NO136844B - Fremgangsm}te til fremstilling av saccharaseinhibitorer. - Google Patents
Fremgangsm}te til fremstilling av saccharaseinhibitorer. Download PDFInfo
- Publication number
- NO136844B NO136844B NO822/73A NO82273A NO136844B NO 136844 B NO136844 B NO 136844B NO 822/73 A NO822/73 A NO 822/73A NO 82273 A NO82273 A NO 82273A NO 136844 B NO136844 B NO 136844B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- amylase
- inhibitor
- inhibitors
- sucrose
- sie
- Prior art date
Links
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims description 29
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 title claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 4
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 title description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 3
- 239000003392 amylase inhibitor Substances 0.000 claims description 17
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 claims description 13
- 101710184309 Probable sucrose-6-phosphate hydrolase Proteins 0.000 claims description 12
- 102400000472 Sucrase Human genes 0.000 claims description 12
- 101710112652 Sucrose-6-phosphate hydrolase Proteins 0.000 claims description 12
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 3
- 241000187844 Actinoplanes Species 0.000 claims description 2
- 239000011260 aqueous acid Substances 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 19
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 19
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 19
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 18
- 229940122816 Amylase inhibitor Drugs 0.000 description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 9
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 9
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 9
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 7
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 7
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 206010060378 Hyperinsulinaemia Diseases 0.000 description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000003245 coal Substances 0.000 description 3
- MSJMDZAOKORVFC-UAIGNFCESA-L disodium maleate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)\C=C/C([O-])=O MSJMDZAOKORVFC-UAIGNFCESA-L 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3,4-dinitrobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C([N+]([O-])=O)=C1O WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JRBJSXQPQWSCCF-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dimethoxybenzidine Chemical compound C1=C(N)C(OC)=CC(C=2C=C(OC)C(N)=CC=2)=C1 JRBJSXQPQWSCCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 2
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 2
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 208000002925 dental caries Diseases 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 2
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 2
- 230000003451 hyperinsulinaemic effect Effects 0.000 description 2
- 201000008980 hyperinsulinism Diseases 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000008458 Glucose Oxidase Reagent Methods 0.000 description 1
- 206010018429 Glucose tolerance impaired Diseases 0.000 description 1
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001134635 Micromonosporaceae Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 208000001280 Prediabetic State Diseases 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012445 acidic reagent Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000001013 cariogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229940112822 chewing gum Drugs 0.000 description 1
- 235000015218 chewing gum Nutrition 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 235000013681 dietary sucrose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 201000005577 familial hyperlipidemia Diseases 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000035879 hyperinsulinaemia Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 238000006395 oxidase reaction Methods 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 201000009104 prediabetes syndrome Diseases 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 229960002901 sodium glycerophosphate Drugs 0.000 description 1
- REULQIKBNNDNDX-UHFFFAOYSA-M sodium;2,3-dihydroxypropyl hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OCC(O)COP(O)([O-])=O REULQIKBNNDNDX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940034610 toothpaste Drugs 0.000 description 1
- 239000000606 toothpaste Substances 0.000 description 1
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/22—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a beta-amylase, e.g. maltose
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
Gjenstanden for eldre patentsøknader er den er-kjennelse at en rekke av aktinomyceter, fremfor alt aktinoplanaceen danner inhibitorer for glykosidhydrolase, fortrinnsvis kullhydrat spaltende enzymer av fordøyelseskanalen. En gruppe av disse inhibitorer er relativt varmestabile og.ved værelses-temperatur syre- og alkalistabile. Disse inhibitorer hører kjemisk i klassen bligo- eller polysaccharider resp. deres derivater.
De fleste av inhibitorene fra denne gruppe er høypotente amylaseinhibitorer, men bare middelssterke eller svake saccharaseinhibitorer.
Oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte til fremstilling saccharaseinhibitorer, idet fremgangsmåten er karakterisert ved dyrkning av en av stammene Actinoplanes CBS 961.70, CBS 615.71 eller CBS .957.70 utvunne amylaseinhibitorer fra klassen av oligo- eller polysaccharider eller deres derivater nedbrytes hydrolytisk til saccharaseinhibitorer ved hjelp av vandige syrer ved 60 - 110°C eller enzymatisk med 6-amylase. Amylaseprøve.
En amylase-inhibitor-enhet (1 AIE) er definert
som den inhibitormengde som inhiberer to amylaseenheter 50%.
En amylaseenhet (AE) er den enzymmengde som i et minutt under de nedenfor angitte prøvebetingelser spalter l^u ekvivalent glukosidiske bindinger i stivelsen. De ^u valspaltede bindinger bestemmes kolorimetrisk som ^ u. valdannet reduserende
sukker 'med dinitrosalicylsyre og angis ved hjelp av en maltose-..justeringskurve som ,u val maltoseekvivalent. Til gjennomføring av prøven blandes 0,1 ml amylaseoppløsning (20 - 22 AE/ml) med 0-10 ^ug inhibitorer eller 0-20 ^ul av oppløsningen som skal prøves i 0,4 ml 0,02 m natriumglycerofosfatpuffer/0,001 m CaCl2 pH 6,9 og ekvilibreres i 10 - 20 minutter i et vannbad av 35°C.
Deretter inkuberes 5 minutter med 0,5 ml av en til 35°C foroppvarmet 1%- ig stivelsesoppløsning (stivelse oppløselig fra firma Merck, Darmstadt, nr. 1252) ved 35°C og blandes deretter med 1 ml dinitrosalicylsyre-reagens (ifølge P. Bernfeldi Colowick-Kaplan, Meth. Enzymol. bind 1, side 149). Til farge-fremkalling oppvarmes blandingen 5 minutter på kokende vannbad, avkjøles deretter og blandes med 10 ml destillert vann. Ek-stinksjonen ved 540 nm måles mot et tilsvarende blindforsøk uten amylase. Til vurdering avleses fra en på forhånd opptatt amylasejusteringskurve den etter inhibitortilsetning ennå virksomme amylaseaktivitet og herav beregnes den prosentuelle hemning av anvendt amylase. Den prosentuelle hemning oppføres som funksjon av kvotienten
+ refererer til tørrstoff
++ AE i ikke inhibert blanding av samme serie 50$ hemningspunkt avleses_av kurven og omregnes til AIE/mg inhibitor.
Saccharaseprøve.
En saccharase-inhibitorenhet (SIE) er definert • som den inhibitormengde som inhiberer to saccharaseenheter til 50$. En saccharaseenhet (SE) er den enzymmengde som på
ett minutt under de nedenfor angitte prøvebetingelser spalter lyumol saccharase i glucose og fructose. Den ^umol dannede . glucose bestemmes ved hjelp av glucoseoksydasereaksjonen kvan-titativt under betingelser hvor den ytterligere saccharosespalt-ning ikke mere finner sted ved saccharasen. Til gjennomføring av prøven blandes 0,05 ml av en til 0,12 SE til saccharaseopp-løsning"^ med 0-20 ^ug inhibitor eller 0-20 . ^ul av den oppløs-ning som skal prøves og oppfylles med 0,1 m natriummaleinatpuffer pH 6,0 til 0,1 ml. Det ekvilibreres i 10 minutter ved 35°C og deretter blandes med 0,1 ml av en til ,35°C foroppvarmet 0,05 m saccharoseoppløsning i 0,1 m natriummaleinatpuffer pH 6,0. Man inkuberer i 20 minutter ved 35°C og stopper saccha-
" . 2) rasereaksjonen ved tilsetning av 1 ml glucoseoksy.dasereagens og inkuberer videre i 30 minutter ved 35°C. Deretter tilsettes 1 ml 50% HgSO^ og måles ved 545 nm mot tilsvarende blindverdi.
l_ 1) Solubilisert saccharase fra svinetynntarmmucosa ifølge B. Borgstrøm, A. Dahlquist, Acta Chem. Scand. 12, (1958), side 1997, ble fortynnet med 0,1 m natriummaleinatpuffer pH
6,0 tilsvarende SE-innhold.
2) Glucoseoksydasereagenset fremstilles ved oppløs-ning av 2 mg glucoseoksydase (firma Boehringer Nr. 15423 EGAB) 1 100 ml 0,565 m tris-CHl-puffer pH 7,0 og etterfølgende tilsetning av 1 ml detergensoppløsning (2 g triton X 100 + 8 g 95% etanol p.a.), 1 ml dianisidinoppløsning (260 mg o-dianisidin . 2 HC1 i 20 ml HpO) og 0,5 ml 0,1% vandig peroksydaseoppløsning
.(firma Boehringer Nr. 15302 EPAP_)_7.
Til vurdering beregnes den prosentuelle hemning
av den anvendte saccharase og omregnes fra 50%-hemningspunktet ved hjelp av en glucosejusteringskurve til SIE/g resp. SIE/liter.
Omdannelsen av amylaseinhibitoren til saccharaseinhibitor foregår ved avspaltning av hemmeinaktive molekylbrudd-stykker (for det meste mono-, di- eller trisaccharider) fra inhibitor-molekylene. Denne avspaltning av hemmeinaktive mole-kylbruddstykker foregår ved enzymatisk-hydrolytisk eller kjemisk-hydrolytisk spaltning, fortrinnsvis betjener man seg av syre-hydrolyse ved høye temperaturer. Hertil hydrolyserer 1 - 40%, fortrinnsvis 2 - 20%, oppløsninger av ovennevnte høypotente amylaseinhibitorer i 0,1 - 5 n, fortrinnsvis 0,5 - 2 n, mineral-syre, fortrinnsvis HC1 eller f^SO^ i 0,1 - 6 timer, fortrinnsvis i 0,5 - 4 timer ved 60 - 110°C, fortrinnsvis 80 - 100°C. Derved iakttar man med økende hydrolysevarighet et steilt fall av den amylaseinhibitoriske aktivitet av oppløsningen ved samtidig steil stigning og etterfølgende flatt fall av den saccharase-inhibitoriske aktivitet av oppløsningene. Kvotienten f =
SIE 3
jjg— x 10 øker med økende hydrolysevarighet tilsvarende steilt l_ sammenlign fig. 1. Denne viser det tidsmessige forløp av amylaseinhibitorinnholdet (1) og saccharaseinhibitorinnholdet (2) samt kvotienten f (3) av en 2% oppløsning av amylaseinhibitor fra stammen SE 50 ved hydrolyse i 0,5 n HC1 ved 100°C over 0 - 100 minutter. På x-aksen er det oppført tiden i minutter, på y-^-aksen AIE x 10° pr. liter, på y2~aksen SIE x 10 pr. liter og på y^-aksen kvosienten f7. Høye syrekonsentrasjoner, lave konsentrasjoner av inhibitoret i oppløsningen og høye temperaturer bevirker en spesielt sterk økning av f-verdien, altså en
spesielt kraftig forskyvning av saccharase/amylase-inhibisjons-forholdet til saccharase £~sammenlign fig. 2 og 3. Disse figurer viser det tidsmessige forløp av saccharase/amylase-inhibi-sjonsforholdet mot hydrolysetiden ved forskjellige hydrolysebe-tingelser/. I begge figurer viser x-aksen tiden i minutter, y-aksen kvotienten f.
Fig. 2 viser hydrolyseforløpet ved 100°C,
Fig. 3 viser innvirkning av syrekonsentrasjonen og hydrolysetemperatur på SIE/AIE-forholdet. C = 20 mg amylaseinhibitor fra stamme SE 50/ml syre (HC1).
Isoleringen av det saccharaseinhiberende prinsipp fra slike hydrolysater foregår best ved adsorpsjon på aktivt kull etter foregående nøytralisering av hydrolysatet og etter-følgende fraksjonerende desorpsjon av inhibitoren fra kull med vandige alkoholer eller vandig aceton. Når hydrolysatene er meget mørkfargede, avfarges de før adsorpsjonen av saccharase-' inhibitoren på kull ved sure pH-verdier (pH 1-3) med aktivt kull.
Hemningskapasiteten av de beste inhibitorpreparater
utgjør 15-000 SIE/g.
Avbygningen ifølge oppfinnelsen kan også foregå
enzymatisk, hvortil det spesielt egner seg g-amylase.
Det er kjent at ved dyr og mennesker etter opptak av saccharoseholdige nærings- og nytelsesmidler opptrer hyperglykemier som på grunn av en hurtig spaltning av saccharosen ved hjelp av saccharaser fra fordøyelseskanalen bevirkes etter følgende skjema
saccharase „ , ' - . saccharose <g>lucose + fructose Disse hyperglykemier er ved diabetikere spesielt sterkt og vedvarende utpreget. Ved adipøse bevirker den alimentære hyperglykemi ofte en spesiell sterk insulinsekresjon, som på sin side
fører til formeret fettoppbygning og nedsatt fettavbygning.
De ifølge oppfinnelsen etter ovennevnte metode utvundne og isolerte saccharaseinhibitorer nedsetter den alimentære hyperglykemi og hyperinsulinemi på rotter etter belast-ning med saccharose betraktelig.
Videre er det kjent at karies etter nytelse av saccharoseholdige nytelses- og næringsmidler forekommer spesielt sterkt og hyppig /"f.eks. B.W.. Gold: Advances in Applied Micro-biology 11 (1969) 135-157/- En hemning av saccharosespaltningen ved inhibitoren ifølge oppfinnelsen nedsetter dannelsen av kario-gene stoffer i munnhulen.
Inhibitoren ifølge oppfinnelsen egner seg derfor som terapeutikum for følgende indikasjoner: Adipositas, Hyperlipemi (Atherosklerose), Diabetes, Predia-betes, Karies.
Dosering:
100 - 10.000 SIE en eller flere ganger daglig før og/eller under og/eller etter måltidene p. os.
Tilberedelses former:
Tabletter, drasjeer, kapsler, oppløsninger, sus-pensjoner, granulater, tyggegummi, tannpasta og som tilsetning til saccharoseholdig nærings- og/eller nytelsesmidler.
Eksempel 1.
5 g av amylaseinhibitoren fra Actinoplanaceen-stammen CBS-Nr. 961.70 med 10 x 10<6> AIE/g og 220 SIE/g ble opp-løst i 50 ml 0,05 m Na-acetatpuffer pH 4,5 og blandet med 25 mg B-amylase fra bygg og inkubert ved 35°C. Etter 3 timer var spaltningen avsluttet. Inkubasjonsblandingen ble inndryppet direkte i 450 ml tørrsprit under omrøring, den hvite fnokkede utfelling suget fra, vasket med vann og eter hver gang 2 ganger og tørket i vakuum.
Utbytte: 2,5 g med 4,6 x 10<6> AIE/g og 700 SIE/g.
Eksempel 2.
100 g av amylaseinhibitoren fra stammen SE 50 ble oppløst i 500 ml 2 n H2S0ij og hydrolysert i 4 timer ved 100°C. Den sortbrune oppløsning ble etter avkjøling med 10 n KOH inn-stillet på pH 2,0 og for avfarging blandet to ganger hver gang med 4 g aktivt kull, omrørt hver gang ca. 10 minutter og frasuget. Kullene ble kassert, det lysegule fargede filtrat nøy-tralisert med 10 n KOH (pH 6,6). Man blandet med 20 g aktivt
kull til adsorpsjon av hemmeaktive bruddstykker på kullene. Etter 10 minutters omrøring ble det suget fra, filtratet igjen adsorbert med-10 g aktivt kull. Kullresiduumet ble forenet, filtratet kassert. De forenede kullresiduer ble for fjerning av resterende salt og glucose vasket med 2 liter destillert vann og 2 liter 2,5%-ig etanol på nutschen og deretter desor-bert hver gang tre ganger med hver gang 750 ml 10%-ig og deretter 15%-ig etanol. Til desorpsjonen ble det hver gang omrørt i 10 minutter, deretter frasuget og blandet med friskt desorp-sjonsmiddel. De tilsvarende filtratet av den 10%-ige resp. 15%-ige desorpsjon ble forenet, inndampet på rotasjonsfordamper til ca. 20 ml og deretter lyofilisert.
Utbytte: ca. 2 g av 10% fraksjonen og 1,2 g av 15% fraksjonen. Spesifikk aktivitet: 10% fraksjonen 9000 SIE/g, 0,2x10^ AIE/g
15% fraksjonen 15000 SIE/g, 0,5xl0<6> AIE/g Eksempel 3-
200 mg av en fra aktinoplanaceen-stammen CBS-Nr. 615.71 isolert amylaseinhibitor (6 x 10<6> AIE/g, l60 SIE/g) ble oppløst i 10 ml 0,75 n HC1. Utgangsoppløsningen hadde en aktivitet på 120 x 10<6> AIE/1 ved 3200 SIE/1. Denne oppløsning ble inkubert i 30 minutter ved 100°C i vannbad, deretter av-kjølt og prøvet. Innholdet av det således dannede hydrolysat av amylaseinhibitor utgjorde 8 x 10^ AIE/liter, innhold av saccharaseinhibitor 21.000 SIE/liter.
Eksempel 4.
200 mg av et fra aktinoplanaceen-stammen CBS-Nr. 957.70 isolert amylaseinhibitor (4 x 10<6> AIE/g, 310 SIE/g) ble oppløst i 10 ml 0,75 n HC1. Utgangsoppløsningen hadde en aktivitet på 80 x 10<6> AIE/liter og 6200 SIE/liter. Denne opp-løsning ble inkubert i 30 minutter ved 100°C i vannbad, deretter avkjølt og prøvet. Innholdet av det således dannede hydrolysat av amylaseinhibitor utgjorde 10 x 10^ AIE/liter, av saccharasep inhibitor 28.000 SIE/liter.
Eksempel 5 -
Porsøksanordning til virkningspåvisning av virksomt stoff fra eksempel 2 på rotter i saccharosebelastningsforsøk.
For frembringelse av en hyperglykemi og hyperinsulinemi etter kullhydrat foring får rotter (n = 2,5 g/kg som saccharose som oppløsning p. os. Et like antall rotter ble i tillegg til saccharosen oralt applisert til nevnte virksomme stoff til avsvekning av hyperglykemi og hyperinsulinemi. Blodglucose og seruminsulin ble bestemt i de angitte tidsav-stander etter kullhydratbelastningen. Bestemmelsen av reduserende kullhydrater foregikk i auto-analysør £~Technicon, ifølge Hoffmann: J. biol. Chem. 120, 51 (193727, bestemmelse av insulin ifølge Hales og Randle [_ Biochem. J. 88, 137 (19 6 327" • Blod uttas fra rottenes retroorbitale venepleksus.
Tabell 1 til eksempel 5-
Blodglucose i mg% (middelverdi ± ls) og seruminsulin i ^uE/ml.
(Middelverdi ± ls) av fastende rotter til forskjellige tider etter oral inngivning av saccharosé ± virksomt stoff fra eksempel 2.
Claims (1)
- Fremgangsmåte til fremstilling av saccharaseinhibitorer, karakterisert ved at ved dyrkning av en av stammene Actinoplanes CBS 961.70, CBS 615-71 eller CBS 957-70 utvunne amylaseinhibitorer fra klassen av oligo- eller polysaccharider eller deres derivater nedbrytes hydrolytisk til saccharaseinhibitorer ved hjelp av vandige syrer ved 60 - 110°C eller enzymatisk med g-amylase.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE2209832A DE2209832C3 (de) | 1972-03-01 | 1972-03-01 | Herstellung von Saccharaseinhibitoren |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO136844B true NO136844B (no) | 1977-08-08 |
NO136844C NO136844C (no) | 1977-11-16 |
Family
ID=5837575
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO822/73A NO136844C (no) | 1972-03-01 | 1973-02-28 | Fremgangsm}te til fremstilling av saccharaseinhibitorer |
Country Status (29)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US3879546A (no) |
JP (1) | JPS4898088A (no) |
KR (1) | KR780000001B1 (no) |
AR (1) | AR196913A1 (no) |
AT (1) | AT319171B (no) |
AU (1) | AU467011B2 (no) |
BE (1) | BE795994A (no) |
BG (1) | BG25655A3 (no) |
CA (1) | CA992018A (no) |
CH (1) | CH578020A5 (no) |
CS (1) | CS189590B2 (no) |
DD (1) | DD105243A5 (no) |
DE (1) | DE2209832C3 (no) |
DK (1) | DK129530B (no) |
ES (1) | ES412097A1 (no) |
FI (1) | FI49840C (no) |
FR (1) | FR2174238B1 (no) |
GB (1) | GB1376574A (no) |
HU (1) | HU171216B (no) |
IE (1) | IE37351B1 (no) |
IL (1) | IL41611A (no) |
LU (1) | LU67107A1 (no) |
NL (1) | NL7302651A (no) |
NO (1) | NO136844C (no) |
PL (1) | PL92400B1 (no) |
RO (1) | RO77618A (no) |
SE (1) | SE418454B (no) |
SU (1) | SU576050A3 (no) |
ZA (1) | ZA731397B (no) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2209834C3 (de) * | 1972-03-01 | 1978-04-20 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | Herstellung von Saccharase-Inhibitoren |
US4010258A (en) * | 1974-03-15 | 1977-03-01 | Ajinomoto Co., Inc. | Microbial amylase inhibitor and preparation thereof with the use of streptomyces diasticus var. amylostaticus |
AU7457300A (en) | 1999-10-28 | 2001-05-08 | Chong Kun Dang Pharmaceutical Corp. | A process for preparing acarbose with high purity |
HRP20010792A2 (en) | 2001-10-26 | 2003-04-30 | Pliva D D | Acarbose purification process |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2064092C2 (de) * | 1970-12-28 | 1983-06-01 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | Inhibitoren für Glykosidhydrolasen aus Actinomyceten |
JPS5111197B1 (no) * | 1971-05-31 | 1976-04-09 |
-
1972
- 1972-03-01 DE DE2209832A patent/DE2209832C3/de not_active Expired
-
1973
- 1973-02-06 RO RO7385990A patent/RO77618A/ro unknown
- 1973-02-23 SU SU7301885529A patent/SU576050A3/ru active
- 1973-02-24 BG BG7300022817A patent/BG25655A3/xx unknown
- 1973-02-26 NL NL7302651A patent/NL7302651A/xx not_active Application Discontinuation
- 1973-02-26 IL IL41611A patent/IL41611A/xx unknown
- 1973-02-27 FI FI730593A patent/FI49840C/fi active
- 1973-02-27 CS CS731417A patent/CS189590B2/cs unknown
- 1973-02-27 CH CH284373A patent/CH578020A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1973-02-27 DD DD169102A patent/DD105243A5/xx unknown
- 1973-02-27 ES ES412097A patent/ES412097A1/es not_active Expired
- 1973-02-27 AT AT172873A patent/AT319171B/de not_active IP Right Cessation
- 1973-02-27 BE BE128125A patent/BE795994A/xx not_active IP Right Cessation
- 1973-02-27 LU LU67107A patent/LU67107A1/xx unknown
- 1973-02-27 AU AU52659/73A patent/AU467011B2/en not_active Expired
- 1973-02-27 CA CA164,665A patent/CA992018A/en not_active Expired
- 1973-02-28 IE IE315/73A patent/IE37351B1/xx unknown
- 1973-02-28 KR KR7300331A patent/KR780000001B1/ko active
- 1973-02-28 SE SE7302815A patent/SE418454B/xx unknown
- 1973-02-28 NO NO822/73A patent/NO136844C/no unknown
- 1973-02-28 ZA ZA731397A patent/ZA731397B/xx unknown
- 1973-02-28 DK DK109473AA patent/DK129530B/da not_active IP Right Cessation
- 1973-02-28 PL PL1973160962A patent/PL92400B1/pl unknown
- 1973-02-28 GB GB972973A patent/GB1376574A/en not_active Expired
- 1973-02-28 US US336720A patent/US3879546A/en not_active Expired - Lifetime
- 1973-03-01 HU HU73BA00002882A patent/HU171216B/hu unknown
- 1973-03-01 AR AR246886A patent/AR196913A1/es active
- 1973-03-01 FR FR7307331A patent/FR2174238B1/fr not_active Expired
- 1973-03-01 JP JP48024742A patent/JPS4898088A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4062950A (en) | Amino sugar derivatives | |
NO135873B (no) | ||
US7816514B2 (en) | Glucosamine and method of making glucosamine from microbial biomass | |
US7923437B2 (en) | Water soluble β-glucan, glucosamine, and N-acetylglucosamine compositions and methods for making the same | |
EP0337889B1 (fr) | Application comme produits sucrants faiblement caloriques d'oligosaccharides fructosylés et les produits ou boissons alimentaires ou diététiques les renfermant | |
US6045819A (en) | Substance containing health-promoting component and process for the production thereof | |
DK149599B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af aminosukkerderivater kaldet trestatina, trestatin b og trestatin c eller salte deraf | |
DE2347782C3 (de) | Aminozuckerderivate, Verfahren zu ihrer Herstellung sowie diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel | |
US4019960A (en) | Process for the production of a saccharase inhibitor | |
KR100768681B1 (ko) | 디글리코시다제에 의한 아글리콘 및 아글리콘을 함유하는 풍미 개선 식품의 제조 방법 | |
JP3043888B2 (ja) | グルコマンナン部分加水分解物を有効成分とする大腸ガン予防剤 | |
NO136844B (no) | Fremgangsm}te til fremstilling av saccharaseinhibitorer. | |
US7709034B2 (en) | Soluble non-caloric fiber composition and process of preparing the same | |
US3937817A (en) | Pharmaceutical compositions containing a saccharase inhibitor | |
DK148798B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af 1-desoxynojirimycin ud fra organismer af slaegten bacillus, samt en kultur af en bacillus-stamme til anvendelse herved | |
JP5327732B2 (ja) | α−グルコシダーゼ阻害剤及びその製造方法 | |
DE2209833C3 (de) | Herstellung eines Amylaseinhibitors | |
WO2015036637A1 (es) | Procedimiento de síntesis de kojibiosa y su aplicación en la elaboración de composiciones alimentarias y farmaceúticas | |
US3934006A (en) | Pharmaceutical compositions comprising saccharase inhibitors | |
DE2614393B2 (de) | Aminozucker-Derivate und diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel | |
JPH08291192A (ja) | ラクトン化オリゴ糖、その製造方法及びα−アミラーゼ阻害剤 | |
US4013510A (en) | Glycoside-hydrolase enzyme inhibitors | |
JP5152474B2 (ja) | オリゴ糖、その製造方法、及びその用途 | |
NO853460L (no) | Nye pseudooligosakkarider med alfa-glukosidasehemmende virkning, fremgangsmaate til deres fremstilling og deres anvendelse samt farmasoeytiske preparater. | |
KR790001709B1 (ko) | 아미노-슈가 화합물의 제조방법 |