ifølge oppfinnelsen kan det anvendes en rull av egnet porøst materiale som eksempelvis en 10 meters rull filtrerpapir. Substratløsningen, bufferløsningen og barriereløsningen påføres på hele rullen på langs i parallelle soner eller bånd ved å føre filtrerpapiret mellom tilmålte påføringsvalser som opptar reagensløsningen fra beholdere. Filtrerpapiret blir impregnert med løsningen når det passerer over valsene. Mengden reagens som avsettes på den beregnede sone på filtrerpapiret er en funksjon av størrelsen av påføringsvalsen og antallet ganger filtrerpapiret føres over påføringsvalsen. Begge sider av filtrerpapiret kan om ønsket belegges. Etter at all reagens-løsning er påført på bestemte soner av filtrerpapirrullen og fordampet til tørrhet, deles filtrerpapiret i enkeltstrimler som representerer en testenhet av diagnosetestsystemet ifølge oppfinnelsen, som hver inneholder tilstrekkelige mengder av substrat og buffer til å identifisere og adskille 3-galaktosidase-produserende mikroorganismer.
Ved anvendelse innføres en testenhet eller teststrimmel av diagnosetestsystemet ifølge oppfinnelsen i et reagensrør inneholdende en saltsuspensjon av den ukjente kultur som skal testes, slik at substrat- og buffersonene er neddykket i test-suspensjonen. Røret inkuberes ved 35-37°C i ca. fire timer og observeres på nærvær av gulfarging av væsken som er en posi-tiv indikasjon på nærvær av 3-galaktosidase-produserende organismer. Dersom suspensjonen forblir fargeløs er testen negativ.
For ytterligere å illustrere oppfinnelsen hitsettes følgende eksempler:
Eksempel I
Fremstilling av substratløsningen.
70 ml aceton og 30 ml destillert vann blandes og 5 gram o-nitrofenyl-3-D-galaktopyranosid tilsettes under omrøring for å oppløse substratet.
Eksempel II
Fremstilling av bufferløsningen.
2,006 gram enbasisk kaliumfosfat og 12,106 gram to-basisk natriumfosfat tilsettes til destillert vann, bringes til 100 ml og oppvarmes til ca. 60°C under omrøring for å oppløse bufferen.
Eksempel III
Fremstilling av barriereløsningen
Løsning A.
5,45 ml "Quilon C"-løsning blandes grundig og tilsettes til 21,8 ml isopropylalkohol med stadig omrøring, 45,4 ml vann tilsettes til "Quilon C"/isopropylalkohol-løsningen. 27,3 ml 0,05N natriumhydroksyd tilsettes med kontinuerlig omrøring og hele løsningen bringes til 100 ml med destillert vann.
Løsning B.
15 . ml etanol (95 %) tilsettes til 85 ml "Krylon 150 Crystal Clear" og blandes grundig.
Eksempel IV
Fremstilling av identifiseringsfargeløsningen.
0,50 gram "FD & C Blue no. 2", 0,10 gram "FD & C Red no. 2" og 0,10 gram vannløselig "Nigrosin" oppløses i destillert vann og bringes til 100 ml.
Eksempel V
Fremstilling av diagnose- testsystemet.
En 10 meters rull tungt filtrerpapir med 83 mm bredde anvendes som porøst materiale. Substratløsningen fra eksempel I plasseres i en beholder fra hvilken den mates til overflaten av et roterende påføringshjul. En 3,7 mm sone langs den 10 meter lange filtrerpapirremsen impregneres med substratløsningen ved å føre filtrerpapiret over et roterende påføringshjul med en bredde på 4 mm. Det roterende hjulet fører samtidig papiret fremover og belegget fordampes til tørrhet. Denne fremgangsmåte gjentas tre ganger med tørking mellom påføringene på hver side av den 3,7 mm brede substratsonen.
Bufferløsningen fra eksempel II plasseres i en beholder og påføres ved hjelp av et roterende påføringshjul med en bredde på 4 mm til en 3,7 mm bred buffersone som støter opp til substratsonen på filtrerpapiret. Bufferløsningen påføres to ganger på hver side av buffersonen og får tørke etter hver påføring. Buffersonen må ikke overlappe substratsonen.
Barriereløsning A fra eksempel III plasseres i en beholder og påføres til sentret av en 16 mm sone i tilslutning til buffersonen ved hjelp av et roterende påføringshjul med en bredde på 5 mm. Påføringen utføres en gang på hver side av denne sentrerte barrieresone. Barriereløsning B fra eksempel III plasseres i en beholder og påføres oppå den impregnerte løsning A uten tørking på begge sider av hele den 16 mm brede barrieresonen ved hjelp av et roterende hjul med en bredde på 15 mm og får tørke.
Identifiseringsløsningen fra eksempel IV plasseres i en beholder og påføres på en 6 mm sone langs den 10 meter lange kanten av filtrerpapiret på motsatt side av substratsonen ved hjelp av et 6,3 mm bredt påføringshjul. Identifiseringsløsningen påføres en gang på hver side av identifiseringssonen og får tørke.
Etter at alle impregnerte soner på filtrerpapirrullen er helt tørre deles papiret i 6,3 mm brede og 83 mm lange strimler.
Eksempel VI
Bruk av diagnose- testsystemet.
En metalltråd-løkke full av en ukjent kultur suspenderes
i 0,3 ml saltløsning i en 13 x 100 reagensrør'. Diagnose-test strimmelen fra eksempel V innføres slik at sonen motsatt identifiseringsfargesonen neddykkes, og inkuberes i et vann-
bad i fire time ved 35-37°C- Utviklingen av gulfarge i væsken angir et positivt testresultat. Dersom væsken forblir farge-løs er testen negativ.
Claims (2)
1. Diagnosetestsystem for påvisning av bakterier som frembringer 3-galaktosidase ved bakteriell hydrolyse av et o-nitrofenyl-/3-D-galaktopyranosidsubstrat anbragt på et porøst materiale eventuelt avgrenset av en sperresone og eventuelt forsynt med en identifiseringsfarvesone, karakterisert ved at substratet er impregnert Som en eluerbar, vandig acetonoppløsning inneholdende fra 0,05 til 3,0 mg tørt o-nitrofenyl-Ø-D-galaktopyranosid i en sone A som grenser opp til en sone B impregnert med 0,01 til 0,1 mmol av et tørt buffersystem som ved eluering vil holde en pH på en verdi fra 6,5-8,5.
2. Diagnose-testsystem ifølge krav 1, karakterisert ved at substratsonen i det porøse materialet inneholder ca. 1,5 mg tørt o-nitrofenyl-6-D-galaktopyranosid og buffersonen inneholder ca.
0,02 mmol buffer som holder pH ved ca. 7,4.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US05/510,816 US3957584A (en) | 1974-09-30 | 1974-09-30 | Detection of beta-galactosidase producing micro-organisms |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO752544L NO752544L (no) | 1976-03-31 |
| NO148380B true NO148380B (no) | 1983-06-20 |
| NO148380C NO148380C (no) | 1983-09-28 |
Family
ID=24032326
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO752544A NO148380C (no) | 1974-09-30 | 1975-07-16 | Diagnosetestsystem for paavisning av bakterier som frembringer beta-galaktosidase |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US3957584A (no) |
| JP (1) | JPS5147491A (no) |
| CA (1) | CA1045531A (no) |
| CH (1) | CH615460A5 (no) |
| DK (1) | DK142461B (no) |
| FR (1) | FR2286192A1 (no) |
| GB (1) | GB1466828A (no) |
| IT (1) | IT1054910B (no) |
| NO (1) | NO148380C (no) |
| SE (1) | SE7510895L (no) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4070247A (en) * | 1977-03-30 | 1978-01-24 | Indiana University Foundation | Diagnostic media |
| US4279992A (en) * | 1978-03-13 | 1981-07-21 | Miles Laboratories, Inc. | Specific binding assay employing an enzyme-cleavable substrate as label |
| US4351899A (en) * | 1978-07-19 | 1982-09-28 | Owen Oliver E | Semi-quantitative assay of metabolic acids |
| US4326957A (en) * | 1978-07-21 | 1982-04-27 | Pall Corporation | Vented filter spigot for intravenous liquid administration apparatus |
| US4177149A (en) * | 1978-07-21 | 1979-12-04 | Pall Corporation | Filter assembly for intravenous liquid administration apparatus |
| US4208480A (en) * | 1978-08-23 | 1980-06-17 | American Home Products Corporation | Method, reagents and apparatus for the rapid identification of Neisseria gonorrhoeae and Neisseria meningitidis |
| US4242447A (en) * | 1978-11-29 | 1980-12-30 | Bioresearch | Rapid detection of bacteria |
| JPH0321160B2 (no) * | 1979-05-02 | 1991-03-22 | Nat Res Dev | |
| FR2457323A1 (fr) * | 1979-05-25 | 1980-12-19 | Api Labor | Test permettant la mise en evidence des bacteries du genre salmonella et serratia et leur distinction des genres proteus et providencia |
| US4713328A (en) * | 1981-09-30 | 1987-12-15 | Yolken Robert H | Microbial Enzyme assays |
| CA1219201A (en) * | 1983-03-07 | 1987-03-17 | Albert E. Chu | Microorganism detection test |
| CA2062753C (en) * | 1989-04-27 | 2005-04-26 | N. Robert Ward, Jr. | Precipitate test for microorganisms |
| US6699685B1 (en) | 1990-04-20 | 2004-03-02 | Rcr Scientific, Inc. | Method, test media and chromogenic compounds for identifying and differentiating general coliforms and escherichia coli bacteria |
| US5210022A (en) * | 1990-04-20 | 1993-05-11 | Rcr Scientific, Inc. | Method test media and chromogenic compounds for identifying and differentiating general coliforms and Escherichia coli bacteria |
| US5633144A (en) * | 1990-05-03 | 1997-05-27 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Assay pad and method for determination of the presence of total coliforms |
| FR2671100B1 (fr) * | 1990-12-28 | 1993-03-05 | Bio Merieux | Procede d'analyse bacteriologique, et milieu de detection des bacteries genre salmonella. |
| US5464755A (en) * | 1994-04-29 | 1995-11-07 | Biolog, Inc. | Microbiological medium and method of assay |
| FI98379C (fi) * | 1995-03-24 | 1997-06-10 | Orion Yhtymae Oy | Elatusaine ja menetelmä salmonellojen tunnistamiseksi |
| WO1996040861A1 (en) * | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Biolog, Inc. | Microbiological media for isolation and identification of enteric pathogens such as e. coli and salmonella |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3359180A (en) * | 1967-04-04 | 1967-12-19 | Warner Lambert Pharmaceutical | Diagnostic preparation for the detection of acetylmethylcarbinol |
| US3649461A (en) * | 1968-08-09 | 1972-03-14 | Warner Lambert Co | Paper strip test for citrate utilization |
| US3645853A (en) * | 1969-06-24 | 1972-02-29 | Warner Lambert Co | Diagnostic composition and method for the detection of nitrate reduction |
| US3785929A (en) * | 1971-11-30 | 1974-01-15 | Warner Lambert Co | Diagnostic composition for the detection of nitrite |
| CH583422A5 (no) * | 1972-01-25 | 1976-12-31 | Hoffmann La Roche | |
| JPS5247035B2 (no) * | 1972-11-24 | 1977-11-29 | ||
| US3870601A (en) * | 1973-05-04 | 1975-03-11 | Schering Corp | Novel diagnostic system for differentiation of enterobacteriaceae |
-
1974
- 1974-09-30 US US05/510,816 patent/US3957584A/en not_active Expired - Lifetime
-
1975
- 1975-07-16 NO NO752544A patent/NO148380C/no unknown
- 1975-07-31 JP JP50093648A patent/JPS5147491A/ja active Granted
- 1975-08-29 GB GB3571175A patent/GB1466828A/en not_active Expired
- 1975-09-25 CA CA236,377A patent/CA1045531A/en not_active Expired
- 1975-09-29 DK DK438675AA patent/DK142461B/da not_active IP Right Cessation
- 1975-09-29 SE SE7510895A patent/SE7510895L/xx unknown
- 1975-09-29 IT IT27731/75A patent/IT1054910B/it active
- 1975-09-30 FR FR7529914A patent/FR2286192A1/fr active Granted
- 1975-09-30 CH CH1267775A patent/CH615460A5/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA1045531A (en) | 1979-01-02 |
| FR2286192A1 (fr) | 1976-04-23 |
| GB1466828A (en) | 1977-03-09 |
| JPS5431396B2 (no) | 1979-10-06 |
| NO752544L (no) | 1976-03-31 |
| DE2531982A1 (de) | 1976-04-08 |
| JPS5147491A (en) | 1976-04-23 |
| DK438675A (no) | 1976-03-31 |
| AU8300975A (en) | 1977-01-20 |
| DK142461B (da) | 1980-11-03 |
| FR2286192B1 (no) | 1979-04-06 |
| NO148380C (no) | 1983-09-28 |
| US3957584A (en) | 1976-05-18 |
| DE2531982B2 (de) | 1977-04-21 |
| IT1054910B (it) | 1981-11-30 |
| CH615460A5 (no) | 1980-01-31 |
| DK142461C (no) | 1981-03-30 |
| SE7510895L (sv) | 1976-03-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO148380B (no) | Diagnosetestsystem for paavisning av bakterier som frembringer beta-galaktosidase | |
| US3298789A (en) | Test article for the detection of glucose | |
| JP3717932B2 (ja) | 腸内細菌の検出及び計測のための培養培地及び製品 | |
| DE3785617T2 (de) | Immunassay-prozess. | |
| EP0171150B1 (en) | Method and apparatus for assaying with optional reagent quality control | |
| US4277561A (en) | Support for the determination of enzyme activities and process | |
| JPH0698028B2 (ja) | 分析用組成物，分析要素及び被分析物の測定方法 | |
| DE2811228A1 (de) | Assay zur quantitativen bestimmung von immonogenen und antikoerpern | |
| US4753890A (en) | Analytical element and method for determination of magnesium ions | |
| FI78360C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av testremsa. | |
| CA2069889A1 (en) | Method and apparatus for speciating and identifying mai (mycobacterium avium-intracellulare) and testing the same for antibiotic sensitivity | |
| US4390622A (en) | Neisseria bacteria species identification and beta lactamase testing methods | |
| US4803158A (en) | Composition used for the determination of beta-hydroxybutyric acid and a method for preparing the said composition | |
| US6509166B1 (en) | Detection and quantification of one or more target analytes in a sample using spatially localized analyte reproduction | |
| Jen et al. | The antibacterial activity of alamethicins and zervamicins | |
| WO1996006356A1 (en) | Test kit and method for detection of target cells and molecules | |
| EP0171158B1 (en) | Processes and materials for carrying out microchemical and microbiological tests | |
| CN108486024A (zh) | 基于菌群的传感系统检测有机磷农药的方法 | |
| US3785929A (en) | Diagnostic composition for the detection of nitrite | |
| US3645853A (en) | Diagnostic composition and method for the detection of nitrate reduction | |
| WO1984003303A1 (en) | Microbiological test processes and apparatus | |
| CA1060764A (en) | E. coli detection broth for clinical use with automated microbial analyzer | |
| EP0258034B1 (en) | Analytical element and method for theophylline determination using buffer in spreading zone | |
| US3278394A (en) | Method and composition for diagnosing glucose | |
| EP0112077A1 (en) | Diagnostic test probe |